PL184231B1 - Żywy wirus PRRS o niskiej patogenności, szczepionki i sposoby ich wytwarzania - Google Patents
Żywy wirus PRRS o niskiej patogenności, szczepionki i sposoby ich wytwarzaniaInfo
- Publication number
- PL184231B1 PL184231B1 PL96324204A PL32420496A PL184231B1 PL 184231 B1 PL184231 B1 PL 184231B1 PL 96324204 A PL96324204 A PL 96324204A PL 32420496 A PL32420496 A PL 32420496A PL 184231 B1 PL184231 B1 PL 184231B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- strain
- cells
- measured amount
- measured
- vaccine
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 99
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 title claims description 13
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 53
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 claims abstract 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 13
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 11
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 4
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 14
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 10
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 7
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 5
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010055690 Foetal death Diseases 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000032696 parturition Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 231100000802 reproductive impairment Toxicity 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 2
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241001050985 Disco Species 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027336 Menstruation delayed Diseases 0.000 description 1
- 208000036830 Normal foetus Diseases 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000255 pathogenic effect Toxicity 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
1. Szczepionka, znam ienna tym, ze zawiera wirus oznaczony w ATTC numerem VR2509. 3. Sposób przygotowywania szczepionki, znamienny tym, ze, (A) otrzymuje sie przez klonowanie lysinki szczep North American PRRS i (B) przygotowuje sie szczepionke ze szczepu otrzymanego w etapie (A), przy czym szczep ten daje lysinki majace srednia srednice mniejsza niz 2 mm i lysinki te sa otrzymywane sposobem obejmujacym nastepujace etapy: (a) zaszczepia sie odmierzona iloscia komórek ze szczepu oznaczonego numerem ATCC VR2509, przy czym odmierzona ilosc komórek jest otrzymywana ze zlanej pojedynczej warstwy komórek utrzymywanych w minimalnej pozywce syntetycznej Eagel's uzupelnionej 3% surowica cieleca i 0,15% weglanem sodowym, w której to pozywce odmierzona ilosc komórek zawiera 1-2 X 105 komórek na ml minimalnej pozywki syntetycznej Eagel's uzupelnionej 3% surowica cieleca 1 0,15% weglanem sodowym; (b) inkubuje sie odmierzona ilosc komórek w 37°C przez 60 minut; (c) usuwa sie material inokulacyjny z odmierzonej ilosci; (d) odmywa sie z odmierzonej ilosci, syntetyczna pozywke Eagel's; (e) zawiesza sie ponownie odmierzona ilosc w 5 ml 2X syntetycznej pozywki Eagel's; 1 1,6% gotowanego agaru uzupelnio- nego 250 µg dietyloaminoetylu (DEAE)-dekstran; (f) posiewa sie odmierzona ilosc; i (g) nastepnie inkubuje sie odmierzona ilosc w 37°C przez 5 dni w inkubatorze z CO2 w celu otrzymania lysinek. 7. Szczepionka, znam ienna tym, ze zawiera szczep North American PRRS przy czym szczep ten daje lysinki majace sredni- ce mniejsza niz 2 mm 1 lysinki te sa otrzymywane sposobem obejmujacym: (a) zaszczepianie odmierzona iloscia komórek ze szczepu oznaczonego numerem depozytowym ATCC VR2509, przy czym odmierzona ilosc komórek jest otrzymywana ze zlanej pojedynczej warstwy komórek utrzymywanych w minimalnej pozywce synte- tycznej Eagel's uzupelnionej 3% surowica cieleca i 0,15% weglanem sodowym, w której to pozywce odmierzona ilosc komórek zawiera 1-2 X 105 komórek na ml minimalnej pozywki syntetycznej Eagel's uzupelnionej 3% surowica cieleca i 0,15% weglanem sodowym; (b) inkubowanie odmierzonej ilosci komórek w 37°C przez 60 minut; (c) usuwaniu materialu inokulacyjnego z odmierzonej ilosci; (d) odmywamu z odmierzonej ilosci syntetycznej pozywki Eagel's; (e) ponownym zawieszaniu odmierzonej ilosci w 5 ml 2X syntetycznej pozywki Eagel's; i 1,6% gotowanego agaru uzupel- nionego 250 µg dietyloaminoetylu (DEAE)-dekstran; (f) posiewaniu odmierzonej ilosci; i (g) nastepnie inkubowaniu odmierzonej ilosci w 37°C przez 5 dni w inkubatorze z CO2 w celu otrzymania lysinek. 12. Izolowany i oczyszczony szczep North American PRRS, znamienny tym, ze szczep ten.......................................................... PL PL PL PL PL PL PL
Description
2. Opis stanu techniki
W ciągu ostatnich kilku lat PRRS wyłonił się jako ważna wirusowa choroba świń. PRRS wywołuje ostre niedomaganie u ciężarnych macior objawiające się przedwczesnymi oprosie^ami, wzrostem ilości martwo urodzonych, zmumifikowanych i słabych prosiąt, spadkiem poziomu oprosień i opóźnieniem powrotu do okresu rujowego. Ostre objawy upośledzenia reprodukcji wywołane PRRS trwają ogólnie, w zaatakowanych gospodarstwach, 2-4 miesiące, ale problemy z oddychaniem występujące w tej chorobie mogą trwać przez wiele lat, powodując znaczne straty w produkcji. Prowadzono wiele badań nad patogenezą infekcji wirusem PRRS w późnych okresach (77-95 dni ciąży) ciężarnych mador/loszek. W każdym z tych badań wykazano, zdolność wirusa PRRS do wywoływania przezłożysdowego zakażenia oraz płodowej patogenności. Jednakże, ta płodowa patogenność nie była oczywista u macior w okresie połowy ciąży i płody w okresie środka okresu ciąży zainfekowane dom7cinonie (in utero), w większości, pozostawały prawidłowe.
W warunkach terenowych są pewne gospodarstwa hodowlane, w których nie ujawniają się poważne problemy z reprodukcją świń ani chroniczną postacią zaburzeń oddechowych, ale na których wykazano u zwierząt seropozytywność na PRRS. Przyczyny braku klinicznych objawów tej choroby w takich przypadkach nie są dobrze znane. Sugeruje się, że szczepy wirusa PRRS o niskiej patogenności mogą istnieć i że takie szczepy są odpowiedzialne za zakażenia populacji świń nie przejawiających klinicznych objawów PRRs. Różni badacze wskazywali na wiele izolatów wirusowych. Wszystkie, jak wskazano, miały
184 231
RNA i otoczkę zawierającą lipidy, ale nie wykazywały zdolności do hemaglutynacji erytrocytów różnych gatunków zwierząt.
Podsumowanie wynalazku
Wynalazek dotyczy przezwyciężenia problemów zarysowanych powyżej i dostarcza polepszonej żywej albo zmodyfikowanej szczepionki PRRS do podawania świniom. Szczepionki według wynalazku zawierają dostateczną ilość żywego albo zmodyfikowanego wirusa oznaczonego MN-Hs, który był zdeponowany w Amerykańskim Organie Depozytowym Hodowli Tankowych (ATCC), 12301 Parklawn Drive, RockVille, MD, 20852 dnia 26 lipca 1995 r., i otrzymał numer akcesyjny ATCC nr VR2509. Wirus ten, jak wykazano, był zasadniczo awirulentny i nadawał skuteczną odporność. Szczepionki z tym wirusem mogą być podawane rodzącym samicom, loszkom, knurom albo nie ssącym warchlakom, i podanie takie może być wykonane w każdy dostępny sposób to znaczy zastrzykiem domięśniowym albo podaniem ustno-nosowym. Ogólnie, dawki szczepionki mogą zawierać od około 104 do 108 tworzących łysinkę jednostek wirusowych.
Bardziej ogólnie, wynalazek dotyczy sposobu przygotowywania szczepionki PRRS dla świń, który obejmuje, najpierw otrzymanie techniką klonowania szczepu wirusa PRRS albo izolatu mającego średnią średnicę łysinki mniejszą niż około 2 mm na jednolitej warstwie komórek MARC-145, i przygotowywanie żywej szczepionki z tego szczepu. Linia komórkowa MARC-145 była zdeponowana w ATCC.
Korzystnie, szczepionki według wynalazku zawierają zasadniczo łysinkę wirusa o tak małych rozmiarach, która jest otrzymywana praktycznie w formie oczyszczonej.
Korzystny wirus o numerze akcesyjnym ATCC - VR225509 ma takie małe rozmiary łysinki i jak wskazano jest zasadniczo całkowicie awirulentny ale nadający odporność.
Krótki opis wynalazku
Figura 1 jest zdjęciem ilustrującym morfologię łysinki i rozmiar izolatu wirusa PRRS MN-Hs (<2 mm) na linii komórkowej MARC-145;
Figura 2 jest zdjęciem ilustrującym morfologię łysinki i rozmiar izolatu wirusa MN-HL (3-5 mm) na linii komórkowej MARC-145; i
Figura 3 jest zdjęciem ilustrującym morfologię łysinki i rozmiar izolatu wirusa MN-W (2-3 mm) na linii komórkowej MARC-145.
Szczegółowy opis korzystnej postaci wynalazku
Następujące przykłady ilustrują preferowane techniki izolowania, identyfikacji i klonowania szczepu wirusa PRRS o niskiej patogenności, jak również korzystne techniki wytwarzania z niego szczepionki; jest zrozumiałym, że przedstawione tu informacje mają na celu zilustrowanie wynalazku i nie stanowią, w żadnym zakresie, ograniczenia tego wynalazku. Powoływana w opisie literatura jest włączona przez cytowanie.
Przykład 1
Streszczenie
W przykładzie tym, badano u ciężarnych macior patogenezę wariantu małych łysinek (MN-Hs) wirusa PRRS powodującego wystąpienie syndromu upośledzenia reprodukcji i upośledzenie oddychania u świń. Szczep MN-Hs był początkowo klonowany z wirusa MN-H, który był mieszaniną małych i dużych łysinek wirusów (MN-H). W pierwszym doświadczeniu, w celu porównania płodowej patogenności, 2 ciężarne maciory, każda w 82 dniu ciąży, były szczepione wewnątrznosowo odpowiednio MN-Hs, MN-hl polem izolatu (MN-W), i medium hodowlanym (kontrola). Wszystkie maciory, oprócz grupy kontrolnej, oprosiły się w terminie. Zainfekowane maciory były wiremiczne na 7 dni po zaszczepieniu (PI) i serokonwersyjne na 14 dzień po PI w teście pośrednim przeciwciał fluorescencyjnych (IFA). Dwie maciory zainfekowane wirusem MN-Hs dostarczyły 14 żywych i 5 martwych prosiąt, podczas gdy 2 maciory zainfekowane wirusem MN-h urodziły 0 żywych i 20 martwych prosiąt. Dwie maciory zainfekowane wirusem MN-W urodziły 10 żywych i 20 martwych prosiąt. Dwie kontrolne maciory miały 16 normalnych płodów wyjętych operacyjnie w 107 dniu ciąży. Wirus izolowano w 16 (66,7%) z 24 żywo-urodzonych, w 9 (64,3%) z 14 martwych i w 3 (12,0%) z 25 zmumifikowanych prosiąt tych 6 zainfekowanych macior. Surowica sześciu z 13 od martwych świń z zainfekowanych wirusem typu MN-h albo MN-W macior posiadała przeciwciała
184 231 przeciwko wirusowi PRRS o mianie w zakresie 1:16 - 1:1,024 metodą IFA. W kolejnym doświadczeniu w celu powtórzenia wyników z wirusem MN-Hs, 2 ciężarne maciory każda w 86 dniu ciąży były zaszczepiane odpowiednio: wewnątrznosowo wirusem - MN-Hs, łysink śródmięśniowo - wirusem MN-Hs i wewnątrznosowo różnymi polami izolatów (OVL-1173), i wszystkim maciorom umożliwiono oprosienie w odpowiednim terminie. Dwie maciory które były zaszczepione wewnątrznosowo i śródmięśniowo wirusem MN-Hs urodziły odpowiednio - 15 żywych i 6 martwych prosiąt oraz 25 żywych i 5 martwych prosiąt, podczas gdy 2 maciory zainfekowane wirusem OVL-173 wydały 6 żywych i 24 nieżywych prosiąt. Wyniki te sugerują, że patogenność wirusa PRRS dla płodów jest różna w odniesieniu do różnych izolatów wirusowych, i szczep MN-Hs wirusa PRRS jest średnio patogenicznym wirusem. Wykrycie przeciwciał przeciwko wirusowi PRRS w surowicy martwych świń została uznana jako użyteczna metoda do diagnozowania infekcji płodowych.
Materiał i Metody
Wirus i hodowla komórkowa. W badaniach używano trzech różnych izolatów wirusa PRRS. Izolat MN-H otrzymywano z surowicy zdrowej świni karmiącej, w gospodarstwie z subklinicznymi objawami PRRS. Wirus był początkowo mieszaniną populacji wirusów o różniących się rozmiarach łysinki. Wirus o małej łysince (MN-Hs) i o dużej łysince (MN-HL) były klonowane osobno niż wirus MN-H i każdy z rodzajów wirusa był pod względem łysinki oczyszczany czterokrotnie do pierwszego doświadczenia i dodatkowo sześciokrotnie do następnego doświadczenia metodą klonowania łysinki według Him i wsp. Am. J. Vet. Res., 52: 1649-16522 (1991). W każdym, takim pasażu łysinki, zlewająca się pojedyncza warstwa komórek linii komórkowej MARC-145 dopuszczony klon pochodzący z linii komórkowej nerki zielonej małpy afrykańskiej (MA-104)) była hodowana na płytkach Petriego, o wymiarach 60 mm X 15 mm (komórki były trzymane w minimalnej pożywce syntetycznej Eagle's (MEM) uzupełnionej 3% cielęcą surowicą płodową(FCS), 0,15% węglanem sodowym i antybiotykami (Kim i wsp. Aren. Virol.,133:477-483 (1993)) i była zaszczepiana odpowiednim wirusem. Hodowle były inkubowane przez 60 min w temperaturze 37°C, po czym materiał inokulacyjny usuwano i hodowle przemywano jeden raz MEM. Następnie, do każdej płytki Petriego dodawano 5 ml płynnej pożywki hodowlanej, która zawierała równą objętość 2 X MEM i 1,6% zagotowanego agaru Nobla (Disco Laboratories) uzupełnione 50 gg dietyloaminoetylu (DEAE) dekstran/ml. Następnie płytki inkubowano przez okres 5 dni w temperaturze 37°C w inkubatorze z CO2. Na koniec okresu inkubacji, hodowle łysinek były poddawane uwidocznianiu przez dodawanie do nich 3 ml PBS uzupełnionego 1% czerwienią obojętną. Wybrane łysinki były klonowane przez zbieranie w sterylną pipetę Pasteura i były przenoszone przez zaszczepianie na niezainfekowana pojedynczą warstwę komórek MARC-145. W celu stałego wybarwiania, agar był usuwany ostrożnie i pojedyncza warstwa komórek była barwiona 2 ml 1% fioletu krezylu w 20% etanu przez 10 min. Płytki przemywano wodą bieżącą w celu ułatwienia zbadania łysinek.
Wirus PRRS typu MN-W był izolowany z surowicy chorych macior z gospodarstw, w których pojawiły się ostre objawy PRRS i wirusem typu OVL-173 otrzymanym z Oxford Veterinary Laboratories, Warthington, MN (Laboratorium Weterynarii w Oksfordzie MN).
Zwierzęta i projekt doświadczenia. Ciężarne maciory w około 80 dniu ciąży były kupione z gospodarstwa w którym nie miały prowadzonej historii klinicznych albo serologicznych dowodów infekcji wirusem PRRS. Maciory były zaszczepiane na farmie dwa razy w ciągu roku przeciwko wirusowi świńskiego parwowirusa (PPV) i leptospira (Leptospira spp). Otrzymano dokładne daty urodzenia prosiąt dla każdej maciory. Po sprzedaży, każda maciora była trzymana osobno w odizolowanym pokoju na University of Minnesota (Uniwersytecie Minesota). W 86 dniu ciąży maciory, po dwie, były zaszczepiane śródnosowo wirusem, odpowiednio - MN-Hs, MN-hl i MN-W (2 ml, 105,0'5,5 TCID50/ml). Pozostałe maciory były zaszczepiane pożywką hodowlaną i traktowane jako zwierzęta kontrolne. Próbki surowicy od każdej maciory były zbierane w odstępach do izolacji wirusa i serologii. Sześciu zakażonym maciorom pozwolono na naturalny poród, i dwie
184 231 kontrolne maciory były zabite w 107 dniu ciąży w celu zbadania płodów. W czasie porodu zebrano próbki krwi i płuc od żywych i martwych prosiąt i płyny z klatki piersiowej zmumifikowanych płodów zebrano w celu wyizolowania wirusa i przeprowadzenia badań serologicznych. W drugim doświadczeniu, wirus MN-Hs był łysinką dodatkowo sześciokrotnie oczyszczoną przed zaszczepieniem. Dwie ciężarne maciory, każda w 86 dniu ciąży, były zaszczepiane odpowiednio: wewnątrznosowo wirusem - MN-Hs, śródmięśniowo - wirusem MN-Hs i wewnątrznosowo różnymi polami izolatów (OVL-1173), i wszystkim maciorom umożliwiono oprosienie w odpowiednim terminie. W czasie oprosienia mierzono długość obwodu pośladkowego w ich części koronowej u zmumifikowanych albo martwych płodów w celu ocenienia czasu śmierci. (Marrable i wsp. J Agric. Sci., 69:443-447 (1967)). Próbki krwi i płuc były zbierane i analizowane jak w pierwszym doświadczeniu.
Izolowanie wirusa i serologia. Do izolowania wirusa, każda próbka surowicy lub nadsączu z homogenatu płuc była umieszczana w 24-studzienkowych płytkach i dodawano komórki MARC-145 (1-2 x 105 komórek/ml) zawieszone w MEM uzupełnionym 3% FCS. Hodowle były obserwowane pod względem efektów cytopatycznych (CPE), typowych dla PRRS w 5-7 dniu. Płytki następnie zamrażano i rozmrażano dwukrotnie, i nadsącze zaszczepiano w 96-studzien-kowych mikro-płytkach świeżą zawiesiną komórkową MARC-145 i inkubowano przez 3-4 dni. Dowody zaistnienia infekcji wirusem były badane przez obserwowanie zarówno CPE i fluorescencji specyficznej, stosując jako odniesienie, pozytywną, w stosunku do wirusa PRRS, surowicę świńską.
Surowice od macior i prosiąt były testowane na przeciwciała metodą fluorescencyjną nie wprost (IFA) (Yoon i wsp., J. Vet. Diag. Invest., 4:144-147 !(2)). Testowe 96-studzienkowe płytki były przygotowywane stosując linię komórkową MARC-145. Niektóre z surowic były testowane na obecność przeciwciał przeciwko PPV testem inhibicyjnym hemaglutynacji (H1) jak wcześniej opisano (Joo i wsp., Aust. Vet. J., 52: 422-424 (1976)).
Wyniki
Izolat wirusa PRRS wskazywał różne rozmiary łysinek w początkowej izolacji. Izolat MN-H klonowano w dwóch różnych populacjach rozmiarów łysinek - MN-Hs i MN-H1. Po klonowaniu, odpowiednie rozmiary łysinek dla MN-Hs i MN-H1 stale wynosiły od < 2 mm i 3-5 mm średnicy podczas gdy dla MN-W wynosiły 2-3 mm (patrz rysunek).
Po infekcji izolatem wirusa PRRS nie obserwowano klinicznych objawów u macior, innych niż jadłowstręt wykryty u macior 112 i 153 po 5 dniach po zaszczepieniu (PI). Wirusa izolowano z próbek surowicy sześciu na sześć macior siedem dni PI i jednej na sześć macior 14 dni Pl. Wysokie miano przeciwciał było wykryte u wszystkich zaszczepionych macior 14 dni PI, jak wykazano w tabeli 1.
Tabela 1
Wiremia i odpowiedź przeciwciał u 86-dniowych ciężarnych macior po doświadczalnej infekcji izolatem wirusa PRRS
| Numer maciory | Wirus którym infekowano | Dzień po zaszczepieniu | ||||
| 0 | 7 | 14 | 21 | 28 | ||
| 17 | MN-Hs | -/-“ | +/- | -/1,024 | -/1,024 | -/256 |
| 53 | MN-Hs | -/- | +/- | -/1,024 | -/1,024 | -/1,024 |
184 231
Tabela 2
Wyniki przedstawiono jako ilość oprosień i izolacji wirusa z zainfekowanych różnymi izolatami wirusa PRRS macior
| Maciora | Płody | |||||||
| Nr | Dni“ | Wirus/droga podania | Ilość całkowita | LB | SB | M. | Cr zakres długości | Wirus izolacjac |
| Doświadczenie I | ||||||||
| 17 | 115 | MN-Hs/IN | 9 | 6 | 0 | 3 | 27-32 | 6/9 |
| 53 | 113 | MN-Hs/IN | 10 | 8 | 1 | 1 | 25-38 | 6/10 |
| 153 | 114 | MN-H1/IN | 13 | 0 | 2 | 11 | 24-32 | 2/11 |
| 147 | 112 | MN-H1/IN | 12 | 0 | 4 | 8 | 18-30 | 3/7 |
| 68 | 112 | MN-W/IN | 15 | 8 | 3 | 4 | 25-28 | 5/15 |
| 112 | 118 | MN-W/IN | 15 | 2 | 44 | 9 | 24-31 | 6/11 |
| 124 | 107d | Kontrola | 14 | - | - | ND | 0/14 | |
| 95 | 107d | Kontrola | 12 | - | - | ND | 0/12 | |
| Doświadczenie II | ||||||||
| 155 | 115 | MN-Hs/IN | 11 | 7 | 3 | 1 | 28-35 | 8/11 |
| 49 | 114 | MN-Hs/IN | 10 | 8 | 2 | 0 | 34-37 | 9/10 |
| 176 | 112 | MN-Hs/IM | 15 | 12 | 2 | 1 | 15-36 | 3/15 |
| 110 | 113 | MN-Hs/IM | 15 | 13 | 2 | 0 | 32-34 | 2/15 |
| 800 | 108 | OVL-173/IN | 12 | 1 | 9 | 2 | 27-28 | 1/12 |
| 44 | 108 | OLV-173/IN | 18 | 5 | 10 | 3 | 26-29 | 10/18 |
“Dzień trwania ciąży przed porodem lub przed ubojem b Długość korony pośladkowej (cm) zmumifikowanych albo nieżywych płodów c Numer próbki izolat wirusowy/numer próbki testowanej d Maciory były ubijane w 107 dniu trwania ciąży w celu zbadania płodów LB - płody żywe; SB - płody martwe; M.- płody zmumifikowane; IN - podanie śródnosowe; IM - podanie domięśniowe; ND - nie oznaczano
Wirus był izolowany z jednego, albo większej liczby płodów, każdego miotu zainfekowanych macior. Wyniki izolacji wirusa w Doświadczeniu I, pochodzące z indywidualnych prosiąt z sześciu zainfekowanych macior, wykazały, że około połowa płodów (28 z 63 prosiąt) jakie badano była wiruso-pozytywna. Wśród prosiąt, badanych na obecność wirusa 16 (66,7%) z 24 żywo urodzonych prosiąt, 9 (64,3%) z 14 martwo urodzonych prosiąt
184 231 i 3 (12,0%) z 25 zmumifikowanych prosiąt było wiruso-pozytywna. W 28 wiruso-pozytywnych prosiętach, na podstawie próbek ich surowic, 10 prosiąt było negatywnych dla wirusa przy badaniu próbek płuc.
Surowica z martwych prosiąt z 153, 147, 68 i 112 zbadano na obecność przeciwciał przeciwko wirusowi PRRS przez pomiar przeciwciał IFA i na obecność PPV przez pomiar przeciwciał H1, i wyniki przedstawiono w tabeli 3. Sześć z 13 surowic z martwo urodzonych prosiąt i 2 z 25 płynów z klatki piersiowej od zmumifikowanych prosiąt posiadał przeciwciała przeciwko wirusowi PRRS. Miano przeciwciał IFA było w zakresie 1:16-1:1,024, podczas gdy żadna z próbek surowic nie miała przeciwciał przeciwko PPV. Trzynaście z 14 żywo urodzonych prosiąt z macior 17 i 53 miało przeciwciała przeciwko wirusowi zarówno PRRS (miano IFA 1:64-1:1,024) i PPV (miano HI 1:512-1:16,384).
Tabela 3
| Numer macioiy | Wirus którym infekowano | Historia miotu | Płody testowane | PRRSV IFA | PPV H1 |
| 153 | MN-H1 | OLB, 2SB, 11m. | SB (32)a | <4b | <8b |
| SB (27) | 256 | <8 | |||
| 147 | MN-H1 | OLB, 4SB, 8m. | SB (30) | <4 | <8 |
| SB (30) | 1,024 | <8 | |||
| SB (29) | <4 | <8 | |||
| SB (28) | <4 | <8 | |||
| 68 | MN-W | 8LB, 3 SB, 4m. | SB (27) | <4 | <8 |
| SB (25) | 16 | <8 | |||
| SB (28) | <4 | <8 | |||
| 112 | MN-W | 2LB, 4SB, 9m. | SB (31) | <4 | <8 |
| SB (29) | 256 | <8 | |||
| SB (26) | 256 | <8 | |||
| SB (24) | 16 | NT |
Dyskusja
Obecne badania potwierdzają zdolność różnych typów izolarów wirusa PRRS do powodowania przezłożyskowego zakażenia i patogennych efektów wywieranych na płody w maciorach w późnej ciąży. Jakkolwiek stwierdzono tam także oczywiste różnice w patogenności pomiędzy izolatami wirusowymi PRRS. Kiedy wielorodne maciory były zaszczepiane śródnosowo wirusem PRRS ATCC-VR2332 w 93 dniu trwania ciąży (Christianson W.T. i wsp., Can J. Vet. Res., 57: 262-268 (1993), maciory te wydawały na świat średnio 5,8 żywych prosiąt i 6,0 martwych płodów na jeden miot. W obecnych badaniach 6 macior zakażanych MN-H1 albo 2 potowym wirusem rodziły średnio 2,7 żywych i 11,5 martwych prosiąt na jeden miot, i dlatego wirusy te uznano jako wysoko wirulentne. Pategenność między ATCC-VR 2332 i wirusami wirulentnymi stosowanymi w tych badaniach była różna. Taki wynik może być rezultatem czasu ciąży w czasie infekowania jako że wirus ATCC-VR był stosowany do infekcji 7 dni później. Między innymi 6 macior infekowanych MN-Hs urodziło średnio 9,0 żywych i 2,7 martwych
184 231 prosiąt na miot. Wyniki te są znacząco różne od tych otrzymywanych dla wirulentnego wirusa, wskazując, że MN-Hs wirus jest szczepem o średniej patogenności pochodzenia. W tych samych warunkach, wirusy MN-Hs i MN-H1 powodowały urodzenie się odpowiednio: 5 i 25 martwych prosiąt (p.<0.005). Z obecnych wyników można wnioskować, że patogenność MN-Hs i MN-H1 jest znacząco różna, jedne są szczepem o średniej a drugie o wysokiej patogenności.
Izolacja wirusa z zainfekowanych PRRS miotów była względnie łatwa, i wirus był izolowany w podobnym zakresie u żywych jak i u martwych prosiąt. Ponieważ wirus mógłby być nie odtworzony z wszystkich prosiąt w zainfekowanym miocie, to dla celów diagnostycznych izolację wirusa powinno się powtarzać w próbach z co najmniej 2 lub więcej prosiąt na miot. Również, wykazano, że izolacje wirusa prowadzi się łatwiej z surowicy niż z próbek tkanki płucnej.
W miotach macior zainfekowanych wirusem wirulentnym, jedno lub więcej martwourodzonych prosiąt miało wykrywalne przeciwciała specyficzne dla wirusa PRRS. Wyniki te sugerują, że wykrywanie przeciwciał w próbkach z martwo-urodzonych albo w stanie przed oseskowym prosiąt może być skuteczną metodą do diagnozowania infekcji wirusem PRRS w nieprawidłowych miotach. Metoda ta może być wartościowa w laboratoriach gdzie technika i urządzenia do izolacji wirusów są niedostępne. W obecnych badaniach 6 z 13 martwourodzonych prosiąt miało pozytywne miano przeciwciał przeciwko wirusowi PRRS, ale nie przeciwko PPV, potwierdzając to, że przeciwciała wykryte są pochodzenia płodowego i są wynikiem zainfekowania wirusem PRRS.
Nie jest wiadomym dlaczego w niektórych stadach zainfekowanych PRRS nie rozwijają się objawy kliniczne.
Było doświadczalnie stwierdzone, że stada o dobrym stanie zdrowia przed infekcją wirusem PRRS wykazywały bardziej łagodną, odpowiedź w porównaniu z tymi z gorszym stanem zdrowia. Ten utrzymujący się stan zdrowia, oraz różnice w szczepach wykazane w tych badaniach są możliwym wytłumaczeniem wyraźnych różnic w przedstawieniu klinicznym. Ponadto, można sugerować, że interakcja pomiędzy wirusami dającymi małe łysinki i duże łysinki może zachodzić w środku zwierząt gospodarzy i modyfikować swoją patogenność. To może być prawdą, jeżeli rozważy się, że na tych farmach nie było problemów z reprodukcją świń, gdzie wyizolowano wirus MN-H, pomimo obecnego w gospodarstwie wirusa PRRS typu MN-H1 o wysokiej patogenności.
Przykład 2
Korzystne szczepionki według wynalazku mogą być podawane rodzącym loszkom, maciorom, knurom i odstawionym od ssania warchlakom. Podawanie może być domięśniowe albo ustno-nosowe i może być wykonane w dowolnym czasie. Jakkolwiek, dla rodzących samic, szczepienie jest korzystne przed parzeniem się w celu zabezpieczenia ich późniejszych stadiów karmiącego, hodowlanego i kończącego.
Ogólnie, szczepionki według wynalazku są podawane w dawce 2 ml, zawierającej od 104 d0 1q8 jednostek tworzących łysinkę (PFU) i bardziej korzystnie około 106 PFU. Odporność będzie trwała co najmniej przez jeden okres ciąży w przypadku rodzących samic, podczas gdy szczepienie prosiąt w czasie po odstawieniu ich od ssania będzie zapewniało odporność przez ostatni okres. Korzystnie szczepionki według wynalazku mogą dawać szeroki zakres odporności krzyżowej.
Szczepionki według wynalazku mogą zawierać żywe albo zmienione (atenuowane) wirusy, jak również konwencjonalne nośniki, stabilizatory i/lub adjuvanty.
Przykład 3
Wstęp
W przykładzie tym badano zdolność szczepionki złożonej z szczepu MN-Hs wirusa North American PRRSV do zapobiegania 3-tygodniowych warchlaków MN-H1 wirusa North American PRRSV. Choroba układu oddechowego związana z infekcją powodowaną przez North American PRRSV jest w pierwszym rzędzie wynikiem zainfekowania przez drugorzędowe patogeny obecne w farmach trzody chlewnej. Jednakże, w warunkach doświadczalnych, objawy choroby układu oddechowego u świń zakażonych North American PRRSV nie są jednolicie powtarzalne z powodu nieobecności patogenów drugorzędowych. Dlatego też wykrycie wiremi
184 231 jest najlepszym wskaźnikiem infekcji przez North American PRRSV. Nieobecność wiremi po obciążeniu szczepem MN-H1 wskazuje, że prosięta zaszczepione szczepem wirusa MN-Hs są odporne na infekcje powodowane przez szczep MN-H1.
Materiał i metody
Dwadzieścia 3-tygodniowych dorosłych warchlaków zakupiono z farmy wolnej od wirusa PRRS. Dwanaście prosiąt było zaszczepionych śródnosowo szczepem MN-Hs (2 ml, 104, TCID50/ml), i pozostałe 8 prosiąt służyło jako grupa kontrolna. Szczepione i kontrolne prosięta były przetrzymywane w osobnych pomieszczeniach izolacyjnych. Sześć szczepionych warchlaków (warchlak nr 81-86) i 4 kontrolne warchlaki (warchlak nr 93-96) były obciążane śródnosowo szczepem MN-H1 (2 ml, 10^ TdD5()/ml) w dwa tygodnie po zaszczepieniu (grupa i). Pozostałe 6 zaszczepionych warchlaków (warchlak nr 87-92) i 4 kontrolne warchlaki (warchlak nr 97-100) były obciążone podobnie 6 tygodni po zaszczepieniu (grupa U). Wszystkie warchlaki były obserwowane codziennie w celu obserwowania objawów klinicznych. Dodatkowo, próbki krwi były zbierane cotygodniowo z każdego warchlaka do (1) izolacji wirusa stosując hodowlę komórkową MARC-145 (Yoon i wsp. J. Vet. Diag. Invest., 6:289-292 (1994)) i (2) oznaczenia miana przeciwciał zobojętniających surowicę (SN) (Park i wsp., Am. J. Vey. Res., 57:320-323 (1996); wykrycia przeciwciał SN w szczepionych warchlakach wskazuje ochronę immunologiczną przeciw wirulentnemu North American PRRSV.
Wyniki
Po szczepieniu z warchlaków w grupie I w grupie II izolowano w okresie aż do 3 tygodni po szczepieniu, wirusa szczepionki. Po obciążeniu, objawy kliniczne nie były obserwowane w żadnym z kontrolnych i zaszczepionych warchlaków w grupie I i II.
Grupa I. Przeciwciał SN nie wykryto w żadnym z warchlaków w czasie obciążania. Po obciążeniu, wirus obciążający odzyskiwano z zaszczepionych i kontrolnych warchlaków. Ponadto, zarówno u zaszczepionych jak i kontrolnych warchlaków rozwinęła się wiremia.
Grupa II. Zaszczepione warchlaki wytwarzały przeciwciała SN rozpoczynając w 3 tygodnie po zaszczepieniu i wykazywały miano pomiędzy 1:2 i 1:8 w czasie obciążenia. Po obciążeniu wirus obciążający nie był izolowany z zaszczepionych warchlaków, podczas gdy u kontrolnych warchlaków rozwijała się wiremia (tabela 4). Wyniki te wskazują, że zaszczepione warchlaki miały nabytą ochronę odpornościową przeciwko wirulentnemu North American PRRSV.
Tabela 4
Wykrywanie wiremi i przeciwciała u 3-tygodniowych warchlaków zaszczepionych i obciążonych 2 albo 3 tygodnie po zaszczepieniu.
| Numer świni | 0 | 1 | Tydzień po zaszczepieniu | 7 | 8 | ||||
| 2a | 3 | 4 | 5 | 6a | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| Grupa I | |||||||||
| 81 V | -/-b | -/- | -/- | -/- | -12 | ||||
| 82 V | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | ||||
| 83 V | -/- | -/- | +/- | +/- | +/2 | ||||
| 84 V | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | ||||
| 85 V | -/- | -/- | +/- | +/- | +/4 | ||||
| 86 V | -/- | -/- | +/- | +/- | -/4 | ||||
| 93 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- |
184 231
c.d. tabeli 4
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 94 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/8 | ||||
| 95 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/4 | ||||
| 94 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/8 | ||||
| 95 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/4 | ||||
| 96 C | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | ||||
| Grupa II | |||||||||
| 87 V | -/- | -/- | -/- | +/+ | -/- | -/2 | -/2 | -/8 | -/8 |
| 88 V | -/- | -/- | +/- | -/- | -14 | -/4 | -/4 | -/64 | -/128 |
| 89 V | -/- | -/- | +/- | -/- | -/2 | -/8 | -/8 | -/8 | -/32 |
| 90 V | -/- | -/- | +/- | +/- | -/4 | -/8 | -/8 | -/128 | -/64 |
| 91 V | -/- | -/- | +/- | -12 | -/2 | -/8 | -/4 | -/32 | -/64 |
| 92 V | -/- | -/- | -/- | -/4 | -/2 | -/4 | -/4 | -/128 | |
| 97 C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- |
| 98 C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- |
| 99 C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | +/- | |
| 100 C | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | -/- | +/- | -/2 |
V = szczepione; C = kontrolne a = obciążone wirusem MN-m, b = izolowany wirus/miano przeciwciała SN
Warchlaki w grupie I i II były zabijane odpowiednio w 4 i 8 tygodniu po zaszczepieniu.
Claims (13)
- Zastrzeżenia patentowe1. Szczepionka, znamienna tym, że zawiera wirus oznaczony w ATTC numerem VR2509.
- 2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że dawkowa ilość szczepionki zawiera 104 do 10δ PFU.
- 3. Sposób przygotowywania szczepionki, znamienny tym, że, (A) otrzymuje się przez klonowanie łysinki szczep North American PRRS i (B) przygotowuje się szczepionką ze szczepu otrzymanego w etapie (A), przy czym szczep ten daje łysinki mające średnią średnicę mniejszą niż 2 mm i łysinki te są otrzymywane sposobem obejmującym następujące etapy:(a) zaszczepia się odmierzoną ilością komórek ze szczepu oznaczonego numerem ATCC VR2509, przy czym odmierzona ilość komórek jest otrzymywana ze zlanej pojedynczej warstwy komórek utrzymywanych w minimalnej pożywce syntetycznej Eagel's uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym, w której to pożywce odmierzona ilość komórek zawiera 1-2 X 105 komórek na ml minimalnej pożywki syntetycznej Eagel's uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym;(b) inkubuje się odmierzoną ilość komórek w 37°C przez 60 minut;(c) usuwa się materiał inokulacyjny z odmierzonej ilości;(d) odmywa się z odmierzonej ilości, syntetyczną pożywkę Eagel's;(e) zawiesza się ponownie odmierzoną ilość w 5 ml 2X syntetycznej pożywki Eagel's; i 1,6% gotowanego agaru uzupełnionego 250 pg dietyloaminoetylu (DEAE)-dekstran;(f) posiewa się odmierzoną ilość; i (g) następnie inkubuje się odmierzoną ilość w 37°C przez 5 dni w inkubatorze z CO2 w celu otrzymania łysinek.
- 4. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że szczepionka zawiera żywotny szczep North American.
- 5. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że przygotowywanie szczepionki zawiera etap otrzymywania szczepu w formie oczyszczonej.
- 6. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że szczep ma oznaczenie ATTC VR2509.
- 7. Szczepionka, znamienna tym, że zawiera szczep North American PRRS przy czym szczep ten daje łysinki mające średnicę mniejszą niż 2 mm i łysinki te są otrzymywane sposobem obejmującym:(a) zaszczepianie odmierzoną ilością komórek ze szczepu oznaczonego numerem depozytowym ATCC VR2509, przy czym odmierzona ilość komórek jest otrzymywana ze zlanej pojedynczej warstwy komórek utrzymywanych w minimalnej pożywce syntetycznej Eagel's uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym, w której to pożywce odmierzona ilość komórek zawiera 1-2 X 105 komórek na ml minimalnej pożywki syntetycznej Eagel's uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym;(b) inkubowanie odmierzonej ilości komórek w 37°C przez 60 minut;(c) usuwaniu materiału inokulacyjnego z odmierzonej ilości;(d) odmywamu z odmierzonej ilości syntetycznej pożywki Eagel's;(e) ponownym zawieszaniu odmierzonej ilości w 5 ml 2X syntetycznej pożywki Eagel's; i 1,6% gotowanego agaru uzupełnionego 250 pg dietyloaminoetylu (DEAE)-dekstran;(f) posiewaniu odmierzonej ilości; i (g) następnie inkubowaniu odmierzonej ilości w 37°C przez 5 dni w inkubatorze z CO2 w celu otrzymania łysinek.
- 8. Szczepionka według zastrz. 7, znamienna tym, że zawiera żywotny szczep North American PRRS.184 231
- 9. Szczepionka: wedhig zastrz. 7, znamienna tym, że szczep ma oznaczeme ATTC VR2509.
- 10. Izolowany i oczyszczony szczep North Amzrin7e PRRS oznaczony ATTC VR2509.
- 11. Szczep według o7strz. 10, znamienny tym, Że szczep jest Żywotnym szczepem.
- 12. Izolowany i oczyszczony szczep North American pRrS, znamienny tym, Ze szczep ten daje łysinki mające średnią średnicę mniejszą niż 2 mm i łysinki są otrzymywane sposobem obejmującym następujące etapy:(a) zaszczepianie odmierzoną ilością komórek ze szczepu oznaczonego numerem depozytowym ATCC VR2509, przy czym odmierzona ilość komórek jest otrzymywana ze zlanej pojedynczej warstwy komórek utrzymywanych w minimalnej pożywce syntetycznej EagPs uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym, w której to pożywce odmierzona ilość komórek zawiera 1-2 X 105 komórek na ml minimalnej pożywki syntetycznej Eagl's uzupełnionej 3% surowicą cielęcą i 0,15% węglanem sodowym;(b) inkubowanie odmierzonej ilości komórek w 37° C przez 60 minut;(c) usuwanie materiału inokulacyjnego z odmierzonej ilości;(d) odmywanie z odmierzonej ilości syntetycznej pożywki Engels;(e) ponowne zawieszanie odmierzonej ilości w 5 ml 2X syntetycznej pożywki Eagels; i 1,6% gotowanego agaru uzupełnionego 250 pg dietylo7minoztylu (DEAE)-dzdstr7n;(f) posiewanie odmierzonej ilości; i (g) następnie iedubow7nie odmierzonej ilości w 37°C przez 5 dni w inkubatorze z CO2 w celu otrzymania łysinek.
- 13. Szczep według zastrz. 12, znamienny tym, że szczep ten jest szczepem Żywotnym.1. Dziedzina wynalazkuWynalazek w szerokim ujęciu dotyczy szczepionki zawierającej żywy wirus o niskiej patogenności do podawania świniom w celu nadania im skutecznej odporności na zakażenie wirusem (PRRS) wywołującym choroby upośledzające reprodukcję świń i choroby układu oddechowego. Bardziej szczegółowo, wynalazek dotyczy takiej żywej szczepionki wraz ze sposobami immunizacji świń przeciw wirusowi PRRS i sposobów wytwarzania takich szczepionek. Nowy, zasadniczo izolowany i oczyszczony wirus PRRS o niskiej patogenności, o numerze akcesyjnym ATCC VR2509, stanowi także część tego wynalazku.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/493,265 US5690940A (en) | 1995-06-21 | 1995-06-21 | Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof |
| PCT/US1996/010595 WO1997000696A1 (en) | 1995-06-21 | 1996-06-19 | Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL324204A1 PL324204A1 (en) | 1998-05-11 |
| PL184231B1 true PL184231B1 (pl) | 2002-09-30 |
Family
ID=23959539
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96324204A PL184231B1 (pl) | 1995-06-21 | 1996-06-19 | Żywy wirus PRRS o niskiej patogenności, szczepionki i sposoby ich wytwarzania |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5690940A (pl) |
| EP (1) | EP0833661B1 (pl) |
| JP (1) | JP4709094B2 (pl) |
| KR (1) | KR100444809B1 (pl) |
| CN (1) | CN1126569C (pl) |
| AT (1) | ATE215384T1 (pl) |
| AU (1) | AU703084B2 (pl) |
| BR (1) | BR9608648A (pl) |
| CA (1) | CA2225388C (pl) |
| CZ (1) | CZ291611B6 (pl) |
| DE (1) | DE69620402T2 (pl) |
| DK (1) | DK0833661T3 (pl) |
| ES (1) | ES2173300T3 (pl) |
| HU (1) | HU227754B1 (pl) |
| PL (1) | PL184231B1 (pl) |
| PT (1) | PT833661E (pl) |
| RU (1) | RU2192887C2 (pl) |
| SK (1) | SK281024B6 (pl) |
| UA (1) | UA47433C2 (pl) |
| WO (1) | WO1997000696A1 (pl) |
Families Citing this family (55)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69201441T3 (de) | 1991-06-06 | 2008-12-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Erreger der mysteriösen schweinekrankheit,impfstoff-zusammensetzungen und diagnose kits. |
| US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| EE04741B1 (et) * | 1996-03-01 | 2006-12-15 | Schering Corporation | Sigade sigimis- ja hingamissündroomi vaktsiin |
| US20040224327A1 (en) * | 1996-10-30 | 2004-11-11 | Meulenberg Johanna Jacoba Maria | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| EP0839912A1 (en) * | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| EP1882696A3 (en) | 1997-05-06 | 2008-03-05 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRSV antigenic sites identifying peptide sequences of PRRS virus for use in vaccines or diagnostic assays |
| CA2366072C (en) * | 1999-03-08 | 2007-07-10 | Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. | Prrsv vaccines |
| MXPA01010681A (es) * | 1999-04-22 | 2003-08-20 | Us Agriculture | Vacuna de sindrome respiratorio y reproductiva porcina a base de ja-142 aislado. |
| SG83740A1 (en) * | 1999-08-10 | 2001-10-16 | Inst Of Molecular Agrobiology | An attenuated porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain and methods of use |
| RU2007101725A (ru) * | 2004-06-18 | 2008-07-27 | Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Миннесота (Us) | Идентификация инфицированных вирусом и вакцинированных вирусом организмов |
| US7632636B2 (en) * | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
| CA2894069C (en) | 2005-06-24 | 2019-02-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use |
| US7241582B2 (en) | 2005-07-05 | 2007-07-10 | Mj Biologics, Inc. | Diagnostic test kits |
| RU2316346C2 (ru) * | 2006-02-20 | 2008-02-10 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ") | Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней эмульсионная инактивированная |
| ES2389748T3 (es) * | 2007-06-25 | 2012-10-31 | South Dakota State University | Virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino de tipo 1 norteamericano recombinante y métodos de uso |
| KR101653177B1 (ko) * | 2008-08-25 | 2016-09-01 | 베링거잉겔하임베트메디카인코퍼레이티드 | 고병원성 돼지 생식기 및 호흡기 증후군(ｈｐ ｐｒｒｓ)에 대한 백신 |
| US8762067B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-06-24 | The Invention Science Fund I, Llc | Methods and systems for ablation or abrasion with frozen particles and comparing tissue surface ablation or abrasion data to clinical outcome data |
| US20100111857A1 (en) | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Boyden Edward S | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US9050070B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US8545857B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-01 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles |
| US8731841B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-20 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US8409376B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-04-02 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US8551505B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-08 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US8731840B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-20 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US9060934B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US8788211B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-22 | The Invention Science Fund I, Llc | Method and system for comparing tissue ablation or abrasion data to data related to administration of a frozen particle composition |
| US8858912B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-10-14 | The Invention Science Fund I, Llc | Frozen compositions and methods for piercing a substrate |
| US9072688B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-07-07 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US8725420B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-13 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US8603494B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-12-10 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for administering compartmentalized frozen particles |
| US8721583B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-05-13 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US9072799B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-07-07 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US8414356B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-04-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Systems, devices, and methods for making or administering frozen particles |
| US8613937B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-12-24 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions |
| US9060931B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives |
| US8545855B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-10-01 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for surface abrasion with frozen particles |
| US20100111835A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US8603495B2 (en) | 2008-10-31 | 2013-12-10 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for biological remodeling with frozen particle compositions |
| US8793075B2 (en) | 2008-10-31 | 2014-07-29 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US9060926B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-23 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| US9050251B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for delivery of frozen particle adhesives |
| US9050317B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-09 | The Invention Science Fund I, Llc | Compositions and methods for therapeutic delivery with frozen particles |
| AR078253A1 (es) * | 2009-09-02 | 2011-10-26 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Metodos para reducir la actividad antivirica en composiciones pcv-2 y composiciones pcv-2 con mejor inmunogenicidad |
| US8263677B2 (en) | 2009-09-08 | 2012-09-11 | Creative Nail Design, Inc. | Removable color gel basecoat for artificial nail coatings and methods therefore |
| US8492454B2 (en) * | 2009-10-05 | 2013-07-23 | Creative Nail Design, Inc. | Removable color layer for artificial nail coatings and methods therefore |
| US8541482B2 (en) * | 2009-10-05 | 2013-09-24 | Creative Nail Design, Inc. | Removable multilayer nail coating system and methods therefore |
| ES2550258T3 (es) | 2011-02-17 | 2015-11-05 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nueva cepa del PRRSV europea |
| SG192821A1 (en) | 2011-02-17 | 2013-09-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Commercial scale process for production of prrsv |
| AU2011361736A1 (en) | 2011-03-07 | 2013-05-02 | Creative Nail Design, Inc. | Compositions and methods for UV-curable cosmetic nail coatings |
| KR101281361B1 (ko) | 2011-07-18 | 2013-07-02 | 서울대학교산학협력단 | 북미형 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 예방 백신 조성물 및 이를 포함하는 혼합백신 조성물 |
| EP2737059A1 (en) | 2011-07-29 | 2014-06-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Novel prrs virus inducing type i interferon in susceptible cells |
| US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
| WO2014089117A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus compositions and uses thereof |
| WO2014150822A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
| US10279031B2 (en) | 2016-05-11 | 2019-05-07 | Phibro Animal Health Corporation | Composition comprising antigens and a mucosal adjuvant and a method for using |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2684792A (en) * | 1991-10-14 | 1993-05-21 | Akzo Nobel N.V. | Porcine reproductive respiratory syndrome vaccine and diagnostic |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| KR100374295B1 (ko) * | 1993-02-08 | 2003-12-24 | 바이엘 코포레이션 | 돼지생식및호흡증후군바이러스의생육방법과백신에서그의용도 |
| ES2074950B1 (es) * | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
-
1995
- 1995-06-21 US US08/493,265 patent/US5690940A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-06-19 DE DE69620402T patent/DE69620402T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 CN CN96194954A patent/CN1126569C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-19 WO PCT/US1996/010595 patent/WO1997000696A1/en not_active Ceased
- 1996-06-19 KR KR1019970709317A patent/KR100444809B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-19 CA CA2225388A patent/CA2225388C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-19 AT AT96922508T patent/ATE215384T1/de active
- 1996-06-19 EP EP96922508A patent/EP0833661B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 CZ CZ19974127A patent/CZ291611B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 RU RU98101129/13A patent/RU2192887C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 SK SK1657-97A patent/SK281024B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 ES ES96922508T patent/ES2173300T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-19 HU HU9903169A patent/HU227754B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 PT PT96922508T patent/PT833661E/pt unknown
- 1996-06-19 DK DK96922508T patent/DK0833661T3/da active
- 1996-06-19 AU AU63361/96A patent/AU703084B2/en not_active Ceased
- 1996-06-19 PL PL96324204A patent/PL184231B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-06-19 UA UA98010280A patent/UA47433C2/uk unknown
- 1996-06-19 BR BR9608648-3A patent/BR9608648A/pt active Search and Examination
-
2006
- 2006-08-02 JP JP2006211493A patent/JP4709094B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL184231B1 (pl) | Żywy wirus PRRS o niskiej patogenności, szczepionki i sposoby ich wytwarzania | |
| RU2166327C2 (ru) | Вакцинная композиция против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (prrs) и способ ее получения, способ иммунизации свиней | |
| Wensvoort et al. | Bovine viral diarrhoea virus infections in piglets born to sows vaccinated against swine fever with contaminated vaccine | |
| Baskerville et al. | Aujeszky's disease in pigs. | |
| Terpstra et al. | Natural infections of pigs with bovine viral diarrhoea virus associated with signs resembling swine fever | |
| KR100241221B1 (ko) | 돼지 불임 및 호흡기계 중후백신 및 그의 진단법 | |
| JP3068204B2 (ja) | ブタの生殖・呼吸症候群（ｐｒｒｓ）を惹起するウイルスの新規弱毒化株、それに由来するワクチンおよび診断キットならびにそれらの取得方法。 | |
| Lin et al. | Egg transmission of two strains of Mycoplasma gallisepticum in chickens | |
| SK119498A3 (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine | |
| CN111849924B (zh) | 类nadc30猪蓝耳病强毒株、弱毒株及其应用 | |
| Woode | Transmissible gastro-enteritis of swine. | |
| CN100384988C (zh) | 2型鸡星状病毒 | |
| CN107537034B (zh) | 猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病二联活疫苗及其制备方法和应用 | |
| McFerran et al. | The role of the carrier pig in the epidemiology of Aujeszkys disease | |
| JP3954101B6 (ja) | 病原性の低いｐｒｒｓ生ウイルスワクチン、ならびにその製造方法 | |
| Peters et al. | The susceptibility of chicken kidney and oviduct organ cultures to a vaccine strain of avian infectious bronchitis virus | |
| Josland | The infective and immunogenic properties of Salmonella cholerae suis in weaner pigs | |
| Mohanty et al. | Other herpesviruses | |
| CN119351352A (zh) | 一株盖塔病毒传代致弱毒株及其应用 | |
| Ekanayake | Inclusion body hepatitis as a primary disease in commercial broiler chickens | |
| MXPA97010149A (en) | Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis | |
| CN1005089B (zh) | 猪肺炎霉形体弱毒疫苗的生产 | |
| HK1016870B (en) | Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof | |
| MXPA98007083A (en) | Vaccine against the reproductive and respiratory syndrome porc |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20120619 |