PL186949B1 - Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne - Google Patents

Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne

Info

Publication number
PL186949B1
PL186949B1 PL97320251A PL32025197A PL186949B1 PL 186949 B1 PL186949 B1 PL 186949B1 PL 97320251 A PL97320251 A PL 97320251A PL 32025197 A PL32025197 A PL 32025197A PL 186949 B1 PL186949 B1 PL 186949B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
ifn
conjugate
peg
formula
activity
Prior art date
Application number
PL97320251A
Other languages
English (en)
Other versions
PL320251A1 (en
Inventor
Pascal S. Bailon
Alicia V. Palleroni
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL186949(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL320251A1 publication Critical patent/PL320251A1/xx
Publication of PL186949B1 publication Critical patent/PL186949B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN- a o wzorze 1, w którym R i R' oznaczaja niezaleznie C 1-C6 alkil; X oznacza NH albo O; n i n' sa liczbami calkowitymi, których suma wynosi od 600 do 1500; zas sredni ciezar czasteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od okolo 26000 do okolo 66000. 11. Sposób wytwarzania koniugatu PEG-IFN- a o zwiekszonej aktywnosci antyproliferacyjnej i zmniejszonej aktywnosci przeciwwirusowej w porównaniu z IFN- a, znam ienny tym, ze reagent o wzorze 2 wiaze sie kowalencyjnie z IFN- a do wytworzenia koniugatu PEG-IFN- a. 12. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, ze zawieraja koniugat PEG-IFN- a okreslony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojetny nosnik. 13. Kompozycje farmaceutyczne do leczenia al- bo zapobiegania zaburzeniom immunomodulacji, takim jak choroby nowotworowe, znamienne tym, ze zawieraja koniugat PEG-IFN- a okreslony w za- strz. 1 oraz terapeutycznie obojetny nosnik. WZÓR 1 PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-α, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycje farmaceutyczne.
Interferon, a w szczególności interferon-α2a, jest białkiem aktywnym farmaceutycznie, wykazującym działanie przeciwwirusowe i antyproliferacyjne. Przykładowo, interferon jest stosowany w leczeniu białaczki włochatokomórkowej i mięsaka Kaposi'ego oraz wykazuje działanie w zapaleniu wątroby. W celu polepszenia stabilności i rozpuszczalności oraz zmniejszenia immunogenności, białka farmaceutycznie czynne takie jak interferon mogą być sprzęgane z polimerem - poliglikolem etylenowym (PEG).
Biodostępność leków białkowych jest często ograniczona z powodu ich krótkiego półokresu trwania w osoczu, co uniemożliwia wykorzystanie ich maksymalnego działania klinicznego. W ostatnich latach wykazano, że cząsteczki biologiczne sprzęgnięte z PEG wykazują właściwości przydatne klinicznie (Inada i in., J. Bioact. and Compatible Polymers 5, 343 (1990); Delgado i in., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, 249 (1992); Katre i in., Advanced Drug Delivery Systems 10, 91 (1993)). Wśród nich można wymienić lepszą stabilność fizyczną i cieplną, oporność na rozkład enzymatyczny, zwiększoną rozpusz186 949 czalność, dłuższy półokres krążenia in vivo, zmniejszony klirens i zwiększona siła działania. Opisywano, że koniugaty z rozgałęzionym PEG wykazują większą stabilność cieplną i wobec pH oraz większą odporność na rozkład proteolityczny w porównaniu z koniugatami z liniowym PEG (Monfardini i in., Bioconjugate Chem. 6, 62 (1995)). Innymi właściwościami koniugatów białek z PEG są zmniejszona immunogenność i antygenowość, jak również zmniejszona toksyczność. Innym wpływem PEGylacji pewnych białek może być mniejsza aktywność in vitro połączona ze zwiększoną aktywnością in vivo. Obserwowano to zjawisko
m.in. w przypadku G-CSF (Satake-Ishikawa i in., Cell Structure and Function 17, 157-160 (1992)), IL-2 (Katre i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1487 (1987)), TNF-α (Tsutsumi i in., Jpn. J. Cancer Res. 85, 9 (1994)), IL-6 (Inoue i in., J. Lab. Glin. Med. 124, 529 (1994)) i CD4-IgG (Chamów i in., Bioconjugate Chem. 5, 133 (1994)).
Obecnie zaobserwowano, że w przypadku interferonu PEGy-lacja zmniejsza aktywność przeciwwirusową in vitro ale zwiększa działanie antyproliferacyjne wobec ludzkich komórek nowotworowych. Jednakże, nowe koniugaty interferonu i PEG według wynalazku, wykazują nieoczekiwane właściwości polegające na tym, że ich działanie antyproliferacyjne jest nie tylko znacznie silniejsze od interferonu ale również od innych koniugatów interferonu z PEG. Jakkolwiek działanie antyproliferacyjne koniugatu jest znacznie wyższe niż działanie innych koniugatów interferonu-α z PEG, zmniejszenie aktywności przeciwwirusowej jest podobne. Oprócz tego, koniugat interferonu-a z PEG według wynalazku nie jest immunogenny i praktycznie nie powoduje tworzenia przeciwciał. W przeciwieństwie, inne koniugaty interferonu-a z PEG powodują ograniczone tworzenie przeciwciał.
Nawiązując, wynalazek stanowi nowa klasa pochodnych PEG interferonu-α (IFN-a). Koniugat według wynalazku ma budowę rozgałęzionego PEG, jak to widać poniżej. Rozgałęziony PEG ma tę zaletę, że umożliwia przyłączenie dwóch liniowych cząsteczek PEG w pojedynczym miejscu, podwajając w ten sposób ilość PEG bez konieczności występowania licznych miejsc PEGylacji.
W porównaniu z niemodyfikowanym IFN-α (tj. IFN-α bez przyłączonego PEG), koniugat ma przedłużony półokres krążenia i czas pozostawania w osoczu, obniżoną immunogenność, zmniejszony klirens i zwiększoną aktywność antyproliferacyjną przy zmniejszonej aktywności przeciwwirusowej in vitro. W porównaniu z innymi koniugatami PEG-IFN-a., koniugat według wynalazku wykazuje znacznie wyższe działanie antyproliferacyjne, nieproporcjonalne do innych różnic w jego charakterystyce, oraz praktycznie brak immunogenności.
Fizjologicznie czynny rodzaj koniugatów PEG-IFN-α według wynalazku ma przedstawiony na rysunku wzór 1.
Koniugat według wynalazku ma te same zastosowania co IFN-α, przykładowo zastosowania antyproliferacyjne. W szczególności, koniugaty interferonu-α z PEG według wynalazku są przydatne w leczeniu chorób immunomodulacyjnych takich jak choroby nowotworowe, przykładowo, białaczka włochatokomórkowa, CML i mięsak Kaposi'ego, i choroby zakaźne, w taki sam sposób jak stosuje się IFN-α (a zwłaszcza IFNa2a). Jednakże, koniugaty według wynalazku wykazują ulepszoną charakterystykę, w tym lepszą stabilność, większą rozpuszczalność, wydłużony półokres krążenia i wydłużony czas pozostawania w osoczu. Oprócz tego, koniugaty te wykazują działanie antyproliferacyjne silniejsze niż IFN-a. Jak to również zaznaczono, koniugaty wykazują nieoczekiwane oddzielenie działań przeciwwirusowych i antyproliferacyjnych. Ta właściwość jest dodatkowo przydatna w celu zwiększania pożądanego działania koniugatu, przy zmniejszaniu albo eliminowaniu działania niepożądanego. Przykładowo, jeżeli niepożądany efekt uboczny związany jest z działaniem przeciwwirusowym, eliminacja tego działania powinna wyeliminować te działanie uboczne, zachowując działanie antyproliferacyjne. Stąd, niniejszy wynalazek obejmuje również kompozycje farmaceutyczne oparte na związkach o wzorze 1 albo ich solach, i sposoby ich wytwarzania.
Kompozycje farmaceutyczne według niniejszego wynalazku stosowane do kontrolowania albo zapobiegania chorób, obejmują koniugat interferonu o ogólnym wzorze 1 i terapeutycznie bierny, nietoksyczny i dopuszczalny terapeutycznie nośnik. Stosowane kompozycje farmaceutyczne mogą być wytwarzane i dozowane w sposób zgodny z dobrą praktyką me4
186 949 dyczną, uwzględniającą leczoną chorobę, stan indywidualny pacjenta, miejsce podawania koniugatu białka, sposób podawania i inne czynniki znane specjalistom.
Zastrzegany koniugat jest fizjologicznie czynnym koniugatem PEG-IFN-α o wzorze 1, w którym R i R' niezależnie oznaczają Ci-Cć alkil; X oznacza NH albo O (X oznacza przynajmniej jedną grupę funkcyjną w cząsteczce IFNa, wybraną z grupy obejmującej NH2 albo OH); n i n' oznaczają liczby całkowite, których suma stanowi od 600 do 1500; zaś średni ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od około 26000 Da do około 66000 Da. Koniugat o wzorze 1 ma budowę rozgałęzioną w taki sposób, że dwie cząsteczki PEG są przyłączone do białka wiązaniem pojedynczym.
Liczby n i n' wybrano w ten sposób, że powstały koniugat o wzorze 1 ma aktywność fizjologiczną IFN-α, która to aktywność jest taka sama, większa albo stanowi frakcję odpowiedniej aktywności niemodyfikowanego IFN-a. n i n' (wartości n i n' mogą być takie same albo różne) oznaczają liczbę jednostek glikolu etylenowego w PEG. Pojedyncza jednostka PEG - OCH2 CH2, ma ciężar cząsteczkowy równy około 44 Da. Ciężar cząsteczkowy koniugatu (z wyłączeniem ciężaru cząsteczkowego IFN-a) zależy od liczb n i n'. Suma n i n' dla koniugatu o wzorze 1 zawiera się od 600 do 1500, dając koniugat o całkowitym ciężarze cząsteczkowym jednostek PEG od około 26000 do 66000, zaś korzystnie od około 35000 do 45000 Da, a zwłaszcza od 39000 do 45000 Da, przy czym 40000 Da jest szczególnie korzystne. Korzystna suma n i n', zawiera się od około 800 do 1200, przy czym średnia suma równa się od około 850 do 1000, zaś korzystna suma wynosi 910. Zarówno n jak i n' mogą wynosić 420 albo 520, albo obie mogą wynosić 420 albo 520, albo obie mogą wynosić 455. Korzystny stosunek n do n' zawiera się od około 0,5 do około 1,5, zaś szczególnie korzystny stosunek wynosi od około 0,8 do 1,2. Ciężar cząsteczkowy „około” konkretnej liczby oznacza, że zawiera się w rozsądnym zakresie tej liczby jak się to określa konwencjonalnymi metodami analitycznymi.
Korzystny jest również koniugat o wzorze 1, w którym IFN-α oznacza IFN-a2, koniugat w którym R i R' oznaczają metyl, koniugat w którym X oznacza NH i koniugat w którym n i n' osobno albo oba wynoszą 420 albo 520. Szczególnie korzystny jest koniugat o wszystkich powyższych charakterystykach.
R i R' mogą być dowolnym Ci-Cć alkilem, przez co rozumie się grupę alkilową posiadającą od jednego do sześciu atomów węgla, taką jak grupa metylowa, etylowa, izopropylowa itd. Obejmuje to grupy alkilowe rozgałęzione. Korzystną grupą alkilową jest grupą metylowa. W odniesieniu do dwóch grup PEG we wzorze 1, R i R' może być taka sama albo różna.
Przez IFN-α (interferon a) i jego rodzaj IFN-a2a, rozumie się białko naturalne albo rekombinowane, korzystnie ludzkie uzyskane z dowolnego konwencjonalnego źródła takiego jak tkanki, synteza białka, hodowla komórkowa komórek naturalnych albo rekombinowanych. Objęte tym jest dowolne białko wykazujące aktywność IFN-α, takie jak muteiny albo białka modyfikowane w inny sposób. Otrzymywanie i izolowanie IFN-α ze źródeł naturalnych i rekombinowanych jest dobrze znane (Pestka, Arch. Biochem. Biophys. 221, 1 (1983)). Korzystnym IFN-α jest IFN-a2a, który można otrzymać znanymi sposobami (Pestka, Sci. Am. 249, 36 (1983); europejski opis patentowy nr 43980)).
Aktywny fizjologicznie koniugat o wzorze 1 ma aktywność IFN-α, przez co rozumie się dowolną frakcję albo liczne aktywności spośród znanych aktywności IFN-a, co jest możliwe są stwierdzenia różnymi znanymi testami. W szczególności, koniugaty według wynalazku wykazują aktywność IFN-a, co wykazano aktywnością antyproliferacyjną wobec różnych komórek nowotworowych i aktywność przeciwwirusową wobec komórek zakażonych wirusem. Są to znane aktywności IFN-a. Aktywność taka w koniugacie może być określona znanymi testami, przykładowo testami opisanymi poniżej (patrz również, Rubinstein i in., J. Virol. 37, 755 (1981); Borden i in., Canc. Res. 42, 4948 (1982)). Część wynalazku stanowi koniugat o wzorze 1, wykazujący większą aktywność antyproliferacyjną i niższą aktywność przeciwwirusową niż niemodyfikowany IFN-a.
Koniugat o wzorze 1 wytwarzany jest przez wiązanie kowalencyjne IFN-α z PEG, który aktywowano przez podstawienie grupy hydroksylowej PEG przez grupę wiążącą, tworząc reagent, który jest pochodną estrową N-hydroksylo-bursztynianową PEG (w szczególności
186 949 monometoksy-PEG) o wzorze 2. Reagent może być otrzymany metodami konwencjonalnymi (Monfardini i in., wyżej). Wiązanie zachodzi dzięki wiązaniu amidowemu albo estrowemu. W korzystnym koniugacie, wiązanie zachodzi dzięki wiązaniu amidowemu (X oznacza NH). Częścią wynalazku jest sposób zwiększania aktywności antyproliferacyjnej IFN-α, przy zmniejszaniu przeciwwirusowej aktywności IFN-a, przez sprzęganie go, jak to opisano wyżej, z reagentem o wzorze 2 tworząc koniugat PEG-IFN.
X oznacza miejsce przyłączania na IFN-α, w którym odczynnik PEG o wzorze 2 jest związany kowalencyjnie z IFN-a. Reagenty wiążą się z pierwszorzędowymi grupami aminowymi XH = NH2) przykładowo na lizynie albo na końcu N IFN-a. Reagenty mogą się również wiązać z grupą hydroksylową (XH = OH) przykładowo na serynie.
Reagent o wzorze 2 (PEG2-NHS), w którym ogółem dwa łańcuchy mono-metoksy PEG (m-PEG) związane są z lizyną, z których jeden przez grupę aminową a, zaś drugi przez grupę aminową e wiązaniami karbaminowymi (uretanowymi), i mające grupę karboksylową lizyny aktywowaną do estru sukcynimidylowego, może być otrzymywany metodami konwencjonalnymi, według znanych procedur (Monfardini i in., wyżej) nadających się do stosowania w przypadku reagentu z Ci-Cć alkilem i pożądaną liczbą n. Reagent może być uzyskany od Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Korzystny średni MW uzyskanego PEG wynosi około 20000 Da, zapewniając całkowity ciężar PEG wynoszący około 40000 Da w PEG2-NHS (inne MW mogą być uzyskiwane przez zmianę n dla substratów alkoholu PEG dla reagentu o wzorze 2 metodami konwencjonalnymi).
Reagent o wzorze 2 może być sprzęgany z IFN-α metodami konwencjonalnymi. Konkretnie, reagent o wzorze I przede wszystkim reaguje z pierwszorzędowymi grupami aminowymi (przykładowo z N-końcowymi i łańcuchami bocznymi lizyny) IFN-α (przykładowo IFN-a2a), tworząc wiązanie amidowe pomiędzy IFN-α i szkieletem polimeru PEG. Reakcja PEGylacji może również zachodzić pomiędzy PEG2-NHS i wolnymi (jeżeli występują) grupami hydroksylowymi (przykładowo seryny) IFN-α tworząc wiązanie estrowe. Mechanizm reakcji przedstawiono na schemacie na rysunku. Warunki reakcji są konwencjonalne dla specjalisty i przedstawiono je szczegółowo poniżej. Reagent PEG jest łączony z IFN-a w warunkach lekko zasadowych w niskiej temperaturze, w warunkach odpowiednich do podstawienia nukleofilowego, które powoduje powstanie koniugatu o wzorze 1. Jest to również pokazane na schemacie reakcji.
Przyłączanie reagentu do IFN-α może być osiągnięte metodami konwencjonalnymi. PEG o różnych MW mogą być zastosowane według wynalazku. Warunki reakcji mogą być dobrane tak, by dawały koniugat z przyłączonym jednym reagentem. Koniugat o wzorze 1, z przyłączonym jednym reagentem o wzorze 2 jest oddzielany od niemodyfikowanego IFN-a i koniugatów z przyłączoną więcej niż jedną cząsteczką reagentu metodami konwencjonalnymi. Sposoby oczyszczania takie jak chromatografia kationowymienna, mogą być zastosowane w celu rozdzielenia koniugatów na zasadzie różnic w ładunku, co skutecznie rozdziela koniugaty według ciężarów cząsteczkowych. Zawartość frakcji uzyskanych przez chromatografię kationowymienną może być określana na podstawie ciężaru cząsteczkowego przez zastosowanie metod konwencjonalnych, przykładowo, spektrometrii masowej, SDS-PAGE albo inną znaną metodą rozdziału cząsteczek na podstawie ich ciężaru cząsteczkowego. Następnie, identyfikowana jest frakcja, która zawiera koniugat o wzorze 1 wolny od niemodyfikowanego IFN-α i koniugatów o przyłączonym więcej niż jednym reagencie. Oprócz tego, reagent o wzorze 2 pod wpływem hydrolizy kwaśnej uwalnia jedną lizynę na cząsteczkę reagentu tak, że liczba lizyn w produkcie hydrolizy wskazuje na liczbę PEG przyłączonych do białka, tak więc w ten sposób może zostać sprawdzona liczba cząsteczek reagentu związanych z koniugatem.
Poniższe przykłady przedstawiono w celu zilustrowania wynalazku, nie zaś w celu ograniczania go. W przykładach tych stosowano IFN-a2a. Inne rodzaje IFN-α mogą być również sprzęgane z PEG przykładowo podanymi sposobami.
Opis rysunków
Figura 1: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe A498. Wszystkie zwierzęta otrzymały
186 949 podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 w dniu badania -33. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-(x2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres czterech tygodni.
Figura 2: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe A498. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 w dniu badania -33. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres czterech tygodni.
Figura 3: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe ACHN. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych ACHN w dniu badania -25. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 4: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe ACHN. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych ACHN w dniu badania -25. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-tx2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 5: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-IFN-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe G402. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych G402 w dniu badania -45. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (30, 60, 120 i 300 pg) PEG2-IFN-a.2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, raz w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Figura 6: Aktywność przeciwnowotworowa PEG2-E7N-a2a u myszy nagich, którym wszczepiono podskórnie ludzkie komórki nerkowe G402. Wszystkie zwierzęta otrzymały podskórny wszczep 2x106 ludzkich komórek nerkowych G402 w dniu badania -45. W dniu badania 0 rozpoczęto leczenie PEG2-IFN-a2a. Zaznaczone ilości (10, 20, 40 i 100 pg) PEG2IFN-cx2a podawano podskórnie po przeciwnej stronie co guz, 3 razy w tygodniu przez okres pięciu tygodni.
Przykład I. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1
Materiały
Interferon-a2a wytworzono znanym sposobem (Pestka, wyżej). Reagent poliglikolu etylenowego (PEG) o wzorze 2 nabyto z Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Żywicę Fractogel® EMD CM 650 (S), o cząsteczkach wielkości 25-40 pm zakupiono w EM Separations (Gibbstown, MA). Stężony (lOx) roztwór soli buforowany fosforanem (PBS) zakupiono w BioWhittaker (Walkersville, MD). Uprzednio przygotowane żele do SDS-PAGE i urządzenia do elektroforezy zakupiono w NOVEX (San Diego, CA). Stężony Fast Stain do barwienia białka koniugatów PEG na SDS-PAGE nabyto w Zoion Research, Inc. (Newton, MA). Zestaw do testu na endotoksynę LAL zakupiono w Associates of Cape Cod, Inc. (Woods Hole, MA). Pozostałe zastosowane odczynniki były możliwie najwyższej dostępnej jakości. Szczury z kaniulowanymi żyłami obojczykowymi oraz myszy BDF-1 zakupiono w Charles River Laboratories (Wilmington, MA).
Procedury doświadczalne
A. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1 na małą skalę
208 miligramów (5,2 (tmol) reagentu o wzorze 2 (średni MW rzędu 40000 Da) dodano do 50 mg (2,6 pmol) IFN-a w 10 ml 100 mM boranu, pH 8,0. Końcowy stosunek molowy białka do reagentu wynosił 1:2. Mieszaninę reakcyjną mieszano w 4°C przez 2 godziny. Reakcję zatrzymano przez ustalenie pH na 4,5 przy użyciu lodowatego kwasu octowego.
186 949
Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 50-krotnie wodą, filtrowano przez filtr 0,2 pm i wprowadzono do kolumny Amicon wypełnionej 100 ml (3,2x13 cm) Fractogel EMD CM 650(S), przy przepływie 20 ml/min. Kolumnę zrównoważono uprzednio 10 mM octanem amonu, pH 4,5. Eluent opuszczający kolumnę badano przez pomiar absorbancji UV przy długości fali 280 nm. Następnie, kolumnę przemywano buforem równoważącym dopóki absorbancja UV nie powróciła do poziomu podstawowego. Koniugaty PEG-IFN z przyłączonym więcej niż jednym reagentem o wzorze 2 (oligomery PEG-IFN) eluowano 40 mM octanem amonu, pH 4,5 zaś koniugat o wzorze 1 eluowano 0,12 M NaCl w buforze 40 mM octanu amonu. Niemodyfikowany IFN pozostający w kolumnie eluowano 0,5 M NaCl w tym samym buforze. Kolumnę regenerowano przemywaniem 1,0 M NaCl a następnie przemywaniem buforem równoważącym. Połączone frakcje koniugatu o wzorze 1 stężano w komorze Amicon z mieszalnikiem, wyposażonej w membranę YM10 do stężenia około 1 mg/ml.
Zastosowana do oczyszczania żywica kationowymienna Fractogel CM 650(S) skutecznie adsorbowała PEG i niemodyfikowany IFN. Siła adsorpcji zależała od stopnia PEGylacji. Koniugaty wiązały się słabiej niż niemodyfikowany IFN. Oligomery PEG-IFN eluowano 40 mM octanem amonu, podczas gdy koniugaty o wzorze 1 eluowano 0,12 M NaCl. Niemodyfikowany IFN eluowano 0,5 M NaCl. Wszystkie preparaty zawierały endotoksyny w ilości <5EU/mg. Powstałe preparaty zawierały >99% koniugatu o wzorze 1 i były pozbawione niemodyfikowanego IFN.
B. Wytwarzanie koniugatu o wzorze 1 na wielką skalę
6240 miligramów (156 pmol) reagentu o wzorze 2 (średni ciężar cząsteczkowy rzędu 40000 Da) rozpuszczono w 63 ml 1 mM HCl w 4°C poczym szybko dodano 125 ml roztworu zawierającego 1000 mg (52 pmol) interferonu w buforze 50 mM boranu, pH 9,0. Końcowy stosunek białka do reagentu wynosił 1:3 zaś końcowe stężenie białka w mieszaninie reakcyjnej wynosiło 5,3 mg/ml. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w 4°C. Reakcję zatrzymano przez ustalenie pH reakcji na 4,5 przy użyciu lodowatego kwasu octowego.
Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 10-krotnie wodą i wprowadzono do kolumny wypełnionej 600 ml Fractogel EMD CM 650(M), zrównoważonej uprzednio 20 mM octanem sodu, pH 4,5, z liniową prędkością 1,3 cm/min. Kolumnę przemyto buforem równoważącym a następnie 10 mM NaCl w celu usunięcia nadmiaru reagentu, produktów ubocznych i oligomerów PEG-IFN. Koniugat o wzorze 1 eluowano buforem równoważącym zawierającym 200 mM NaCl. Niemodyfikowany IFN adsorbowany na kolumnie usunięto przez przemywanie 0,75 M NaCl w buforze równoważącym. Koniugat o wzorze 1 eluowany w stężeniu 0,3-0,5 mg/ml był dalej stężany i diafiltrowany w buforze końcowym, 20 mM octanie sodu, pH 5,0, zawierającym 150 mM NaCl. Całkowity uzysk koniugatu o wzorze wynosił 40-45%.
Oczyszczony PEG-IFN z wytwarzania na wielką skalę składał się w >99% z koniugatu o wzorze 1. Średni ciężar cząsteczkowy koniugatu o wzorze 1 według przykładu wynosił 62000 Da, z czego ciężar cząsteczkowy IFN-a2a wynosił 19241 Da, zaś średni ciężar cząsteczkowy reagentu, zawierający się od 40000 Da do 45000 Da, wynosił 43000 Da.
Przykład II. Charakteryzacja koniugatu o wzorze 1
Oznaczanie białka
Stężenia białka określono stosując wartość A280 równą 1,0 dla roztworu IFN-α2a 1 mg/ml.
Analiza SDS-PAGE
Koniugat analizowano przez elektroforezę na żelu SDS-poliakrylamidowym (8-16%) w warunkach redukujących, według metody Laemmli (Nature 227, 680 (1970)). SDS-PAGE zawierający koniugaty PEG zabarwiono stosując Fast Stain (Zoion Research, Inc.) według instrukcji producenta.
Określanie ilości endotoksyny
Stężenie endotoksyny określono stosując metodę LAL, według instrukcji producenta. Wszystkie preparaty zawierały endotoksynę w ilości >5 EU/mg.
Przykład III. Aktywności biologiczne in vitro koniugatu o wzorze 1
Aktywność przeciwwirusowa wobec komórek nerki bydlęcej
186 949
Aktywność przeciwwirusową in vitro IFN-α2a i koniugatu o wzorze 1, jaki wytworzono w przykładzie I.A., badano w teście biologicznym na hodowli komórkowej stosując komórki nerki bydlęcej Madin-Darby (MDBK) eksponowane na wirusa pryszczycy pyska (Rubinstein i in., wyżej). Aktywności przeciwwirusowe podano w tabeli 1, wraz z ich odpowiednimi aktywnościami resztkowymi, jako procent wyjściowego IFN.
Tabela 1
Aktywności przeciwwirusowe
Próbki Rodzaj PEG Całkowita ilość PEG (kDa) Liczba modyf. Lys Aktywność właściwa (U/mg) Aktywność resztkowa (%)
IFN-o.2a - - - 2,00 x 108 100
Koniugat o wzorze 1 rozgałęziony 40 1 1,40 x 107 7
Aktywność antyproliferacyjna wobec ludzkich komórek nowotworowych in vitro
Aktywności antyproliferacyjne in vitro badano wobec ludzkich komórek Daudi (chłoniak Burkitta) jak to opisano w Borden i in. Ludzkie komórki Daudi utrzymywano jako stacjonarne hodowle w zawiesinie wRPMI 1640 z dodatkiem 10% surowicy płodowej bydlęcej i 2 mM glutaminy (Grand Island Biologicals, Grand Island, NY). Komórki badano w kierunku mykoplazm i stwierdzono, że nie są zakażone. Komórki (2x104) wysiano do studzienek płytek do mikromiareczkowania (Costar, MA) w 100 pl pożywki. Do studzienek dodano różne stężenia IFN i koniugatu o wzorze 1, jaki wytworzono w przykładzie I.A., w objętości 100 μΐ. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 72 godziny. Komórki pulsowano 0,25 pCi/studzienkę 3H-tymidyny (New England Nuclear, Boston, MA), szesnaście godzin przed zbieraniem komórek. Komórki zebrano na filtry szklane i liczono w liczniku scyntylacyjnym. Wyniki podano jako % zahamowania wyliczony według wzoru:
% zahamowania = [(A-B)/A] x 100, gdzie;
A = cpm w hodowli kontrolnej (komórki inkubowane w samej pożywce)
B = cpm w hodowli doświadczalnej
Próbki badano w poczwórnym powtórzeniu, a odchylenie standardowe było niższe niż 20% średniej z wszystkich przepadków. Doświadczenia wykonywano przynajmniej dwukrotnie z porównywalnymi wynikami.
Aktywności antyproliferacyjne (IC50) IFN i koniugatu podano w tabeli 2. Dane wskazują na 28-krotny wzrost aktywności antyproliferacyjnej dla koniugatu o wzorze 1, w porównaniu z IFN.
Tabela 2
Aktywności antyproliferacyjne in vitro wobec ludzkiej linii komórkowej Daudi (chłoniak Burkitta)
Próbka Antypro l iferacyjna IC50 (ng/ml) Wzrost aktywności
IFN(x2a 0,56 1x
Koniugat o wzorze 1 0,02 28x
Przykład IV. Farmakokinetyka
Samice szczurów Sprague Dawley, z chirurgicznie wszczepionymi kaniulami w żyłach podobojczykowych, o średnim ciężarze ciała 240-260 g, trzymano osobno, przy swobodnym dostęoie do pożywienia i wody, w 12-godzinnym cyklu dzień-noc. W ciągu 4-6 godzin po przybyciu, kaniule podobojczykowe przepłukano PBS. Następnego dnia po przepłukaniu 0,150,2 ml PBS, wstrzyknięto 2x106 jednostek IFN-α w 0,2-0,4 ml PBS, a następnie 0,15-0,2 ml PBS w celu upewnienia się cały lek został podany zwierzęciu. Tak więc każde ze zwierząt otrzymało dawkę 8x1(0’ jednostek IFN-α na kilogram ciężaru ciała.
186 949
Próbki krwi pobierano w 5, 15 i 30 minut, oraz 1, 3, 5, 12 i 24 godziny po wstrzyknięciu IFN oraz koniugatu o wzorze 1. We wszystkich punktach czasu, po usunięciu pierwszych 0,15-0,2 ml krwi, świeżą strzykawką pobierano porcję 0,5 ml krwi przez kaniulę podobojczykową. Próbki rozdzielano do probówek do oddzielania surowicy w temperaturze pokojowej. Po zebraniu próbek dla wszystkich punktów czasu, probówki odwirowano przy 14000xg w chłodzonej wirówce Eppendorfa przez 10 minut. Oddzieloną surowicę przeniesiono do 1,5 ml probówek mikrowirownicz.ych i zamrożono w-80°C do momentu wykorzystania w teście biologicznym. Próbki surowicy odpowiednio rozcieńczono i badano aktywność przeciwwirusową w każdym punkcie czasu, jak to opisano. Z wykresu czasu w stosunku do aktywności, określono końcowy półokres trwania koniugatu o wzorze 1 i IFN-α, i podano go w tabeli 3 wraz z czasem przebywania w osoczu.
Tabela 3
Końcowy półokres trwania (t]/2) i średni czas pozostawania w osoczu
Próbka tj/2 (godziny) Okres pozostawania w osoczu (godziny)
IFN-a2a 2,1 1,0
Koniugat o wzorze 1 15,0 20,0
Końcowy t1/2 określono przez regresję liniową.
Przykład V. Immunogenność
Normalnym myszom BDF-1 (dziesięć na grupę), wstrzykiwano dootrzewnowo raz dziennie przez pięć dni w tygodniu różne preparaty interferonu w ilości 300000 jednostek aktywności przeciwwirusowej. Niektórym myszom wstrzykiwano również agregowaną postać IFN-a2a, która jest bardziej immunogenna niż postać monomeryczna. Próbki krwi pobierano 19 dni po ostatnim wstrzyknięciu zaś surowice badano pod kątem przeciwciał neutralizujących.
Jak to widać na tabeli 4, myszy, którym wstrzykiwano IFN-a2a wytworzyły przeciwciała neutralizujące, zaś odpowiedź ta była znacznie wzmożona u myszy, którym wstrzykiwano agregat interferonu. Nie wykrywano przeciwciał u większości zwierząt, którym wstrzykiwano koniugat według wynalazku.
Tabela 4 Immunogenność
Przeciwciała (INU/ml)*
Leczenie Mediana
IFN-a2a 2400
Agregaty IFN-a2a 42667
Koniugat o wzorze 1 0
Zakres
217-8533
8000-768000
0-1133 *Jednostki neutralizujące interferon/ml
Przykład VI. Aktywność przeciwnowotworowa in vivo
Aktywność przeciwnowotworowa in vivo koniugatu o wzorze 1 (PEG2-IFN-a2a) i niezmodyfikowanego IFN-a2a badano przez określanie ich zdolności do zmniejszania guzów z różnych ludzkich komórek nowotworowych wszczepionych podskórnie myszom. Wyniki pokazano na rysunkach fig. 1-6.
Procedura: bezgrasicze myszy nagie (Harlan) otrzymały podskórny wszczep w lewy bok z 2x106 ludzkich komórek nerkowych A498 (Fig. 1 i 2), ludzkich komórek nerkowych ACHN (Fig. 3 i 4) albo ludzkich komórek nerkowych G402 (Fig. 5 i 6). Nowotwory pozostawiono do wzrostu w ciągu 3-6 tygodni, jak to zaznaczono. Kryterium wielkości do włączenia do badania wynosiło 0,05-0,5 centymetrów sześciennych. Myszom podawano cotygodniowe dawki PEG2-IFN-a2a albo niezmodyfikowanego IFN-α2a wielkości 30, 60, 120 albo 300 pg. W przypadku PEG2-IFN-a2a myszy leczono raz tygodniu (poniedziałek) dawką 30, 60, 120
186 949 albo 300 ug na dawkę. W przypadku niezmodyfikowanego IFN-a2a myszom podawano go trzy razy w tygodniu (poniedziałek, środa, piątek) w ilości 10, 20, 40 albo 100 (Lig na dawkę. Czas trwania leczenia wynosił 4-5 tygodni w zależności od agresywności nowotworu. Objętość guzów mierzono co poniedziałek przed leczeniem.
Wyniki: PEG2-IFN-a2a wykazywał znaczne zmniejszenie wielkości guza A498 w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a w każdej ze stosowanych dawek w 7, 14, 21 oraz 28 dni po rozpoczęciu leczenia (Fig. 1 i 2). Leczenie kontynuowano przez cztery tygodnie. Siedem dni po przerwaniu leczenia zabito po trzy myszy w grupie. Nie obserwowano resztkowego guza u trzech myszy leczonych PEG2-IFN-a2a. U myszy leczonych niezmodyfikowanym IFN-a2a ciężar guzów A498 wynosił 1,28, 0,62 i 1,6 gramów odpowiednio u każdej z trzech myszy. Ciężar guzów A498 u trzech myszy kontrolnych wynosił odpowiednio 2,32, 2,37 i 1,94 grama. W 80 dni po zakończeniu leczenia istnienie guzów palpacyjnie u 7 myszy. Wszystkie myszy były wolne od nowotworu.
PEG2-IFN-a2a spowodował znaczne zmniejszenie wielkości guzów ACHN w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a dla dawek tygodniowych 60, 120 i 300 jjg w dniu 14, 21, 28 i 35 (Fig. 3 i 4).
PEG2-IFN-a2a spowodował znaczne zmniejszenie wielkości guzów G402 w porównaniu z niezmodyfikowanym IFN-a2a w dawce 60 i 120 pg w dniu 14, 21, 28 i 35 (Fig. 5 i 6).
186 949 d
LL
><
1
CM 0=0
X X/
o — θ\χ xz
0 = 0 1
I 0=0
O
E
CM z X
o CM CM Z
Z o
o o CM Z o
CM Z o
o CM CM Z
Z o
o o CE CM Z o o
oi
186 949
X
Z0=0
I o
O
X o
o o
X o
c\
X o
o
Di
z u_ I
1 X I
1
CM ,0=0
X 1/
-o—o \;
0=0
I o
O e
X o
o
Di
Schemat
186 949
Έ α
( luo) εζηΒ 3SOłdfqo ε
186 949
186 949
186 949
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
-----0.5
0.0
Objętość guza (cm )
A Kontrola nieleczona B 10pg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a C 20pg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a D 4(^g/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a E lOOpg/leczenie, PEG2-IFN alfa-2a
o 7 14 21 28 35
Dni
Fig.4
186 949
Fig. 5
186 949
Fig.6
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (13)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-α o wzorze 1, w którym R i R' oznaczają niezależnie C1-C6 alkil; X oznacza NH albo O; n i n' są liczbami całkowitymi, których suma wynosi od 600 do 1500; zaś średni ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego w koniugacie wynosi od około 26000 do około 66000.
  2. 2. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego wynosi od około 35000 do około 45000.
  3. 3. Koniugat według zastrz. 2, znamienny tym, że ciężar cząsteczkowy jednostek poliglikolu etylenowego wynosi około 40000.
  4. 4. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl.
  5. 5. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że X oznacza NH.
  6. 6. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że IFN-α oznacza IFN-α 2a.
  7. 7. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że średnia suma n in' wynosi od 850 do 1000.
  8. 8. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl; X oznacza NH; IFN-α oznacza IFN-a2a; zaś jeden lub oba z n i n' wynoszą 420.
  9. 9. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że R i R' oznacza metyl; X oznacza NH; IFN-α oznacza IFN-α2a; zaś jeden lub oba z n i n' wynoszą 520.
  10. 10. Koniugat według zastrz. 1, znamienny tym, że ma większą aktywność antyproliferacyjnąniż IFN-α i mniejszą aktywność przeciwwirusową niż IFN-α.
  11. 11. Sposób wytwarzania koniugatu PEG-IFN-α o zwiększonej aktywności antyproliferacyjnej i zmniejszonej aktywności przeciwwirusowej w porównaniu z IFN-α, znamienny tym, że reagent o wzorze 2 wiąże się kowalencyjnie z IFN-α do wytworzenia koniugatu PEGIFN-α .
  12. 12. Kompozycje farmaceutyczne, znamienne tym, że zawierają koniugat PEG-IFN-α określony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojętny nośnik.
  13. 13. Kompozycje farmaceutyczne do leczenia albo zapobiegania zaburzeniom immunomodulacji, takim jak choroby nowotworowe, znamienne tym, że zawierają koniugat PEGIFN-α określony w zastrz. 1 oraz terapeutycznie obojętny nośnik.
PL97320251A 1996-05-31 1997-05-28 Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne PL186949B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL320251A1 PL320251A1 (en) 1997-12-08
PL186949B1 true PL186949B1 (pl) 2004-04-30

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL97320251A PL186949B1 (pl) 1996-05-31 1997-05-28 Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne

Country Status (47)

Country Link
US (1) US7201897B2 (pl)
EP (1) EP0809996B1 (pl)
JP (1) JP2980569B2 (pl)
KR (1) KR100254097B1 (pl)
CN (1) CN1088721C (pl)
AR (1) AR008378A1 (pl)
AT (1) ATE235920T1 (pl)
AU (1) AU725195B2 (pl)
BG (1) BG62273B1 (pl)
BR (1) BR9703421A (pl)
CA (1) CA2203480C (pl)
CO (1) CO4950528A1 (pl)
CY (2) CY2433B1 (pl)
CZ (1) CZ292775B6 (pl)
DE (3) DE10399018I1 (pl)
DK (1) DK0809996T3 (pl)
EG (1) EG24292A (pl)
ES (1) ES2110386T3 (pl)
GR (1) GR970300063T1 (pl)
HR (1) HRP970298B1 (pl)
HU (1) HU227992B1 (pl)
IL (1) IL120902A (pl)
IS (1) IS1988B (pl)
LU (1) LU91029I2 (pl)
MA (1) MA24193A1 (pl)
MY (1) MY117909A (pl)
NL (1) NL300127I2 (pl)
NO (1) NO322964B1 (pl)
NZ (1) NZ314903A (pl)
OA (1) OA10488A (pl)
PA (1) PA8431001A1 (pl)
PL (1) PL186949B1 (pl)
PT (1) PT809996E (pl)
RS (1) RS49533B (pl)
RU (1) RU2180595C2 (pl)
SA (1) SA97180030B1 (pl)
SG (1) SG55314A1 (pl)
SI (1) SI0809996T1 (pl)
SK (1) SK284458B6 (pl)
SV (1) SV1997000049A (pl)
TJ (1) TJ328B (pl)
TN (1) TNSN97091A1 (pl)
TR (1) TR199700358A3 (pl)
TW (1) TW517067B (pl)
UA (1) UA56989C2 (pl)
UY (1) UY24572A1 (pl)
ZA (1) ZA974583B (pl)

Families Citing this family (144)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
DE69632062T2 (de) 1995-11-02 2004-11-18 Schering Corp. Kontinuierliche, niedrigdosierte zytokine-infusionstherapie
US5908621A (en) * 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
WO1999048535A1 (en) * 1998-03-26 1999-09-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
EE05214B1 (et) * 1998-04-28 2009-10-15 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Polool-IFN- β konjugaat, selle valmistamismeetod ja farmatseutiline kompositsioon
AU766597B2 (en) 1998-05-15 2003-10-16 Schering Corporation Combination therapy comprising ribavirin and interferon alpha in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
DK1087778T3 (da) * 1998-06-08 2005-12-19 Hoffmann La Roche Anvendelse af PEG-IFN-alfa og Ribavirin til behandling af kronisk hepatitis C
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
NZ514417A (en) * 1999-04-08 2003-10-31 Schering Corp Use of pegylated interferon alpha in chronic myeloid leukemia (CML) therapy
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
EP1535622B1 (en) 1999-04-08 2008-12-31 Schering Corporation Melanoma therapy
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
KR100773323B1 (ko) 2000-01-10 2007-11-05 맥시겐 홀딩스 리미티드 지-씨에스에프 접합체
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
EP1251866A1 (en) * 2000-01-24 2002-10-30 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
CA2739933A1 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Bayer Healthcare Llc Factor vii or viia-like molecules
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6924270B2 (en) 2000-04-20 2005-08-02 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic hepatitis C infection
DE60135393D1 (de) 2000-06-30 2008-09-25 Zymogenetics Inc Allelische Variante des Interferon-ähnlichen Proteins Zcyto21
ATE471956T1 (de) * 2001-01-30 2010-07-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verzweigte polyalkylenglykole
WO2002074806A2 (en) 2001-02-27 2002-09-26 Maxygen Aps New interferon beta-like molecules
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2003062290A1 (en) 2002-01-16 2003-07-31 Biocompatibles Uk Limited Polymer conjugates
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
UA86744C2 (en) 2002-06-21 2009-05-25 Ново Нордиск Хэлс Кеа Аг Pegylated factor vii glycoforms
MXPA05000796A (es) 2002-07-24 2005-04-19 Hoffmann La Roche Aditivos de acidos polialquilenglicolicos.
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
EP1400533A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
BR0314227A (pt) 2002-09-11 2005-10-25 Fresenius Kabi De Gmbh Derivados de amido de hidroxialquila
TWI318629B (en) * 2002-09-20 2009-12-21 Pharmacia Corp Process for decreasing aggregate levels of pegylated protein
US7538092B2 (en) 2002-10-08 2009-05-26 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
EP1565205A4 (en) * 2002-11-18 2006-07-05 Maxygen Inc Interferon-alpha polypeptides and conjugates
US7314613B2 (en) * 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
US20050176108A1 (en) * 2003-03-13 2005-08-11 Young-Min Kim Physiologically active polypeptide conjugate having prolonged in vivo half-life
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
CN1867581B (zh) 2003-10-10 2012-02-01 诺沃挪第克公司 Il-21衍生物
EP2641611A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
BRPI0507169A (pt) 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
JP5191729B2 (ja) 2004-03-11 2013-05-08 フレゼニウス・カビ・ドイチュラント・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 還元的アミノ化によって製造される、ヒドロキシアルキルデンプンとタンパク質とのコンジュゲート
CN101115769A (zh) 2004-05-19 2008-01-30 马克西根公司 干扰素-α多肽和偶联物
US7632924B2 (en) 2004-06-18 2009-12-15 Ambrx, Inc. Antigen-binding polypeptides and their uses
WO2006004959A2 (en) * 2004-06-30 2006-01-12 Egen Corporation Pegylated interferon alpha-1b
WO2006091231A2 (en) 2004-07-21 2006-08-31 Ambrx, Inc. Biosynthetic polypeptides utilizing non-naturally encoded amino acids
CA2576549C (en) 2004-08-12 2011-01-18 Schering Corporation Stable pegylated interferon formulation
BRPI0519430A2 (pt) 2004-12-22 2009-02-10 Ambrx Inc hormânio do crescimento humano modificado
US20060233740A1 (en) * 2005-03-23 2006-10-19 Bossard Mary J Conjugates of an hGH moiety and a polymer
EP1888633A4 (en) 2005-05-18 2010-01-27 Maxygen Inc UNFOLDED INTERFERON ALPHA POLYPEPTIDE
ES2553160T3 (es) 2005-06-17 2015-12-04 Novo Nordisk Health Care Ag Reducción y derivatización selectivas de proteínas Factor VII transformadas por ingeniería que comprenden al menos una cisteína no nativa
CA2612901A1 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon- alpha analogs and interferon tau
AU2005335491B2 (en) 2005-08-18 2010-11-25 Ambrx, Inc. Compositions of tRNA and uses thereof
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
DK2339014T3 (en) 2005-11-16 2015-07-20 Ambrx Inc Methods and compositions comprising non-natural amino acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种治疗肿瘤的药物及其应用
JPWO2007132882A1 (ja) 2006-05-16 2009-09-24 財団法人 東京都医学研究機構 Ｈｃｖ感染症を治療または予防するための医薬組成物
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
JP5399906B2 (ja) 2006-09-08 2014-01-29 アンブルックス，インコーポレイテッド 脊椎動物細胞用のハイブリッドサプレッサーｔｒｎａ
CN106008699A (zh) 2006-09-08 2016-10-12 Ambrx公司 经修饰的人类血浆多肽或Fc骨架和其用途
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
CA2668478C (en) * 2006-11-07 2015-05-26 Dsm Ip Assets B.V. Carbamate, thiocarbamate or carbamide comprising a biomolecular moiety
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
CN107501407B (zh) 2007-03-30 2022-03-18 Ambrx公司 经修饰fgf-21多肽和其用途
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
AU2007358605B8 (en) 2007-09-04 2012-02-02 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Polyethylene glycol modified interferon alpha 2b and preparation method and applications thereof
KR101483814B1 (ko) 2007-09-04 2015-01-16 바이오스티드 진 익스프레션 테크. 컴파니 리미티드 폴리에틸렌 글리콜에 의해 변형된 인터페론 알파 2ａ, 이의 합성 방법 및 용도
MX2010005317A (es) 2007-11-20 2010-06-02 Ambrx Inc Polipeptidos de insulina modificados y sus usos.
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
KR20100103595A (ko) * 2008-01-18 2010-09-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 비-글라이코실화된 단백질의 정제
AU2009209565B2 (en) * 2008-02-01 2013-09-19 Ascendis Pharma As Prodrug comprising a self-cleavable linker
MX344166B (es) 2008-02-08 2016-12-07 Ambrx Inc Leptina-polipeptidos modificados y sus usos.
US9840546B2 (en) 2008-04-03 2017-12-12 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Double-stranded polyethylene glycol modified growth hormone, preparation method and application thereof
MX344559B (es) 2008-04-29 2016-12-20 Ascendis Pharma As Compuestos de hormona de crecimiento humana recombinante unidos al peg.
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
AU2009268841B2 (en) 2008-07-08 2014-02-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Novel inhibitors of proliferation and activation of signal transducer and activator of transcription (STATS)
CN102159230A (zh) 2008-07-23 2011-08-17 Ambrx公司 经修饰的牛g-csf多肽和其用途
BR122012024318A2 (pt) 2008-09-26 2019-07-30 Ambrx, Inc. Polipeptídeos modificados de eritropoetina animal e seus usos
AU2009296267B2 (en) 2008-09-26 2013-10-31 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
EP2459211A1 (en) 2009-07-31 2012-06-06 Medtronic, Inc. Continuous subcutaneous administration of interferon- to hepatitis c infected patients
EA201200650A1 (ru) 2009-10-30 2012-12-28 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин
MX337432B (es) 2009-12-15 2016-03-04 Ascendis Pharma As Composicion de la hormona del crecimiento seca enlazada transitoriamente a un portador del polimero.
BR112012015597A2 (pt) 2009-12-21 2017-01-31 Ambrx Inc peptídeos de somatotropina suínos modificados e seus usos
MX349301B (es) 2009-12-21 2017-07-21 Ambrx Inc Polipéptidos de somatotropina bovina modificados y sus usos.
US9815876B2 (en) 2010-03-05 2017-11-14 Omeros Corporation Chimeric inhibitor molecules of complement activation
WO2011143274A1 (en) 2010-05-10 2011-11-17 Perseid Therapeutics Polypeptide inhibitors of vla4
JP2013529627A (ja) 2010-06-24 2013-07-22 パンメド リミテッド ヒドロキシクロロキンまたはヒドロキシクロロキンおよび抗ウイルス剤の組合せを使用するｃ型肝炎ウイルス関連疾患の処置
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
JP2013541937A (ja) 2010-08-05 2013-11-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｍｈｃ抗体−抗ウイルス性サイトカイン融合タンパク質
EA030886B1 (ru) 2010-08-17 2018-10-31 Амбркс, Инк. Модифицированные полипептиды релаксина, содержащие некодируемую в природе аминокислоту, связанную с полимером, и их применение
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
TWI480288B (zh) 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
RU2014103288A (ru) 2011-07-01 2015-08-10 Байер Интеллектчуал Проперти Гмбх Слитые полипептиды релаксина и их применение
WO2013017653A1 (en) 2011-08-03 2013-02-07 Cytheris Hcv immunotherapy
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
WO2014004639A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Sutro Biopharma, Inc. Modified fc proteins comprising site-specific non-natural amino acid residues, conjugates of the same, methods of their preparation and methods of their use
EP2890402B1 (en) 2012-08-31 2019-04-17 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
WO2015006555A2 (en) 2013-07-10 2015-01-15 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
EP3055298B1 (en) 2013-10-11 2020-04-29 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
CN114805532A (zh) 2014-10-24 2022-07-29 百时美施贵宝公司 修饰的fgf-21多肽及其用途
JP6820841B2 (ja) 2014-11-06 2021-01-27 ファーマエッセンティア コーポレイション ペグ化インターフェロンのための投薬計画
SG11201703870UA (en) 2014-11-18 2017-06-29 Ascendis Pharma Endocrinology Div As Novel polymeric hgh prodrugs
PT3220892T (pt) 2014-11-21 2021-11-05 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Formas de dosagem de hormona do crescimento de longa ação
JP6668468B2 (ja) 2015-11-03 2020-03-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｈｂｖキャプシドアセンブリ阻害剤とインターフェロンの併用療法
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
PE20191716A1 (es) 2017-02-08 2019-12-05 Bristol Myers Squibb Co Polipeptidos de relaxina modificada que comprenden un mejorador farmacocinetico y sus usos
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
CA3111576A1 (en) 2018-09-11 2020-03-19 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and their uses
JP2022512746A (ja) 2018-10-19 2022-02-07 アンブルックス，インコーポレイテッド インターロイキン－１０ポリペプチド複合体、その二量体、およびそれらの使用
CA3128081A1 (en) 2019-02-12 2020-08-20 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods and uses of antibody-tlr agonist conjugates
AU2020233198B2 (en) 2019-03-04 2025-05-15 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
EP4117732A1 (en) 2020-03-11 2023-01-18 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
JP2023538071A (ja) 2020-08-20 2023-09-06 アンブルックス，インコーポレイテッド 抗体－ｔｌｒアゴニストコンジュゲート、その方法及び使用
AU2021410080A1 (en) * 2020-12-23 2023-06-22 Jazz Pharmaceuticals Ireland Ltd. Methods of purifying charge-shielded fusion proteins
CA3213805A1 (en) 2021-04-03 2022-10-06 Feng Tian Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024164213A1 (zh) 2023-02-09 2024-08-15 谢彦晖 聚乙二醇修饰的白介素2、糖皮质激素和透明质酸用于治疗特应性皮炎
WO2026043823A2 (en) 2024-08-19 2026-02-26 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of preparation and uses thereof

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3380726D1 (en) 1982-06-24 1989-11-23 Japan Chem Res Long-acting composition
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
WO1984004745A1 (fr) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Nouveaux polypeptides et leur utilisation
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
JP2524586B2 (ja) 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
DK0400472T3 (da) * 1989-05-27 1996-05-13 Sumitomo Pharma Fremgangsmåde til fremstilling af polyethylenglycolderivater og modificeret protein
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
RU2006036C1 (ru) * 1991-12-27 1994-01-15 Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи РАМН Способ определения антигенов
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
ATE214940T1 (de) * 1993-11-10 2002-04-15 Enzon Inc Verbesserte interferon-polymerkonjugate
DE69521880T2 (de) * 1994-02-08 2002-01-03 Amgen Inc., Thousand Oaks Orales verabreichungssystem von chemischmodifizierten proteinen g-csf
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
JP2758154B2 (ja) 1995-04-06 1998-05-28 エフ・ホフマン−ラ ロシユ アーゲー インターフェロンを含む液体製剤
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
NO322964B1 (no) 2006-12-18
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
PT809996E (pt) 2003-06-30
SK67397A3 (en) 1997-12-10
YU17597A (sh) 1999-07-28
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
ZA974583B (en) 1998-11-17
NO972480L (no) 1997-12-01
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
AR008378A1 (es) 2000-01-19
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
IS4491A (is) 1997-12-01
EG24292A (en) 2009-01-08
SV1997000049A (es) 1998-07-09
AU725195B2 (en) 2000-10-05
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
OA10488A (fr) 2002-04-11
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
TW517067B (en) 2003-01-11
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
BG101540A (en) 1998-02-27
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
CN1167777A (zh) 1997-12-17
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
NL300127I1 (pl) 2003-07-01
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
AU2372397A (en) 1997-12-04
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
SG55314A1 (en) 1998-12-21
MX9704012A (es) 1997-11-29
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
CN1088721C (zh) 2002-08-07
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
HU227992B1 (en) 2012-08-28
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
IL120902A0 (en) 1997-09-30
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
BR9703421A (pt) 1998-09-15
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
UY24572A1 (es) 2000-12-29
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
KR970074791A (ko) 1997-12-10
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
IL120902A (en) 2004-06-20
DE809996T1 (de) 1998-04-09
TJ328B (en) 2001-12-24
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
CA2203480C (en) 2009-06-30
NO972480D0 (no) 1997-05-30
MY117909A (en) 2004-08-30
US7201897B2 (en) 2007-04-10
IS1988B (is) 2005-02-15
RS49533B (sr) 2006-12-15
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
CY2433B1 (en) 2004-11-12
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
PL320251A1 (en) 1997-12-08
NZ314903A (en) 1998-10-28
TJ97000465A (en) 1998-12-25
SI0809996T1 (en) 2003-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL186949B1 (pl) Fizjologicznie czynny koniugat PEG-IFN-alfa, sposób jego wytwarzania oraz zawierające go kompozycjefarmaceutyczne
JP2859105B2 (ja) インターフエロン抱合体
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
US20070219356A1 (en) G-CSF conjugates
US20060029573A1 (en) Pegylated interferon alpha-1b
CZ298579B6 (cs) Konjugát polyolu a interferonu-beta
CN103228792A (zh) PEG-干扰素λ1结合物
JP2009536963A (ja) ポリエチレングリコール−インターフェロンα結合体
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
KR100480432B1 (ko) Ｇ-ｃｓｆ와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
HK1005225B (en) Interferon conjugates
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
KR100761652B1 (ko) 단백질 또는 펩타이드에 결합되는 다가지의 고분자유도체와 접합체
KR20030045414A (ko) 인터페론-베타와 폴리에틸렌글리콜 유도체의 배합체
HK1131345A (en) Polyethylene glycol-interferon alpha conjugate
KR20070110162A (ko) 폴리에틸렌 글리콜-인터페론 알파 접합체