PL190783B1

PL190783B1 - Sposób wytwarzania wyrobu chłonnego zawierającego bakterie kwasu mlekowego

Info

Publication number: PL190783B1
Application number: PL340332A
Authority: PL
Inventors: Rolf Andersson; Bo Runeman; Ulla Forsgren-Brusk; Hćkansson Eva Grahn; Stellan Hćkansson; Stig E. Holm
Original assignee: Sca Hygiene Prod Ab
Priority date: 1997-10-08
Filing date: 1998-10-08
Publication date: 2006-01-31
Also published as: ZA989211B; ES2195396T3; CO5011035A1; PE125899A1; JP3676233B2; PL340332A1; AU9470798A; PT1032434E; TNSN98180A1; RU2212902C2; EP1032434A1; WO1999017813A1; NZ503947A; EP1032434B1; AU739096B2; TR200000935T2; JP2001518362A; SK5002000A3; KR100581180B1; KR20010031001A

Abstract

1. Sposób wytwarzania wyrobu chlonnego zawierajacego bakterie kwasu mlekowego, w którym dostarcza sie wyrób chlonny i nanosi sie zawiesine bakterii kwasu mlekowego na ten wyrób, zna- mienny tym, ze nastepnie suszy sie wyrób chlonny do zawartosci wilgoci ponizej 10%, liczac zawar- tosc procentowa w odniesieniu do wagi wkladu chlonnego w wyrobie. PL PL PL

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania wyrobu chłonnego zawierającego bakterie kwasu mlekowego.

Chodzi tu zwłaszcza o wyrób chłonny zawierający bakterie kwasu mlekowego i przeznaczony do umieszczania w styczności ze skórą użytkownika w okolicy krocza.

Infekcje w okolicy moczowo-płciowej stanowią problem dotyczący wielu osób. W odbycie i w jego okolicach znajduje się wiele różnych gatunków mikroorganizmów, a także duże ich ilości. Powszechnie wiadomo, że jedną z przyczyn wielu infekcji w obszarze moczowo-płciowym jest rozprzestrzenianie się mikroorganizmów z własnej flory jelitowej danej osoby z odbytu na moczowo-płciowe organy wokół krocza i wywoływanie przez nie infekcji.

W normalnych warunkach dominuje równowaga biologiczna pomię dzy róż nymi mikroorganizmami na skórze i błonie śluzowej, a normalna flora mikrobiologiczna silnie zapobiega rozwojowi niepożądanych mikroorganizmów. Pod tym względem bardzo czynną rolę odgrywają, między innymi, bakterie kwasu mlekowego. Znaleziono jednak sytuacje, w których ten naturalny system obrony nie jest wystarczający i jest zakłócany w taki sposób, że umożliwia rozwój mikroorganizmów potencjalnie patogennych powodujących infekcje, na przykład łącznie z lekami, brakiem higieny, zmianami skórnymi i zmianami w błonie śluzowej.

Do mikroorganizmów, które można powiązać z tymi problemami należą, na przykład, mikroorganizmy z rodzaju Escherichia, Enterococcus, Proteus, Klebsiella, Streptococcus, Gardnerella i Candida.

Odnośnie do niebezpieczeństwa nabycia infekcji w obszarze moczowo-płciowym, starsze i młodsze kobiety są bardziej naraż one na ryzyko niż mężczy ź ni, ze wzglę du na małą odległość od odbytu do otworu cewki moczowej i pochwy.

Grupami jeszcze bardziej narażonymi na ryzyko pod tym względem są młode dziewczyny, u których w obszarze moczowo-płciowym nie rozwinę ła się jeszcze odpowiednia flora bakterii kwasu mlekowego oraz starsze kobiety, u których z kolei flora tego typu już zanikła.

Inną grupą ryzyka są osoby leczone antybiotykami przed pewnego typu infekcjami, w wyniku czego następują zmiany w ich zwykłej naturalnej florze mikrobiologicznej a następnie również w obszarze moczowo-płciowym.

Ściśle z tym związany jest problem przenikania do pochwy bakterii z odbytu, np. paciorkowców, itp. Duży procent kobiet dorosłych (~30%) ma w pochwie paciorkowce grupy B. Kobiety w ciąży z tej grupy stanowią grupę szczególnego ryzyka, ponieważ grozi to zakażeniem płodu lub noworodka i moż e być przyczyną bardzo poważ nej infekcji.

Silnie związanym z tym problemem jest zakażenie bakteryjne pochwy. Na dolegliwości z tego powodu cierpi duży procent dorosłych kobiet (~10%). Kobiety w ciąży mające tego typu problemy stanowią grupę ryzyka, ponieważ stan ten może prowadzić do przedwczesnego porodu, który stanowi poważne zagrożenie zdrowia dziecka.

Nawrotowe infekcje dróg moczowych stanowią dolegliwość wielu osób, a wystąpienie takich infekcji może doprowadzić do komplikacji w postaci uszkodzenia nerek, na przykład, kiedy nie ma możliwości odpowiedniego leczenia.

Naturalną częścią profilaktyki przeciwko infekcjom w obszarze moczowo-płciowym jest intensywna higiena osobista. Może się jednak okazać, że mycie zewnętrznych narządów płciowych i podbrzusza za pomocą silnego mydła i substancji bakteriobójczych nie jest odpowiednie i w rezultacie osoba może mieć trudności ze zmniejszeniem ryzyka infekcji w wystarczającym stopniu za pomocą typowych środków.

Tradycyjnie, wspomniane powyżej problemy rozwiązuje się lecząc infekcje typowymi antybiotykami. Jednakże skutkiem częstego leczenia antybiotykami jest rozwój odpornych szczepów bakteryjnych, co może silnie utrudnić ciągłość leczenia nowych infekcji. Kolejnym problemem związanym z leczeniem antybiotykami jest bardzo silne uczulenie wielu osób na antybiotyki. Jeszcze innym problemem z leczeniem antybiotykami jest złożoność flory mikrobiologicznej w odbycie i wokół niego oraz jej nieokreśloność. Dlatego trudno jest zaproponować leczenie profilaktyczne zmniejszające ryzyko wystąpienia infekcji, jakie mogą powodować mikroorganizmy z jelit.

Znanym dotychczas jedynym sposobem zmniejszenia ryzyka infekcji w obszarze moczowopłciowym jest leczenie antybiotykami. Jednakże, ponieważ stosowanie antybiotyków do celów profilaktycznych nie jest z kilku względów odpowiednie, istnieje silne zapotrzebowanie na alternatywne rozPL 190 783 B1 wiązanie tego problemu poprzez wytwarzanie i utrzymywanie odpowiedniej flory mikrobiologicznej w obszarze moczowo-płciowym.

Jak już wspomniano, tradycyjnym sposobem rozwiązywania wspomnianych powyżej problemów jest leczenie pacjenta typowymi antybiotykami. Zaproponowano różne alternatywne sposoby rozwiązania wspomnianych powyżej problemów. Częścią tej nowej metodologii, zamiast alternatywnych antybiotyków, jest stosowanie tak zwanych bakterii probiotycznych.

Powszechnie wiadomo, że pewne bakterie kwasu mlekowego mogą działać hamująco na rozwój innych mikroorganizmów. Stwierdzono, że zastosowanie takich bakterii kwasu mlekowego zapobiega występowaniu infekcji zarówno na skórze jak i na błonie śluzowej.

Zastosowanie wybranych szczepów bakterii mlekowych w leczeniu ujawniono w kanadyjskim opisie patentowym CA 1298556, gdzie, między innymi, całe komórki albo części komórek bakterii mlekowych stosuje się do leczenia lub zapobiegania występowaniu infekcji przewodów moczowych i infekcjom jelitowym.

W mię dzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 93/09793 ujawniono stosowanie bakterii mlekowych i preparatów z mleka chudego do zapobiegania infekcjom obszaru moczowo-płciowego.

Zarówno w opisie CA 1298556 jak i w WO 93/09793 ujawniono zdolność tych mikroorganizmów do wzmacniania ścianek błony śluzowej, np. komórek nabłonka organów moczowych lub komórek nabłonka pochwy, jako ważny element uzupełniający leczenia. Natomiast ani w opisie CA 1298556 ani w publikacji WO 93/09793 nie opisano sposobu aplikowania takich substancji użytkownikowi.

W międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 92/13577 ujawniono tampon lub podpaskę higieniczną nasycone kulturą bakterii wytwarzających kwas mlekowy, korzystnie Pediococcus, którą wyizolowano od osób zdrowych. Taki tampon lub podpaska higieniczna jest przeznaczona do leczenia profilaktycznego infekcji moczowo-płciowych.

W opisie zgłoszenia WO 92/13577 ujawniono, ż e nałoż one mikroorganizmy kwasu mlekowego podczas manipulacji technicznych zostają osłabione oraz opisano sposób dotyczący leczenia i profilaktyki wokół właściwego otworu cewki moczowej.

Wszystkie przytoczone powyżej dokumenty są skierowane na nakładanie bakterii kwasu mlekowego na skórę. Natomiast żaden z tych dokumentów nie ujawnia niczego o wyrobach chłonnych zawierających bakterie kwasu mlekowego, które to wyroby można przechowywać przez dłuższy czas, z zachowaniem wystarczają cej iloś ci ż ywych i dają cych się przenosić bakterii. Absolutnie niezbę dna jest możliwość przechowywania wyrobów użytkowych, takich jak wyroby chłonne, przez dłuższy czas i w odbiegają cych od ideału warunkach, bez ryzyka ich wpływu na pogorszenie jakoś ci wyrobów. W rezultacie istnieje zapotrzebowanie na wyroby chłonne specjalnie przystosowane do przechowywania przez dłuższy czas w niesprzyjających warunkach.

Sposób wytwarzania wyrobu chłonnego zawierającego bakterie kwasu mlekowego, w którym dostarcza się wyrób chłonny i nanosi się zawiesinę bakterii kwasu mlekowego na ten wyrób, odznacza się według wynalazku tym, że następnie suszy się wyrób chłonny do zawartości wilgoci poniżej 10%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

Korzystnie wyrób chłonny suszy się do zawartości wilgoci poniżej 5%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

Korzystnie wyrób chłonny suszy się do zawartości wilgoci poniżej 1%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

Korzystnie jako nanoszoną zawiesinę bakterii kwasu mlekowego stosuje się zawiesinę zawierającą jeden lub więcej szczepów bakterii z gatunku Lactobacillus, Lactococcus lub Pediococcus.

Korzystnie jako nanoszoną zawiesinę bakterii kwasu mlekowego stosuje się zawiesinę zawierającą jeden lub więcej szczepów bakterii z gatunku Lactobacillus.

Korzystnie zawiesina bakterii kwasu mlekowego nanoszona na wyrób zawiera również chude mleko.

Korzystnie nanoszona zawiesina bakterii kwasu mlekowego ma stężenie bakterii kwasu mlekowego od 10⁹ a 10¹² cfu/ml.

Korzystnie wyrób chłonny wybiera się z grupy obejmującej pieluchę, podpaskę higieniczną, wkład do majtek, wyrób ochronny dla osób nie panujących nad wydalaniem i wkładkę.

Okazało się, że powyższe problemy można rozwiązać dzięki wynalazkowi oraz zapewnić wysoką jakość, nanosząc zawiesinę bakterii kwasu mlekowego na wyrób chłonny, po czym susząc wyrób chłonny do zawartości wilgoci poniżej około 10%, korzystnie poniżej 5%, a najbardziej korzystnie poniżej 1%, odnosząc udziały procentowe do wagi wkładu chłonnego w wyrobie. Wyrobem chłonnym może być pielucha, podpaska higieniczna, wkład do majtek, ochrona dla osób nie panujących nad

PL 190 783 B1 wydalaniem lub podobny wyrób. Jak już wspomniano, zawiera on bakterie kwasu mlekowego i wyrób jest przeznaczony do noszenia w styczności ze skórą użytkownika w obszarze krocza, przy czym bakterie kwasu mlekowego są przygotowane tak, żeby przenosiły się na skórę użytkownika oraz, stosownie do sytuacji, na błonę śluzową w obszarze krocza, tworząc barierę mikrobiologiczną wytwarzającą warunki hamujące rozprzestrzenianie się i rozwój niepożądanych szczepów bakteryjnych we wspomnianym obszarze krocza.

Przedmiot wynalazku opisano bardziej szczegółowo w przykładach wykonania na rysunku, na którym fig. 1 przedstawia wyniki uzyskane z badań hamującego oddziaływania na siebie wybranych bakterii kwasu mlekowego i niepożądanych mikroorganizmów, a fig. 2 przedstawia budowę wyrobu według wynalazku w postaci wkładki, schematycznie.

Wyrób chłonny według wynalazku jest przeznaczony do przenoszenia bakterii kwasu mlekowego na krocze użytkownika, a tym samym wytwarzania flory mikrobiologicznej, która stwarza tam niesprzyjające warunki dla niepożądanych mikroorganizmów. Powoduje to wstrzymanie przemieszczania się niepożądanych mikroorganizmów z odbytu użytkownika na organy moczowo-płciowe.

Bakterie kwasu mlekowego, albo zawierające je preparaty, nanosi się na wyrób chłonny taki jak pielucha, podpaska higieniczna, wkład do majtek, wyrób ochronny dla osób nie panujących nad wydalaniem i tym podobne.

Ogólnie, bakterie kwasu mlekowego nanosi się na wyrób dodając ich zawiesinę na tę powierzchnię wyrobu, która ma być zwrócona ku użytkownikowi. Korzystnie, zawiesina ta zawiera mleko chude. Korzystnie, zawiesina ta jest stężona w celu zmniejszenia jej całkowitej objętości, ale z drugiej strony, silnie stężona zawiesina może być przyczyną zatykania się rurociągów i dysz. Odpowiednie stężenie mieści się w przedziale wartości od 1x10⁹ do 1x10¹² cfu/ml (jednostki tworzące kolonie na ml), a korzystnie w przedziale od 1x10¹⁰ cfu do 1x10¹¹ cfu/ml. Zawiesinę można nakładać natryskowo albo wylewając ją. Wodna część zawiesiny jest natychmiast wchłaniana w warstwy chłonne w dolnej części wyrobu, natomiast bakterie zostają w górnej części wyrobu, to jest najbliższej użytkownika w stanie w zasadzie suchym. Pomimo tej absorpcji okazuje się istotne przeprowadzenie etapu suszenia w celu zapewnienia, że zawartość wilgoci w tym gotowym wyrobie wynosi poniżej 10%, korzystnie poniżej 5%, a najbardziej korzystnie poniżej 1%, odnosząc udziały procentowe do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

Bakterie kwasu mlekowego działają hamująco na rozwój niepożądanych mikroorganizmów w kroczu.

Do bakterii kwasu mlekowego nadających się do stosowania w wynalazku należą jeden lub więcej szczepów z rodzaju Lactobacillus, Lactococcus lub Pediococcus. Natomiast, korzystnie, bakterie kwasu mlekowego składają się z jednego lub więcej szczepów pochodzących z rodzaju Lactobacillus.

Bakterie kwasu mlekowego można łączyć z innymi składnikami, takimi jak substancja obniżająca pH lub substancja pomocnicza, która ułatwia przetrwanie bakterii kwasu mlekowego. Jednym z przykładów takiej substancji pomocniczej jest chude mleko w proszku.

Wyrób chłonny wytworzony sposobem według wynalazku można, korzystnie, łączyć z lokalnym dodawaniem bakterii kwasu mlekowego w pochwie za pomocą kapsułki, vagitorium lub temu podobnych środków. Korzystnie, wyrób chłonny wytworzony zgodnie z wynalazkiem można również używać w bezpoś rednim połą czeniu z leczeniem za pomocą antybiotyków, na przykład leczeniem infekcji organów moczowo-płciowych.

Wynalazek można stosować w odniesieniu do wszystkich typów wyrobów chłonnych przeznaczonych do stykania się z kroczem użytkownika. Zatem bakterie kwasu mlekowego mogą być wprowadzane jako element składowy do wkładu chłonnego w wyrobie chłonnym, albo nanoszone w lub na przepuszczalną dla cieczy warstwę osłonową takiego wyrobu, albo w lub na warstwę transportującą ciecz pomiędzy przepuszczalną dla cieczy warstwą osłonową a wkładem chłonnym, albo można je nanosić na oddzielny nośnik, taki jak warstwa bibułki lub podobnego materiału. Wyrobem chłonnym może być pielucha, podpaska higieniczna, wyrób ochronny dla osób nie panujących nad wydalaniem albo wkład do majtek. W wyrobach tego typu zazwyczaj znajduje się wkład chłonny lub wkładka zamknięta w osłonie, przy czym osłona zawiera korzystnie, przepuszczalną dla cieczy warstwę zewnętrzną na tej powierzchni, która podczas używania wyrobu ma znajdować się blisko użytkownika. Korzystne jest, kiedy warstwa barierowa dla cieczy, na przykład w postaci folii z tworzywa sztucznego, znajduje się w pobliżu przeciwległej powierzchni, która podczas używania wyrobu leży dalej od użytkownika.

Kiedy bakterie kwasu mlekowego znajdują się na wewnętrznej stronie względem osłony wyrobu, to istotne znaczenie ma ich zdolność do przenikania przez osłonę na tę powierzchnię wyrobu,

PL 190 783 B1 która ma leżeć na skórze użytkownika w kroczu. Stwierdzono, że, korzystnie, liczba bakterii kwasu mlekowego w wyrobie powinna wynosić od 10⁴ cfu do 10¹¹ cfu, a bardziej korzystnie od 10⁶ cfu do 10¹⁰ cfu.

Alternatywnie, wyrób chłonny może mieć postać wkładki zawierającej elementy do jej mocowania do przepuszczalnej dla cieczy warstwy zewnętrznej w konwencjonalnym wyrobie chłonnym. Jedną z zalet stosowania takiej wkładki jest moż liwość uniknię cia koniecznoś ci wytwarzania wyrobów zaopatrzonych w bakterie kwasu mlekowego w dużej liczbie różnych wymiarów i modeli.

Jak już wspomniano, celem wynalazku jest zapewnienie sposobu wytwarzania wyrobu chłonnego wspomnianego powyżej typu, który zmniejsza rozprzestrzenianie się bakterii z odbytu ku organom moczowo-płciowym dzięki istnieniu mechanizmu antagonizmu mikrobiologicznego. Cel ten osiągnięto według wynalazku za pomocą sposobu wytwarzania wyrobu chłonnego z bakteriami kwasu mlekowego. Taki wyrób chłonny jest przeznaczony do regularnego używania i w styczności ze skórą użytkownika w obszarze krocza. Pod określeniem regularnego używania należy rozumieć, w tym przypadku, używanie codzienne albo prawie codzienne wyrobu. W związku z tym bakterie kwasu mlekowego nanosi się na obszar krocza użytkownika tak, żeby wytworzyć i utrzymać w tym obszarze florę mikrobiologiczną, która wytwarza niesprzyjające warunki dla przetrwania niepożądanych mikroorganizmów we wspomnianym obszarze krocza, a tym samym zapobiec rozprzestrzenianiu się tych mikroorganizmów z odbytu do organów moczowo-płciowych.

Przykładami gatunków wywołujących infekcje organów moczowo-płciowych są bakterie Escherichia coli, Enterobacter, Klebsiella, Pseudomonas, Proteus, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus epidermidis, grupa B streptococci, Enterococci, Candida sp., Clamydia sp., Gardnerella vaginalis, Mobiluncus i Bacteroides sp.

Jak już wspomniano działanie wyrobu wytworzonego według wynalazku oparte jest na mechanizmie antagonizmu mikrobiologicznego. Antagonizm mikrobiologiczny polega na tym, że jeden mikroorganizm, albo kombinacja mikroorganizmów, hamuje rozwój innych mikroorganizmów. Antagonistyczny szczep wywiera hamujące działanie za pomocą konwencjonalnych technik zakłócania rozwoju kilku wspomnianych powyżej niepożądanych mikroorganizmów. Innym ważnym warunkiem stawianym odpowiedniemu mikroorganizmowi antagonistycznemu jest jego zdolność do przetrwania podczas przechowywania oraz zdolność do rozwoju lub zdolność do zachowania swojej aktywności w wyrobie podczas używania.

Mikroorganizmy antagonistyczne mogą być organizmami występującymi naturalnie, które nie są toksyczne i nie wywierają żadnego negatywnego działania biologicznego na ludzi, w postaci infekcji lub zmian skórnych. Mikroorganizmy antagonistyczne można jednak również wytwarzać metodami biotechnologicznymi.

Pewne szczepy bakterii kwasu mlekowego mają zdolność do hamowania rozwoju niepożądanych szczepów bakterii w kroczu użytkownika. To działanie hamujące polega na tym, że bakterie kwasu mlekowego mają szereg antagonistycznych właściwości działających na różnych zasadach, takich jak przez obniżanie pH, np. poprzez wytwarzanie kwasu mlekowego, współzawodnictwo do dostępnego pożywienia, zmniejszenie potencjału redoks, wytwarzanie nadtlenku wodoru, wytwarzanie specyficznych substancji hamujących lub składników, takich jak enzymy, toksyny lub środki bakteriobójcze oraz współzawodnictwo do dostępnych miejsc receptorowych. W niektórych przypadkach można zintensyfikować jeszcze bardziej antagonistyczny efekt dodając dodatkową substancję obniżającą pH.

Rozwój niepożądanych mikroorganizmów znajdujących się w kroczu użytkownika można zahamować dodając bakterie kwasu mlekowego do wyrobu chłonnego zgodnie z wynalazkiem, które to bakterie wykazują właściwości antagonistyczne wobec wspomnianych niepożądanych mikroorganizmów. W ten sposób można również zniszczyć co najmniej pewną liczbę mikroorganizmów niepożądanych gatunków. Mikroorganizmy dodane do wyrobu trzeba dodawać w takich ilościach i muszą mieć takie formy działania, żeby uzyskać pożądany efekt. Ten efekt uzyskuje się zwykle, gdy liczba antagonistycznych mikroorganizmów na wyrób jest większa niż 10⁶ cfu, korzystnie 10⁸ cfu, a najbardziej korzystnie 10⁹ cfu.

Jedną z zalet, wynikających ze stosowania mikroorganizmów antagonistycznych, jest możliwość rezygnacji ze stosowania niepożądanego nacisku selekcyjnego na mikrośrodowisko, takiego, które jest korzystne dla organizmów potencjalnie patogennych, a tym samym ryzyka rozwoju patogennych szczepów, które są odporne na antybiotyki i chemiczne środki farmaceutyczne. Ponieważ system antymikrobiologiczny opiera się na naturalnym procesie biologicznym, więc ryzyko zakłóceń ekologicznych i toksycznych środowiska naturalnego jest zmniejszone.

W skład wyrobu wytworzonego sposobem według wynalazku moż e wchodzić noś nik w formie, np. typowej wkładki do majtek z, albo bez, nieprzepuszczalną dla cieczy warstwą podkładową i zawie6

PL 190 783 B1 ₂ rający warstwę chłonną z 100-200 g/m² pulpy celulozowej zmieszanej z proszkiem superchłonnym w iloś ci 0-10%. Ta strona wyrobu, która podczas uż ywania znajduje się w pobliż u uż ytkownika, zawiera bakterie kwasu mlekowego o stężeniu, korzystnie, rzędu 10⁴-10¹¹, bardziej korzystnie 10⁶-10¹⁰ cfu na wyrób. W skład wyrobu wytworzonego sposobem według wynalazku wchodzi, korzystnie, odpowiednia substancja pomagająca organizmom przetrwać. Jedną z takich substancji pomocniczych może być, na przykład, chude mleko w proszku. Bez względu na ogólną postać wyrobu, w skład wyrobu wytworzonego sposobem według wynalazku może również wchodzić odpowiednia substancja obniżająca wartość pH w celu dalszej intensyfikacji efektu antagonistycznego.

Poniżej przedstawiono przykłady mające na celu dalsze zilustrowanie działania wyrobu wytworzonego sposobem według wynalazku.

P r z y k ł a d 1

Przeprowadzono badania antagonizmu bakteryjnego metodą agarową. Metoda ta opiera się na dyfuzji substancji hamującej rozwój, wytwarzanej przez bakterie kwasu mlekowego, przez warstwę agaru oraz hamowaniu przez tę substancję rozwoju organizmów badawczych.

Hodowano, w ciągu nocy w hodowli bulionowej firmy Merck, bakterie kwasu mlekowego, trzy szczepy Lactobacillus oznaczone, odpowiednio, LB13, LB14 i LB16, oraz pięć szczepów Lactococcus, oznaczone odpowiednio L3, L4, L5, L9 i L26. Lactococcus hodowano na pożywce M17 a Lactobacillus na pożywce MRS. Mieszano, odpowiednio, agar (2%) z M17 i MRS (25 ml) z 1 ml odpowiednich bakterii i wlewano na płytkę Petriego. Płytki z agarem hodowano przez noc w temperaturze 37°C. Płytki z MRS hodowano w atmosferze CO2. Płytki porównawcze sporz ą dzono w taki sam sposób, ale bez bakterii kwasu mlekowego. Świeżą warstwę z 25 ml agaru wkładano na górną powierzchnię istniejącej warstwy na płytkach Petriego i pozwolono jej zakrzepnąć.

Organizmy badawcze w formie bakterii gram-ujemnych odpowiednich Escherichia coli, Klebsiella spp i Proteus spp oraz, odpowiednio, szczepów 100, 91 i 50, hodowano na bulionie, a następnie sporządzano z nich rozcieńczony roztwór odpowiednio do poziomu 10⁷ cfu/ml w zlewkach Bertaniego. Następnie bakterie testowe przenoszono za pomocą stempla na nową warstwę agaru za pomocą Stalowego Replikatora Trzpieniowego Steersa (Steers i inni, J. Antibiot Chemother (1979,9,307). Płytki te wygrzewano w temperaturze 37°C przez dwadzieścia cztery godziny. Po inkubacji płytki te przeanalizowano i porównano z płytkami odniesienia. Podczas analizy płytek rejestrowano dla odpowiednich organizmów testowych „rozwój”, „zahamowanie rozwoju” lub „rozwój zerowy”. Mierzono wartość pH dla wszystkich warstw agaru, a płytki z pH poniżej 5,0 ponownie badano z agarem z regulowanym pH, tj. z agarem, do którego dodano małe ilości glukozy w celu przeciwdziałania zmniejszeniu pH. Obliczano procentowe udziały całkowitej liczby organizmów testowych, których rozwój określono jako zahamowany lub zerowy.

Na wykresie na fig. 1 przedstawiono procentowe zawartości różnych szczepów Escherichia coli, Klebsiella i Proteus, których rozwój zahamowano wskutek obecności wybranych szczepów z rodzaju Lactobacillus i Lactococcus. Wyraźnie widać, że szczepy Lactobacillus LB13 i LB16 działają hamująco praktycznie na wszystkie szczepy patogenne. Szczep Lactobacillus oznaczony LB14 hamował rozwój wszystkich szczepów E. coli, około 80% szczepów Proteus i nieco więcej niż 30% szczepów Klebsiella. Wszystkie użyte szczepy Lactococcus i Lactobacillus działały hamująco na rozwój pewnych szczepów patogennych. Spośród szczepów Lactococcus, uzyskano zahamowanie najwyższej procentowo ilości organizmów patogennych za pomocą L25 i L9, z których oba działały hamująco na praktycznie wszystkie szczepy E. coli oraz na duży procent szczepów Klebsiella.

P r z y k ł a d 2

Poniższe badania przeprowadzono z intencją przeanalizowania przenoszenia bakterii kwasu mlekowego na krocze osób noszących wkładki do majtek. Wszystkie badane osoby były płci żeńskiej w wieku 3-60 lat. W pewnych przypadkach badania te przeprowadzono pomiędzy okresami menstruacyjnymi u danych osób badanych. Wyroby testowe wytwarzano z typowych wkładek do majtek zawierających przepuszczalny dla cieczy warstwę osłonową, nieprzepuszczalną dla cieczy warstwę podkładową oraz warstwę chłonną z chemicznej pulpy celulozowej, o gramaturze 100-200 g/m², umieszczoną przekładkowo pomiędzy nimi. Na chłonną stronę badanych wyrobów natryśnięto zawiesinę wybranych bakterii kwasu mlekowego w stężeniu rzędu 10⁹ cfu na wyrób.

Obecność bakterii kwasu mlekowego w kroczu badanych osób określano za pomocą tak zwanego testu wymazowego. W tym przypadku bakterie zbierano zanurzając sterylny pręcik z bawełniano-wełnianym wacikiem na szczycie w sterylnym roztworze soli, a następnie pocierano wacikiem określony obszar skóry. W ten sposób określano i mierzono obecność bakterii kwasu mlekowego w kroczu dwudziestu badanych osób, uzyskują c tak zwaną próbkę 0 (próbkę podstawową ). Nastę pnie

PL 190 783 B1 badanym osobom zakładano wkładkę do majtek na przeciąg pięciu godzin w okresie porannym. Następnie zdejmowano wkładkę do majtek i ponownie mierzono obecność bakterii kwasu mlekowego, natychmiast po zdjęciu wkładek do majtek. Badanie to oznaczono jako Próbka 1. Po następnych czterech-pięciu godzinach przeprowadzono kolejny test, oznaczony jako Próbka 2. Podczas każdego pobierania próbek badano typ bakterii kwasu mlekowego w celu oceny czy któraś z badanych osób nie jest naturalnym nosicielem wybranego typu bakterii kwasu mlekowego dodanego do badanych wyrobów. Stosowano metodę identyfikacyjną API (system API, La Balme les Grottes, 38390 Montalieu, Vercieu, Francja). Uzyskane podczas tych badań wyniki przedstawiono w tabeli 1.

T a b e l a 1

Obecność LAB* w kroczu (cfu)

TP Flora Próbka 0 Próbka 1 Próbka 2

1	Dodane LAB	0	0	0
	Własne LAB	0	0	0
2	Dodane LAB	0	4,0x10¹	0
	Własne LAB	0	0	0
3	Dodane LAB	0	7,2x10¹	1,6x10²
	Własne LAB	0	0	0
4	Dodane LAB	0	0	0
	Własne LAB	0	0	0
5	Dodane LAB	0	1,1x10²	5,0x10¹
	Własne LAB	0	0	0
6	Dodane LAB	0	5,0x10¹	3,0x10¹
	Własne LAB	+	+	0
7	Dodane LAB	0	3,2x10²	1,3x10³
	Własne LAB	+	+	+
8	Dodane LAB	0	2,7x10³	6,0x10²
	Własne LAB	0	0	0
9	Dodane LAB	0	3,2x10³	1,0x10¹
	Własne LAB	+	0	0
10	Dodane LAB	0	7,6x10²	7,0x10¹
	Własne LAB	+	+	+
11	Dodane LAB	0	8,4x10³	7,0x10¹
	Własne LAB	+	+	+
12	Dodane LAB	0	3,5x10³	8,0x10¹
	Własne LAB	0	0	0
13	Dodane LAB	0	2,4x10²	3,0x10²
	Własne LAB	+	+	+
14	Dodane LAB	0	0	0
	Własne LAB	+	+	+
15	Dodane LAB	0	2,1x10²	8,0x10¹
	Własne LAB	+	+	+
16	Dodane LAB	0	1,6x10⁴	4,0x10³
	Własne LAB	0	0	+
17	Dodane LAB	0	6,0x10²	1,5x10²
	Własne LAB	+	+	+
18	Dodane LAB	0	9,3x10²	1,0x10¹
	Własne LAB	0	0	0
19	Dodane LAB	0	4,0x10¹	1,0x10¹
	Własne LAB	0	0	0
20	Dodane LAB	0	7,2x10³	7,0x10¹
	Własne LAB	0	0	0
Liczba próbek TP z dodanym LAB	0	17	16

*LAB = bakterie kwasu mlekowego 0 = u badanych osób nie wykryto bakterii kwasu mlekowego + = u badanych osób stwierdzono obecność LAB

PL 190 783 B1

Jak wynika z tabeli 1, wybrane bakterie kwasu mlekowego dodane do badanych wyrobów uaktywniły się po założeniu tych badanych wyrobów przez badane osoby oraz że wybrane bakterie kwasu mlekowego zostały przeniesione na obszar krocza wspomnianych osób oraz stwierdzono ich obecność we wspomnianym obszarze nawet przez stosunkowo długi okres czasu po zdjęciu badanych wyrobów.

P r z y k ł a d 3

Przeprowadzono badania kliniczne w celu zilustrowania wpływu dodawania bakterii kwasu mlekowego na florę znajdującą się na organach moczowo-płciowych u dzieci cierpiących na rozszczepienie kręgosłupa z przepukliną oponowo-rdzeniową. Badania przeprowadzono na ślepo, losowo i w układzie krzyż owym. Badano dwadzieś cia troje dzieci w wieku od dwóch do siedemnastu lat. Wszystkie dzieci nosiły pieluchy. Badane wyroby w postaci wkładek z bakteriami kwasu mlekowego, i bez niego, umieszczono w pobliż u skóry w standardowej pielusze.

Budowę zastosowanej wkładki 1 pokazano na fig. 2. Najwyżej we wkładce 1, tj. najbliżej skóry użytkownika, znajduje się przepuszczalna dla cieczy warstwa osłonowa 2 wykonana z materiału włókninowego. W bezpośrednim sąsiedztwie warstwy osłonowej 2, wewnętrznie względem niej, znajduje się cienka warstwa bibułkowa 3. W skład wkładki 1 wchodzi również wkładka chłonna 4 wykonana z mieszanki puszystej pulpy celulozowej i materiału superchłonnego. Na powierzchni wkładki chłonnej 4 w pobliż u warstwy bibułkowej 3 znajduje się warstwa liofilizowanego mleka 5 w proszku z domieszką , albo bez niej, wybranych liofilizowanych bakterii w stężeniu 10⁹ cfu na wkładkę. Warstwę bibułkową 3, wkładkę chłonną 4 oraz mleko 5 w proszku zamknięto pomiędzy przepuszczalną dla cieczy warstwą osłonową 2 a podobną przepuszczalną dla cieczy warstwą podkładową 6 z materiału włókninowego.

Na dolnej powierzchni warstwy podkładowej 6, która podczas używania ma leżeć w pobliżu pieluchy, umieszczono dwa paski 7 kleju w celu umożliwienia mocowania wkładki 1 do pieluch noszonych przez badane dzieci. Paski 7 kleju zabezpieczono papierem abhezyjnym 8 przed włożeniem wkładki 1 w odpowiednie pieluchy.

Wkładkę chłonną 4 uformowano jako warstwę chłonną z chemotermomechanicznej pulpy o gramaturze 150 g/m² z domieszką 10% proszku superchłonnego. Na powierzchnię warstwy bibułkowej 3 zwróconą ku wkładce chłonnej 4 natryśnięto liofilizowane mleko w proszku, w tym przypadku z domieszką liofilizowanych bakterii kwasu mlekowego. Na górnej powierzchni mleka w proszku umieszczono warstwę bibułkową 3 o gramaturze około 20 g/m². Warstwę osłonową 2 i warstwę podkładową 6 złożoną z materiału włókninowego o gramaturze 17 g/m² laminowano z obu stron do zespołu chłonnego 3-5. Wytworzona w ten sposób wkładka 1 miała kształt klepsydry o największej szerokości około 9 cm i najmniejszej szerokości około 6,5 cm oraz długości około 24 cm.

Badania te kontynuowano przez okres 6+6 tygodni z przerwą trzech tygodni pomiędzy nimi. Przed i podczas odpowiednich okresów badawczych wykonano hodowlę moczową (w odstępach dwóch tygodni) oraz przeprowadzono ocenę liczbową z obszaru krocza i otworu cewki moczowej. Liczbę uzyskanych bakterii odniesiono do skali pomiarowej pomiędzy 0 a 5, gdzie 0 oznacza cfu<10², 1 oznacza cfu pomię dzy 10² a 10³, i tak dalej. Uzyskane wyniki przedstawiono w tabeli 2.

T a b e l a 2

Wkładka bez LAB* Wkładka z LAB*

Grupa bakterii	Miejsce	M	SD	M	SD	Znaczenie
Potencjalnych patogenów	Krocze	1,93	0,84	1,52	0,89	Tak
Układu moczowego	Cewka moczowa	1,62	1,12	1,29	0,95	Nie
	Mocz	1,93	1,72	1,43	1,39	Tak

*LAB = bakterie kwasu mlekowego M = wartość ś rednia

SD = odchylenie standardowe

W tabeli 2 wyraźnie widać, że wkładka zawierająca wybrane bakterie kwasu mlekowego zapewnia statystycznie znaczące (p<0,05) zmniejszenie liczby potencjalnych organizmów patogennych układu moczowego (PUP) w kroczu i w moczu.

P r z y k ł a d 4

Poniższe badania przeprowadzono z zamiarem przeanalizowania przeżycia bakterii kwasu mlekowego w wyrobach chłonnych wytworzonych sposobem według wynalazku. Badane wyroby wykonano z konwencjonalnych wkładek do majtek zawierających przepuszczalną dla cieczy warstwę osłonową, nieprzepuszczalną dla cieczy warstwę podkładową oraz umieszczoną pomiędzy nimi przekładkowo warstwę chłonną z chemicznej pulpy celulozowej o gramaturze 100-200 g/m². Na chłonną

PL 190 783 B1 stronę badanych wyrobów natryśnięto około 150 mikrolitrów zawiesiny wybranych bakterii kwasu mlekowego w solance mleka chudego w stężeniu około 9,0x10⁷ cfu na wyrób. Niektóre badane wyroby wysuszono do zawartości wilgoci poniżej 10% wagowych przed zapakowaniem ich do pakietów z tworzyw sztucznych, natomiast inne zapakowano bez poprzedzają cego etapu suszenia. Po 14, 28, 40 i 53 dniach określano, odpowiednio, za pomocą standardowych metod ilość żywych bakterii kwasu mlekowego. Uzyskane wyniki przedstawiono w poniższej tabeli 3:

T a b e l a 3

Wysuszona Wkładka do majtek, wkładka do majtek która nie została wysuszona

dzień	cfu	cfu	cfu	cfu
0	9,0 x 10⁷	7,0 x 10⁷	9,0 x 10⁷	7,0 x 10⁷
14	7,5 x 10⁶	6,1 x 10⁶	3,6 x 10⁵	8,0 x 10⁵
28	7,2 x 10⁷	2,6 x 10⁷	2,1 x 10⁴	1,0 x 10³
40	8,9 x 10⁷	3,2 x 10⁷	1,4 x 10⁴	1,0 x 10³
53	7,0 x 10⁷	3,0 x 10⁷	1,1 x 10⁴	1,0 x 10³

Jak wyraźnie wynika z tabeli 3 powyżej, ilość żywych bakterii kwasu mlekowego nie zmniejszyła się podczas okresu badawczego. Natomiast znacznie zmniejszyła się ilość żywych bakterii kwasu mlekowego jeżeli przed zapakowaniem nie przeprowadzono suszenia.

Wynalazku nie należy traktować jako ograniczonego do powyższych przykładów, ponieważ rozumie się samo przez się, że istnieje możliwość przeprowadzenia licznych modyfikacji i opracowania innych przykładów wykonania mieszczących się w zakresie zastrzeżeń.

Claims

1. Sposób wytwarzania wyrobu chłonnego zawierającego bakterie kwasu mlekowego, w którym dostarcza się wyrób chłonny i nanosi się zawiesinę bakterii kwasu mlekowego na ten wyrób, znamienny tym, że następnie suszy się wyrób chłonny do zawartości wilgoci poniżej 10%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wyrób chłonny suszy się do zawartości wilgoci poniżej 5%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wyrób chłonny suszy się do zawartości wilgoci poniżej 1%, licząc zawartość procentową w odniesieniu do wagi wkładu chłonnego w wyrobie.

4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako nanoszoną zawiesinę bakterii kwasu mlekowego stosuje się zawiesinę zawierającą jeden lub więcej szczepów bakterii z gatunku Lactobacillus, Lactococcus lub Pediococcus.

5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako nanoszoną zawiesinę bakterii kwasu mlekowego stosuje się zawiesinę zawierającą jeden lub więcej szczepów bakterii z gatunku Lactobacillus.

6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że zawiesina bakterii kwasu mlekowego nanoszona na wyrób zawiera również chude mleko.

7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że nanoszona zawiesina bakterii kwasu mlekowego ma stężenie bakterii kwasu mlekowego od 10⁹ a 10¹² cfu/ml.

8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że wyrób chłonny wybiera się z grupy obejmującej pieluchę, podpaskę higieniczną, wkład do majtek, wyrób ochronny dla osób nie panujących nad wydalaniem i wkładkę.