PL175020B1

PL175020B1 - Składowa grupy A streptogramin oraz sposób wytwarzania składowej grupy A streptogramin

Info

Publication number: PL175020B1
Application number: PL94321271A
Authority: PL
Inventors: Pascal Anger; Bertrand Bonnavaud; Alain Callet; Patrick Lefevre
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer Sa
Priority date: 1993-02-17
Filing date: 1994-02-16
Publication date: 1998-10-30
Also published as: DE69414622D1; PL175016B1; HK1006500A1; IE940144A1; OA10400A; SG81198A1; BR1101176A; IE80462B1; CN1159197A; DE69414622T2; EP0614910A1; WO1996005219A1; IL121821A; US5726151A; DK0614910T3; AT406052B; CZ285281B6; HK1006499A1; US5637565A; EP0614910B1

Abstract

1. Skladowa grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2, w którym R” oznacza atom wodoru lub rodnik etylowy. 2. Sposób wytwarzania skladowej grupy A streptogramin mniejszosciowej o ogólnym wzorze 2 , w którym R’ ’ oznacza atom wodoru rodnik metylowy lub etylowy, znamienny tym, ze poddaje sie kokry- stahzacji skladowa grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2 z jedna lub kilkoma skladowymi grupy B streptogramin o wzorze 1 , gdzie A 1 oznacza grupe o ogólnym wzorze 1a lub wzorze 1a’, w którym R’ oznacza atom wodoru lub grupe hydroksylowa, a Y oznacza atom wodoru, grupe metyloaminowa lub gru- pe dwumetyloaminowa, R oznacza rodnik etylowy, lub gdy R’ oznacza atom wodoru, R moze równiez oznaczac metyl, a R1 oraz R2 oznaczaja atom wodoru, lub tez A 1 oznacza grupe o wzorze 1b, R oznacza rodnik izobutylowy, R1 oznacza grupe hydroksylowa, a R2 oznacza rodnik metylowy, po czym usuwa sie skladowa /skladowe/ grupy B przez obróbke w srodo- wisku kwasnym, przy czym poddaje sie kokrystaliza- cji jedna lub kilka skladowych grupy B streptogramin i jedna lub kilka skladowych mniejszosciowych grupy A streptogramin, w stosunku molowym 1/2. Wzór 2 PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest również sposób otrzymywania oczyszczonej składowej mniejszościowej grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2.

Dotychczas nie była znana możliwość oczyszczenia składowej grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2 przez krystalizację. Ze stanu techniki znane są jedynie chromatograficzne metody wytwarzania oczyszczonego produktu z grupy A o ogólnym wzorze 2 i nie znano

175 020 żadnego innego sposobu oczyszczania, który by pozwolił wydzielić te produkty w znacznych ilościach.

Wykazano obecnie, że składową grupy A o ogólnym wzorze 2 można otrzymać w stanie czystym, przechodząc przez pośrednią asocjację kokrystaliczną utworzoną przez składową (składowe) grupy A streptogramin o wzorze 2 ze składową (składowymi) grupy B streptogramin o wzorze 1, a następnie usunięcie składowej (składowych) grupy B przez obróbkę w środowisku kwaśnym.

Kokrystalizację prowadzi się w stałym stosunku stechiometrycznym 1 mola składowej (składowych) o ogólnym wzorze 1 z 2 molami składowej (składowych) grupy A o ogólnym wzorze 2 [stechiometria tajest zgodna z odpowiednim stosunkiem wagowym około 43-44/57-56 w przypadku, gdy składowa A jest produktem o ogólnym wzorze 1, w którym Ai oznacza grupę o ogólnym wzorze la].

Surowa mieszanina, zawierająca co najmniej 30% składowej mniejszościowej grupy A, odpowiadającej ogólnemu wzorowi 2, rozpuszczona w organicznym rozpuszczalniku, takimjak keton (np. aceton, metyloetyloketon, metyloizobutyloketon), ester (np. octan etylu, octan izopropylu, octan butylu, octan izobutylu), rozpuszczalnik chlorowany (np. dwuchlorometan, chloroform, 1,2-dwuchloroetan) lub nitryl (np. acetonitryl) i dodana do składowej grupy B, określonej ogólnym wzorem 1 daje połączenie kokrystaliczne o proporcjach składu określonych poprzednio. Oczywiste jest, że wprowadzoną ilość związku o ogólnym wzorze 1 dobiera się odpowiednio, aby stężenie resztkowe tego produktu (po kokrystalizacji) było niższe od jego rozpuszczalności w danym środowisku.

Oczywiste jest też, że zmiany odpowiednich zawartości produktu o ogólnym wzorze 2 i produktu o ogólnym wzorze 1 w początkowym środowisku nie prowadzą do modyfikacji otrzymanego połączenia kokrystalicznego. Z tak otrzymanej asocjacji kokrystalicznej rozpuszczonej w rozpuszczalniku np. metyloizobutyloketonie lub dwuchloroetanie i dodanej do kwaśnego środowiska (np. kwas siarkowy, kwas chlorowodorowy) otrzymuje się po dodaniu do fazy organicznej rozpuszczalnika np. heksanu, składową mniejszościową grupy A, oczyszczoną i pozbawioną składowej grupy B.

Wytwarzanie i rozdział składowych grup A i B zachodzi drogą fermentacji i wydzielenia składników z zacieru fermentacyjnego zgodnie lub analogicznie z metodą opisaną przez J. Preud’homme i in., Buli. Soc. Chim. Fr., vol 2, 585 (1968) w publikacjach: Antibiot. & Chemother. 5,632/1955 lub 7,606/1957; Chromatog. Sym., 2°Bruxelles, 181 (1962); Antibiot. Ann., 728-784 (1954-55); opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki 3 299047; lub jak opisano poniżej w przykładach. Zwłaszcza w wypadku pristinamycyny, składowe grup A i B rozdziela się, zawieszając streptograminę surową w rozpuszczalniku organicznym, takim jak octan (np. octan etylu), po czym następuje filtracja lub odwirowanie surowej składowej grupy A i ekstrakcja składowej grupy B w kwaśnym wodnym środowisku a potem powtórna ekstrakcja dwuchlorometanem. Rozdzielenia składowych grup A i B można również dokonać przez ekstrakcję kwaśną roztworu surowej streptograminy w metyloizobutyloketonie, potem wydzielenie przez ekstrakcję składowej grupy B z fazy wodnej i wydzielenie składowej grupy A przez wytrącenie z fazy organicznej.

Po wydzieleniu można oczyścić składowe grupy B streptogramin przez krystalizację z alkoholu, takiego jak etanol, metanol lub izopropanol, z octanu (np. octanu izopropylu lub octanu butylu), ketonu (np. metyloetyloketonu) lub z acetonitrylu albo przez chromatografię. Składowe grupy A o ogólnym wzorze 2 można oczyścić przez, chromatografię, stosując jako eluent mieszaninę acetonitryl-woda.

Alternatywnie wytwarzanie składowych z grup A i B o odpowiednich ogólnych wzorach 2 i 1 prowadzi się zgodnie z opisem we francuskim zgłoszeniu patentowym 2 689 518 przez fermentację podzieloną na następujące etapy;

- pierwszy etap - działanie mutagenne wobec drobnoustroju nieselektywnego produkującego streptograminy,

- drugi etap - dobór drobnoustrojów selektywnych.

175 020

Przykład I.

500 g surowej pristinamycyny [pri.st^ii^i^^i^M^^<cyⁿy IA (PLAj-20,7%, pristinamycyny IB (PIB)-3 ,9%, pristinamycyny IC (PIC)-,6%, pristinamycyny ID (PID)-0,3%, pristinamycyny IIB (pIIB)-8%, pristinamycyny IIA (PHG)-45%], pristinamycyny IIF (PHF)-<0,5% (nie oznaczono), pristinamycyny IIG (PIIG)-<0,5%], rozpuszcza się w 50 litrach metyloizobutyloketonu. Roztwór ten ekstrahuje się 5 razy fazą wodną złożoną z 2,5 litrów wody i 2,5 litra 1 N kwasu siarkowego, po czym przemywa się 3 razy 10 litrami wody. Do metyloizobutyloketonu dodaje się następnie

7,5 litra wodnego roztworu kwaśnego węglanu sodu, o stężeniu 35 g/litr, po czym przemywa 5 litrami wody. Za każdym razem fazę wodną miesza się z fazą organiczną, dekantuje i rozdziela. Otrzymaną fazę organiczną kontaktuje się z 750 g tlenku glinu, odsącza, zatęża do objętości około 4 litrów i dodaje 5 objętości heksanu. Uzyskany osad odsącza się i suszy. Otrzymuje się 300 g produktu, który zawiesza się w 1 litrze izopropanolu. Po mieszaniu w ciągu 45 minut w temperaturze 55°C, sączy się w temperaturze 4°C.

Ługi macierzyste z filtracji zatęża się do sucha, dodaje 500 cm³ metyloizobutyloketonu i wlewa do tego 5 objętości heksanu. Osad odsącza się, przemywa heksanem i suszy w temperaturze 40°C pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując 69 g surowej PIIB (surowa składowa grupy A), zawierającej 36% PIIB, 6% PIIA i pozbawionej PIA.

Przykład Π.

g surowej PUB otrzymanej tak jak poprzednio w przykładzie I oczyszcza się w kilku operacjach chromatografowania na kolumnie, zawierającej Nucleosil 5C8® (średnica kolumny 5 cm, wysokość 30 cm) przy perkolacji eluentem woda-acetonitryl (60-0). Otrzymuje się w ten sposób 250 mg pristinamycyny IIF (PIIF).

Przykład III.

Wytwarzanie produktu kokrystalicznego: PIIB surową otrzymaną uprzednio w przykładzie I (składowa mniejszościowa grupy A streptogramin o wzorze 2) rozpuszcza się w 190 cm3 acetonu i dodaje 33 g oczyszczonej pI (PIA-81,1%, PIB-12%, PIC-2,6%, PID-1,1%) (składowa grupy B streptogramin o wzorze 1, otrzymana tak jak to przedstawiono w przykładzie V). Po 17 godzinach mieszania w temperaturze 20°C otrzymuje się zawiesinę, którą odsącza się w temperaturze 4°C, przemywa i suszy. Po krystalizacji z acetonu w stosunku 100 g/litr otrzymuje się 10 g białych kryształów o zawartości PIIB + PIIF + PIIG, wynoszącej 55% i zawartości PIA + PIB + PID wynoszącej 43%.

Przykład IV.

* <3

9,3 g produktu otrzymanego w przykładzie III rozpuszcza się w 490 rn metyloizobutyloketonu. Roztwór ten ekstrahuje się dwa razy 370 cm3 0,5 N wodnego roztworu kwasu siarkowego i przemywa dwa razy 150 cm³ wody. Niastt^^r^iii fazę organiczną zatęża si<ę do objętości około 80 cm3 i wlewa do 5 objętości heksanu. Otrzymany osad przemywa się, odsącza i suszy. W celu usunięcia metyloizobutyloketonu osad dodaje się do acetonu w stosunku 100 g/litr, wprowadza do 10 obj. heksanu, przemywa i suszy. Otrzymuje się 3,5 g produktu, zawierającego oczyszczoną PIIB i pozbawionego PI. Zawartość PIIB + PIIF + PIIG wynosi około 95%, w tym 92% PUB. Produkty PIIB, PIIF, PIIG są składowymi mniejszościowymi grupy A streptogramin o wzorze 2.

Przykład V.

kg pristinamycyny surowej [pristinamycyny IA (PIA)-20,7%, pristinamycyny IB (PDB)-3,9%, pristinamycyny IC (PIC)-0,6%, pristinamycyny ID (PID)-0,3%, pristinamycyny IIB (PIIB)-8%, pristinamycyny IIA (PiIA)-45%, pristinamycyny IIF (PIIF)-<0,5% (nie oznaczono), pristinamycyny IIG (PHG)-<0,5% (nie oznaczono)] zawieszono w 210 litrach octanu etylu i mieszano w ciągu 15 godzin w temperaturze pokojowej. Zawiesinę sączy się i odebrany przesącz octanu etylu ekstrahuje się 2 razy 2θ litrami 1N kwasu siarkowego i następnie 20 litrami wody destylowanej. Połączone fazy wodne przemywa się 6 razy 15 litrami octanu etylu, a potem doprowadza się do pH 7, dodając 30 litrów 10% roztworu kwaśnego węglanu sodu i ekstrahuje się 3 razy 30 litrami dwuchlorometanu. Fazy dwuchlorometanowe łączy się i przemywa 10 litrami wody destylowanej. Następnie oddestylowuje się dwuchlorometan i wprowadza 50 litrów etanolu. Do mieszaniny dodaje się wtedy 0,8 kg sadzy L3S i utrzymuje we wrzeniu wobec powrotu skroplin w ciągu 30 minut. Po przesączeniu i przemyciu 2 razy 5 litrami etanolu mieszaninę ochładza się do temperatury 10°C w ciągu 15 godzin. Po utrzymaniu przez jedną

175 020 godzinę w temperaturze 10°C zawiesinę sączy się i przemywa 3 razy 7 litrami etanolu. Po wysuszeniu ciała stałego w temperaturze 40°C pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymuje się 5,7 kg oczyszczonej pristinamycyny I (poniżej zwanej PI).

Zawartość: 96,8% (PIA-81,1%, PIB-12%, PIC-2,6%, PID-1,1%). Wydajność PIA-74% (składowa grupy B).

Wzór 1

II o

^0

Wzór 1a

Wzór 1q'

175 020

Wzór 1b

Departament Wydawnictw UP RP Nakład 90 egz. Cena 2,00 zł

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Składowa grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2, w którym R” oznacza atom wodoru lub rodnik etylowy.
2. Sposób wytwarzania składowej grupy A streptogramin mniejszościowej o ogólnym wzorze 2, w którym R” oznacza utom wodoru rodnik metylowy lub etylowy, znamienny tym, że poddaje się kokrystalizacji składową grupy A streptogramin o ogólnym wzorze 2 z jedną lub kilkoma składowymi grupy B streptogramin o wzorze 1, gdzie Ai oznacza grupę o ogólnym wzorze lu lub wzorze la’, w którym R’ oznacza atom wodoru lub grupę hydroksylową, u Y oznacza atom wodoru, grupę metyloaminową lub grupę dwumetyloaminową, R oznacza rodnik etylowy, lub gdy R’ oznacza utom wodoru, R może również oznaczać metyl, a Ri oraz R2 oznaczają utom wodoru, lub też Ai oznacza grupę o wzorze lb, R oznacza rodnik izobutylowy, Ri oznacza grupę hydroksylową, u R2 oznacza rodnik metylowy, po czym usuwu się składową /składowe/ grupy B przez obróbkę w środowisku kwaśnym, przy czym poddaje się kokrystalizacji jedną lub kilku składowych grupy B streptogramin i jedną lub kilka składowych mniejszościowych grupy A streptogramin, w stosunku molowym 1/2.

Wynalazek niniejszy dotyczy oczyszczonej składowej mniejszościowej grupy A streptogrumin o wzorze 2, w którym R” oznacza rodnik metylowy, etylowy lub atom wodoru oraz sposobu jej wytwarzaniu.

Związek o ogólnym wzorze 2, w którym R” oznacza rodnik etylowy, nazwany niżej pristinamycyną IIF (PIIF) oraz związek o ogólnym wzorze 2, w którym R” oznuczu utom wodoru, nazwany niżej pristinamycyną IIG (PIIG) są produktami nowymi.

Składowe grupy A streptogrumin o wzorze 2 znajdują zastosowanie do wytwarzania oczyszczonej postaci streptogramin w postaci asocjacji związku o wzorze 2 z jedną lub kilkoma składowymi grupy B o ogólnym wzorze 1, gdzie Ai oznacza grupę o ogólnym wzorze lu lub wzorze 1u’, w którym R’ oznacza utom wodoru lub grupę hydroksylową, u Y oznacza atom wodoru, grupę metyloaminową lub grupę dwumetyloaminową, R oznacza rodnik etylowy, lub gdy R’ oznuczu atom wodoru, R może również oznaczać rodnik metylowy, aRi oruz R2 oznaczają atom wodoru, lub też Ai oznacza grupę o wzorze 1b, R oznacza rodnik izobutylowy i Ri oznuczu grupę hydroksylową, a R2 oznacza rodnik metylowy. Asocjacje mogą występować w postaci kokrystalizatu, koprecypitatu lub fizycznej mieszaniny proszków.

Asocjacje według wynalazku są produktami również nowymi i wykazują działanie przeciwbukteryjne w żywym ustroju, wyższe od produktu naturalnego (np. naturalnej wirginiamycyny lub naturalnej pristinamycyny) lub asocjacji, zawierających większościową składową grupy A, i przede wszystkim są obdarzone całkowicie zadawalającą dostępnością biologiczną. Ponadto asocjacje te można wytwarzać na znaczną skalę. Tak samo możliwe jest doprowadzenie do postaci oczyszczonej i dostępnego biologicznie produktu końcowego o dobrym poziomie aktywności, zawierającej poniżej 6% zanieczyszczeń.