PL143571B1 - Method of obtaining semi-synthetic human insulin - Google Patents
Method of obtaining semi-synthetic human insulin Download PDFInfo
- Publication number
- PL143571B1 PL143571B1 PL1983241575A PL24157583A PL143571B1 PL 143571 B1 PL143571 B1 PL 143571B1 PL 1983241575 A PL1983241575 A PL 1983241575A PL 24157583 A PL24157583 A PL 24157583A PL 143571 B1 PL143571 B1 PL 143571B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- human insulin
- insulin
- ester
- amino acid
- phe
- Prior art date
Links
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 claims description 6
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 claims description 6
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 6
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 claims description 5
- 102000000496 Carboxypeptidases A Human genes 0.000 claims description 5
- 108010080937 Carboxypeptidases A Proteins 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 claims description 2
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 15
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 15
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- VEIKMWOMUYMMMK-FCLVOEFKSA-N Thr-Phe-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 VEIKMWOMUYMMMK-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 3
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 101000993800 Sus scrofa Insulin Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101000830691 Homo sapiens Protein tyrosine phosphatase type IVA 2 Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010053229 Lysyl endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N Phe-Phe Chemical group C([C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 GKZIWHRNKRBEOH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 1
- 102100024602 Protein tyrosine phosphatase type IVA 2 Human genes 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 125000004106 butoxy group Chemical group [*]OC([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania pólsyntetycznej insuliny ludzkiej ze zmody¬ fikowanej insuliny ludzkiej, stanowiacej nowy zwiazek.Hiperglikemic, bedaca wynikiem obnizenia sie poziomu insuliny we krwi (diabetes mellitus), mozna leczyc podawaniem insuliny, np. przez wstrzykiwanie albo za pomoca pompy dozujacej. W tym celu znajduja zastosowanie w szczególnosci insuliny wyodrebnione z trzustki zwierzat takich jak swinia i bydlo.Preparaty insulin tego rodzaju wykazuja w niektórych przypadkach aktywnosc antygenowa lub alergenowa. Moze to byc czesciowo wynikiem obecnosci zanieczyszczen, takich jak proinsu- lina, produkty jej czesciowego rozkladu, arginino-insulina, ester etylowy insuliny, jednodezami- noinsulina lub agregaty insuliny. Oprócz tego, aktywnosc antygenowa moze takze zalezec od róznic strukturalnych wystepujacych miedzy insulinami ludzkimi a zwierzecymi. W wyniku tego bialko otrzymane z organizmu zwierzecego jest odrzucane przez organizm ludzki. I tak np. insulina ludzka i swinska róznia sie tylko jednym aminokwasem, a mianowicie karboksy-koncowym aminokwasem tak zwanego lancucha B. Tym tak zwanym aminokwasem 30 jest w insulinie swienskiej alanina, a w ludzkiej treonina. Takwiec, insuline swinska mozna przeksztalcic w ludzka za pomoca podstawieniajej aminokwasu B30 treonina. Mozna to przeprowadzic kilkoma znanymi sposobami.Niemal wszystkie znane sposoby wytwarzania rozpoczynaja sie oczywiscie od usuniecia aminokwasu B30. W przypadku insuliny swinskiej usuwa sie alanine, w wyniku czego otrzymuje sie dez/B30/insuline, czesto nazywana takze dez/Ala/insulina, w skrócie DAL Jesli chodzi o dalsze stadia procesu, znanych jest szereg metod alternatywnych, prowadzacych do utworzenia insuliny ludzkiej. Oparte sa one na enzymatycznym lub nieenzymatycznym wprowadzaniu do dez/B30 insuliny treoniny z zabezpieczona grupa karboksylowa, np. w postaci estru. Po zwiazaniu treoniny nalezy grupe zabezpieczajaca usunac. Zazwyczaj stosowana grupa zabezpieczajaca jest grupa Hl-rzed. butoksylowa. Do jej usuniecia konieczne sa w zasadzie drastyczne warunki reakcji, w szczególnosci ekstremalne pH, wplywajace na pozostala czesc czasteczki insuliny. W wyniku tego tworza sie produkty czesciowej degradacji insuliny, które sa w zasadzie nie do oddzielenia od produktu zadanego, a mianowicie insuliny iudzkiej. Totez otrzymuje sie w ten sposób preparaty POLSKA RZECZPOSPOLITA LUDOWA URZAD PATENTOWY PRL2 143 571 insuliny w wysokim stopniu zanieczyszczone. Takzei samo oczyszczanie stwarza we wczesniejszym stadium szereg problemów jesli chodzi o wydzielenie przereagowanej i nie przereagowanej dez/- B30/insuliny z mieszaniny reakcyjnej, w której zachodzilo wiazanie treoniny. W rezultacie tego oczyszczania, zwlaszcza w trakcie preparatyki w duzej skali, uzyskuje sie produkt o niedostatecznej czystosci, do czego dochodza jeszcze koszty wynikajace z bardzo wielkich strat.Niniejszy wynalazek umozliwia wytwarzanie insuliny ludzkiej o wysokiej czystosci, bez konie¬ cznosci przeprowadzania licznych, obnizajacych wydajnosc, stadiów oddzielania i oczyszczania.Sposób wedlug wynalazku polega na tym, ze od zmodyfikowanej insuliny ludzkiej o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R oznacza H, albo reszte mono- lub disacharydowa albo jej ester, enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy a R1 oznacza reszte mono- lub di-sacharydowa albo jej ester albo hydrofobowy lub posiadajacy ladunek aminokwas albo di- lub tripeptyd, przy czym jezeli Ri oznacza jeden lub wiecej aminokwasów to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca karboksypeptazy lub jezeli R1 oznacza reszte mono- lub disacharydowa to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy albo w przypadku gdy R oznacza podstawnik inny niz H, wtedy R1 oznacza OH, oddziela sie enzymatycznie cukier i/lub aminokwas lub peptyd, jak zdefiniowano w odniesieniu do symboli R i R1, w wyniku czego otrzymuje sie natywna insuline ludzka, a nastepnie wyodrebnia sie z podloza insuline ludzka.Wiazanie kowalencyjne miedzy grupa o symbolu R i i/lub R1 a insulina ludzka powinno byc podatne na rozszczepianie metoda enzymatyczna.Warunek ten w duzym stopniu decyduje o wyborze aminokwasu lub aminkowasów, albo rodzaju cukru, które tworza grupe o symbolu R i/lub R1.W przypadku, gdy R1 oznacza aminokwas lub aminkowasy, wybór korzystnie powinien pasc na resztejednego aminokwasu lub na reszte di- albo tripeptydu. Nalezec tu moga takie aminokwasy jak aminokwasy hydrofobowe, np. fenyloalanina lub tryptofan i/lub aminokwasy posiadajace ladunek, np. arginina lub lizyna. W przypadku uzycia aminokwasów hydrofobowych oczyszczanie w wybitnym stopniu ulatwiaja warunki hydrofobowe, podczas gdy w przypadku wiazania kwasów posiadajacych ladunek wydzielanie i oczyszczanie polepszaja sie w warunkach polarnych lub jonizujacych.Do cukrów, które mozna zastosowac w sposobie wedlug wynalazku jako grupe o symbolu R i/lub R1 naleza mono-, oraz disacharydy. Korzystnie takie jak glukoza, fruktoza, mannoza, galaktoza, sacharoza, maltoza i laktoza. Dzieki swemu silnie polarnemu charakterowi, cukry przylaczone do insuliny wywieraja bardzo korzystny wplyw na wydzielanie i oczyszczanie bialka.W celu wytwarzania insuliny ludzkiej nalezy ze zmodyfikwanej insuliny ludzkiej o wzorze przedstawionym na rysunku usunac enzymatycznie reszte stanowiaca grupe o symbolu R i/lub R1.Od doboru wspomnianej grupy zalezy rodzaj enzymu, odpowiedniego do uzycia w tym zastosowaniu.W przypadku, gdy grupa o symbolu R1 zlozona jest z jednego, lub wiecej niz jednego aminokwasu, usuwa sieja przy uzyciu karboksypeptydazy. Karboksypeptydaza stanowi egzopep- tadaze zdolna do usuwania z lancucha peptydowego jednego aminokwasu po drugim, zaczynajac od konca karboksylowego. Wykazuje przy tym preferencje dla pewnych aminokwasów.Karboksypeptydaza A (CPA) odszczepia aminokwasy hydrofobowe, z preferencja w szcze¬ gólnosci dla aminokwasów aromatycznych, fenyloalaniny, tyrozyny i tryptofanu. Z drugiej strony, karboksypeptydaza B (CPB) korzystnie odszczepia aminokwasy zasadowe. W sposobie wedlug wynalazku bardzo korzystnymi enzymami proteolitycznymi sa CPA i/lub CPB, lacznie z odpo¬ wiednio dobranymi aminokwasami w grupie o symbolu R1, jednakze w tym samym celu dogodnie mozna uzyc takze i innych karboksypeptydaz lub dipeptykarboksypeptydaz.W przypadku, gdy grupe o symbolu R1 stanowi cukier przylaczony wiazaniem estrowym, odszczepiania cukru dokonac mozna przy uzyciu estrazy, natomiast w przypadku, gdy grupe o symbolu R stanowi cukier przylaczony wiazaniem eterowym, do odszczepiania mozna uzyc enzymu takiego jak glaktozydaza, która jest specyficzna dla tego rodzaju zwiazków O-glikozy- dowych.Wynalazek objasniaja nastepujace przyklady. W przykladach tych, w kazdym przypadku przyjeto za podstawe dez/B30/insuline, tak zwana dez/Ala/insuline (DAl), wytworzona z insuliny swinskiej wedlug metody opisanej przez E. W. Schmitt'a i wsp. [Hoppe Seyler's Z. Physiol. Chemie. 359, 799 (1978)].143571 3 Przyklady I-VI. Przylaczanie di- i tripeptydów do DAL Przylaczenia dokonuje sie przy uzyciu róznych substratów, takich jak di- i tripeptydy i chlorowodorki tripeptydów, i róznych ukladów enzymatycznych, takich jak trypsyna i osadzona na nosniku trypsyna i lizylenopeptydaza.Przylaczenia tego dokonuje sie w nastepujace sposób. a) Przygotowuje sie podloze buforowe zlozone z mieszaniny dwumetyloformamidu i etanolu 1: (tak zwana frakcja organiczna) oraz pewnej ilosci buforu Tris. HC1 o stezeniu 0,5 mola/litr. b) W przygotowanym podlozu buforowym rozpuszcza sie odwazona ilosc substratu lacznie z cala iloscia DAL c) pH otrzymanej mieszaniny podwyzsza sie do zadanej wartosci za pomoca stezonego NaOH (1 mol/litr). d) Dodaje sie cala ilosc enzymu katalizujacego reakcje przylaczania i po jej rozpoczeciu kontynuuje sie ja w temperaturze 37°C e) Po uplywie czasu reakcji, produkt reakcji wydziela sie metoda chromatograficzna. Wydaj¬ nosc produktu przylaczenia okresla sie na podstawie chromatogramu i wyraza w procentach w stosunku do wydajnosci teoretycznej.W ponizszej tabeli 1 przedstawiono warunki reakcji i jej wydajnosc dla przykladów I-VI.Tabela 1 Warunki Stezenie DAI (g/litr) Substrat Stezenie (mol/litr) Enzym (g/litr): trypsyna trypsyna osadzona na krzemionce lizylendopeptydaza osa¬ dzona na krzemionce Podloze (zawartosc frakcji organicznej, %) PH Czas reakcji (godz) I 67,1 Thr-Phe 0,176 2,7 60 6,2 1/3 II 66,6 Trh-Phe 0,175 808 60 6,5 1 Przyklad nr III 13,6 Thr-Phe- Phe 0,067 5 67 6,5 7/12 IV 25,2 Thr-Phe- Phe-HCl 0,037 77 60 6,3 48 V 32,2 Thr-Phe- Phe-HCl 0,047 157 60 6,5 3 VI 32,2 Thr-Phe- Phe 0,025 157 60 6,5 3 Wydajnosc (% wydajnosci teoretycznej) 53 28 54 38 27 16 Przyklad VII. Rozdzielanie produków przylaczenia metoda chromatograficzna.Dokonano porównania DAI z wiazaniem peptydowym z DAI z wiazaniem estrowym pod wzgledem zachowania sie w chromatografii.W tym celu wytwarza sie sposobem opisanym w powyzszych przykladach I-IV produkty przylaczenia do DAI nastepujacych grup: Thr-O-metyl, Thr-O-III—rzed. butyl, Thr-Phe-O-metyl i Thr-Phe-Phe.Przyjmuje sie nastepujace warunki przylaczenia. Stezenie DAI: 14 g/litr, stezenie substratu: 0,06 mola/litr, stezenie trypsyny: 2,5 g/litr, zawartosc frakcji organicznej w podlozu o pH 6,4:67%, czas reakcji: 1/2 godziny.Produkty przylaczenia rozdziela sie na analitycznej kolumnie do cieczowej chromatografii cisnieniowej. Oznacza sie wartosci retencji (Rf). W ponizszej tabeli 2 przedstawiono uzyskane wyniki rozdzielania jako róznice miedzy wartosciami retencji produktów przylaczania, a wartos¬ ciami retencji DAI (<5Rf).4 143 571 Tabela 2 Grupa przylaczona doDAl 6 Rf (sek) Thr-O-metyl 220 Thr-O-III-rzed.butyl 1000 Thr-Phe-O-metyl 1400 Thr-Phe-Phe 1700 Przyklad VIII. Usuwanie przylaczonej grupy Phe-Phe z DAI-Thr-Phe-Phe.W rezultacie rozdzielania nie przereagowanej DAI i produktu przylaczenia, DAI-Thr-Phe- Phe, na kolumnie hydrofobowej, otrzymuje sie 23 ml frakcje zawierajaca produkt przylaczania w stezeniu 0,85 mg/ml. Produkt ten poddaje sie liofilizacji a nastepnie rozpuszcza w buforze z wodoroweglanem amonowym o stezeniu 0,2 mola/litr, o pH 8,5, z otrzymaniem stezenia konco¬ wego wynoszacego okolo 2,8 mg/ml. Do otrzymanego roztworu dodaje sie 2/il karboksypeptazy (2,3 E).Reakcje zatrzymuje sie po uplywie 30 minut za pomoca dodania takiej samej objetosci roztworu kwasu cytrynowego o stezeniu 0,5 mol/litr, po czym produkt reakcji poddaje sie krystalizacji.Za pomoca analizy aminokwasów wykazano, ze produkt przylaczenia zostal calkowicie przeksztalcony w insuline ludzka. Po krystalizacji, w supernatancie wykazano metoda analizy aminokwasów obecnosc jedynie fenyloalaniny.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania pólsynetycznej insuliny ludzkiej, znamienny tym, ze od zmodyfikowa¬ nej insuliny ludzkiej o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, na którym R oznacza H lub reszte mono- lub disacharydowa albo jej ester, enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy, a R1 oznacza reszte mono- lub di- sacharydowa albojej ester albo hydrofobowy lub posiadajacy ladunek aminokwas lub di- albo tripeptyd albo amid lub ester wymienionego aminok¬ wasu lub di- albo tripeptydu, przy czym jezeli R1 oznacza jeden lub wiecej aminokwasów to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca karboksypeptazy lubjezeli R1 oznacza reszte mono-lub disacharydowa to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy albo w przypadku gdy R oznacza podstawnik inny niz H, R1 oznacza grupe OH, oddziela sie enzymatycznie cukier i/lub aminokwas lub peptyd, jak zdefiniowano w odniesieniu do symboli R i/lub R1, a nastepnie wyodrebnia sie z podloza insuline ludzka. 2. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze stosuje sie zwiazek o przedstawionym na rysunku wzorze ogólnym, w którym symbol R1 oznacza monomer, dimer lub trimer fenyloalaniny. 3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako karboksypeptydaze stosuje sie karboksy- peptydaze A.143571 O des(B30)insulina-NH-CH- C^ R1 I HC-CH^ I J 0-R WZÓR 1 O H // 1 H2N~C - C-R HC-CH, I J 0-R WZÓR 2 uN-ch-/nh-ch-/r' 2 I I (ChU), HC-ChU \ *a \ ° NH2 O-R WZÓR 3 PL PL
Claims (3)
1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania pólsynetycznej insuliny ludzkiej, znamienny tym, ze od zmodyfikowa¬ nej insuliny ludzkiej o wzorze ogólnym przedstawionym na rysunku, na którym R oznacza H lub reszte mono- lub disacharydowa albo jej ester, enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy, a R1 oznacza reszte mono- lub di- sacharydowa albojej ester albo hydrofobowy lub posiadajacy ladunek aminokwas lub di- albo tripeptyd albo amid lub ester wymienionego aminok¬ wasu lub di- albo tripeptydu, przy czym jezeli R1 oznacza jeden lub wiecej aminokwasów to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca karboksypeptazy lubjezeli R1 oznacza reszte mono-lub disacharydowa to reszty te sa enzymatycznie odszczepialne za pomoca estrazy lub galaktozydazy albo w przypadku gdy R oznacza podstawnik inny niz H, R1 oznacza grupe OH, oddziela sie enzymatycznie cukier i/lub aminokwas lub peptyd, jak zdefiniowano w odniesieniu do symboli R i/lub R1, a nastepnie wyodrebnia sie z podloza insuline ludzka.
2. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze stosuje sie zwiazek o przedstawionym na rysunku wzorze ogólnym, w którym symbol R1 oznacza monomer, dimer lub trimer fenyloalaniny.
3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako karboksypeptydaze stosuje sie karboksy- peptydaze A.143571 O des(B30)insulina-NH-CH- C^ R1 I HC-CH^ I J 0-R WZÓR 1 O H // 1 H2N~C - C-R HC-CH, I J 0-R WZÓR 2 uN-ch-/nh-ch-/r' 2 I I (ChU), HC-ChU \ *a \ ° NH2 O-R WZÓR 3 PL PL
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8201650A NL8201650A (nl) | 1982-04-21 | 1982-04-21 | Semisynthetische bereiding van humane insuline. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL241575A1 PL241575A1 (en) | 1983-12-19 |
| PL143571B1 true PL143571B1 (en) | 1988-02-29 |
Family
ID=19839621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1983241575A PL143571B1 (en) | 1982-04-21 | 1983-04-20 | Method of obtaining semi-synthetic human insulin |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4840897A (pl) |
| EP (1) | EP0092280B1 (pl) |
| JP (2) | JPS58189149A (pl) |
| AT (1) | ATE42203T1 (pl) |
| AU (1) | AU554050B2 (pl) |
| CA (1) | CA1202587A (pl) |
| DE (1) | DE3379640D1 (pl) |
| DK (1) | DK173007B1 (pl) |
| ES (1) | ES521674A0 (pl) |
| HU (1) | HU189268B (pl) |
| IL (1) | IL68397A (pl) |
| NL (1) | NL8201650A (pl) |
| PL (1) | PL143571B1 (pl) |
| SU (1) | SU1232148A3 (pl) |
| ZA (1) | ZA832602B (pl) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3326472A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-02-14 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Neue insulin-derivate, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung sowie pharmazeutische mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3326473A1 (de) * | 1983-07-22 | 1985-01-31 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Pharmazeutisches mittel zur behandlung des diabetes mellitus |
| DE3327709A1 (de) * | 1983-07-29 | 1985-02-07 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Insulin-derivat-kristallsuspensionen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| DE3333640A1 (de) * | 1983-09-17 | 1985-04-25 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten, deren b-kette c-terminal verlaengert ist, neue basisch modifizierte insulin-derivate diese enthaltende mittel und ihre verwendung |
| DK309184D0 (da) * | 1984-06-25 | 1984-06-25 | Nordisk Insulinlab | Fremgangsmaade til isolering af insulin eller insulinlignende materiale fra en fermenteringsvaeske |
| EP1132404A3 (en) * | 1993-09-17 | 2002-03-27 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin |
| CN113956326B (zh) * | 2021-09-15 | 2024-05-28 | 河南工业大学 | 一种短肽单体，结构自愈型肽基水凝胶及其应用 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3276961A (en) * | 1963-04-08 | 1966-10-04 | Squibb & Sons Inc | Process for preparing human insulin |
| US4182654A (en) * | 1974-09-18 | 1980-01-08 | Pierce Chemical Company | Production of polypeptides using polynucleotides |
| NO153061C (no) * | 1979-04-13 | 1986-01-08 | Shionogi & Co | Fremgangsmaate for fremstilling av et b30-threonininsulin |
| JPS55138391A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | New synthetic method of peptide derivative |
| JPS55138393A (en) * | 1979-04-13 | 1980-10-29 | Shionogi & Co Ltd | Semisynthesis of insulin |
| DK147437A (en) * | 1980-02-11 | 1900-01-01 | Process for preparing human insulin or threonine B30 esters of human insulin, or a salt or complex thereof | |
| IE50892B1 (en) * | 1980-02-11 | 1986-08-06 | Novo Industri As | Process for preparing insulin esters |
| DK319780A (da) * | 1980-07-24 | 1982-01-25 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade til enzymatisk udskiftning af b-30 aminosyren i insuliner |
| DE3327928A1 (de) * | 1983-08-03 | 1985-02-21 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von insulin-derivaten |
-
1982
- 1982-04-21 NL NL8201650A patent/NL8201650A/nl not_active Application Discontinuation
-
1983
- 1983-04-13 DK DK198301616A patent/DK173007B1/da not_active IP Right Cessation
- 1983-04-13 ZA ZA832602A patent/ZA832602B/xx unknown
- 1983-04-14 AT AT83200530T patent/ATE42203T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-04-14 IL IL68397A patent/IL68397A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-04-14 EP EP83200530A patent/EP0092280B1/en not_active Expired
- 1983-04-14 DE DE8383200530T patent/DE3379640D1/de not_active Expired
- 1983-04-15 AU AU13554/83A patent/AU554050B2/en not_active Expired
- 1983-04-20 SU SU833582755A patent/SU1232148A3/ru active
- 1983-04-20 CA CA000426236A patent/CA1202587A/en not_active Expired
- 1983-04-20 ES ES521674A patent/ES521674A0/es active Granted
- 1983-04-20 PL PL1983241575A patent/PL143571B1/pl unknown
- 1983-04-20 JP JP58069862A patent/JPS58189149A/ja active Granted
- 1983-04-21 HU HU831392A patent/HU189268B/hu unknown
-
1985
- 1985-08-20 US US06/767,481 patent/US4840897A/en not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-10-28 JP JP4290556A patent/JPH0735399B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE42203T1 (de) | 1989-05-15 |
| EP0092280B1 (en) | 1989-04-19 |
| PL241575A1 (en) | 1983-12-19 |
| HU189268B (en) | 1986-06-30 |
| AU1355483A (en) | 1983-10-27 |
| JPH05339290A (ja) | 1993-12-21 |
| ES8405760A1 (es) | 1984-06-16 |
| ZA832602B (en) | 1984-01-25 |
| SU1232148A3 (ru) | 1986-05-15 |
| JPH0735399B2 (ja) | 1995-04-19 |
| NL8201650A (nl) | 1983-11-16 |
| AU554050B2 (en) | 1986-08-07 |
| DE3379640D1 (en) | 1989-05-24 |
| JPS58189149A (ja) | 1983-11-04 |
| DK173007B1 (da) | 1999-11-08 |
| IL68397A (en) | 1986-01-31 |
| IL68397A0 (en) | 1983-07-31 |
| JPH0533993B2 (pl) | 1993-05-20 |
| DK161683A (da) | 1983-10-22 |
| US4840897A (en) | 1989-06-20 |
| ES521674A0 (es) | 1984-06-16 |
| DK161683D0 (da) | 1983-04-13 |
| EP0092280A1 (en) | 1983-10-26 |
| CA1202587A (en) | 1986-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Spiro | Studies on the renal glomerular basement membrane: preparation and chemical composition | |
| Skeggs Jr et al. | The amino acid sequence of hypertensin II | |
| Kemmler et al. | Studies on the conversion of proinsulin to insulin: I. Conversion in vitro with trypsin and carboxypeptidase B | |
| US5663291A (en) | Process for obtaining insulin having correctly linked cystine bridges | |
| CN1483831B (zh) | 获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素或胰岛素衍生物的方法 | |
| US4400465A (en) | Semi-synthesis of human insulin | |
| EP0489711B1 (en) | Method for producing human growth hormone | |
| JP3130080B2 (ja) | ペプチドおよびその製造方法 | |
| Howard et al. | Studies of the physicochemical and enzymatic properties of papaya lysozyme | |
| EP0045187B1 (en) | A process for enzymatic replacement of the b-30 amino acid in insulins | |
| US5763215A (en) | Method of removing N-terminal amino acid residues from eucaryotic polypeptide analogs and polypeptides produced thereby | |
| Wingard et al. | Myxobacter AL-1 protease II: specific peptide bond cleavage on the amino side of lysine | |
| Rose et al. | Preparation of well-defined protein conjugates using enzyme-assisted reverse proteolysis | |
| Kelley et al. | Amino acid sequence of Escherichia coli alkaline phosphatase. Amino-and carboxyl-terminal sequences and variations between two isoenzymes | |
| PL143571B1 (en) | Method of obtaining semi-synthetic human insulin | |
| Carey et al. | Phaseolain: A plant carboxypeptidase of unique specificity | |
| CA1229588A (en) | Process for the preparation of insulin derivatives | |
| EP0017938A1 (en) | Process for preparing a B30-threonine insulin | |
| Gold et al. | The amino acid sequence of a hexapeptide containing an essential sulfhydryl group of rabbit muscle glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase | |
| Laine et al. | Primary structure of chicken erythrocyte histone H2A | |
| FI79117B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av bovine-, svin- eller humaninsulin. | |
| IDA et al. | Assignment of catalytically essential cysteine residues in aspartase by selective chemical modification with N-(7-dimethylamino-4-methylcoumarynyl) maleimide | |
| Yamasaki et al. | Studies on the common active site of growth hormone. Revision of the amino acid sequence of an active fragment of bovine growth hormone. | |
| Maurer et al. | Tryptophan Synthetase β2 Subunit: PRIMARY STRUCTURE OF THE PYRIDOXYL PEPTIDE FROM THE PSEUDOMONAS PUTIDA ENZYME | |
| EP0085516A2 (en) | A process for enzymatic replacement of the B-30 amino acid in insulins |