PL154182B1 - Fastening handle - Google Patents
Fastening handleInfo
- Publication number
- PL154182B1 PL154182B1 PL1987264490A PL26449087A PL154182B1 PL 154182 B1 PL154182 B1 PL 154182B1 PL 1987264490 A PL1987264490 A PL 1987264490A PL 26449087 A PL26449087 A PL 26449087A PL 154182 B1 PL154182 B1 PL 154182B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- infusion
- substance
- mammary gland
- growth
- mammal
- Prior art date
Links
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims abstract description 74
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 54
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 40
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 35
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 claims description 74
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 68
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 20
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims description 20
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 9
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 9
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 8
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 7
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims description 6
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 claims description 6
- 102100021809 Chorionic somatomammotropin hormone 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010003044 Placental Lactogen Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000381 Placental Lactogen Substances 0.000 claims description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 3
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims description 3
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 claims 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 abstract description 18
- 239000008267 milk Substances 0.000 abstract description 18
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 abstract description 18
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 55
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 48
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 45
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 41
- 101000851176 Homo sapiens Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 33
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 33
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 21
- 102000018386 EGF Family of Proteins Human genes 0.000 description 20
- 108010066486 EGF Family of Proteins Proteins 0.000 description 20
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 16
- 244000309465 heifer Species 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 244000309466 calf Species 0.000 description 13
- 101001034686 Bos taurus Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 12
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 12
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 210000002445 nipple Anatomy 0.000 description 11
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 10
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 8
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 8
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 8
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 8
- 101000851196 Mus musculus Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 7
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 7
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 7
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 6
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 description 6
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 5
- 241000207961 Sesamum Species 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 4
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 4
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 4
- -1 NBGF Proteins 0.000 description 4
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N diphenylamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 DMBHHRLKUKUOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 229960004532 somatropin Drugs 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 3
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 3
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001897 Anterior Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 2
- 102000000827 Anterior Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 2
- 238000005231 Edge Defined Film Fed Growth Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003329 adenohypophysis hormone Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 2
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N ethanol;ethoxyethane Chemical compound CCO.CCOCC PSLIMVZEAPALCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 102000044162 human IGF1 Human genes 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001983 lactogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N (3-hydroxy-2,3,3a,5,6,6a-hexahydrofuro[3,2-b]furan-6-yl) (z)-octadec-9-enoate Chemical compound OC1COC2C(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC21 JDRAOGVAQOVDEB-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N (8R,11R,12R,13E,15S)-11,15-Dihydroxy-9-oxo-13-prostenoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241000283699 Bos indicus Species 0.000 description 1
- 101000599968 Bos taurus Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- VJGGHXVGBSZVMZ-QIZQQNKQSA-N Cloprostenol Chemical compound C([C@H](O)\C=C\[C@@H]1[C@H]([C@@H](O)C[C@H]1O)C\C=C/CCCC(O)=O)OC1=CC=CC(Cl)=C1 VJGGHXVGBSZVMZ-QIZQQNKQSA-N 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 101100118545 Holotrichia diomphalia EGF-like gene Proteins 0.000 description 1
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 1
- 101000655540 Homo sapiens Protransforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N Leu-Arg Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 101100225178 Mus musculus Gfm1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102000006747 Transforming Growth Factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220631423 Very-long-chain (3R)-3-hydroxyacyl-CoA dehydratase 1_A61D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N [(3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] (Z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LUXUAZKGQZPOBZ-SAXJAHGMSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229960000711 alprostadil Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 229960004409 cloprostenol Drugs 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000012505 colouration Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000043392 human TGFA Human genes 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 230000009701 normal cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000009806 oophorectomy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001913 submandibular gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Dairy Products (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Liquid Deposition Of Substances Of Which Semiconductor Devices Are Composed (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Seasonings (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Feed For Specific Animals (AREA)
Description
RZECZPOSPOLITA OPIS PATENTOWY 154 182
POLSKA
URZĄD
PATENTOWY
RP
Patent dodatkowy do patentu nr Zgłoszono: 87 03 06 (P. 264490)
Pierwszeństwo: 86 03 07 Stany Zjednoczone Ameryki
Int. Cl.5 A01K 67/00 A61D 7/00
Zgłoszenie ogłoszono: 88 02 18
Opis patentowy opublikowano: 1992 01 31
Twórca wynalazku Uprawniony z patentu: Monsanto Company,
St. Louis (Stany Zjednoczone Ameryki)
Sposób wzmagania wzrostu miąższu gruczołu mlecznego
Przedmiotem wynalazku jest sposób wzmagania wzrostu miąższu gruczołu mlecznego u fizjologicznie normalnego ssaka przez podawanie substancji wykazującej wpływ mitogenny na komórki nabłonka gruczołu mlecznego tego ssaka.
Wytwarzanie mleka przez ssaka jest ostatecznie ograniczone ilością miąższu gruczołu mlecznego (tkanka wydzielnicza). Porównanie wydajności mleka z całkowitą wagą mokrą miąższu, jego wagą suchą, wagą suchą bez tłuszczu i całkowitym gruczołowym DNA wykazuje wysokie wartości koleracji. Davis i wsp., w Proc. N. Z. Soc. Anim. Prod., 43, 71 (1983), wiążą zwiększone wytwarzanie mleka u zwierząt wyższych genetycznie wyłącznie ze zwiększoną objętością wymienia, która zależy również od ilości komórek miąższu.
Klasyczne dane wskazują na to, że wzrostem miąższu gruczołu mlecznego kierują czynniki przysadkowe, jajnikowe, nadnerczowe i łożyskowe. Patrz Cowie, 15 Monographs on Endocrinoiogy (1980; oraz opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4521 409, w którym ujawniono, że wzrost miąższu gruczołu mlecznego u przeżuwaczy można wzmagać za pomocą podawania przeżuwaczowi hormonu wzrostu (somatotropiny) do krwi krążącej, między mniej więcej początkiem okresu dojrzewania a mniej więcej pierwszym porodem (korzystnie mniej więcej przy pierwszym zapłodnieniu).
Przy podawaniu czynników wzmagających wzrost miąższu do krwi krążącej zwierzęcia większość mitogenów komórek miąższu gruczołu mlecznego wiąże się dodatkowo z receptorami wielu innych tkanek. W zależności od tego zmniejszenia pożądanego wpływu na receptory gruczołu mlecznego stymulującego wzrost, można oczekiwać, że wzmaganie wzrostu miąższu gruczołu mlecznegoprzezpodawanie wspomnianych mitogenówdo krwi krążącej będzie wymagało względnie większej ich ilości. Tak więc obecnie jest bardzo pożądane opracowanie praktycznego sposobu zwiększania zdolności do wytwarzania mleka i/lub wydajności ssaka, niezależnego od podawania czynników wzmagających wzrost do krwi krążącej ssaka.
Używając królików, myszy i szczurów fizjologicznie nienormalnych, to znaczy poddanych usunięciu jajników i/lub poddanych innemu działaniu (np. potraktowanych uprzednio hormonem związanym z reprodukcją w celu wywołania ciąży rzekomej), przeprowadzono badania wpływu na rozwój gruczołu mlecznego podskórnego wstrzykiwania somatotropiny i/lub innych hormonów, implantów uwalniającej toksynę cholery lub doprzewodowego wstrzykiwania „hormonu laktogennego“. Patrz Lyons i wsp., Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 50, 308-311 (1942) oraz Recent Próg. Hormone Res., 14, 219-254 (1958); Fiddler i wsp., J. Endocrin., 49,459-469 (1971); Daniel i wsp. Sci., 224,1245-1247 (1984) oraz Silberstein i wsp., Proc. Natl. Sci. USA, 81,4950-4954 (1984). Inni autorzy badali wpływ mitogenów in vitro, takich jak naskórkowy czynnik wzrostu, łącznie z insuliną lub bez niej, na wzrost komórek gruczołu mlecznego rozmaitych gatunków zwierząt w hodowli komórkowej. Patrz: Imagawa i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79, 4074-4077 (1982); Taketani i wsp., Endocrin., 113 (3), 871 (1983) i Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 2647-2650 (1983); Tonelli i wsp., Naturę, 285, 250-252 (1980) oraz Turkington, Exper. Celi Res., 57, 70-85 (1969).
Celem wynalazku było umożliwienie wzmagania wzrostu miąższu gruczołu mlecznego u ssaka poprzez opracowanie sposobu, który zapewniałby dobre wyniki u ssaków fizjologicznie normalnych. Sposób taki powinien wykazywać wysoki stopień specyficzności względem poddawanego zabiegowi zwierzęcia i wymagać użycia minimalnej lub bliskiej minimalnej ilości substancji doprowadzającej do skutku wzrostu miąższu. Sposób ten powinien być wygodny w realizacji i zapewniać uzyskiwanie możliwych do przewidzenia efektów w poddanych działaniu gruczołach mlecznych zwierzęcia. Sposób ten powinien stwarzać minimalne ryzyko biologicznych działań ubocznych na zwierzę.
Nieoczekiwanie odkryto, że powyższe cele można osiągnąć dzięki sposobowi według wynalazku, którego cechą jest to że ssakowi podaje się substancję wykazującą wpływ mitogenny na drodze infuzji do gruczołu mlecznego podczas ciąży, albo mniej więcej między początkiem dojrzewania a pierwszą ciążą ssaka.
Niespodziewanie okazało się, że można osiągnąć tym sposobem wzmożenie normalnego wzrostu miąższu, przy czym sposób ten nie wymaga podawania mitogenu do krwi krążącej zwierzęcia, jego podskórnego wstrzykiwania lub implantacji, ale zamiast tego wykorzystuje dogodną metodę, taką, jaka w przypadku większości krów typu mlecznego i niektórych innych ssakówjest rutynowo stosowana do infuzji antybiotyków, których działania nie można oczywiście porównać z wpływem mitogennym. Sposobem według wynalazku można osiągnąć znaczne wzmożenie wzrostu miąższu w stosunku do wzrostu normalnego, stosując tylko bardzo niewielkie ilości powyższych substancji i to we względnie krótkich odstępach czasu.
Wynalazek jest użyteczny w przypadku każdego ssaka, u którego pożądane jest wzmożenie wzrostu miąższu gruczołu mlecznego. Jest on szczególnie użyteczny w przypadku przeżuwaczy, w tym bydła, takiego jak krowy typu mlecznego, krowy typu mięsnego oraz jałówki typu mlecznego i mięsnego. Jest on użyteczny w przypadku krów wszystkich znanych ras mlecznych, takich jak holstein, friesen, brown swiss, jersey, guernsey, ayrshire, milking shortborn oraz ich krzyżówek, a także krów wszystkich znanych ras mięsnych, takich jak hereford, angus, zebu, charolais, brangus, simmental, chianina, dutch belted, limousin i ich krzyżówek. Jest on także użyteczny w przypadku innych przeżuwaczy, takich jak owce i kozy wszystkich ras, a także różnych nieprzeżuwaczy, np. Św m wszystkich ras.
Przez określenie „ssaki fizjologicznie normalne stosowane w niniejszym opisie powinno się rozumieć ssaki nie poddane usunięciu jajników i nie potraktowane uprzednio np. hormonem związanym z reprodukcją, takim jak estrogen, gonadotropina itp., w celu wywołania ciąży rzekomej lub dojrzewania.
Stosowany w niniejszym opisie termin „miąższ gruczołu mlecznego odnosi się do tkanki w gruczole mlecznym, w tym tkanki pospolitej zwanej „nabłonkiem gruczołu mlecznego, która jest zaangażowana w tworzeniu mleka przez ten gruczoł. Typowo, u samic wzrost gruczołu mlecznego zachodzi głównie po rozpoczęciu się dojrzewania. Zazwyczaj, np. u jałówki, wzrost gruczołu mlecznego w większości zachodzi podczas pierwszej ciąży. Dalszy wzrost i/lub wzrost ponowny miąższu zachodzi podczas następnych ciąż.
W celu wzmożenia tego wzrostu, sposób według wynalazku można zastosować przez podanie substancji wykazującej pożądany wpływ mitogenny między mniej więcej początkiem dojrzewania (włączając okres bliski dojrzewaniu) a pierwszą ciążą ssaka, lub podczas pierwszej, albo każdej natępnej ciąży. Tak więc, typowo podawanie to przeprowadza się w okresie „zasuszenia, podczas którego ssak nie wykazuje laktacji. U krów typu mlecznego i podobnych ssaków zazwyczaj korzystne jest podawanie w trakcie ostatniego trymestru przed porodem. W przypadku substancji
154 182 o bezpośrednim wpływie mitogennym, np. IGF, EGF, prostaglandyn, NBGF, TGF-α, insulin i ich połączeń, infuzje najkorzystniej przerywa się najpóźniej na około 5, a korzystnie na około 10 dni przed porodem. W przypadku mitogenów o działaniu parakrynowym, np. somatotropin, laktogenu łożyskowego i ich połączeń, infuzje można kontynuować do około 5 dnia przed porodem bez niekorzystnego oddziaływania na pożądane efekty. Na ogół kontynuowanie infuzji w ciągu ostatnich 10 dni ciąży nie daje znaczącego wzmożenia wzrostu miąższu.
Dogodną i zaskakująco skuteczną technikę podawania sposobem według wynalazku nazywa się tu najogólniej „infuzją do gruczołu mlecznego. U ssaków takich jak krowy, techniki tej rutynowo używa się do podawania maści zawierających antybiotyk lub inne środki przeznaczone do zapobiegania lub zwalczania zapalenia miąższu wymienia.
W praktycznym zastosowaniu wynalazku, substancję wykazującą wpływ mitogenny zazwyczaj można podawać stosując podobną technikę i nawet bardziej dogodnie za pomocą włączenia jej (razem z inną substancją stymulującą wzrost miąższu lub bez niej) do środka przeznaczonego do infuzji w celu zapobiegania lub zwalczania zapalenia miąższu wymienia, lub w jakikolwiek innym celu. W metodzie tej, tępo zakończoną strzykawką wprowadza się substancję przez otwór strzyku i przez przewód brodawkowy tak, że substancja wykazująca działanie mitogenne zostaje ulokowana w zatoce strzyku. Z tego miejsca, normalnie rozprzestrzenia się ona przez zatokę strzyku, zatokę mleczną i układ przewodów gruczołu mlecznego. Ta dobrze znana metoda opisana jest przez Spinelli'ego i wsp. w „Drugs in Veterinary Practice, str. 80-83, C. V. Mosby Co., St. Louis, oraz Reutera i wsp. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4011 312, opublikowanym 8 marca 1977 r., które to źródła włączone są do niniejszego opisu jako odnośniki. Dla celów niniejszego wynalazku inne sposoby postępowania należy uważać za równoważne infuzji do gruczołu mlecznego w takim wymiarze, w jakim pozwalają one na ulokowanie tego rodzaju substancji w zatoce strzyku, doprowadzając w rezultacie tego do rozprzestrzeniania się jej, poprzez układ przewodów i przechodzenie z niego do tkanki gruczołu mlecznego, gdzie będzie ona wywierać wpływ wzmagający wzrost miąższu.
Dla celów niniejszego wynalazku przez „bezpośredni i „parakrynowy wpływ mitogenny należy rozumieć taki wpływ, który nie wymaga osiągnięcia, a w większości przypadków nie jest związany z osiągnięciem przez wprowadzoną substancję do krwi krążącej zwierzęcia poddanego zabiegowi w takiej ilości, która podnosi jej stężenie we krwi do poziomu dostatecznego dla wywarcia, przez regulację endokrynową, mitogennego wpływu na komórki miąższu zwierzęcia w pożądanym rozmiarze. Jeśli chodzi o przegląd dotyczący regulacji parakrynowej wzrostu gruczołu mlecznego, patrz Oka i wsp., Clinics in Endocrin. and Metab., 15 (1), 79-97 (1986).
Sposób według wynalazku realizuje się z zastosowaniem dowolnej substancji wywierającej znaczny wpływ mitogenny bezpośredni lub parakiynowy na miąższ gruczołu mlecznego u ssaka, który ma być poddany zabiegowi. W wielu ważnych zastosowaniach sposób postępowania realizuje się z użyciem substancji działającej bezpośrednio na komórki miąższu gruczołu mlecznego, do którego dokonano infuzji w celu zwiększenia w nim szybkości namnażania się normalnych komórek. W innych zastosowaniach substancja dziła bezpośrednio na komórki w gruczole nie stanowiące komórek miąższu, co w wyniku zapewnia w tych komórkach, dzięki wpływowi parakrynowemu, miejscowe zwiększenie ilości substancji wykazującej bezpośredni wpływ mitogenny na komórki miąższu gruczołu mlecznego, do którego dokonano infuzji.
W niektórych przypadkach, co przedstawiono szczegółowo w przykładach, infuzja wspomnianej substancji do gruczołu mlecznego daje w wyniku znaczny wzrost gruczołów mlecznych przyległych do tego gruczołu, do którego dokonano infuzji, bez znacznego wzrostu poziomu wprowadzonej substancji w krwi krążącej zwierzęcia. Jednakże receptory podatne na bezpośrednie lub parakrynowe wpływy niektórych substancji w gruczole mlecznym mogą istnieć w wystarczającej ilości tylko podczas pewnych faz fizjologicznych u zwierzęcia. Np. ilość receptorów wiążących somatotropinę w bydlęcym gruczole mlecznym pojawiającą się podczas ciąży jest większa, niż wtedy, gdy zwierzęta nie są w ciąży. Porównaj: Jean-Francois Beckers „L'hormone placetaire somatomammotrope bovine“, rozdz. V, Universite de Liege, Wydział Medycyny Weterynaryjnej (1983) z Gertleri wsp., „Hormonal Control of Casein Synthesis and Organ Culture of the Bovine Lactating Mammary Gland, J. Dairy Res., 49,387 (1982) i Akers „Lactogenic Hormones: Binding Sites, Mammary Growth, Secretory Celi Differentiation, and Milk Biosynthesis in Ruminants, J. Dairy Sci., 68, 501 (1985).
154 182
W wielu zastosowaniach sposobu według wynalazku substancją wykazującą wpływ mitogennyjest polipeptydowy czynnik wzrostowy. Pewne klasy tych czynników wzrostowych korzystne w zastosowaniu w sposobie według wynalazku mają masę cząsteczkową na ogół niższą od około 45000, a nawet, bardziej typowo, niższą od około 22500, a w przypadku czynników wzrostowych wykazujących bezpośredni wpływ mitogenny, jak wyżej opisano, typowo poniżej około 10000.
W niektórych przypadkach można podobnie zastosować pewne substancje niepolipetydowe, takie jak steroidy wytwarzane w jajniku i łożysku oraz substancje będące ich agonistami. W obydwu przypadkach substancją może być substancja występująca w naturze, substancja syntezyzowana w celu naśladowania substancji występującej w naturze, lub substancja syntetyzowana w celu zapewnienia substancji niepodobnej do jakiegokolwiek występującego w naturze związku, ale niezależnie od tego wykazującej wpływ mitogenny.
Doskonałą klasą polipeptydowych czynników wzrostowych, których można użyć w sposobie według wynalazku są naskórkowe czynniki wzrostowe (EGF). Typowo, oddziaływują one z receptorami komórek nabłonkowych gruczołu mlecznego ze stymulacją namnażania się tych komórek. EFG różnych gatunków ssaków poddano analizie sekwencji i zidentyfikowano na podstawie ich sekwencji aminokwasów i/lub konfiguracji narzuconych przez wewnętrzne usieciowanie reszt cysteiny w wiązania dwusiarczkowe. Jeden z tych EGF jest dobrze scharaketryzowanym jednołańcuchowym polipeptydem o 53 aminokwasach, który można wyodrębnić z podszczękowych (ślinowych) gruczołów dorosłych myszy samców. Inny sposób EGF, ludzki urogastron, jest syntetyzowany w dwunastnicy i gruczołach ślinowych i można go wyodrębnić z ludzkiego moczu. Urogastron jest w 70% homologiczny (37 wspólnych z 53 aminokwasów) z mysim EFG i zawiera 3 wiązania dwusiarczkowe w tych samych pozycjach. Dostępne dane wskazują, że ludzki urogastron i ludzki EGF są identyczne. Co do większej ilości informacji o EGF patrz Carpenter i wsp. „Epidermal Growth Factor, Ann. Rev. Biochem., 48,193-216 (1979) oraz Gregory, Naturę, 257, 325-327 (1975), przy czym obie te prace są włączone do niniejszego opisu jako odnośniki.
Jest rzeczą znaną, że całkowita sekwencja aminokwasów ludzkiego lub mysiego EGF nie jest niezbędna dla aktywności mitogennej. I tak np. Gamble'a i in. opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 917 824 opublikowany 4 listopada 1975 r. ujawnia molekularne warianty EGF skróconego przy końcu karboksylowym, np. o 2, 5 lub 6 aminokwasów. Gregory'ego i in. opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4035485, opublikowany 12 lipca 1977, ujawnia molekularny wariant EGF skróconego o 7 aminokwasów. Cohena opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 948 875, opublikowany 6 kwietnia 1976, ujawnia pochodne EGF, którym brak C-końcowych reszt Leu-Arg. Banksa i in. zgłoszenie patentowe PCT nr WO 83/04030 ujawnia analogi urogastronu różniące się identycznością lub położeniem jednego, lub więcej niż jednego aminokwasu, oraz Komoriyi i in. zgłoszenie patentowe PCT nr WO 85X01284 ujawnia polipeptydy o aktywności podobnej do EGF opartej na obecności 10-aminokwasowej sekwencji odpowiadającej sekwencji naturalnego GF międz Cys2o a Cys3i. Każdą z tych pozycji włączono do niniejszego opisu jako odnośnik. Te, lub im podobne molekularne warianty EGF, ich analogi lub inne związki, które oddziaływują z receptorami EGF albo funkcjonalnie podobnymi w gruczole mlecznym w wyniku infuzji do gruczołu mlecznego i pozwalają osiągnąć cele niniejszego wynalazku w znacznym stopniu, uważane są w takim też wymiarze za ekwiwalenty EGF dla celów niniejszego wynalazku.
Znane są rozmaite sposoby otrzymywania EGF. I tak np. japońskie zgłoszenie patentowe nr 59/027858 (Nippon Shinyaku) ujawnia sposób poddania zabezpieczonych peptydów składających się z 1-5 aminokwasów kondensacji z utworzeniem zabezpieczonego tripentakontapeptydu, który po usunięciu grup zabezpieczających zostaje utleniony, w wyniku czego otrzymuje się EGF. Lee i in. w zgłoszeniu patentu europejskiego nr 128 733, opublikowanym 19 grudnia 1984 r., oraz Bell w zgłoszeniu patentowym nr WO 85/00369, opublikowanym 31 stycznia 1985 r. ujawniają otrzymywanie EGF przez ekspresję rekombinantowego DNA. Sugimoto w brytyjskim opisie patentowym nr 2092155 ujawnia sposób wytwarzania EGF za pomocą namnażania komórek hybrydoma. Wreszcie Nishimury i in. opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 528 186, opublikowany 9 lipca 1985, ujawnia wyodrębnienie EGF z moczu ludzkiego. Ujawnienia te włączono do niniejszego opisu jako odnośniki.
W innych korzystnych zastosowaniach, czynnikiem wzrostowym może być czynnik taki, jak płodowe EGF, np. transformujące czynniki wzrostowe typu a. Patrz Sporna i wsp. zgłoszenie patentu europejskiego nr 105014 oraz Todaro i in., zgłoszenie patentu.europejskiego) nr 190018.
154 182
Ujawnienia te włączone są do niniejszego opisu jako odnośniki. Typowo, oddziaływują one z receptorami w gruczole mlecznym, w wyniku czego uzyskuje się pożądaną aktywność mitogenną. Inną klasą rozmaitych polipetydów użytecznych w sposobie według wynalazku są analogi białka wirusowego ujawnione przez Browna i in. w zgłoszeniu patentu europejskiego nr 199 769 opartym na zgłoszeniu nr WO 86/02650.
W innych zastosowaniach, czynnikiem wzrostowym może być polipeptyd z rodziny insuliny, analog tego polipeptydu, lub inna substancja oddziaływująca z receptorami insulopodobnego czynnika wzrostowego (IGF) albo z funkcjonalnie podobnymi w gruczole mlecznym, zapewniając mitogenny wpływ na miąższ. Korzystnie, stosowanym IGF jest IGF-I („somatomedyna) lub IGF-II. Podobne wyniki można uzyskać z insuliną lub jej perkursorem, np. proinsuliną, aczkolwiek wymagana tu ilość jest znacznie wyższa aniżeli w przypadku IGF.
Istnieje obszerne piśmiennictwo na temat tożsamości tych czynników wzrostowych z rodziny insuliny i sposobów ich otrzymywania. I tak np., sekwencję aminokwasów ludzkiego IGF-I i IGF-II oraz ich otrzymywanie w wyniku ekspresji rekombinowanego DNA w drobnoustrojach gospodarzach opisano w zgłoszeniach patentów europejskich nr nr 128 733 (j. w.) i 123 228 (Chiron Corp.) opublikowanych 31 października 1984 r. Analogi IGF-I zawierające walinę w pozycji aminokwasowej 59 opisano w Niwy i in. zgłoszeniu patentu europejskiego nr 158 892, opublikowanym 23 października 1985 r. Więcej informacji o IGF można znaleźć w publikacji Rinderknechta i in.. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73,2365 (1976), Zapfa i in., Curr. Top. Celi. Reg., 19,257 (1981) oraz Wilsona i in. J. Endocrin., 95, 59-64 (1982). Otrzymywanie insuliny i proinsuliny jest opisane przez Johnsona w Sci., 219, 632-637 (1983) oraz w zgłoszeniu patentu europejskiego nr 55945 (Genentech), opublikowanym 14 lipca 1982 r. Ujawnienia cytowane w tym paragrafie włączono do niniejszego opisu jako odnośniki.
Do substancji, które można wprowadzać drogą infuzji w celu osiągnięcia parakiynowego wpływu mitogennego należą: laktogen łożyskowy, pewne hormony przedniego płata przysadki i inne polipeptydy mające wystarczające podobną strukturę chemiczną, aby zapewnić zasadniczo taki sam mitogenny wpływ (wpływy) dla celów niniejszego wynalazku. Ogólnie, hormony przedniego płata przysadki inne niż prolaktyna (np. somatotropiny) są korzystne z powodu swej skuteczności.
Jako substancję mitogenną można także stosować jedną lub większą liczbę związków ze szlaku metabolicznego kwasu arachidonowego i ich analogów o działaniu mitogennym. Należą do nich prostaglandyny, takie jak te z grupy A - F, np. prostoglandyny Ei, E2, Ai, A2, Bi, B2, D2, Fitr i Ii produkcji Sigma Chemical Co., St. Louis, St. Zjedn. Ameryki, F2Ć produkcji The Upjohn Co., Kalmazo, St. Zjedn. Ameryki i kloprostenol. Można także stosować ich prekursory i metabolity, przy czym silniej działające można podawać w mniejszych dawkach.
Ilości substancji zapewniających aktywność mitogenną wymaganą w sposobie według wynalazku są bardzo niewielkie, co wskazuje na niespodziewanie wysoką skuteczność przy ich użyciu. Dawki jednostkowe do wprowadzania do gruczołu w niektórych przypadkach nie muszą być wyższe od około 2//g, a w pewnych przypadkach, będąc nadal skutecznymi, mogą być jeszcze niższe. Dawki jednostkowe do około 100 mg (lub więcej) też można zwykle podawać bez interferencji z pożądanymi wpływami, ale ze względów ekonomicznych na ogół korzystniejsze są dawki mniejsze, takie jak dawki poniżej 100//g. Stężenia substancji zapewniającej aktywność w środku wprowadzonym drogą infuzji są zwykle najbardziej korzystne w zakresie od około 5 ng/ml do około 500 ng/ml, aczkolwiek w niektórych przypadkach mogą okazać się użyteczne stężenia wyższe lub niższe.
Najbardziej pożądane dawki, stężenie, częstotliwość i ilość infuzji można ustalić na drodze eksperymentów rutynowych. W licznych przypadkach od 1do 5 następujących po sobie infuzji daje dobre rezultaty. Infuzje można odpowiednio rozdzielić przerwami, np. od 1 do około 10 (korzystnie od 2 do około 5) dni. Fakt, że zasadnicze wzmożenie wzrostu miąższu można osiągnąć w tak krótkich okresach czasu był całkowicie nieoczekiwany i ma poważne znaczenie ekonomiczne. Zadawalające dawki całkowite, to jest suma kolejnych dyfuzji dla indywidualnego ssaka podczas ciąży lub w okresie dojrzewania, przed ciążą, wynoszą na ogół co najmniej około 10/tg, typowo są niższe od około 500 mg i często korzystnie niższe od około 1 mg substancji zapewniającej aktywność mitogenną.
154 182
Podczas gdy sposób według wynalazku można praktycznie zastosować używając pojedynczej substancji zapewniającej aktywność mitogenną, w niektórych przypadkach mogą okazać się korzystne kombinacje tych substancji. W wielu zastosowaniach korzystnejest wprowadzenie drogą infuzji substancji zapewniającej aktywność mitotyczną, ściśle odpowiadającej substancji naturalnie występującej w gatunku, na który się działa, np. bydlęcego EGF, IGF i/lub somatotropiny przy traktowaniu bydła. Tym nie mniej jednak, zazwyczaj odpowiednie są także substancje odpowiadające substancjom naturalnie występującym u innych gatunków zwierząt.
Normalnie, sposób postępowania według wynalazku realizuje się z użyciem środka przystosowanego do podawania ssakowi przez infuzję do gruczołu mlecznego i zawierającego, w ilości skutecznej, jeśli chodzi o wzmaganie wzrostu miąższu gruczołu mlecznego u tego ssaka, substancję wywierającą wpływ mitogenny na komórki nabłonka gruczołu mlecznego u wspomnianego ssaka. Tego rodzaju środki powinny być fizjologicznie tolerowane, korzystnie zasadniczo niedrażniące i zasadniczo wolne od endotoksyn. Jeżeli jest to pożądane, substancję zapewniającą aktywność mitogenną można wprowadzać drogą infuzji jako substancję stałą, która może być subtelnie rozdrobniona lub poddana kompresji z nadaniem korzystnego kształtu i wielkości, np. dla powolnego uwalniania się w zatoce strzyku.
W innych zastosowaniach korzystnie używa się nośnika, zasadniczo płynnego w temperaturze ciała ssaka, a korzystnie także w temperaturze otoczenia przy infuzji. Czy środek do infuzji jest stały lub płynny, korzystne jest, aby zawierał on nośnik zwiększający dyfuzję substancji zapewniającej aktywność mitogenną przez gruczoł mleczny. W niektórych, aczkolwiek nie we wszystkich przypadkach, korzystne jest, aby nośnik był zasadniczo rozpuszczalny w wodzie.
Najbardziej pożądany typ nośnika i jego ilość do infuzji substancji zapewniającej aktywność mitogenną można ustalić na podstawie przeprowadzonych eksperymentów rutynowych. W celu objaśnienia można podać, że typowo zadawalające jest użycie 1-10 ml płynnego nośnika o pH w zakresie fizjologicznym, np. fizjologicznego roztworu soli, niekompletnego adiuwantu Freunda lub oleju roślinnego, takiego jak arachidowy albo sezamowy, względnie mineralnego. Zazwyczaj korzystne są emulsje dwóch, lub większej ilości takich nośników. Jeżeli jest to pożądane, można włączyć odpowiednie stabilizatory, takie jak monosacharady i/lub disacharydy, cukier i alkohole lub obojętne aminokwasy.
Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania środków użytecznych do wzmagania wzrostu miąższu gruczołu mlecznego u ssaka. W ogólnym zastosowaniu, sposób ten polega na tym, że łączy się (np. przez zdyspergowanie) substancję wykazującą wpływ mitogenny na komórki nabłonka gruczołu mlecznego u danego ssaka, z nos'nikiem wzmagającym dyfuzję substancji przez gruczoł mleczny tego ssaka, przy czym środek ten jest przystosowany, dzięki temu połączeniu, do podawania ssakowi na drodze infuzji do gruczołu mlecznego.
Następujące opisy specyficznych zastosowań sposobu według wynalazku stanowią jedynie objaśnienie i nie ograniczają w zamierzeniu w żaden sposób zakresu wynalazku. W przykładach tych, wszystkie zwierzęta są fizjologicznie normalne (jak zdefiniowano w poprzedniej części opisu). Wszystkie wartości temperatury podano w stopniach Celsjusza. Części i wartości procentowe są częściami i wartościami wagowymi, jeżeli tego inaczej nie wskazano.
A. Naskórkowe czynniki wzrostowe.
Przykładylill. 12 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięsnego, w ich ostatnich 40-80 dniach ciąży umieszcza się w obiekcie wolnostanowiskowym, karmi się racją siana lucerny i granulowanym koncentratem, oraz podaje się im 10 ml zarobki (niekompletny adiuwant Freunda zemulgowany taką samą objętością jałowego 0,9% roztworu soli) do każdej ćwiartki wymienia na drodze infuzji do gruczołu mlecznego przez przewód brodawkowy w dniu 1, 3, 5, 7 i 9 niniejszego testu. Infuzji dokonuje się przy użyciu kaniuli z tworzywa sztucznego o długości 3,2cm, o wymiarze około 12, tępo zakończonej, do infuzji do strzyku, otrzymanej z Jorgensem Laboratories, Loveland, Co. Ponieważ „połówki wymienia, przednia i tylna, nie są jednakowej wielkości, działanie, względnie kontrolne porównania, prowadzi się między przeciwnymi (w kierunku bocznym) ćwiartkami, to jest przednia prawa wobec przedniej lewej i tylna prawa wobec tylnej lewej. Dwie ćwiartki w każdej połówce wymienia wyznacza się do badania działania i jego kontroli losowo. W infuzjach substnacji czynnej, zaróbka zawiera 25/zg ludzkiego EGF (hEGF) otrzymanego z G. D. Searle &Co., Ltd., U. K. (6 zwierząt) lub mysiego EGF (mEGF)
154 182 otrzymanego z Collaborative Research Corp., Lexington, MA (pozostałe 6 zwierząt). hEGF został otrzymany przez Searle na drodze ekspresji rekombinowanego DNA, a następnie dalszego oczyszczania za pomocą sączenia przez filtr (10000/masa cząsteczkowa) do stopnia czystości ponad 90%, jak oznaczono metodą HPLC. mEGF o czystości do hodowli, nr katalogowy 40001, z mysich gruczołów podszczękowych, otrzymano metodą Savage'a i in., J. Biol. Chem., 247, 7609 (1972) o czystości ponad 98%, jak oznaczono metodą z użyciem żelu SDS-poliakryloamidowego.
Przed podziałaniem, strzyki każdego zwierzęcia poddaje się kąpaniu przz trzy kolejne dni i każdy strzyk zostaje wstępnie przemyty 70% etanolem w dniu zabiegu. 14-go dnia krowy uśmierca się i wycina się ich gruczoły mleczne. Każde wymię, po usunięcia mleka, jeżeli jest to konieczne, odskórza się, dzieli wzdłuż środkowego wiązadła podwieszającego, a następnie dzieli na ćwiartki, a więc na przednią prawą, przednią lewą, tylną prawą i tylną lewą ćwiartkę wymienia. Każdą ćwiartkę wymienia rozdrabnia się i 200 g próbkę reprezentatywną homogenizuje z 4-krotnie większą objętością wody, po czym mierzy się całkowitą objętość homogenatu uzyskanego z każdej ćwiartki.
W celu określenia suchej wagi każdej ćwiartki wymienia, trzy 10 ml próbki każdego rozcieńczonego 1:5 homogenatu umieszcza się na uprzednio zważonych miseczkach, suszy przez noc w temperaturze 60°C, a następnie suszy i waży do stałej wagi.
W celu określenia wagi tkanki bez tłuszczu w każdej ćwiartce wymienia, trzy 5 ml próbki nie rozcieńczonego homogenu ekstrahuje się metodą Andersona, J. Anim. Sci., 41,118 (1975), z tą różnicą, że próbki umieszcza się w uprzednio zważonych 25 Xł50 mm szklanych probówkach wirówkowych i ekstrahuje w ciągu nocy 10 ml mieszaniny etanolu i eteru 3:1, po czym wiruje w ciągu 5 minut przy 500 obr/min i płyn znad osadu odsysa się. Następnie wprowadza się dodatkową 10 ml próbkę mieszaniny etanolu i eteru dla dokonania drugiej ekstrakcji, po czym próbkę suszy się w atmosferze azotu do stałej wagi.
DNA w każdej ćwiartce wymienia oznacza się metodą Burtona, Methods in Enzymol., 12B, 163-166 (1968), z zastosowaniem jako płynu do badań 15% kwasu trójchlorooctowego (TCA) w 2 N HC1. W tych oznaczeniach próbki homogenatu gruczołu rozcieńcza się w stosunku 1:5 wodą i ponownie homogenizuje. Używając potrójnych 0,25 ml lub 0,5 ml próbek tych homogenatów, każdą próbkę miesza się z 2 ml płynu do badań. Po upływie 30 minut próbki odwirowuje się w ciągu 10 minut przy 3000 obr/min i utworzone osady przemywa 2 ml 10% roztworu TCA w wodzie destylowanej. Po ponownym odwirowaniu powstałe osady rozbija się w 2 ml 0,5 N kwasu nadchlorowego i ogrzewa w ciągu 30 minut w temperaturze 70°C w celu ekstrakcji DNA. Próbki odwirowuje się i 1ml każdego powstałego płynu znad osadu umieszcza w 12X75 mm probówce. Po dodaniu 2 ml roztworu 1,5 g dwufenyloaminy i 1,5 ml H2SO4 w 100 ml kwasu octowego lodowatego (oraz 0,1 ml 1,6% wodnego roztworu acetaldehydu na 20 ml odczynnika bezpośredniego przed użyciem), próbki wiruje się i inkubuje w ciągu nocy w temperaturze 27°C. Standardem jest DNA grasicy cielęcej.
Otrzymane wyniki przedstawiają poniższe tabele 1 i 2.
Tabela 1
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (Ag) | |
| A. Średnia z badania | 389,9 | 120,0 | 63,2 | 794,5 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 357,3 | 111,4 | 58,3 | 710 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 32,6 | 8,6 | 4,9 | 84,5 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 9,1 | 7,7 | 8,4 | 11,9 |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/ zwierzę | 12,9 | 13,1 | 16,1 | 14,8 |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,01 | 0,09 | 0,16 | 0,06 |
154 182
Tabela 2
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego mEGF na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (Ag) | |
| A. Średnia z badania | 419,6 | 150,2 | 69,6 | 905,1 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 402,0 | 147,9 | 64,6 | 794,9 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 17,6 | 2,3 | 5,0 | 110,2 |
| D. % wzrostu , _ (A-B) B | 4,4 | 1,6 | 7,9 | 13,8 |
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 1,8 | 2,1 | 5,2 | 12,0 |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,22 | 0,40 | 0,19 | 0,05 |
Jak przedstawiono w powyższych tabelach 1 i 2, ćwiartki wymienia w wyniku infuzji hEGF i mEGF są zgodnie cięższe i zawierają DNA aniżeli im przeciwne w kierunku bocznym ćwiartki kontrolne, do których wprowadzono tylko zaróbkę i wykazują ogólnie wyższy statystyczny poziom istotności.
P r z y k ł a d y III - VI. 24 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięsnego dzieli się na 4 grupy badane z 6 zwierzętami w każdej grupie. Wpływ infuzji ludzkiego EFG do gruczołu mlecznego na ćwiartki wymienia tych zwierząt określa się sposobem opisanym w przykładzie I, z tą różnicą, że (A) jako zarobki używa się dla grupy 1 emulsji Freunda, a dla grup: 2, 3 i 4 używa się emulsji zawierającej 60 części oleju sezamowego i 40 części jałowej 0,9% solanki do strzykiwań zawierającej 0,5% Tween 20, oraz (B) ilość hEGF włączonego do każdej infuzji substancji czynnej wynosi 25//g dla grup 1 i 2, 2,5>g dla grupy 3 i 250//g dla grupy 4. Oznaczenia DNA dokonuje się sposobem opisanym w powyższych przykładach I i II, z tą różnicą, że początkowe trzykrotne 0,5 ml próbki homogenatu ekstrahuje się 2 ml mieszaniny etanolu i eteru 3:1 w ciągu godziny, wiruje w ciągu 15 minut przy 3000 obr/min, przemywa 2 ml 70% etanolu w ciągu 10 minut, wiruje przy 3000 obr/min w ciągu 15 minut i odciąga etanol przed zmieszaniem każdej próbki z roztworem TCA.
Otrzymane wyniki dla grup 1-4 przedstawiają poniższe tabele, odpowiednio, 3-6.
Tabela 3
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem 125 pg, w emulsji Freunda, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 1)
Sucha waga
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | bez tłuszczu (g) | DNA (Ag) | |
| A, Średnia z badania | 364,9 | 107,2 | 60,3 | 723,0 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 349,5 | 101,0 | 56,8 | 629,0 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 15,4 | 6,2 | 3,5 | 94,0 |
| D. % wzrostu (A-B) B | 4,4 | 6,1 | 6,2 | 14,9 |
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 8,1 | 10,3 | 8,3 | 23,0 |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,15 | 0,11 | 0,13 | 0,18 |
154 182
Tabela 4
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem 125/tg, w emulsji sezamowej, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 2)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA | |
| A, Średnia z badania | 370,2 | 122,1 | 71,0 | 995,0 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 356,2 | 111,1 | 68,8 | 703,0 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 14,0 | 11,0 | 2,2 | 292,0 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 3,9 | 9,9 | 3,2 | 41,5 |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 10,4 | 20,2 | 15,9 | 70,0 |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,2 | 0,02 | 0,3 | 0,09 |
Tabela 5
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem 12,5^/g, w emulsji sezamowej, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 3)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (Ag) | |
| A, Średnia z badania | 397,8 | 132,4 | 79,4 | 867,6 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 400,0 | 127,0 | 72,7 | 896,6 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | (2,2) | 5,4 | 6,7 | (29,0) |
| D. % wzrostu | ||||
| (0,5) | 4,2 | 9,2 | (3,3) | |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 0,6 | 7,8 | 16,3 | (2,2) |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | _ | 0,17 | 0,1 | _ |
Tabela 6
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem 1,25/zg, w emulsji sezamowej, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 4)
Sucha waga
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | bez tłuszczu (g) | DNA (Ag) | |
| A, Średnia z badania | 391,9 | 131,5 | 81,7 | 733,2 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 360,2 | 117,9 | 75,1 | 729,2 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 31,7 | 13,6 | 6,6 | 4,0 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 8,8 | 11,6 | 8,8 | 0,5 |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 9,9 | 12,2 | H,9 | 1,6 |
| F, Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,001 | 0,004 | 0,03 |
154 182
Jak przedstawiono w tabelach 3-6, ćwiartki wymienia w wyniku infuzji hEGF są ogólnie znacznie cięższe i zawierają więcej DNA aniżeli im przeciwne w kierunku bocznym ćwiartki, do których wprowadzono - tylko zaróbkę.
Przykłady VII i VIII. 24 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięsnego, dzieli się na 3 grupy badane z 8 zwierzętami w każdej grupie. Wpływ infuzji ludzkiego IGF na ćwiartki wymienia tych zwierząt określa się sposobem opisanym w powyższych przykładach I i II, z tą różnicą, że ilość hEGF włączonego do każdej infuzji substancji czynnej wynosi 25 //g dla grupy 1,250/yg dla grupy 2 i 2,5//g dla grupy 3. Wagę gruczołu i DNA oznacza się jak w przykładach I i II. Wyniki otrzymane przy niskiej dawce użytej w przypadku grupy 3 zostały przesłonięte przez obrzęk niektórych gruczołów.
Wyniki otrzymane dla grupy 1 i 2 przedstawiają tabele, odpowiednio 7 i 8.
Tabela 7
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem 125//g, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 1)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (8) | DNA 0^g) | |
| A, Średnia z badania | 363,0 | 113,0 | 52,8 | 396,9 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 358,0 | 109,7 | 50,7 | 358,9 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 5,0 | 3,3 | 2,1 | 38,0 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 1,5 | 3,0 | 4,1 | 10,6 |
B
E. Poziom istotności % wzrostu, p<0,34_0,21_0,16_0,12
Tabela 8
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego hEGF, ogółem l,25//g, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 2)
Sucha waga
| Wilgotna waga (8) | Sucha waga (8) | bez tłuszczu (8) | DNA (ug) | |
| A. Średnia z badania | 392,5 | 122,0 | 63,8 | 344,0 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 388,2 | 115,7 | 61,4 | 384,0 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 4,3 | 6,3 | 2,4 | (40,0) |
| D. % wzrostu (A-B) | 1,1 | 5,3 | 3,9 | (10,4) |
| E. Poziom istotności % wzrostu, P< ' 0,4 | 0,12 | 0,26 | _ | |
| Jak przedstawiono w powyższych tabelach 7 i 8, ćwiartki wymienia w wyniku infuzji hEGF są cięższe od przeciwnych im w kierunku bocznych ćwiartek, do których wprowadzono jedynie zaróbkę. B. Insulinopodobne czynniki wzrostowe. Przykłady IX - XI. 24 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięs- |
nego, w ich ostatnich 40-80 dniach ciąży, umieszcza się w obiekcie wolnostanowiskowym, karmi się racją siana lucerny i granulowanym koncentratem, oraz podaje się im 10 ml zarobki (emulsja sezamowa, takiego rodzaju jak użyta w powyższych przykładach IV -VI), do każdej ćwiartki wymienia na drodze infuzji do gruczołu mlecznego przez przewód brodawkowy w dniu 1,3,5,7 i 9 niniejszego testu. Metoda infuzji z losowym wyznaczeniem ćwiartki wymienia w celu poddania ich działaniu, wobec porównań kontrożnych, jest taka, jak w powyższych przykładach I i II.
154 182
W przypadku infuzji substancji czynnej, zaróbka zawiera bydlęcy insulinopodobny czynnik wzrostowy-I (bIGF-I) otrzymany na drodze ekspresji w E. coli (Prla szczep 079) rekombinowanego DNA kodującego bIGF-I sprzężonego ze „zbitą sekwencją sygnałową białka ściany komórkowej komórek B, z wydzieleniem do przestrzeni periplazmatycznej E. coli i wydzieleniem (oczyszczeniem zwykłymi metodami, takimi jak filtracja żelowa, wymiana kationowa oraz HPLC z odwróconymi fazami. Ten bIGF-I ma tę samą sekwencję aminokwasów i strukturę drugorzędową co ludzki IGF-I z AMgen, użyty w poniższym przykładzie XIII. W standardowych testach na mioblastach L6 jego aktywność była zasadniczo taka sama (90-123%) jak hIGF-I z przykładu XIII. Ilość bIGF w każdej infuzji była następująca: grupa 1 - 2,5//g, grupa 2 - 25//g, grupa 3 - 250yug. Zwierzęta przygotowuje się i poddaje infuzji, a wagę ćwiartek ich wymienia i DNA oznacza się jak opisano w powyższych przykładach III - VI.
Wyniki otrzymane dla grupy 1 przedstawia tabela 9.
Tabela 9
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego bIGF-Ι, ogółem 12,5//g, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 1)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (pg) | |
| A. Średnia z badania | 408,4 | 111,7 | 54,9 | 1307 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 369,0 | 102,7 | 48,0 | 1219 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 39,4 | 9,0 | 6,9 | 88 |
| D. % wzrostu (A-B) B | 10,7 | 8,7 | 14,2 | 7,2 |
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 11,0 | 8,8 | 16,0 | 12,5 |
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,01 | 0,003 | 0,03 | 0,2 |
W badaniu tym dwie wyższe dawki bIGF-Ι (w grupach 2 i 3) nie dały zgodnie znaczniejszego wzrostu w ćwiartkach, na które działano, w stosunku do ćwiartek kontrolnych. Tym nie mniej jednak, zaobserwowano znaczny wzrost w ćwiartkach bez infuzji. Gdy powtórzono sposób postępowania opisany w przypadku grup 1-3, uzyskano zasadniczo takie same wyniki. Po zgromadzeniu wyników z badania pierwotnego i z jego powtórzeniu stwierdzono, że zarówno poddane działaniu jak i kontrolne ćwiartki wykazały wzrost jak następuje:
Tabela 10
Dawki Kontrola Poddane działaniu Łącznie
| Średnia wobec niskiej | + 27%, | p<0,08 | + 23,1%, | p<0,12 | + 25% |
| Wysoka wobec średniej | + 34,4%, | p<0,08 | + 31,5%, | p<0,09 | + 33% |
| Wysoka wobec niskiej | + 71,3%, | p<0,007 | + 62%, | p<0,01 | + 67% |
Zwiększenie wzrostu kontrolnych ćwiartek wymienia jak wyżej nastąpiło nawet pomimo tego, że poziom bIGF-Ι nie wzrósł znacząco badania. Takie same zasadniczo wyniki uzyskano w przypadku powtórzenia tych testów na innych cielnych, nie wykazujących laktacji krowich typu mięsnego zgrupowanych z przejęciem za podstawę zasadniczo takich samych objętości wymienia, a to dla usunięcia z wyników testu (w stopniu, w jakim to było możliwe) tego źródła zmienności.
Przykład XII. Jałówki typu mlecznego lub mięsnego poddaje się infuzji zgodnie ze sposobem postępowania opisanym w powyższych przykładach IX - XI z użyciem bydlęcego insulinopodobnego czynnika wzrostowego-II, w całkowitej ilości od 125//g do 12,5 mg, oczyszczonego do stanu zasadniczo wolnego od innych peptydów bydlęcych, jak w przykładzie 1 zgłoszenia patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 888 996 złożonego 31 lipca 1986 r. odpowiadającego zgłoszeniu patentu europejskiego nr 86 870 128.5, przy czym oba te opisy włączono do niniejszego opisu jako odnośniki. Otrzymuje się to wyniki zasadniczo takie same, jak w przykładach IX - XI, w postaci znacznego wzrostu wagi i DNA w ćwiartkach poddanych działaniu.
C. Kombinacje IGF i EGF.
Przykład XIII. 30 owiec mieszańców w ich ostatnich 35-45 dniach ciąży karmi się racją siana lucerny i paszą dla owiec, oraz podaje się im 2,5 ml zarobki (emulsja Freunda takiego rodzaju, jakiej użyto w sposobie według przykładu I i II dla 15 owiec, oraz fizjoologiczny 0,9% roztwór soli dla pozostałych 15 owiec), do każdej połówki wymienia przez infuzję do gruczołu mlecznego przez przewód brodawkowy w dniu 1, 3, 5, 7 i 9 niniejszego testu. Infuzji dokonuje się przy użyciu teflonowej osłonowej tępo zakończonej kaniuli typu „A-cath“ o długości 3,2 cm, o rozmiarze 16 (produkcji C. R. Bard, Inc.). U każdego zwierzęcia wyznacza się losowo połówki wymienia, które mają być poddane działaniu, przy czym zaróbka dodatkowo zawiera 2,5//g mysiego EGF tego rodzaju, jaki użyty został w powyższych przykładach I i II, oraz 2,5pg IGF-I otrzymanego na drodze ekspresji rekombinowanego DNA, sprzedawanego przez firmę AMgen Biological Corp., Thousand Oaks, CA (nr katalogowy 04111, seria 407, czystość ponad 90% na podstawie oznaczania metodą HPLC). Pozostałą połówkę wymienia u każdego zwierzęcia wyznacza się jako kontrolę, do której wprowadza się drogą infuzji jedynie zaróbkę. Przed działaniem, strzyki każdego zwierzęcia poddaje się kąpaniu w ciągu 7 kolejnych dni i każdy strzyk zostaje wstępnie przemyty 70% etanolem w dniu zabiegu. 13 dnia owce uśmierca się i wycina się ich gruczoły mleczne. Każde wymię, po usunięciu mleka, jeżeli jest to konieczne, odskórza się i dzieli wzdłuż środkowego wiązadła podwieszającego na prawą i lewą połówkę wymienia. Każdą połówkę wymienia homogenizuje się z wodą o 4-krotnej większej wadze i mierzy się całkowitą objętość homogenatu, uzyskanego z każdej połówki.
W celu określenia wagi suchej każdej połówki wymienia, trzy 10 ml próbki każdego rozcieńczonego 1:5 homogenatu umieszcza się na uprzednio zważonych miseczkach, suszy przez noc w temperaturze 60°C, a następnie suszy i waży do stałej wagi.
W celu określenia wagi suchej tkanki bez tłuszczu w każdej połówce wymienia, trzy 5 ml próbki nie rozcieńczonego homogenatu ekstrahuje się metodą Andersona, J. Anim. Sci., 41, 118 (1975), z tą różnicą, że próbki umieszcza się w uprzednio zważonych 25 XI50 mm szklanych probówkach wirówkowych i ekstrahuje w ciągu nocy 10 ml mieszaniny etanolu i eteru 3:1, po czym wiruje w ciągu 5 minut przy 500 obr/min i płyn znad osadu odsysa się. Następnie wprowadza się dodatkową 10 ml próbkę mieszaniny etanolu i eteru dla dokonania drugiej ekstrakcji, po czym próbkę suszy się w atmosferze azotu i waży do stałej wagi.
DNA w każdej połówce wymienia oznacza się metodą Burtona, 62 Biochemistry, 1315 (1956), z zastosowaniem jako płynu do badań 15% kwasu trójchlorooctowego (TCA) w 2N HC1. W tych oznaczeniach próbki homogenatu gruczołu rozmnaża się, rozcieńcza wodą w stosunku 1:5 i ponownie homogenizuje. Używając potrójnych 0,5 ml próbek tych homogenatów, każdą próbkę miesza się z 2 ml płynu do badań. Po upływie 30 minut próbki odwirowuje się w ciągu 10 minut przy 3000obr/min i utworzone osady przemywa 2 ml 10% roztworu TCA w wodzie destylowanej. Po ponownym odwirowaniu powstałe osady rozbija się w 2 ml 0,5 N kwasu nadchlorowego i ogrzewa się w ciągu 30 minut w temperaturze 70°C w celu ekstrakcji DNA. Próbki odwirowuje się i 1 ml każdego powstałego płynu znad osadu umieszcza się w probówce o wymiarach 12X75 mm. Po dodaniu 2 ml roztworu 1,5 g dwufenyloaminy i 1,5 ml H2SO4 w 100 ml kwasu octowego lodowatego (oraz 0,1 ml 1,6% wodnego roztworu acetaldehydu na 20 ml odczynnika bezpośrednio przed użyciem), próbki wiruje się i inkubuje przez noc w temperaturze 20°C. Standardem jest DNA grasicy cielęcej.
Otrzymane wyniki przedstawia poniższa tabela 11.
Tabela 11
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego kombinacji mEGF i hIGF-I na połówki wymienia ciężarnych owiec
| Waga mokra (g) | Waga sucha (g) | Waga sucha bez tłuszczu (g) | DNA (pg) | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| A. Średnia z badania | 277,3 | 73,6 | 75,2 | 1021,2 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 264,7 | 66,2 | 56,4 | 849,5 |
154 182
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| C. Wzrost średniej (A—B) | 12,5 | 7,4 | 18,8 | 171,7 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) ' | 4,7 | 11,0 | 33,0 | 20,2 |
| B | ||||
| Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,016 | 0,03 | 0,001 | 0,002 |
Dane w tabeli 11 wskazują, że DNA, waga mokra, waga sucha i waga sucha bez tłuszczu połówek wymienia, na które podziałano w sposób według wynalazku, zwiększyły się znacznie w stosunku do połówek wymienia nie poddanych działaniu u tych samych zwierząt i wykazały wyjątkowo wysoki statystyczny poziom istotności.
Przykład XIV. 8 niecielnych jałówek Holstein, mniej więcej 18-miesięcznych bada się pod względem wpływu infuzji do gruczołu mlecznego kombinacji bydlęcego IGF-I i ludzkiego EGF zgodnie ze sposobami postępowania, których użyto w przykładach ΙΧ-ΧΙ, z tym wyjątkiem, że (A) objętość zarobki w każdej infuzji wynosi 2,5 ml, oraz (B) każda infuzja substancji czynnej zawiera 6,25 jtig bIGF-I i 625//g hEGF takiego rodzaju, jakiego użyto w powyższych przykładach, odpowiednio, ΙΧ-ΧΙ i I-II. Otrzymane wyniki przedstawia poniższa tabela 12.
Tabela 12
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego kombinacji hEGF i bIGF-I na ćwiartki wymienia jałówek Holstein
| Waga mokra (g) | Waga sucha (g) | Waga sucha bez tłuszczu (g) | |
| A. Średnia z badania | 205,1 | 93,2 | 10,7 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 188,2 | 89,0 | 9,5 |
| C. Wzrost średniej (A—B) | 16,9 | 4,2 | 1,2 |
| D. % wzrostu | |||
| (A-B) | 8,9 | 4,7 | 12,1 |
| B | |||
| Średni % wzrostu/zwierzę | 11,3 | 7,7 | 18,8 |
| Poziom istotności % wzrostu, | |||
| P< | 0,06 | 0,2 | 0,09 |
Dane w tabeli 12 wykazują, że waga mokra, waga sucha i waga sucha bez tłuszczu ćwiartek wymienia jałówek Holstein, na które podziałano w sposób według wynalazku, znacznie się zwiększyły w stosunku do ćwiartek wymienia im przeciwnych w kierunku bocznym, do których wprowadzono jedynie zaróbkę i wykazują wysoki statystyczny poziom istotności.
Przykład XV. Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego kombinacji bydlęcego IGF-I i ludzkiego EGF na 8 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięsnego w ich ostatnich 40-80 dniach ciąży, określa się z wykorzystaniem sposobów postępowania opisanych w powyższych przykładach ΙΧ-ΧΙ. Każda infuzja substancji czynnej zawiera 25pg hEGF takiego rodzaju jak użyty w sposobie według powyższych przykładów I i II, oraz 250pg bIGF-I takiego rodzaju, jak w przypadku sposobu według powyższych przykładów ΙΧ-ΧΙ. Otrzymane wyniki przedstawia tabela 13.
154 182
Tabela 13
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego kombinacji bIGF-I, ogółem 12,5 mg i hEGF, ogółem 125jug, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego
| Waga mokra (g) | Waga sucha (g) | Waga sucha bez tłuszczu (g) | DNA (ug) | |
| A. Średnia z badania | 496,1 | 156,4 | 72,0 | 1392 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 474,0 | 144,0 | 60,7 | 1243 |
| C. Wzrost średniej (A—B) | 22,1 | 12,4 | 11,3 | 149 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 4,7 | 8,6 | 18,7 | 12,0 |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 8,2 | 13,0 | 11,0 | 12,0 |
| Poziom istotności % wzrostu, | ||||
| P< | 0,1 | 0,03 | 0,08 | 0,15 |
Jak przedstawiono w tabeli 13, ćwiartki wymienia, do których wprowadzono kombinację bIGF-I i hEGF są zgodnie cięższe i zawierają więcej DNA aniżeli przeciwne im w kierunku bocznym ćwiartki kontrolne i wykazują wysoki statystyczny poziom istotności.
D. Somatotropina.
Przykłady XVI i XVII. 24 cielnych, nie wykazujących laktacji krów mieszańców typu mięsnego w ich ostatnich 40-80 dniach ciąży dzieli się na 2 grupy i bada pod względem wpływu infuzji do gruczołu mlecznego z zastosowaniem sposobów postępowania opisanych w powyższych przykładach III-VI, z tą różnicą, że (A) objętość zarobki w każdej infuzji wynosi 5 ml, oraz (B) każda infuzja substancji czynnej zawiera 1% sól cynkową i N-metionylosomatotropinę bydlęcą (BST) (dla grupy 1*100 mg i dla grupy 2-40 mg), otrzymaną na drodze ekspresji rekombinatowego DNA i oczyszczenia zasadniczo sposobem jak opisano w przykładzie 1A zgłoszenia patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 787873, złożonego 16 paźdzeirnika 1985 r, opartego na zgłoszeniu patentu europejskiego nr 177 478 opublikowanym 9 kwietnia 1986 r., przy czym oba te opisy zostały włączone do niniejszego opisu jako odnośniki. Otrzymane wyniki przedstawiają tabele 14 i 15.
Tabela 14
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego BST, ogółem 500 mg, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 1)
Waga sucha
Waga mokra Waga sucha bez tłuszczu DNA
| (S) | (g) | (g) | fag) | |
| A. Średnia z badania | 790,1 | 207,6 | 146,7 | 2185 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 736,6 | 190,6 | 141,5 | 2054 |
| C. Wzrost średniej (A—B) | 53,5 | 17,0 | 5,2 | 131 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 7,3 | 8,9 | 3,6 | 6,4 |
| B | ||||
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 9,8 | 10,7 | 7,9 | 10,5 |
| Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,004 | 0,03 | 0,18 | 0,3 |
154 182
Tabela 15
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego BST, ogółem 200 mg, na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 2)
| Waga mokra (g) | Waga sucha (g) | Waga sucha bez tłuszczu (g) | DNA (Alg) | |
| A. Średnia z badania | 396,9 | 96,4 | 49,5 | 1371 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 345,4 | 85,1 | 44,8 | 1299 |
| C. Wzrost średniej (A—B) | 51,5 | 11,3 | 4,7 | 72 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | ||||
| B | 14,9 | 13,3 | 10,5 | 5,5 |
| E. Średni % wzrostu/zwierzę | 13,4 | 10,7 | 7,8 | 15,8 |
| Poziom istotności % wzrostu, | ||||
| P< | 0,007 | 0,06 | 0,06 | 0,1 |
Dane w tabelach 14 i 15 wykazują, że zwiększenue ilości DNA, wagi mokrej, wagi suchej i wagi suchej bez tłuszczu w poddanych działaniu sposobem według wynalazku ćwiartkach wymienia cielnych krów typu mięsnego jest znacznie wyższe aniżeli w przeciwnych im w kierunku bocznym ćwiartkach wymienia, do których wprowadzono tylko zaróbkę i że różnice we wzroście w wyniku podziałanie i w kontrolowanym wykazują wysoki statystyczny poziom istotności.
E. Transformujące czynniki wzrostowe.
Przykłady XVIII - XXI. Jałówki lub krowy cielne typu mlecznego lub mięsnego poddaje się infuzji z zastosowaniem sposobów postępowania i dawkowania według powyższych przykładów III-VI, ludzkim transformującym czynnikiem wzrostowym typu a, produkcji Bachem. Inc. Fine Chemicals, Torrance, CA (nr katalogowy PGRO-30). Otrzymane wyniki są tu w istocie te same, to jest następuje znaczny i statystycznie istotny wzrost wagi i ilości DNA w poddanych działaniu ćwiartkach wymienia.
F. Insulina.
Przykłady XXII - XXIV. Jałówki lub krowy cielne typu mlecznego lub mięsnego poddaje się infuzji z zastosowaniem sposobów postępowania według powyższych przykładów III - VI. Na jedną infuzję stosuje się 25,100 lub 250 mg insuliny trzustkowej bydlęcej produkcji Sigma Chemical Co., St. Louis, MO (nr katalogowy 1-5500; 24 jednostki międzynarodowej/mg). Otrzymane tu wyniki są podobne, to jest następuje znaczny i statystycznie istotny wzrost wagi i ilości DNA w poddanych działaniu ćwiartkach wymienia.
G. Laktogeny łożyskowe.
Przykłady XXV - XXVII. Jałówki lub krowy cielne typu mlecznego lub mięsnego poddaje się infuzji z zastosowaniem sposobów postępowania według powyższych przykładów III-VI. Stosuje się, ogółem, 0,25,10 lub 250 mg naturalnego bydlęcego laktogenu łożyskowego, oczyszczonego metodą Byatt'a Endocrin., 119,1343-1350 (1986). Otrzymane tu wyniki są bardzo podobne, to jest występuje znaczny i statystycznie istotny wzrost wagi i ilości DNA w poddanych zabiegom ćwiartkach wymienia.
H. Prostaglandyny.
Przykłady XXVIII - XXXI. 24 cielne, nie wykazujące laktacji krowy mieszańce typu mięsnego, w ich ostatnich 45-105 dniach ciąży, umieszcza się w obiekcie wolnostanowiskowym i karmi się je racjami siana lucerny i granulowanym koncentratem. Krowom podaje się 5 ml zarobki (MCT-Oil, a Mead Johnson Corp., trójgliceryd o łańcuchu średniej długości, będący lipidową frakcją oleju kokosowego złożoną głównie z trójglicerydów kwasów Ce-1o-tłuszczowych, a mianowicie: 67% Ce, 23% Cw, 6% krótszych niż Ce i 4% dłuższych niż Cw) do poszczególnych ćwiartek wymienia, drogą infuzji przez przewód brodawkowy w 1, 3, 5, 7 i 9 dniu próby. 48 przednich i tylnych połówek wymion dzieli się losowo na 4 grupy, przy czym dla każdej traktowanej ćwiartki ćwiartką kontrolną jest nie traktowana ćwiartka przeciwna leżąca z boku traktowanej. Traktowanie prowadzi się stosując infuzję zarobki zawierającej prostaglandynę (PG) Ei i E2 produkcji Sigma
154 182
Chemical Co, St. Louis, MO (nr katalogowy 86F-0406 i 86F-0404). Ilość PG w każdej infuzji wynosi: w grupie 1 - 87,5 //g E2, w grupie 2 - 875/yg E2, w grupie 3 - 87,5 //g Ei, w grupie 4 - 875//g Ei. Zwierzęta przygotowano i poddano infuzji w sposób opisany w poprzednich przykładach. Wyniki badań dla grupy 1 - 4 podano w tabelach odpowiednio 16-19.
Tabela 16
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego prostaglandyny E2 (ogółem 0,4375 mg) na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 1)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (mg) | |
| A, Średnia z badania | 1966,9 | 525,5 | 351,8 | 5203 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 1735,5 | 484,9 | 297,8 | 4724 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 231,4 | 40,6 | 54,0 | 479 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 13,3 | 8,3 | 18,1 | 10,1 |
| B | ||||
| F. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,01 | 0,04 | 0,18 | 0,02 |
Tabela 17
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego prostaglandyny E2 (ogółem 4,375 mg) na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 2)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (mg) | |
| A. Średnia z badania | 1030,8 | 312,7 | 194,5 | 3397 |
| B. Średnia kontrolna | ||||
| (tylko zaróbka) | 742,0 | 219,0 | 144,3 | 2348 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 288,8 | 93,7 | 50,2 | 1049 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) B | 38,9 | 42,8 | 34,8 | 44,6 |
| E. Poziom istotności % wzrostu, | ||||
| P< | 0,0003 | 0,0001 | 0,004 | 0,001 |
Tabela 18
| Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego prostaglandyny E1 (ogółem 0,4375 mg) na ćwiaiiki wymienia cielnych kiów typu mięsnego (grupa 3) | ||||
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (mg) | |
| A Średnia z badania | 972,5 | 259,3 | 180,9 | 2881 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 778,0 | 210,6 | 200,3 | 2284 |
| C. Wz.rost średniej (A-B) | 194,5 | 48,7 | (19,4) | 597 |
| D. % wzrostu , , (A-B) B | 25,0 | 23,0 | (9,7) | 26 |
| E. Poz.iom istotności % wzrostu, P< | 0,002 | 0,002 | 0,58 | 0,07 |
154 182
Tabela 19
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego prostaglandyny E-ι (ogółem 4,375 mg) na ćwiartki wymienia cielnych krów typu mięsnego (grupa 4)
| Wilgotna waga (g) | Sucha waga (g) | Sucha waga bez tłuszczu (g) | DNA (mg) | |
| A. Średnia z badania | 1435,5 | 379,6 | 247,7 | 4218 |
| B. Średnia kontrolna (tylko zaróbka) | 949,3 | 268,2 | 189,0 | 2792 |
| C. Wzrost średniej (A-B) | 486,2 | 111,4 | 58,7 | 1426 |
| D. % wzrostu | ||||
| (A-B) | 51,2 | 41,5 | 31,0 | 51,1 |
| B | ||||
| E. Poziom istotności % wzrostu, P< | 0,03 | 0,02 | 0,07 | 0,06 |
Jak wynika z danych przedstawionych w tabelach 16-19, wszystkie ćwiartki wymienia, do których wprowadzano prostaglandynę były cięższe i zawierały więcej DNA niż odpowiednie ćwiartki kontrolne, do których wprowadzono tylko odnośnik, przy ogólnie bardzo wysokim poziomie istotności statystycznej. .
I. Zabiegi z użyciem różnych środków mitogennych.
Przykład XXXII. 18 cielnych jałówek w 40-60 dniu przed spodziewanym porodem umieszcza się w obiekcie wolnostanowiskowym, karmi się je racjami siana lucerny i granulowanym koncentratem i podaje im 10 ml zarobki (jałowy olej sezamowy) do każdej ćwiartki wymienia drogą infuzji do gruczołu mlecznego poprzez przewód brodawkowy, co trzeci dzień. Jałówki w grupie 1 i 3 poddaje się zabiegom najpóźniej do piątego dnia przed porodem, zaś w grupie 2 i 4 zabiegi prowadzi się aż do pięciu ostatnich dni przed porodem. Zabiegi z użyciem środków mitogennych prowadzi się w obrębie obu ćwiartek z jednego boku zwierzęcia, zaś do pozostałych ćwiartek podaje się tylko zaróbkę. Wszystkie zabiegi realizuje się z użyciem kaniuli produkcji Jorgensen Laboratories opisanej w poprzednich przykładach. Każdy strzyk opryskuje się 70% etanolem i wyciera do sucha na 1 dzień przed zabiegiem, a zanurza w jodynie po zabiegu. Jako substancje mitogenne stosuje się hEGF z IGF-I (po 0,25 mg każdego), otrzymane jak w przykładach I - II i IX - XI, rozpuszczone (stężenie każdego 62,5 //g/ml) w jałowej 0,9% solance do iniekcji zawierającej 0,5% Tween 20 i zemulgowane w zaróbce olejowej (3:2, olej sezamowy - solanka) z 5% Arlacel A, oraz BST (50 mg), otrzymanej jak w przykładach XVI - XVII, rozcieńczonej do stężenia lOmg/ml olejem sezamowym.
W tabeli 20 podano w jaki sposób prowadzono badania. W tabeli 21 przedstawiono wpływ podawanej substancji mitogennej (hEGF z IGF-I), zaś w tabeli 22 wpływ BST. Zwierzęta dojono rano i wieczorem przez pierwsze 30 dni po porodzie i wydajność mleka rejestrowano dla każdej ćwiartki osobno. Średnio, produkcja mleka z połówek wymion poddanych zabiegowi w grupie 2 nie była wyższa niż z połówek kontrolnych. Jak wynika z danych z tabeli 21, z ćwiartek wymion traktowanych hEGF z IGF-I nie później niż na 5 dni przed porodem, uzyskano średnio znacznie więcej mleka niż z ćwiartek kontrolnych. Jak wynika z tabeli 22 ilość mleka z połówek wymion traktowanych w grupie 4 przewyższa nieco ilość z połówek kontrolnych (2%, p<0,4). Z ćwiartek wymion traktowanych BST nie później niż na 5 dni przed porodem, uzyskano średnio znacznie więcej mleka niż z ćwiartek kontrolnych.
Tabela 20
| Grupa | Liczba jałówek | Substancja mitogenna . w zaróbce | Liczba zabiegów | |
| Zakres | Średnio | |||
| 1 | 4 | hEGF + IGF-I | 10 | 10 |
| 2 | 5 | hEGF + lGF-I | 7-20 | 14 |
| 3 | 5 | BST | 10-20 | 12 |
| 4 | 4 | BST | 4-16 | 9 |
154 182
Tabela 21
Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego połączenia hEGF z IGF-I na ćwiartki wymienia cielnych jałówek (grupa 1)
| Średnia produkcja mleka, kg/dzień | % wzrostu (A-B) B | . Poziom istotności % wzrostu, P< | |
| Traktowana połówka wymienia (A) | Kontrolna połówka wymienia (B) | ||
| 10,0 | 9,0 | 11 | 0,14 |
| Tabela 22 Wpływ infuzji do gruczołu mlecznego BST na ćwiartki wymienia cielnych jałówek (grupa 4) | |||
| Średnia produkcja mleka, kg/dzień | % wzrostu (A-B) | Poziom istotności % wzrostu, P< | |
| Traktowana połówka wymienia (A) | Kontrolna połówka wymienia (B) | B | |
| 10,9 | 9,8 | 11 | 0,15 |
Przykład XXXIII. 48 cielnych jałówek rasy Holstein, w przybliżeniu w ostatnich 40 dniach ciąży, umieszcza się w obiekcie wolnostanowiskowym, karmi sianem lucerny i granulowanym koncentratem i podaje się im 10 ml zarobki do każdej ćwiartki wymienia na drodze infuzji do gruczołu mlecznego przez przewód brodawkowy, co 3 dzień aż do trzeciego dnia przed porodem z wyjątkiem jednego zwierzęcia, któremu podaje się zaróbkę tylko do 15 dnia przed porodem. Infuzję prowadzi się za pomocą kaniuli z tworzywa sztucznego o długości 3,2 cm, o wymiarze około 12, tępo zakończonej, do infuzji do strzyku, produkcji Jorgensen Laboratories, Loveland, CO. Zwierzęta przydziela się losowo do grup (po 12 zwierząt w grupie) i w poszczególnych grupach podaje się: (A) 250/yg hEGF produkcji G. D. Searle and Co., Ltd., Wielka Brytania, rozpuszczonego w stężeniu 62,5/yg/ml w jałowej 0,9% solance do iniekcji zawierającej 0,5% Tween-29 i zemulgowanego tuż przed użyciem w jałowym olejem sezamowym zawierającym 5% jednooleinianu mannidu Aralcel A (3:2, olej - solanka), przy końcowym stężeniu hEGF w zaróbce 25/yg/ml; (B) 250jug bydlęcego IGF-I (b-IGF-I, wytworzony jak w przykładach IX - XI), oczyszczonego, a następnie rozpuszczonego i zemulgowanego tak jak hEGF w punkcie (A); (C) 50 mg bydlęcej N-metionylosomatotropiny (BST, wytworzona jak w przykładach XVI - XVII), rozcieńczonej do stężenia lOmg/ml w jałowym oleju sezamowym i (D) sam jałowy olej sezamowy jako zaróbkę. Wszystkie ćwiartki wymienia każdego zwierzęcia poddaje się takim samym zabiegom. Każde wymię opryskuje się 70% etanolem i wyciera do sucha przed zabiegiem, a zanurza w jodynie (roztwór) po zabiegu. Po porodzie 4 zwierzęta uśmierca się i ich gruczoły mleczne poddaje się analizie, a pozostałe 8 zwierząt z każdej grupy doi się normalnie rano i wieczorem przez pierwszych 105 dni laktacji.
W ciągu tych 105 dni zwierzę traktowane hEGF tylko do 15 dnia przed porodem dawało średnio 9,6 kg mleka dziennie więcej (o 34,8%) od średniej produkcji 8 zwierząt kontrolnych. Przeciętnie, produkcja mleka od krów traktowanych do samego porodu nie przewyższała produkcji mleka od krów kontrolnych.
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wzmagania wzrostu miąższu gruczołu mlecznego u fizjologicznie normalnego ssaka przez podawanie substancji wykazującej wpływ mitogenny na komórki nabłonka gruczołu mlecznego tego ssaka, znamienny tym, że ssakowi podaje się substancję wykazującą wpływ mitogenny na drodze infuzji do gruczołu mlecznego podczas ciąży, albo mniej więcej między początkiem dojrzewania a pierwszą ciążą ssaka.
- 2. Sposób według zastrz.. 1, znamienny tym, że jako substancję wykazującą wpływ mitogenny podaje się polipeptydowy czynnik wzrostowy.154 182 19
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako czynnik wzrostowy stosuje się naskórkowy czynnik wzrostowy, czynnik wzrostowy z rodziny insuliny lub ich kombinacje.
- 4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że jako czynnik wzrostowy stosuje się insulinopodobny czynnik wzrostowy typu IGF-I.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się substancję wywierającą na komórki parakrynowy wpływ mitogenny.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako substancję wywierającą wpływ mitogenny podaje się somatotropinę lub laktogen łożyskowy.
- 7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako substancję wywierającą wpływ mitogenny podaje się prostaglandynę.
- 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że substancję wywierającą wpływ mitogenny podaje się ssakowi podczas ostatniego trymestru ciąży tego ssaka.Zakład Wydawnictw UP RP. Nakład 100 egz.Cena 3000 zł
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US83747786A | 1986-03-07 | 1986-03-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL264490A1 PL264490A1 (en) | 1988-02-18 |
| PL154182B1 true PL154182B1 (en) | 1991-07-31 |
Family
ID=25274560
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL1987264490A PL154182B1 (en) | 1986-03-07 | 1987-03-06 | Fastening handle |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5059586A (pl) |
| EP (1) | EP0237514B1 (pl) |
| JP (1) | JPS62221635A (pl) |
| KR (1) | KR900000545B1 (pl) |
| CN (1) | CN87102601A (pl) |
| AT (1) | ATE93730T1 (pl) |
| AU (1) | AU595295B2 (pl) |
| BG (1) | BG50926A3 (pl) |
| CA (1) | CA1299103C (pl) |
| CS (1) | CS272772B2 (pl) |
| DD (1) | DD258943A5 (pl) |
| DE (1) | DE3787185T2 (pl) |
| DK (1) | DK116287A (pl) |
| ES (1) | ES2000437T3 (pl) |
| HU (1) | HU205007B (pl) |
| IL (1) | IL81809A (pl) |
| MX (1) | MX170911B (pl) |
| NO (1) | NO870946L (pl) |
| NZ (1) | NZ219530A (pl) |
| PL (1) | PL154182B1 (pl) |
| RU (1) | RU2033178C1 (pl) |
| ZA (1) | ZA871654B (pl) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5130299A (en) * | 1986-03-07 | 1992-07-14 | Monsanto Company | Method for enhancing growth of mammary parenchyma |
| US5182302A (en) * | 1986-03-07 | 1993-01-26 | Monsanto Company | Method for enhancing growth of mammary parenchyma using a prostaglandin |
| US5130300A (en) * | 1986-03-07 | 1992-07-14 | Monsanto Company | Method for enhancing growth of mammary parenchyma |
| IE912345A1 (en) * | 1990-08-03 | 1992-02-12 | Pharmacia Ab | Treatment of human lactation failure |
| US5336488A (en) * | 1991-08-07 | 1994-08-09 | American Cyanamid Company | Method of treating or preventing mastitis in animals with involuting mammary glands by administering recombinant cytokines |
| US6828111B2 (en) | 2000-01-13 | 2004-12-07 | Wayne State University | Three-dimensional in vitro model of human preneoplastic breast disease |
| RU2185198C2 (ru) * | 2000-05-15 | 2002-07-20 | Российский Университет Дружбы Народов | Способ лечения кисты молочной железы |
| MXPA03010572A (es) * | 2001-05-18 | 2005-03-07 | Minister Agriculture & Food | Acido nucleico y secuencias de proteinas del factor de crecimiento epidermico bovino. |
| JP2017046688A (ja) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | 株式会社みやぎヘルスイノベーション | 体重増加抑制用飲料組成物 |
| CN105194642B (zh) * | 2015-10-09 | 2018-04-17 | 深圳市容大生物技术有限公司 | 一种疏通乳房微循环养护自体腺胞的组合物及制备方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4011312A (en) * | 1975-06-25 | 1977-03-08 | American Home Products Corporation | Prolonged release drug form for the treatment of bovine mastitis |
| EP0085036A1 (en) * | 1982-01-18 | 1983-08-03 | Monsanto Company | Method for improved bovine milk production |
| US4521409A (en) * | 1983-10-03 | 1985-06-04 | Cornell Research Foundation, Inc. | Use of growth hormone to enhance ruminant mammary development |
-
1987
- 1987-02-19 CA CA000530136A patent/CA1299103C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-04 ES ES87870029T patent/ES2000437T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-04 DE DE87870029T patent/DE3787185T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-03-04 EP EP87870029A patent/EP0237514B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-04 AT AT87870029T patent/ATE93730T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-06 CN CN198787102601A patent/CN87102601A/zh active Pending
- 1987-03-06 JP JP62051831A patent/JPS62221635A/ja active Pending
- 1987-03-06 DD DD87300534A patent/DD258943A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-06 ZA ZA871654A patent/ZA871654B/xx unknown
- 1987-03-06 NZ NZ219530A patent/NZ219530A/xx unknown
- 1987-03-06 AU AU69788/87A patent/AU595295B2/en not_active Ceased
- 1987-03-06 KR KR1019870002026A patent/KR900000545B1/ko not_active Expired
- 1987-03-06 CS CS151887A patent/CS272772B2/cs unknown
- 1987-03-06 MX MX005494A patent/MX170911B/es unknown
- 1987-03-06 HU HU87973A patent/HU205007B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-03-06 IL IL81809A patent/IL81809A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-03-06 NO NO870946A patent/NO870946L/no unknown
- 1987-03-06 RU SU874202227A patent/RU2033178C1/ru active
- 1987-03-06 DK DK116287A patent/DK116287A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-03-06 PL PL1987264490A patent/PL154182B1/pl unknown
- 1987-03-06 BG BG078775A patent/BG50926A3/bg unknown
- 1987-09-02 US US07/092,009 patent/US5059586A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD258943A5 (de) | 1988-08-10 |
| HUT47031A (en) | 1989-01-30 |
| DE3787185T2 (de) | 1994-02-03 |
| EP0237514A1 (en) | 1987-09-16 |
| ZA871654B (en) | 1987-08-28 |
| KR880010773A (ko) | 1988-10-24 |
| EP0237514B1 (en) | 1993-09-01 |
| CA1299103C (en) | 1992-04-21 |
| AU595295B2 (en) | 1990-03-29 |
| ATE93730T1 (de) | 1993-09-15 |
| MX170911B (es) | 1993-09-22 |
| CS272772B2 (en) | 1991-02-12 |
| HU205007B (en) | 1992-03-30 |
| NO870946D0 (no) | 1987-03-06 |
| CS151887A2 (en) | 1990-06-13 |
| DK116287A (da) | 1987-09-08 |
| CN87102601A (zh) | 1987-12-16 |
| IL81809A (en) | 1993-01-31 |
| BG50926A3 (bg) | 1992-12-15 |
| NO870946L (no) | 1987-09-08 |
| NZ219530A (en) | 1992-12-23 |
| ES2000437A4 (es) | 1988-03-01 |
| KR900000545B1 (ko) | 1990-01-31 |
| AU6978887A (en) | 1987-09-10 |
| DK116287D0 (da) | 1987-03-06 |
| DE3787185D1 (de) | 1993-10-07 |
| RU2033178C1 (ru) | 1995-04-20 |
| PL264490A1 (en) | 1988-02-18 |
| JPS62221635A (ja) | 1987-09-29 |
| US5059586A (en) | 1991-10-22 |
| ES2000437T3 (es) | 1994-01-16 |
| IL81809A0 (en) | 1987-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5130300A (en) | Method for enhancing growth of mammary parenchyma | |
| EP0571417B1 (en) | Combination of igf-i and igfbp for anabolism | |
| PL154182B1 (en) | Fastening handle | |
| US5610138A (en) | Process for treating infertility and an agent for use in the process | |
| US6194384B1 (en) | Long-acting galenical formulation for GRF peptides | |
| JPH05503702A (ja) | 卵胞の成熟を阻害する方法 | |
| US8835386B2 (en) | Activity of recombinant equine follicle stimulating hormone | |
| US20020107187A1 (en) | Modulating the activity of hormones or their receptors - peptides, antibodies, vaccines and uses thereof | |
| McGuinness et al. | Response of young broiler chickens to chronic injection of recombinant-derived human insulin-like growth factor-I | |
| US5008244A (en) | Method for increasing fertility in animals | |
| US5182302A (en) | Method for enhancing growth of mammary parenchyma using a prostaglandin | |
| Arai et al. | Effects of transforming growth factor α (TGF-α) on DNA synthesis and thyrotropin-induced iodine metabolism in cultured porcine thyroid cells | |
| US5130299A (en) | Method for enhancing growth of mammary parenchyma | |
| Gow et al. | Lack of effect of epidermal growth factor treatment in late-pregnant ewes on subsequent lactation | |
| KR900000749B1 (ko) | 반추동물의 우유생산량을 증가시키는 조성물 | |
| EP4582093A1 (en) | Ruminant conception chance-improving composition | |
| Malecki et al. | Passive immunization of pregnant goats against ovine LH | |
| Vander Laan | Changing concepts of prolactin in man | |
| Tonner | The Insulin-Like Growth Factor Axis in the Lactating Rat and in the Immune System of the Sheep | |
| Chang | THE REGULATION OF REPRODUCTION IN CATTLE BY AN ANTIESTROGEN, OR ACTIVE IMMUNIZATION AGAINST PROSTAGLANDIN F (2ALPHA) AND OVARIAN STEROIDS |