PL183472B1 - Sposób wytwarzania L-aminokwasów - Google Patents
Sposób wytwarzania L-aminokwasówInfo
- Publication number
- PL183472B1 PL183472B1 PL96325155A PL32515596A PL183472B1 PL 183472 B1 PL183472 B1 PL 183472B1 PL 96325155 A PL96325155 A PL 96325155A PL 32515596 A PL32515596 A PL 32515596A PL 183472 B1 PL183472 B1 PL 183472B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- gene
- pps
- dna
- plasmid
- strain
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 82
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 24
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 56
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims abstract description 29
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims abstract description 29
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 26
- DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N phosphoenolpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=C)OP(O)(O)=O DTBNBXWJWCWCIK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 claims abstract description 18
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 13
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 58
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 44
- 108010062110 water dikinase pyruvate Proteins 0.000 claims description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 21
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 18
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 18
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 17
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 12
- 108010064711 Homoserine dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010055400 Aspartate kinase Proteins 0.000 claims description 4
- 108010006873 Threonine Dehydratase Proteins 0.000 claims description 4
- 229930029653 phosphoenolpyruvate Natural products 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 95
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 71
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 70
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 36
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 34
- 101150043515 pps gene Proteins 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 24
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 17
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 13
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 101150024271 TKT gene Proteins 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 9
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 9
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 8
- -1 aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 8
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 6
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 6
- 101150043028 ilvD gene Proteins 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 5
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- 101150099953 ilvE gene Proteins 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 4
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 101150095957 ilvA gene Proteins 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- PJWIPEXIFFQAQZ-PUFIMZNGSA-N 7-phospho-2-dehydro-3-deoxy-D-arabino-heptonic acid Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC(=O)C(O)=O PJWIPEXIFFQAQZ-PUFIMZNGSA-N 0.000 description 3
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 3
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100002724 Thermus thermophilus aroH gene Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 101150076125 aroG gene Proteins 0.000 description 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 101100435903 Corynebacterium glutamicum (strain ATCC 13032 / DSM 20300 / BCRC 11384 / JCM 1318 / LMG 3730 / NCIMB 10025) aroG gene Proteins 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 2
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150042732 aroC gene Proteins 0.000 description 2
- 101150019536 aroF gene Proteins 0.000 description 2
- 101150010999 aroP gene Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 101150105723 ilvD1 gene Proteins 0.000 description 2
- CNFDGXZLMLFIJV-UHFFFAOYSA-L manganese(II) chloride tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Mn+2] CNFDGXZLMLFIJV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N (-)-chorismic acid Natural products OC1C=CC(C(O)=O)=CC1OC(=C)C(O)=O WTFXTQVDAKGDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 108010037870 Anthranilate Synthase Proteins 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- 108010088278 Branched-chain-amino-acid transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108090000410 Chorismate dehydratases Proteins 0.000 description 1
- 241001517047 Corynebacterium acetoacidophilum Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108700016168 Dihydroxy-acid dehydratases Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- SLFHWLMXLIRLPS-DFWYDOINSA-N N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)O.[Na] Chemical compound N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)O.[Na] SLFHWLMXLIRLPS-DFWYDOINSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102100033451 Thyroid hormone receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N Vitamin B6 Natural products CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 101150018055 aroH gene Proteins 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-L chorismate(2-) Chemical compound O[C@@H]1C=CC(C([O-])=O)=C[C@H]1OC(=C)C([O-])=O WTFXTQVDAKGDEY-HTQZYQBOSA-L 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 108010071598 homoserine kinase Proteins 0.000 description 1
- 101150020087 ilvG gene Proteins 0.000 description 1
- 101150003892 ilvM gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003978 infusion fluid Substances 0.000 description 1
- 229910001410 inorganic ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- CCMVPFWAIAFRIH-UHFFFAOYSA-L magnesium;sulfate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O CCMVPFWAIAFRIH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004108 pentose phosphate pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- FPWMCUPFBRFMLH-UHFFFAOYSA-N prephenic acid Natural products OC1C=CC(CC(=O)C(O)=O)(C(O)=O)C=C1 FPWMCUPFBRFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097022 thiamine 100 mg Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania L-aminokwasów wybranych z grupy obejmujacej: L-tryptofan, L-fenyloalanine, L-tyrozyne, L-treonine i L-izoleucyne w którym hoduje sie w pozywce mi- kroorganizm posiadajacy zdolnosc wytwarzania L-aminokwasu, a nastepnie wydziela sie L-aminokwas z pozywki, znamienny tym, ze hoduje sie mikroorganizm o wzmocnionej, przez zwiekszenie ilosci kopii genu syntazy fosfoenolopirogronianowej w komórce, zdolnosci do wytwarzania fosfoenolopirogronianu, w porównaniu do szczepu dzikiego. PL PL PL
Description
Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania L-aminokwasu. W szczególności wynalazek dotyczy sposobu efektywnego wytwarzania aminokwasu, dla którego powstaje coraz więcej zastosowań, takich jak wykorzystanie jako surowca do produkcji słodzika aspartamu (L-fenyloalanina), dodatków pokarmowych (L-tryptofan, L-treonina) i surowca do wytwarzania farmaceutyków, takich jak roztwory do infuzji (L-tryptofan, L-fenyloalanina, L-tyrozyna, L-treonina i L-izoleucyna).
Znanych jest wiele sposobów wytwarzania aminokwasu z wykorzystaniem mikroorganizmu.
Na przykład znane są sposoby wytwarzania L-fenyloalaniny, obejmujące sposoby wykorzystujące zrekombinowane szczepy Escherichia coli (E. coli), jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 2-4276, Japońskiej Publikacji Patentowej (PCT) Nr 4-501813, Japońskiej Publikacji Patentowej (PCT) Nr 5-244956 i Publikacji Międzynarodowej W087/00202.
Znane są również sposoby wytwarzania L-fenyloalaniny lub L-tyrozyny, obejmujące sposoby polegające na wykorzystaniu zmuntowanego szczepu należącego do rodzaju Corynebacterium,jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 61-128897, sposoby wykorzystujące zrekombinowany szczep Corynebacterium, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 60-34197, 60-24192, 61-26089 i 61-124375.
Donoszono o sposobach wytwarzania L-tryptofanu, obejmujących sposoby oparte na wykorzystaniu zrekombinowanego szczepu Escherichia coli, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 57-71397 i Patencie USA Nr 4 371 614, sposoby wykorzystujące zmutowany szczep Bacillus subtilis, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 53-39517 i 62-34399, sposoby oparte na wykorzystaniu zrekombinowanego szczepu Bacillus subtilis, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 61-104790 i 1-67179, sposoby oparte na wykorzystaniu zmutowanego szczepu należącego do rodzaju Brevibacterium, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 57-1744096 i sposoby oparte na wykorzystaniu rekombi183 472 nanta należącego do rodzaju Brevibacteriun,)ak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 62-51980.
Donoszono o sposobach wytwarzania L-treoniny, obejmujących sposoby oparte na wykorzystaniu zmutowanego szczepu należącego do rodzaj u Escherichia, j ak uj awniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 5-304969, sposoby wykorzystujące zrekombinowany szczep Escherichia coli, jak ujawniono to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 1-29559, Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 109985 i 56-15696 i Japońskiej Publikacji Patentowej (PCT) Nr 3-501682. Ponadto znane są sposoby polegające na wykorzystaniu zmutowanego szczepu bakterii należącej do rodzaju Corynebacteriun, jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 62-239996, i sposoby oparte na wykorzystaniu zrekombinowanej bakterii należącej do rodzaju Corynebacteriun, jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 61-195695.
Donoszono również o sposobach wytwarzania L-izoleucyny, obejmujących sposoby wykorzystujące szczep Escherichia coli, jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 5-130882 i sposoby oparte na wykorzystaniu zrekombinowanego szczepu Escherichia coli, jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 2-4458. Ponadto znane są sposoby polegające na wykorzystaniu zmutowanego szczepu bakterii należącej do rodzaju Corynebacteriun, jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 6-62395, i sposoby polegające na wykorzystaniu rekombinanta należącego do rodzaju Corynebacteriun,jak podano to w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 5-47196.
Mikroorganizmy wykorzystywane we wspomnianych sposobach wytwarzania aminokwasu zostały wyhodowane zasadniczo na podstawie wzmocnienia enzymów katalizujących reakcje należące do podstawowych szlaków anabolizmu różnych aminokwasów i w szlakach właściwych dla poszczególnych aminokwasów lub na podstawie wyłączenia kontroli wywieranej przez produkty końcowe lub na podobnej podstawie (hamowanie zwrotne i supresja). Dokładniej, sposoby wykorzystane do wyprowadzenia szczepów obejmowały na przykład nadanie cechy auksotrofii mikroorganizmowi, nadanie oporności na antybiotyk i powielenie genów kodujących enzymy systemu biosyntezy aminokwasu i wprowadzenie mutacji powodującej zmniejszenie czułości kontroli, oparte na wykorzystaniu technik rekombinacji DNA.
Syntaza 3-deoksy-D-arabino-hepturoniano-7-fosforanowa (skrót związku: DAHP, skrót enzymu: DS) to enzym uczestniczący w pierwszej reakcji wspólnej drogi syntezy aminokwasów aromatycznych. DS z Escherichia coli obejmuje trzy typy izoenzymów kodowanych przez geny zwane: aroF, aroG i aroH, które ulegają hamowaniu zwrotnemu odpowiednio pod działaniem L-tyrozyny, L-fenyloalaniny i L-tryptofanu. Znana jest technika polepszania produktywności aminokwasu aromatycznego w kontekście wykorzystania właściwości wspomnianych genów, polegająca na wprowadzeaniu do Escherichia coli kompozycji genu kodującego enzym z obniżoną zdolnością do hamowania zwrotnego (nie polegający zasadniczo hamowaniu zwrotnemu) pochodzący z aroF lub aroG o wysokiej aktywności enzymatycznej i operon tryptofanu obejmujący gen kodujący syntazę kwasu antranilowego (AS) charakteryzującą się obniżoną.zdolnością do hamowania zwrotnego, należącą do systemu biosyntezy L-tryptofanu.
Kwas fosfoenolopirogronowy (PEP) i D-erytrozo-4-fosforan (E4P) wykorzystywane są jako substraty w reakcji syntezy DAHP. PEP służy również jako prekursor biosyntezy kwasu asparaginowego, L-treoniny, L-izoleucyny i podobnych związków. Substraty te powstąjąz.e źródła węgla, takiego jak glukoza w szlaku glikolitycznym i szlaku pentozofosforanowym. Nie sądotychczas znane przykłady szczepów produkujących aminokwas, które posiadaj ąwzmożoną zdolność do wytwarzania takich substratów, powodującąpolepszenie produktywności aminokwasu.
Syntaza fosfoenolopirogronianowa (PPS) występuje powszechnie wśród mikroorganizmów. Enzym ten gra ważną rolę w wytwarzaniu PEP z kwasu pirogronowego w przemianach glikoneogenazy. Escherichia coli należąca do rodzaju Escherichia została wykorzystana do klonowania genu (pps) kodującego PPS, określenia substancji nukleotydowej genu i analizy funkcjonalnej tego enzymu. Ponadto donoszono, że DAHP wytwarzanyjest z wydajnością zbliżoną do teoretycznej, poprzez jednoczesną amplifikację genu pps i genu transketorazy w szczepie z brakiem syntazy dehydrochinonowej (Pątnik R i wsp. Appl. Environ. Microbiol. 60 (11),
183 472
3903-3908,1994). Niejestjednak znany przypadek zwiększenia produktywności aminokwasów aromatycznych i innych aminokwasów poprzez amplifikację genu pps.
Celem wynalazku jest dostarczenie niedrogiego i wydajnego sposobu wytwarzania różnych aminokwasów reprezentowanych przez aminokwasy aromatyczne.
Wynalazcy odkryli, iż produktywność L-aminokwasów można polepszyć wzmagając wytwarzanie fosfoenolopirogronianu w komórkach mikroorganizmów wykazujących zdolność do wytwarzania L-aminokwasów. Obserwacja ta stanowi podstawę wynalazku.
Wynalazek polega na podaniu sposobu wytwarzania L-aminokwasu obejmujący etapy hodowania w pożywce mikroorganizmu wykazującego zdolność do wytwarzania L-aminokwasu, wytwarzania i gromadzenia L-aminokwasu w pożywce i zbierania L-aminokwasu, przy czym:
zdolność mikroorganizmu do wytwarzania fosfoenolopirogronianu została wzmożona.
L-aminokwas jest korzystnie wytwarzany sposobem podanym powyżej, obejmuje L-tryptofan, L-fenyloalaninę, L-tyrozynę, L-treoninę i L-izoleucynę.
Mikroorganizm wykazujący zdolność do wytwarzania L-aminokwasu to przykładowo bakteria należąca do rodzaju Escherichia i bakteria maczugowata (korynebakteria). Bakteria maczugowata oznacza tu bakterię sklasyfikowaną jako należącą do rodzaju Brevbacterium, wprowadzona obecnie do rodzaju Corynebacterium (Int J Syst Bacteriol 41,255,1991). Ponadto, bakteria maczugowata obejmuje tu bakterię należącą do rodzaju Brevibacterium, bardzo blisko spokrewnionego z rodzajem Corynebacterium..
Sposób wzmocnienia wytwarzania fosfoenolopirogroniau przez mikroorganizm polega na przykład na wzmocnieniu aktywności PPS w komórkach mikroorganizmu. Sposoby wzmocnienia aktywności PPS w komórkach mikroorganizmu obejmują na przykład sposób zwiększenia ekspresji genu pps w komórkach mikroorganizmu, jak również sposób polegający na wprowadzeniu do komórek genu kodującego pps o wysokiej aktywności specyficznej.
Dokładniej, sposób zwiększania ekspresji genu pps w komórkach mikroorganizmu obejmuje na przykład sposób polegający na zwiększeniu ilości kopii genu pps w komórkach mikroorganizmu, jak również sposób wzmagający aktywność transkrypcyjną promotora genu pps.
Wynalazek zostaje przedstawiony dokładniej poniżej.
Mikroorganizm korzystny według wynalazku nie jest specjalnie określony i obejmuje na przykład mikroorganizmy należące do rodzajów Escherichia, Brevibacterium, Corynebacterium, Bacillus, Serratia i Pseudomonas, zakładając iż dla tych bakterii można otrzymać fragment DNA obejmujący plazmidowe miejsce startu replikacji, iż gen pps działa w mikroorganizmie i, że mikroorganizm wykazuje zdolność do wytwarzania L-aminokwasu (na przykład w przypadku L-fenyloalaniny, szczepy nabywające zdolność do wytwarzania L-fenyloalaniny, poprzez nadanie, na przykład, oporności na analog L-fenyloalaniny). Korzystnie są to bakterie należące do rodzaju Escherichia i bakteria maczugowata.
Dokładniej, korzystnie używanymi do wytwarzania L-tryptofanu są na przykład: Escherichia coli AGX17 (pGX44) [NRRL B-12263] i AGX 9pGX50)aroP [NRRL B-12264] (Patent USA Nr 4 371 614) iBrevibacterium flavum AJ11667 (Japońska Publikacja Patentowa Nr 57-174096;
korzystnie używanymi do wytwarzania L-fenyloalaniny są na przykład Escherichia coli AJ126404 (FERM BP-3579) (Europejska Publikacja Patentowa Nr 488 424) i Brevibacterium lactofermentum AJ12637 (FERM BP-4160) (Francuska Publikacja Patentowa Nr 2 686 898);
korzystnie używanymi do wytwarzania L-tyrozyny sąna przykład Corynebacterium glutamicum AJ11655 (FERM P-5836) (Japońska Publikacja Patentowa Nr 2-6517) i Brevibacterium lactofermentum AJ12081 (FErM P-70093) (Japońska Publikacja Patentowa);
korzystnie używanymi do wytwarzania L-treoniny sąna przykład Escherichia coli VKPM B-3996 (RIA a867) (Patent USA Nr 5 175 107) i Corynebacterium acetoacidophilum AJ12318 (FERM BP-1172) (Patent USA Nr 5 188 949);
korzystnie używanymi do wytwarzania L-izoleucyny są na przykład Escherichia coli KX141 (VKPMB-4781) (Europejska Publikacja Patentowa Nr 51S9113) i Brevbacteriumflavum AJ12149 (FERM BP-759) (Patent USA Nr 4 656 135).
183 472
Sposób wzmagania produktywności PEP mikroorganizmówjak to przedstawiono powyżej obejmuje wzmacnianie aktywności PPS w komórkach mikroorganizmu.
Sposób wzmacniania aktywności PPS obejmuje zwiększenie ekspresji genu pps w komórkach mikroorganizmu. Jednym ze sposobów zwiększenia aktywności PPS jest takie zmodyfikowanie genu pps, że powstaje enzym PPS o zwiększonej aktywności.
Sposób zwiększania ekspresji genu pps w komórkach mikroorganizmu obejmuje zwiększenie ilości kopii genu pps w komórkach mikroorganizmu. W celu zwiększenia ilości liczby kopii genu pps konieczne jest otrzymanie fragmentu DNA obejmującego ten sam gen. Gen pps sklonowano w Escherichia coli, jako bakterii należącej do rodzaju Escherichia, i oznaczono jego sekwencję nukleotydową (Mol Gen Genet 231, 332,1992). Fragment DNA obejmujący wspomniany gen można uzyskać sposobem opisanym w cytowanym dokumencie. Pożądany fragment DNA można uzyskać stosując hybrydyzację z wykorzystaniem syntetycznej sondy DNA przygotowanej w oparciu o znajomość sekwencji nukleotydowej przedstawionej powyżej lub z wykorzystaniem techniki PCR z wykorzystaniem syntetycznych starterów przygotowanych w oparciu o tę samą sekwencję nukleotydową. Liczbę kopii genu pps można zwiększyć poprzez ligację fragmentu DNA obejmującego gen pps z wektorem replikującym się autonomicznie w komórkach docelowego mikroorganizmu i wprowadzenie uzyskanego zrekombinowanego fragmentu DNA do tego samego mikroorganizmu.
Startery DNA wykorzystywane do klonowania genu pps z bakterii należącej do rodzaju Escherichia z wykorzystaniem techniki PCR można przygotować na podstawie znajomości sekwencji nukleotydowej Escherichia coli (Mol Gen Genet 231, 332,1992). Są to konkretnie dwa startery:
5' -CCCGTCGACGGATCCAGTTTCATCTCTTG-3' (Sek Id Nr 1)
5' -CCCGTCGACGATCATGCGCITATGCCGTG-3'(Sek Id 'Nr 2) pozwalające powielić region wielkości około 3.3 kpz obejmujący genpps. Startery pozwalaj ąpowielić gen pps w postaci fragmentu flankowanego z obu końców miejscami SAll. Gdy miejsca rozpoznawane przez enzym restrykcyjny wprowadzone są na oba końce amplikonu, powielany fragment DNA można w standardowy sposób klonować z wykorzystaniem właściwego enzymu restrykcyjnego, a wspomniany fragment DNA można łatwo przenosić do innego wektora. Startery DNA można zsyntetyzować na przykład wykorzystując syntetyzer DNA 3 80B (Applied Biosystems)metodąfosforoMmdynową(TetraheSIonLett22,1859,1981). Reakcję PCR można prowadzić na przykład w termocyklerze PJ2000 Takara Shuzo z wykorzystaniem polimerazy Taq zgodnie z zaleceniami producenta.
Fragment DNA obejmujący gen pps można uzyskać również z mikroorganizmów innych niż bakteria należąca do rodzaju Escherichia. Sposób otrzymywania fragmentu obejmuje hybrydyzację opartą o wykorzystanie syntetycznej sondy DNA, przygotowanej woparciu o znajomość sekwencji nukleotydowej ujawnionej w podanych wyżej publikacjach (Mol Gen Genet 231,332, 192) lub użycie techniki PCR z wykorzystaniem syntetycznych starterów DNA, przygotowanych w oparciu o tę samą sekwencję nukleotydową. Sonda DNA wykorzystana do hybrydyzacji może zostać również odpowiednio przygotowana na podstawie znanych sekwencji w taki sam sposób jak startery DNA wykorzystywane we wspomnianej technice PCR. Zakłada się, że sekwencja nukleotydową genu różni się dla konkretnych mikroorganizmów. Korzystne jest zatem przygotowanie syntetycznego DNA parującego z sekwencją kodującą część konserwowaną ewolucyjnie białka PPS u każdego z wymienionych mikroorganizmów.
Gdy gen pps powielony sposobem wykorzystującym technikę PCR zostanie wprowadzony do bakterii należącej do rodzaju Escherichia, zostaje następnie zligowany z DNA wektora replikującego się automatycznie w komórkach bakterii należącej do rodzaju Escherichia, i otrzymany zrekombinowany DNA wprowadzany jest do komórek bakterii należącej do rodzaju Escherichia.
Gdy uzyskany fragment DNA obejmujący gen pps wprowadzany jest do mikroorganizmu innego niż bakteria należąca do rodzaju Escherichia, fragment DNA ligowany jest z DNA wektora zdolnego do autonomicznej replikacji w komórkach mikroorganizmu do którego wpro6
183 472 wadzany jest wspomniany fragment DNA, i uzyskany taki fragment DNA wprowadzany jest do wspomnianych komórek.
Według wynalazku korzystnym wektorowym DNA jest DNA plazmidowy. Gdy mikroorganizmem, do którego wprowadzany jest gen jest bakterią Escherichia coli, użyteczne plazmidy obejmują na przykład: pTWV228, pUC19, pUC18, pBR322, pHSG299, pHSG399 i RSF1010. Ponadto można wykorzystać wektory zbudowane z fagowego DNA. W celu uzyskania wydajnej ekspresji PPS korzystne jest użycie promotora działającego w mikroorganizmie, takiego jak lac, trp czy PL. W celu zwiększenia ilości kopii genu pps, korzystne jest wprowadzenie DNA obejmującego gen pps do chromosomu bakteryjnego, zgodnie ze sposobem wykorzystującym transpozon (Berg DE i Berg CM BioTechnol 1, 417, 1983), fag Mu (Japońska Publikacja Patentowa NR 2-109985) lub zjawisko rekombinacji homologicznej (Experiments in Molecular Genetics, CSH Lab, 1972).
Jeżeli mikroorganizmem, do którego wprowadzany jest gen to bakteria maczugo wata, wektorowym DNA według wynalazku może być wektorowy DNA obejmujący na przykład wektory plazmidowe replikujące się autonomicznie w bakterii maczugowatej, takie jak pAM330 (Japońska Publikacja Patentowa Nr 1-11280) i pHM1519 (Japońska Publikacja Patentowa Nr 58-77895).
Bakterię Escherichia coli można transformować zrekombinowanym wektorem uzyskanym przez wprowadzenie sekwencji DNA według wynalazku do wektora przedstawionego powyżej stosując na przykład sposób wykorzystywany zazwyczaj do transformacji Escherichia coli, taki jak zwiększanie przenikalności DNA w wyniku traktowania komórek chlorkiem wapniowym (Mandel M i Higa A J Mol Biol 53, 159, 1977).
Sposób transformowania bakterii należących do rodzaju Bacillus obejmuje sposób wprowadzania DNA podczas określonego etapu cyklu wzrostu bakterii, podczas którego komórki zdolne sądo przyjęcia obcego DNA (doniesienie o Bacillus subtilis nadesłane przez: Duncan CR i wsp). Ponadto DNA można wprowadzić do komórek bakterii tworząc sferoplasty lub protoplasty zdolne do łatwiejszego przyjmowania plazmidowego DNA. Sposoby te znane są dla Bacillus subtilis, Actinomycetes i dla drożdży (Chang S i wsp Mol Gen Genet 168,111,1979; Bibb i wsp Nature 274, 398, 1978; Hinnen A i wsp Proc Natl Acad Sci USA 75, 1929, 1978).
Równie efektywny dla szerokiego zakresu bakterii jest sposób elektroporacyjny, polegający na wprowadzaniu DNA przez pory w ścianie komórkowej, tworzone w wyniku działania pulsów prądu elektrycznego o wysokim napięciu (Hanahan D i wsp Plasmid Transformation of Escherichia coli and other bacteria, Meth Enzymol 204,63,1991). Ponadto sposób transformacji bakterii maczugowatej oparty na elektroporacji został przedstawiony w Japońskiej Publikacji Patentowej Nr 2-207791.
W celu wybrania wektora do wprowadzenia genu pps spośród wektorów zdolnych do wprowadzenia genu pps można przeprowadzić na przykład test komplementacji z wykorzystaniem szczepu pozbawionego PPS. Szczep PPS nie rośnie na pożywce minimalnej zawierającej kwas pirogronowy jako jedyne źródło węgla. Łatwo zatem wyselekcjonować transformanty zdolne do wzrostu na takim podłożu. Szczepy Escherichia coli pozbawione aktywności PPS obejmująszczep AT2572-1 (JBacteriol 96,2185,19868). Szczep AT2572-1 można uzyskać z E. coli Genetic Stock Center (yale Univeristy, Dept Biology, Osborn Memorial Labs, 06511 -7444 New Haven, CO, USA PO BOX 6666; Szczep Nr CGSC5242).
W celu wyselekcjonowania szczepu, w którym aktywność PPS zostanie wzmocniona, z możliwych szczepów zdolnych do zwiększenia aktywności PPS można na przykład zastosować sposób, w którym wzrost aktywności enzymatycznej PPS potwierdzany jest znanymi metodami (Cooper RA i Komberg HL Meth Enzymol 13, 309, 1969).
Mikroorganizm korzystny według wynalazku obejmuje mikrorganizm uzyskany poprzez wzmocnienie zdolności do wytwarzania PEP pochodzący z mikroorganizmu posiadającego uprzednią zdolność do wytwarzania L-aminokwasu i mikroorganizmu uzyskanego przez nadanie zdolności do produkcji L-aminokwasu już po wzmocnieniu zdolności do wytwarzania PEP. Ponadto nawet w przypadku mikroorganizmu posiadającego uprzednią zdolność do wytwarza183 472 nia L-aminokwasu, zdolność do wytwarzania L-aminokwasu można ulepszyć w pewnych przypadkach przez wzmocnienie genu kodującego enzym istotny w szlaku biosyntezy odpowiedniego aminokwasu lub poprzez wprowadzenie operonu lub genu kodującego wariant enzymu z obniżoną zdolnością do hamowania zwrotnego (odpowiedni enzym wyjściowy ulega hamowaniu zwrotnemu).
Wspomniany gen lub operon może być:
- specyficznym dla L-fenyloalaniny i L-tyrozyny, obejmującej na przykład gen kodujący dehydratazę choryzmianową- mutazę prefenianową(CM-PDT) o obniżonej zdolności do hamowania zwrotnego (Japońska Publikacja Patentowa Nr 5-236947 i 62-130693) i gen kodujący DS (syntazę 3-deoksy-D-arabino-hepturaniono-7-fosforanową) o obniżonej zdolności do hamowania zwrotnego (Japońska Publikacja Patentowa Nr 5-236947 i 61-124375);
- specyficzny dla L-tryptofanu, obejmujący na przykład gen kodujący syntazę antranilianową o obniżonej zdolności do hamowania (Japońska Publikacja Patentowa Nr 57-71397 i 62-244381 oraz Patent USA Nr 4 371 614);
- specyficzny dla L-treoniny, obejmujący na przykład operon treoninowy z genem kodującym aspartokinazę o obniżonej zdolności do hamowania (Japońska Publikacja Patentowa nr 1-29559), gen kodujący dehydrogenazę homoserynową (Japońska Publikacja Patentowa Nr 60-0120995), i gen kodujący kinazę homoserynową i dehydrogenazę homoserynową (Japońska Publikacja Patentowa Nr 61-195695); i
- specyficzny dla L-izoleucyny obejmujący na przykład wspomniany wyżej operon treoninowy i gen kodujący deaminazę treoninowąo obniżonej zdolności do hamowania zwrotnego (Japońska Publikacja Patentowa Nr 2-458).
Oczekuje się, że produktywność aminokwasów aromatycznych (L-fenloalaniny, L-tryptofanu i L-tyrozyny) można nadal polepszyć poprzez wzmocnienie w komórkach oprócz PPS również produktywności transketorazy (TK). Sposób wzmocnienia produktywności TK w mikroorganizmie obejmuje wzmocnienie aktywności TK w komórkach mikroorganizmu. Sposób zwiększania aktywności TK obejmuje zwiększenie ekspresji genu kodującego transketorazę (tkt) w komórkach mikroorganizmu. Jednym ze sposobów wzmocnienia aktywności TK jest modyfikacja genu tlt w celu otrzymania białka TK o zwiększonej aktywności.
Sposób zwiększenia ekspresji genu tkt w komórkach mikroorganizmu obejmuje zwiększenie ilości kopii genu tkt w komórkach mikroorganizmu. W celu zwiększenia ilości kopii genu tkt konieczne jest otrzymanie fragmentu DNA obejmującego wspomniany gen. Gen tkt sklonowano w bakterii Escherichia coli, jako bakterii należącej do rodzaju Escherichia, i oznaczono jego sekwencję nukleotydową (Biochem Bioph Acta 1216, 307,1993). Fragment DNA obejmujący wspomniany gen można uzyskać sposobem opisanym w cytowanym dokumencie. Pożądany fragment DNA można uzyskać stosując hybrydyzację z wykorzystaniem syntetycznej sondy DNA przygotowanej w oparciu o znajomość sekwencji nukleotydowej przedstawionej powyżej lub z wykorzystaniem techniki PCR z wykorzystaniem syntetycznych starterów przygotowanych w oparciu o tę samą sekwencję nukleotydową. Liczbę kopii genu tkt można zwiększyć poprzez ligację fragmentu DNA obejmującego gen tkt z wektorem replikującym się automatycznie w komórkach docelowego mikroorganizmu i wprowadzenie uzyskanego zrekombinowanego fragmentu DNA do tego samego mikroorganizmu.
Startery DNA wykorzystywane do wyklonowania genu tkt z bakterii należącej do rodzaju Escherichia z wykorzystaniem techniki PCR można przygotować na podstawie znanej sekwencji nukleotydowej Escherichia coli (Biochem Bioph Acta 1216,307,1993). Sąto konkretnie dwa startery:
- AGAGGATCCAGAGATTTCTGAAGC-3' (Sek Id Nr 3)
5' - TCTGGATCCGCAAACGGACATTATCA-3' (Sek Id Nr 4) pozwalające powielić region wielkości około 2.2 kpz obejmujący gen tkt. Startery pozwalają powielić generał tkt w postaci fragmentu flankowanego z obu końców miejscami BamHI. Gdy miejsca rozpoznawane przez enzym restrykcyjny wprowadzone są na oba końce amplikonu, powielony fragment DNA można w standardowy sposób klonować z wykorzystaniem właściwego
183 472 enzymu restrykcyjnego, a wspomniany fragment DNA można łatwo przenosić do innego wektora. Startery DNA można zsyntetyzować na przykład wykorzystując syntetyzer DNA 380B (Applied Biosystems) metodą fosforoamidynową (Tetrahedron Lett 22, 1859, 1981). Reakcję PCR można prowadzić na przykład w termocyklerze PJ2000 Takara Shuzo z wykorzystaniem polimerazy Taq zgodnie z zaleceniami producenta.
Fragment DNA obejmujący gen tkt można uzyskać również z mikroorganizmów innych niż bakteria należąca do rodzaju Escherichia. Sposób otrzymywania fragmentu obejmuje hybrydyzacje opartąo wykorzystanie syntetycznej sondy DNA, przygotowanej w oparciu o znajomość sekwencji nukleotydowej ujawnionej w podanych wyżej publikacjach (Biochem Bioph Acta 1216, 367, 1993) lub użycie techniki PCR z wykorzystaniem syntetycznych starterów DNA, przygotowanych w oparciu o tę samą sekwencję nukleotydową. Sonda DNA wykorzystana do hybrydyzacj i może zostać również odpowiednio przygotowana na podstawie znanych sekwencji w taki sam sposób jak startery DNA wykorzystywane we wspomnianej technice PCR. Zakłada się, że sekwencja nukleotydową genu różni się dla konkretnych mikroorganizmów Korzystne jest zatem przygotowanie syntetycznego DNA parującego z sekwencją kodującą część konserwowaną ewolucyjnie białka TK u każdego z wymienionych mikroorganizmów.
Gdy geny wymienione powyżej wprowadzane są do mikroorganizmu, każdy z wymienionych genów może występować w chromosomie gospodarza lub występować w postaci osobnego plazmidu, w taki sam sposób jak genpps. Wymienione geny mogą również występować w różnych plazmidach.
Pożądany aminokwas można uzyskać hodując mikroorganizm stransformowany zrekombinowanym DNA zawierającym gen pps uzyskany zgodnie ze sposobem podanym powyżej, wytwarzając i gromadząc pożądany aminokwas w pożywce hodowlanej i zbierając pożądany aminokwas.
Pożywka używana do hodowli jest zwykłą pożywką zawierającą źródło węgla, źródło azotu, jony nieorganiczne i możliwe inne związki organiczne.
Źródła węgla obejmuj ą na przykład cukry, takie j ak glukoza, laktoza, galaktoza, fruktoza, sacharoza i hydrolizat skrobiowy; alkohole takie jak glicerol i sorbitol i kwasy organiczne takie jak kwas fumarowy, kwas cytrynowy i kwas bursztynowy.
Źródła azotu obejmują na przykład nieorganiczne sole amonowe, takie jak siarczan amonowy, chlorek amonowy i fosforan amonowy; organiczne źródło azotu, takie jak hydrolizator sojowy; amoniak gazowy i roztwór wodny amoniaku.
Korzystne jest użycie śladowych odżywczych substancji organicznych, takich jak witamina B1 i B6, jak również ekstraktu drożdżowego lub substancji podobnych w odpowiednich ilościach.
Ponadto można dodać na przykład niewielkie ilości fosforanu potasowego, siarczanu magnezowego, jonów żelazowych i manganowych.
Hodowlę można prowadzić w warunkach odpowiednich dla hodowanego mikroorganizmu. Dokładniej hodowle prowadzić można korzystnie w warunkach tlenowych przez od 16 do 72 godzin. Temperatura hodowli powinna wynosić od 30 do 45 °C i pH od 5 do 7 w czasie hodowli pH można ustalać przy pomocy na przykład nieorganicznych lub organicznych kwasów lub zasad, jak również amoniakiem.
L-aminokwas można zbierać z pożywki fermentacyjnej połączeniem znanych sposobów, takich jak chromatografia jonowymienna, wytrącanie i podobne sposoby.
Figura 1 przedstawia sposób konstruowania plazmidu pHSGSK.
Figura 2 przedstawia sposób konstruowania plazmidu pdGM1.
Figura 3 przedstawia sposób konstruowania plazmidu pMWGMA2.
Figura 4 przedstawia sposób konstruowania plazmidu pMWD5.
Wynalazek zostanie przedstawiony dokładnie poniżej na przykładach.
Przykład 1: Otrzymanie genu pps z Escherichia coli
DNA chromosomalny ekstrahowano ze szczepu W3110 pochodzącego ze szczepu Escherichia coli K-12 metodą Saito i Mitury (Biochem Bioph Act, 72,619,1963). Startery oligonukle183 472 otydowe do amplifikacji genu pps z chromosomalnego DNA technikąPCR przygotowano w oparciu o znaną sekwencję nukleotydową genu pps (Mol Gen Genet 231, 332, 1992).
5' -CCCGTCGACGGATCCAGTTTCATCTCTTG-3' (Sek Id Nr 1)
5' -CCCGTCGACGATCATGCGCTTATGTCGTG-3' (Sek Id Nr 2)
Startery te posiadają sekwencję homologiczną lub komplementarną, do sekwencji położonych po obu stronach genu pps i zawieraj ą sekwencję rozpoznawanąprzez enzym Sali, co umożliwia późniejsze klonowanie amplikonu.
Reakcję PCR prowadzono z wykorzystaniem chromosomalnego DNA i starterów podanych powyżej, technikąPCR wg. Ericha (PCR Technology Stockton Press 1989). Warunki reakcji obejmowały denaturację w 93 °C przez 1 minutę, przyłączanie w 55°C przez 1,5 minuty oraz wydłużanie w 72°C przez 3 minuty; reakcję powtarzano 30 razy.
Otrzymany w reakcji PCR fragment DNA o wielkości około 3.3 kpz trawiono enzymem restrykcyjnym Sali, a następnie ligowano do miejsca Sali wektora plazmidowego pTWV228 (nadającego oporność na ampicilinę, Ap1) (Takara Shuzo) w reakcji z ligaząDNA. Szczep AT2572-1 Escherichia coli pozbawiony aktywności PPS (J. Bacteriol 96,2185,1968), uzyskany z Genetic Stock Center (adres podano wyżej) transformowano mieszaniną ligacyjną. Transformanty wysiewano na selekcyjnych płytkach z ampiciliną w celu oddzielenia szczepu zdolnego do wzrostu na podłożu minimalnym z ampicyllną, wykorzystującego pirogronian jako źródło węgla. Plazmidowy DNA ekstrahowano z uzyskanego szczepu, a otrzymany plazmid nazwano pTWV-pps.
Dla uzyskanej tak wstawki DNA z plazmidu pTWV-pps sporządzono mapę restrykcyjną i określano aktywność PPS w uzyskanych transformantach. Analiza ta potwierdziła, iż sklonowany fragment DNA zawierał gen pps.
Przykład 2: Wytwarzanie L-fenyloalaniny < 1> Utworzenie bakterii produkującej L-fenyloalaninę
Fragment DNA obejmujący gen kodujący dehydratazę choryzmianową- mutazę prefenianową(CM-PDT) o obniżonej zdolności do hamowania zwrotnego systemu biosyntezy L-fenyloalaniny wstawiono pomiędzy miejsca BamHI, Hndlll wektora plazmidowego pACY C184 (Cmr) uzyskując plazmid pACMAB (nadający oporność na chloramfenikol, Cmr) patrz: Japońska Publikacja Patentowa Nr 5-236947, który następnie strawiono Sali. Uzyskany tak fragment zligowano z genem pps wyciętym z plazmidu pTWV-pps enzymem Sali otrzymując plazmid pACMAB-pps ( o wielkości 8.9 kpz).
Fragment DNA zawierający gen (aroG) kodujący syntazę 3-deoksy-D-arabino-hepturoniano-7-fosforanową(DS) o zmniejszonej zdolności hamowania zwrotnego, wstawiono pomiędzy miejsca EcoRI i Hindlll wektora plazmidowego pBR322, uzyskując plazmid pBR-aroG4 (Ap\ Japońska Publikacja Patentowa), którym następnie stransformowano szczep Escherichia coli W3110 (tyrA). Plazmid pACMAB-pps wprowadzono do uzyskanego transformanta w celu wyselekcjonowania transformanta ampicilino- i kanamycynoopornego (szczep W3110 (tyrA)/pACMAB-pps, pBR-aroG4).
Szczep pozbawiony tyrA W3110 (tyrA) (oznaczony jako AJ12604) Escherichia coli stransformowany pBR-aroG4 i pACMAB-pps przekazano 28.01.1991 do National Bioscience and Humań Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministerstwa Przemysłu i Handlu (302, l-3 Higashi 1-Chomę, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japonia) i oznaczono numerem FERM P-11975, i przekazano do depozytu międzynarodowego 26.08.1991 zgodnie z Układem Budapesztańskim (numer FERM BP-3579). Plazmidy pBRaroG4 i pACMAB można wyizolować z wspomnianego szczepu standardowymi sposobami.
<2> Ocena produktywności L-fenyloalaniny
Szczep Escherichia coli W3110 (tyrA)/pACMAB-pps, pBR-aroG4 uzyskany jak podano wyżej hodowano w temperaturze 37°C przez 40 godzin w pożywce używanej przy produkcji L-fenyloalaniny (pożywka zawiera 20g glukozy, 29.4g wodoro fosforanu disodowego, 6g diwodoro fosforanu potasowego, 1g chlorku sodowego, 2g chlorku amonowego, 10 g cytrynianu sodowego, 0.4g glutaminu sodowego, 3g sześciowodnego siarczanu magnezowego, 0,23g chlorku wapniowego, 2 mg chlorowodorku tiaminy i 100 mg L-tyrozyny w 1 litrze wody, pH = 7.0).
183 472
Szczep W3110 (tyrA)/pACMAB, pBR-aroG4 hodowanojako kontrolę w taki sam sposóbjak podano wyżej. Zawartąw pożywce L-fenyloalaninę oznaczano ilościowo wysokowydajnąchromatografią cieczową.
Wyniki zestawiono w tabeli 1.
Tabela 1
| Szczep bakterii | Ilość wytworzonej L-fenyloalaniny (g/L) |
| W3110 (tyrA)/pACMAB, pBR-aroG4 | 3,8 |
| W3110 (tyrA)/pACMAB-pps, pBR-aroG4 | 4,1 |
Przykład 3: Wytwarzanie L-tryptofanu < 1> Utworzenie bakterii wytwarzającej L-tryptofan
Fragment DNA zawierający gen kodujący DS o zmniejszonej zdolności do hamowania zwrotnego (aroG4) i gen oporności na kanamycynę wstawiono do plazmidu pACYC177E uzyskanego przez modyfikację miejsca XhoI plazmidu pACY C177 w miejsce EcoRI, uzyskując plazmid pACKG4 (nadający oporność na ampicilinę i kanamycynę (Ap( Km) o wielkości 6.4 kpz Patrz: Japońska Publikacja Patentowa Nr 5-236947, który strawiono częściowo Hindlll i uzupełniono działając fragmentem Klenowa polimerazy DNA do postaci z tępymi końcami. Fragment Sali wielkości 3.3 kpz obejmujący gen pps uzyskany, jak podano to w przykładzie 1 doprowadzono do postaci z tępymi końcami w ten sam sposób i zligowano z fragmentem pACKG4 opisanym powyżej. Szczep Escherichia coli pozbawiony aktywności PPS stransformowano następnie mieszaniną ligacyjną i wyselekcjonowano transformanty Apr, Kmr i pps Zrekombinowany plazmid izolowano z transformanta i oznaczono jako pACKG4-pps (9.4 kpz).
Plazmid pGX44 wydeletowano ze szczepu Escherichia coli AGX17 (PGX44) charakteryzującego się auksotrofią względem L-fenyloalaniny i L-tyrizyny (szczep gospodarza AGX 17jest auksotrofem względem L-fenyloalaniny, L-tyrozyny i L-tryptofanu) w celu uzyskania AGX 17. pGX 50 wyodrębniono z szczepu Escherichia coli K-12 AGX6 (pGX50) (aroP) niosącego plazmid pGX50 (Apr) zawierającego operon tryptofanowy (opisany w Patencie USA Nr4 371 614i przekazanym 31.01.1981 pod numerem NRRL B -12264 do Agricultural Research Service Culture Collection (NRRL) (1815 North University Str, Peoria IL 61604, USA) i wprowadzono do szczepu AGX17 selekcjonując transformanty oporne na ampicylinę oraz Trp+. pACKG-pps wprowadzono następnie do transformanta w celu wyselekcjonowania transformanta Apr, Kmr Uzyskanego transformanta oznaczono jako AGX17/pGX50, pACKG4-pps.
pGX50 i pACKG4 wprowadzono również do AGX17 selekcjonując transformanty Apr Trp+- i Kmr j otrzymując w ten sposób szczep AGX17/pGX50, pACKG4.
<2> Ocena produktywności L-tryptofanu
Szczep AGX17/pGX50, pACKG4-pps hodowano w temperaturze 31 °C przez 48 godzin w pożywce używanej przy produkcji L-tryptofanu (pożywka zawiera 40g glukozy, 16g siarczanu amonowego, 1g fosforanu potasowego, 3g sześciowodnego siarczanu magnezowego, 0.01g czterowodnego chlorku manganowego, 2g ekstraktu drożdżowego, 40g węglanu wapniowego, 100 mg L-fenyloalaniny i 100 mg L-tyrozyny w 1 litrze wody, pH = 7.0). Szczep AGX17/pGX50, pAGKG4 hodowano jako kontrolę w taki sam sposób jak podano wyżej. Zawarty w pożywce L-tryptofan oznaczano ilościowo wysokowydajną chromatografię cieczową.
Wyniki zestawiono w tabeli 2.
Tabela 2
| Szczep bakterii | Ilość wytworzonego L-tryptofanu (g/L) |
| AGX17/pGX50, pACKG4 | 2,1 |
| AGX17/pGX50, pACKG4-pps | 2,5 |
183 472
Przykład 4: Wytwarzanie L-treoniny < 1> Utworzenie bakterii wytwarzającej L-treoninę
Plazmid pTWV-pps otrzymany jak podano w przykładzie 1 wprowadzono do bakterii wytwarzającej L-treoninę, szczep Escherichia coli VKPM B-3996 (Patent USA Nr 5 175 107, przekazany 19.11.1987 do All-Union Scientific Center of Antibiothics (VNIIA) pod numerem RIA 1867 (Nagatinskaya Str 3a, 113105 Moskow, RF). Transformanta wyselekcjonowano na podstawie cechy Smr i Apr uzyskując szczep B-3996/pTWV-pps. Szczep VKPM B-3996 niosący plazmid pVKC40 (nadający oporność na streptomycynę, Sm1) zawiera operon treoninowy obejmujący gen kodując aspartokinazę o zmniejszonej zdolności do hamowania zwrotnego przez L-treoninę.
<2 > Ocena produktywności L-treoniny
Szczepy B-3996 i B-3996/pTWV-pps hodowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny w pożywce używanej przy produkcji L-treoniny (pożywka zawiera 40g glukozy, 16g siarczanu amonowego, 1g fosforanu potasowego, 3g sześciowodnego siarczanu magnezowego, 0,01g czterowodnego chlorku manganowego, 2g ekstraktu drożdżowego, 40g węglanu wapniowego w 1 litrze wody, pH = 7.0). Zawartąw pożywce L-treoninę oznaczano ilościowo wysokowydajną chromatografią cieczową. Wyniki zestawiono w tabeli 3.
Tabela 3
| Szczep bakterii | Ilość wytworzonej L-treoniny (g/L) |
| B-3996 | 14,5 |
| B-3996/pTWV-pps | 15,5 |
Przykład 5: Wytwarzanie L-izoleucyny < 1> Utworzenie bakterii wytwarzającej L-izoleucynę (1) Konstruowanie plazmidu obejmującego operon treoninowy i gen pps
Plazmid pVIC40 obejmujący operon treoninowy niosący gen kodujący aspartokinazę o zmniejszonej zdolności do hamowania zwrotnego przez L-treoninę (Patent USA Nr 5 175 107) strawiono enzymem BamHI, a uzyskany fragment uzupełniono działając fragmentem klenowa polimerazy DNA do postaci z tępymi końcami. Jednocześnie fragment Sali o wielkości 3.3 kpz obejmujący gen pps uzyskany jak podano w przykładzie 1 uzupełniono do tępych końców w ten sam sposób i zligowano z fragmentem pVIC40 opisanym powyżej. Mieszaninę ligacyjnąużyto do transformacji szczepu Escherichia coli pozbawionego aktywności PPS i selekcjonowano transformanta wykazującego cechy Smr i pps+. Zrekombinowany plazmid wyizolowano z uzyskanego transformanta i oznaczono symbolem pVIC40-pps (plazmid o wielkości 17.9 kpz).
(2) Konstruowanie plaznidu zawierającego operon ilvGMEDA
Chromosomalny DNA wyizolowano ze szczepu MI161 Escherichia coli. Chromosomalny DNA strawiono enzymem HindIII. Jak wiadomo fragment HindIII-HindIII o wielkości 4.8 kpz obejmuje gen ilvGM. W związku z tym fragment HindIII-HindIII o wielkości około 4.8 kpz zligowano z fragmentem DNA uzyskanym przez strawienie enzymem HindIII wektora pBR322 (Takara Shuzo).
Mieszaniną ligacyjną stransformowano szczep Escherichia coli MI262 (CGSC5769) pozbawiony aktywności syntazy acetohydroksykwasowej. Następnie wyselekcjonowano szczep transformanta, z uzupełnioną cechą aktywności acetohydroksykwasowej. Ze szczepu tego wyizolowano plazmid. Analiza restrykcyjna wykazała, że plazmid ten niesie fragment DNA o wielkości 4.8 kpz zawierający gen ilvGM i część 5' końcowągenu ilvE, wstawiony w miejsce HindIII plazmidu pBR322. Plazmid oznaczono symbolem pBRGM7.
Otrzymano syntetyczne oligonukleotydy (Sek Id Nr 6 i 7 w zestawieniu sekwencji) w oparciu o znajomość sekwencji genu ilvGM podana w: Gene 97,21 (1991); Proc Natl Acad Sci USA 78, 922 (1981) oraz J Bacteriol 149. 294 (1982). Sek Id Nr 5 przedstawia sekwencję promotora, atenuatora i regionu kodującego genu ilvGM oraz sekwencję aminokwasową określaną przez
183 472 region kodujący genu. Oba oligonukleotydy używano jako startery do powielania DNA techniką PCR z chromosomalnego DNA szczepu Ml 162. Zamplifikowany fragment DNA jest fragmentem DNA o sekwencji od 25 do 952 nukleotydu Sek Id N 5 w zestawieniu sekwencji. Fragment ten określono jako „fragment (A)”.
Syntetyczne oligonukleotydy o sekwencj i podanej Sek Id Nr 8 i 9 w zestawieniu sekwencj i otrzymano w oparciu o znajomość sekwencji podanej w: Gene 97,21 (1991); Proc Natl Acad Sci USA 78,922 (1981) oraz JBacteriol 149,294 (1982). Oba oligonukleotydy używanojako startery do powielania DNA technikąPCR z chromosomalnego DNA szczepu MI 162. Zamplifikowany fragment DNA j est fragmentem DNA o sekwencji od 1161 do 2421 nukleotydu Sek Id N 5 w zestawieniu sekwencji. Fragment ten określono jako „fragment (B)”.
Duży fragment uzyskany przez trawienie fragmentu (A) enzymem SmaI zligowano z fragmentem DNA uzyskanym przez trawienie wektora pUCl 8 (Takara Shuzo) enzymem SmaI w celu uzyskania plamidu pUAC. Duży fragment uzyskany przez trawienie fragmentu (B) enzymem KpnI zligowano z dużym fragmentem uzyskanym przez trawienie pHSG399 (Takara Shuzo) enzymami HincI i KpnI, uzyskując plazmid pHSGB.
Plazmid pUCA strawiono KpnI i następnie uzupełniono fragmentem Kleno wapolimerazy I DNA do postaci z tępymi końcami, a następnie strawiono Pstl w celu ostatecznego wyizolowania fragmentu DNA obejmującego fragment (A). Plazmid pHSGB strawiono enzymem Hinlll i doprowadzono do postaci z tępymi końcami działając fragmentem Kleno wapolimerazy I DNA, a następnie strawiono PstI w celu ostatecznego wyizolowania fragmentu zawierającego fragment (B). Oba fragmenty DNA zligowano w celu uzyskania plazmidu pHSGSK.
Fragment SmaI-KpnI, przenoszony przez plazmid pHSGSK i pochodzący z fragmentów (A) i (B) oznaczono jako fragment (C). Fragment (C) odpowiadający fragmentowi HindIII-HindIII o wielkości 4.8 kpz obejmującemu gen ilvGM z miejscami SmaI i KpnI, zawierający promotor, sekwencję SD i 5' -końcowy fragment genu ilvG, lecz nie posiadający około 0.2 kpz fragmentu obejmującego sekwencję liderowąaż do sekwencji atenuatorowej. Sposób uzyskania plazmidu pHSGSK przedstawiony powyżej podsumowano na fig. 1.
Fragment (C) otrzymano trawiąc plazmid pHSGSK enzymami SmaI i KpnI. Duży fragment DNA otrzymano trawiąc plazmid pBRGM7 SmaI i KPnI. Oba fragmenty zligowano z sobą. Uzyskany plazmid oznaczono jako pdGMl. Fragment HindIII-HindIII o wielkości 4.6 kpz obejmujący gen ilvGM, naniesiony przez pdGMl, pozbawiony jest regionu niezbędnego dla atenuacji. Gen ilvGM, pozbawiony regionu niezbędnego do atenuacji oznaczony jest jako „delattGM” w przykładzie i rysunkach. Procedurę konstruowania plazmidu pdGMl opisaną powyżej streszcza fig. 2.
Plazmid pDRIA4, przedstawiony w Japońskim Opisie Patentowym Nr 2-458 jest plazmidem ulegającym autonomicznej replikacji w komórkach bakterii należącej do rodzaj u Escherichia.
Plazmid pDRIA4 przygotowano łącząc wektor przenośnikowy pDR1120 replikujący się autonomicznie w bakterii należącej do rodzaju Brevibacterium z fragmentem BamHI-BamHI obejmującym gen ilvA kodujący deaminazę treoninowąpochodzącą z Escherichia coli szczep K-12 i część 3' -końcowego fragmentu genu ilvD. Fragment BamHI-BamHI o wielkości 2.3 kpz przedstawia Japoński Opis Patentowy Nr 2-458. Obecnie wiadomo, że fragment BamHI-BamHI posiada wielkość 2.75 kpz. Plazmid pDRIA4 występuje poza chromosomalnym DNA Brevibacterium flavum AJ12358 (FERM P-9764). Plazmid pDRIA4 można uzyskać z wspomnianego szczepu sposobami standardowymi.
Fragment HindIII-BamHI obejmujący gen ilvA kodujący deaminazę treoninowąpozbawioną zasadniczo zdolności do hamowania zwrotnego L-izoleucyną, przygotowano z fragmentu BamHI-BamHI o wielkości 2.75 kpz sklonowanym w plazmidzie pDRIA4. Fragment BamHI-BamHI zligowano z fragmentem DNA uzyskanym po trawieniu wektora pMW119 (Nippon Gene) enzymem HindIII i BamHI. Tak otrzymany plazmid oznaczono jako pMWAl.
Fragment DNA uzyskany z trawienia plazmidu pMWAl enzymem HindIII zligowano z fragmentem DNA obejmującym gen ilvGM uzyskanym trawieniem HindIII z plazmidu pdGM 1. Następnie stosując analizę restrykcyj nąwybrano plazmid, w którym gen ilvGM wklonowany był
183 472 w tej samej orientacji co gen ilvA. Uzyskany w ten sposób plazmid nazwano pMWGMA2. pMWGMA2 niesie gen ilvGM pozbawiony sekwencji atenuatorowej, niesie część 5' - końcową genu ilcE oraz część 3' - końcowągeou ilvD. Sposób otrzymania plazmidu pMWGMA2 opisany powyżej streszczono na fig. 3.
DNA chromosomalny wyizolowany ze Escherichia coll MI162 strawiono Sali i P^tl otrzymując nue^ezzani^n? ffaa^a^r^me^tć^^' DNA. Jjdnoczzśine straawono weeto!- pUC 1 9 (Taaara Shuzo) enzymem Sali i Pst otrzymując fragment DNA. Mieszaninę fragmentów DNA zligowano z fragmentem DNA uzyskanym przez trawienie pUC19 otrzymując mieszaninę DNA. Mieszaninę DNA transformowano następnie szczep AB2070 pozbawiony aktywności transaminazy B (J Baztereol 109, 703, 1972) uzyskany z Ge^tic Stock Center {Escherichia coli, CGSC2070) selekcjonując następnie rzaosformanta o cesze auksotrofii względem aminokwasów rozgałęzionych. Z transformanta izolowano następnie plazmid, posiadający fragment DNA uzyskany z trawienia plazmidu pUC 19 enzymami Sali i PstI i zligowano następnie z fragmentem Sall-Pstl obejmującym gen ilvE. Plazmid ten oznaczono jako pUCEl. pUECl obejmuje fragment 3' -końcowej części genu ilvM, gen ilvE i część 5' -końcowego fragmentu genu ilvD.
Plazmid pMWGMA2 częściowo strawiono Hiodlll otrzymując mieszaninę fragmentów DNA. Jednocześnie plazmid pUCEl strawiono Hindlll otrzymując fragment Hmdni-Hiodin o wielkości 1.7 kpz obejmujący część genu ilvE i część 5' -końcowego fragmentu geou ilvD. Oba fragmenty zligowano ze sobą otrzymując mieszaninę DNA użytą następnie do transformacji szczepu AB 1280 pozbawionego aktywności dehydratazy dihydroksykwasowej (produkt genu ilvD). Następnie z uzyskanych transformantów wybrano szczep rzaosfor·maota, u którego zanikła cecha auksotrcfii względem aminokwasów rozgałęzionych. Z otrzymanego traosformanta wyizolowano plazmid posiadający fragment DNA uzyskany przez strawienie pMWGAMA2 jedynie w miejscu Hindlll położonym pomiędzy delattGM i ilvA zligowanym z fragmentem ΗϊοΙΙΙΙ-ΗΟοΙΙΠ o wielkości 1.7 kpz otrzymanym z pUCEl i obejmującym część genu ilvE i część genu ilvD, w którym został więc odtworzony operon ilvGMEDA. Otrzymany w taki sposób plazmid oznaczono jako pMWD5. Sposób otrzymania plazmidu pMWD5 przedstawiono powyżej i zilustrowano na fig. 4.
Plazmid pMWD5 (Apr) uzyskany jak podano powyżej jest oparty na wykorzystaniu jako wektora plazmidu pMW119, niosącym operon ilvGMED, z usuniętym regionem potrzebnym do atenuacji.
(3) Utworzenie bakterii wytwarzającej L-izoleucyną
Plazmid pVIC40-pps wprowadzono do Escherichia coli UNIIGenetiza TDH-6 (szczep TDH-6 odpowiada bakterii gospodarza uzyskanej przez delecję plazmidu pVIC40 ze szczepu Escherichia coli VKPM B-3996 opisanego powyżej) w celu wyselekcjonowania rraosfozmaota o cesze Smr.
Ponadto wprowadzono plazmid pMWD5 do wspomnianej bakterii w celu uzyskania traosformaota THD-6/pVIC40-pps, pMWD5 wykazującego cechę Smr i Apr. Jednocześnie pVIC40 i pMWD5 wprowadzono do szczepu TDH-6 opisanego powyżej z wykorzystaniem cech Smr i Apr, otrzymując szczep TDH-6/pVIC40, pMWD5.
<2> Ocena produktywności L-izoleucyny
Szczep TDH-67pV!C40-pps, pMWD5 hodowano w temperaturze 37°C przez 24 godziny w pożywce używanej przy produkcji L-izoleucyny (pożywka zawiera 40g glukozy, 16g siarczanu amonowego, 1g fosforanu potasowego, 3g sześzicwodnego siarczanu magnezowego, 0.01 g zzrerowodnego chlorku manganowego, 2g ekstraktu drożdżowego, 40g węglanu wapniowego w 1 litrze wody, pH = 7.0). Szczep TDH-6/pVIC40, pMWD5 hodowano jako kontrolę w ten sam sposób. Zawarta w pożywce L-izoleucyoę oznaczano ilościowo wysokowydajnązhromarografią cieczową. Wyniki zestawiono w tabeli 4.
183 472
Tabela 4
| Szczep bakterii | Ilość wytworzonej L-izoleucyny (g/L) |
| TDH-6/pVIC40, pMWD5 | 10,0 |
| TDH-6/pVIC40-pps, pMWD5 | 11,5 |
Zastosowania przemysłowe
Według wynalazku możliwe jest wytwarzanie z wysoką wydajnością różnych aminokwasów należących do grupy aminokwasów aromatycznych, szczególnie L-fenyloalaniny, L-tryptofanu, L-tyrozyny, L-treoniny i L-izoleucyny. Produktywność tych L-aminokwasów można ponadto zwiększyć przez zastosowanie wynalazku do modyfikacji mikroorganizmu posiadającego wysoką produktywność wymienionych L-aminokwasów.
Zestawienie sekwencji
Claims (6)
1. Sposób wytwarzania L-aminokwasów wybranych z grupy obejmującej: L-tryptofan, L-fenyloalaninę, L-tyrozynę, L-treoninę i L-izoleucynę w którym hoduje się w pożywce mikroorganizm posiadający zdolność wytwarzania L-aminokwasu, a następnie wydziela się L-aminokwas z pożywki, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm o wzmocnionej, przez zwiększenie ilości kopii genu syntazy fosfoenolopirogronianowej w komórce, zdolności do wytwarzania fosfoenolopirogronianu, w porównaniu do szczepu dzikiego.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm posiadający operon treoninowy z genem kodującym aspartokinazę desensytyzowany na hamowanie na zasadzie sprzężenia zwrotnego przez L-treoninę, wytwarzając L-treoninę lub L-izoleucynę.
3. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że wytwarza się L-treoninę.
4. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że hoduje się mikroorganizm posiadający również operon ilvGMEDA z genem kodującym deaminazę treonino wądesensytyzowany na hamowanie na zasadzie sprzężenia zwrotnego przez L-treoninę, wytwarzając L-izoleucynę.
5. Sposób według zastrz. 1 albo 2 albo 3 albo 4, znamienny tym, że hoduje się bakterię należącą do rodzaju Escherichia.
6. Sposób według zastrz. 1 albo 2 albo 3 albo 4, znamienny tym, że hoduje się bakterię maczugowatą.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22156195 | 1995-08-30 | ||
| JP20086096A JP4032441B2 (ja) | 1995-08-30 | 1996-07-30 | Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
| PCT/JP1996/002399 WO1997008333A1 (fr) | 1995-08-30 | 1996-08-27 | Procede de production d'acides amines levogyres |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL325155A1 PL325155A1 (en) | 1998-07-06 |
| PL183472B1 true PL183472B1 (pl) | 2002-06-28 |
Family
ID=26512437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96325155A PL183472B1 (pl) | 1995-08-30 | 1996-08-27 | Sposób wytwarzania L-aminokwasów |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6319696B1 (pl) |
| EP (1) | EP0877090B1 (pl) |
| JP (1) | JP4032441B2 (pl) |
| CN (1) | CN1077139C (pl) |
| DE (1) | DE69635493T2 (pl) |
| DK (1) | DK0877090T3 (pl) |
| HU (1) | HU224895B1 (pl) |
| PL (1) | PL183472B1 (pl) |
| SK (1) | SK282611B6 (pl) |
| WO (1) | WO1997008333A1 (pl) |
Families Citing this family (96)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5985617A (en) * | 1997-02-18 | 1999-11-16 | Liao; James C. | Microorganisms and methods for overproduction of DAHP by cloned PPS gene |
| WO2000056859A1 (en) * | 1999-03-19 | 2000-09-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Process for producing l-amino acid |
| JP2003204783A (ja) * | 1999-07-19 | 2003-07-22 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| JP4362959B2 (ja) * | 2000-08-24 | 2009-11-11 | 味の素株式会社 | 塩基性アミノ酸の製造方法 |
| DE10045497A1 (de) * | 2000-09-13 | 2002-03-28 | Degussa | Neue für das ppsA-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
| DE10063314A1 (de) * | 2000-12-20 | 2002-07-04 | Degussa | Neue für das ilvE-Gen kodierende Nukleotidsequenzen |
| JP2002209596A (ja) * | 2001-01-19 | 2002-07-30 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| MXPA04004874A (es) | 2001-11-23 | 2004-09-03 | Ajinomoto Kk | Procedimiento para producir l-aminoacido utilizando escherichia. |
| RU2229513C2 (ru) * | 2001-11-23 | 2004-05-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-аминокислот, штамм escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты) |
| RU2244007C2 (ru) * | 2002-02-27 | 2005-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | Способ получения l-треонина, штамм escherichia coli - продуцент треонина (варианты) |
| RU2268300C2 (ru) * | 2003-04-07 | 2006-01-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ПОВЫШЕННОЙ ЭКСПРЕССИЕЙ ГЕНА pckA |
| WO2005030973A1 (ja) | 2003-09-30 | 2005-04-07 | Ajinomoto Co., Inc. | 発酵液からのコハク酸の精製方法 |
| KR101142885B1 (ko) * | 2003-12-15 | 2012-05-10 | 씨제이제일제당 (주) | 트립토판 생합성 관련 변이유전자를 함유한 대장균 변이주및 이를 이용한 트립토판 제조방법 |
| DE102004003410A1 (de) * | 2004-01-23 | 2005-08-25 | Degussa Ag | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| RU2288264C2 (ru) * | 2004-02-12 | 2006-11-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Бактерия, принадлежащая к роду escherichia - продуцент l-треонина и способ получения l-треонина |
| US7482140B2 (en) | 2004-06-15 | 2009-01-27 | Ajinomoto Co., Inc. | L-tyrosine-producing bacterium and a method for producing L-tyrosine |
| ATE474847T1 (de) * | 2004-06-25 | 2010-08-15 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | Verfahren zur herstellung von dipeptiden |
| WO2007086546A1 (en) * | 2006-01-26 | 2007-08-02 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of enterobacteriaceae family with attenuated expression of the aldh gene |
| JP2009118740A (ja) | 2006-03-03 | 2009-06-04 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP2004803A2 (en) | 2006-03-23 | 2008-12-24 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using bacterium of theenterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small rna |
| JP2009153382A (ja) | 2006-03-30 | 2009-07-16 | Ajinomoto Co Inc | メタノール資化性細菌を用いたカルボン酸の製造法 |
| EP2007873B1 (en) * | 2006-04-18 | 2015-11-18 | Ajinomoto Co., Inc. | A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE |
| JP2009165355A (ja) | 2006-04-28 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP2035569A1 (en) * | 2006-06-01 | 2009-03-18 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family with attenuated expression of the rcsa gene |
| RU2337961C2 (ru) * | 2006-07-04 | 2008-11-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН rspAB |
| CN1986777B (zh) * | 2006-07-11 | 2010-09-08 | 湖北大学 | 活体催化工程菌及利用α-酮酸生产L型非天然疏水性氨基酸的方法 |
| CN103215319A (zh) * | 2006-07-19 | 2013-07-24 | 味之素株式会社 | 使用肠杆菌科细菌产生l-氨基酸的方法 |
| RU2006129690A (ru) | 2006-08-16 | 2008-02-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ydiN, ГЕНА ydiB ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
| JP2010017081A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010017082A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| WO2008072761A2 (en) * | 2006-12-11 | 2008-06-19 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing an l-amino acid |
| RU2006143864A (ru) | 2006-12-12 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
| JP2010041920A (ja) | 2006-12-19 | 2010-02-25 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2006145712A (ru) * | 2006-12-22 | 2008-06-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина |
| JP5540504B2 (ja) | 2007-01-22 | 2014-07-02 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010088301A (ja) | 2007-02-01 | 2010-04-22 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010110216A (ja) | 2007-02-20 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸または核酸の製造方法 |
| JP2010110217A (ja) | 2007-02-22 | 2010-05-20 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| DE102007051024A1 (de) | 2007-03-05 | 2008-09-11 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| JP2010130899A (ja) | 2007-03-14 | 2010-06-17 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−グルタミン酸系アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| EP1975241A1 (de) | 2007-03-29 | 2008-10-01 | Evonik Degussa GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| WO2009031565A1 (ja) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Ajinomoto Co., Inc. | アミノ酸生産微生物及びアミノ酸の製造法 |
| DE102007044134A1 (de) | 2007-09-15 | 2009-03-19 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| RU2396336C2 (ru) | 2007-09-27 | 2010-08-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
| DE102007052270A1 (de) | 2007-11-02 | 2009-05-07 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| EP2060636A1 (de) | 2007-11-14 | 2009-05-20 | Evonik Degussa GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| JP2011067095A (ja) | 2008-01-10 | 2011-04-07 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法による目的物質の製造法 |
| WO2009093703A1 (ja) | 2008-01-23 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
| JP5217780B2 (ja) * | 2008-02-08 | 2013-06-19 | 味の素株式会社 | Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2008105793A (ru) | 2008-02-19 | 2009-08-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена |
| EP2098597A1 (de) | 2008-03-04 | 2009-09-09 | Evonik Degussa GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| DE102008002309A1 (de) | 2008-06-09 | 2009-12-10 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| DE102008040352A1 (de) | 2008-07-11 | 2010-01-14 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Tryptophan unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| DE102008044768A1 (de) | 2008-08-28 | 2010-03-04 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von organisch-chemischen Verbindungen unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| EP2336347B1 (en) | 2008-09-08 | 2017-03-15 | Ajinomoto Co., Inc. | An l-amino acid-producing microorganism and a method for producing an l-amino acid |
| JP2012029565A (ja) | 2008-11-27 | 2012-02-16 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010142200A (ja) | 2008-12-22 | 2010-07-01 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−リジンの製造法 |
| BRPI1007069A2 (pt) | 2009-01-23 | 2015-08-25 | Ajinomoto Kk | Método para produzir um l-aminoácido. |
| EP2267145A1 (de) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | Evonik Degussa GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae |
| BRPI1014661B1 (pt) | 2009-07-29 | 2020-12-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Método para produzir um l-aminoácido |
| JP2012223092A (ja) | 2009-08-28 | 2012-11-15 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2013013329A (ja) | 2009-11-06 | 2013-01-24 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2460793C2 (ru) | 2010-01-15 | 2012-09-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae |
| JP2013074795A (ja) | 2010-02-08 | 2013-04-25 | Ajinomoto Co Inc | 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法 |
| RU2471868C2 (ru) | 2010-02-18 | 2013-01-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот |
| RU2501858C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-12-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae |
| RU2482188C2 (ru) | 2010-07-21 | 2013-05-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE |
| JP2014036576A (ja) | 2010-12-10 | 2014-02-27 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| RU2011134436A (ru) | 2011-08-18 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности |
| EP2628792A1 (de) | 2012-02-17 | 2013-08-21 | Evonik Industries AG | Zelle mit verringerter ppGppase-Aktivität |
| EP2762571A1 (de) | 2013-01-30 | 2014-08-06 | Evonik Industries AG | Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren |
| RU2013118637A (ru) | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
| EP2868745B1 (en) | 2013-05-13 | 2017-06-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for manufacturing an L-amino acid |
| JP2016165225A (ja) | 2013-07-09 | 2016-09-15 | 味の素株式会社 | 有用物質の製造方法 |
| RU2013140115A (ru) | 2013-08-30 | 2015-03-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB |
| JP2016192903A (ja) | 2013-09-17 | 2016-11-17 | 味の素株式会社 | 海藻由来バイオマスからのｌ−アミノ酸の製造方法 |
| JP5958653B2 (ja) | 2013-10-02 | 2016-08-02 | 味の素株式会社 | アンモニア制御装置およびアンモニア制御方法 |
| RU2013144250A (ru) | 2013-10-02 | 2015-04-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР |
| EP2886651B1 (en) | 2013-10-21 | 2018-08-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-amino acid |
| JP6519476B2 (ja) | 2013-10-23 | 2019-05-29 | 味の素株式会社 | 目的物質の製造法 |
| RU2014105547A (ru) | 2014-02-14 | 2015-08-20 | Адзиномото Ко., Инк. | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL |
| RU2015120052A (ru) | 2015-05-28 | 2016-12-20 | Аджиномото Ко., Инк. | Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA |
| CN105316371B (zh) * | 2015-10-23 | 2018-08-14 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种用于提高色氨酸发酵产量的方法 |
| WO2017146195A1 (en) | 2016-02-25 | 2017-08-31 | Ajinomoto Co., Inc. | A method for producing l-amino acids using a bacterium of the family enterobacteriaceae overexpressing a gene encoding an iron exporter |
| EP3481850A1 (en) * | 2016-07-08 | 2019-05-15 | Evonik Degussa GmbH | Method for the fermentative production of methionine or its hydroxy analog form by microorganisms comprising genes coding sugar phosphotransferase system (pts) |
| JP7066977B2 (ja) | 2017-04-03 | 2022-05-16 | 味の素株式会社 | Ｌ－アミノ酸の製造法 |
| EP3385275B1 (de) | 2017-04-07 | 2019-10-23 | Evonik Degussa GmbH | Verfahren zur herstellung von aromatischen l-aminosäuren unter verwendung von verbesserten stämmen der familie enterobacteriaceae |
| WO2019030808A1 (ja) * | 2017-08-07 | 2019-02-14 | 地方独立行政法人大阪産業技術研究所 | 芳香族化合物を産生する微生物 |
| US11053526B2 (en) | 2018-08-09 | 2021-07-06 | Evonik Operations Gmbh | Process for preparing L amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family |
| EP3608409A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-12 | Evonik Operations GmbH | Process for preparing l amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family |
| EP3861109A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-08-11 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing target substance by bacterial fermentation |
| BR112021014194A2 (pt) | 2019-02-22 | 2021-12-28 | Ajinomoto Kk | Método para a produção de um l-aminoácido |
| BR112021017870A2 (pt) | 2019-04-05 | 2021-12-07 | Ajinomoto Kk | Método para produzir um l-aminoácido |
| JP7655312B2 (ja) | 2019-09-25 | 2025-04-02 | 味の素株式会社 | 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法 |
| WO2022245340A1 (en) * | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Zymergen Inc. | Engineered biosynthetic pathways for production of deoxyhydrochorismic acid by fermentation |
| CN119012914A (zh) | 2022-04-04 | 2024-11-22 | 味之素株式会社 | 防治寄生植物的方法 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5236831A (en) * | 1981-12-29 | 1993-08-17 | Kiowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Amino acid synthesis in corynebacteria using E. coli genes |
| DE3576523D1 (de) | 1984-11-20 | 1990-04-19 | Ajinomoto Kk | Rekombinante dna enthaltende coryneformbakterien und verfahren zur herstellung von aromatischen aminosaeuren unter verwendung dieser bakterien. |
| US5175107A (en) * | 1988-10-25 | 1992-12-29 | Ajinomoto Co., Inc. | Bacterial strain of escherichia coli bkiim b-3996 as the producer of l-threonine |
| JPH02472A (ja) * | 1988-12-26 | 1990-01-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ―グルタミン酸の製造方法 |
| IL98312A0 (en) * | 1990-06-04 | 1992-06-21 | Univ Notre Dame Du Lac | Process for preparation of beta-hydroxy-alpha-amino acids |
| JP3880636B2 (ja) | 1994-01-10 | 2007-02-14 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
| US5998178A (en) * | 1994-05-30 | 1999-12-07 | Ajinomoto Co., Ltd. | L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation |
| CA2199853C (en) * | 1994-09-16 | 2009-03-24 | James C. Liao | Microorganisms and methods for overproduction of dahp by cloned pps gene |
-
1996
- 1996-07-30 JP JP20086096A patent/JP4032441B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-27 US US09/011,762 patent/US6319696B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-27 PL PL96325155A patent/PL183472B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-08-27 DE DE69635493T patent/DE69635493T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-27 HU HU9901198A patent/HU224895B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-08-27 SK SK235-98A patent/SK282611B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-08-27 EP EP96927917A patent/EP0877090B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-27 WO PCT/JP1996/002399 patent/WO1997008333A1/ja not_active Ceased
- 1996-08-27 DK DK96927917T patent/DK0877090T3/da active
- 1996-08-27 CN CN96197716A patent/CN1077139C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1997008333A1 (fr) | 1997-03-06 |
| JP4032441B2 (ja) | 2008-01-16 |
| HUP9901198A2 (hu) | 1999-07-28 |
| US6319696B1 (en) | 2001-11-20 |
| CN1077139C (zh) | 2002-01-02 |
| CN1200150A (zh) | 1998-11-25 |
| SK23598A3 (en) | 1998-09-09 |
| HU224895B1 (en) | 2006-04-28 |
| EP0877090B1 (en) | 2005-11-23 |
| EP0877090A4 (en) | 2001-04-18 |
| HUP9901198A3 (en) | 2001-10-29 |
| EP0877090A1 (en) | 1998-11-11 |
| JPH09121872A (ja) | 1997-05-13 |
| DE69635493T2 (de) | 2006-08-03 |
| DK0877090T3 (da) | 2005-12-27 |
| DE69635493D1 (de) | 2005-12-29 |
| SK282611B6 (sk) | 2002-10-08 |
| PL325155A1 (en) | 1998-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL183472B1 (pl) | Sposób wytwarzania L-aminokwasów | |
| CN103243042B (zh) | 具有增强的l-赖氨酸产率的棒状杆菌属微生物以及使用所述微生物生产l-赖氨酸的方法 | |
| KR100924065B1 (ko) | Ｌ－라이신 생산능이 향상된 코리네박테리아 및 그를 이용한 ｌ－라이신 생산 방법 | |
| EP1092776B1 (en) | Method for producing L-amino acids by fermentation of an Escherichia strain which is transformed with a pyruvate carboxylase-encoding gene from Bacilus subtilis | |
| JP4427878B2 (ja) | 析出を伴う発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| KR100823044B1 (ko) | 트레오닌 및 이소류신의 제조방법 | |
| JP5412446B2 (ja) | トランスポゾンを利用した形質転換用ベクター、前記ベクターで形質転換された微生物及びこれを利用したｌ−リジン生産方法 | |
| US8058036B2 (en) | Microorganism of Corynebacterium genus having enhanced L-lysine productivity and a method of producing L-lysine using the same | |
| EP0332234A1 (en) | Process for preparing L-tyrosine | |
| JP2002238592A (ja) | Ｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| JP2002238593A (ja) | Ｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| CN1289675C (zh) | 微生物制备芳族氨基酸的方法 | |
| US20050176114A1 (en) | Microorganism producing L-threonine having inactivated galR gene, method of producing the same and method of producing L-threonine using the microorganism | |
| JP2002238591A (ja) | Ｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| US7220572B2 (en) | Method for producing L-leucine | |
| US7256018B2 (en) | Microorganism producing L-threonine having inactivated tyrR gene, method of producing the same and method of producing L-threonine using the microorganism | |
| RU2264457C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ ESCHERICHIA, СОДЕРЖАЩЕЙ НЕАКТИВНЫЙ ГЕН gadB | |
| JP2000232890A (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| BR122018011810B1 (pt) | Vetor para transformação usando transposons, microorganismos transformados pelo vetor e método para produzir l-lisina |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20120827 |