PL186523B1 - Sposób wytwarzania rozpuszczalnego materiału antygenowego, materiał antygenowy, kombinacja materiałów antygenowych, szczepionka, roztwór do wstrzyknięć,zastosowanie i Candida albicans - Google Patents

Abstract

1. Sposób wytwarzania rozpuszczalnego materialu antygenowego zawierajacego polisa- charyd i/lub glikopeptyd (ASMP), znamienny tym, ze komórki grzybów, nalezacych do grupy keratynofilowych grzybów albo drozdzy albo pochodzacy z nich material - poddaje sie dzialaniu 0,1-5% (wag/obj) roztworu KOH albo NaOH w okolo 20-150°C przez okolo 30 godzin, - rozdziela sie faze stala i plynna preparatu, korzystnie przez odwirowanie - po rozdzieleniu nadsacz traktuje sie kwasem nieorganicznym albo organicznym, ko- rzystnie 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym i - po oddzieleniu nadsacz traktuje sie odpowiednim rozpuszczalnikiem organicznym albo sola takim jak nizszy alkanol albo siarczan amonu, przy czym wytraca sie ASMP i - odzyskuje sie osad i, jezeli to konieczne, rozpuszcza w roztworze wodnym. PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest zatem sposób wytwarzania rozpuszczalnego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (ASMP), charakteryzujący się tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

- poddaje się działaniu 0,1-5% (wag/obj) roztworu KOH albo NaOH w około 20-150°C przez około 30 godzin,

- rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, korzystnie przez odwirowanie

- po rozdzieleniu nadsącz traktuje się kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym i

- po oddzieleniu nadsącz traktuje się odpowiednim rozpuszczalnikiem organicznym albo solą takim jak niższy alkanol albo siarczan amonu, przy czym wytrąca się ASMP i

- odzyskuje się osad i, jeżeli to konieczne, rozpuszcza w roztworze wodnym.

Korzystnie w sposobie tym grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida, zwłaszcza gdy grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

Trichophyton equinum,

Trichophyton mentagophytes,

Trichophyton sarkisovii,

Trichophyton verrucosum,

Microsporum canis,

Microsporum gypseum albo

Candida albicans.

Szczególnie korzystnie grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

Trichophyton equinum DSM nr 7276,

Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

Microsporum canis DSM nr 7281,

Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

186 523

Candida albicans DSM nr 9656.

Przedmiotem wynalazku jest również odmiana sposobu wytwarzania nierozpuszczalnego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (ANMP), charakteryzujący się tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

- poddaje się działaniu 0,1-5% (wag/obj) roztworu KOH albo NaOH w około 20-150°C przez około 30 godzin,

- rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, i

- po rozdzieleniu fazę stałą traktuje się kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym i

- przemywa się roztworem wodnym.

Korzystnie grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida, zwłaszcza grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

Trichophyton equinum,

Trichophyton mentagophytes,

Trichophyton sarkisovii,

Trichophyton verrucosum,

Microsporum canis,

Microsporum gypseum albo

Candida albicans.

Szczególnie korzystnie grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

Trichophyton equinum DSM nr 7276,

Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

Microsporum canis DSM nr 7281,

Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

Candida albicans DSM nr 9656.

Odmianą sposobu według wynalazku jest sposób wytwarzania egzogennego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (AEMP), charakteryzujący się tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

- hoduje się w pożywce płynnej około 250 godzin,

- rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, i

- po rozdzieleniu do nadsączu dodaje się alkohol, przy czym odzyskuje się osad AEMP i, jeżeli to konieczne, rozpuszcza w roztworze wodnym.

Korzystnie

- po rozdzieleniu nadsącz się liofilizuje,

- rozpuszcza w roztworze wodnym,

- po wytrącaniu około 1-5 objętościami alkoholu osad rozpuszcza się w roztworze wodnym,

- roztwór liofilizuje się.

Korzystnie w sposobie tym grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida, zwłaszcza grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

Trichophyton equinum,

Trichophyton mentagophytes,

Trichophyton sarkisovii,

Trichophyton verrucosum,

Microsporum canis,

186 523

Microsporum gypseum albo

Candida albicans, najkorzystniej

Trichophyton equinum DSM nr 7276,

Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

Microsporum canis DSM nr 7281,

Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

Candida albicans DSM nr 9656.

Przedmiotem wynalazku jest również materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, charakteryzujący się tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu.

Przedmiotem wynalazku jest materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, charakteryzujący się tym, że zawiera ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.

Przedmiotem wynalazku jest również materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, charakteryzujący się tym, że zawiera AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.

Przedmiotem wynalazku są również kombinacje materiałów antygenowych zwanych dalej w opisie równocennie kompleksami.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zatem kombinacja materiałów antygenowych, charakteryzująca się tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.

186 523

Przedmiotem wynalazku jest również kombinacja materiałów antygenowych, charakteryzująca się tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.

Przedmiotem wynalazku jest również kombinacja materiałów antygenowych, charakteryzująca się tym, że zawiera AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kombinacja materiałów antygenowych, charakteryzująca się tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu, i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.

Dalszym przedmiotem wynalazku są szczepionki, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, charakteryzujące się tym, że zawierają powyżej określone materiały antygenowe.

Przedmiotem wynalazku są również szczepionki, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, charakteryzujące się tym, że zawierają określone powyżej jako wynalazki kombinacje materiałów antygenowych.

186 523

Dalszym przedmiotem wynalazku są roztwory do wstrzyknięć, charakteryzujące się tym. że zawierają jedną z określonych powyżej szczepionek zawierającą materiał antygenowy lub kombinację materiałów antygenowych i nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B), przy czym korzystnie, gdy nośnik wybrany jest z:

- nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

- nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lablemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

- nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).

Przedmiotem wynalazku jest również Candida albicans zdeponowany w Deutsche

Sammlung fur Mikroorganismen (DSM) pod numerem dostępu 9656.

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie materiałów antygenowych według wynalazku powyżej przedstawionych lub ich kombinacji według wynalazku powyżej przedstawionych do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i/lub leczenia alergii, szczególnie do wytwarzania środka farmaceutycznego do zapobiegania lub leczenia wyprysku, w tym wyprysku letniego, do zapobiegania lub leczenia zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, do poprawy pokrywy włosowej ssaków.

Materiały antygenowe w postaci frakcji antygenowych ASMP, ANMP albo AEMP otrzymuje się z keratynofilowych grzybów albo drożdży w trzech różnych procesach.

Proces 1: Frakcja możliwa do uzyskania tym sposobem obejmuje rozpuszczalny materiał antygenowy obejmujący polisacharydy i/lub glikopeptydy (ASMP). Pokrótce, proces ten, który jest szczegółowo opisany w Przykładzie 1 obejmuje:

Keratynofilowe grzyby albo drożdże hoduje się na płytkach agarowych, jak to przykładowo opisano w EP 0564620. Jedną z korzystnych pożywek jest, przykładowo, agar z ekstraktem jęczmienia z f-my Oxoid. Mogą być również zastosowane inne pożywki zapewniające wzrost keratynofilowych grzybów albo drożdży. Powstałą biomasę grzyba pobiera się i traktuje wodnym roztworem alkalicznym. Korzystnymi wodnymi roztworami alkalicznymi są NaOH albo KOH, korzystnie w stężeniu około 0,1-5% (wag/obj). Traktowanie alkaliczne zachodzi korzystnie w zakresie 20-150°C przez około 30 godzin. Po przetwarzaniu w warunkach alkalicznych, fazę stałą i płynną rozdziela się, przykładowo przez wirowanie, filtrację albo sedymentację. Korzystnie, rozdzielenie wykonuje się przez wirowanie, co zapewnia dobre rozdzielenie resztek komórkowych grzybów, przykładowo z siłą około 3500 g. Traktowanie w wodnych warunkach alkalicznych, jak również etap rozdzielania można powtórzyć kilkakrotnie.

Po traktowaniu alkalicznym, powstały nadsącz traktuje się kwaśnym roztworem wodnym, np. 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym. Przykładowo, można zastosować HC1 albo kwas octowy, korzystnie o pH pomiędzy 2,5 i 4,5. Korzystnie, traktowanie wodnym roztworem kwaśnym trwa przez 2 do 4 godzin w temperaturze

4-8°C, po czym ma miejsce rozdział fazy stałej i płynnej. Traktowanie w wodnych warunkach kwaśnych, jak również etap rozdzielenia można powtórzyć kilkakrotnie, korzystnie w opisanych wyżej warunkach. Następnie, nadsącz z etapu rozdzielania poddaje się etapowi wytrącania. Korzystnie, wytrącanie wykonuje się przez dodanie do nadsączu odpowiedniego rozpuszczalnika organicznego, np. alkoholu takiego jak niższy alkanol, przykładowo metanolu albo etanolu. Stosunek jednej objętości nadsączu do 2-5 objętości alkoholu powinien spowodować dobre wytrącenie materiału antygenowego. Można również zastosować inne procedury wytrącania znane specjalistom w dziedzinie, przykładowo, wytrącanie siarczanem amonu albo inną solą może również spowodować wytrącenie materiału antygenowego. Fazę stałą poddaje się dalszemu etapowi rozdzielenia, korzystnie w warunkach opisanych wyżej. Powstałą fazę stałą odzyskuje się i rozpuszcza, jeżeli to pożądane, w roztworze wodnym, korzystnie w wodzie destylowanej, stosując zwykle 25-100 ml. Na koniec, preparat ASMP można liofilizować i przechowywać przez czas dłuższy w suchych warunkach.

186 523

Proces 2: Frakcja możliwa do uzyskania tym sposobem obejmuje nierozpuszczalny materiał antygenowy obejmujący polisacharydy i/lub glikopeptydy (ANMP). Pokrótce, proces ten, który jest szczegółowo opisany w Przykładzie 2 obejmuje:

Keratynofilowe grzyby albo drożdże hoduje się na płytkach agarowych, jak to przykładowo opisano w EP 0564620. Jedną z korzystnych pożywek jest, przykładowo, agar z ekstraktem jęczmienia z f-my Oxoid. Mogą być również zastosowane inne pożywki zapewniające wzrost keratynofilowych grzybów albo drożdży. Powstałą biomasę grzyba pobiera się i traktuje wodnym roztworem alkalicznym. Korzystnymi wodnymi roztworami alkalicznymi są NaOH albo KOH, korzystnie w stężeniu około 0,1-5% (wag/obj). Traktowanie alkaliczne zachodzi korzystnie w zakresie 20-150°C przez około 30 godzin. Po przetwarzaniu w warunkach alkalicznych, fazę stałą i płynną rozdziela się, przykładowo przez wirowanie, filtrację albo sedymentację. Korzystnie, rozdzielenie wykonuje się przez wirowanie, co zapewnia dobre rozdzielenie resztek komórkowych grzybów, przykładowo z siłą około 3500 g. Traktowanie w wodnych warunkach alkalicznych, jak również etap rozdzielania można powtórzyć kilkakrotnie. Po traktowaniu alkalicznym, fazę stałą traktuje się kwasem organicznym albo kwasem nieorganicznym. Korzystnie, do fazy stałej dodaje się 0,2-1,5 M kwas octowy albo 0,05-1 M HC1 na 0,5 do 3 godzin w temperaturach od 70 do 100°C. Po traktowaniu kwaśnym, fazę stałą przemywa się roztworem wodnym, korzystnie wodą destylowaną. Korzystnie, przemywanie powtarza się około pięciokrotnie. Na koniec fazę stałą rozpuszcza się w wodzie destylowanej.

Proces 3: Frakcja możliwa do uzyskania tym sposobem obejmuje egzogenny materiał antygenowy obejmujący polisacharydy i/lub glikopeptydy (AEMP). Pokrótce, proces ten, który jest szczegółowo opisany w Przykładzie 3 obejmuje:

Keratynofilowe grzyby albo drożdże inkubuje się w roztworze wodnym albo hoduje pożywce płynnej przez około 240 godzin (objętość roztworu albo pożywki określona jest tu jako objętość pierwotna, PV). Można zastosować wodę destylowaną (patrz, Przykład 3. I.) jak również pożywki opisane w EP 0564620. Po inkubacji albo hodowli, komórki drożdży oddziela się przez, przykładowo wirowanie, filtrowanie albo sedymentację, korzystnie przez wirowanie w opisanych wyżej warunkach. Powstały nadsącz liofilizuje się, a następnie rozpuszcza w wodzie. Korzystnie, objętość wody równa się 0,1 -0,2 objętości pierwotnej (PV). Powstały roztwór poddaje się etapowi wytrącania. Korzystnie, wytrącanie wykonuje się przez dodanie do nadsączu odpowiedniego rozpuszczalnika organicznego, np. alkoholu takiego jak niższy alkanol, przykładowo metanolu albo etanolu. Stosunek jednej objętości nadsączu do

2-5 objętości alkoholu powinien spowodować dobre wytrącenie materiału antygenowego. Można również zastosować inne procedury wytrącania znane specjalistom w dziedzinie, przykładowo, wytrącanie siarczanem amonu albo inną solą może również spowodować wytrącanie materiału antygenowego. Powstały osad rozpuszcza się w roztworze wodnym, korzystnie w wodzie destylowanej. Korzystnie, 0,5-50 mg osadu rozpuszcza się w 1 ml wody. Na koniec, preparat AEMP można liofilizować i przechowywać przez czas dłuższy w suchych warunkach, korzystnie w zakresie 2-10°C.

Korzystnymi rodzajami grzybów, z którym można wytworzyć opisane wyżej frakcje są rodzaje Trichophyton, Microsporum albo Candida.

Korzystnymi gatunkami są:

Trichophyton equinum,

Trichophyton mentagophytes,

Trichophyton sarkisovii,

Trichophyton verrucosum,

Microsporum canis,

Microsporum gypseum albo

Candida albicans.

Korzystnymi szczepami wymienionych wyżej gatunków są:

Trichophyton equinum DSM nr 7276,

Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

186 523

Microsporum canis DSM nr 7281,

Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

Candida albicans DSM nr 9656.

Wymienione wyżej szczepy zdeponowane zostały przez Zgłaszających w DSM („Deutsche Sammlungvon Microorganismen und Zellkulturen GMBH”, Mascheroder Weg IB, D-38124 Brunszwik, Niemcy) według postanowień Traktatu Budapeszteńskiego dotyczącego deponowania drobnoustrojów. Wszystkie szczepy, z wyjątkiem Candida albicans DSM nr 9656, opisano uprzednio w zgłoszeniu patentowym ZSRR, nr 5006861, zgłoszonym 21 października 1991 i odpowiednich zgłoszeniach tj. opublikowanym zgłoszeniu EP 0564620, zgłoszonym 17 października 1992.

Zależnie od gatunku z którego są uzyskane, frakcje określone zostały jak niżej.

Frakcje pochodzące z:

(i) Trichophyton equinum określone sąjako ASMP-TE, ANMP-TE albo AEMP-TE,

Trichophyton mentagophytes określone sąjako ASMP-Tm, ANMP-TM albo AEMP-TM,

Trichophyton sarkisovii określone sąjako ASMP-TS, ANMp-TS albo AEMP-TS,

Trichophyton verrucosum określone sąjako ASMP-TV, ANMP-TV albo AEMP-TV,

Microsporum canis określone sąjako ASMP-MC, AnMP-MC albo AEMP-MC,

Microsporum gypseum określone sąjako ASMP-MG, ANMP-MG albo AEMP-MG

Candida albicans określone sąjako ASMP-CA, ANMP-CA albo AEMP-CA.

Gdzie podano informację dotyczącą konkretnego danego szczepu, skrót od nazwy gatunku poprzedza cyfry konkretnego depozytu DSM, przykładowo - AEMP-CA9656 dotyczy frakcji AEMP otrzymanej z Candida albicans szczepu DSM nr 9656.

Frakcje możliwe do otrzymania w którymkolwiek opisanym wyżej procesie (od 1 do 3) obejmują przynajmniej jeden pojedynczy antygen, możliwy do uzyskania z przynajmniej jednego wyżej wymienionego grzyba. Preparaty antygenowe według wynalazku obejmują przynajmniej jedną z określonych wyżej frakcji albo ich kombinacje.

Preparaty antygenowe (aSmP i AEMP) jak opisane w Przykładach 1 i 3:

1) obejmują monosacharydy, aminokwasy i nukleotydy, które w większości są związane w postaci polimerycznych struktur i w mniejszej części jako wolne monomery;

2) składają się głównie z podjednostek monosacharydowych: mannozy, galaktozy, glukozy i ksylozy oraz innych w różnych ilościach;

3) zawierają mieszaninę struktur polimerowych utworzonych w większości z tych monosacharydów. Znaczna część tych struktur polimerowych wykazuje ciężar cząsteczkowy ponad 20000 kDa;

4) zawierają małe ilości wolnych albo związanych aminokwasów.

5) zawierają małe ilości cząsteczek DNA, które, jak wykazano są wrażliwe na trawienie DNAząl.

Dzięki spektroskopii NMR preparatów antygenowych ASMP i AEMP otrzymano spektrogramy NmR przedstawione na Figurach 1-4.

Przesunięcia chemiczne i zwielokrotnienia sygnału (podsumowane w tabeli 12) są zgodne z danymi literaturowymi dla węglowodanów i aminokwasów.

Dla frakcji AEMP i ASMP, np. MG 7274, TM 7279 i CA 9056, sygnały węglowodanów pokrywają zakres od 3,2 do 5,5 ppm, sygnały aminokwasów region od 0,75 do 3,45 (bez protonów a).

ASMP zwykle wykazuje sygnały dla octanu-CH₃ 1,92 ppm.

Frakcje AEMP wykazują również sygnały typowe dla disacharydów i aminokwasów. Np. widmo TM 7279 wykazuje sygnały dla aminokwasów aromatycznych takich jak fenyloalanina, tyrozyna i tryptofan, w regionie 7,15-7,9 ppm.

Jeżeli chodzi o frakcje pojedyncze ASMP albo AEMP, korzystne są stężenia 0,1 do 50 mg/ml. Jeżeli chodzi o frakcje pojedyncze ANMP, korzystne są stężenia 0,1-5% (obj/obj).

Korzystne wykonania preparatów antygenowych według wynalazku obejmują, przykładowo, następujące kombinacje frakcji (kompleksy):

186 523

Kompleks 1 obejmuje ASMP-TM, ASMP-MG i ASMP-CA. Korzystnie, stężenie każdej z frakcji wynosi 0,1-50 mg/ml. Najkorzystniejszym wykonaniem dotyczącym kompleksu 1 jest kombinacja ASMP-TM7279, ASMP-MG7274 i ASMP-CA9656.

Kompleks 1.1 obejmuje ASMP-MG i ASMP-CA. Korzystnie, stężenie każdej z frakcji wynosi 0,1-50 mg/ml. Najkorzystniejszym wykonaniem dotyczącym kompleksu 1.1 jest kombinacja ASMP-MG7274 i ASMP-CA9656.

Kompleks 2 obejmuje ANMP-TM, ANMP-MG i ANMP-CA. Korzystnie, stężenie każdej z frakcji wynosi 0,1-5% (obj/obj). Najkorzystniejszym wykonaniem dotyczącym kompleksu 2 jest kombinacja ANMP-TM7279, ANMP-MG7274 i ANMP-CA9656.

Kompleks 3 obejmuje AEMP-Tm, AEMP-MG i AEMP-CA. Korzystnie, stężenie każdej z frakcji wynosi 0,1-50 mg/ml. Najkorzystniejszym wykonaniem dotyczącym kompleksu 3 jest kombinacja AEMP-TM7279, AEMP-MG7274 i AEMP-CA9656.

Kompleks 4 obejmuje ANMP i ANMP. Korzystne są następujące kombinacje frakcji: (1) ANMP-CA i AEMP-TM albo (2) ANMP-MG, ANMP-TM i AEMP-TM. Korzystnie, stężenie ANMP wynosi 0,1-5% (obj/obj), zaś stężenie AEMP wynosi 0,1-50 mg/ml. Najkorzystniejszymi wykonaniami kompleksu 4 są następujące kombinacje:

4.1 ANMP-CA9656, i 4.2 ANMP-MG7274,

AEMP-TM7279; ANMP-TM7279 i

AEMP-TM7279.

Kompleks 5 obejmuje ANMP i ASMP. Korzystną kombinacjąjest ANMP-MG, ANMPTM i ASMP-CA. Korzystnie, stężenie ANMP wynosi 0,1-5% (obj/obj), zaś stężenie ASMP wynosi 0,1-50 mg/ml. Najkorzystniejszą kombinacją jest ANMP-MG7274, ANMP-TM7279 i ASMP-CA9656.

Dalsze korzystne kompleksy antygenowe według wynalazku obejmują, przykładowo: ASMP i AEMP albo ASMP, AEMP i ANMP w stężeniach ANMP wynoszących 0,1-5% (obj/obj), zaś ASMP i AEMP 0,1-50 mg/ml.

Preparaty antygenowe według wynalazku mogą być podawane wraz z odpowiednimi dopuszczalnymi fizjologicznie nośnikami, które nie wywołują niepożądanych fizjologicznych efektów ubocznych i obejmują bufory, roztwory albo adiuwanty, przykładowo, roztwory soli, roztwory mleczanu albo roztwór Ringera. Korzystnymi nośnikami są, przykładowo: nośnik A - wodny roztwór, zawierający 0,85% (wag/obj) NaCl; nośnik B - wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid); nośnik C - pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).

Preparaty antygenowe według wynalazku mogą być podawane per se albo jako roztwory do wstrzyknięć, kremy, rozpylacze, aerozole, tabletki i inne postaci dawkowania znane specjalistom w dziedzinie. Preparaty antygenowe według wynalazku mogą dalej zapewniać skuteczne szczepionki.

Preparaty antygenowe według wynalazku są zdolne do pobudzania proliferacji komórek układu odpornościowego, i w ten sposób zdolne do modulowania reakcji odpornościowej. Preparaty antygenowe według wynalazku są dalej zdolne do hamowania proliferacji ludzkich keratynocytów.

Preparaty antygenowe według wynalazku mogą zapewnić znaczny stopień odporności na reakcje alergiczne, szczególnie tkanek nabłonkowych, w szczególności skóry. Są one interesujące z punktu widzenia zapobiegania i leczenia alergii i nie powodowały niepożądanych efektów ubocznych, co wykazano in vivo na zwierzętach doświadczalnych (tj. świnkach morskich i białych myszach) oraz koniach (tj. mieszańcach i koniach islandzkich).

W szczególności, ostre alergiczne zapalenia skóry i ubytki skórne mogą być skutecznie leczone bez objawów ubocznych przez podawanie preparatów antygenowych według wynalazku, tj. przez szczepienie. Po domięśniowym wstrzyknięciu (albo wstrzyknięciach) preparatów antygenowych według wynalazku, można spowodować zniknięcie objawów alergicznego zapalenia skóry, świądu i wrażliwości skóry osobników dotkniętych alergicznym zapaleniem skóry. Całkowite wyzdrowienie z wszystkich objawów alergicznych osiągnięto po 2 do

186 523 tygodniach po początkowym wstrzyknięciu, oraz spowodowano zoSknięcSe mrgżlimpści skóry wywołanej alergenem. Dalej, w ciągu 1-6 tygodni po ostatnim wstrzyknięciu znikał świąd.

W najkorzystniejszym wykonaniu, preparaty antygenowe według wynalazku zapewniają ochronę i zdrowienie w tzw. wyprysku letnim koni, zwłaszcza koni islandzkich. Po 1-3 wstrzyknięciach domięśniowych albo śróZskómych preparatów antygenowych według wynalazku konie dotknięte wypryskiem letnim mogą być wyleczone albo dhrppSpoo przez wypryskiem letnim, przy czym korzystne są kompleksy 1 i 1.1.

W dalszym korzystnym mokongoiu, preparaty antygenowe według wynalazku dostarczają ochrony i leczenia łysienia u ssaków. Po 1-3 mstrzokpSędiach domięśniowych albo śródskórnych preparatów gptygeopmoch według wynalazku ssaki dotknięte łysieniem mogą być mylecapoe albo chronione przed łysieniem, przy czym korzystne są kompleksy 1 i 1.1.

W jeszcze dalszym korzystnym wykonaniu, preparaty antygenowe według wynalazku poprawiają. stan włosów i sezonowej zmiany pokrywy włosowej ssaków. Po 1-3 wstrzyknięciach domięśniowych albo śródskómych preparatów antygenowych według wynalazku stan sierści może ulec istotnej poprawie, zaś u osobników dotkniętych niecałkowitą sezonową zmianą. pokrywy włosowej może spowodować całkowitą zmianę sierści, przy czym korzystne są kompleksy 1 i 1.1.

W innym korzystnym mokoogoiu, preparaty antygenowe według wynalazku dostarczają ochrony i leczenia wyprysku. Po 1-3 wstrzyknięciach domięśniowych albo śródskórnych preparatów antygenowych według wynalazku ssaki, w tym ludzie, dotknięte moproskiem mogą być wyleczone albo chronione przed wypryskiem, przy czym korzystne są frakcje ASMP-MG, ASMP-CA i ASMP-TM, tj. ASMP-MG7274, ASMP-CA9656 iASMP-TM7279 albo kompleksy 1 i 1.1.

W innym korzystnym mokoogpSu, preparaty antygenowe według myoglgaku dostarczają ochrony i leczenia zapalenia nerwowo-skórnego. Po 1-3 wstrzyknięciach domięśniowych albo śróds^imy^ preparatów antygenowych według mooglazku ssaki, w tym ludzie, dotknięte zapaleniem oermomo-skórnom mogą być wyleczone albo chronione przed wypryskiem, przy czym korzystne są frakcje ASMP-MG, ASMP-CA i ASMP-TM, tj. ASMP-MG7274, ASMPCA9656 i ASMP-TM7279 albo kompleksy 1 i 1.1.

Kompleksy antygenowe według wynalazku mogą być zastosowane w leczeniu z wielu wskazań, takich jak opisane w „Klinische Immuoplpgie”, Peter (wydawca), moZawpSctmp Urban & Schwarzen^^ 1991, Monachium, Niemcy, przykładowo:

1. choroby alergiczne dróg oddechowych

1.1. alergiczne zapalenie błony śluzowej nosa i spojówek

1.1.1. sezonowe zapalenie błony śluzowej nosa i spojówek

1.1.2. mSoseooe zapalenie błony śluzowej nosa

1.2. astma oskrzelowa

1.3. stan astmatyczny

1.4. astma u dzieci

1.4.1 choroba pbturadojna płuc po zakaźnym zapaleniu oskrzeli

1.4.2 łagodna odosobniona albo łagodna wiosenna astma oskrzelowa

1.4.3. silna wiosenna astma oskrzelowa

2. alergiczna aspergilloza oskrzelowo-płucna

3. alergie pokarmowe

3.1. alergia pokarmowa wywołana IgE

3.1.1 alergia pokarmowa niemowląt

3.1.2 alergia pokarmowa młodzieńcza i dorosła

3.2. alergie pokamiowe doy'WΌłίoee IgG i iimOocygmsi T

3.3. r^etoleapdcj a udeka kro w ii go

3.4. zespół Hemera

3.5. ggstroenterppatig epaooofSlowa

3.6. choroba traemoa (celiakia)

4. alergia na ukąszeni ©użądlenia cdvadóm

5. pplαaymkgme ws2ostkidhpostaciach

186 523

5.1. pokrzywka kontaktowa

5.2. pokrywka towazyysząca reakej om ahrgg^^^r^^mr

5.3. pokrywka tow-az/yząca nietolenmej i dodatków i bhhbbthrn^w s^nrtey prostaglandyn (pseudoalergia)

5.4. pokrzywka fizyczna

5.4.1. dermatografia (urticaria factitia)

5.4.2. pokrzywka cholinergiczna i adrenergiczna

5.4.3. pokrzywka wywołana zimnem

5.4.4. pokrzywka wywołana światłem

5.4.5. pokrzywka wywołana uciskiem

5.4.6. inne rzadkie postaci pokrzywki

5.5. pokrzywkowe zapalenie naczyń

5.6. maLstocytoza i pokrzywka barwnikowa

5.7. pokrzywka towarzysząca chorobom zakaźnym

5.8. pokrzywka towarzysząca zapaleniu tarczycy

5.9. pokrzywka i amyloidoza

6. obrzęknaczyniowy

6.1. Λw^<^<^2^r^t^^ot^r^^ik neurΌnaccyyrowyiHANI-)

6.2. nabyty obrzęk neuronaczyniowy

7. atopowe zaipalenie skóyy wyprysk atopowy

8. alergiana leki

Tabela 1:

Właściwości i charakterystyka Candida albicans DSM nr 9656

Właściwości i charakterystyka szczepu	DSM nr 9656	Szczep epidemiczny nr 008
Opis hodowli	10-dniowa hodowla na agarze Saburaud jest kremowo-gładka, mazista, połyskliwa i uniesiona, z centralnym zagłębieniem, brzeg kolonii jest regularny, o średnicy około 18-22 mm	10-dniowa hodowla na agarze Saburaud jest kremowo-gładka, mazista, połyskliwa, o pofałdowanych segmentach, brzeg kolonii jest nie regularny, o średnicy około 15-18 mm
Charakterystyka morfologiczna	sferyczne, owalne blastospory mierzące 3,5-5x5-8 fm, pseudowypustki szerokości 5-8 pm, wypustki szerokości 2-3 pm. Chlamydospory na agarze ryżowym mierzą 13-16 |am średnicy	sferyczne, owalne blastospory mierzące 3,5-5x5-8 pm, pseudowypustki szerokości 5-8 pm, wypustki szerokości 2-3 pm. Chlamydospory na agarze ryżowym mierzą 13-16 pm średnicy
Charakterystyka patogeniczna	30 dni po wstrzyknięciu dootrzewnowym białym myszom 10-100 min komórek drożdży, 80% zwierząt wykazywało ziaminiaki trzewne, nie obserwowano skutków letalnych	30 dni po wstrzyknięciu dootrzewnowym białym myszom 10-100 min komórek drożdży, 80% zwierząt wykazywało ziaminiaki trzewne, 40% zwierząt padło

Wynalazek dalej dotyczy Candida albicans szczepu DSM nr 9656, który otrzymano przez selekcję opartą na stabilizacji charakterystyki hodowlano-morfologicznej i atenuacji szczepu epidemicznego nr 008, któiy wyizolowano od człowieka w roku 1990.

Właściwości biologiczne Candida albicans szczepu DSM nr 9656 opisano w tabeli 1.

Szczep Candida albicans DSM nr 9656 różni się dalej od szczepu epidemicznego stabilnością populacyjną i charakterystyką morfologiczną podczas długotrwałego pasażowania na podłożach oraz niższą zjadliwością. Na podstawie opisu wytwarzania preparatów antygenowych według wynalazku, można wytworzyć z tego szczepu niezwykle skuteczne i bezpieczne preparaty antygenowe według wynalazku.

186 523

Specjalista w dziedzinie zauważy, że wynalazek może być łatwo adaptowany do przeprowadzenia i osiągnięcia wspomnianych korzyści. Związki, procedury i techniki opisane tu są dla najkorzystniejszych wykonań, są jedynie przykładowe i w zamierzeniach nie stanowią ograniczenia zakresu wynalazku.

Wynalazek opisany wyżej ogólnie będzie łatwiejszy do zrozumienia w odniesieniu do poniższych Przykładów dostarczonych tu jako ilustracja, nie zaś jako ograniczenie niniejszego wynalazku.

Przykłady

We wszystkich Przykładach, wirowanie wykonywano z siłą od 3000 do 3500 g, przez około 30-50 minut. Pożywki zakupiono wOxoid (Unipath GmbH, Am Lippeglacis 6-8, 46483 Wesel, Niemcy) albo w Serva (Serva Feinbiochemica GmbH & Co. KG, Carl-BenzStr. 7, 69115 Heidelberg, Niemcy). Jeżeli inaczej nie zaznaczono, grzyby hodowano jak to opisano w katalogu Serva (piąte wydanie niemieckie, uaktualnione) albo w EP 0564620.

Szczepy grzybów zastosowane do wytwarzania preparatów antygenowych według wynalazku uzyskano przez selekcję i atenuację szczepów grzybów opisanych w Mazkevitch, 1981, „Spontannaja ismetchivost i kariologia nesoverschennych gribov”, wydawnictwo Isdatelstwo Nauka, Moskwa; oraz Ivanova, 1992, „Sistematika, morphologicheskaja Chiar^i^l^^t^i*istika, biologitcheskich svojstva vosbuditielej dermatophitosov, obshih dljagivotnih i tcheloveka, Maskwa, Biblioteka Uniwersytetu Moskiewskiego. Podstawowe techniki hodowli kultur komórkowych ssaków można znaleźć w Doyle, Griffith i Newell (wyd.) Celi & Tissue Culture: Laboratory Procedures, John Willey Sons (1995). Do testu keratynocytów zastosowano komórki HaCaT (Boukamp i in., (1988), J. Celi. Biol., 106: 761-771; Ryle i in., (1989), Differentiation 40: 42-54), izolowane keratynocyty albo inne linie komórkowe keratynocytów mogą być również zastosowane. Limfocyty końskie izolowano i hodowano, jak to opisano w Friemel „Immunologische Arbeitsmethoden”, VEB Gustav Fischer Verlag, Jena, 1984; albo Paul „Fundamental Immunology”, Raven Press, Nowy York, 1984. Testy promieniotwórcze wykonano zasadniczo jak to opisano w Boehncke i in., 1994, Scand. J. Immunol., 39: 327-332 oraz w cytowanych tu odnośnikach. NaOH, KOH, HC1 i kwas octowy przygotowano jako roztwory wodne. Jeżeli inaczej nie zaznaczono, określenie „rozpuszczalne” dotyczy rozpuszczalności w wodzie. Fizjologicznie dopuszczalnymi nośnikami zastosowanymi w opisanych niżej doświadczeniach były: nośnik A - wodny roztwór, zawierający 0,85% (wag/obj) NaCl; nośnik B - wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid); nośnik C - pożywka RpMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).

Przykład 1

Rozpuszczalny materiał antygenowy, zawierający polisacharydy i/lub glikolipidy (ASMP) wytworzono z:

Trichophyton mentagrophytes (ASMP-TM), Microsporum gypseum (ASMP-MG) albo Candida albicans (ASMP-CA) według poniższej procedury:

Grzyby hodowano na płytkach agarowych, jak to opisano wEP 0564620. Biomasę grzyba pobrano i zastosowano do wytwarzania:

I. ASSM-TM (i) Biomasę Trichophyton mentagrophytes traktowano 4,5% (wag/obj) NaOH w około 140°C przez godzinę, a następnie odwirowano przez 45 minut. Do nadsączu dodano 4 M roztworu kwasu octowego do momentu uzyskania pH 3,5. Po 2 godzinach, osad zebrano przez odwirowanie i do nadsączu dodano 3 objętości etanolu. Osad powstały z precypitacji etanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

(ii) Biomasę Trichophyton mentagrophytes traktowano 0,2% (wag/obj) KOH w około 140°C przez godzinę, a następnie odwirowano przez 45 minut. Nadsącz traktowano 1 M roztworem HC1 przy pH 3,5 przez 4 godziny w 4-10°C. Osad zebrano przez odwirowanie i do 1 objętości nadsączu dodano 2 objętości etanolu. Osad powstały z precypitacji etanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

186 523

Π. ASMP-MG (i) Biomasę Microsporum gypseum traktowano 0,2% (wag/obj) NaOH w około 140°C przez 2 godziny, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 0,2% (wag/obj) NaOH w około 140°C przez 2 godziny, i ponownie odwirowano. Procedurę powtórzono po raz trzeci. Nadsącz traktowano 8 M roztworem kwasu octowego w pH 3,5 przez 3 godziny w 18-20°C. Osad zebrano przez odwirowanie i do 1 objętości nadsączu dodano 3 objętości etanolu. Osad powstały z precypitacji etanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

(ii) Biomasę Microsporum gypseum traktowano 3% (wag/obj) KOH wokoło 75°C przez 6 godzin, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 3% (wag/obj) KOH w około 75°C przez 6 godzin, i ponownie odwirowano. Powstały nadsącz traktowano 0,5 M roztworem HC1 w pH 3,5 przez 4-6 godzin w4-10°C. Osad zebrano przez odwirowanie i do 1 objętości nadisączu dodano 3 objc^^ośt^^ metanolu. Osad powstały z precypitacji cttanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

III. ASMP-CA:

(i) Biomasę Candida albicans traktowano 3% (wag/obj) NaOH wokoło 75°C przez godzin, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 3% (wag/obj) NaOH wokoło 75°C przez 6 godzin, i ponownie odwirowano. Powstały nadsącz traktowano 12 M roztworem kwasu octowego w pH 3,5 przez 2 godziny w4-10°C. Osad zebrano przez odwirowanie i do 1 obbi^i^i^^i^i nadsączu 2 objętości metanolu. O^^ti powstały z precypitacci etanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

(ii) Biomasę Candida albicans traktowano 4,5% (wag/obj) KOH w około 35°C przez 3 godziny, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 4,5% (wag/obj) KOH w około 35°C przez 3 godziny, i ponownie odwirowano. Procedurę powtórzono po raz trzeci. Nadsącz traktowano 0,25 M roztworem HC1 w pH 3,5 przez 4 godziny w 18-20°C. Osad zebrano przez odwirowanie i do 1 objętości nadsączu dodano 2 objętości etanolu. Osad powstały z precypitacji etanolem odwirowano i rozpuszczono w wodzie destylowanej. Na koniec, liofilizowano poszczególne preparaty ASMP.

Przykład 2

Nierozpuszczalny materiał antygenowy, zawierający polisacharydy i/lub glikolipidy (ANMP) wytworzono z: Trichophyton mentagrophytes (ANMP-TM), Microsporum gypseum (ANMP-MG) albo Candida albicans (ANMP-CA) według poniższych procedur:

Grzyby hodowano na płytkach agarowych, jak to opisano wEP 0564620. Biomasę grzyba pobrano i zastosowano do wytwarzania:

I. ANMP-TM:

(i) Biomasę Trichophyton mentagrophytes traktowano 0,2% (wag/obj) NaOH w około 35°C przez 24 godziny, a następnie odwirowano. Osad traktowano 0,3 M kwasem octowym przez około 3 godziny w około 60°C i przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną. Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono w roztworze wodnym 0,85% (wag/obj) NaCl (nośnik A) w stężeniu końcowym 0,5% (obj/obj) ANMP-TM. Preparat ANMP-TM przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

(ii) Biomasę Trichophyton mentagrophytes traktowano 0,2% (wag/obj) KOH w około 35°C przez 24 godziny, a następnie odwirowano. Osad traktowano 0,1 M HC1 przez około 30 minut w około 70°C i przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną. Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono w RPMi 1640 (nośnik C) w stężeniu końcowym 1,5% (obj/obj) ANMP-TM. Preparat ANMP-TM przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

II. ANMP-MG (i) Biomasę Microsporumgypseumtraktowako 3% (wag/obj) NaOHw około75°C przez 6 godzin, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 0,23% (wag/obj) NaOH w około 75°C przez 6 godzin, i ponownie odwirowano. Osad traktowano 0,7 M roztworem kwasu octowego przez 4 godziny w 60°C i przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną.

186 523

Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono w roztworze, zawierającym 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid) (nośnik B) w stężeniu końcowym 2,5% (obj/obj) ANMP-MG. Preparat ANMP-MG przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

(ii) Biomasę MięrosporumgAmseum traktowano 3% (wag(obj) KOHOokoło 35°C przez 3 godziny, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 3% (wag/obj) KOH w około 35°C przez 3 godziny, i ponownie odwirowano po czym powtórzono procedurę po raz trzeci. Powstały osad traktowano 0,5 M roztworem HC1 przez 30 minut w 80°C przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną. Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono wRPMI 1640 (nośnik C) w stężeniu końcowym 2,0% (obj/obj) ANMP-MG. Preparat ANMP-MG przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

ΙΠ. ANMP-CA:

(i) Biomasę Candida albicans traktowano 4,5% (wag/obj) NaOH w około 140°C przez godziny, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 4,5% (wag/obj) NaOH w około 140°C przez 2 godziny, i ponownie odwirowano, po czym powtórzono procedurę po raz trzeci. Powstały osad traktowano 1 M roztworem kwasu octowego przez godzinę w 60°C ί przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną. Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono wodnym roztworze 0,85% (wag/obj) NaCl w stężeniu końcowym 1,5% (obj/obj) ANMP-CA. Preparat ANMP-CA przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

(ii) Biomasę Candida albicans traktowano 4,5% (wag/obj) KOH wokoło 140°C przez godziny, a następnie odwirowano. Osad ponownie traktowano 4,5% (wag/obj) KOH w około 140°C przez 2 godziny, zaś powstały osad traktowano 0,1 M roztworem HC1 przez 30 minut w 100°C po czym powtórzono procedurę po raz trzeci. Powstały osad traktowano 0,5 M roztworem HC1 przez 30 minut w 80°C i przemywano pięciokrotnie wodą destylowaną. Każdy etap płukania poprzedzał wirowanie. Końcowy osad zawieszono w RPMI 1640 (nośnik C) w stężeniu końcowym 2,5% (obj/obj) ANMP-CA. Preparat ANMP-CA przechowywano jako zawiesinę w 2-10°C.

Przykład 3

Egzogenny materiał antygenowy, zawierający polisacharydy i/lub glikopeptydy (AEMP) wytworzono z hodowli płynnych: Trichęphytęn mentagrophytes (AEMP-TM), Microsporum gypseum (AEMP-MG) i Candida albicans (AEMP-CA). Płynne hodowle utrzymywano w warunkach zasadniczo jak to opisano wEP 0564620. Poszczególne preparaty AEMP otrzymano według poniższych procedur:

I. AEMP-TM: Trichophyton mentagrophytes inkubowano przez 240 godzin w26°C w 1000 ml wody destylowanej. Następnie, hodowlę, zawierającą około 1,2x10⁸ komórek/ml odwirowano. Nadsącz liofilizowano i rozpuszczono w 100 ml wody destylowanej, dodano objętości metanolu i rozpuszczono powstały osad w wodzie destylowanej. Nadsącz liofilizowano otrzymując AEMP-TM.

II. AEMP-MG: Microsporum gypseum inkubowano przez 50 godzin w 28°C w 200 ml nośnika C (pożywka RPMI 1640 z Serva). Następnie, hodowlę, zawierającą około 3x10⁷ komórek/ml odwirowano. Nadsącz liofilizowano i rozpuszczono w 20 ml wody destylowanej, dodano 2 objętości metanolu i rozpuszczono powstały osad w wodzie destylowanej. Nadsącz liofilizowano otrzymując AEMP-Mg.

III. AEMP-CA: Candida albicans inkubowano przez 30 godzin w 37°C w 800 ml nośnika B (5% (wag/obj) glukozy, 1%o (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid)). Następnie, hodowlę, zawierającą około 10* komórek/ml odwirowano. Nadsącz liofilizowano i rozpuszczono w małej ilości wody destylowanej, dodano 2 objętości metanolu i rozpuszczono powstały osad w roztworze wodnym. Nadsącz lięfilizęwanę otrzymując AEMP-CA.

Przykład 4

Badano wpływ różnych preparatów antygenowych na wzrost hodowli keratynocytów (linia komórek HaCaT).

I. Frakcje aatygenoweASMP-AM,ANMP-TM i ATMP-AMw-TwowonozTricSzphyc ton ment3grophytes DSM nr 7279, ASMP-MG, ANMP-MG i AEMP-MG wytworzone

186 523 z Microsporum gypseum DSM nr 7274 i ASMP-CA, ANMP-CA i AEMP-CA wytworzone z Candida albicans DSM nr 9656 zastosowano w różnych stężeniach. Frakcje ANMP wytworzone według Przykładu 2 liofilizowano i zawieszono w PBS (roztwór soli buforowany fosforanem o stężeniu fosforanu równym 6,7 mM w fizjologicznym pH równym około 7,2, zakupiony w Serva, nr kat. 17-516).

Do hodowli zastosowano 12-studzienkowe płytki hodowlane zFalcon (płaskodenne, pole powierzchni 9,6 cm²). Do każdej studzienki dodano 0,15 ml zawiesiny keratynocytów (komórki HaCaT) w gęstości około 1 miliona komórek na ml pożywki (RPMI 1640 z dodatkiem 10% (wag/obj) płodowej surowicy cielęcej), 2 ml pożywki i 0,02-0,1 ml frakcji antygenowej rozpuszczonej w PBS. Do studzienek kontrolnych nie dodano materiału frakcji. Hodowlę prowadzono w inkubatorze w 5% CO2 w temperaturze 37°C przez około 48 godzin, dopóki w studzienkach kontrolnych nie wytworzyły się zlewne pojedyncze warstwy komórek.

Zahamowanie wzrostu komórek określano przez porównanie pola powierzchni warstw komórek traktowanych frakcjami antygenowymi w porównaniu z kontrolą nie traktowaną, frakcjami antygenowymi (kontrole = 100%). Wyniki pokazano na tabeli 2 i 3.

Zahamowanie wzrostu komórek obserwowano przy stężeniu ASMP-MG równym 0,1 mg/ml i ASMP-CA 1 mg/ml. Dla ANMP (MG, TM i CA) nie obserwowano zahamowania w stężeniu 1 mg/ml. Dla AEMP-MG zahamowanie wzrostu komórek obserwowano w stężeniu 0,3 mg/ml, zaś dla AEMP-TM i AEMP-CA w stężeniu 1 mg/ml.

Przykład 5

Badano wpływ różnych frakcji antygenowych na proliferację limfocytów końskich.

Zastosowano frakcje antygenowe ASMP i AEMP szczepów grzybów T. mentagrophytes DSM nr 7279, M. gypseum dSm nr 7274 i C. albicans DSM nr 9656. Wytworzono zawiesinę około 40000 limfocytów (pochodzących z koni islandzkich) w ml pożywki. Pożywkę RPMI 1640 uzupełniono o 10% płodowej surowicy cielęcej. Hodowlę limfocytów prowadzono w 96-studzienkowych płytkach hodowlanych o dnie w kształcie U (Falcon nr 3077). 200 pl zawiesiny komórkowej rozdzielono do każdej ze studzienek, po czym dodano po 20 μ.1 frakcji antygenowej rozpuszczonej w PBS. Kontrole wykonano bez dodania frakcji antygenowych.

Płytki hodowlane inkubowano w 37°C z 5% CO2 przez 27 godziny. Następnie pożywkę hodowlaną zmieniono i dodano roztwór, zawierający ³H-tymidynę (1 μ.1 na studzienkę). Drugi etap hodowli prowadzono przez 12 godzin, a następnie hodowlę przemyto PBS. Proliferację komórek oceniano techniką testu radioaktywnego jak opisano w Boehncke i in., 1994, Scand,. J. Immunol., 39: 327-332. Pomiar proliferacji komórek wykonano przez porównanie hodowli badanych z kontrolnymi nie eksponowanymi na materiał frakcji antygenowych. Wartości kontrolne określono jako 100%. Wyniki pokazano w tabeli 4. Poszczególne frakcje antygenowe wykazują wpływ hamujący albo pobudzający na proliferację limfocytów.

Przykład 6

Przykład ten ilustruje typowe preparaty złożone. Kompleksy (od 1 do 5) opisane w tym Przykładzie wytworzono z Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279, Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo Candida albicans DSM nr 9656.

I. Kompleksl obejmuje ASMP-TM,ASMP-MM iMSMP-CM w^dpww^epodr^ dośniku, na przykład

	A	Stężenie [mg/ml]
KkAμlobe 1	B	C
ATMP-TM7274	5	10	30
ASMP-MG7274	5	10	30
ATMP-CA9656	5	10	30
	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C

186 523

Kompleks 1.1 obejmuje ASMP-MG i ASMP-CA w odpowiednim nośniku, na przykład

	A	Stężenie [mg/ml]
Kompleks 1	B	C
ASAP-GG7m74	5	10	30
ASAP-CA9656	5	10	30
	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C

II. Kompleks 2obejmuje jmuMP-TM, ANMP-MGiANMP-CA wodpowiednimnośni· ku, na przykład

	A	Stężenie [mg/ml]
Kompleks 2	B	C	D
AMAP-TA7m74	0,5	1,0	1,5	2,5
AMAP-AG7m74	0,5	1,0	1,5	2,5
AMMP-CA9656	0,5 zawiesina w nośniku A albo B albo C	1,0 zawiesina w nośniku A albo B albo C	1,5 zawiesina w nośniku A albo B albo C	2,5 zawiesina w nośniku A albo B albo C

III. Kompleks 3 obejmuje AEMP-TM, AEMP-MG i AEMP-CA w odpowiednim nośni ku, na przykład _

	A	Stężenie [mg/ml]
Kompleks 3	B	C
AEMP-TA7m74	5	10	30
AEAP-AG7274	5	10	30
AEMP-CA9656	5	10	30
	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C	w nośniku A albo B albo C

IV. Kompleks 4 obejmujeAMAΠ^> i AEMP w odpowiednim nośniku, na przykład (i) Kompleks

4.1 AMAP-CA9656 2,5% (obj/obj)

AEMP-TA7279 7,1 mg/ml w nośniku A albo B albo C (ii) ._

	Stężenie
Kompleks 4.2	A	B
AMMP-AG7m74	2,5% (obj/obj)	3,0% (obj/obj)
AMAP-TA7279	2,5% (obj/obj)	3,0% (obj/obj)
AEMP-TA7279	10,5 mg/ml w nośniku A albo B albo C	18,5 mg/ml w nośniku A albo B albo C

186 523

IV. Kompleks 5 obejmuje ASMP i ANMP w odpowiednim nośniku, na przykład

	Stężenie
Kompleks 5	A	B
ANMP-MG7274	1,75% (obj/obj)	3% (obj/obj)
ANMP-TM7279	175% (obj/obj)	3% (obj/obj)
ASMP-CA9656	15,6 mg/ml w nośniku A albo B albo C	15,6 mg/ml w nośniku A albo B albo C

Przykład 7

Bezpieczeństwo różnych preparatów antygenowych badano w doświadczeniach nad szczepieniem w różnych zwierzęcych modelach (białe myszy, świnki morskie i konie).

Frakcje antygenowe wytworzono jak to opisano w Przykładzie od 1 do 3 i 6 z Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279, Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo Candida albicans DSM nr 9656.

Poniższe obserwacje kliniczne dotyczące stanu szczepionych zwierząt dokonywano codziennie przez pięć dni po każdym szczepieniu:

1. Stan ogólny

- apetyt

- wpływ na poruszanie się

2. Reakcje miejscowe

- obrzęk i stan zapalny w miejscu wstrzyknięcia

- zmiany temperatury w miejscu wstrzyknięcia

- ból w miejscu wstrzyknięcia

- konieczność leczenia miejscowego w miejscu wstrzyknięcia

I. Preparaty antygenowe wstrzykiwano raz albo dwa razy w odstępach 10-dniowych dootrzewnowo białym myszom oraz dootrzewnowo albo podskórnie świnkom morskim. Preparaty antygenowe, ich stężenia i wyniki pokazano na tabeli 5 i 6 (A i B). Wstrzyknięcia podskórne albo dootrzewnowe antygenów grzybówjako preparaty proste albo złożone w większości nie wykazywały szkodliwych efektów ubocznych na stan ogólny zwierząt i nie obserwowano reakcji miejscowej w miejscu wstrzyknięcia.

II. Preparaty złożone antygenów grzybiczych jak opisane w Przykładzie 6 (kompleksy

4.1, 4.2 i 5) wstrzykiwano domięśniowo koniom w różne miejsca (lewa i prawa strona szyi oraz jeden z mięśni piersiowych). Szczepiono trzy różne konie: (i) źrebną klacz, (ii) źrebię w wieku 7-8 miesięcy i (iii) ogiera w wieku 6 lat. Preparaty antygenowe, ich stężenia i wyniki podano w tabeli 7.

Domięśniowe wstrzyknięcie antygenów grzybiczych jako preparaty złożone nie wykazywało wpływu na stan ogólny koni i nie obserwowano reakcji miejscowych w miejscu wstrzyknięcia. Badanie to pokazało doskonałe bezpieczeństwo preparatów antygenowych według wynalazku.

Przykład 8

Badano wpływ różnych preparatów antygenowych na stan skóry i pokrywy włosowej białych myszy.

Preparaty antygenowe wytworzono jak to opisano w Przykładzie od 1 do 3 i 6 z Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279, Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo Candida albicans DSM nr 9656.

Preparaty antygenowe wstrzykiwano dwa razy w odstępach 10-dniowych dootrzewnowo białym myszom. Obserwacje stanu skóry i pokrywy włosowej prowadzono przez pięć dni. Preparaty antygenowe, ich stężenia i wyniki podano w tabeli 8. Wstrzyknięcia preparatów antygenowych poprawiały stan skóry i pokrywy włosowej białych myszy w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi dotkniętymi zapaleniem skóry.

186 523

Przykład 9

Skuteczność trzech różnych preparatów antygenowych badano przez szczepienie koni islandzkich dotkniętych wypryskiem letnim w badaniu kontrolowanym placebo.

Preparaty gptygeoome wytworzono jak to opisano w Przykładzie od 1 do 3 i 6 z Trichophotpo meotagrophytes DSM nr 7279, Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo CgodiZg albidgos DSM nr 9656. Objętość 1 ml Nośnika A, zawierającego poszczególny preparat antygenowy trzykrotnie wstrzykiwano domięśniowo koniom. Wstrzyknięcia podawano w odstępach pięciodniowych naprzemiennie w lewą i prawą stronę mięśnia piersiowego. Preparaty antygenowe, ich stężenia i mooikS podano w tabeli 9 i 10.

Podawanie preparatów antygenowych, zawierających ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 i ASMP-CA9656 powodowało całkowite myloczeoSe wszystkich szczepionych koni (3) w cztery tygodnie po trzecim wstrzyknięciu. Konie w grupie kontrolnej (wstrzyknięcia nośnika A bez gptyreohm) oso wykazywały objawów zdrowienia.

Przykład 10

Bezpieczeństwo trzech różnych preparatów antygenowych badano przez szczepienie koni islandzkich dotkniętych wypryskiem letnim w badaniu kootrolpmgoom placebo.

Preparaty antygenowe wytworzono jak to opisano w Przykładzie od 1 do 3 i 6 z Trichophytpo meotagrpphytes DSM nr 7279, Micipspρrum gypseum DSM nr 7274 albo CgodiZg albicans DSM nr 9656. Objętość 1 ml nośnika A, agmierąjącegp poszczególny preparat aotygeopdy trzykrotnie wstrzykiwano domięśniowo koniom. Wstrzyknięcia podawano w odstępach pięciodniowych naprzemiennie w lewą i prawą stronę mięśnia piersiowego. Zwierzęta obserwowano pod kątem objawów ubocznych w ciągu trzech dpi po każdym wstrzyknięciu. Preparaty gotogeopme, ich stężenia i mooSki podano w tabeli 11.

Ogólne objawy uboczne takie jak gorączka albo utrata apetytu oie były obserwowane. Tylko jeden z preparatów antygenowych wywołał obrzęk w miejscu wstrzyknięcia. Ten niewielki objaw uboczny obserwowano tylko u jednego kopia. Nie obserwowano oznak bólu.

Przykład 11

Skuteczność przecimalergiczną pojedynczych ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 i ASMP-CA9656 jak również kompleksu 1, zawierającego pojedynczych ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 i ASMP-CA9 badano oa modelu zwierząt doświadczalnych.

Poszczególne frakcje wytworzono, jak to opisano w Przykładzie 1. Kompleks 1 wytworzono jak to opisano w Przykładzie 1 i 6.

Myszy CF-1 uczulano według modelu i instrukcji zawartych w Mouse Ear Smelliog Test (test obrzęku ucha u myszy) (Gad i in., Developmeot aoZ Validgtioo of ao Alteroative Dermal Sensitizatioo Test: The Mouse Ear Smelling Test (MEST). ^χ^^ιο aod Applied Phgrmgdplogy 84:93-114, 1986). Model teo jest dobrze zoaoy, potwierdzony i zaakceptowany przez OECD Zo badania substancji alergicznych. Aby dowieść skuteczności kompleksu albo jego pojedynczej frakcji jako leku praecimgldrricaoego należy zapobiec wywołanemu alergenem obrzękowi ucha u zwierzęcia laboratoryjnego. Przeprowadzono badanie ślepej próby kontrolowane placebo oa myszach z użyciem dwóch różnych alergenów:

Wykonano MEST oa myszach CF-1, które są najbardziej wrażliwe oa alergeny. 6-10tygodniowe myszy CF-1 przygotowano przez pgplepSe skóry brzucha, wstrzyknięcie 0,05 ml gZiuwgotu Freuoda i nałożenie 100 jal alergenu, l-chloro-2,4-dinitrochlprobenzeou (DNCB) w jednym doświadczeniu i alergenu roztoczy w drugim oa ogoloną skórę brzucha w dniach od 0 do 4. Siedem dni później, na badane ucho nałożono 20 μΐ alergenu, zaś na ucho kontrolne roztworu nośnika. 24 i 48 godzio później mierzono grubość ucha. Tę samą procedurę przeprowadzono oa grupie kontrolnej, którą leczono placebo zamiast kompleksem albo frakcją kompleksu.

Podawanie pojedynczej frakcji ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 i ASMP-CA9 jak również kompleksu 1, zawierającego ASMP-MG7274, ASMP-TM7279 i ASMP-CA9 pomoZomałp 90%o zmniejszenie obrzęku ucha po uczuleniu DNCB w 48 godzio po ponownej ekspozycji, w porównaniu z grupą kontrolną.

186 523

Przykład 12

Skuteczność preparatu złożonego, zawierającego preparaty antygenowe ASMPMG7274 i ASMP-CA9656, wytworzone jak to opisano w Przykładzie 1 wykazano przez szczepienie koni islandzkich dotkniętych wypryskiem letnim.

Wstrzyknięcie podskórne objętości 0,4 ml nośnika A zawierającego 0,2 mg MG albo 0,2 mg CA trzykrotnie, w odstępach pięciodniowych, powodowało wyleczenie szczepionych koni w trzy tygodnie po ostatnim wstrzyknięciu, czego dowiedziono zmniejszeniem objawów klinicznych. Nie obserwowano objawów ubocznych.

Przykład 13

Skuteczność preparatu antygenowego wytworzonego jak to opisano w Przykładzie 1 (ASMP) z Microsporum gypseum DSM nr 7274 wykazano przez szczepienie 41-letniego mężczyzny cierpiącego na wyprysk ze stanem zapalnym, świąd i owrzodzenie skóry pomiędzy palcem 4 i 5 nogi.

Objętość 0,1 ml nośnika A zawierającego 0,4 mg ASMP-MG7274 wstrzyknięto podskórnie raz. Skóra powróciła do normalnego wyglądu w ciągu 4-5 dni po leczeniu.

Świąd zniknął po 24 godzinach od wstrzyknięcia. Nie obserwowano ciężkich objawów ubocznych.

Przykład 14

Skuteczność preparatu antygenowego wytworzonego jak to opisano w Przykładzie 1 (ASMP) z Candida albicans DSM nr 9656 wykazano przez leczenie zapalenia nerwowoskómego.

ASMP-CA9656 zmieszano z kremem, stosując „Kamili Hand und Nagelcreme” z f-my Procter&Gamble w stężeniu końcowym równym 60 mg/ml kremu. Preparat nałożono miejscowo 3-letniej dziewczynce cierpiącej na zapalenie nerwowo-skóme z żółtymi strupami na skórze obu uszu. Krem nakładano miejscowo na uszkodzoną część skóry raz dziennie przez 30 dni. Po leczeniu skóra powróciła do normalnego wyglądu. Nie obserwowano objawów ubocznych.

Przykład 15

Wykazano skuteczność preparatu antygenowego wytworzonego według Przykładu 1 (ASMP) z Microsporum gypseum DSM nr 7274 w leczeniu wyprysku.

ASMP-MG7274 zmieszano z kremem, stosując „Kamili Hand und Nagelcreme” z f-my Procter&Gamble w stężeniu końcowym równym 60 mg/ml kremu. Preparat nałożono miejscowo 30-letniemu mężczyźnie cierpiącemu na wyprysk ze stanem zapalnym i świądem na palcu prawym na miejsce zajęte raz dziennie przez 30 dni. Spowodowało to całkowite wyleczenie. Świąd zniknął w kilka dni po rozpoczęciu leczenia. Nie obserwowano efektów ubocznych.

Przykład 16

Skuteczność preparatów antygenowych wytworzonych według Przykładu 1 (ASMP) z Microsporum gypseum DSM nr 7274, Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i Candida albicans DSM nr 9656 badano przez szczepienie 5-letniego konia, który nie zmienił sierści do czerwca. Objętość 1 ml nośnika A zawierającego 15 mg każdego z preparatów antygenowych ASMP-TM7274, ASMP-MG7279 i ASMP-CA9656 (stężenie końcowe 45 mg ASMP/ml) wstrzyknięto trzykrotnie w odstępach 5-dniowych domięśniowo, co spowodowało całkowitą sezonową zmianę sierści w ciągu 15 dni. Nie obserwowano objawów ubocznych.

Przykład 17

Wykazano skuteczność preparatów antygenowych wytworzonych według Przykładu 1 (ASMP) z Microsporum gypseum DSM nr 7274, Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i Candida albicans DSM nr 9656 w leczeniu łysienia.

7-letnim koniom, cierpiącym na łysienie wstrzyknięto raz w 3-5 i raz w 7-10 różnych miejsc szczepionkę zawierającą 10 mg każdego z preparatów antygenowych ASMP-TM7274, ASMP-MG7279 i ASMP-CA9656 (stężenie końcowe 30 mg ASMP/ml) w 1 ml nośnika A. Szczepionkę wstrzyknięto trzykrotnie w odstępach 5-dniowych domięśniowo co spowodowało całkowite przywrócenie sierści u obu koni w 10 dni po ostatnim podaniu. Nie obserwowano objawów ubocznych.

186 523

Przykład 18

Wykazano skuteczność preparatów antygenowych wytworzonych według Przykładu 1 (ASMP) z Microsporum gypceum DSM nr 7274, Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i Candida albicH^ DSM nr 9656 w leczeniu łysienia u koni.

10-letniemu koniowi, cierpiącemu na łysienie wstrzyknięto raz w 10-12 różnych miejsc szczepionkę zawierającą 15 mg każdego z preparatów antygenowych ASMP-TM7274, ASMP-MG7279 i ASMP-CA9656 (stężenie końcowe 45 mg ASMP/ml) w 1 ml nośnika A. Szczepionkę wstrzyknięto trzykrotnie w odstępach 5-dniowych domięśniowo co spowodowało całkowite przywrócenie sierści u obu koni w 15 dni po ostatnim podaniu. Nie obserwowano objawów ubocznych.

Przykład 19

Wykazano skuteczność preparatów antygenowych wytworzonych według Przykładu 1 (ASMP) z Microsporum gypseum DSM nr 7274, Trichophyton mentagropŁytes DSM nr 7279 i Candida albicans DSM nr 9656 w leczeniu łysienia u psów.

3-letniej suce, cierpiącej na łysienie wstrzyknięto raz w 2-3 różne miejsca szczepionkę zawierającą 10 mg każdego z preparatów antygenowych ASMP-TM7274, ASMP-MG7279 i ASMP-CA9656 (stężenie końcowe 30 mg ASMP/ml) w 1 ml nośnika A. Szczepionkę wstrzyknięto trzykrotnie w odstępach 5-dniowych domięśniowo co spowodowało całkowite przywrócenie sierści u obu psów w 15 dni po ostatnim podaniu. Nie obserwowano objawów ubocznych.

Przykład 20

Wykazano skuteczność preparatów antygenowych wytworzonych według Przykładu 1 (ASMP) z Micrcspcrum gypseum DSM nr 7274, Trichophyton mentaurophytec DSM nr 7279 i Candida albicans DSM nr 9656 w leczeniu łysienia u psów.

Dwóm psom, 5-letniemu i 8-letniemu, cierpiącym na łysienie wstrzyknięto raz w 2-4 różne miejsca szczepionkę zawierającą 15 mg każdego z preparatów antygenowych ASMPTM7274, ASMP-MG7279 i ASMP-CA9656 (stężenie końcowe 45 mg ASMP/ml) w 1 ml nośnika A. Szczepionkę wstrzyknięto trzykrotnie w odstępach 5-dniowych domięśniowo co spowodowało całkowite przywrócenie sierści u obu psów w 30 dni po ostatnim podaniu. Nie obserwowano objawów ubocznych.

186 523

Tabela 2.

Wpfyw stężema różbiych frakcji antygenowy^ na wzrost liodowii komórek keratynocytów. (komórki HaCat w prscenjach w porównaniu do kontroii nie rkspsaswangS na Ι^*j^^·t<;r^e antygenowe (jrdnswarsW°owe zlewni hodowlee komórkowe kontroii = 100%).

	CM		O	O	O	O	O	O	O	O	O
	1,75		o	o	CM	UD CM	UD CM	UD CM	o	UD CM	o
	ud		o	o	UD	O	UD	O	o	UD	o
		CM	UD	CM	UD		UD
	1,25	porównanm z kontrolą	o	o	O UD	75	O UD	UD r-	o	75	O UD
		UD		U*ł	UD	UD	UD	UD	UD	UD
	CM				r-	Γ-	r-	r-
stężemi frakcji αntygeaowgS [mg/ml]	0,6	ud cm	UD CM	100	100 1	100	100	o UD	001	100
0,45	pcHe pokryte przez komórki w prscenjach w	UD CM	O UD	001	100	100	— 100	UD r~-	100	100
θ'	o UD	75 1.	100	100	100	1- 100	UD	' 100 i______________	100 i
θ'	UD r-	100	100	001	|- 100	001 i	100	100 1	100
	0,03	100	100 ..	100	100	i- 100	1- 100	100	100	100 i
	0,015	001	100	100	100	100	100	001	001	001
	O o		100	100 1	001	100	100	100	100	100	100
	0,007		100	100 1	100	100	100	001	o o	100	001
	0,003		001	-1 001	100	1 100	100	001 1	001	100	001
frakcja antygenowa			ASMP- MG7274	ASMP- TM7279	ASMP- CA9656	ANMP- MG7274	ANMP- TM7279	ANMP- CA9656	AEMP- MG7274	AEMP- TM7279	AEMP- CA9656

186 523

Λ

U ce

X £

Ό ο

Ο

C £

J— <ϋ ο

ε ο

ο

-Ο ce

Η c

Λ

Ź ο

ε ce

Λ

X*

Ο

V) <υ &

σ ο

£ ο

ΟJ= u

Ο

C

4>

Οΰ £>

c

Λ

Ο (ΰ <fc

Ο >>

C <υ •Ν

0>

[ stężenie trakcji antygenowej [mg/ml]	AEMP	0,6	1,5	1,25 1 ’
ANMP		1,25	«ζγ
ASMP	ΓΛ O	0,45	1,25
szczep		MG7274	TM7279	CA9656

186 523

Tabeli a 4.

Wpfyw różnych frakcji antygenowych na proliferację komórkową końskich limfocytów.

pi^oh^^rajaa limfocytów końsk^h w % (kontrole bez ekspozycji na fiakrnie antygenowe = 100%)	AEMP- CA9656	1,08	46,9	138,3	138,3	149,8	146,3
AEMP- TM7279		10,2	47,3	133,3	94,8	109,9
AEMP- MG7274	19,4	76,1	129,7	147,8	143,5	104,7
ASMP-CA9656	37,8 .. ... .	109,8	119,8	134,1	181,5	144,7
ASMP- TM7279	1 36,2	6‘90l	172,8	93,8	94,3	207,6
ASMP- MG7274	<C 00		oo	Γ 98,6	271,3	146,7
i stężenia frakcji antygenowych [(Hg/ml]	500	o	*/Ί	νγ θ'	0,05	0,005

186 523 o

c u

OD

O'

Φ3

X

O >>

J=

X <υ

N

O

N (/>

O

CL

Q>‘

N < Έ «ΖΊ CL cd Q — CL O X) «t 2 ί—ι I

CM u

o fr (Λ >.

S u

co

X $

X o

>>

c

X

X ,C0 'ET

CO o

CĆ

reakcje letal- ne	o	O	O	O	O	O	O	O	O
pogorszenie ruchliwości	o	o	o	o	o	o	o	o	o
zujących: utratę apatytu	o	o	o	o	o	o	o	o	o
liczba zwierząt wyka miejscowy wzrost temperatury	o	o	o	o	o	o	o	o	o
1 miejscowy odczyn	o	o	o	—	CM	-	-	-	-
miejscowy ból	o	o	o	o	O	o	o	o	o
liczba zaszczepionych zwierząt	o	o	O\	00	o	o	o	o	o
objętość iniekcji [ml]	1 0,5	0,5	0,5	un o	0,5	0,5	0,5	ι/γ o*	0,5
stężenie [mg/ml] lub [% (v/v)]	10,5 mg/ml	12,5 mg/ml	15,5 mg/ml	3,3%	3,3%	3,3%	15,5 mg/ml	11,3 mg/ml	13,5 mg/ml
frakcja antygenowa i	ASMP-MG7274	ASMP-TM7279	ASMP-CA9656	ANMP-MG7274	ANMP-TM7279	ANMP-CA9656	AEMP-MG7274	AEMP-TM7279	AEMP-CA9656

186 523

Tabela 5B.

Reakcja badanych zwierzą po „pierw/szej iniekcji prepaaatów złożonych

reakcje letalne	biaee mysyy (ciężar ciaaa 12-14 g)	©	O	O	świnki morskie (ciężar ciaaa 150-2000 g)	©	©	©
pogorszenie ruchliwości	o	o	o	©	©	©
a/ujących: utratę apetytu	o	o	o	©	©	©
;ba zwierzą wyki miejscowy wzrósł temperatury	©	o	o	©	©	©
licz: Aioeeckwy odczyn	o	o	o	©	©	©
mieesckóy ból	o	o	o	©	©	©
liczba zaszcze- pionych zwierząt 1	o	o	©	tn	m	•n
objętość iniekcji [ml]	in θ'	«η θ'	tn ©	tn ©°	tn ©	tn ©
stężenie [mg/mlj lub [% (v/v)]	2,5% 2,5% 10,5 mg /ml	2,5% 7,1 mg/ml	1 1,75% 1,75% 15,6 mg /ml	2,5% 2,5% 10,5 mg/ml	2,5% 7,1 mg/ml	1,75% 1,75% 15,6 mg/ml
z	Tj7		tn	CM TT		<n
prep^^^^j złozony	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ATMP-CA9656

186 523

4=

Ο

Ο

C ω

οβ ο

σ3 ¢=

-C

Ο .5

Ό

Οβ <υ

Ν

Ο

Ν £Λ

Ο

G,

Ο ω

<

V©

Οβ

Ο

Ο,

Οβ rt υ X)

Ύ

CD <υ ίί a

Ο

Ο £

<ζ>

>>

ε <υ

Ίδ

LS ΐ

Ο >χ

C

Ό

-Ο

Ο

CC <υ α:

reakcje letalne	O	O	O	O	O	O	CO	O	O
pogorszenie ruchliwości	o	o	o	O	o	CO	O	o	co
ykazuj ących: utratę apetytu i	o	o	o	O	CO	co	O	co	o
iczba zwierząt w miejscowy wzrost temperatury	o	o	o	o	o	CO	O	o	co
li miejscowy odczyn	o	o	o	-	CD	-	—	—	-
miejscowy ból	o	o	o	o	o	o	o	o	o
liczba zaszczepionych zwierząt	o	o	o	00	o	o	CO	co	o
objętość iniekcji [ml] 1		CO	co	0,5	1- ’ 0,5	<o	0,5	<o	0,5
stężenie [mg/ml] lub [% (v/v)]	10,5 mg/ml	-1 12,5 mg/ml	15,5 mg/ml	s® σγ	3,3%	X® o' cn f*?	15,5 mg/ml	11,3 mg/ml	13,5 mg/ml
frakcja antygenowa	ASMP-MG7274	ASMP-TM7279	ASMP-CA9656	ANMP-MG7274	ANMP-TM7279	ANMP-CA9656	AEMP-MG7274	AEMP-TM7279	AEMP-CA9656

186 523

Tabela 6B.

Reakcja badanych zwierząt po „Ζπ©εί iniekcji” preparat^wiA' złożonych

reakcje ^talne	biaee myzoy (ciężat diaja 12-14 g)	O	O	O	świnki morskte (ciężat ^313 150-200 g)	O	©	O
pogorszenie ruchliwOści	o	o	o	o	o	o
okazujących: utratę apetytu	o	o	o	o	o	o
liczba amieraκtt w mioCsdpmo wzrost temperaturo	o	o	o	o	o	o
mioCsdPmo odczyn	o	o	o	o	o	o
mioCsdPmo ból	o	o	o	o	o	o
liczba zaszczepionych zwierząt	o	o	o
objętość ΐο^^^ΐί [ml]	ι/Ί θ'	O	νγ θ'	©		o
stężenie [mg/mlj lub [%(v/v)]	2,5% 2,5% 10,5 mg /ml	2,5% 7, t mg/ml	1,75% 1,75% 15,6 mg /ml	r ........... 2,5% 2,5% 10,5 mg /ml	2,5% 7, i mg/ml	1'· ' — ' ' ' 1,75% 1,75% 15,6 mg/ml
U. z	Cd			Cd	'Ft
propajat złożony	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656

186 523 <υ c

o •N

O

Tabela

ólnione: utrata zwierząt	O
ych reakcje uog pogorszenie ruchliwości	o
ii wykazując utratę apetytu	o
liczba kor wzrost temperatury	o
i wykazujących ; miejscowe obrzęk/zapalenie	o	O	O
liczba koni reakcje ból	o	o	o
liczba zaszczepionych koni	rc
objętość iniekcji [ml]	0,5	0,5	0,5
stężenie [mg/ml] lub [%(v/v)]	3,0% 3,0% 18,5 mg /ml	3,0% 15,6	£ £ « O ic rc rc
Nr	CM C
preparat złożony	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656

186 523

Tabeli a 8.

Stan skóyy i pokrywy włosowei po wstrzyknięciu złożonych prepaaatów antygenowych biayym myzoom (cię^r^^r citłla 12-14 g).

ujj^cycr następcjysy stan ęj po zaszczepieniu: zmierzwiona i matowa	O	O	O	—
liczba zwierząt wykaz pokrywy^ włosow gładka i błyszcząca |	CM	co	-	04
[t wykazujących y stan skóry izepieniu: gładka	Ol	co	-	O
liczba zwierzą następujcy po zaszc łuszcząca	O	o	o	CO
liczba zwierząt	Ol	co	-	co
ce OJO τ Ξ £ Ό	<o	1,0	1,0	1
pierwsza |	θ'	0,5	θ'	1
stężenie (mg/mli lub [%(v/v)]	2,5% 2,5% 10,5 mg /ml	£ % oOl	1,75% 1,75% ! 15,6
U- z	ίΝ rr		iO	i
preparat złożony	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 AEMP-TM7279	ANMP-CA9656 AEMP-TM7279	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ASMP-CA9656	nir zaszczepione

186 523

S

JĘ>

eO (U

N

OJ)

U

O &

i o

Ό x

o co ‘2 o

CO c

co c

CO

CN

Λ

O

X

H r

o c

li

OJ) £*

cztery tygodnie po trzecim szczepieniu: liczba koni wyleczonych | nie wyleczonych z letniej egzemy	o	rc	C4
rc	O	—
liczba zaszczepionych koni:		rc	rc	rc
liczba iniekcji		rc	rc	rc
objętość iniekcji [ml]		-	-	-
stężenie [mg/ml] lub [%(v/v)] i _1		10 mg/ml 10 mg ml 10 mg/ml	χθ χθ χθ ox ox ox	10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml
u.		—	CM	rc
1 preparat złożony		ASMP-MG7274 ASMP-TM7279 ASMP-CA9656	ANMP-MG7274 ANMP-TM7279 ANMP-CA9656	AEMP-MG7274 AEMP-TM7279 AEMP-CA9656

186 523

Tabela 10.

Skuteczność szczepienia różnymi złozonymi preparatami antygenowymi okreśLna na koniach isla^r^<^:k<ich dotkniętych egzemą letnią

-------

?ecśm szczepieniu: /leczonych egzemy	cn	O	—	O
cztery tygodme po tr; liczba koni w; ze swędzenia |	m	-	CM	o
-, liczba zaezazepiorach koni:	cn	cn	cn	cn
liczba iniekcji	cn	m	cn	cn
objętość iniekcji [ml]	-	-	-	-
stężeme puezazególnyhh frakcji [mg/ml] lub [% (v/v)]	10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml	NP nP ox ©x ©x	10 mg/ml 10 mg/ml 10 mg/ml	(kontrola)
Z	-	CM	cn	1
prepaaai złożony	ASAP-AG7274 ASAP-TA7279 ASAP-CA9656	ACAP-AG7274 ATAP-TA7279 ANAP-CA9656	AEAP-AG7274 AEAP-TA7279 AEAP-CA9656	brak antygenu (jedyme nośnik A)

186 523 rt¹ β

rt £

ο

Ν <υ

£ fi

Ό

C ‘5.

α>

Ν ο

Ν

Ό ·</}

Ο

Ο ο

Οη

ε 03 3 ο. X .Σ’ α> c ·- Ο £ cn & ° X Ό Ό

.2 ’£ <υ ‘Ł ω Ν Ο

utrata apetytu

©

©

©

©

00 ο ·=

ζ/5

Ν

ε

§ §

ο

rt

-* ο

-Ł

&

©

©

©

©

03 X)

u.

X 3

Ο

Ν

00

Ο

od -w

α> — C £ >-» ΟΊ

.2 ’£

ból

©

©

©

©

? Ο

<D

Ο Ό Ο CZ5

α. <υ

I ε

ο Ν

ε

<Ζ)

Ν β

ε

'5 g S -§

Ο ο Ν

rzęk

©

©

©

ε

X

liczba tami

o

1 t>

Ν

Ο <- $ “S

<S £>

Ν C

ο

<n

m

m

ΟΊ

rt .2 X C-

Ν

.2

rt ’ο1

Έ

Ν ς}

m

m

m

m

X .C

j-1

ό ε

SZł lZL

ο α> ·£7>

1 ,

2Ξ1 ·*

ο .ε

c

1—-

ε

~0Ϊ) Ζ £ £,

ml

ε

<

ε

ε

ε

cO

oO

oO

ii?

Jś?

ISO

'oto

~o0

o J—

.ε £

ε

ε

ε

ε

ε

ε

C

C '—'

©

©

©

©

©

©

O

•Ν 3

r—

α> — ŁC

i—

ζ

CM

m

1

x“~\

>>

ο»

X

Os

X

os

_ <

C

r-

r*

r-

tn

Γ-

r-

3

ο

CM

CM

X

CM

CM

X

CM

CM

C

Γ-

r-

o

r-

Os

r-

r-

Os

O ’3 oo c ę? nz>

*Ν

o

<

CJ

Σ

<

CJ

Σ

<

Σ

H O.

u

Σ

l- 1 0-

CJ

f— CL

u

c c

rt ν-

CL

oL

CL

0-

CL

CL

°3 ω

rt α.

Σ

Σ

Σ

Σ

Σ

Σ

Σ

Σ

Σ

c Λ >*

ο

on

00

on

Z

Z

Z

ω

ω

ω

~ θ'

Ł

<

<

<

<

<

<

<

<

<

X <□ O

186 523

Tal· ea s 12. Widma NMR

O·

0 ε UD CU ~ cx

o·

0,95 ppm I

1- 0,955 ppm

0,85-0,95 ppm

0,841-1,08 ppm

o·

1,7-^31/15 ppm

CH2 (AcB,16H) 277 ppm/2,5 ppm

3,288 ppm

1- 2,1-3,3 ppm

1- 1,6-342 ppm

multiplet aminokwasów

3,2-4,3 ppm

1- 4,9)-55,4 ppm

3,4-4, 6 ppm

4,9-5,24 ppm

3,9-4,35 ppm

5,0-5,25 ppm

3,2-4,07 ppm

CH3(d, 8,2Hz) 4,655 ppm

CH3 (d, 4,0Hz) 5,23 ppm

triplet aminokwasów

z-~\ N 5 ε ~ C. cu 00 CD * U

CH3 (t,7,0 Hz) 1,18 ppm

CH3 (t,7,lHz) 1,18 ppm

duplet aminokwasów

CH3 (ds 6,8Hz) 1,:33 ppm

CH3 (d, 7,5Hz) 1,418 ppm

CH3(d77,0Hz) 1,418 ppm

'ν' K c CD C G & -a ro ro ro _Γ O

CH3(d, 71Hz) 1,33 ppm

CH3(d, 71Hz) , 1,418 ppm

CH3(d, 6,5Hz) 1,33 ppm

CH3 (d, 7,5Hz) 1,418 ppm

octan©)

1,9)2 ppm

1,92 ppm

1,92 ppm

preparaty antygenowe

ASMP

MG 7274/9-18-1 (Figuaa 4)

CA 9656/0008 (Figuaa 2)

TM 7279/32-m-l-5 (Figuaa 3)

AEMP

TM 7279/p32-5-l (Figuaa 1/A-C)

ppm = części na milion s = single:

186 523

Figury 1-4

Doświadczenia NMR frakcji ASMP i AEMP jak pokazano na Figurach 1-4 wykonano jak niżej:

Widma w D₂ O przy 250 MHz uzyskano z cyfrowego spektrometru NMR BRUKER (model DRX 400) przy częstotliwości równej 400,13 Mc. Szerokość przesunięcia wynosiła

14,5 ppm, temperatura otoczenia równa 300 K. Przesunięcie chemiczne określono odległością rozpuszczalnika.

Standardowe dwuwymiarowe widma uzyskano stosując odpowiedni program pulsowy BRUKER.

186 523

TM 7279/ _Fig i_A p32-5-l

ppm

186 523

TM 7279 Fig. 1B p32-5-l

186 523

TM 7279/ Fig· IC p32-5-l

ε α

La

186 523

CA 9656/ b008

-O

-w

-co

-co

LS

-w b186 523

TM 7279/ ^Fig· ³

32-Π1-1-5

ppm

186 523

MG 7274/ ^Fig· ⁴

9-18-1

ppm

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 6,00 zł.

Claims (91)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Sposób wytwarzania rozpuszczalnego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (ASMP), znamienny tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

   - poddaje się działaniu 0,1-5% (wag/obj) roztworu KOH albo NaOH w około 20-150°C przez około 30 godzin,

   - rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, korzystnie przez odwirowanie

   - po rozdzieleniu nadsącz traktuje się kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym i

   - po oddzieleniu nadsącz traktuje się odpowiednim rozpuszczalnikiem organicznym albo solą, takim jak niższy alkanol albo siarczan amonu, przy czym wytrąca się ASMP i

   - odzyskuje się osad i, jeżeli to konieczne, rozpuszcza w roztworze wodnym.
2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida.
3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

   Trichophyton equinum,

   Trichophyton mentagophytes,

   Trichophyton sarkisovii,

   Trichophyton verrucosum,

   Microsporum canis,

   Microsporum gypseum albo

   Candida albicans.
4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

   Trichophyton equinum DSM nr 7276,

   Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

   Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

   Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

   Microsporum canis DSM nr 7281,

   Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

   Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

   Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

   Candida albicans DSM nr 9656.
5. 5. Sposób wytwarzania nierozpuszczalnego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (ANMP), znamienny tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

   - poddaje się działaniu 0,1-5% (wag/obj) roztworu KOH albo NaOH w około 20-150°C przez około 30 godzin,

   - rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, i

   - po rozdzieleniu fazę stałą traktuje się kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie 0,2-1,5 M kwasem organicznym albo 0,05-1 M kwasem nieorganicznym i

   - przemywa się roztworem wodnym.
6. 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida.

   186 523
7. 7. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

   Trichophyton equinum,

   Trichophyton mentagophytes,

   Trichophyton sarkisovii,

   Trichophyton verrucosum,

   Microsporum canis,

   Microsporum gypseum albo

   Candida albicans.
8. 8. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

   Trichophyton equinum DSM nr 7276,

   Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

   Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

   Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

   Microsporum canis DSM nr 7281,

   Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

   Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

   Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

   Candida albicans DSM nr 9656.
9. 9. Sposób wytwarzania egzogennego materiału antygenowego zawierającego polisacharyd i/lub glikopeptyd (AEMP), znamienny tym, że komórki grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzący z nich materiał

   - hoduje się w pożywce płynnej około 250 godzin,

   - rozdziela się fazę stałą i płynną preparatu, i

   - po rozdzieleniu do nadsączu dodaje się alkohol, przy czym odzyskuje się osad AEMP i, jeżeli to konieczne, rozpuszcza w roztworze wodnym.
10. 10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że

    - po rozdzieleniu nadsącz się liofilizuje,

    - rozpuszcza w roztworze wodnym,

    - po wytrącaniu około 1-5 objętościami alkoholu osad rozpuszcza się w roztworze wodnym,

    - roztwór liofilizuje się.
11. 11. Sposób według zastrz. 9 albo 10, znamienny tym, że grzyb keratynofilowy należy do przynajmniej jednego z rodzajów grzybów z grupy obejmującej Trichophyton i/lub Microsporum i/lub drożdże należą do rodzaju Candida.
12. 12. Sposób według zastrz. 9 albo 10, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

    Trichophyton equinum,

    Trichophyton mentagophytes,

    Trichophyton sarkisovii,

    Trichophyton verrucosum,

    Microsporum canis,

    Microsporum gypseum albo

    Candida albicans.
13. 13. Sposób według zastrz. 9 albo 10, znamienny tym, że grzyb należy do któregokolwiek z gatunków grzybów z grupy obejmującej

    Trichophyton equinum DSM nr 7276,

    Trichophyton mentagophytes DSM nr 7279,

    Trichophyton sarkisovii DSM nr 7278,

    Trichophyton verrucosum DSM nr 7277,

    Microsporum canis DSM nr 7281,

    Microsporum canis var. obesum DSM nr 7280,

    Microsporum canis var. distortum DSM nr 7275,

    186 523

    Microsporum gypseum DSM nr 7274 albo

    Candida albicans DSM nr 9656.
14. 14. Materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, znamienny tym, że zawiera ASMp ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMp ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu.
15. 15. Materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, znamienny tym, że zawiera ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.
16. 16. Materiał antygenowy zawierający polisacharyd i/lub glikopeptyd, wykazujący aktywność przeciwalergiczną u ssaków, znamienny tym, że zawiera AEMp ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.
17. 17. Kombinacja materiałów antygenowych, znamienna tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMp ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.
18. 18. Kombinacja materiałów antygenowych, znamienna tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

    ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego

    186 523 z nich, materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP.
19. 19. Kombinacja materiałów antygenowych, znamienna tym, że zawiera AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.
20. 20. Kombinacja materiałów antygenowych, znamienna tym, że zawiera ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMp ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsaczu, i ANMP wybrany spośród ANMp ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.
21. 21. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera materiał antygenowy zawierający ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i korzystnie odpowiedni nośnik fizjologiczny.
22. 22. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera materiał zawierający ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie wraz z odpowiednim nośnikiem fizjologicznym.
23. 23. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, z:apalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera materiał antygenowy zawierający AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i /lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek

    186 523 grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP, korzystnie wraz z odpowiednim nośnikiem fizjologicznym.
24. 24. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera kombinację materiałów antygenowych, zawierającą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP, korzystnie wraz z odpowiednim nośnikiem fizjologicznym.
25. 25. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera kombinację materiałów antygenowych zawierającą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

    ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lb AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP, korzystnie wraz z odpowiednim nośnikiem fizjologicznym.
26. 26. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera kombinację materiałów antygenowych zawierającą AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej

    186 523 i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym.
27. 27. Szczepionka, zwłaszcza do modulowania reakcji odpornościowej organizmów, zapobiegania i leczenia alergii, szczególnie do zapobiegania i leczenia wyprysku letniego, zapalenia nerwowo-skómego, zapobiegania i leczenia łysienia, znamienna tym, że zawiera kombinację materiałów antygenowych zawierającą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu, i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym, korzystnie wraz z odpowiednim nośnikiem fizjologicznym.
28. 28. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą materiał antygenowy zawierający ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
29. 29. Roztwór do wstrzyknięć według zastrz. 28, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lablemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
30. 30. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą materiał zawierający ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym, przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
31. 31. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 30, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    186 523

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lablemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
32. 32. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą materiał antygenowy zawierający AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AeMp, przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
33. 33. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 32, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lablemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
34. 34. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą kombinację materiałów antygenowych, zawierającą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP, przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
35. 35. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 34, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
36. 36. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą kombinację materiałów antygenowych zawierającą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

    ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących

    186 523 do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMp, przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
37. 37. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 36, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wąg/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
38. 38. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą kombinację materiałów antygenowych zawierającą AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
39. 39. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 38, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
40. 40. Roztwór do wstrzyknięć, znamienny tym, że zawiera szczepionkę zawierającą kombinację materiałów antygenowych zawieraj ącą ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu, i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym,

    186 523 przy czym roztwór oprócz szczepionki zawiera nośnik fizjologiczny wybrany z roztworów soli (A), roztworów mleczanu (B) lub roztworów Ringera (B).
41. 41. Roztwór do wstrzyknięć, według zastrz. 40, znamienny tym, że gdy nośnik wybrany jest z:

    - nośnika (A), to stanowi go wodny roztwór zawierający 0,85 (wag/obj.) NaCl,

    - nośnika (B), to stanowi go wodny roztwór, zawierający 5% (wag/obj) glukozy, 0,3% (wag/obj) ekstraktu mięsnego „lab-lemco” (Oxoid) i 0,1% (wag/obj) ekstraktu drożdżowego (Oxoid);

    - nośnika (C) - to stanowi go pożywka RPMI 1640 (z Serva, nr kat. 12-702).
42. 42. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytraceniem ASMP z nadsączu do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
43. 43. Zastosowanie według zastrz. 42 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
44. 44. Zastosowanie według zastrz. 42 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
45. 45. Zastosowanie według zastrz. 42 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
46. 46. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
47. 47. Zastosowanie według zastrz. 46 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
48. 48. Zastosowanie według zastrz. 46 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
49. 49. Zastosowanie według zastrz. 46 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
50. 50. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
51. 51. Zastosowanie według zastrz. 50 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
52. 52. Zastosowanie według zastrz. 50 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
53. 53. Zastosowanie według zastrz. 50 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
54. 54. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych

    186 523 grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
55. 55. Zastosowanie według zastrz. 54 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
56. 56. Zastosowanie według zastrz. 54 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
57. 57. Zastosowanie według zastrz. 54 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
58. 58. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

    ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMp do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
59. 59. Zastosowanie według zastrz. 58 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
60. 60. Zastosowanie według zastrz. 58 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
61. 61. Zastosowanie według zastrz. 58 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
62. 62. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMp ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie

    186 523 fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutyczego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
63. 63. Zastosowanie według zastrz. 62 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
64. 64. Zastosowanie według zastrz. 62 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
65. 65. Zastosowanie według zastrz. 62 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
66. 66. Zastosowanie kombinacji materiałów leczniczych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DsM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu, i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMp ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutycznego do zapobiegania i/lub leczenia alergii.
67. 67. Zastosowanie według zastrz. 66 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku letniego.
68. 68. Zastosowanie według zastrz. 66 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia wyprysku.
69. 69. Zastosowanie według zastrz. 66 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia zapalenia nerwowo-skómego.
70. 70. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
71. 71. Zastosowanie według zastrz. 70 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
72. 72. Zastosowanie według zastrz. 70 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
73. 73. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
74. 74. Zastosowanie według zastrz. 73 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
75. 75. Zastosowanie według zastrz. 73 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
76. 76. Zastosowanie materiału antygenowego zawierającego AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu

    186 523

    Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
77. 77. Zastosowanie według zastrz. 76 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
78. 78. Zastosowanie według zastrz. 76 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
79. 79. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans

    DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
80. 80. Zastosowanie według zastrz. 79 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
81. 81. Zastosowanie według zastrz. 79 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
82. 82. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu,

    ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym i AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656, uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
83. 83. Zastosowanie według zastrz. 82 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
84. 84. Zastosowanie według zastrz. 82 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
85. 85. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej AEMP wybrany spośród AEMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub AEMP ze

    186 523 szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub AEMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez hodowanie w pożywce płynnej komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału, rozdzielenie fazy stałej i płynnej preparatu, i po rozdzieleniu dodanie alkoholu do nadsączu z uzyskaniem osadu AEMP i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
86. 86. Zastosowanie według zastrz. 85 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
87. 87. Zastosowanie według zastrz. 85 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
88. 88. Zastosowanie kombinacji materiałów antygenowych, zawierającej ASMP wybrany spośród ASMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ASMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ASMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, potraktowaniu po rozdzieleniu nadsączu kwasem nieorganicznym albo organicznym z wytrąceniem ASMP z nadsączu, i ANMP wybrany spośród ANMP ze szczepu Trichophyton mentagrophytes DSM nr 7279 i/lub ANMP ze szczepu Microsporum gypseum DSM nr 7274 i/lub ANMP ze szczepu Candida albicans DSM nr 9656 uzyskany przez poddanie komórek grzybów, należących do grupy keratynofilowych grzybów albo drożdży albo pochodzącego z nich materiału działaniu wodnego roztworu alkalicznego, rozdzieleniu fazy stałej i płynnej preparatu, traktowanie fazy stałej kwasem nieorganicznym albo organicznym do wytwarzania środka farmaceutycznego do modulowania reakcji odpornościowej.
89. 89. Zastosowanie według zastrz. 88 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do zapobiegania albo leczenia łysienia.
90. 90. Zastosowanie według zastrz. 88 do wytwarzania produktu farmaceutycznego do poprawy pokrywy włosowej ssaków.
91. 91. Candida albicans zdeponowany w Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen (DSM) pod numerem dostępu 9656.

    Wynalazek dotyczy nowych materiałów antygenowych obejmujących polisacharydy i/lub glikopeptydy, które można wytworzyć z grzybów keratynofilowych, jak również z drożdży, sposobu wytwarzania tych materiałów antygenowych, ich zastosowanie do wytwarzania substancji farmaceutycznych, jak również szczepionek, w tym, choć nie wyłącznie, w profilaktyce i leczeniu alergii, jak również do modulowania odpowiedzi odpornościowej oraz roztworów do wstrzykiwań.

    Wynalazek dotyczy również nowego szczepu etaidida albicans.

    Alergia w takiej czy innej postaci dotyka ponad 20% populacji ludzkiej, zaś alarmujący wzrost częstości występowania, chorobowości i śmiertelności w ostatniej dekadzie doprowadził do określenia jej jako choroba środowiskowa numer 1 (Sutton i Gould, Nature, 1993, 366: 421-428). Populacja ludzka i zwierzęca dotknięte są alergią w tym samym stopniu.

    W rozwoju alergii kluczową rolę odgrywa reakcja odpornościowa (Paul W. E. (wydawca) Fundamental Immunology, Raven Press Books Ltd., Nowy York, 1984). Opisano zasadniczo dwa różne rodzaje reakcji alergicznych. Jedną z nich jest nadwrażliwość typu natychmia186 523 stowego (ITH), w której maksymalną reakcję alergiczną obserwuje się w ciągu minut albo godzin. Drugim rodzajem jest nadwrażliwość typu późnego (DTH). W przypadku DTH, reakcja alergiczna na alergen osiąga szczyt po 24-48 godzinach. Najprawdopodobniej, ITH zachodzi głównie szlakiem IgE, podczas gdy DTH jest bardziej złożona. Prawdopodobnie, w rozwoju DTH włączają się dalsze reakcje komórkowe (tj. limfocyty B i T). Przykładowo, po przeniesieniu limfocytów i przeciwciał z alergicznego zwierzęcia-dawcy na niealergiczne zwierzę-biorcę, biorca rozwija DtH (Askenase (1973), J. Exp. Med., 138: 1144-1155).

    Z powodu ich bezpośredniej ekspozycji na antygeny środowiskowe, tkankami najbardziej dotkniętymi alergiami są tkanki nabłonkowe, zwłaszcza skóra. Przykładowo, w klinice dermatologicznej ostre alergiczne kontaktowe zapalenie skóry i przewlekły alergiczny wyprysk kontaktowy stanowią ponad 15% wszystkich dermatoz. Astma alergiczna stanowi około 20% wszystkich przypadków astmy u ludzi.

    Chorobami alergicznymi, które mogą być sklasyfikowane jako ITH są, przykładowo, wyprysk atopowy, alergiczna astma oskrzelowa, katar sienny, zapalenie błony śluzowej nosa, zapalenie spojówek. Mogą się one również rozwinąć w postaci przewlekłej i nie powinny być rozważane wyłącznie jako reakcje zależne od IgE. Przykładem DTH jest ostre alergiczne kontaktowe zapalenie skóry i przewlekły alergiczny wyprysk kontaktowy, które to dalej mogą być klasyfikowane jako DTH (typ IV) z udziałem naskórka. Pacjenci tacy musieli być uprzednio uczuleni przez kontakt z alergenem i rozwinęli nadwrażliwość. Ponowny kontakt z alergenem powoduje ostre, podostre albo przewlekłe kontaktowe zapalenie skóry.

    Przykładem alergicznego zapalenia skóry z kliniki weterynaryjnej jest wyprysk letni, zwany również świądem Sweet albo Queensland. Wyprysk letni jest alergicznym zapaleniem skóry, należącym do atopowych postaci chorób alergicznych (z udziałem reakcji typu I i IV). Wyprysk letni jest wywoływany przez ugryzienie muchy z rodziny Culicidae i Ceratopgonidae, oraz charakteryzuje się zmianami skórnymi z ciągłym owrzodzeniem i wysiękiem, głównie w rejonie grzywy, ogona i brzucha. Dotknięte zwierzęta wykazują znaczną wrażliwość skóry na podrażnienia, tj. dotyk, deszcz, wiatr itp., zaburzając ich stan zdrowia i sprawność. Podobnie jak w przypadku innych alergii, uważa się, że na rozwój tej choroby wpływają czynniki żywieniowe. Objawy choroby obserwowane są wyłącznie od marca do października, podczas gdy wywołaną alergenem wrażliwość skóry obserwuje się przez cały rok. Wyprysk letni dostarcza ciekawego modelu do badania alergii i opracowania środków przeciwalergicznych.

    Proponuje się wiele sposobów leczenia alergii, zależnie od obrazu choroby. Do leczenia ostrego kontaktowego alergicznego zapalenia skóry, przewlekłego alergicznego wyprysku kontaktowego i/lub wyprysku atopowego stosuje się zwykle lipofilowe kremy, zawierające glukokortykosteroidy, środki przeciwbakteryjne, środki przeciwzapalne i/lub wapń. Do leczenia wyprysku letniego miejscowo albo ogólnoustrojowo stosuje się różne substancje, przykładowo preparaty steroidowe, owadobójcze, różne leki galenowe, salicylany, oleje albo peptydy izolowane z mikroorganizmów. Wszystkie metody lecznicze działają wyłącznie na objawy, nie zaś na przyczyny alergii.

    Zaburzona odpowiedź odpornościowa albo niedobór odporności często odgrywa rolę w rozwoju alergii. Stąd, w leczeniu wyprysku, wyprysku atopowego, wrzodów skórnych jak również chorób autoagresyjnych stosuje się immunostymulatory, takie jak BCG, lewamizol i inne (Tschemucha (wydawca), Koscha, Medicina, 1982, Moskwa).

    Do leczenia zapaleń skóry wywołanych przez ukąszenia much zastosowano z powodzeniem peptydy pochodzące z przeciwciał (brytyjskie zgłoszenie patentowe nr 8913737). Do leczenia wyprysku kontaktowego stosuje się również odczulanie, z względnie dobrymi wynikami (Tschemucha (wydawca), Koscha, Medicina, 1982, Moskwa).

    O ile wiadomo, mimo rómych podej śćdolćczeniaalergiinie stosowtmoda tej poty w leczeniu alergii substancji antygenowych pochodzących z kergtonofilomoch grzybów albo drożdży.

    W tym kontekście wynalazek pod pojęciem „rozpuszczalne” albo „oierozpusadzgloe” dotyczy rozpuszczalności w roztworach moZoydh. Określenie „preparat antygenowy” dotyczy dowolnej kompozycji, która jest zdolna do wywołania reakcji antygenowej albo immunogennej. Określenie „modulowanie reakcji odpornościowej” dotyczy zdolności preparatów antyge16

    186 523 nowych według wynalazku do pobudzania albo wzmagania reakcji odpornościowej, jak to przykładowo zademonstrowano przez ich zdolność do pobudzania proliferacji limfocytów w hodowli komórkowej (szczegółowo opisane wSbube i in., (1989) Vet. Med. Rev., 60:

    3-15; Buetner (1993) Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis., 16: 1-10).

    Nieoczekiwanie stwierdzono, że materiały antygenowe pochodzące z keratynofilowych grzybów albo drożdży mogą być zastosowane do profilaktyki i leczenia alergii, jak również do modulowania reakcji odpornościowej, szczególnie u ssaków.

    Opracowano sposób wytwarzania materiału antygenowego z grzybów keratynofilowych grzybów oraz drożdży. Materiały antygenowe mogą być zastosowane jako kompozycje farmaceutyczne, jak również jako szczepionki do leczenia zwierząt i ludzi, zwłaszcza do leczenia alergii oraz do modulowania reakcji odpornościowej. Należy rozumieć, że kompozycje farmaceutyczne według wynalazku mogą mieć zastosowanie immunologiczne jak również farmakologiczne.

    Materiał antygenowy według wynalazku może być również wytworzony z materiału pochodzącego z keratynofilowych grzybów albo drożdży, przykładowo ze ścian komórkowych grzybów albo drożdży.

    Do wytwarzania materiałów antygenowych według wynalazku opracowano trzy różne procesy. Dzięki tym trzem procesom, z keratynofilowych grzybów albo drożdży można wytworzyć trzy różne frakcje antygenowe (ASMP, ANMP albo AEMP), zwane dalej „frakcjami”. Preparaty antygenowe, zawierające więcej niż jedną frakcję są określane dalej jako „preparat złożony” albo w skrócie „kompleks”.