PL182509B1 - Sposób wytwarzania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA) - Google Patents
Sposób wytwarzania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA)Info
- Publication number
- PL182509B1 PL182509B1 PL96323639A PL32363996A PL182509B1 PL 182509 B1 PL182509 B1 PL 182509B1 PL 96323639 A PL96323639 A PL 96323639A PL 32363996 A PL32363996 A PL 32363996A PL 182509 B1 PL182509 B1 PL 182509B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- adca
- phenylacetyl
- acid
- penicillin
- chrysogenum
- Prior art date
Links
- 101710104123 Deacetoxycephalosporin C synthase Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 2
- NVIAYEIXYQCDAN-UHFFFAOYSA-N 7-amino-3-methyl-8-oxo-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid Chemical compound S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(N)C12 NVIAYEIXYQCDAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 13
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 4
- 241000187390 Amycolatopsis lactamdurans Species 0.000 claims description 3
- 241000187433 Streptomyces clavuligerus Species 0.000 claims description 3
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 abstract description 23
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 7beta-aminodeacetoxycephalosporanic acid Chemical compound S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](N)[C@@H]12 NVIAYEIXYQCDAN-CLZZGJSISA-N 0.000 abstract 3
- CSGFFYNMTALICU-ZWNOBZJWSA-N adipyl-7-aminodesacetoxycephalosporanic acid Natural products CC1=C(N2[C@H](SC1)[C@H](NC(=O)CCCCC(O)=O)C2=O)C(O)=O CSGFFYNMTALICU-ZWNOBZJWSA-N 0.000 abstract 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 22
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 22
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 20
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 19
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 19
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 12
- -1 D-5-amino-5-carboxypentanoyl side chain Chemical group 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 238000006049 ring expansion reaction Methods 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 6
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N Isopenicillin N Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N penicillin N Chemical group OC(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-GPUHXXMPSA-N 0.000 description 4
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 description 3
- 229950008644 adicillin Drugs 0.000 description 3
- 101150091913 cefE gene Proteins 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 3
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228431 Acremonium chrysogenum Species 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N Cephalosporin C Natural products S1CC(COC(=O)C)=C(C(O)=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H](N)C(O)=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-N 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 108700005088 Fungal Genes Proteins 0.000 description 2
- 101710107944 Isopenicillin N synthase Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-M cephalosporin C(1-) Chemical compound S1CC(COC(=O)C)=C(C([O-])=O)N2C(=O)[C@@H](NC(=O)CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O)[C@@H]12 HOKIDJSKDBPKTQ-GLXFQSAKSA-M 0.000 description 2
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 108010093176 deacetoxycephalosporin C synthetase Proteins 0.000 description 2
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 2
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 2
- 101150055760 glcA gene Proteins 0.000 description 2
- 101150073906 gpdA gene Proteins 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- ODJQKYXPKWQWNK-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Thiobispropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCSCCC(O)=O ODJQKYXPKWQWNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWWJFMCCTZLKNT-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2h-thiazine Chemical group C1CC=CSN1 NWWJFMCCTZLKNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700016155 Acyl transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000057234 Acyl transferases Human genes 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010055428 Isopenicillin-N epimerase Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- OYIFNHCXNCRBQI-BYPYZUCNSA-N L-2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710123388 Penicillin G acylase Proteins 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 101150044453 Y gene Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229940011643 acv tripeptide Drugs 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N cephalexin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@@H]3N(C2=O)C(=C(CS3)C)C(O)=O)=CC=CC=C1 ZAIPMKNFIOOWCQ-UEKVPHQBSA-N 0.000 description 1
- 229940106164 cephalexin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N desacetoxycephalosphorin G Natural products S1CC(C)=C(C(O)=O)N2C(=O)C(NC(=O)CCCC(N)C(O)=O)C12 NNQIJOYQWYKBOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JSYGRUBHOCKMGQ-UHFFFAOYSA-N dichloramine Chemical compound ClNCl JSYGRUBHOCKMGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000003651 hexanedioyl group Chemical group C(CCCCC(=O)*)(=O)* 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- MIFYHUACUWQUKT-GTQWGBSQSA-N isopenicillin N Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H](NC(=O)CCC[C@H](N)C(O)=O)C(=O)N21 MIFYHUACUWQUKT-GTQWGBSQSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000002500 microbody Anatomy 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentachloride Chemical compound ClP(Cl)(Cl)(Cl)Cl UHZYTMXLRWXGPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000001984 thiazolidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania i wyodrebniania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA), znamienny tym, ze: a)transformuje sie szczep Penicyllium chrysogenum genem ekspandazy pod kontrola trans- krypcyjnych i translacyjnych grzybowych sygnalów regulacji ekspresji, b)prowadzi sie fermentacje wytworzonego szczepu w pozywce hodowlanej i dodaje sie do tej pozywki hodowlanej kwas fenylooctowy badz jego sól lub ester odpowiedni do celów otrzymania penicyliny G, która podlega ekspansji do fenyloacetylo-7-ADCA, c) odzyskuje sie fenyloacetylo-7-ADCA z brzeczki fermentacyjnej, d) deacyluje sie fenyloacetylo-7-ADCA, e) wyodrebnia sie krystaliczny 7-ADCA. PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest biosyntetyczny sposób wytwarzania i wyodrębniania kwasu
7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA).
Antybiotyki β-laktamowe stanowią najważniejszą grupę związków antybiotycznych o długiej historii zastosowań klinicznych. W tej grupie wysoką pozycję zajmują penicyliny i cefalosporyny. Związki te są w stanie naturalnym wytwarzane przez grzyby nitkowce, odpowiednio przez Penicillium chrysogenum i Acremonium chrysogenum.
W ciągu ostatnich dziesięcioleci, w wyniku ulepszania szczepów z użyciem technik klasycznych, poziomy tych antybiotyków wytwarzanych przez Penicillium chrysogenum i Acremonium chrysogenum ogromnie wzrosły. Wraz z rozwojem wiedzy o szlakach biosyntezy prowadzących do penicylin i cefalosporyn i wraz z rozwojem technologii rekombinacji DNA, stały się dostępne nowe narzędzia ulepszania szczepów produkcyjnych i derywatyzacji tych związków in vivo.
Zidentyfikowano większość enzymów biorących udział w biosyntezie β-laktamow, sklonowano też odpowiadające im geny. Zagadnienia te zostały opisane przez Ingolia'ę i Queenet'a w Med. Res. Rev. 1989, 9, 245-264 (droga biosyntezy i enzymy) oraz przez Aharonowitz'a, Cohen'a i Martin,a w Ann. Rev. Mictobiol., 1992, 46, 461-495 (klonowanie genów).
Pierwsze dwa etapy biosyntezy penicyliny w P. chrysogenum to kondensacja trzech aminokwasów: kwasu L-5-amino-5-katboksypentanowego (kwasu L-a-amino-adypinowego; A), L-cysteiny (C) i L-waliny (V) z wytworzeniem trópeptydu LLD-ACV i następna cyklizacja tego trójpeptydu do izopenicyliny N. Ten związek posiada typową strukturę β-laktamu.
W trzecim etapie następuje wymiana hydrofilowego łańcucha bocznego kwasu L-5-amino-5-karboksypentanowego na hydrofobowy łańcuch boczny pod działaniem enzymu, acylottansferazy (AT). Ta reakcja wymiany enzymatycznej z udziałem AT zachodzi wewnątrz organelli komórkowych, mikrociał. Została ona opisana w opisie zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0448180.
182 509
Cefalosporyny są znacznie droższe od penicylin. Jedna z przyczyn tego faktujestto, że niektóre cefalosporyny (np. cefaleksynę) wytwarza się z penicylin na drodze wielu konwersji chemicznych. Następną przyczyną jest fakt, że dotychczas przez fermentację można otrzymywać jedynie cefalosporyny z bocznym łańcuchem D-5-amino-5-karboksypentanoilowym. Cefalosporyna C, najważniejsza do tej pory substancja wyjściowa, jest łatwo rozpuszczalna w wodzie przy każdej wartości pH, co wymusza stosowanie długotrwałych i kosztownych procesów izolacji z użyciem kłopotliwej i drogiej technologii chromatografii kolumnowej. Uzyskana tą drogą cefalosporyna C musi być następnie przetworzona w użyteczne leczniczo cefalosporyny drogą wielu konwersji chemicznych i enzymatycznych.
Obecnie z powodzeniem stosowane sposoby wytwarzania pośredniego 7-ADCA wymagają prowadzenia złożonych etapów chemicznych prowadzących do ekspansji pierścienia i derywatyzacji penicyliny G. Jednym z niezbędnych etapów chemicznych syntezy 7-ADCA jest ekspansja 5-członowej pierścieniowej struktury penicyliny do 6-członowej struktury pierścieniowej cefalosporyny, ujawniona np. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr. 4.003.894. Ten skomplikowany proces chemiczny jest nie tylko drogi lecz również szkodliwy dla środowiska.
Istnieje zatem ogromna potrzeba zastąpienia powyższych procesów chemicznych przez reakcje enzymatyczne, takie jak kataliza enzymatyczna, korzystnie przebiegająca podczas fermentacji. Kluczem do zastąpienia procesu ekspansji chemicznej przez proces biologiczny jest centralny enzym w szlaku biosyntezy cefalosporyny, syntetaza deacetoksycefalosporyny C, czyli ekspandaza.
Wykazano (Baldwin i wsp., Tetrahedron, 43(13), 3009,1987), że enzym ekspandaza z bakterii Streptomyces clavuligerus ma w niektórych przypadkach zdolność powiększania pierścienia penicylinowego in vitro. Canwell i wsp. opisali ekspresję ekspandazy z S. clavuligerus w P. chrysogenum (Current Genetics, 1990,17,213-221). Ekspresjatej ekspandazy nie powoduje wytwarzania cefalosporyn w procesie fermentacji, jak sugerowano w publikacjach. Jedynie wówczas, gdy była ona wprowadzona do P. chrysogenum razem z genem epimerazy izopenicyliny N z S. claYuligerus, obserwowano konwesję struktury pierścieniowej penicyliny N (naturalnego substratu) do cefalosporynowej struktury pierścieniowej dezacetoksycefalosporyny C (naturalnego produktu), co opisał Cantwell i wsp. w Proc. R. Soc. Lond. B. 248, 283-289 (l992). Enzym ekspandaza oraz odpowiadający mu gen, zostały dokładnie scharakteryzowane (w opisie zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0366354) zarówno pod względem biochemicznym jak i funkcjonalnym. Opisano zarówno mapy fizyczne genu cefE (opis zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0341842) jak i sekwencję DNA i badania biotransformacji w P. chrysogenum z genem cefE.
Innym źródłem enzymu do ekspansji pierścienia jest bakteria Nocardia lactamdurans (poprzednio Streptomyces lactamdurans). Opisano zarówno właściwości biochemiczne tego enzymu jak i sekwencję DNA odpowiadającego mu genu (Cortes i wsp., J. Gen. Microbiol., 1987, 133, 3165-3174 i odpowiednio Coque i wsp., Mol. Gen. Genet., 1993, 236, 453-458).
Ponieważ ekspandaza katalizuje powiększenie 5-członowego pierścienia tiazolidynowego w penicylinie N do 6-członowego pierścienia dihydrotiazynowego w dezacetoksycefalosporynie C, enzym ten powinien być logicznym kandydatem użytym do zastąpienia etapów chemicznej ekspansji pierścienia. Niestety, enzym ten działa na półprodukt, penicylinę N w szlaku biosyntezy cefalosporyny ale nie łatwo dostępne, tanie penicyliny wytwarzane przez P. chrysogenum, w tym na penicylinę G. Penicylina N nie jest dostępna w handlu, a nawet po ekspansj i pierścienia, jej boczny łańcuch D-aminoadypilowy nie może być łatwo usunięty przez acylazy penicylinowe.
Ostatnio okazało się, że enzym ekspandaza ma właściwości powiększania pierścienia w penicylinach z określonymi łańcuchami bocznymi, z wytworzeniem odpowiedniej pochodnej 7-ADCA. W opisie zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0268343 opisano sposób in vitro ekspansji penicyliny z 3-karboksyfenyloacetylowym bądź adypoilowym łańcuchem bocznym przez użycie syntetazy dezacetoksycefalosporyny C. Ponadto, ta właściwość ekspandazy została wykorzystana w technolgii, co jest opisane w opisach patentowych europejskich EP-A-0532341, EP-A-0540210 i światowych WO95/04148 i WO95/04149. W powyższych ujawnieniach, konwencjonalną konwersję chemiczną penicyliny G do 7-ADCA zastąpiono kon4
182 509 wersją in vitro niektórych pochodnych kwasu 6-aminopenicyłanowego (6-APA) w rekombinantowych szczepach Penicyllium chrysogenum zawierających gen ekspandazy.
W opisie zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0532341 opisane jest użycie in vivo enzymu ekspandazy zawartej w P. chrysogenum w kombinacji z bocznym łańcuchem 5-karboksypentanoilowym jako pożywką, stanowiącym substrat dla enzymu acylotransferazy w P. chrysogenum. Powstawał 5-karboksypentanoilo-6-APA, który podlegał konwersji do 5-karboksypentanoilo-7-ADCA przez ekspandazę wprowadzoną do szczepu P. chrysogenum. W końcowym etapie autorzy sugerowali usunięcie 5-karboksypentanoilowego łańcucha bocznego i uzyskanie 7-ADCA jako końcowego produktu.
W opisach zgłoszeń patentowych PCT, WO95/04148 i WO95/04149 ujawniono, że kwas 3' -karboksymetylotiopropionowy i kwas 3,3' -tiodipropionowy są substratami dla ekspandazy. Powstaje z nich odpowiednio 2-(karboksyetylotio)acetylo- i 3-(karboksymetylotio)-propionylo-7-ADCA.
Sposób według niniejszego wynalazkujestjednak bardziej korzystny, ze względu na wyższą zdolność syntezy penicyliny G przez szczepy wytwarzające penicylinę i bardziej korzystny sposób ekstrakcji kwasu fenyloacetylo-7-ADCA. Ponadto, fenyloacetylowy łańcuch boczny penicyliny G jest bardzo podatny na rozszczepienie enzymatyczne przez amidazy penicyliny G wytwarzane przez kilka typów mikroorganizmów wytwarzających 6-APA, np. przez separazę G, co jest ujawnione w opisie zgłoszenia patentowego europejskiego EP-A-0453047.
W różnych publikacjach donoszono, że ekspandaza nie rozpoznaje penicyliny Gjako substratu do powiększenia pierścienia. Jest to opisane przez Baldwina i Abrahama: Natural Product Reports, 5(20, str. 129-145 (1988); Maeda'ę i wsp., Enzyme and Microbial Technology, 17,231-234 (1995); Crawford'a i wsp., Bio/technology, 13, str. 58-61 (1995); Wu-Kuang Yen'a i wsp., w książce „50 lat stosowania penicyliny” (wyd. Kleinkauf i von Dohren), 209 (1991), patrz zwłaszcza tabela 3A).
Nieoczekiwanie jednak okazało się, że transformowany genem kodującym ekspandazę P. chrysogenum wytwarzający penicylinę G ma zdolność wytwarzania kwasu fenyloacetylodezacetoksycefalosporanowego.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazkujest sposób wytwarzania i wyodrębniania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA) przez:
a) rransformowanie szczepu Penicyllium chrysogenum genem ekspandazy pod kontrolą tamskrypcyjnych i translacyjnych grzybowych sygnałów regulacji ekspresji,
b) pro wadzenie fermentacji wytworzonego szczepu w pożywce hodowlanej i dodanie do tej pożywki hodowlanej kwasu fenylooctowego bądźjego soli lub estru odpowiedniego do celów otrzymania penicyliny G, która podlega ekspansji do fenyloacetylo-7-ADCA,
c) odzyskanie fenyloacetylo-7-ADCA z brzeczki fermentacyjnej,
d) deacylację fenyloacetylo-7-ADCA,
e) wyodrębnienia krystalicznego 7-ADCA.
Korzystnie, w etapie (e) stosuje się filtrację.
Korzystnie, fenyloacetylo-7-ADCA odzyskuje się z brzeczki fermentacyjnej przez ekstrakcję przesączu z brzeczki rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszającym się z wodą, przy wartości pH poniżej około 4.5 i powrotną ekstrakcję wodą przy wartości pH od 4 do 10.
Ponadto, przedmiotem ujawnienia jest rekombinacyjny wektor DNA zawierający DNA kodujący ekspandazę, funkcyjnie związany z elementami kontroli transkrypcji i translacji genu grzybowego, np. genu gpdA z Aspergillus nidulaans i genu glcA Aspergillus niger, a także komórki gospodarza transformowane tym wektorem.
Szczegółowy opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy użycia funkcyjnych konstrukcji genu w P. chrysogenum do ekspansji in vivo struktury pierścieniowej penicyliny G z wytworzeniem pochodnej kluczowego półproduktu w biosyntezie cefalosporyny, kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA). Ta pochodna ma taką budowę chemiczną, która umożliwia wydajną ekstrakcję rozpuszczalnikiem, co daje atrakcyjny ekonomicznie sposób odzysku.
182 509
Transformację Ρ. chrysogenum można prowadzić w zasadzie różnymi technikami uzyskiwania DNA, takimi jak wejście do protoplastu za pośrednictwem PEG-Ca, elektroporacj i albo techniką bombardowania cząstkami i przez wyselekcjonowanie transformantów. Techniki te są opisane przykładowo przez Van den Hondel en Punfa, „Gene Transfer and Vector Development for Filamentous Fungi” w książce: „Applied Molecular Genetics of Fungi (wydawcy: Peberdy, Laten, Ogden, Bennett), Cambridge University Press (1991). Opisano też stosowanie dominujących i niedominujących markerów selekcji (Van den Hondel, jak wyżej). Opisano markery selekcji ze źródeł homologicznych (pochodzące z P. chrysogenum) i heterologicznych (pochodzące z organizmu innego niż P. chrysogenum) (Gouka i wsp., J. Biotechnol. 20, 1991, 189-200).
Stosowanie do selekcji transformantów różnych markerów selekcyjnych, zarówno homologicznych jak i heterologicznych, w obecności lub w nieobecności sekwencji wektora, związanych lub niezwiązanych fizycznie z DNA nie podlegającym selekcji jest dobrze znane.
W ten sposób wprowadzono reakcję ekspansji pierścienia przebiegąjącąza pośrednictwem enzymu ekspandazy do P. chrysogenum i dokonano ekspresji tej reakcji w tym organiźmie, przykładowo, w szczepie Panlabs P14-B10, DS18541 (zdeponowanym w muzeum CBS pod numerem akcesyjnym 455.95). Jest oczywiste, iż w przypadku, gdy reakcja ekspansji pierścienia jest prowadzona z udziałem mutantów tego transformantu, należy dokonać niewielkich adaptacji w parametrach pożywki aby uzyskać wydajny wzrost.
Ponadto, gen cefE umieszcza się pod kontrolątranskrypcyjnych i translacyjnych grzybowych elementów kontroli genu (nitkowców lub innych), korzystnie pochodzących z genu Y z P. chrysogenum (opisanego w zgłoszeniu patentowym europejskim EP-A-0549062), genu IPNS z P. chrysogenum, genu β-tubuliny, genu gpdA z Aspergillus nidulans albo genu glcA z Aspergillus niger.
Reasumując, niniejszy wynalazek pokazuje, w jaki sposób aktywność ekspandazy wprowadzonądo P. chrysogenum można ukierunkować in vivo na ekspansję pierścienia w penicylinie G.
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem, β-laktamowy półprodukt - fenyloacetylo-7-ADCA, wytwarza się w P. chrysogenum przez dodanie do pożywki kwasu fenylooctowego, jego soli albo estru. Odpowiednimi solami sąprzykładowo sole sodowe i potasowe. 7-ADCA wydajnie wyodrębnia się z pożywki przez zwykłą ekstrakcję rozpuszczalnikiem, np. w . sposób następujący.
Brzeczkę filtruje się i do filtratu dodaje się rozpuszczalnik organiczny nie mieszający się z wodą. Dla wyekstrahowania cefalosporyny z warstwy wodnej ustawia się wartość pH. Ma się ono zawierać w wartościach niższych od 4.5, korzystnie pomiędzy 4 a 1, bardziej korzystnie pomiędzy 2 a 1. W ten sposób cefalosporynę oddziela się od wielu innych zanieczyszczeń występujących w brzeczce fermentacyjnej. Korzystnie, stosuje się małą objętość rozpuszczalnika, otrzymując stężony roztwór cefalosporyny, uzyskując obniżenie szybkości przepływów objętościowych. Drugą możliwościąjest ekstrakcja pełnej brzeczki przy wartości pH 4 albo niższym. Korzystnie, brzeczkę poddaje się ekstrakcji w zakresie wartości pH od 4 do 1, rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszającym się z wodą.
Do ekstrakcji można użyć każdy rozpuszczalnik, który nie wchodzi w interakcje z cząsteczką cefalosporyny. Odpowiednimi rozpuszczalnikami są dla przykładu octan butylowy, octan etylowy, keton metylowo-izobutylowy, alkohole takie jak butanol i inne. Korzystnie stosuje się octan butylowy.
Następnie, cefalosporynę poddaje się powrotnej ekstrakcji wodą, przy wartości pH od 4 do 10, korzystnie od 6 do 9. W tym przypadku również drastycznie zmniejsza się objętość. Odzysk . prowadzi się w zakresie temperatur od 0°C do 50°C, korzystnie w temperaturach otoczenia.
Na otrzymany wodny roztwór cefalosporyny działa się odpowiednim enzymem w celu usunięcia bocznego łańcucha fenyloacetylowego i otrzymania żądanego 7-ADCA. Odpowiednim enzymem jest acylaza penicyliny G opisana w zgłoszeniu patentowym europejskim EP-A-0453047, zwana również amidazą penicyliny.
W celu stworzenia możliwości wielokrotnego użycia enzymu, korzystnie stosuje się enzym immobilizowany. Metodologia wytwarzania takich cząstek i immobilizacji enzymów jest szczegółowo opisana w zgłoszeniu patentowym europejskim EP-A-0222462. Wartość pH wod6
182 509 nego roztworu wynosi przykładowo 4 do 9. W tym zakresie pH, reakcja degradacji cefalosporyny jest zminimalizowana, a konwersja z udziałem enzymu jest zoptymalizowana.
Tak więc, do wodnego roztworu cefalosporyny dodaje się enzym, utrzymując wartość pH na odpowiednim poziomie, dodając np. zasadę nieorganiczną, takąjak roztwór wodorotlenku potasu albo stosując żywicę kationo-wymienną. Po zakończeniu reakcji immobilizowany enzym usuwa się przez filtrację. Inną możliwosciąjest użycie immobilizowanego enzymu w kolumnie wypełnionej złożem stałym albo w złożu fluidalnym albo stosując enzym w roztworze i odzyskując produkty metodą filtracji membranowej. Następnie, mieszaninę reakcyjną zakwasza się w obecności rozpuszczalnika organicznego nie mieszającego się z wodą.
Po doprowadzeniu pH do wartości około 0,1 do 1,5 warstwy się rozdziela i pH warstwy wodnej doprowadza się do wartości 2 do 5. Odfiltrowuje się krystaliczny 7-ADCA.
Deacylację można, jak wiadomo ze stanu techniki, również prowadzić na drodze chemicznej , np. przez utworzenie iminochlorku w łańcuchu bocznym przez dodanie pięciochlorku fosforu w temperaturze poniżej 10°C i następnie izobutanolu w temperaturach otoczenia lub niższych.
Wynalazek jest zilustrowany przykładami nie ograniczającymi jego zakresu.
Przykład I. Wytwarzanie fenyloacetylo-7-ADCA przez fermentację.
Do konstrukcji kaset ekspresyjnych zawierających gen ekspandazy użyto jako szczep gospodarza szczep P. chrysogenum Panlabs P14-B10, zdeponowany w muzeum CBS pod numerem akcesyjnym 455.95.
Użyta kaseta ekspresyjna, zawierająca gen ekspandazy pod kontrolą sygnałów regulacji transkrypcji i translacji genu IPNS z P. chrysogenum została opisana przez Crawforda i wsp. (jak wyżej). Zastosowano warunki transformacji i hodowli opisane przez Crawforda i wsp. (jak wyżej). Transformanty oczyszczano i analizowano na ekspresję enzymu ekspandazy metodątestów na zdolność wytwarzania adypoilo-7-ADCA, jak opisał Crawford i wsp. (jak wyżej).
Transformantami wytwarzającymi adypoilo-7-ADCA, jaknp. P. chrysogenum, szczepem PC 100, zdeponowanym w muzeum szczepów ATCC pod numerem akcesyjnym 74182, zaszczepiano z gęstością 2.1θ6 konidiów/ml pożywkę o składzie (g/litr): glukoza, 30; Pharmamedia (mączka z nasion bawełnianych), 10; namok kukurydziany, 20; (NH^SO,,, 20; CaCO3, 5; KH2PO4, 0,5; laktoza, 10; wyciąg Drożdżowy, 10 o wartości pH przed sterylizacją 5,6.
Hodowlę posiewową (20 ml w kolbie Erlenmeyera zakrytej korkiem z waty) inkubowano wtemperaturze 25°C mieszając zprędkością220 obrotów/minutę. Po 48 godzinach pobrano 1 ml do inokulacji 15 ml pożywki produkcyjnej o składzie (g/litr): KH2PO4,0,5; K2SO4,5; (NH4)2SO4, 17,5; laktoza, 140; Pharmamedia, 20; CaCO3,10; smalec, 10; o wartości pH przed sterylizacją
6,6. Po zaszczepieniu hodowlą posiewową, do płynu fermentacyjnego dodano 0,15 - 0,75 ml 10% roztworu kwasu fenylooctowego, doprowadzonego do pH 7.0 za pomocą KOH. Hodowlę produkcyjną zaszczepiono wtemperaturze 25°C przy szybkości mieszania 220 obrotów/minutę i hodowano w czasie 168 godzin w kolbie Erlenmeyera o pojemności 250 ml, zamkniętej filtrem do mleka. Co drugi dzień uzupełniano wyparowaną wodę.
Po zakończeniu fermentacji produkcyjnej usuwano grzybnię przez wirowanie albo filtrację i analizowano penicylinę G i fenyloacetylo-7-ADCA metodą HPLC.
Przykład II. Analiza produkcji fenyloacetylo-7-ADCA
Produkty fermentacji wytworzone przez transformowane szczepy Penicillium analizowano metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Układ HPLC zawierał następujące części składowe Spectra Physics; układ dostarczania rozpuszczalnika P1500, iniektor AS ΙΟΟΟ, detektor UV1000 ze zmienną długością fali (ustawiony na 214 nm) i integrator ISM100 albo podobny. Fazę stacjonarną stanowiła kolumna Chromopack Chromspher Cl 8. Faza ruchoma składała się z 75% buforu fosforanowego (pH 2.6) i 25% acetonitrylu. Produkty oznaczano ilościowo przez porównanie z krzywą standardowa dla fenyloacetylo-7-ADCA i penicyliny G. Identyczność fenyloacetylo-7-ADCA potwierdzano metodą NMR przy 600 MHz w roztworze deuterochloroformu po ekstrakcji kwaśnej filtratu hodowli. Wartości rezonansu fenyloacetylo-7-ADCA w ekstrakcie kwaśnym były identyczne z tymi, jakie występowały w próbach substancji wytworzonych na drodze syntezy chemicznej.
182 509
Traktat Budapesztański o międzynarodowym uznawaniu depozytów mikroorganizmów do celów procedury patentowej
Formularz międzynarodowy
Gist-Brocades N.V.
Research & Development/Stamccnservering
Postbus 1
2600 MA Delft
Holandia
Nazwa i adres deponenta
Potwierdzenie odbioru w przypadku oryginalnego depozytu wydane zgodnie z regułą 7.1 przez Międzynarodowe Biuro Depozytów na końcu tej strony
| I. Identyfikacja mikroorganizmu | |
| Identyfikacja nadana przez składającego depozyt: DS18541 | Numer akcesyjny nadany przez Międzynarodowe Biuro Depozytów: CBS 455.95 |
| II. Opis naukowy i/lub proponowana klasyfikacja taksonomiczna | |
| Mikroorganizm zidentyfikowany w p. I z dołączonym: - opisem naukowym X - proponowaną kasyfikacją taksonomiczną | |
| III. Przyjęcie i akceptacja | |
| Międzynarodowe Biuro Depozytów akceptuje mikroorganizm zidentyfikowany w p.l, który to mi- |
182 509
| kroorganizm został dostarczony w piątek, 2 czerwca 1995. | |
| IV. Przyjęcie podania o konwersję | |
| Mikroorganizm zidentyfikowany w p.l został przyjęty przez Międzynarodowe Biuro Depozytów - nie dotyczy Podanie o konwersję oryginalnego depozytu na depozyt w ramach Traktatu Budapeszteńskiego przyjęto; - nie dotyczy | |
| V. Międzynarodowe Biuro Depozytów | |
| Nazwa: Centraalbureau voor Schimmelcultures Adres: Oosterstraat 1 P.O. Box 273 3740 AG BAARN Holandia | Podpis osoby (osób) uprawnionych do reprezentowania Międzynarodowego Biura Depozytów drs. F.M. van Asma dr M.C. Agterberg data: Poniedziałek, 10 lipiec 1995 |
182 509
Traktat Budapesztański o międzynarodowym uznawaniu depozytów mikroorganizmów do celów procedury patentowej
Formularz międzynarodowy
Gist-Brocades N.V.
Research & Development/Stamconservering
Postbus 1
2600 MA Delft
Holandia
Nazwa i adres strony, do której wysłane jest pświadczenie o żywotności
Oświadczenie o żywotności wydane zgodnie z regułą 10.2 przez Międzynarodowe Biuro Depozytów na następnej stronie
| I. Składający depozyt | II. Identyfikacja mikroorganizmu |
| Nazwa: Gist-Brocades N.V. | Numer akcesyjny nadany przez Międzyna- |
| Research & Development | rodowe Biuro Depozytów: |
| /Stamconservering | CBS 455.95 |
| Adres: Postbus 1 | data złożenia depozytu albo transferu: |
| 2600 MA Delft | Piątek, 2 czerwiec 1995 |
| Holandia |
182 509
III. Oświadczenie o żywotności
Żywotność mikroorganizmu zidentyfikowanego w p. II badano dnia: poniedziałek 10 lipca 1995.
X - żywy
- brak dalszej żywotności
| IV. Warunki, w których przeprowadzono testy żywotności | |
| V. Międzynarodowe Biuro Depozytów | |
| Nazwa: Centraalbureau voor Schimmelcul- tures Adres: Oosterstraat 1 P.O. Box 273 3740 AG BAARN Holandia | Podpis osoby (osób) uprawnionych do reprezentowania Międzynarodowego Biura Depozytów drs. F.M. van Asma dr M.C. Agterberg data: Poniedziałek, 10 lipiec 1995 |
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz Cena 2,00 zł.
Claims (4)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania i wyodrębniania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA), znamienny tym, że:a) tnmsformuje się szczep Penicyllium chrysogenum genem ekspandazy pod kontrolą transkrypcyjnych i translacyjnych grzybowych sygnałów regulacji ekspresji,b) prowadzi się fermentację wytworzonego szczepu w pożywce hodowlanej i dodaje się do tej pożywki hodowlanej kwas fenylooctowy bądź jego sól lub ester odpowiedni do celów otrzymania penicyliny G, która podlega ekspansji do fenyloacetylo-7-ADCA,c) odzyskuje się fenyloacetylo-7-ADCA z brzeczki fermentacyjnej,d) deacyluje się fenyloacetylo-7-ADCA,e) wyodrębnia się krystaliczny 7-ADCA.
- 2. Sposób według zasttz. 1, znamienny tym, że w etapie (e) prowadzi się proces filtracji.
- 3. Sposób według zasttz. 1 albo zastrz. 2, znamienny tym, że w etapie c) prowadzi się etap filtracji i prowadzi się ekstrakcję filtratu z brzeczki rozpuszczalnikiem organicznym nie mieszającym się z wodą, przy wartości pH poniżej około 4.5 a następnie prowadzi się powrotną ekstrakcję wodą przy wartości pH od 4 do 10.
- 4. Sposób według zastrz. 1 znamienny tym, że stosuje się gen ekspandazy pochodzący ze Streptomyces clavuligerus albo z Nocardia lactamdurans.* * *
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP95201455 | 1995-06-02 | ||
| PCT/EP1996/002434 WO1996038580A1 (en) | 1995-06-02 | 1996-06-03 | Process for the production of 7-adca via expandase activity on penicillin g |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL323639A1 PL323639A1 (en) | 1998-04-14 |
| PL182509B1 true PL182509B1 (pl) | 2002-01-31 |
Family
ID=8220352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96323639A PL182509B1 (pl) | 1995-06-02 | 1996-06-03 | Sposób wytwarzania kwasu 7-aminodezacetoksycefalosporanowego (7-ADCA) |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6020151A (pl) |
| JP (1) | JPH11505726A (pl) |
| KR (1) | KR100421225B1 (pl) |
| CN (1) | CN1084791C (pl) |
| AT (1) | ATE209255T1 (pl) |
| BR (1) | BR9608954A (pl) |
| CA (1) | CA2223105A1 (pl) |
| DE (1) | DE69617228T2 (pl) |
| DK (1) | DK0828850T3 (pl) |
| ES (1) | ES2167568T3 (pl) |
| HU (1) | HUP9801906A3 (pl) |
| PL (1) | PL182509B1 (pl) |
| RU (1) | RU2192471C2 (pl) |
| SK (1) | SK280539B6 (pl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6383773B2 (en) * | 1998-04-23 | 2002-05-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Penicillin conversion |
| MD4030C2 (ro) * | 2009-12-12 | 2010-11-30 | Тимофей ПОПЕСКУ | Bază pentru prepararea mediilor nutritive pentru cultivarea microorganismelor din genul Mycobacterium şi procedeu de obţinere a acesteia |
| CN101880302B (zh) * | 2010-06-11 | 2012-10-24 | 中国科学院海洋研究所 | 一种多羟基甾醇衍生物及其制备和应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL81555A0 (en) * | 1986-11-17 | 1987-09-16 | Baldwin Jack Edward | Enzymatic process for 3-substituted cephalosporins |
| US5070020A (en) * | 1988-05-09 | 1991-12-03 | Eli Lilly And Company | Recombinant dna expression vectors and dna compounds that encode deacetoxycephalosporin c synthetase |
| SK280569B6 (sk) * | 1991-10-15 | 2000-03-13 | Gist-Brocades B.V. | Biologický spôsob výroby kyseliny7-aminodeacetylce |
| WO1995004148A1 (en) * | 1993-07-30 | 1995-02-09 | Gist-Brocades B.V. | Process for the efficient production of 7-adca via 2-(carboxyethylthio)acetyl-7-adca and 3-(carboxymethylthio)propionyl-7-adca |
| CN1087780C (zh) * | 1993-07-30 | 2002-07-17 | 吉斯特·布罗卡迪斯公司 | 通过3－(羧乙硫基)丙酰－7－adca有效生产7－adca的方法 |
| US5731165A (en) * | 1995-06-02 | 1998-03-24 | Gist-Brocades, B.V. | Process for the production of 7-ADCA via expandase activity on penicillin G |
-
1996
- 1996-06-03 PL PL96323639A patent/PL182509B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 DE DE69617228T patent/DE69617228T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-03 JP JP8536220A patent/JPH11505726A/ja not_active Abandoned
- 1996-06-03 KR KR1019970708709A patent/KR100421225B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-03 RU RU98100072/13A patent/RU2192471C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 AT AT96917498T patent/ATE209255T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-06-03 BR BR9608954A patent/BR9608954A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-06-03 DK DK96917498T patent/DK0828850T3/da active
- 1996-06-03 ES ES96917498T patent/ES2167568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 CN CN96195316A patent/CN1084791C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-03 US US08/973,292 patent/US6020151A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-03 SK SK1630-97A patent/SK280539B6/sk unknown
- 1996-06-03 CA CA002223105A patent/CA2223105A1/en not_active Abandoned
- 1996-06-03 HU HU9801906A patent/HUP9801906A3/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11505726A (ja) | 1999-05-25 |
| KR100421225B1 (ko) | 2004-06-18 |
| CA2223105A1 (en) | 1996-12-05 |
| ES2167568T3 (es) | 2002-05-16 |
| KR19990022230A (ko) | 1999-03-25 |
| HUP9801906A3 (en) | 2001-01-29 |
| ATE209255T1 (de) | 2001-12-15 |
| BR9608954A (pt) | 1999-03-02 |
| DK0828850T3 (da) | 2002-05-21 |
| CN1084791C (zh) | 2002-05-15 |
| PL323639A1 (en) | 1998-04-14 |
| CN1190440A (zh) | 1998-08-12 |
| DE69617228T2 (de) | 2002-06-27 |
| HUP9801906A2 (hu) | 1998-11-30 |
| SK163097A3 (en) | 1998-05-06 |
| SK280539B6 (sk) | 2000-03-13 |
| DE69617228D1 (de) | 2002-01-03 |
| US6020151A (en) | 2000-02-01 |
| RU2192471C2 (ru) | 2002-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0912754B1 (en) | Process for the fermentative production of deacylated cephalosporins | |
| JP2655790B2 (ja) | アジポイル―７―ａｄａｃを製造するための新規なバイオプロセス | |
| RU2230790C2 (ru) | Способ расширения 5-членного кольца соединения бета-лактама до 6-членного цефема | |
| FI108148B (fi) | Uusi biomenetelmä 7-ADCA:n valmistamiseksi | |
| EP0828850B1 (en) | Process for the production of 7-adca via expandase activity on penicillin g | |
| KR100327881B1 (ko) | 3-(카르복시에틸티오)프로피오닐-7-adca를경유하여7-adca를제조하는효율적인방법 | |
| US5919680A (en) | Process for the production of SSC's via expandase activity on penicillin G | |
| RU2208643C2 (ru) | Способ получения n-деацилированного цефалоспорина | |
| EP0783581B1 (en) | Process for the production of secondary metabolites | |
| US6020151A (en) | Process for the production of 7-ADCA via expandase activity on penicillin G | |
| HK1036480A (en) | Improved in vivo production of cephalosporins | |
| MXPA98010758A (en) | Process for the fermentative production of deacylated cephalosporins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20070603 |