PL170186B1 - Sposób wytwarzania szczepionki PL - Google Patents
Sposób wytwarzania szczepionki PLInfo
- Publication number
- PL170186B1 PL170186B1 PL92301116A PL30111692A PL170186B1 PL 170186 B1 PL170186 B1 PL 170186B1 PL 92301116 A PL92301116 A PL 92301116A PL 30111692 A PL30111692 A PL 30111692A PL 170186 B1 PL170186 B1 PL 170186B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- organism
- ethyleneimine
- culture
- adjusted
- vaccine
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 26
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims abstract description 9
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000204003 Mycoplasmatales Species 0.000 claims abstract description 6
- 241000203024 Acholeplasma Species 0.000 claims abstract description 5
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical group [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 claims description 8
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000203022 Acholeplasma laidlawii Species 0.000 claims description 2
- 241000204028 Mycoplasma arginini Species 0.000 claims description 2
- 241001138504 Mycoplasma bovis Species 0.000 claims description 2
- 241000006377 Mycoplasma dispar Species 0.000 claims description 2
- 241000204048 Mycoplasma hominis Species 0.000 claims description 2
- 241000202894 Mycoplasma orale Species 0.000 claims description 2
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine;hydron;bromide Chemical compound [Br-].[NH3+]CCBr WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 description 1
- NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N [(2r)-2-[(3r,4s)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)C1OC[C@H](O)[C@H]1O NWGKJDSIEKMTRX-BFWOXRRGSA-N 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003918 blood extract Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N but-3-en-2-imine Chemical compound CC(=N)C=C OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000000383 hazardous chemical Substances 0.000 description 1
- 238000010952 in-situ formation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N33/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic nitrogen compounds
- A01N33/02—Amines; Quaternary ammonium compounds
- A01N33/04—Nitrogen directly attached to aliphatic or cycloaliphatic carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- A01N43/44—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom three- or four-membered rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania szczepionki skutecznej w ochronie zwierzecia przeciwko stanowi zwiazanemu z zakazeniem przez organizm z rodzaju Mycoplasma i Acholeplasma z rzedu Mycoplasmatales, zwlaszcza skutecznej w ochronie swin przez odzwierzecym zapale- niem pluc polegajacy na powodowaniu wzrostu organizmu w hodowli i unieczynnianiu tego organizmu, znamienny tym, ze organizm ten unieczynnia sie traktujac etylenoimina wytwo- rzona in situ przez dodanie do hodowli bromowodorku 2-bromoetylenoaminy (BEA), przy czym podczas dodawania wartosc pH hodowli nastawia sie na odczyn lagodnej alkalicznosci, korzystnie okolo 7,0 - 8,0, zbiera sie komórki organizmu i przetwarza sie te komórki na szczepionke. PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania szczepionki, zwłaszcza wytwarzania szczepionki przeciwko mikoplazmom.
Stosowane tu określenie mikoplazma dotyczy organizmu z rzędu Mycoplasmatales, a zwłaszcza, członów tego rzędu z rodzaju Mycoplasma i Acholeplasma.
Mikoplazmy są szeroko rozpowszechnione w przyrodzie, a pewne patogeniczne szczepy są odpowiedzialne za szereg chorób u ludzi i zwierząt. Np., choroby układu oddechowego, takie jak zapalenie płuc, zarówno u ludzi jak i u zwierząt są powodowane przez takie organizmy, i choroby te charakteryzują się przewlekłym przebiegiem i dużą zachorowalnością. W związku z tym należy zwrócić szczególną uwagę na odzwierzęce zapalenie płuc u świń (EPP), mające istotne znaczenie ekonomiczne, zwłaszcza w przypadku zwierząt intensywnie hodowanych, i dla których czynnikiem wywołującym chorobę jest Mycoplasma hyopneumoniae (poprzednio znany także jako M. suipneumoniae).
Czyniono liczne próby wytworzenia szczepionek, chroniących zwierzęta przed zakażeniami mikoplazmą, zwłaszcza EPP. Zwykle sposób wytwarzania szczepionki polegał na powodowaniu wzrostu organizmu, np. M. hyopneumoniae, w hodowli do uzyskania pożądanej wydajności, unieczynnianiu i zbieraniu organizmu, i formułowania z zebranych komórek szczepionki, ewentualnie z odpowiednim adjuwantem. Mikoplazmy zwykle trudno wzrastają w hodowli, a przy wytwarzaniu szczepionki ważne jest, aby po unieczynnieniu zachować antygenowość żywego organizmu. Najczęstszym sposobem unieczynniania bakterii podczas wytwarzania szczepionki jest traktowanie formaliną i był to sposób zwykle stosowany w próbach wytwarzania szczepionek przeciwko
170 186 mikoplazmom. Dotychczas okazało się niemożliwe wytwarzanie w ten sposób szczepionki, zapewniającej zadawalającą ochronę przed EPP.
Znanych jest także szereg sposobów unieczynniania wirusów podczas wytwarzania szczepionek przeciwko chorobom wirusowym, polegających na traktowaniu żywych wirusów etylenoiminą. Stosowanie etylenoiminy w praktyce nastręcza jednak obecnie znaczne trudności ze względu na to, że jest ona wysoce toksyczna i można nią operować tylko przy zachowaniu najsurowszych środków bezpieczeństwa.
Badano także stosowanie binarnej etylenoiminy do unieczynniania mikoplazmowych zanieczyszczeń w surowicach zwierzęcych, używanych do propagacji hodowli komórek [Christianson i in., J. Clin. Microbiol., 11(4), 377-379 (1980)], ale wyciągnięto wniosek, że nie można zalecać do tego celu binarnej etylenoiminy.
Zgodnie z wynalazkiem sposób wytwarzania szczepionki skutecznej w ochronie zwierzęcia przeciwko stanowi związanemu z zakażeniem przez organizm z rodzaju Mycoplasma i Acholeplasma z rzędu Mycoplasmatales, zwłaszcza skutecznej w ochronie świń przed odzwierzęcym zapaleniem płuc, polega na tym, że powoduje się wzrost organizmu w hodowli, unieczynnia się ten organizm traktując etylenoiminą wytworzoną in situ przez dodanie do hodowli bromowodorku 2-bromoetyloaminy (BEA), przy czym podczas dodawania wartość pH hodowli nastawia się na odczyn łagodnej alkaliczności, korzystnie około 7,0-8,0, zbiera się komórki organizmu i przetwarza się te komórki na szczepionkę.
Sposób według niniejszego wynalazku polega na stosowaniu etylenoiminy lub jej odpowiedniej pochodnej. Odpowiednie pochodne obejmują pochodne acylowe, np. acetyloetylenoiminę. Wynalazek opisano ze szczególnym odniesieniem do stosowania samej etylenoiminy jako takiej.
Jak wspomniano wyżej, etylenoiminą jest wysoce toksycznym i niebezpiecznym związkiem chemicznym i chociaż według wynalazku może być stosowanajako taka do unieczynniania mikoplazmy, to wysoce korzystne jest tworzenie etylenoiminy in situ w hodowli organizmu. Sposób tworzenia etylenoiminy in situ powinien być taki, aby była ona wytwarzana z prekursora bezpiecznego w operowaniu nim, a etylenoiminą sama powinna być następnie unieczynniana po spełnieniu swojej roli w unieczynnianiu organizmu. Sposoby tworzenia i unieczynniania etylenoiminy same powinny być takie, aby nie wywierać żadnego znaczącego wpływu na antygeniczność organizmu.
A więc, zgodnie z wynalazkiem etylenoiminę tworzy się in situ, dodając do hodowli mikoplazmy bromowodorek 2-bromoetyloaminy (BEA). BEA jest stosunkowo obojętnym ciałem stałym, ale w łagodnych warunkach alkalicznych cyklizuje tworząc etylenoiminę. W związku z tym, podczas dodawania BEA konieczne jest nastawienie wartości pH hodowli na lekko allkaliczną, korzystnie w granicach 7,0-8,0, bardziej korzystnie 7,3 do 7,7, zwłaszcza około 7,5.
Jeśli nie podjąć kroków, aby ciągle utrzymywać wartość pH na tym poziomie łagodnej alkaliczności podczas unieczynniania organizmu, pH ma tendencję spadkową. Dlatego, po dodaniu BEA, wartość pH hodowli należy nastawiać w sposób ciągły, aby utrzymać jego wartość na poziomie łagodnej alkaliczności w ciągu dostatecznego czasu, aby zapewnić, że organizm został całkowicie unieczynniony. Dodawanie alkaliów jest konieczne przede wszystkim w ciągu pierwszych kilku godzin, np. około pierwszych trzech godzin, ale może także być konieczne utrzymanie ciągłego nastawiania pH pożywki hodowlanej w ciągu dłuższego okresu czasu, np. około 20 do 24 godzin. Wartość pH pożywki hodowlanej można nastawiać na pożądaną wartość łagodnie alkaliczną dodatkiem dowolnej odpowiedniej zasady, np. wodorotlenku metalu alkalicznego, korzystnie wodorotlenku sodowego.
Po unieczynnieniu organizmu, etylenoimina sama może być unieczynniona dodatkiem odpowiedniego reagenta, przekształcającego etylenoiminę w postać, w której można nią bezpiecznie operować. Do przykładowych środków unieczynniających należą tiosiarczan sodowy, unieczynniający etylenoiminę przez rozszczepienie struktury pierścieniowej związku i kwas cytrynowy. Komórki mikoplazmy zbiera się następnie, np. przez odwirowanie, i aby uniknąć
170 186 jakiegokolwiek ewentualnego wystawienia operatora na działanie etylenoiminy, pozostałą pożywkę hodowlaną można wyładowywać do wodnego roztworu tiosiarczanu sodowego.
Niniejszy wynalazek dotyczy wszelkich organizmów rzędu Mycoplasmatales rodzaju Mycoplasma i Acholeplasma. Do przykładowych takich organizmów należą M. hyopneumoniae, M. bovis, M. dispar, M. orale, M. hominis, M. arginini i A. laidlawii. Wynalazek dotyczy zwłaszcza wytwarzania szczepionek przeciw EEP i będzie opisany dalej za pomocą przykładu odnoszącego się szczególnie do organizmu M. hyopneumoniae.
Sposób wytwarzania szczepionki przeciw organizmowi M. hyopneumoniae rozpoczyna się od kultury posiewowej omawianego organizmu. Odpowiednie kultury są dostępne z kolekcji kultur, np. M. hyopneumoniae 10110 jest dostępna z National Collection of Type Cultures, Colindale, Zjednoczone Królestwo. Kulturę posiewową hoduje się w odpowiedniej pożywce i następnie zaszczepia w końcowej objętości pożywki hodowlanej. Zależnie od skali wytwarzania szczepionki, końcowa objętość pożywki hodowlanej może wynosić, np., 40 do 45 litrów aż do 200 litrów Iub więcej, a kultura posiewowa może wzrastać do objętości od 1 do 10% końcowej objętości pożywki hodowlanej przed jej zaszczepieniem w tej końcowej pożywce hodowlanej.
Do odpowiednich pożywek hodowlanych należą np. dostępne w handlu podstawowe buliony wzbogacone surowicą i ekstraktem z drożdży. Do pożywki zwykle wprowadza się także źródło energii, takie jak glukoza, i antybiotyk, taki jak polimiksyna. Wartość pH powinna na ogół być w granicach od 7,2 do 7,6. Organizm wzrasta w hodowli w warunkach regulowanego pH, korzystnie pH 7,1 do 7,3, przy czym wartość pH reguluje się dodatkiem alkaliów, takich jak wodorotlenek sodowy. Wzrost odbywa się w normalnej temperaturze inkubatora, np. 36°C ± 10C, i kontynuuje się go aż do czasu, gdy aktywność metaboliczna hodowli zaczyna spadać, co odzwierciedla zużywanie alkaliów, stosowanych do nastawiania pH.
Gdy aktywność metaboliczna hodowli zaczyna spadać, organizm unieczynnia się, dodając do pożywki hodowlanej BEA. Na przykład, BEA można dodawać jako wodny roztwór o znanym stężeniu do końcowego stężenia w pożywce hodowlanej wynoszącego około 0,82 g/litr, co odpowiada około 4 mM. Jednocześnie z dodawaniem Iub bezpośrednio przed dodawaniem BEA, wartość pH pożywki hodowlanej nastawia się na poziom łagodnie alkaliczny, zwykle na pH około 7,5, dodatkiem odpowiednich alkaliów, takich jak wodorotlenek sodowy.
BEA cyklizuje w tych warunkach, tworząc etylenoiminę, która unieczynnia M. hyopneumoniae. Ten sposób unieczynniania wymaga kilku godzin, zwykle około 24 godzin, podczas których hodowlę utrzymuje się w normalnej temperaturze inkubowania. Ważne jest, aby etylenoimina w dalszym ciągu była obecna w pożywce hodowlanej w czasie potrzebnym do unieczynniania. Pod nieobecność dalszego nastawiania, wartość pH pożywki hodowlanej ma z czasem tendencję do stawania się coraz bardziej kwasowym. W związku z tym należy ciągle kontrolować wartość pH pożywki hodowlanej podczas procesu unieczynniania i utrzymywać ją na poziomie łagodnej alkaliczności przez dodawanie, o ile to konieczne, dalszych ilości alkaliów.
Gdy unieczynnianie organizmu zostaje zakończone, etylenoimina jako taka w pożywce hodowlanej zostaje rozłożona dodatkiem nadmiaru odpowiedniego reagenta, takiego jak tiosiarczan sodowy lub kwas cytrynowy. Np., dodaje się nadmiar wodnego roztworu tiosiarczanu sodowego, aby zapewnić jego stężenie w pożywce hodowlanej około 1 g/litr.
Po zdezaktywowaniu etylenoiminy, komórki organizmu zbiera się, pozostałą pożywkę hodowlaną można dodawać do dalszego wodnego roztworu tiosiarczanu sodowego, ponownie korzystnie do końcowego stężenia około 1 g/litr.
Po zebraniu komórek można zmierzyć wydajność antygenu przez ocenę białka. Koncentrat komórkowy, powstały w wyniku zebrania komórek można przerabiać w znany sposób, wytwarzając szczepionkę. Dokładniej, komórki rozcieńcza się do odpowiedniego poziomu w przeliczeniu na zawartość antygenu, np. fizjologicznie buforowaną solanką, i jeśli to pożądane, można formułować szczepionkę, stosując odpowiedni adjuwant, taki jak olej, saponina Iub dekstran DEAE. Korzystnym adjuwantem jest olej.
Stwierdzono, że szczepionka wytworzona ogólnym sposobem opisanym wyżej z organizmu M. hyopneumoniae zachowuje właściwości antygeniczne żywego organizmu i była skutecznie stosowana do ochrony świń przed EPP.
Nie chcąc być związanym żadną konkretną teorią, uważa się, że znane sposoby unieczynniania bakterii podczas wytwarzania szczepionki (np. traktowanie formaliną) oddziaływują na białka powierzchniowe bakterii powodując niekorzystny wpływ na antygeniczne właściwości bakterii. W niektórych przypadkach wpływ na białka powierzchniowe komórek bakterii może być taki, że komórek nie możnajuż stosować do wytwarzania zadawalającej szczepionki, i może to mieć miejsce zwłaszcza w przypadku bakterii takich jak mikoplazmy, które trudno wzrastają w hodowli.
W takich okolicznościach, aby wytworzyć zadawalającą szczepionkę trzeba stosować sposób unieczynniania organizmu, wywierający jak najmniejszy niekorzystny wpływ na antygeniczne właściwości komórek. Uważa się, że etylenoiminą dezaktywuje organizm, niszcząc jego materiał genetyczny (DNA), nie wpływając w żaden znaczący sposób na białka powierzchniowe komórek.
Wynalazek ilustrują następujące przykłady.
Przykład I. Do 100 ml aktywnie wzrastającej hodowli M. hyopneumoniae 10110 dodano BEA (0,082 grama), aby uzyskać końcowe stężenie w pożywce hodowlanej wynoszące 4 mM. Wartość pH nastawiono na 7,5 wodnym roztworem wodorotlenku sodowego (1n), po czym mierzono pH i nastawiano w ten sam sposób następująco:
godzina pH zmierzono przy 6,95 nastawiono pH na 7,5 godziny pH zmierzono przy 7,2 nastawiono pH na 7,5* godziny pH zmierzono przy 7,4 nastawiono pH na 7,5 godziny pH zmierzono przy 7,45 nie nastawiano godzin pH zmierzono przy 7,45 nie nastawiano godzin pH zmierzono przy 7,45 nie nastawiano Wartość pH nastawiano 0,1 n wodorotlenkiem sodowym.
W ciągu 6 godzin co godzinę pobierano próbki do rozcieńczenia i oznaczania metodą płytkową, a po 24 godzinach także do bezpośredniego posiewu. Po 24 godzinach nie stwierdzono żadnego organizmu zdolnego do życia.
Przykład II. Prowadzono hodowlę następczą M. hyopneumoniae 10110 na pożywce hodowlanej o następującym składzie:
| Bulion podstawowy | 65 ml |
| Surowica krwi wieprzowej | 15 ml |
| Gotowany wyciąg krwi | 1 0 ml |
| Wyciąg drożdżowy | 1 0 ml |
| Cysteina HCl (1%) | 1 ml |
| Glukoza (20%) | 5 ml |
| Czerwień fenolowa (0,4%) | 1 ml |
| Ampicylina (0,5%) | 0,5 ml |
| Octan talawy (1%) | Ί,5 ml |
| Hodowlę następczą prowadzono | w sekwencji 10 ml, 100 ml, 400 ml, 4000 ml. Gdy |
hodowla o objętości 4 litrów wykazywała oznaki aktywnego wzrostu (lekkie zmętnienie i przesunięcie w kierunku kwasowym pH), zaszczepiono nią 40 litrów świeżej pożywki. Wartość pH tej hodowli utrzymywano na poziomie 7,2, dodając wodny roztwór wodorotlenku sodowego gdy tylko spadek wartości pH wymagał skorygowania.
Po 13 dniach zapotrzebowanie na wodorotlenek sodowy spadało, i do hodowli przez filtr sterylizujący wpompowywano 36,5 g BEA w około 100 ml wody destylowanej. Wartość pH utrzymywano na poziomie 7,5, dodając w miarę potrzeby wodny roztwór wodorotlenku sodowego. Po 24 godzinach zbierano hodowlę przez odwirowanie, a zużytą pożywkę hodowlaną wyładowywano do kwasu cytrynowego, otrzymując 0,2% roztwór. Alternatywnym sposobem postępowania na tym etapie było dodanie po 24 godzinach tiosiarczanu sodowego przed odwirowaniem do poziomu 1,0 g/litr i wyładowanie zużytej pożywki hodowlanej do dalszej ilości wodnego roztworu tiosiarczanu sodowego. Ten alternatywny sposób postępowania dawał równoważne wyniki.
170 186
Stężony antygen, wytworzony w następstwie odwirowania homogenizowano w 300 ml solanki buforowanej fosforanem (PBS), homogenizowano i ponownie odwirowywano. Ponownie osadzony antygen ponownie zawieszano w 300 ml PBS i przechowywano jednakowych objętościach roztworu w temperaturze -70°C.
Dostateczną ilość antygenu emulgowano w oleistym adjuwancie (Marcol : Arlacel) tak, aby uzyskać w przybliżeniu dawkę 13 mg/podanie podskórne, i podano ją 6 świniom, podczas gdy 10 świń stanowiło nieszczepioną grupę kontrolną. Po 4 tygodniach wszystkie świnie przez trzy kolejne dni poddano donosowo prowokacji 5 ml objętościami homogenizatu płuc, zawierającego organizmy M. hyopneumoniae. Sekcja w cztery tygodnie po prowokacji ujawniła obszerne zmiany chorobowe u świń z grupy kontrolnej i żadnych zmian u zwierząt zaszczepionych, to znaczy przez szczepienie osiągnięto całkowite zabezpieczenie od prowokacji.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 2,00 zł
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania szczepionki skutecznej w ochronie zwierzęcia przeciwko stanowi związanemu z zakażeniem przez organizm z rodzaju Mycoplasma i Acholeplasma z rzędu Mycoplasmatales, zwłaszcza skutecznej w ochronie świń przez odzwierzęcym zapaleniem płuc polegający na powodowaniu wzrostu organizmu w hodowli i unieczynnianiu tego organizmu, znamienny tym, że organizm ten unieczynnia się traktując etylenoiminą wytworzoną in situ przez dodanie do hodowli bromowodorku 2-bromoetylenoaminy (BEA), przy czym podczas dodawania wartość pH hodowli nastawia się na odczyn łagodnej alkaliczności, korzystnie około 7,0 - 8,0, zbiera się komórki organizmu i przetwarza się te komórki na szczepionkę.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pH nastawia się na wartość 7,3 - 7,7.
- 3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że pH nastawia się na wartość około 7,5.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że po dodaniu BEA, pH hodowli nastawia się ciągle tak, aby utrzymać odczyn łagodnej alkaliczności w ciągu dostatecznie długiego czasu aby zapewnić, że organizm został całkowicie unieczynniony.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że pH nastawia się dodatkiem wodorotlenku metalu alkalicznego.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że po unieczynnieniu organizm unieczynnia się samąetylenoiminę lub jej pochodną przez dodanie reagenta przekształcającego etylenoiminę łub jej pochodną w postać, którą można bezpiecznie operować.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że jako reagent stosuje się tiosiarczan sodowy.
- 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako organizm stosuje się M. Hyopneumoniae, M. bovis, M. dispar, M. orale, M. hominis, M. arginini łub A. laidlawii.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB919108682A GB9108682D0 (en) | 1991-04-23 | 1991-04-23 | Production of vaccines |
| PCT/GB1992/000747 WO1992018161A1 (en) | 1991-04-23 | 1992-04-23 | Production of vaccines |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL170186B1 true PL170186B1 (pl) | 1996-11-29 |
Family
ID=10693782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL92301116A PL170186B1 (pl) | 1991-04-23 | 1992-04-23 | Sposób wytwarzania szczepionki PL |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0592454B1 (pl) |
| AT (1) | ATE141800T1 (pl) |
| AU (1) | AU1574392A (pl) |
| CZ (1) | CZ282089B6 (pl) |
| DE (1) | DE69213239T2 (pl) |
| DK (1) | DK0592454T3 (pl) |
| ES (1) | ES2090629T3 (pl) |
| GB (1) | GB9108682D0 (pl) |
| GR (1) | GR3021142T3 (pl) |
| HU (1) | HU214245B (pl) |
| MD (1) | MD960213A (pl) |
| PL (1) | PL170186B1 (pl) |
| RU (1) | RU2104712C1 (pl) |
| WO (1) | WO1992018161A1 (pl) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5565205A (en) * | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
| US6114108A (en) * | 1995-08-29 | 2000-09-05 | V.I. Technologies, Inc. | Methods and compositions for the selective modification of viral nucleic acids |
| US6136586A (en) * | 1995-08-29 | 2000-10-24 | Vi Technologies, Inc. | Methods for the selective modification of viral nucleic acids |
| US5891705A (en) * | 1997-04-08 | 1999-04-06 | Pentose Pharmaceuticals, Inc. | Method for inactivating a virus |
| US6352695B1 (en) | 1997-10-03 | 2002-03-05 | V.I. Technologies, Inc. | Methods and compositions for the selective modification of nucleic acids |
| US6093564A (en) * | 1997-10-03 | 2000-07-25 | V.I. Technologies, Inc. | Methods and compositions for the selective modification of nucleic acids |
| US6369048B1 (en) | 1998-01-12 | 2002-04-09 | V.I. Technologies, Inc. | Methods and compositions for inactivating viruses |
| US6403359B1 (en) | 1998-09-25 | 2002-06-11 | V. I. TECHNOLOGIES, Inc. | Solid phase quenching systems |
| US6617100B2 (en) | 1998-09-25 | 2003-09-09 | V.I. Technologies, Inc. | Solid phase quenching systems |
| GB0110851D0 (en) * | 2001-05-03 | 2001-06-27 | Mini Agriculture & Fisheries | Vaccine |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2112274T5 (es) * | 1990-05-29 | 2006-03-01 | Wyeth Holdings Corporation | Vacuna contra la pneumonia en cerdos y metodo para la preparacion de la misma. |
| US5565205A (en) * | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
-
1991
- 1991-04-23 GB GB919108682A patent/GB9108682D0/en active Pending
-
1992
- 1992-04-23 WO PCT/GB1992/000747 patent/WO1992018161A1/en not_active Ceased
- 1992-04-23 MD MD96-0213A patent/MD960213A/ro unknown
- 1992-04-23 ES ES92908854T patent/ES2090629T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-04-23 EP EP92908854A patent/EP0592454B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-04-23 HU HU9302995A patent/HU214245B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-04-23 DE DE69213239T patent/DE69213239T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1992-04-23 AU AU15743/92A patent/AU1574392A/en not_active Abandoned
- 1992-04-23 AT AT92908854T patent/ATE141800T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-04-23 DK DK92908854.0T patent/DK0592454T3/da active
- 1992-04-23 RU RU93058395A patent/RU2104712C1/ru active
- 1992-04-23 CZ CS932242A patent/CZ282089B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-04-23 PL PL92301116A patent/PL170186B1/pl unknown
-
1996
- 1996-09-25 GR GR960402508T patent/GR3021142T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU214245B (hu) | 1998-03-02 |
| GB9108682D0 (en) | 1991-06-12 |
| CZ224293A3 (en) | 1994-03-16 |
| CZ282089B6 (cs) | 1997-05-14 |
| DE69213239T2 (de) | 1997-01-23 |
| WO1992018161A1 (en) | 1992-10-29 |
| HUT67441A (en) | 1995-04-28 |
| EP0592454A1 (en) | 1994-04-20 |
| GR3021142T3 (en) | 1996-12-31 |
| HU9302995D0 (en) | 1994-01-28 |
| MD960213A (ro) | 1998-03-31 |
| AU1574392A (en) | 1992-11-17 |
| RU2104712C1 (ru) | 1998-02-20 |
| DE69213239D1 (de) | 1996-10-02 |
| ATE141800T1 (de) | 1996-09-15 |
| EP0592454B1 (en) | 1996-08-28 |
| DK0592454T3 (da) | 1996-09-16 |
| ES2090629T3 (es) | 1996-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100286573B1 (ko) | 불활성화 미코플라스마 히오뉴모니에 박테린 및 그의 이용방법 | |
| US4167560A (en) | Polyvalent shipping fever vaccine | |
| US4556556A (en) | Vaccine for the prevention of vesicular stomatitis virus infection | |
| PL170186B1 (pl) | Sposób wytwarzania szczepionki PL | |
| EP0256792B1 (en) | Vaccines for fowl colibacillosis | |
| Rimler et al. | A growth medium for the production of a bacterin for immunization against infectious coryza | |
| CN1097466C (zh) | 沙门氏菌活疫苗 | |
| EP1387693B1 (en) | Saponin inactivated mycoplasma vaccine | |
| Montgomery et al. | Observations on the pathogenicity of Alcaligenes faecalis in chickens | |
| US4287179A (en) | Immersion vaccine for enteric redmouth | |
| Mulsow | The Differentiation and Distribution of the Paratyphoid-Enteritidis Group. VI: Avian Paratyphoid Bacilli: A Comparative Study of B. Pullorum and B. Sanguinarium | |
| RU2857851C1 (ru) | Вакцина против инфекционного кератоконъюктивита крупного рогатого скота на основе антигена бактерий Moraxella bovoculi | |
| US3980523A (en) | Method of propagating microorganisms | |
| KR102348853B1 (ko) | 락토바실러스 플란타룸 및 가금 아데노 바이러스를 포함하는 백신 조성물 | |
| RU2750865C1 (ru) | Поливалентная инактивированная вакцина против риемереллёза, пастереллёза и сальмонеллёза индеек, уток и гусей, способ её получения | |
| RU2264227C1 (ru) | Ассоциированная вакцина для специфической профилактики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий moraxella bovis и герпесвируса типа i | |
| CA1129769A (en) | Polyvalent shipping fever vaccine | |
| RU2125465C1 (ru) | Вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза (орнитоза) птиц | |
| Artemeva et al. | Improved production strain maintenance technique for Burkholderia mallei 5584 (Master seed) used for glander diagnostic agent production | |
| RU2233174C2 (ru) | Вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза крупного и мелкого рогатого скота | |
| US8637047B2 (en) | Erysipelothrix rhusiopathiae-haemophilus parasuis vaccine and methods of using the same | |
| RU2270867C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНА Pseudomonas aeruginosa | |
| NO791690L (no) | Fremgangsmaate for immunisering av fisk | |
| CA1144478A (en) | Immersion vaccine for enteric redmouth | |
| RU2279892C1 (ru) | Вакцина культуральная инактивированная против хламидиоза (орнитоза) птиц |