PL171608B1 - Sposób wytwarzania suchych zestawów immunoglobuliny G - Google Patents

Abstract

Sposób wytwarzania suchych zestawów immunoglobuliny G poprzez redukcję mostków dwusiarczkowych w cząsteczce immunoglobuliny G, przyłączenie do immunoglobuliny G związku chelatującego, znamienny tym, że redukcję mostków dwusiarczkowych prowadzisię 2-merkaptoetanolem, zaśjako związku chelatującego używa się kwasu metylenodwufosfonowego.

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania suchych zestawów immunoglobuliny G, które po wyznakowaniu za pomocą 99mTc służą do lokalizacji ognisk ropnych oraz do rozpoznawania stanów zapalnych u ludzi.

Znanych jest wiele radiofarmaceutyków stosowanych w diagnostyce stanów zapalnych. Najczęściej stosowane są: cytrynian galu-67, albumina znakowana 99mTc, 99mTcnanokoloid, granulocyty znakowane 111In i 99mTc, a także immunoglobulina G znakowana 99mTc. Preparaty te, jakkolwiek o dużej wartości diagnostycznej, posiadają szereg wad i niedogodności utrudniających ich stosowanie. Są to: wysoka cena w przypadku izotopów 11In i 67Ga, czy też długi i skomplikowany proces przygotowania preparatu, wynoszący około 3 godzin i wymagający pobrania około 50 ml krwi od pacjenta, w przypadku znakowania ludzkich granulocytów. Znajdujący się na rynku preparat Technescan HIG, zawierający immunoglobulinę G do znakowania 99mTc otrzymuje się poprzez:

1. redukcję mostków dwusiarczkowych immunoglobuliny G 4-merkaptobutylem

2. łączenie zmodyfikowanej immunoglobuliny G ze związkiem chelatującym-winianem dwusodowym.

Preparat Technescan HIG zawierający immunoglobulinę G łatwo daje się znakować za pomocą 99mTc i posiada wysoką wartość diagnostyczną. Jednakże pewną barierę w jego stosowaniu stanowi wysoka cena oraz fakt, że nie jest produkowany w kraju.

Immunoglobulinę G do znakowania 99mTc można wytworzyć w prosty sposób stosując metodę według wynalazku.

Istota wynalazku polega na:

1. redukcji mostków dwusiarczkowych w cząsteczce immunoglobuliny G 2-merkaptoetanolem do grup sulfhydrylowych, posiadających duże powinowactwo do 99mTc

2. przyłączeniu do zmodyfikowanej immunoglobuliny G silnego związku chelatującego, z jednej strony wiążącego immunoglobulinę G, z drugiej zaś strony kompleksującego 99mTc - kwasu metylenodwufosfonowego.

Zastosowanie 2-merkaptoetanolu do redukcji mostków dwusiarczkowych w miejsce 4-merkaptobutylu pozwala na lepsze i dokładniejsze oczyszczenie preparatu po procesie redukcji.

Ze względu na większą różnicę w ciężarach cząsteczkowych pomiędzy immunoglobuliną G a 2-merkaptoetanolem aniżeli pomiędzy immunoglobuliną G a 4-merkaptobutylem, proces usuwania środka redukującego przebiega z większą dokładnością, dając produkt o lepszej jakości. Sposobem według wynalazku otrzymuje się więc immunoglobulinę o wyższym stopniu czystości niż stosując, jak dotychczas 4-merkaptobutyl.

Zastosowanie natomiast, jako związku chelatującego, kwasu metylenodwufosfonowego jest również korzystniejsze niż stosowanie, jak dotychczas winianu dwusodowego. Kwas metylenodwufosfonowy tworzy silne wiązania kowalencyjne z

171 608 immunoglobuliną G, a także dobrze kompleksuje 99mTc. Ma to zasadniczy wpływ na trwałość preparatu zarówno in vitro jak i in vivo. Tak przygotowany zestaw znakuje się prosto i szybko za pomocą około 20mC i 99mTc, w objętości nie przekraczającej 1,5 ml. Całość inkubuje się w temperaturze pokojowej przez okres 10 minut, delikatnie wytrząsając.

W tych warunkach otrzymuje się powyżej 98% czystego kompleksu immunoglobuliny G znakowanej 99mTc, który dobrze gromadzi się w stanach zapalnych i pozwala na trafną i szybką diagnostykę tych schorzeń.

Istotę wynalazku wyjaśnia poniższy przykład:

Przykład: Do 5 ml roztworu bioglobuliny dodać 150 μ 1 2-merkaptoet.anolu i wytrząsać delikatnie przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Całość przenieść na kolumnę 12 x 2,5 cm wypełnioną sefadeksem G-50 medium, a następnie zbierać frakcje zawierające białko, którego stężenie należy mierzyć spektrofotometrycznie. Do jałowych fiolek rozdozować:

mg zmodyfikowanej immunoglobuliny G oraz 0,4 mg kwasu metylenodwufosfonowego i 0,03 mg chlorku cynawego w roztworze soli fizjologicznej. Zawartość fiolek poddać liofilizacji, a następnie zakorkować w atmosferze argonu i zakapslować.

171 608

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 2,00 zł

Claims (1)

1. Zastrzeżenie patentowe

   Sposób wytwarzania suchych zestawów immunoglobuliny G poprzez redukcję mostków dwusiarczkowych w cząsteczce immunoglobuliny G, przyłączenie do immunoglobuliny G związku chelatującego, znamienny tym, że redukcję mostków dwusiarczkowych prowadzi się 2-merkaptoetanolem, zaś jako związku chelatującego używa się kwasu metylenodwufosfonowego.