PL187763B1 - Sposób chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklosporyn - Google Patents
Sposób chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklosporynInfo
- Publication number
- PL187763B1 PL187763B1 PL32911397A PL32911397A PL187763B1 PL 187763 B1 PL187763 B1 PL 187763B1 PL 32911397 A PL32911397 A PL 32911397A PL 32911397 A PL32911397 A PL 32911397A PL 187763 B1 PL187763 B1 PL 187763B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cyclosporin
- smb
- chromatography
- technique
- impurities
- Prior art date
Links
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 title claims abstract description 35
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 title claims abstract description 35
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 title claims abstract description 21
- 108010036941 Cyclosporins Proteins 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims description 8
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 claims 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 19
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 abstract description 6
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 abstract description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 abstract description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 6
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 4
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 3
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-[(1r)-1-hydroxyethyl]-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontan Chemical compound C\C=C\C[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H]1N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-QRVTZXGZSA-N 0.000 description 1
- FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-30-ethyl-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,25,28-octamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,17,20 Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-WKHWYDSQSA-N 0.000 description 1
- ZMKGDQSIRSGUDJ-VSROPUKISA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s,21s,24s,30s,33s)-33-[(e,1r,2r)-1-hydroxy-2-methylhex-4-enyl]-1,4,7,10,12,15,19,25,28-nonamethyl-6,9,18,24-tetrakis(2-methylpropyl)-3,21-di(propan-2-yl)-30-propyl-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-undecazacyclotritriacontane-2,5,8,11,14,1 Chemical compound CCC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZMKGDQSIRSGUDJ-VSROPUKISA-N 0.000 description 1
- JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin C Natural products CC=CCC(C)C(O)C1N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C(C(C)O)NC1=O JTOKYIBTLUQVQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin L Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)NC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZSNYYEIGOZADKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N Cyclosporin U Natural products CCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O FWMBRFVXLUJFCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMKGDQSIRSGUDJ-UHFFFAOYSA-N NVa2 cyclosporine Natural products CCCC1NC(=O)C(C(O)C(C)CC=CC)N(C)C(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O ZMKGDQSIRSGUDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 108010019248 cyclosporin C Proteins 0.000 description 1
- 108010019249 cyclosporin G Proteins 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- MHYCRLGKOZWVEF-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hydrate Chemical compound O.CCOC(C)=O MHYCRLGKOZWVEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
- C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklo- sporyn z surowego ekstraktu zawierajacego cyklosporyne z zastosowaniem zelu krze- mionkowego jako adsorbenta, znamienny tym, ze: a) w pierwszym etapie chromatografii za pom oca preparatywnej techniki HPLC lub techniki z symulowanym ruchomym zlozem surowy ekstrakt rozdziela sie przez frak- cjonowanie w podzielonym profilu stezenia na frakcje uzyteczna 1, zawierajaca zanieczysz- czenia niepolame i na frakcje uzyteczna 2, zawierajaca zanieczyszczenia polarne oraz b) frakcje uzyteczna 1 i frakcje uzyteczna 2 w nastepnym drugim etapie chromato- grafii poddaje sie oczyszczaniu za pom oca techniki SMB. PL PL PL
Description
Wynalazek dotyczy sposobu chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklosporyn z surowego ekstraktu zawierającego cyklosporynę z zastosowaniem żelu krzemionkowego jako adsorbenta. Istota wynalazku polega na tym, że:
a) w pierwszym etapie chromatografii za pomocą preparatywnej techniki HPLC lub techniki z symulowanym złożem, surowy ekstrakt rozdziela się przez frakcjonowanie w oddzielnym profilu stężenia, na frakcję użyteczna 1, zawierającą zanieczyszczenia niepolame, oraz na frakcję użyteczną 2, zawierającą zanieczyszczenia polarne, oraz
b) frakcję użyteczną 1 (rafinat) i frakcję użyteczną 2 (ekstrakt) poddaje się dalszemu, drugiemu etapowi chromatografii za pomocą techniki SMB.
Korzystnie, zarówno pierwszy etap chromatografii jak i drugi etap chromatografii może być przeprowadzany w systemie normalnofazowym z octanem etylu lub w systemie odwrotnofazowym acetonitryl/woda.
W szczególności przez zastosowanie techniki SMB uzyskuje się następujące zalety:
- można realizować procedurę absolutnie ciągłą, to znaczy przy nowym trybie chromatografii odpadają oddzielne wprowadzania substancji. Ciągle działająca chromatografia tego typu jest szczególnie korzystna w zastosowaniu przemysłowym.
- technika SMB umożliwia działanie z roztworami stężonymi bardziej niż dotychczas. Dzięki temu maleje koszt rozpuszczalnika, a równocześnie potrzeba mniej czasu na odzyskanie rozpuszczalnika.
Dzięki tym korzystnym parametrom ekonomicznym techika SMB jest w coraz większym stopniu stosowana również do chromatograficznego oddzielania biotechnologicznie wytwarzanych protein (Nadler, T.K., F.E. Sch. Sei., Purdue Univ. East Lafayette, IN 47907 USA) oraz Aminosauren (Adachi, S. i inni, Agric. Biol. Chem. 1991, 55, 925-32).
Również w przedmiotowym przypadku oczyszczania produktów zawierających cyklosporynę A można stwierdzić wyższość systemu SMB w porównaniu z konwencjonalnymi sposobami chromatograficznymi.
porównanie techniki SMB z techniką HPLC
| System fazowy | Parametr | Iloraz (SMB: HPLC) |
| System normalnofazowy | Zużycie octanu etylu | 0,7 |
| Zużycie materiału Si 60 | 0,25 | |
| Wydajność produkcyjna (g zasilania/dzień/kg adsorbentu) | 2,5 | |
| System odwrotnofazowy | Zużycie acetonitryl/woda | 0,15 |
| Zużycie materiału RP-18 | 0,15 | |
| Wydajność produkcyjna (g zasilania/dzień/kg adsorbentu) | 10 |
Najważniejszym wymaganiem technicznym dla realizacji oddzielania SMB jest dokładne ustawienie różnych przepływów częściowych (patrz przykłady), aby zapewnić ąuasistacjonamy stan frontów eluowania w zależności od czasów przełączania. Ponadto dla optymalnego ustawiania rozdzielania SMB konieczna jest dokładna znajomość izoterm adsorpcji użytecznego produktu oraz zanieczyszczeń w systemie chromatografii. Trzeba je uprzednio określić analitycznie.
Ponadto przez wprowadzenie tak zwanej piątej strefy udało się zlikwidować dotychczas zwykle stosowane rozdzielanie dwuskładnikowe klasycznej czterostrefowej techniki SMB. Za
187 763 pomocą systemu płuczącego zainstalowanego w tej dodatkowej strefie możliwe jest teraz eliminowanie zanieczyszczeń, które mają ekstremalne wartości k' względem cyklosporyny A. Możliwe jest zatem dalsze polepszenie jakości użytecznego produktu. Zwykle przy użyciu standardowej techniki SMB można przeważnie łatwo rozdzielać mieszaniny o wartościach k' w zakresie 0,6-2,0 (k' = 1 oznacza produkt użyteczny). Jednakże składniki, które są poza tym zakresem, normalnie są jedynie niecałkowicie wypłukiwane w ekstrakcie, także stężenie w rafinacie jest większe niż w doprowadzanym materiale (fig. 1).
Zgodnie z nową procedurą według wynalazku kolumny są doprowadzane do określonego stanu przez przemywanie rozpuszczalnikiem o dużej sile eluowania (np. metanolem) po przełączeniu z czwartej strefy do pierwszej. Odpowiednie kolumny urządzenia, które są usytuowane w piątej strefie, są następnie na czas trwania jednego taktu całkowicie wyłączone z zamkniętego pierścienia pozostałych czterech stref (fig. 1).
Piąta strefa jest przy tym podzielona na dwa oddzielne etapy:
1. Podczas trwania pierwszego etapu częściowego kolumny piątej strefy są przemywane za pomocą odpowiedniego rozpuszczalnika o dużej sile eluowania, aby oczyścić fazę stacjonarną z przywierających jeszcze zanieczyszczeń. Jako środek płuczący korzystnie stosuje się metanol. W przypadku płukania materiału RP można również stosować czysty acetonitryl, przez co upraszcza się problem odzyskiwania rozpuszczalnika dzięki brakowi konieczności dodatkowego rozpuszczalnika.
2. W drugim etapie częściowym płukanie jest przestawiane ze środka płuczącego na eluent potrzebny do danego oddzielania.
Jeżeli kolumny są rozmieszczone w strefach tak, że wiele kolumn jest usytuowane w piątej strefie, wówczas proces płukania można zintensyfikować, jeżeli kolumny te są podczas płukania połączone równolegle.
Dalszą optymalizację procedury uzyskano przy wysokim oczyszczaniu tak zwanej frakcji użytecznej 2 z pierwszego etapu chromatografii. Oprócz cyklosporyny A frakcja ta zawiera przede wszystkim zanieczyszczenia polarne, takie jak cyklosporyna U i L. Niespodziewanie po zamianie miejsc pobierania ekstraktu i rafinatu w urządzeniu SMB można było stwierdzić, że potem ta użyteczna frakcja 2 mogła być bardzo łatwo oddzielana. W związku z tym zanieczyszczenia polarne są eluowane przed wartościowym produktem, cyklosporyną A, to znaczy mają one krótsze czasy przebywania. Oznacza to, że przy stosowaniu tego specjalnego reżimu SMB w drugim etapie chromatografii można pracować wyłącznie z systemem RP-18, przez co znacznie upraszcza się odzyskiwanie rozpuszczalnika (schemat 1).
W poniższych trzech przykładach, które wykazują przydatność techniki SMB do drugiego stopnia chromatografii, stosowane substancje wyjściowe w swym profilu zanieczyszczeń odpowiadają typowym frakcjom użytecznym, jakie występują po pierwszym etapie chromatografii zrealizowanym przez konwencjonalny preparatywny system HPLC.
W przykładzie 1 przedstawiono wysokie oczyszczanie produktu pośredniego pierwszego stopnia chromatografii za pomocą techniki SMB w systemie normalnofazowym Si 60/octan etylu. Oprócz cyklosporyny A użyty produkt zawiera głównie zanieczyszczenia polarne.
W wyniku należy zauważyć wyraźne zmniejszenie zawartości polarnych cyklosporyn (zwłaszcza U i L oraz B i C), przez co wyraźna staje się zasadnicza przydatność tego systemu rozdzielania w połączeniu z techniką SMB.
Przykład 2 opisuje wysokie oczyszczanie produktu pośredniego, który jako frakcja użyteczna 1 zawiera głównie niepolame zanieczyszczenia, za pomocą techniki SMB w systemie odwrotnofazowym RP-18/acetonitryl, woda (60:40, obj/obj). Po rozdzielaniu SMB obserwuje się wyraźne zmniejszenie zawartości niepolamych cyklosporyn (zwłaszcza G i D).
W przykładzie 3 opisano wysokie oczyszczanie produktu pośredniego, który zawiera frakcję użyteczną 1 z przeważnie niepolamymi zanieczyszczeniami, za pomocą techniki SMB w systemie normalnofazowym z octanem etylu. W porównaniu z przykładem 1 przez zamianę miejsc pobierania ekstraktu/rafinatu uzyskuje się większe zmniejszenie zawartości niepolarnych zanieczyszczeń oraz oszczędność rozpuszczalnika. Takie dokładne rozdzielanie jest zaskakujące o tyle, że przed kilkoma laty, nawet za pomocą analitycznego systemu HPLC nie było możliwości rozdzielenia od cyklosporyny A tych substancji towarzyszących niezwykle
187 763 podobnych chromatograficznie. Otrzymana cyklosporyna A spełnia po rekrystalizacji wymagania jakościowe zarówno według USP XXIII jak i według EUROPEAN PhARMACOPEIA, 2. wydanie, 1995.
Fig. 1: Schemat zasadniczy 5-strefowego systemu SMB
Ruchome Złoże Zawracanie do obiegu
Eluent
Opis fig. 1
Eluent przepływa w obiegu pomiędzy strefami 1 i 4. Doprowadzanie próbek odbywa się pomiędzy strefami 2 i 3. Świeży eluent doprowadzany jest pomiędzy strefami 4 i 1. Rafinat (cyklosporyna A) odbierany jest pomiędzy strefami 3 i 4, a ekstrakt (cyklosporyna A + zanieczyszczenia) pomiędzy strefami 1 i 2. Każda kolumna jest wyposażona w cztery zawory do doprowadzania (doprowadzanie substancji), eluentu, ekstraktu (produkt użyteczny + zanieczyszczenia) i rafinatu (produkt użyteczny). Ruch materiału nośnego symulowany jest przez przesuwanie punktów odbierania i doprowadzania względem kierunku eluowania. Dzięki temu można uzyskać ciągłe rozdzielanie substancji pomiędzy fazami systemu kolumn, a stężenia eluentu w punktach odbierania wydają się stałe.
187 763
Ponadto w eksperymentalnym teście można było niespodziewanie stwierdzić, że oddzielanie ubocznych cyklosporyn U i L z jednej strony oraz G i D z drugiej strony przez stosowanie techniki SMB przebiega pełniej niż za pomocą konwencjonalnej chromatografii, a równocześnie osiąga się większe wydajności w etapach. Na skutek tego dla porównywalnych wydajności produkcyjnych możliwe są mniejsze urządzenia, które dzięki temu mają mniejsze zapotrzebowanie zarówno na materiał wypełniający kolumny jak i na eluent.
Oczywiście stosowanie techniki sMb jest zasadniczo możliwe również w pierwszym etapie chromatografii (schemat 3). Zasadniczo przy istnieniu odpowiednich surowych ekstraktów (małe obciążenie materiałami balastowymi, przede wszystkim natury lipofilowej) można w pierwszym stopniu przeprowadzać rozdzielanie SMB w systemie odwrotnofazowym z acetonitrylem i wodą (schemat 4). Ponieważ, jak ponadto stwierdzono, również zanieczyszczenia polarne mogą być oddzielane od cyklosporyny A w systemie odwrotnofazowym z acetonitrylem i wodą po zamianie położeń rafinatu i ekstraktu, możliwe jest wtedy przeprowadzanie oczyszczania cyklosporyny A jedynie przez zastosowanie systemu odwrotnofazowego z acetonitrylem i wodą dwustopniowo za pomocą techniki SMB, albo też można oddzielać od cyklosporyny A niepolame zanieczyszczenia w systemie normalnofazowym z octanem etylu po zamianie miejsc rafinatu i ekstraktu, możliwe jest zatem również oczyszczanie cyklosporyny A jedynie przy użyciu systemu normalnofazowego z octanem etylu dwustu-pniowo za pomocą techniki SMB.
Schemat 1
Cyklosporyna A- surowy ekstrakt
| 1. stopień chromatografii | Żel krzemionkowy Si60 | |
| Konwencj onalny preparatywny system HPLC | Octan etylu | |
| Frakcja użyteczna 1 | Frakcja użyteczna 2 | |
| Niepolarne | Polarne | |
| Cy A + Cy G, Cy D itd. | Cy A + Cy L, Cy U itd. |
| 2. stopień chromatografii | Si60 | Si60 |
| SMB | Octan etylu | Octan etylu |
187 763
Schemat 2
Cyklosporyna A- surowy ekstrakt
| 1. stopień chromatografii | Żel krzemionkowy Si60 | |
| Konwencjonalny preparatywny system HPLC | Octan etylu | |
| Frakcja użyteczna 1 | Frakcja użyteczna 2 | |
| Niepolarne | Polarne | |
| Cy A + Cy G, Cy D itd. | Cy A + Cy L, Cy U itd. |
| 2. stopień chromatografii | RP-18 | Si60 |
| SMB | Acetonitryl, woda | Octan etylu |
| lub | ||
| po zamianie miejsc ekstraktu i rafinatu: | ||
| RP-18/acetonitryl, woda |
187 763
Schemat 3
Cyklosporyna A - surowy ekstrakt
| 1. stopień chromatografii SMB | Si60 octan etylu | |
| Rafinat | Ekstrakt | |
| Cy A + zanieczyszczenia niepolarne | Stężenie zanieczyszczeń polarnych, (przykład 1) |
| 2. stopień chromatografii SMB | RP-18 acetonitryl, woda | |
| Rafinat | Ekstrakt | |
| Cy A | Stężenie zanieczyszczeń niepolarnych. (przykład 2) |
Schemat 4
Cyklosporyna A - surowy ekstrakt
| 1. stopień chromatografii SMB | RP-18 acetonitryl. woda | |
| Rafinat | Ekstrakt | |
| Cy A + zanieczyszczenia polarne | Stężenie zanieczyszczeń niepolarnych. (przykład 2) |
| 2. stopień chromatografii SMB | RP-18 acetonitryl. woda | |
| Rafinat | Ekstrakt | |
| Stężenie zanieczyszczeń polarnych | Cy A |
187 763
Przykład 1
Oddzielenie głównie polarnych cyklosporyn (cyklosporyny C, B, L, U) od cyklosporyny A w drugiej chromatografii za pomocą techniki SMB w systemie normalnofazowym z octanem etylu.
| Urządzenie | LiChrosep® 8-50, urządzenie pilotowe |
| Kolumna | 8 kolumn, długość 100 mm x Owew. 50 mm kompresja osiowa |
| Faza stacjonarna | LiChrospher® Si 60,15 mm |
| Faza ruchoma | Octan etylu |
| Substancja surowa | nr 011194 Cyklosporyny Czystość % C 2,3 B 6,9 L 0,7 U 1,2 A 86,2 G 1,0 D 0,1 Suma zanieczyszczeń 13,8% |
| Doprowadzana substancja Doprowadzanie | Roztwór w octanie etylu 5,8 g/l 5,3 ml/min |
| Eluent | 100 ml/min |
| Zawracanie do obiegu | 151 ml/min |
| Detekcja | Analiza HPLC w przepływie ekstraktu i rafinatu |
| Wyniki | |
| Rafinat | Cyklosporyny Czystość % C 0,2 B 0,4 L 0,0 U 0,4 A 97,4 G 1,1 D 0,1 Suma zanieczyszczeń: 2,6% |
| Uzysk cyklosporyny A >95% | |
| Ekstrakt | Cyklosporyna A 75,5% Suma zanieczyszczeń: 24,5% |
| Wynik eksperymentu wykazuje w zasadzie możliwość oddzielania przede wszystkim zanieczyszczeń biegunowych od cyklosporyny A w systemie Si60 / octan etylu. |
187 763
Przykład 2
Oddzielenie głównie niepolamych cyklosporyn (cyklosporyny G, D) od cyklosporyny A za pomocą techniki SMB w systemie RP-18 acetonitryl/woda.
| Urządzenie | LiChrosep® 8-50, urządzenie pilotowe |
| Kolumna | 8 kolumn, długość 100 mm x 0wew. 50 mu kompresja osiowa |
| Faza stacjonarna | LiChrospher® RP-18, 15 mm |
| Faza ruchoma | Acclonitryl/woda - 60/40 obj/obj |
| Substancja surowa | nr 251094 Cyklosporyny Czystość % L 0,3 U 0,8 A 92,5 G 4.1 D 1,6 Suma zanieczyszczeń 7,5% |
| Doprowadzana substancja Doprowadzanie | Roztwór w acetonitrylu 1g/l ' 12,7ml/min |
| Eluent | 81 ml/min |
| Zawracanie do obiegu | 151 ml/min |
| Detekcja | Analiza HPLC w przepływie ekstraktu i rafinatu |
| Wyniki | |
| Rafinat | Cyklosporyny Czystość % nieznana (α=3,4) 0,1 L 0,2 U 0,5 A 99,1 G 0,0 D 0,0 nieznana (α=20, 1) 0.1 Suma zanieczyszczeń: 0,9% Zawartość cyklosporyny A (substancja sucha): 99,4% Etapowy uzysk cyklosporyny A >95% |
| Czystość rafinatu uzyskana w tym eksperymencie wynosi 99,1%. Po wysuszeniu tej substancji oznaczono zawartość cyklosporyny A 99,4%. Wynik ten wskazuje na możliwość oddzielania niepolamych zanieczyszczeń od cyklosporyny A w systemie RP-18/acetonitryl, woda (60:40, obj./obj.) |
187 763
Przykład 3
Oddzielenie głównie niepolarnych cyklosporyn (cykloporyny C, G, D) od cyklosporyny A w drugiej chromatografii za pomocą techniki SMB w systemie normalnofazowym z octanem etylu przez zamianę miejsc pobierania ekstraktu i rafinatu.
| Urządzenie | LiChrosep® 12-26, urządzenie pilotowe |
| Kolumna | 8 kolumn, długość 100 mm x 0vrew. 26 mm kompresja osiowa |
| Faza stacjonarna | LiChrospher® Si(63,15-25 mm |
| Faza ruchoma | Octan etylu |
| Substancja surowa | Cyklosporyny Czystość % C 0,04 B 0,122 L 0.075 A 92,462 G 2,934 D 4,177 Suma zanieczyszczeń 7,538% |
| Doprowadzana substancja Doprowadzanie | Roztwór w octanie etylu 28 g/l 1,5 ml/min |
| Eluent | 16,4 ml/min |
| Detekcja Wyniki | Analiza HPLC w przepływie ekstraktu i rafinatu |
| Rafinat | Cyklosporyny Czystość % C ' ' 0,02 B 0,075 L 0,063 A 99,364 nieznana 0,219 G 0,175 Suma zanieczyszczeń: θ 636% Uzysk cyklosporyny A: >95% |
Wynik ten wykazuje, że przez powyższy reżim przełączania przy stosowaniu techniki SMB można również niepolarne zanieczyszczenia oddzielać bardzo dobrze w systemie Si 60 / octan etylu.
Claims (2)
1) Oznaczenie analityczne HPLC według PHARMEUROPA wol. 4, nr 4, s. 270 i dalsze
W pierwszym etapie chromatograficznym polarne cyklosporyny (C, B, L, U) zostają oddzielone od niepolamych cyklosporyn (G, D) tak, że uzyskuje się dwie użyteczne frakcje, które oprócz cyklosporyny A zawierają tylko zanieczyszczenia polarne, albo tylko zanieczyszczenia niepolame. W ten sposób w drugim etapie chromatograficznym cyklosporynę A można korzystnie oczyścić z odpowiednich zanieczyszczeń.
Sposobem według wynalazku uzyskuje się ultraczystą cyklosporynę A za pomocą oczyszczania chromatograficznego, przez stosowanie konwencjonalnego HPLC w połączeniu z techniką złoża z symulacją ruchu (SMB), które przeprowadza się następująco:
1. Chromatografia HPLC lub technika SMB.
2. Chromatografia technika SMB.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE1996111094 DE19611094C2 (de) | 1996-03-21 | 1996-03-21 | Verfahren zur Reinigung von Cyclosporin A und/oder verwandten Cyclosporinen aus einem Cyclosporin-haltigen Rohextrakt unter Anwendung chromatographischer Verfahren mit Kieselgel als Adsorbens |
| PCT/DE1997/000525 WO1997034918A1 (de) | 1996-03-21 | 1997-03-14 | Chromatographisches verfahren zur gewinnung von hochgereinigtem cyclosporin a und verwandten cyclosporinen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL329113A1 PL329113A1 (en) | 1999-03-15 |
| PL187763B1 true PL187763B1 (pl) | 2004-10-29 |
Family
ID=7788939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL32911397A PL187763B1 (pl) | 1996-03-21 | 1997-03-14 | Sposób chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklosporyn |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6306306B1 (pl) |
| EP (1) | EP0888382B1 (pl) |
| JP (1) | JP3408818B2 (pl) |
| KR (1) | KR100467127B1 (pl) |
| CN (1) | CN1196711C (pl) |
| AT (1) | ATE210146T1 (pl) |
| CZ (1) | CZ293243B6 (pl) |
| DE (3) | DE19611094C2 (pl) |
| DK (1) | DK0888382T3 (pl) |
| ES (1) | ES2169384T3 (pl) |
| HU (1) | HU222200B1 (pl) |
| IL (1) | IL125807A (pl) |
| NO (1) | NO321570B1 (pl) |
| PL (1) | PL187763B1 (pl) |
| PT (1) | PT888382E (pl) |
| RU (1) | RU2163607C2 (pl) |
| SK (1) | SK282836B6 (pl) |
| WO (1) | WO1997034918A1 (pl) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030220234A1 (en) | 1998-11-02 | 2003-11-27 | Selvaraj Naicker | Deuterated cyclosporine analogs and their use as immunodulating agents |
| RU2155747C2 (ru) * | 1998-07-14 | 2000-09-10 | Воронежский государственный университет | Способ безреагентного разделения смеси тирозина и триптофана |
| DE19858892A1 (de) * | 1998-12-19 | 2000-06-21 | Merck Patent Gmbh | Kontinuierliches Verfahren zur Trennung von Stoffen nach Molekülgröße |
| WO2000040219A1 (en) | 1998-12-30 | 2000-07-13 | Dexcel Ltd. | Dispersible concentrate for the delivery of cyclosporin |
| US7732404B2 (en) | 1999-12-30 | 2010-06-08 | Dexcel Ltd | Pro-nanodispersion for the delivery of cyclosporin |
| DE60231570D1 (de) | 2001-10-19 | 2009-04-23 | Isotechnika Inc | Synthese von Cyclosporinanalogen |
| US6843854B2 (en) | 2002-05-31 | 2005-01-18 | Purdue Research Foundation | Method and apparatus for separating a component from a mixture |
| CN102050865B (zh) * | 2002-09-13 | 2014-03-12 | 拜奥根Idec公司 | 通过模拟移动床层析纯化多肽的方法 |
| CN1763084B (zh) * | 2005-10-11 | 2010-04-21 | 山东新时代药业有限公司 | 高纯度环孢菌素a的制备方法 |
| EP2151450A1 (de) | 2008-07-29 | 2010-02-10 | Sandoz AG | Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden |
| CN102086226B (zh) * | 2009-12-04 | 2012-10-10 | 山东新时代药业有限公司 | 一种制备环孢菌素a的方法 |
| US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| US9428711B2 (en) | 2013-05-07 | 2016-08-30 | Groupe Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
| EP3118186B1 (fr) | 2013-12-11 | 2022-02-09 | Novasep Process | Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures |
| US10975031B2 (en) | 2014-01-07 | 2021-04-13 | Novasep Process | Method for purifying aromatic amino acids |
| HUP1500502A2 (en) * | 2015-10-26 | 2017-04-28 | Rotachrom Tech Kft | Process for the purification of cyclosporin-a |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB568698A (en) | 1943-05-26 | 1945-04-17 | M O Valve Co Ltd | Improvements in the capping of thermionic valves, electric lamps and like devices |
| US2985589A (en) * | 1957-05-22 | 1961-05-23 | Universal Oil Prod Co | Continuous sorption process employing fixed bed of sorbent and moving inlets and outlets |
| US4117118A (en) | 1976-04-09 | 1978-09-26 | Sandoz Ltd. | Organic compounds |
| US4215199A (en) | 1978-06-05 | 1980-07-29 | Sandoz Ltd. | Antibiotic production |
| SE448386B (sv) | 1978-10-18 | 1987-02-16 | Sandoz Ag | Nya cyklosporinderivat, forfarande for framstellning av dem samt farmaceutisk komposition innehallande dem |
| US4402832A (en) * | 1982-08-12 | 1983-09-06 | Uop Inc. | High efficiency continuous separation process |
| US4923616A (en) * | 1987-09-24 | 1990-05-08 | Mitsubishi Petrochemical Company, Ltd. | Method of separating chemical components in simulated moving bed |
| HU201577B (en) | 1988-12-20 | 1990-11-28 | Gyogyszerkutato Intezet | Process for producing cyclosporin antibiotics |
| ATE158022T1 (de) | 1991-01-25 | 1997-09-15 | Fujisawa Pharmaceutical Co | Prozess zur produktion von cyclosporin-a und/oder c |
| ES2078374T3 (es) | 1991-04-06 | 1995-12-16 | Dresden Arzneimittel | Procedimiento para la produccion por fermentacion y aislamiento de ciclosporina a, y nuevas cepas formadoras de ciclosporina. |
| HU213553B (en) | 1992-05-25 | 1997-07-28 | Biogal Gyogyszergyar | Process for isolating of cyclosporin-a |
| US5709797A (en) * | 1996-06-05 | 1998-01-20 | Poli Industria Chimica S.P.A. | Method of isolating cyclosporins |
-
1996
- 1996-03-21 DE DE1996111094 patent/DE19611094C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-03-14 DE DE59705670T patent/DE59705670D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 HU HU9901801A patent/HU222200B1/hu active IP Right Grant
- 1997-03-14 IL IL12580797A patent/IL125807A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 ES ES97920517T patent/ES2169384T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 JP JP53303697A patent/JP3408818B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 KR KR10-1998-0707580A patent/KR100467127B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 EP EP97920517A patent/EP0888382B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 WO PCT/DE1997/000525 patent/WO1997034918A1/de not_active Ceased
- 1997-03-14 PT PT97920517T patent/PT888382E/pt unknown
- 1997-03-14 CZ CZ19982999A patent/CZ293243B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 SK SK1222-98A patent/SK282836B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-03-14 PL PL32911397A patent/PL187763B1/pl unknown
- 1997-03-14 CN CNB971927049A patent/CN1196711C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1997-03-14 DK DK97920517T patent/DK0888382T3/da active
- 1997-03-14 AT AT97920517T patent/ATE210146T1/de active
- 1997-03-14 RU RU98119067/12A patent/RU2163607C2/ru active
- 1997-03-21 US US08/821,823 patent/US6306306B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-18 DE DE19716167A patent/DE19716167C2/de not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-09-08 NO NO19984133A patent/NO321570B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUP9901801A3 (en) | 2001-01-29 |
| IL125807A (en) | 2003-10-31 |
| US6306306B1 (en) | 2001-10-23 |
| CN1212703A (zh) | 1999-03-31 |
| DE19716167A1 (de) | 1998-10-22 |
| DE19716167C2 (de) | 2000-06-29 |
| DE19611094C2 (de) | 1999-06-17 |
| HUP9901801A2 (hu) | 1999-09-28 |
| CZ299998A3 (cs) | 1999-10-13 |
| KR100467127B1 (ko) | 2005-05-27 |
| NO984133L (no) | 1998-09-08 |
| WO1997034918A1 (de) | 1997-09-25 |
| EP0888382A1 (de) | 1999-01-07 |
| ATE210146T1 (de) | 2001-12-15 |
| HU222200B1 (hu) | 2003-05-28 |
| RU2163607C2 (ru) | 2001-02-27 |
| SK282836B6 (sk) | 2002-12-03 |
| CZ293243B6 (cs) | 2004-03-17 |
| DE59705670D1 (de) | 2002-01-17 |
| DE19611094A1 (de) | 1997-09-25 |
| PT888382E (pt) | 2002-05-31 |
| DK0888382T3 (da) | 2002-04-02 |
| KR20000064784A (ko) | 2000-11-06 |
| EP0888382B1 (de) | 2001-12-05 |
| NO321570B1 (no) | 2006-06-06 |
| ES2169384T3 (es) | 2002-07-01 |
| JP3408818B2 (ja) | 2003-05-19 |
| CN1196711C (zh) | 2005-04-13 |
| IL125807A0 (en) | 1999-04-11 |
| PL329113A1 (en) | 1999-03-15 |
| HK1015382A1 (en) | 1999-10-15 |
| JP2000507237A (ja) | 2000-06-13 |
| NO984133D0 (no) | 1998-09-08 |
| SK122298A3 (en) | 1999-08-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL187763B1 (pl) | Sposób chromatograficznego oczyszczania cyklosporyny A i pokrewnych cyklosporyn | |
| JP5661209B2 (ja) | 濃縮及び単離のためのクロマトグラフィープロセス | |
| CA2159823A1 (en) | Processes for chromatographic fractionation of fatty acids and their derivatives | |
| WO1996031263A1 (en) | Method for rapid purification, analysis and characterization of collections of chemical compounds | |
| RU2508930C2 (ru) | Способ многофракционной очистки и устройство для осуществления такого способа | |
| RU98119067A (ru) | Хроматографический способ получения высокочистого циклоспорина a и родственных циклоспоринов | |
| Hodges et al. | Multi-column preparative reversed-phase sample displacement chromatography of peptides | |
| Veeraragavan et al. | Sample displacement mode chromatography: purification of proteins by use of a high-performance anion-exchange column | |
| Singleton et al. | High-performance liquid chromatography analysis of peanut phospholipids. I. Injection system for simultaneous concentration and separation of phospholipids | |
| CA2346358A1 (en) | Method and device for the rapid liquid chromatographic separation of substance mixtures and for the identification of substances | |
| Hill et al. | Convenient purification of tritylated and detritylated oligonucleotides up to 100-mer | |
| Mehok et al. | Preparative reversed-phase liquid chromatography of peptides: Isocratic two-step elution system for high loads on analytical columns | |
| Nishizawa et al. | True moving bed chromatography: Solid–liquid multi-stage counter-current extraction | |
| Medina | Purification of zopiclone by preparative high performance liquid chromatography | |
| US20250121300A1 (en) | Purification method and uses thereof | |
| US20250179466A1 (en) | Chromatographic purification method and uses thereof | |
| Báthori et al. | Preparative scale purification of shidasterone, 2-deoxy-polypodine B and 9α, 20-dihydroxyecdysone from Silene italica ssp. nemoralis | |
| Inoue et al. | Separation of bufotalin and cinobufotalin by preparative liquid chromatography | |
| Strickler et al. | Strategy for the preparative-scale high-performance liquid chromatographic isolation of kadsurenone and futoquinol from the medicinal plant Piper futokadsura | |
| Unit | Purification of Reaction Mixtures with an |