PL189322B1 - Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego oraz sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinny - Google Patents
Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego oraz sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinnyInfo
- Publication number
- PL189322B1 PL189322B1 PL97333181A PL33318197A PL189322B1 PL 189322 B1 PL189322 B1 PL 189322B1 PL 97333181 A PL97333181 A PL 97333181A PL 33318197 A PL33318197 A PL 33318197A PL 189322 B1 PL189322 B1 PL 189322B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- extract
- cells
- treated
- rna
- isolated
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 91
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 74
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 67
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 50
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 230000008859 change Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 46
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 29
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 4
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 4
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 claims 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 2
- GXFZCDMWGMFGFL-KKXMJGKMSA-N (+)-Tubocurarine chloride hydrochloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C([C@H]1[N+](C)(C)CCC=2C=C(C(=C(OC3=CC=C(C=C3)C[C@H]3C=4C=C(C(=CC=4CC[NH+]3C)OC)O3)C=21)O)OC)C1=CC=C(O)C3=C1 GXFZCDMWGMFGFL-KKXMJGKMSA-N 0.000 claims 1
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 claims 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims 1
- 229930000680 A04AD01 - Scopolamine Natural products 0.000 claims 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 claims 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229930003347 Atropine Natural products 0.000 claims 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 claims 1
- 241001111317 Chondrodendron tomentosum Species 0.000 claims 1
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 claims 1
- 239000008709 Curare Substances 0.000 claims 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 claims 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N Hyosciamin-hydrochlorid Natural products CN1C(C2)CCC1CC2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N Hyoscine Natural products C1([C@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-GAUPFVANSA-N 0.000 claims 1
- STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N N-Methyl-scopolamin Natural products C1C(C2C3O2)N(C)C3CC1OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 claims 1
- 102100031951 Oxytocin-neurophysin 1 Human genes 0.000 claims 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims 1
- PIJVFDBKTWXHHD-UHFFFAOYSA-N Physostigmine Natural products C12=CC(OC(=O)NC)=CC=C2N(C)C2C1(C)CCN2C PIJVFDBKTWXHHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 claims 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 claims 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 claims 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 claims 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims 1
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 claims 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 claims 1
- 229940125687 antiparasitic agent Drugs 0.000 claims 1
- RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N atropine Chemical compound O([C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)N2C)C(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N 0.000 claims 1
- 229960000396 atropine Drugs 0.000 claims 1
- 229940097217 cardiac glycoside Drugs 0.000 claims 1
- 239000002368 cardiac glycoside Substances 0.000 claims 1
- 239000002327 cardiovascular agent Substances 0.000 claims 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 claims 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 claims 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 claims 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 claims 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 claims 1
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 claims 1
- -1 ergot alkaloids Chemical compound 0.000 claims 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 claims 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 claims 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims 1
- FJQXCDYVZAHXNS-UHFFFAOYSA-N methadone hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC=CC=1C(CC(C)N(C)C)(C(=O)CC)C1=CC=CC=C1 FJQXCDYVZAHXNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 239000000472 muscarinic agonist Substances 0.000 claims 1
- 239000003149 muscarinic antagonist Substances 0.000 claims 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 claims 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 claims 1
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960000988 nystatin Drugs 0.000 claims 1
- VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N nystatin A1 Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/CC/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 VQOXZBDYSJBXMA-NQTDYLQESA-N 0.000 claims 1
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 claims 1
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 claims 1
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 claims 1
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 claims 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 claims 1
- 229960001697 physostigmine Drugs 0.000 claims 1
- PIJVFDBKTWXHHD-HIFRSBDPSA-N physostigmine Chemical compound C12=CC(OC(=O)NC)=CC=C2N(C)[C@@H]2[C@@]1(C)CCN2C PIJVFDBKTWXHHD-HIFRSBDPSA-N 0.000 claims 1
- YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N podophyllotoxin Chemical class COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@H](O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 YJGVMLPVUAXIQN-XVVDYKMHSA-N 0.000 claims 1
- 239000003600 podophyllotoxin derivative Substances 0.000 claims 1
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 claims 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N scopolamine Chemical compound C1([C@@H](CO)C(=O)O[C@H]2C[C@@H]3N([C@H](C2)[C@@H]2[C@H]3O2)C)=CC=CC=C1 STECJAGHUSJQJN-FWXGHANASA-N 0.000 claims 1
- 229960002646 scopolamine Drugs 0.000 claims 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims 1
- 229930002534 steroid glycoside Natural products 0.000 claims 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims 1
- 239000002550 vasoactive agent Substances 0.000 claims 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001629 suppression Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 71
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 6
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 108091005981 phosphorylated proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 description 1
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 description 1
- 239000009429 Ginkgo biloba extract Substances 0.000 description 1
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoryl-L-serine Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710192597 Protein map Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940068052 ginkgo biloba extract Drugs 0.000 description 1
- 235000020686 ginkgo biloba extract Nutrition 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N phosphotyrosine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=C(OP(O)(O)=O)C=C1 DCWXELXMIBXGTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 108091005626 post-translationally modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035123 post-translationally modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6809—Methods for determination or identification of nucleic acids involving differential detection
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
1. Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego, znamienny tym, ze najpierw ko- mórki poddaje sie dzialaniu ekstraktu roslinnego, nastepnie z komórek traktowanych eks- traktem wyizolowuje sie bialko lub RNA, po czym identyfikuje sie w przypadku których bialek lub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastapila zmiana ste- zenia wzgledem komórek nie traktowanych ekstraktem, komórki poddaje sie dzialaniu zwiazku Iub zwiazków otrzymanych z ekstraktu roslinnego, z komórek traktowanych zwiazkiem lub zwiazkami wyizolowuje sie bialko lub RNA i identyfikuje sie zwiazki po- wodujace ekspresje lub supresje bialka lub RNA, wystepujacego w innym stezeniu niz w komórkach nie traktowanych ekstraktem, przy czym wyklucza sie podawanie ekstraktu czlowiekowi. PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest zatem sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego, w którym komórki najpierw poddaje się działaniu ekstraktu roślinnego, następnie z komórek traktowanych ekstraktem wyizolowuje się białko Iub RNA, po czym identyfikuje się w przypadku których białek Iub rNa wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem, komórki poddaje się działaniu związku Iub związków otrzymanych z ekstraktu roślinnego, z komórek traktowanych związkiem Iub związkami wyizolowuje się białko Iub RNA i identyfikuje się związki powodujące ekspresję Iub supresję białka Iub RNA, występującego w innym stężeniu niż w komórkach nie traktowanych ekstraktem, przy czym wyklucza się podawanie ekstraktu człowiekowi.
W jednym z korzystnych wariantów realizacji w sposobie według wynalazku białko wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym oraz z komórek traktowanych wspomnianym związkiem Iub związkami.
W innym korzystnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku RNA wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym oraz z komórek traktowanych wspomnianym związkiem Iub związkami, przy czym RNA korzystnie jest matrycowym RNA.
W jeszcze innym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku ekstrakt roślinny i wspomniany związek Iub związki stosuje się in vitro.
W kolejnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku identyfikuje się w przypadku których białek Iub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystnie, w sposobie według wynalazku sekwencjonuje się zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystniej, w sposobie według wynalazku identyfikuje się gen kodujący zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
W następnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku identyfikuje się RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystnie, w sposobie według wynalazku sekwencjonuje się zidentyfikowany RNA z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystniej, w sposobie według wynalazku identyfikuje się gen zidentyfikowany przez RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
W dalszym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku rodzaj komórek ma związek z biologicznym miejscem działania ekstraktu roślinnego.
189 322
W kolejnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku RNAjest matrycowym RNA.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinny, polegający na tym, że najpierw komórki poddaje się działaniu ekstraktu roślinnego, następnie z komórek traktowanych ekstraktem wyizolowuje się białko lub RNA, po czym porównuje się białko lub RNA wyizolowane komórek traktowanych ekstraktem roślinnym z białkiem Iub RNA z komórek nie traktowanych ekstraktem, przy czym wyklucza się podawanie ekstratu człowiekowi.
W jednym z korzystnych wariantów realizacji w sposobie według wynalazku białko wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym.
W innym korzystnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku RNA wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, przy czym RNA korzystnie jest matrycowym RNA.
W jeszcze innym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku ekstrakt roślinny stosuje się in vitro.
W kolejnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku identyfikuje się w przypadku których białek Iub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystnie, w sposobie według wynalazku sekwencjonuje się zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystniej, w sposobie według wynalazku identyfikuje się gen kodujący zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
W następnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku identyfikuje się RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystnie, w sposobie według wynalazku sekwencjonuje się zidentyfikowany RNA z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem. Korzystniej, w sposobie według wynalazku identyfikuje się gen zidentyfikowany przez RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
W dalszym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku rodzaj komórek ma związek z biologicznym miejscem działania ekstraktu roślinnego. Na przykład, jeśli wiadomo, że ekstrakt roślinny działa leczniczo w astmie, raku, zaburzeniach krążenia Iub schorzeniach neurologicznych, to stosowanymi do badań komórkami są odpowiednio: komórki płuc, naczyń Iub komórki nerwowe.
W kolejnym wariancie realizacji w sposobie według wynalazku RNAjest matrycowym RNA.
Pojęcie „ekstrakt roślinny” oznacza wiele różnych naturalnych związków, które są izolowane z rośliny (np. z liści, kory, owoców, kwiatów, nasion Iub korzeni). Przykładem takiego ekstraktu jest ekstrakt z drzewa Ginkgo biloba. Pojęcie „komórki” może oznaczać izolowaną komórkę (np. otrzymaną z organizmu człowieka Iub zwierzęcia) Iub komórki tkanek Iub narządów organizmu. Komórka może być komórką zdrową Iub chorą (np. komórka patologicznie Iub fizjologicznie różniąca się od zdrowej, jak komórka guza nowotworowego).
Ekstrakt roślinny i związek Iub związki mogą być podane komórkom in vitro Iub in vivo (np. komórkom zdrowego zwierzęcia, od którego komórki są następnie pobierane po zastosowaniu ekstraktu roślinnego, związku Iub związków). Gdy stosuje się metodę badań in vitro, białko Iub RNA może być na przykład wyizolowane bezpośrednio po zastosowaniu ekstraktu roślinnego, związku Iub związków Iub w czasie do 1 dnia po ich zastosowaniu. Gdy stosuje się metodę in vivo, białko Iub RNA może być na przykład wyizolowane bezpośrednio po podaniu zwierzęciu ekstraktu roślinnego, związku Iub związków Iub w czasie do 1 dnia po ich podaniu. Białko może pozostawać w komórkach Iub być wydzielone na zewnątrz. Przykładami takich białek są receptory, czynniki wzrostu, enzymy Iub czynniki transkrypcyjne.
Inne cechy i zalety wynalazku są opisane w dalszej, szczegółowej części opisu.
Znany jest fakt, że osoba biegła w dziedzinie może, na podstawie niniejszego opisu, w pełni wykorzystać wynalazek. Dlatego przedstawione dalej szczegółowe zastosowania wynalazku nie ograniczają jego zakresu.
189 322
O ile nie podano innej definicji, wszystkie terminy techniczne i naukowe użyte w opisie mają takie samo znaczenie, jak terminy powszechnie używane przez osoby biegłe w dziedzinie wynalazku. Podano także źródła wszystkich publikacji, zgłoszeń patentowych, patentów i inne, na które powołano się w opisie.
Ekstrakty roślinne mogą być sporządzone za pomocą standardowych technik ekstrakcji (np. przy użyciu wody do ekstrakcji związków rozpuszczalnych w wodzie, alkoholi i acetonu do ekstrakcji związków rozpuszczalnych w tłuszczach lub ich mieszanin).
Ekstrakt może być dalej oczyszczany w celu zmniejszenia liczby obecnych w nim związków Iub nawet izolacji pojedynczego związku Iub klasy związków przy użyciu standardowych technik takich, jak chromatografia i krystalizacja, patrz np. Ginkgolides-Chemistry, Biology, Pharmacology and Clinical Perspectives, wydane przez P. Braquet (J. R. Prous, Science Publishers, Barcelona, Spain 1988); Okabe, J. Chem. Soc. (c) str. 2201 (1967) i Nakauishi, Pure & Applied Chemistry 19:89 (1967).
Komórki docelowe, z hodowli, są zbierane przed i po zadziałaniu na nie ekstraktem roślinnym w ustalonych stężeniach (np. ekstrakt z Ginkgo biloba). Procedura ta może być zastosowana w stosunku do komórek pochodzących z docelowej tkanki lub narządu organizmu, który poddano działaniu dawki lub wielu dawek ekstraktu roślinnego. Komórki są poddawane lizie, a białka są rozpuszczane w buforach z detergentami (np. Tween 20, SDS lub NP-40 dostarczane przez Sigma Chemicals, St. Louis, MO, USA). Białka są rozdzielane za pomocą dwuwymiarowej elektroforezy w żelu, w jednym wymiarze rozdziela się pod kątem punktu izolelektrycznego, zaś w drugim gradientu, patrz np. Ausubel, A.M. i wsp., Current Protocols in Molecular Biology, str. 10.3.1-10.4.5 (John Wiley & Sons, 1987). Jest to najbardziej czuła metoda badania złożonych mieszanin białek (np. na pojedynczym żelu 2-D można rozdzielić aż 1500 białek, patrz np. O'Farrell, P.H., J. Biol. Chem. 250:4007-4021 (1975).
Obraz ekspresji białka może być uwidoczniony za pomocą barwienia barwnikiem Coomasie Blue (Ausubel, A.M. i wsp., Current Protocols in Molecular Biology, str. 10.6.1 (John Wiley & Sons, 1987) lub barwienia azotanem srebra (Ausubel, A.M. i wsp., Current Protocols in Molecular Biology, str. 10.6.1-10.6.3. John Wiley & Sons, 1987). Komórki mogą być także znakowane radioaktywnymi aminokwasami, np. ‘^S-metioniną (Amersham Corp., Arlington Heights, ll), obraz ekspresji znakowanych białek na żelach 2-D jest odczytywany za pomocą autoradiografii. W przypadku, gdy badany jest obraz białek zmodyfikowanych potranslacyjnie, np. białek ufosforylowanych, do inkubowanego podłoża dodaje się radioaktywny donor fosforanowy taki, jak P32-yATP (Amersham Corp., Arlington Heights, ll), wówczas obraz ufosforylowanego białka w żelach 2-D może być uwidoczniony za pomocą autoradiografii, patrz Hansen, K. i wsp., Electrophoresis 14:112-116 (1993) i Guy, R., Electrophoresis 15:417440 (1994). W ostatnim przypadku ekspresja nie znakowanej fosfoproteiny może być uwidoczniona przy użyciu przeciwciał fosfotyrozyny lub fosfoseryny przez przenoszenie żeli na filtr nitrocelulozowy patrz, np. Ausubel, A.M. i wsp., Current Protocols in Molecular Biology, str. 10.7.1-10.8.6 (John Wiley & Sons, 1987).
Specyficzne procesy genomowe są wykrywane dzięki porównywaniu wzoru ekspresji białka w komórkach przed i po zadziałaniu ekstraktu roślinnego. Specyficzne prążki białkowe w żelach 2-D, które wykazują nasilenie lub ograniczenie ekspresji, jak wynika z intensywności barwienia na mapie białkowej, reprezentują zmiany aktywności genomowej wywołane przez ekstrakt roślinny. Sposób jest w wysokim stopniu powtarzalny i może służyć pozyskiwaniu małych ilości maksymalnie czystych białek do analizy sekwencji aminokwasów przy użyciu standardowych technik (np. Edmans amino-terminal chemistry) patrz np. Graven i wsp., J. Biol. Chem. 269-24446 (1994).
W przypadku białek, które ulegają ekspresji w małych ilościach, niewystarczających do wykonania sekwencjonowania, prążki białkowe mogą być wycięte z żelów 2-D i użyte bezpośrednio immunizacji królików w celu wytworzenia przeciwciał, patrz Harlow, E. & Lane, D., Anitibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988, str. 61. Dostępność przeciwciała pozwala na oczyszczenie immunologicznymi metodami powinowactwa większych ilości pożądanego białka do celów jego zsekwencjono wania.
Znając sekwencję peptydu, można zsyntezować oligonukleotydy (w oparciu o najczęściej spotykany lub najbardziej pożądany kod genetyczny), które będą służyły jako sondy do
189 322 przeszukiwania biblioteki cDNA w celu uzyskania pełnej długości sekwencji kodującej gen lub geny, patrz np. Sambrook, J. i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Book 2, (drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989).
Innym sposobem wykrywania zmian zachodzących procesów genomowych w odpowiedzi na ekstrakt roślinny jest monitorowanie zmian matrycowego RNA (mRNA) w komórce (Liang, P. & Pardee, A.B., Science 257:967-971, 1992). Komórka poddawana jest działaniu ekstraktu w hodowli, Iub komórki z docelowej tkanki Iub narządu organizmu są poddawane działaniu miejscowemu Iub systemowemu dawki albo wielu dawek ekstraktu roślinnego przez określony czas, a następnie są ekstrahowane.
Matrycowe RNA otrzymuje się standardowymi metodami ekstrakcji całkowitego RNA według sposobów opisanych w Ausubel, A.M. i wsp., Current Protocols in Molecular Biology, str. 4.1.2-4.3.4 (John Wiley & Sons, 1987). Następnie, stosując technikę chromatografii oligo-dT otrzymuje się Poly(A+) RNA (Aviv, H. & Leder, P., J. Mol. Biol. 134-743 (1972), jak opisano w Ausubel, A.M. i wsp. Current Protocols in Molecular Biology, str. 4.5.1-4.5.3 (John Wiley & Sons, 1987).
Przygotowuje się dwie pule mRNA, jedną z komórek, którym nie podano ekstraktu roślinnego a drugą z komórek po zadziałaniu tego ekstraktu. Specyficzne procesy genomowe występują w obu pulach w zależności od tego, czy ekstrakt roślinny wywołuje supresję aktywności genu, czy aktywację ekspresji genu. W przypadku, gdy w odpowiedzi na działanie ekstraktu roślinnego gen jest hamowany, mRNA będzie obecne w większych ilościach w puli mRNA otrzymanej z komórek kontrolnych. W przypadku, gdy w odpowiedzi na działanie ekstraktu roślinnego, gen jest aktywowany mRNA będzie obecne w większych ilościach w puli mRNA otrzymanej z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym. W celu zidentyfikowania populacji mRNA, które są aktywowane Iub hamowane można zastosować wiele technik, np. hybrydyzację subtraktywną Iub obrazowanie dyferencyjne.
Techniki hybrydyzacji subtraktywnej (Lee, S.W. i wsp., Proc. Natl. Acad. Sei. 88:2825, 1991), zostały rozwinięte, gdy mRNA z jednej Iub dwóch puli przekształcano w pierwszą nić cDNA (antysensową) przy użyciu primerów oligo-dT przyłączonych do cząstki celulozy Iub wolnych primerów i odwrotnej transkryptazy, patrz np. Sambrook, J. i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Book 2, str. 10.46 (drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). W przypadku, gdy pierwsza nić jest przyłączona do cząstki celulozy, subtraktywna chromatografia mRNA może być wykonana poprzez przepuszczenie drugiej puli mRNA przez kolumnę. mRNA obecne w obu pulach będzie hybrydyzować (np. mRNA z drugiej puli będzie hybrydyzować z anty-sensownym cDNA na kolumnie i pozostanie na kolumnie). Frakcja ruchoma, która nie hybrydyzuje ze złożem w kolumnie, będzie zawierała cząsteczki mRNA wytworzone na skutek zmian aktywności genomowej wynikającej z działania na komórki ekstraktu roślinnego. Stosując opisanego wyżej metody, wykorzystując cząsteczki mRNA z frakcji ruchomej, można stworzyć bakteriofagową bibliotekę cDNA, patrz np. Sambrook, J. i wsp., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Book 2, str. 8.11-8.45 (drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989).
Klony, których mRNA nie występowało w pierwszej puli mRNA są identyfikowane jako płytki nie-hybrydyzujące, jeśli biblioteka jest przeszukiwana sondami znakowanymi na końcach 32P, wytworzonymi w pierwszej puli. Opisano również inne podobne sposoby identyfikacji, patrz Sambrook, J. i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Book 2, str. 10.41, 10.42 (drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989).
Zaangażowane geny będą identyfikowane przez sekwencjonowanie DNA otrzymanego z klonów cDNA, patrz np. Sambrook, J. i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Book 2, str. 13.3-13.20 (drugie wydanie, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989).
Metoda dyferencyjnego obrazowania mRNA jest dobrze opisana w literaturze, patrz Liang, P. & Pardee, A.B., Science 257:967-970 (1992); Callard, D. i wsp., BioTechniques 16:1096-1103 (1994); Chen, Z. i wsp. BioTechniques 16:1003-1006 (1994) i Zhao, S. i wsp., BioTechniques 20:400-404 (1996). Częściowe sekwencje cDNA są przygotowywane przez odwrotną transkrypcję z mRNA otrzymanego z ekstraktu roślinnego Iub komórek, na które działano ekstraktem i na które nie działano ekstraktem roślinnym, patrz np. Sambrook, J. i wsp. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Book 2, str. 10.46 (drugie wydanie, Cold
189 322
Spring Harbor Laboratory Press, 1989) i amplifikowane w reakcji łańcuchowej polimerazy, np. zastosowanie 5'-TnCAjako primera 3' i krótkiego (6-7 zasad) primera 5'. W reakcji amplifikacji stosuje się znakowanie a35S-dATP. Znakowane, krótkie fragmenty po amplifikacji PCR, z każdej puli mRNA, są następnie frakcjonowane (np. rozdzielane) na żelach sekwencyjnych DNA. Prążki, których natężenie różni się w zależności od puli mRNA są wycinane z żelu, ponownie poddane amplifikacji i używane jako próbka do przeszukiwania biblioteki cDNA, jak opisano powyżej, w celu identyfikacji genów, na których aktywność wpływa ekstrakt roślinny.
W ten sposób, profil genowy specyficznych komórek odpowiadających na działanie określonego ekstraktu roślinnego może być skatalogowany bez znajomości komponentów zawartych w ekstrakcie roślinnym. Zastosowanie ekstraktu roślinnego może być rozszerzane dzięki roli niektórych genów w specyficznych procesach biologicznych. W ten sposób potencjał terapeutyczny produktu może wykraczać poza znane właściwości farmakologiczne lub znana właściwość farmakologiczna może być weryfikowana genomowo. Co więcej, podobnie działające związki ekstraktu mogą być zidentyfikowane jako środki lecznicze w oparciu o aktywność ekstraktu w zakresie określonych zdarzeń genomowych. Jest zrozumiałe, że o ile wynalazek został przedstawiony szczegółowo w opisie, opis ten ma na celu zilustrowanie wynalazku bez ograniczania jego zakresu, ujętego w załączonych zastrzeżeniach patentowych.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.
Cena 2,00 zł.
Claims (24)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego, znamienny tym, że najpierw komórki poddaje się działaniu ekstraktu roślinnego, następnie z komórek traktowanych ekstraktem wyizolowuje się białko lub RNA, po czym identyfikuje się w przypadku których białek lub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem, komórki poddaje się działaniu związku Iub związków otrzymanych z ekstraktu roślinnego, z komórek traktowanych związkiem Iub związkami wyizolowuje się białko Iub RNA i identyfikuje się związki powodujące ekspresję Iub supresję białka Iub RNA, występującego w innym stężeniu niż w komórkach nie traktowanych ekstraktem, przy czym wyklucza się podawanie ekstraktu człowiekowi.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że białko wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym oraz z komórek traktowanych wspomnianym związkiem Iub związkami.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że RNA wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym oraz z komórek traktowanych wspomnianym związkiem Iub związkami, przy czym RNA korzystnie jest matrycowym RNA.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakt roślinny i wspomniany związek Iub związki stosuje się in vitro.
- 5. Sposób według zastrz. 2, znamienny tym, że identyfikuje się w przypadku których białek Iub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że sekwencjonuje się zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 7. Sposób według zastrz. 6, znamienny tym, że identyfikuje się gen kodujący zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 8. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że identyfikuje się RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że sekwencjonuje się zidentyfikowany RNA z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 10. Sposób według zastrz. 9, znamienny tym, że identyfikuje się gen zidentyfikowany przez RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 11. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że rodzaj komórek ma związek z biologicznym miejscem działania ekstraktu roślinnego.
- 12. Sposób według zastrz. 3, znamienny tym, że RNA jest matrycowym RNA.
- 13. Sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinny, znamienny tym, że najpierw komórki poddaje się działaniu ekstraktu roślinnego, następnie z komórek traktowanych ekstraktem wyizolowuje się białko Iub RNA, po czym porównuje się białko Iub RNA wyizolowane komórek traktowanych ekstraktem roślinnym z białkiem Iub RNA z komórek nie traktowanych ekstraktem, przy czym wyklucza się podawanie ekstraktu człowiekowi.
- 14. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że białko wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym.189 322
- 15. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że RNA wyizolowuje się z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, przy czym RnA korzystnie jest matrycowym RNA.
- 16. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że ekstrakt roślinny stosuje się in vitro.
- 17. Sposób według zastrz. 13 albo 14, znamienny tym, że identyfikuje się w przypadku których białek lub RNA wyizolowanego z komórek traktowanych ekstraktem nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 18. Sposób według zastrz. 17, znamienny tym, że sekwencjonuje się zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 19. Sposób według zastrz. 18, znamienny tym, że identyfikuje się gen kodujący zidentyfikowane białko z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 20. Sposób według zastrz. 13 albo 15, znamienny tym, że identyfikuje się RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 21. Sposób według zastrz. 20, znamienny tym, że sekwencjonuje się zidentyfikowany RNA z komórek traktowanych ekstraktem, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 22. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że identyfikuje się gen zidentyfikowany przez RNA wyizolowany z komórek traktowanych ekstraktem roślinnym, w którego przypadku nastąpiła zmiana stężenia względem komórek nie traktowanych ekstraktem.
- 23. Sposób według zastrz. 13, znamienny tym, że rodzaj komórek ma związek z biologicznym miejscem działania ekstraktu roślinnego.
- 24. Sposób według zastrz. 15, znamienny tym, że RNA jest matrycowym RNA.Królestwa drobnoustrojów, roślin i zwierząt (np. bezkręgowców) zawierają bogate, naturalne źródła substancji czynnych o zróżnicowanych właściwościach fizykochemicznych i leczniczych. W farmakopei amerykańskiej i europejskiej występuje wiele przykładów leków otrzymywanych ze źródeł naturalnych, patrz U.S. Pharmacopeia 1995 (United States Pharmacopeial Convention, Inc., 1994) i Martindale, The Extra Pharmacopeia 31 (Royal Pharmaceutical Society, 1996). Wiele środków przeciwko drobnoustrojom (np. penicyliny, cefalosporyny i aminoglikozydy), środki przeciwgrzybicze (np. amfoterycyna B i nystatyna), środki przeciwpasożytnicze (np. chinina), środki kardio- i wazoaktywne (np. glikozyd nasercowy digoxin, alkaloidy sporyszu, nikotyna i oksytocyna), środki przeciwzapalne (np. aspiryna), środki muskarynowe (np. acetylocholina) i przeciwmuskarynowe (np. atropina i skopolamina), środki neuroaktywne (np. kurara, fizostygmina i opiaty), środki przeciwkrzepliwe (np. heparyna), środki przeciwnowotworowe (np. alkaloidy vinca, taksol i pochodna podofilotoksyny - etopozyd) i hormony (np. estrogeny, androgeny, progestyny, hormony peptydowe i czynniki wzrostu) zostały odkryte jako produkty pochodzenia naturalnego, patrz, np. Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (wydanie 9, McGraw-Hill, 1996). Przykłady te wskazują na to, że niektóre aktywne komponenty zawarte w ekstraktach roślinnych mogą także być oczyszczone i wciąż będą zachowywać aktywność biologiczną.W większości z powyższych przykładów właściwości farmakologiczne związków były określone za pomocą znanych testów farmakologicznych jedynie na podstawie izolacji związku ze źródła naturalnego, patrz, np. Turner, R.A. Screening Methods in Pharmacology (Academic Press, 1965) i Turner, R.A., Peter Hebbom Screening Methods in Pharmacology, (Vol. II, Academic Press, 1971). Podczas gdy proces oznaczania aktywności ekstraktów roślinnych może być oparty na badaniach poszczególnych komponentów, wiele ekstraktów może posiadać dodatkowe właściwości farmakologiczne, które nie muszą być oczywiste na podstawie znajomości właściwości poszczególnych komponentów (np. zdolność ekstraktu do wpływania na przekazywanie sygnałów do jądra, zmieniania przewodzenia powierzchniowych receptorów komórki i regulowania procesów genomowych).189 322Charakterystyka określonych związków naturalnych, otrzymanych ze źródeł naturalnych lub wyprodukowanych syntetycznie lub półsyntetycznie, tworzy farmakologiczne podstawy znacznej części zachodniej medycyny. Jednakże z wielu powodów proces destylowania farmakologicznie czynnego składnika z ekstraktu roślinnego może spowodować utratę aktywności biologicznej, np. z powodu niestabilności danego związku w procesie ekstrakcji Iub w formie oczyszczonej Iub dlatego, że w czasie oczyszczania może on reagować z innymi składnikami chemicznymi ekstraktu, dlatego, że związek ulega frakcjonowaniu w czasie oczyszczania, albo też, co ważniejsze, że właściwości farmakologiczne nie zależą od pojedynczego składnika ekstraktu, lecz są wynikiem interakcji dwu Iub więcej składników ekstraktu. Zatem hipoteza, że więcej niż jeden związek obecny w ekstrakcie roślinnym odpowiada za właściwości farmakologiczne ekstraktu, jak również zastosowanie czynników genomowych do identyfikacji tych związków w produkcie naturalnym stanowią nowatorską koncepcję farmakologiczną.Wynalazek dotyczy przeszukiwania genomów organizmów żywych, umożliwiającego scharakteryzowanie potencjalnych właściwości biologicznych ekstraktu roślinnego, które mogą być (Iub nie) znanymi właściwościami ekstraktu. Wynalazek ten przedstawia nowe podejście do zagadnienia analizy możliwych mechanizmów działania ekstraktów roślinnych, jako podstaw ich skuteczności leczniczej oraz środki służące identyfikowaniu poszczególnych związków, które wykorzystują odkryte właściwości biologiczne w celu identyfikacji nowego leku Iub określenia nowego zastosowania farmaceutycznego znanego leku.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/744,983 US20020018989A1 (en) | 1996-11-07 | 1996-11-07 | Method of identifying pharmaceuticals from plant extracts |
| PCT/US1997/020103 WO1998020163A1 (en) | 1996-11-07 | 1997-11-05 | Method of identifying pharmaceuticals from plant extracts |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL333181A1 PL333181A1 (en) | 1999-11-22 |
| PL189322B1 true PL189322B1 (pl) | 2005-07-29 |
Family
ID=24994734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL97333181A PL189322B1 (pl) | 1996-11-07 | 1997-11-05 | Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego oraz sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinny |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20020018989A1 (pl) |
| EP (1) | EP0938589B1 (pl) |
| JP (1) | JP2001502920A (pl) |
| KR (1) | KR100463639B1 (pl) |
| AT (1) | ATE248229T1 (pl) |
| AU (1) | AU744788B2 (pl) |
| BR (1) | BR9713335A (pl) |
| CA (1) | CA2270115A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ158399A3 (pl) |
| DE (1) | DE69724447T2 (pl) |
| DK (1) | DK0938589T3 (pl) |
| ES (1) | ES2206750T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0003940A3 (pl) |
| IL (1) | IL129786A (pl) |
| NZ (1) | NZ335534A (pl) |
| PL (1) | PL189322B1 (pl) |
| PT (1) | PT938589E (pl) |
| RU (2) | RU2244751C2 (pl) |
| WO (1) | WO1998020163A1 (pl) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030211456A1 (en) * | 2001-03-27 | 2003-11-13 | Vassilios Papadopoulos | Method of profiling a plant extract |
| ATE320003T1 (de) * | 2001-06-05 | 2006-03-15 | Advanced Gene Technology Corp | Chip mit pflanzenextrakten auf der oberfläche |
| RU2271001C1 (ru) * | 2004-06-21 | 2006-02-27 | Лидия Васильевна Савина | Способ экспресс-идентификации фарма- и парафармацевтиков, вводимых в организм человека |
| CA2758546C (en) | 2009-04-17 | 2019-02-26 | President And Fellows Of Harvard College | Quality control bioassays for nutriceutical and medicinal products |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH663900A5 (de) * | 1985-05-06 | 1988-01-29 | Cernitin Sa | Pharmazeutisches praeparat zur prophylaktischen behandlung von allergien und verfahren zur herstellung dieses praeparates. |
| DE3717337A1 (de) * | 1987-05-22 | 1988-12-15 | Hoechst Ag | Verfahren zum nachweis der antiaggregatorischen wirkung von vasoaktiven stoffen, speziell von phosphodiesterase- und/oder cyclooxygenase-hemmern |
| SU1540804A1 (ru) * | 1987-06-05 | 1990-02-07 | Сыктывкарский Государственный Университет Им.50-Летия Ссср | Способ отбора биологически активных веществ, взаимодействующих с @ - адренорецепторами |
| DE4038898A1 (de) * | 1990-12-06 | 1992-06-11 | Michaelis Peter Dr | Verfahren zum vergleich der wirkung und/oder der bioverfuegbarkeit therapeutisch wirksamer stoffgemische |
| RU2016888C1 (ru) * | 1991-06-26 | 1994-07-30 | Институт молекулярной биологии им.В.А.Энгельгардта РАН | Биодатчик для определения биологически активных веществ, взаимодействующих с двухцепочечными молекулами нуклеиновых кислот |
| EP0534640B1 (en) * | 1991-09-23 | 1996-10-02 | Pfizer Inc. | Process for detecting specific mRNA and DNA in cells |
| US5589358A (en) * | 1993-12-29 | 1996-12-31 | Univ Wake Forest | Ileal bile acid transporter compositions and methods |
| RU2046341C1 (ru) * | 1994-06-28 | 1995-10-20 | Борис Федорович Дибров | Способ отбора лекарственных препаратов, обладающих противораковой активностью |
| US5834248A (en) * | 1995-02-10 | 1998-11-10 | Millennium Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods using rchd534, a gene uregulated by shear stress |
| US5736376A (en) * | 1995-12-19 | 1998-04-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Recombinant endothelin converting enzyme-2 and its use in ECE inhibitor screening |
| HK1053150A1 (zh) * | 2000-03-31 | 2003-10-10 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. | 籍由基因图像绘制在植物萃取物中监定银杏之方法 |
-
1996
- 1996-11-07 US US08/744,983 patent/US20020018989A1/en not_active Abandoned
-
1997
- 1997-11-05 WO PCT/US1997/020103 patent/WO1998020163A1/en not_active Ceased
- 1997-11-05 PT PT97945607T patent/PT938589E/pt unknown
- 1997-11-05 CZ CZ991583A patent/CZ158399A3/cs unknown
- 1997-11-05 AU AU51043/98A patent/AU744788B2/en not_active Ceased
- 1997-11-05 JP JP10521722A patent/JP2001502920A/ja not_active Ceased
- 1997-11-05 EP EP97945607A patent/EP0938589B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-05 DE DE69724447T patent/DE69724447T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-05 AT AT97945607T patent/ATE248229T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 HU HU0003940A patent/HUP0003940A3/hu unknown
- 1997-11-05 DK DK97945607T patent/DK0938589T3/da active
- 1997-11-05 KR KR10-1999-7004092A patent/KR100463639B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-05 IL IL12978697A patent/IL129786A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 BR BR9713335-3A patent/BR9713335A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 PL PL97333181A patent/PL189322B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 CA CA002270115A patent/CA2270115A1/en not_active Abandoned
- 1997-11-05 RU RU99111501/13A patent/RU2244751C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 RU RU2002109243/15A patent/RU2251690C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-11-05 NZ NZ335534A patent/NZ335534A/xx unknown
- 1997-11-05 ES ES97945607T patent/ES2206750T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-10-08 US US10/266,531 patent/US20030026857A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ158399A3 (cs) | 1999-09-15 |
| ATE248229T1 (de) | 2003-09-15 |
| WO1998020163A1 (en) | 1998-05-14 |
| DE69724447D1 (de) | 2003-10-02 |
| RU2244751C2 (ru) | 2005-01-20 |
| HUP0003940A2 (en) | 2001-03-28 |
| AU5104398A (en) | 1998-05-29 |
| US20020018989A1 (en) | 2002-02-14 |
| KR100463639B1 (ko) | 2004-12-29 |
| RU2251690C2 (ru) | 2005-05-10 |
| IL129786A (en) | 2004-05-12 |
| EP0938589A1 (en) | 1999-09-01 |
| KR20000053157A (ko) | 2000-08-25 |
| IL129786A0 (en) | 2000-02-29 |
| US20030026857A1 (en) | 2003-02-06 |
| JP2001502920A (ja) | 2001-03-06 |
| ES2206750T3 (es) | 2004-05-16 |
| HUP0003940A3 (en) | 2002-09-30 |
| CA2270115A1 (en) | 1998-05-14 |
| DK0938589T3 (da) | 2003-11-24 |
| PL333181A1 (en) | 1999-11-22 |
| PT938589E (pt) | 2004-01-30 |
| BR9713335A (pt) | 2000-05-09 |
| DE69724447T2 (de) | 2004-06-17 |
| AU744788B2 (en) | 2002-03-07 |
| EP0938589B1 (en) | 2003-08-27 |
| NZ335534A (en) | 2000-05-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dobner et al. | Cloning and sequence analysis of cDNA for the canine neurotensin/neuromedin N precursor. | |
| WO1998008856A2 (de) | Spiegelselektion und spiegelevolution von nucleinsäuren | |
| DE69631409T2 (de) | Cathepsin-G-hemmende Aptamere | |
| DE69736002T2 (de) | GEN ASSOZIIERT MIT IgA GLOMERULONEPHRITIS | |
| PL189322B1 (pl) | Sposób identyfikacji preparatu farmaceutycznego oraz sposób wyznaczania odpowiedzi genomowej komórek na ekstrakt roślinny | |
| CN109439745A (zh) | 绝经后骨质疏松的诊疗标志物 | |
| JP2002517456A (ja) | 虚血からのニューロンの保護 | |
| DE10021834A1 (de) | mRNA Moleküle zur Verwendung als Indikatoren für den Aktivierungs- und Funktionszustand von T-Lymphozyten | |
| IL146247A (en) | Method of identifying pharmaceuticals from plant extracts | |
| MXPA99004285A (en) | Method of identifying pharmaceuticals from plant extracts | |
| Benkovic et al. | Regional and cellular localization of presenilin-2 RNA in rat and human brain | |
| CN109468375A (zh) | 分子标志物在骨质疏松症中的应用 | |
| DE10164805B4 (de) | Verfahren und Mittel zur Modifikation humaner Angiogenese | |
| DE60119524T2 (de) | Screening-verfahren | |
| CN118813627B (zh) | 一种fus蛋白水解靶向嵌合体及其制备方法和应用 | |
| US5262528A (en) | cDNA probe differentiating normal and cancer tissues | |
| Bronstein et al. | cDNA cloning and spatiotemporal expression during avian embryogenesis of hnRNP A1, a regulatory factor in alternative splicing | |
| WO2019107440A1 (ja) | コレステロール合成促進剤 | |
| WO1999042477A2 (de) | Transporterprotein für saccharid-gekoppelte arzneimittel | |
| WO1999019477A1 (de) | Cadherin derived growth factor und seine verwendung | |
| CN119909066A (zh) | 一种t-5224用于制备预防和治疗阿霉素诱导心脏毒性药物的用途 | |
| CN120284945A (zh) | 3'-二甲基烯丙基染料木黄酮在治疗钙化性血管疾病中的应用 | |
| US20030216339A1 (en) | Gene sequences associated with neural plasticity and methods related thereto | |
| WO2006027260A1 (de) | Verwendung einer genveränderung im gen des humanen cdca3-proteins in der medizinischen diagnostik und therapie | |
| DE102005046526A1 (de) | Variante des humanen SV2A-Proteins und deren Einfluss auf die Therapieantwort bei Epilepsie |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20051105 |