PL193190B1

PL193190B1 - Method of obtaining paclitaxtel

Info

Publication number: PL193190B1
Application number: PL344228A
Authority: PL
Inventors: Włodzimierz Daniewski; George Charles Schloemer; Danuta Anna Schloemer; Marek Masnyk; Maria Gumułka
Original assignee: Inst Chemii Organicznej Pan
Priority date: 2000-12-01
Filing date: 2000-12-01
Publication date: 2007-01-31
Also published as: PL344228A1

Abstract

Sposob wytwarzania padlikselu o wzorze 1 znamienny tym, ze amid o wzorze 2 gdzie R oznacza wodór lub metyl, a R1 oznacza niższy alkil. Korzystnie o 1-3 atomach węgla, poddaje się cyklizacji w obojętnym rozpuszczalniku organicznym przy pomocy dwumetylowego acetalu aktywowanego benzaldehydu o wzorze 2a, w którym R2 i R3 oznaczają niezależnie atom wodoru lub grupę alkoksylową o 1-3 atomach węgla, w warunkach kwaśnej katalizy, z jednoczesnym usuwaniem metanolA method for preparing padlixel of formula 1 characterized in that an amide of formula 2 where R is hydrogen or methyl and R1 is lower alkyl, preferably with 1-3 carbon atoms, is cyclized in an inert organic solvent with an activated benzaldehyde dimethyl acetal of formula 2a, wherein R2 and R3 are independently a hydrogen atom or an alkoxy group with 1-3 carbon atoms, under acid catalytic conditions, with simultaneous removal of methanol

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest nowa, pół-syntetyczna metoda wytwarzania leku przeciwnowotworowego paklitakselu o wzorze 1.The present invention relates to a new, semi-synthetic method for the preparation of the anticancer drug paclitaxel of formula 1.

W metodzie tej stosuje się unikalny sposób wytwarzania nienasyconych pochodnych aktywowanych oksazoli, które następnie hydrolizuje się do pochodnych, z których po procesie utlenienia i przegrupowania wytwarza się między innymi paklitaksel. Metoda według wynalazku może potencjalnie być pożyteczna do syntezy różnorodnych nowych pochodnych taksanowych.This method uses a unique method for the preparation of unsaturated derivatives of activated oxazoles, which are then hydrolyzed to derivatives from which, after the oxidation and rearrangement process, paclitaxel is produced. The method of the invention has the potential to be useful in the synthesis of a wide variety of new taxane derivatives.

Dotychczasowy stan technikiState of the art

Różne półsyntezy pochodnych taksanowych z 10-deacetylobakatinu III prowadzone są już od kilku lat. Pierwsza synteza opublikowana przez Greene'a (J. N. Denis, A.E. Greene, D. Guenard, F.Gueritte-Vogelein, L. Mangantal, P. Potier, J.Am.Chem.Soc., 1988, 110 5917 - 5919) była mało wydajna, używano dużego nadmiaru kosztownego łańcucha bocznego, oraz zaobserwowano epimeryzację na węglu 2' łańcucha bocznego. Holton et al. (R.A. Holton, EP-A 400971, 1990) opublikowali bardziej wydajną syntezę używając szeregu pochodnych cyklicznych amidów. Rhone-Poulenc Rorer przedstawił wydajną syntezę taksotere i paklitakselu z użyciem specjalnych pochodnych cyklicznych acetali (A. Commercon, D. Bezard, F. Bernard, J.D. Bourzat, Tetrahedron Lett. 1992, 33, 5185). Także Bristol-Mayers zademonstrował wydajną syntezę paklitakselu przy użyciu pochodnych oksazolinowych (J.K. Trottathil, J.D. Trifunovich, EP-A 0735036 A1 1996. (Bristol Myers Squibb). Opublikowanych zostało jeszcze kilka innych syntez jednak nie mają one większego znaczenia praktycznego. Chociaż, niektóre z tych syntez są dość wydajnymi, jednakowoż nie pozwalają one na wyprodukowanie innych pochodnych taksanowych lub nowa pochodna musi być wytwarzana od razu na początku syntezy. Znana jest także metoda opublikowana przez Kingstona et al. (D.G.l. Kingston, A.A. Molinero, A.A.L. Gunatilaka U.S.P. 5,470,866 Nov. 28 1995) posiadająca wydajną syntezę związków pośrednich, ale warunki ostatniego etapu syntezy tam podane są nieefektywne.Various semisyntheses of taxane derivatives from 10-deacetylbacatin III have been carried out for several years. The first synthesis published by Greene (JN Denis, AE Greene, D. Guenard, F. Gueritte-Vogelein, L. Mangantal, P. Potier, J. Am.Chem. Soc., 1988, 110 5917 - 5919) was not enough efficient, a large excess of the expensive side chain was used, and epimerization at the 2 'carbon of the side chain was observed. Holton et al. (R.A. Holton, EP-A 400971, 1990) published a more efficient synthesis using a series of cyclic amide derivatives. Rhone-Poulenc Rorer has reported the efficient synthesis of taxotere and paclitaxel using special cyclic acetal derivatives (A. Commercon, D. Bezard, F. Bernard, J.D. Bourzat, Tetrahedron Lett. 1992, 33, 5185). Also Bristol-Mayers has demonstrated the efficient synthesis of paclitaxel using oxazoline derivatives (JK Trottathil, JD Trifunovich, EP-A 0735036 A1 1996. (Bristol Myers Squibb) Several other syntheses have been published but are of little practical importance. these syntheses are quite efficient, however they do not allow the production of other taxane derivatives or the new derivative must be prepared immediately at the start of the synthesis The method published by Kingston et al. (DGl Kingston, AA Molinero, AAL Gunatilaka USP 5,470,866 Nov. 28 1995) having efficient synthesis of the intermediates, but the conditions of the last step of the synthesis given therein are ineffective.

Dlatego też poszukiwano metody, która dałaby możliwość syntezy różnorodnych pochodnych taksanowych ze wspólnego związku pośredniego.Therefore, a method was sought that would make it possible to synthesize a variety of taxane derivatives from a common intermediate.

W pracach własnych, zmodyfikowano znacznie znane dotychczas metody syntezy w celu uzyskania pożądanego rezultatu.In the authors' own work, the previously known methods of synthesis were significantly modified in order to obtain the desired result.

Nieoczekiwanie, okazało się, że metodą według wynalazku wytwarza się unikalną pochodną fenyloizoseryny, która po przereagowaniu z odpowiednio zablokowana pochodną bakatyny III tworzy taksanowy substrat, który może być przekształcony w paklitaksel lub inne potencjalnie użyteczne pochodne taksanowe.Surprisingly, it turned out that the method according to the invention produces a unique phenylisoserine derivative which, when reacted with an appropriately blocked baccatin III derivative, forms a taxane substrate that can be converted into paclitaxel or other potentially useful taxane derivatives.

PL 193 190 B1PL 193 190 B1

Sposób według wynalazku polega na tym, że amid o wzorze 2The process according to the invention consists in that the amide of formula II

gdzie R oznacza wodór lub metyl, a R1 oznacza niższy alkil, korzystnie o 1 - 3 atomach węgla, poddaje się cyklizacji w obojętnym rozpuszczalniku organicznym przy pomocy dwumetylowego acetalu aktywowanego benzaldehydu o wzorze 2a, w którym R2 i R3 oznaczają niezależnie atom wodoru lub grupę alkoksylową o 1 - 3 atomach węgla w warunkach kwaśnej katalizy, z jednoczesnym usuwaniem metanolu, wytwarzając pochodną oksazolową o wzorze 3, gdzie R, R1, R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie, który hydrolizuje się przy pomocy zasady i zakwasza w celu wytworzenia kwasu karboksylowego o wzorze 4, w którym R, R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie, po czym łączy się związek 4 ze związkiem 5 przez zastosowanie dicykloheksylodikarbodiimidu (DCC) z DMAP uzyskując związek 6, w którym R, R2 i R3 mają wyżej podane znaczenie, następnie usuwa się grupy zabezpieczające uzyskując związek o wzorze 7, gdzie R ma wyżej podane znaczenie, który benzoiluje się w pozycji 2', jedną ze znanych metod, korzystnie z zastosowaniem mieszaniny chlorek benzoilu, trójetyloamina, wodorowęglan sodu w chlorku metylenu, do wytworzenia amidowej olefiny o wzorze 8, z której na drodze oksydatywnego rozszczepienia przy pomocy ozonu wytwarza się związek 9, który przekształca się do związku 1 poprzez uwolnienie grupy aminowej z amidu w reakcji z ortofenylenodiaminąw obecności kwasu i migrację grupy benzoilowej z pozycji 2' na uwolnioną grupę aminową na pozycji 3'.where R is hydrogen or methyl and R1 is lower alkyl, preferably with 1 to 3 carbon atoms, is cyclized in an inert organic solvent with an activated benzaldehyde dimethyl acetal of formula IIa, where R2 and R3 are independently hydrogen or alkoxy of 1 - 3 carbon atoms under acidic catalysis with simultaneous removal of methanol to give an oxazole derivative of formula 3, where R, R1, R2 and R3 are as defined above, which is hydrolyzed with a base and acidified to form the carboxylic acid of Formula 4 wherein R, R2 and R3 are as defined above, and compound 4 is combined with compound 5 by using dicyclohexyldicarbodiimide (DCC) with DMAP to give compound 6 where R, R2 and R3 are as defined above, then removed protecting groups to give a compound of formula VII, wherein R is as defined above, which is benzoylated at the 2 'position, by one of the known methods, preferably by The mixture of benzoyl chloride, triethylamine, sodium bicarbonate in methylene chloride to form the amide olefin of formula 8, from which compound 9 is produced by oxidative cleavage with ozone, which is converted to compound 1 by liberating the amino group from the amide by reaction with orthophenylenediamine in the presence of acid and migration of the benzoyl group from the 2 'position to the liberated 3' amino group.

W sposobie według wynalazku stosuje się a,b-nienasycony amid 2R,3S-fenyloizoseryny o wzorze 2, gdzie R oznacza wodór lub metyl, otrzymany poprzez estryfikację chlorowodorku 2R,3S-fenyloizoseryny alkoholem (R1) w obecności chlorku tionylu. Otrzymany ester reaguje się z chlorkiem kwasu a-alkilo- lub -cynamonowego w środowisku zasadowym lub obojętnym wytwarzając związek 2, który jest substancją krystaliczną.The process of the invention uses a, b-unsaturated 2R, 3S-phenylisoserine amide of formula II, wherein R is hydrogen or methyl, obtained by esterifying 2R, 3S-phenylisoserine hydrochloride with an alcohol (R1) in the presence of thionyl chloride. The resulting ester is reacted with a-alkyl or-cinnamic acid chloride in a basic or neutral environment to produce compound 2, which is a crystalline substance.

W sposobie według wynalazku w reakcji cyklizacji, korzystnie stosuje się toluen. Jako aktywowany benzaldehyd stosuje się benzaldehyd zawierający przynajmniej jedną grupę O-alkilową.In the process according to the invention, toluene is preferably used in the cyclization reaction. As activated benzaldehyde, benzaldehyde containing at least one O-alkyl group is used.

Taki aktywowany benzaldehyd zwiększa gęstość elektronów w pierścieniu aromatycznym, co jest konieczne dla procesu hydrolizy w późniejszym etapie syntezy. Grupa aktywująca benzaldehyd musi zapewnić w procesie hydrolizy estru, wytworzenie trwałego kwasu z całego łańcucha bocznego, który przyłącza się do alkoholu taksanowego. Stwierdzono, że benzaldehydy zawierające grupy alkiloeterowe w pozycji 4 są korzystne, a najkorzystniejsze są benzaldehydy zawierające dwie grupy alkiloeterowe. Grupa metoksylowa jest preferowana, a 3,4-dimetoksybenzaldehyd okazał się najkorzystniejszym aktywnym benzaldehydem.This activated benzaldehyde increases the electron density in the aromatic ring, which is necessary for the hydrolysis process at a later stage of the synthesis. The benzaldehyde activating group must ensure, in the ester hydrolysis process, the formation of a stable acid from the entire side chain that attaches to the taxane alcohol. Benzaldehydes having 4-position alkylether groups have been found to be preferred, with benzaldehydes having two alkylether groups being most preferred. The methoxy group is preferred, and 3,4-dimethoxybenzaldehyde has proved to be the most preferred active benzaldehyde.

Warunki hydrolizy jak i zakwaszania muszą być tak dobrane aby nie spowodować epimeryzacji pozycji 2' w części fenyloizoseryny, ani rozpadu delikatnego oksazolowego produktu pośredniego. Do tego celu korzystne są wodorotlenki metali. Preferowany jest wodorotlenek litu a korzystnymi rozpuszczalnikami są alkohole i THF. Zakwaszenia można dokonać używając różnorodnych kwasów, jednak korzystnymi przy zakwaszeniu do pH ok. 2 są kwas solny lub kwas cytrynowy.The hydrolysis and acidification conditions must be selected so as not to cause epimerization of the 2 'position in the phenylisoserine portion, nor breakdown of the delicate oxazole intermediate. Metal hydroxides are preferred for this purpose. Lithium hydroxide is preferred, and the preferred solvents are alcohols and THF. Acidification can be done using a variety of acids, but hydrochloric acid or citric acid are preferred when acidifying to a pH of about 2.

PL 193 190 B1PL 193 190 B1

10-Deacetylobakatinę III otrzymuje się z igieł cisa europejskiego Taxus baccata jako odnawialnego źródła. Pozycję 7 tego związku zabezpiecza się jako trójetylosililowy eter. Grupę trójetylosililową przyłącza się różnymi metodami, korzystnie takimi jak pirydyna/TESCI lub DMF/imidazol/TESCI. 7-Trójetylosililo-10-deacetylobaccatin III (7-TES-10-DAB) następnie przekształca się w 7-TES-baccatin (wzór 5) przez acetylowanie grupy hydroksylowej w pozycji 10. Acetylowania korzystnie dokonuje się w roztworze pirydynowym przy pomocy chlorku acetylu, lub przez deprotonowanie alkilolitem i acetylowanie bezwodnikiem octowym. Związek 5 w tak otrzymanej odpowiedniej formie łączy się z pochodną kwasową o wzorze 4.10-Deacetylbaccatine III is obtained from the needles of European yew Taxus baccata as a renewable source. The 7-position of this compound is protected as a triethylsilyl ether. The triethylsilyl group is attached by various methods, preferably such as pyridine / TESCI or DMF / imidazole / TESCI. 7-Triethylsilyl-10-deacetylobaccatin III (7-TES-10-DAB) is then converted to 7-TES-baccatin (Formula 5) by acetylating the hydroxyl group at position 10. Acetylation is preferably done in pyridine solution with acetyl chloride. or by deprotonation with alkyl lithium and acetylation with acetic anhydride. The compound 5 is combined with the acid derivative of formula IV in the appropriate form thus obtained.

Połączenie związków 4 i 5 z wytworzeniem związku 6 osiąga się przez zastosowanie dicykloheksylodikarbodiimidu (DCC) z DMAP. Korzystnymi rozpuszczalnikami są toluen i octan etylu lub rozpuszczalniki aprotonowe. Korzystne temperatury tej reakcji wynoszą od 0° do temperatury wrzenia rozpuszczalnika, jednakże najkorzystniejsza jest temperatura 25°C. Związek 6 wyizolowuje się przy pomocy ekstrakcji. W następnym etapie usuwa się dwie grupy zabezpieczające. Grupę trójetylosililową usuwa się w środowisku kwaśnym wytwarzając związek 7-hydroksy. Jednakże usunięcie oksazolu wymaga wzmiankowanej wcześniej aktywacji (benzaldehydu), jak i dokładnego monitoringu reakcji w celu zapobieżenia tworzenia się produktów rozkładu. Korzystnymi rozpuszczalnikami dla przeprowadzenia tej reakcji są alkohole lub THF, a kwaśnymi katalizatorami mocne kwasy takie jak chlorowodór gazowy, kwas solny lub kwas trójfluorooctowy. Korzystną temperaturą reakcji jest temperatura od 0°C do temperatury wrzenia rozpuszczalnika, jednakże preferowanym zakresem temperatur jest 0 - 40°C. W wyniku całkowitego usunięcia grup zabezpieczających otrzymuje się związek 7. Benzoilowania pozycji 2' można dokonać w różnych warunkach. Stwierdzono, że zastosowanie mieszaniny chlorek benzoilu, trójetyloamina, wodorowęglan sodu w chlorku metylenu jest szczególnie korzystne dla tego przekształcenia. Inną metodą dla przeprowadzenia ostatniej reakcji jest użycie DCC i kwasu benzoesowego w toluenie.The combination of compounds 4 and 5 to form compound 6 is achieved by using dicyclohexyldicarbodiimide (DCC) with DMAP. The preferred solvents are toluene and ethyl acetate or aprotic solvents. Preferred temperatures for this reaction are from 0 ° C to the boiling point of the solvent, however, 25 ° C is most preferred. Compound 6 is isolated by extraction. Two protecting groups are removed in the next step. The triethylsilyl group is removed in acidic medium to produce the 7-hydroxy compound. However, the removal of oxazole requires the previously mentioned (benzaldehyde) activation as well as careful monitoring of the reaction to prevent the formation of degradation products. The preferred solvents for this reaction are alcohols or THF, and acid catalysts are strong acids such as hydrogen chloride gas, hydrochloric acid or trifluoroacetic acid. The preferred reaction temperature is from 0 ° C to the reflux temperature of the solvent, however, a preferred temperature range is 0-40 ° C. Complete removal of the protecting groups provides compound 7. Benzoylation of the 2 'position can be accomplished under various conditions. The use of a mixture of benzoyl chloride, triethylamine, sodium bicarbonate in methylene chloride has been found to be particularly advantageous for this conversion. Another method for carrying out the final reaction is to use DCC and benzoic acid in toluene.

Otrzymanie docelowego związku osiąga się na drodze oksydatywnego rozszczepienia amidowej olefiny o wzorze 8 przy pomocy ozonu z wytworzeniem związku 9, który przekształca się do związku 1 poprzez uwolnienie grupy aminowej z amidu w reakcji z ortofenylenodiaminą w obecności kwasu i migrację grupy benzoilowej z pozycji 2' na uwolnioną grupę aminową na pozycji 3'. Oczyszczenia otrzymanego paklitakselu (1) dokonuje się w znany sposób, korzystnie przy pomocy krystalizacji lub chromatografii.Obtaining the target compound is achieved by oxidative cleavage of the amide olefin of formula 8 with ozone to give compound 9, which is converted to compound 1 by liberating the amino group from the amide by reaction with orthophenylenediamine in the presence of an acid and migration of the benzoyl group from 2 'to the liberated amino group at the 3 'position. Purification of the paclitaxel (1) obtained is carried out in a known manner, preferably by crystallization or chromatography.

Poniżej przedstawiono przykład wykonania wynalazku.An exemplary embodiment of the invention is illustrated below.

Przykład.Example.

Etap 1 (otrzymywanie związku 2. R= Me. R1=Me)Step 1 (preparation of compound 2. R = Me. R1 = Me)

W kolbie dwu szyjnej o pojemności 1 l zaopatrzonej w mieszadło mechaniczne umieszczono 100 g kwaśnego węglanu sodu, 400 ml chlorku metylenu i 13 g (56.3 mmol) estru metylowego chlorowodorku fenyloizoseryny i włączono mieszadło. Następnie do kolby dodano porcjami, w temperaturze pokojowej, w ciągu 1 godziny chlorek kwasu metylocynamonowego (ok. 12 g, 67 mmol), aż do momentu, gdy TLC (płytka pokryta żelem krzemionkowym f-my Merck, chlorek metylenu / izopropanol 49/1) wykazywała nadmiar chlorku kwasowego (Rf = 0.16) w mieszaninie. Mieszanie kontynuowano przez następną godzinę, po czym zawartość kolby filtrowano i z przesączu oddestylowano rozpuszczalnik na wyparce. Pozostałość rozpuszczono, na ciepło, w małej ilości chlorku metylenu i roztwór rozcieńczono toluenem. Wytrącony produkt - związek o wzorze 2 (R= Me, R1=Me) (Rf = 0.21) odsączono, przemyto toluenem i suszono na powietrzu. Otrzymano 16.2 g produktu (88%).In a 1 L two-necked flask equipped with a mechanical stirrer, 100 g of sodium bicarbonate, 400 mL of methylene chloride and 13 g (56.3 mmol) of phenylisoserine hydrochloride methyl ester were placed and the stirrer was turned on. Methyl cinnamic acid chloride (ca. 12 g, 67 mmol) was then added to the flask portionwise at room temperature over 1 hour until TLC (Merck silica gel plate, methylene chloride / isopropanol 49/1) was added to the flask. ) showed an excess of acid chloride (Rf = 0.16) in the mixture. Stirring was continued for another hour, then the contents of the flask were filtered and the filtrate's solvent was distilled off by an evaporator. The residue was dissolved warm in a small amount of methylene chloride and the solution was diluted with toluene. The precipitated product - a compound of formula 2 (R = Me, R 1 = Me) (Rf = 0.21) was filtered off, washed with toluene and dried in air. 16.2 g of product (88%) were obtained.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 2.10 (d, J=1.2 Hz, 3H); 3.85 (s, 3H); 4.60 (d, J=2.1 Hz, 1H); 5.65 (dd, J=9.0, 1.7 Hz, 1H); 6.74 (d, J=9.0 Hz, 1H); 7.27-7.34 (m, 5H); 7.35-7.39 (m., 4H); 7.42-7.45 (m., 2H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 2.10 (d, J = 1.2 Hz, 3H); 3.85 (s. 3H); 4.60 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 5.65 (dd, J = 9.0, 1.7 Hz, 1H); 6.74 (d, J = 9.0 Hz, 1H); 7.27-7. 34 (m, 5H); 7.35-7.39 (m, 4H); 7.42-7.45 (m, 2H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) 6: 14.27; 53.23; 54.80; 73.22; 126.94; 127.94; 128.34; 128.75; 129.36; 131.63; 134.52; 135.90; 138.82; 168.96; 173.43. ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) 6: 14.27; 53.23; 54.80; 73.22; 126.94; 127.94; 128.34; 128.75; 129.36; 131.63; 134.52; 135.90; 138.82; 168.96; 173.43.

t.t. =162-164°Cmp = 162-164 ° C

Etap 2 (otrzymywanie związku 3. R=Me. R1=Me. R2=OMe. R3= OMe)Step 2 (Preparation of Compound 3. R = Me. R1 = Me. R2 = OMe. R3 = OMe)

W kolbie kulistej o pojemności 500 ml, zaopatrzonej w propeler magnetyczny i nasadkę destylacyjną z zamontowaną chłodnicę prostą umieszczono 12g (56.6 mmol) acetalu dwumetylowego-3,4-dimetoksybenzaldehydu, 17 g (50.1mmol) amidu metylocynamonowego 2 (R= Me, R1=Me)i 220 ml toluenu. Włączono mieszadło magnetyczne i roztwór ogrzano do wrzenia. Z mieszaniny oddestylowano 20 ml rozpuszczalnika. Następnie mieszaninę ochłodzono, dodano katalityczną ilość kwasu p-toluenosulfonowego (100 mg) i ponownie ogrzano do wrzenia oddestylowując powoli toluen (ok. 1 ml/min.). Ogrzewanie prowadzono aż do zaniku substratu wg TLC (ok. 1 godz.). Następnie mieszaPL 193 190 B1 ninę ochłodzono i przemyto 50 ml 10% wodnego roztworu węglanu sodu. Warstwę organiczną suszono siarczanem magnezu i oddestylowano rozpuszczalnik na wyparce. Oleistą pozostałość zalano 100 ml metanolu i odsączono wytrącone kryształy. Otrzymano 15.8 związku o wzorze 3 (R=Me, R1= Me, R2=OMe, R3=OMe) (65%), Rf = 0.14 (heksan/ chlorek metylenu/ eter etylowy 9/9/2).12 g (56.6 mmol) of dimethyl acetal-3,4-dimethoxybenzaldehyde, 17 g (50.1 mmol) of methyl cinnamamide 2 (R = Me, R1 = Me) and 220 ml of toluene. The magnetic stirrer was turned on and the solution was heated to reflux. 20 ml of the solvent was distilled off from the mixture. Then the mixture was cooled, a catalytic amount of p-toluenesulfonic acid (100 mg) was added and it was heated again to the boil while slowly distilling off the toluene (ca. 1 ml / min). Heating was carried out until the substrate disappeared according to TLC (approx. 1 hour). The mixture was then cooled and washed with 50 ml of 10% aqueous sodium carbonate solution. The organic layer was dried with magnesium sulfate and the solvent was distilled off the evaporator. The oily residue is taken up in 100 ml of methanol and the precipitated crystals are filtered off. 15.8 of the compound of formula 3 were obtained (R = Me, R 1 = Me, R 2 = OMe, R 3 = OMe) (65%), Rf = 0.14 (hexane / methylene chloride / ethyl ether 9/9/2).

¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 1.88 (s, 3H); 3.67 (s, 3H); 3.86 (s, 3H); 3.88 (s, 3H); 4.97 (s, 1H); 5.63 (s, 1H); 6.40 (d, J=1.2 Hz, 1H); 6.79 (s, 1H); 6.82 (d, J=8.3 Hz, 1H); 6.90-7.09 (m, 4H); 7.20-7.44 (m., 7H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 1.88 (s, 3H); 3.67 (s, 3H); 3.86 (s. 3H); 3.88 (s. 3H); 4.97 (s. 1H); 5.63 (s. 1H); 6.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H); 6.79 (s. 1H); 6.82 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 6.90-7.09 (m, 4H); 7.20-7.44 (m, 7H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) d: 15.44; 52.74; 55.65; 55.92; 64.08; 81.36; 91.61; 110.49; 110.68; 120.46; 127.62; 128.11; 128.22; 128.71; 128.96; 130.29; 131.23; 133.06; 135.35; 139.09; 148.84; 149.45; 170.57; 173.54. ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) d: 15.44; 52.74; 55.65; 55.92; 64.08; 81.36; 91.61; 110.49; 110.68; 120.46; 127.62; 128.11; 128.22; 128.71; 128.96; 130.29; 131.23; 133.06; 135.35; 139.09; 148.84; 149.45; 170.57; 173.54.

t.t. = 131-133°Cmp = 131-133 ° C

Związek 3 (R=Me, R1=Me, R2=OMe, R3=H) ¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 1.88 (bs, 3H); 3.82 (s, 3H); 3.85 (s, 3H); 4.90 (d, J=2.2 Hz, 1H); 5.56 (d, J=1.9 Hz, 1H); 6.40 (d, J=1.4 Hz, 1H); 6.81 (s, 1H); 6.88 (m, 2H); 6.95 (m, 2H); 7.19-7.45 (m, 10 H).Compound 3 (R = Me, R 1 = Me, R 2 = OMe, R 3 = H) ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 1.88 (bs, 3H); 3.82 (s. 3H); 3.85 (s. 3H); 4.90 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 5.56 (d, J = 1.9 Hz, 1H); 6.40 (d, J = 1.4 Hz, 1H); 6.81 (s. 1H); 6.88 (m, 2H); 6.95 (m, 2H); 7.19-7.45 (m, 10H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) d: 15 41; 52.72; 55.29; 64.44; 81.90; 91.25; 113.68; 127.31; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) d: 41; 52.72; 55.29; 64.44; 81.90; 91.25; 113.68; 127.31;

127.57; 128.08; 128.20; 128.70; 128.96; 129.96; 131.25; 133.11; 135.40; 139.24; 160.03; 170.53.127.57; 128.08; 128.20; 128.70; 128.96; 129.96; 131.25; 133.11; 135.40; 139.24; 160.03; 170.53.

Etap 3 (otrzymywanie związku 4. R=Me. R2= OMe. R3=OMe)Step 3 (Preparation of Compound 4. R = Me. R2 = OMe. R3 = OMe)

W kolbie kulistej o pojemności 1 l umieszczono 15.6 g estru o wzorze 3 (R=Me, R1=Me, R2=OMe, R3=OMe) (32 mmol) i 100 ml metanolu. Do mieszanej zawiesiny wkroplono w ciągu 1 godziny w temperaturze pokojowej 37 ml 1N (37 mmol) wodnego roztworu NaOH. Mieszanie kontynuowano aż do zaniku substratu wg TLC. Następnie do kolby wlano 375 ml 0.1 N HCI (37.5 mmol) i mieszaninę ekstrahowano chlorkiem metylenu (w przypadku utworzenia emulsji dodawano trochę kwasu solnego). Warstwę organiczną przemyto wodą i wysuszono siarczanem magnezu. Rozpuszczalnik oddestylowano na wyparce i surowy produkt - związek o wzorze 4 (R=Me, R2=OMe, R3=OMe) użyto w całości do następnej reakcji. Wydajność ilościowa.15.6 g of the ester of formula 3 (R = Me, R 1 = Me, R 2 = OMe, R 3 = OMe) (32 mmol) and 100 ml of methanol were placed in a 1 L round bottom flask. To the stirred suspension was added dropwise 37 ml of a 1N (37 mmol) aqueous NaOH solution over 1 hour at room temperature. Stirring was continued until no starting material was found by TLC. Then 375 mL of 0.1 N HCl (37.5 mmol) was poured into the flask and the mixture was extracted with methylene chloride (some hydrochloric acid was added if an emulsion was formed). The organic layer was washed with water and dried with magnesium sulfate. The solvent was distilled off on an evaporator and the crude product compound of formula 4 (R = Me, R2 = OMe, R3 = OMe) was used in full for the next reaction. Quantitative yield.

Etap 4 (otrzymywanie związku 6. R=Me. R2=OMe. R3=OMe)Step 4 (Preparation of Compound 6. R = Me. R2 = OMe. R3 = OMe)

W kolbie kulistej o pojemności 1 l, zaopatrzonej w propeler magnetyczny umieszczono cały produkt o wzorze 4 (R=Me, R2=OMe, R3=OMe) z poprzedniej reakcji (ok. 32 mmol), 18.8 g (27 mmol) sililowanego bakatynu o wzorze 5, 570 ml toluenu, 10 g (49 mmol) DCC i 1.26 g (10 mmol) DMAP. Zawartość kolby mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin a następnie odsączono nierozpuszczalne składniki mieszaniny. Z przesączu oddestylowano rozpuszczalnik na wyparce a pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym 230-400 (600 g, CH2CI2/eter 6%). Otrzymano 28 g związku o wzorze 6 (R=Me, R2=OMe, R3= OMe) (addukt A) (90%).In a 1 L round bottom flask equipped with a magnetic propeler, all the product of formula 4 (R = Me, R2 = OMe, R3 = OMe) from the previous reaction (approx. 32 mmol), 18.8 g (27 mmol) of silylated baccatin with for formula 5, 570 ml of toluene, 10 g (49 mmol) of DCC and 1.26 g (10 mmol) of DMAP. The contents of the flask were stirred at room temperature for 15 hours, and then the insoluble components of the mixture were filtered off. The filtrate was distilled off with an evaporator and the residue was chromatographed on silica gel 230-400 (600 g, CH 2 Cl 2 / ether 6%). 28 g of the compound of formula 6 (R = Me, R2 = OMe, R3 = OMe) (adduct A) (90%) were obtained.

¹H NMR (500 MHz, CDCl3) d: 0.51-0.61 (m, 6H, część AB układu ABX3); 0.92 (t, J=8.0 Hz, 9H, część X układu ABX3); 1.23 (s, 3H); 1.25 (s, 3H); 1.68 (s, 3H); 1.74 (s, 1H); 1.84-1.91 (m., 4H); 2.05 (s, 3H); 2.13 (d, J=1.2 Hz, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.25-2.31 (m., 2H); 2.35 (s, 1H); 2.50 (ddd, J=14.4, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.71 (s, 3H); 3.84 (d, J=7.0 Hz, 1H); 3.91 (s, 3H); 3.96 (d, J=11.9 Hz, 1H); 4.14 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4.31 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4.48 (dd, J=10.4, 6.7 Hz, 1H); 4.88 (dd, J=7.8, 1.2 Hz, 1H); 4.99 (s, 1H); 5.68 (d, J=7.0 Hz, 1H); 5.73 (s, 1H); 6.32 (td, J=9.1, 1.1 Hz, 1H); 6.40 (d, J=1.1 Hz, 1H); 6.47 (s, 1H); 6.79 (s, 1H); 6.86 (d, J=8.3 Hz, 1H); 6.93-7.10 (m., 4H); 7.13-7.28 (m., 6H); 7.34-7.49 (m., 6H); 7.60 (tt, J=7.4, 1.2 Hz, 1H); 8.04-8.08 (m, 2H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl3) d: 0.51-0.61 (m, 6H, AB part of ABX3); 0.92 (t, J = 8.0 Hz, 9H, part X of ABX3 system); 1.23 (s. 3H); 1.25 (s. 3H); 1.68 (s. 3H); 1.74 (s. 1H); 1.84-1.91 (m, 4H); 2.05 (s, 3H); 2.13 (d, J = 1.2 Hz, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.25-2. 31 (m, 2H); 2.35 (s. 1H); 2.50 (ddd, J = 14.4, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.71 (s. 3H); 3.84 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 3.91 (s. 3H); 3.96 (d, J = 11.9 Hz, 1H); 4.14 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 4.31 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 4.48 (dd, J = 10.4, 6.7 Hz, 1H); 4.88 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H); 4.99 (s. 1H); 5.68 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 5.73 (s. 1H); 6.32 (td, J = 9.1, 1.1 Hz, 1H); 6.40 (d, J = 1.1 Hz, 1H); 6.47 (s. 1H); 6.79 (s. 1H); 6.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 6.93-7.10 (m, 4H); 7.13-7.28 (m, 6H); 7.34-7.49 (m, 6H); 7.60 (mp, J = 7.4, 1.2 Hz, 1H); 8.04-8.08 (m, 2H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) d: 5.29; 6.70; 10.02; 14.64; 15.45; 20.83; 21.00; 21.42; 22.03; 26.61; 35.43; 37.20; 43.30; 46.81; 55.66; 55.96; 56.01; 56.17; 58.52; 71.59; 72.24; 74.87; 74.97; 76.48; 78.97; 80.93; 84.18; 110.53; 110.81; 120.22; 125.28; 127.62; 127.66; 128.35; 128.62; 128.89; 128.96; 129.01; 129.22; 130.06; 131.58; 132.94; 133.70; 134.17; 135.29; 139.63; 149.00; 149.57; 167.01; 169.11; 169.92;170.00; 190.85; 201.64. ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) d: 5.29; 6.70; 10.02; 14.64; 15.45; 20.83; 21.00; 21.42; 22.03; 26.61; 35.43; 37.20; 43.30; 46.81; 55.66; 55.96; 56.01; 56.17; 58.52; 71.59; 72.24; 74.87; 74.97; 76.48; 78.97; 80.93; 84.18; 110.53; 110.81; 120.22; 125.28; 127.62; 127.66; 128.35; 128.62; 128.89; 128.96; 129.01; 129.22; 130.06; 131.58; 132.94; 133.70; 134.17; 135.29; 139.63; 149.00; 149.57; 167.01; 169.11; 169.92; 170.00; 190.85; 201.64.

olejOil

[a]D = -51.8 (c=1.8, chloroform)[a] D = -51.8 (c = 1.8, chloroform)

Związek 6 (R=Me, R2=OMe, R3=H) ¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 0.58 (m, 9H, część AB układu ABX3); 0.92 (t, J=8.0 Hz, 6H); 1.23 (s, 3H); 1.24 (s. 3H); 1.59 (s, 1H); 1.68 (s, 3H); 1.73 (s, 1H); 1.85-1.92 (m, 1H); 1.89 (s, 3H); 2.05 (s, 3H); 2.12 (d, J=1.0 Hz, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.24-2.30 (m, 2H); 2.35 (s, 1H); 2.51 (ddd, J=14.4, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.82-3.86 (m, 1H); 3.84 (s, 3H); 4.13 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4.27 (d, J=8.3 Hz, 1H); 4.48 (dd, J=10.5, 6.7 Hz, 1H); 4.89 (dd. J=9.6, 1.5 Hz, 1H); 4.91 (d, J=1.8 Hz, 1H); 5.67 (s, 1H); 5.68 (d, J=5.2 Hz,Compound 6 (R = Me, R2 = OMe, R3 = H) ¹ H NMR (500 MHz, CDCl3) d: 0.58 (m, 9H, AB part of ABX3); 0.92 (t, J = 8.0 Hz, 6H); 1.23 (s. 3H); 1.24 (s. 3H); 1.59 (s. 1H); 1.68 (s. 3H); 1.73 (s. 1H); 1.85-1.92 (m, 1H); 1.89 (s. 3H); 2.05 (s, 3H); 2.12 (d, J = 1.0 Hz, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.24-2.30 (m, 2H); 2.35 (s. 1H); 2.51 (ddd, J = 14.4, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.82-3.86 (m, 1H); 3.84 (s. 3H); 4.13 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 4.27 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 4.48 (dd, J = 10.5, 6.7 Hz, 1H); 4.89 (dd. J = 9.6, 1.5 Hz, 1H); 4.91 (d, J = 1.8 Hz, 1H); 5.67 (s. 1H); 5.68 (d, J = 5.2 Hz,

PL 193 190 B1PL 193 190 B1

1H); 6.31 (td, J=9.1, 1.2 Hz, 1H); 6.41 (d, J=0.8 Hz, 1H); 6.47 s, 1H); 6.82 (s, 1H); 6.90-6.96 (m, 4H); 7.44-7.49 (m, 4H); 7.60 (tt, J=7.4, 1.1 Hz, 1H); 8.04-8.08 (m, 2H).1H); 6.31 (td, J = 9.1, 1.2 Hz, 1H); 6.41 (d, J = 0.8 Hz, 1H); 6.47 s, 1H); 6.82 (s. 1H); 6.90-6.96 (m, 4H); 7.44-7.49 (m, 4H); 7.60 (mp, J = 7.4, 1.1 Hz, 1H); 8.04-8.08 (m, 2H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) d: 5.30; 6.71; 10.03; 14.62; 15.41; 20.83; 21.01; 21.42; 21.98; 26.60; 35.44; 37.18; 43.29; 48.80; 55.34; 58.51; 71.62; 72.22; 74.89; 74.97; 76.47; 79.00; 80.89; 84.22; 113.87; 127.51; 127.61; 128.20; 128.29; 128.61; 128.78; 128.82; 128.96; 129.24; 129.75; 130.06; 131.61; 133.00; 133.69; 134.11; 135.33; 139.26; 139.70; 160.13; 167.07; 169.09; 169.89; 169.96; 201.68. ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) d: 5.30; 6.71; 10.03; 14.62; 15.41; 20.83; 21.01; 21.42; 21.98; 26.60; 35.44; 37.18; 43.29; 48.80; 55.34; 58.51; 71.62; 72.22; 74.89; 74.97; 76.47; 79.00; 80.89; 84.22; 113.87; 127.51; 127.61; 128.20; 128.29; 128.61; 128.78; 128.82; 128.96; 129.24; 129.75; 130.06; 131.61; 133.00; 133.69; 134.11; 135.33; 139.26; 139.70; 160.13; 167.07; 169.09; 169.89; 169.96; 201.68.

Etap 5 (otrzymywanie związku 7. R=Me)Step 5 (preparation of compound 7. R = Me)

Do roztworu adduktu A o wzorze 6 (R=Me, R2=OMe, R3= OMe) (22g) w tetrahydrofuranie (220 ml) dodano 10% kwas solny (22 ml) i mieszaninę pozostawiono w temperaturze pokojowej. Przebieg reakcji kontrolowano za pomocą TLC (płytki f-my Merck pokryte żelem krzemionkowym, benzen/octan etylu 7/3). Po 24 godzinach obserwowano zanik substratu (Rf = 0.65) i pojawienie się produktu desililacji (Rf = 0.46) oraz niewielkiej ilości produktu całkowitej hydrolizy (Rf = 0.33). Reakcję prowadzono aż do momentu zaobserwowania tworzenia się produktówrozkładu (Rf = 0.23 i 0.11) (ok. 72 godziny). Następnie reakcję przerwano przez zneutralizowanie kwasu solnego 10% wodnym roztworem wodorowęglanu sodowego (100 ml) i z mieszaniny oddestylowano tetrahydrofuran na wyparce. Do pozostałości dodano wodę (200 ml) i ekstrahowano chlorkiem metylenu (3 x 200 ml). Ekstrakt suszono siarczanem magnezu i usunięto rozpuszczalnik na wyparce. Pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym f-my Merck o granulacji 230 -400 Mesh (800 g, chlorek metylenu / izopropanol 49/1). Otrzymano produkt desililacji (5 g) i właściwy produkt hydrolizy (12 g). Produkt desililacji rozpuszczono w tetrahydrofuranie (50 ml) i do roztworu dodano 10% kwas solny (5 ml). Po 72 godzinach reakcję przerwano przez zneutralizowanie kwasu solnego wodorowęglanem sodu (25 ml) i z mieszaniny usunięto tetrahydrofuran na wyparce. Do pozostałości dodano wodę (50ml) i ekstrahowano chlorkiem metylenu (3 x 50 ml). Ekstrakt suszono siarczanem magnezu i usunięto rozpuszczalnik na wyparce. Pozostałość chromatografowano na żelu krzemionkowym f-my Merck o granulacji 230-400 Mesh (200g, chlorek metylenu/izopropanol 49/1). Otrzymano dodatkową porcję właściwego produktu hydrolizy (2.5g) o wzorze 7 (R=Me). Całkowita wydajność reakcji wynosiła 84%.To a solution of adduct A of formula 6 (R = Me, R2 = OMe, R3 = OMe) (22 g) in tetrahydrofuran (220 ml) was added 10% hydrochloric acid (22 ml) and the mixture was left at room temperature. The course of the reaction was monitored by TLC (Merck plates coated with silica gel, benzene / ethyl acetate 7/3). After 24 hours, disappearance of the substrate (Rf = 0.65) and the appearance of a desilylation product (Rf = 0.46) and a small amount of complete hydrolysis product (Rf = 0.33). The reaction was carried out until the formation of decomposition products was observed (Rf = 0.23 and 0.11) (approx. 72 hours). The reaction was then quenched by neutralizing hydrochloric acid with 10% aqueous sodium bicarbonate (100 ml) and tetrahydrofuran was distilled off the mixture by evaporation. Water (200 ml) was added to the residue, and extraction was carried out with methylene chloride (3 x 200 ml). The extract was dried with magnesium sulfate and the solvent was removed in an evaporator. The residue was chromatographed on Merck silica gel, granulation 230-400 Mesh (800 g, methylene chloride / isopropanol 49/1). The desilylation product (5 g) and the actual hydrolysis product (12 g) were obtained. The desilylation product was dissolved in tetrahydrofuran (50 ml) and 10% hydrochloric acid (5 ml) was added to the solution. After 72 hours, the reaction was quenched by neutralizing the hydrochloric acid with sodium bicarbonate (25 ml) and the tetrahydrofuran was removed by evaporation. Water (50 ml) was added to the residue and extraction with methylene chloride (3 x 50 ml) was carried out. The extract was dried with magnesium sulfate and the solvent was removed in an evaporator. The residue was chromatographed on Merck silica gel, granulation 230-400 Mesh (200 g, methylene chloride / isopropanol 49/1). An additional aliquot of the proper hydrolysis product (2.5 g) of formula 7 (R = Me) was obtained. The overall yield of the reaction was 84%.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 1.15 (s, 3H); 1.26 (s, 3H); 1.68 (s, 3H); 1.81 (d, J=1.3 Hz, 3H); 1.88 (ddd, J=14.6, 11.0, 2.3 Hz, 1H); 2.07 (d, J=1.4 Hz, 3H); 2.24 (s, 3H); 2.28 (dd, J=15.5, 9.0 Hz, 1H); 2.34 (dd, J=15.5, 9.0 Hz, 1H); 2.38 (s, 3H); 2.46 (d, J=3.9 Hz, 1H); 2.54 (ddd, J=14.8, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.57 (d, J=5.3 Hz, 1H); 3.80 (d, J=7.0 Hz, 1H); 4.19 (dd, J=8.4, 0.8 Hz, 1H); 4.29 (d, J=8.4 Hz, 1H); 4.40 (m., 1H); 4.75 (dd, J=5.2, 2.9 Hz, 1H); 5.67 (d, J=7.1 Hz, 1H); 5.70 (dd, J=8.8, 2.7 Hz, 1H); 6.24 (td, J=8.9, 1.4 Hz, 1H); 6.28 (s, 1H); 7.24-7.37 (m., 6H); 7.40-7.75 (m., 6H); 7.60 (tt, J=7.4, 1.3 Hz, 1H); 8.11-8.15 (m., 2H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 1.15 (s, 3H); 1.26 (s. 3H); 1.68 (s. 3H); 1.81 (d, J = 1.3 Hz, 3H); 1.88 (ddd, J = 14.6, 11.0, 2.3 Hz, 1H); 2.07 (d, J = 1.4 Hz, 3H); 2.24 (s, 3H); 2.28 (dd, J = 15.5, 9.0 Hz, 1H); 2.34 (dd, J = 15.5,90 Hz, 1H); 2.38 (s. 3H); 2.46 (d, J = 3.9 Hz, 1H); 2.54 (ddd, J = 14.8, 9.7, 6.7 Hz, 1H); 3.57 (d, J = 5.3 Hz, 1H); 3.80 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 4.19 (dd, J = 8.4, 0.8 Hz, 1H); 4.29 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 4.40 (m, 1H); 4.75 (dd, J = 5.2, 2.9 Hz, 1H); 5.67 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 5.70 (dd, J = 8.8, 2.7 Hz, 1H); 6.24 (td, J = 8.9,1.4 Hz, 1H); 6.28 (s. 1H); 7.24-7.37 (m, 6H); 7.40-7.75 (m, 6H); 7.60 (mp, J = 7.4, 1.3 Hz, 1H); 8.11-8.15 (m, 2H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) 8: 9.56; 14.27; 14.81; 20.83; 21.84; 22.60; 25.33; 26.87; 35.61; 35.68; 43.19; 45.63; 55.02; 58.62; 72.17; 73.31; 74.97; 75.56; 76.50; 79.09; 81.14; 84.40; 127.00; ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3)?: 9.56; 14.27; 14.81; 20.83; 21.84; 22.60; 25.33; 26.87; 35.61; 35.68; 43.19; 45.63; 55.02; 58.62; 72.17; 73.31; 74.97; 75.56; 76.50; 79.09; 81.14; 84.40; 127.00;

127.04; 128.04; 128.34; 128.70; 129.01; 129.14; 129.32; 130.22; 131.19; 133.19; 133.72; 134.91; 135.69; 138.05; 142.01; 167.01; 169.14; 170.35; 171.21; 172.74; 203.62.127.04; 128.04; 128.34; 128.70; 129.01; 129.14; 129.32; 130.22; 131.19; 133.19; 133.72; 134.91; 135.69; 138.05; 142.01; 167.01; 169.14; 170.35; 171.21; 172.74; 203.62.

olejOil

[a]D = -39.3 (c=1.2, chloroform)[a] D = -39.3 (c = 1.2, chloroform)

Etap 6 (otrzymywanie związku 8. R=Me)Step 6 (preparation of compound 8. R = Me)

W kolbie dwu szyjnej o pojemności 11 zaopatrzonej w mieszadło mechaniczne i rurkę z chlorkiem wapnia umieszczono 15 g (16.8 mmol) hydroksyamidu o wzorze 7 (R=Me), 600 ml chlorku metylenu, 100 g wodorowęglanu sodu, 8 ml trójetyloaminy i 3g (21 mmol) chlorku benzoilu. Zawartość kolby mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę a następnie do mieszaniny dodano 60 ml metanolu. Po 15 godzinach mieszaninę filtrowano, a z przesączu oddestylowano rozpuszczalnik na wyparce. Suchą pozostałość związku o wzorze 8 (R=Me) użyto do następnej reakcji bez oczyszczania.15 g (16.8 mmol) of hydroxyamide of formula 7 (R = Me), 600 ml of methylene chloride, 100 g of sodium bicarbonate, 8 ml of triethylamine and 3 g of (21) were placed in a 11-neck two-neck flask equipped with a mechanical stirrer and a calcium chloride tube. mmol) of benzoyl chloride. The contents of the flask were stirred at room temperature for 1 hour, and then 60 ml of methanol was added to the mixture. After 15 hours, the mixture was filtered and the filtrate's solvent was distilled off by evaporation. The dry residue of the compound of formula 8 (R = Me) was used for the next reaction without purification.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 1.15 (s. 3H), 1.26 (s. 3H); 1.69 (s. 3H), 1.89 (ddd. J=2.4, 11.1, 14.5 Hz, 1H), 1.97 (d. J=1.2Hz, 3H), 2.10 (d. J=1.4Hz, 3H), 2.16-2.25 (m. 2H), 2.22 (s. 3H), 2.35 (dd. J=9.4, 15.3Hz, 1H), 2.43 (s. 3H), 2.56 (ddd. J=6.6, 9.7, 14.8Hz, 1H), 3.83 (d. J=7.0Hz, 1H), 4.20 (d. J=8.3Hz, 1H), 4.30 (d. J=8.3Hz, 1H), 4.46 (dd. J=6.7, 10.9HZ, 1H), 4.97 (dd. J=2.0, 9.6Hz, 1H), 5.68 (d. J=3.9Hz, 1H), 5.69 (d. J=7.2Hz, 1H), 6.00 (dd. J=3.8, 9.1 Hz, 1H), 6.29 (d. J=9.1Hz, 1H), 6.31 (s. 1H), 6.85 (d. J=9.1Hz, 1H), 7.24-7.63 (m. 14H), 7.99 (dd. J=1.2, 6.5Hz,2H), 8.05 (dd. J=1.2, 6.4Hz, 2H), 8.11 (dd. J=1.4, 8.5Hz, 2H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 1.15 (s. 3H), 1.26 (s. 3H); 1.69 (s. 3H), 1.89 (ddd. J = 2.4, 11.1, 14.5 Hz, 1H), 1.97 (d. J = 1.2Hz, 3H), 2.10 (d. J = 1.4Hz, 3H), 2.16-2.25 (m. 2H), 2.22 (s. 3H), 2.35 (dd. J = 9.4, 15.3Hz, 1H), 2.43 (s. 3H), 2.56 (ddd. J = 6.6, 9.7, 14.8Hz, 1H), 3.83 (d. J = 7.0 Hz, 1H), 4.20 (d. J = 8.3 Hz, 1H), 4.30 (d. J = 8.3 Hz, 1H), 4.46 (dd. J = 6.7, 10.9HZ, 1H), 4.97 (dd. J = 2.0, 9.6Hz, 1H), 5.68 (d. J = 3.9Hz, 1H), 5.69 (d. J = 7.2Hz, 1H), 6.00 (dd. J = 3.8, 9.1 Hz, 1H ), 6.29 (d. J = 9.1 Hz, 1H), 6.31 (s. 1H), 6.85 (d. J = 9.1 Hz, 1H), 7.24-7.63 (m. 14H), 7.99 (d. J = 1.2, 6.5Hz, 2H), 8.05 (dd. J = 1.2, 6.4Hz, 2H), 8.11 (dd. J = 1.4, 8.5Hz, 2H).

IR (CHCI3) v: 3636, 3485, 3282, 1737, 1722, 1615, 1533, 1452, 1376, 1316, 1273, 1240, 1176, 1108, 1070, 1026, 985, 708 cm^-1.IR (CHCl3) v: 3636, 3485, 3282, 1737, 1722, 1615, 1533, 1452, 1376, 1316, 1273, 1240, 1176, 1108, 1070, 1026, 985, 708 cm ^-1 .

PL 193 190 B1PL 193 190 B1

UV (etanol) lmax: 230, 264 nmUV (ethanol) 1max: 230, 264 nm

[a]D = -54.5 (c=3.0, etanol) t.t. = 171-173°C[a] D = -54.5 (c = 3.0, ethanol) mp. = 171-173 ° C

Etap 7 (otrzymywanie związku 9. R=Me)Step 7 (preparation of compound 9. R = Me)

Substrat o wzorze 8 (R=Me) (11 g, 11.02 mmol) rozpuszczono w 500 ml chlorku metylenu (destylowany suchy* 1) w 2 litrowej kolbie trójszyjnej, zaopatrzonej w termometr do pomiaru niskich temperatur, wlot gazu (ozonu) i wylot gazu (nadmiaru ozonu) z odprowadzeniem wężem do wyciągu, oraz mieszadło magnetyczne (propeller teflonowany). Kolbę umieszczono w łaźni (krystalizator szklany) na dobrym mieszadle magnetycznym. Całość schłodzono w acetonie z suchym lodem (aceton wlano do krystalizatora, stanowiącego łaźnię dla kolby z roztworem substratu), mieszając roztwór energicznie, do -70°C. Wtedy zaczęto przepuszczać przez roztwór substratu ozon z generatora przy pomocy bełkotki. Roztwór stopniowo szarzał, różowiał, a następnie zniebieszczał. Ozon przepuszczano przez ok. 45 min. Następnie odłączono wąż generatora ozonu, a przez roztwór przepuszczono tlen (ok. 1 min), po czym ostrożnie dodano siarczek dwumetylu kroplami aż do momentu odbarwienia się niebieskiego roztworu (ok. 1ml), w celu rozłożenia ozonku. Roztwór pozostawiono na noc w temperaturze pokojowej (ok. 16 godz.) i wtedy odparowano rozpuszczalnik na wyparce obrotowej, otrzymując związek o wzorze 9 (R=Me) w postaci ciągliwej bezbarwnej piany (ok. 11 g), której używano do następnej reakcji bez oczyszczania.The substrate of formula 8 (R = Me) (11 g, 11.02 mmol) was dissolved in 500 mL of methylene chloride (dry distilled * 1) in a 2 liter three-necked flask equipped with a low temperature thermometer, gas (ozone) inlet and gas outlet (excess ozone) with a hose discharge, and a magnetic stirrer (Teflon-coated propeller). The flask was placed in a bath (glass crystallizer) on a good magnetic stirrer. It was cooled in acetone with dry ice (acetone was poured into a crystallizer, which was a bath for the flask with the substrate solution), while the solution was stirred vigorously to -70 ° C. Then ozone was bubbled through the substrate solution from the generator. The solution turned gray, pink and then blue. Ozone was passed through for about 45 minutes. Then the ozone generator hose was disconnected and oxygen was bubbled through the solution (approx. 1 min), and then dimethyl sulfide was carefully added dropwise until the blue solution became discolored (approx. 1 ml) in order to decompose the ozone. The solution was allowed to stand overnight at room temperature (approx. 16 h) and the solvent was then evaporated on a rotary evaporator to give the compound of formula 9 (R = Me) as a continuous colorless foam (approx. 11 g) which was used for the next reaction without purification.

¹H NMR (500 MHz, CDCI3) d: 1.12 (s. 3H); 1.23 (s.3H); 1.65 (s.3H); 1.90 (d. J=0.8 Hz, 3H); 1.98-2.05 (m., 2H); 2.21 (s.3H); 2.35 (s. 3H); 2.39 (s. 3H); 2.48-2.59 (m. 2H); 3.78 (d. J=7.1 Hz, 1H); 4.16 (d. J=8.5 Hz, 1H); 4.28 (d, J=8.5 Hz, 1H); 4.42 (dd. J=10.9, 6.6 Hz, 1H); 4.94 (dd. J=9.5, 1.7 Hz, 1H); 5.58 (d. J=4.3 Hz, 1H); 5.65 (d. J=7.2 Hz, 1H); 5.71 (dd. J=9.5, 4.3 Hz, 1H); 6.19 (t. J=9.0 Hz, 1H); 6.27 (s. 1H); 7.28-7.52 (m. 8H); 7.59-7.65 (m. 3H); 8.00 (dd. J=8.4, 1.2 Hz, 2H); 8.10 (dd. J=8.41, 1.2 Hz, 2H). ¹ H NMR (500 MHz, CDCl 3) d: 1.12 (s, 3H); 1.23 (s. 3H); 1.65 (s. 3H); 1.90 (d. J = 0.8 Hz, 3H); 1.98-2. 05 (m, 2H); 2.21 (s. 3H); 2.35 (s. 3H); 2.39 (s. 3H); 2.48-2.59 (m, 2H); 3.78 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 4.16 (d. J = 8.5 Hz, 1H); 4.28 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 4.42 (dd. J = 10.9, 6.6 Hz, 1H); 4.94 (dd. J = 9.5, 1.7 Hz, 1H); 5.58 (d. J = 4.3 Hz, 1H); 5.65 (d, J = 7.2 Hz, 1H); 5.71 (dd. J = 9.5, 4.3 Hz, 1H); 6.19 (t. J = 9.0 Hz, 1H); 6.27 (s. 1H); 7.28-7.52 (m, 8H); 7.59-7.65 (m, 3H); 8.00 (dd. J = 8.4, 1.2 Hz, 2H); 8.10 (dd. J = 8.41, 1.2 Hz, 2H).

¹³C NMR (125 MHz, CDCI3) d: 9.59; 14.79; 20.78; 22.16; 22.53; 24.38; 26.81; 35.39; 35.45; 43.16; 45.55; 53.33; 58.45; 72.01; 72.03; 74.56; 75.16; 75.52; 76.36; 79.36; 81.01; 84.44; 126.75; 128.36; 128.66; 128.73; 128.97; 129.22; 129.91; 130.17; 132.75; 133.71; 134.00; 135.91; 142.74; 159.58; 165.45; 167.04; 167.80; 169.25; 169.65; 171.23; 196.12; 203.74. ¹³ C NMR (125 MHz, CDCl 3) d: 9.59; 14.79; 20.78; 22.16; 22.53; 24.38; 26.81; 35.39; 35.45; 43.16; 45.55; 53.33; 58.45; 72.01; 72.03; 74.56; 75.16; 75.52; 76.36; 79.36; 81.01; 84.44; 126.75; 128.36; 128.66; 128.73; 128.97; 129.22; 129.91; 130.17; 132.75; 133.71; 134.00; 135.91; 142.74; 159.58; 165.45; 167.04; 167.80; 169.25; 169.65; 171.23; 196.12; 203.74.

olejOil

[a]D = -28.9 (c=2.4, chloroform)[a] D = -28.9 (c = 2.4, chloroform)

Etap 8 (otrzymywanie paklitakselu 1)Step 8 (receiving paclitaxel 1)

Substrat o wzorze 9 (R=Me) rozpuszczono w benzenie i zawartość kolby wypłukano argonem. Dodano dwuaminę, kwas p-toluenosulfonowy, uruchomiono mieszadło i zapewniono atmosferę argonu przy pomocy balonika z argonem. Całość mieszano w temperaturze pokojowej (18 - 25°C); Przebieg reakcji kontrolowano TLC (Płytki Merck No. 5554 i No. 5559) uwidaczniając plamy przy pomocy lampy DV (254 nm) lub spryskaniem roztworu aldehydu anyżowego. Reakcja przebiegała bardzo powoli, przez okres 30 - 45 dni (im dłużej tym lepiej). Reakcję kontrolowano także przy pomocy HPLC w układzie 65% acetonitrylu, 30% wody i 5% metanolu.The substrate of formula 9 (R = Me) was dissolved in benzene and the contents of the flask flushed with argon. Diamine, p-toluenesulfonic acid were added, the stirrer was turned on and an argon atmosphere was provided with an argon balloon. The mixture was stirred at room temperature (18-25 ° C); The course of the reaction was monitored by TLC (Merck Plates No. 5554 and No. 5559) by visualizing the spots using a DV lamp (254 nm) or by spraying an anisaldehyde solution. The reaction was very slow, over a period of 30-45 days (the longer the better). The reaction was also monitored by HPLC in 65% acetonitrile, 30% water and 5% methanol.

Przerób produktu reakcji.Work-up of the reaction product.

Z roztworu usunięto propeler magnetyczny i zatężono go do 30% objętości benzenu na wyparce obrotowej w 40°C pod próżnią. Do pozostałości dodano chlorek metylenu (~ 500 ml) i roztwór przeniesiono do rozdzielacza. Aminę usunięto jednorazowym przemyciem warstwy organicznej 10% kwasem solnym z dodatkiem potłuczonego lodu. Roztwór organiczny przemyto dwukrotnie nasyconą solanką i osuszono siarczanem magnezu. Po odsączeniu siarczanu magnezu roztwór organiczny odparowano na wyparce w próżni pompy olejowej, otrzymując brunatną pozostałość zawierającą paklitaksel (w/g analizy HPLC 70 -80%).The magnetic propeller was removed from the solution and concentrated to 30% by volume of benzene on a rotary evaporator at 40 ° C under vacuum. Methylene chloride (~ 500 mL) was added to the residue and the solution was transferred to a separatory funnel. The amine was removed by washing the organic layer once with 10% hydrochloric acid plus crushed ice. The organic solution was washed with saturated brine twice and dried with magnesium sulfate. After the magnesium sulfate was filtered off, the organic solution was evaporated in an oil pump vacuum, yielding a brown residue containing paclitaxel (by HPLC analysis 70-80%).

Izolowanie Paklitakselu.Isolation of Paclitaxel.

Surową mieszaninę poreakcyjną (6 g) rozpuszczono w 500 ml rozpuszczalnika składającego się z 20% wody w metanolu, do roztworu dodano 6 g węgla aktywnego (Merck) i roztwór zagrzano prawie do wrzenia (2 min.). Całość przefiltrowano przez ubity na lejku Schotta celit i przemyto dwoma porcjami (50 ml) gorącym roztworem 5% wody w metanolu. Tak otrzymany roztwór po odbarwieniu węglem był jasno żółty. Węgiel i celit przemyto 250 ml chlorku metylenu; rozpuszczalnik odparowano, otrzymując ciemno brązową pozostałość (0.8 g) zawierającą trochę taksolu. Odbarwiony roztwór metanolowo wodny odparowano częściowo na wyparce w 35°C, otrzymany mętny roztwór po usunięciu większej części metanolu wyekstrahowano chlorkiem metylenu. Ekstrakt odparowano w próżni otrzymując 5.8 g produktu zawierającego 73% paklitakselu (HPLC). Produkt ten czyszczono następnie naThe crude reaction mixture (6 g) was dissolved in 500 ml of a solvent consisting of 20% water in methanol, 6 g of activated carbon (Merck) was added to the solution and the solution was heated to near reflux (2 min.). It was filtered through a Schott funnel and washed with two portions (50 ml) of hot 5% water in methanol. The solution thus obtained was light yellow after decolorization with charcoal. The coal and celite were washed with 250 ml of methylene chloride; the solvent was evaporated to give a dark brown residue (0.8 g) containing some taxol. The discolored methanol-aqueous solution was partially evaporated on an evaporator at 35 ° C, the resulting cloudy solution, after removing most of the methanol, was extracted with methylene chloride. The extract was evaporated in vacuo to give 5.8 g of product containing 73% paclitaxel (HPLC). This product was then cleaned on

PL 193 190 B1 kolumnie chromatograficznej przy użyciu żelu krzemionkowego (60 g), który zawieszono w heksanie z dodatkiem trójetyloaminy (200 ml heksanu 0.1 ml N(Et)3). Na kolumnę naniesiono produkt rozpuszczony w układzie 10% acetonu w benzenie. Wyeluowano czysty paklitaksel w układzie gradientowym 20% - 30% acetonu w heksanie, otrzymując 4.1 g czystego paklitakselu (95% HPLC) z 0% popiołu. Chromatografię monitorowano przy pomocy TLC.Column chromatography using silica gel (60 g) which was suspended in hexane with the addition of triethylamine (200 ml hexane 0.1 ml N (Et) 3). The product dissolved in 10% acetone in benzene was applied to the column. Pure paclitaxel was eluted over a 20% - 30% acetone in hexane gradient to give 4.1 g of pure paclitaxel (95% HPLC) with 0% ash. The chromatography was monitored by TLC.

a) w fazach normalnych płytki Merck 5554, 30% acetonu w benzenie.a) in normal phases Merck 5554 plaques, 30% acetone in benzene.

b) w fazach odwróconych płytki Merck 5559, acetnitryl/woda/metanol 65/30/5.b) Reverse phase Merck 5559 plates, acetnitrile / water / methanol 65/30/5.

Dane spektroskopowe otrzymanego paklitakselu.Spectroscopic data of the obtained paclitaxel.

¹H NMR (CDCI3, 500 MHz) d: 1.14 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.87 (m, 1H), 1.95 (s, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.29 (dd, J = 15.5, 8.9 Hz, 1H), 2.35 (dd, J = 15.5, 8.9 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.53 (ddd, J = 14.6, 9.7, 6.7 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J =8.4 Hz, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.79 (br.s, 1H), 4.94 (dd, J = 9.5, 2.0 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.78 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.23 (td, J = 8.9, 1.1 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 7.02 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.33-7.43 (m, 5H), 7.46-7.54 (m, 5H), 7.61 (tt, J= 7.4, 1.3 Hz, 1H), 7.73 (m, 2H), 8.13 (m, 2H); ¹ H NMR (CDCl 3, 500 MHz) d: 1.14 (s, 3H), 1.23 (s, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.87 (m, 1H), 1.95 (s, 1H), 2.23 (s, 3H), 2.29 (dd, J = 15.5, 8.9 Hz, 1H), 2.35 (dd, J = 15.5, 8.9 Hz, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.53 (ddd, J = 14.6, 9.7, 6.7 Hz, 1H), 3.64 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.79 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 4.20 (d , J = 8.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.39 (m, 1H), 4.79 (br s, 1H), 4.94 (dd, J = 9.5, 2.0 Hz, 1H) , 5.67 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 5.78 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1H), 6.23 (td, J = 8.9, 1.1 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 7.02 ( d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.33-7.43 (m, 5H), 7.46-7.54 (m, 5H), 7.61 (tt, J = 7.4, 1.3 Hz, 1H), 7.73 (m, 2H), 8.13 (m, 2H);

¹³C NMR (CDCI3, 50 MHz) d: 9.55, 14.75, 20.81, 21.79, 22.54, 26.76, 35.62, 43.12, 45.62, 55.08, 58.48, 72.04, 72.22, 73.13, 74.90, 75.53, 78.83, 81.08, 84.34, 126.98, 127.02, 128.26, 128.63, 128.93, 129.15, 130.13, 131.92, 133.11, 133.57, 133.64, 137.94, 141.84, 166.84, 167.23, 171.20, 1.72.68, 203.58. ¹³ C NMR (CDCl3, 50 MHz) d: 9.55, 14.75, 20.81, 21.79, 22.54, 26.76, 35.62, 43.12, 45.62, 55.08, 58.48, 72.04, 72.22, 73.13, 74.90, 75.53, 78.83, 81.08, 84.34, 126.98 , 127.02, 128.26, 128.63, 128.93, 129.15, 130.13, 131.92, 133.11, 133.57, 133.64, 137.94, 141.84, 166.84, 167.23, 171.20, 1.72.68, 203.58.

t.t. = 222-224°Cmp = 222-224 ° C

[a]D = 49.72 (C 0.36, EtOH)[a] D = 49.72 (C 0.36, EtOH)

Claims

Patent claims

1. The method of producing paclitaxel of formula 1:

PL 193 190 B1, characterized in that the amide of formula 2:

where R is hydrogen or methyl and R1 is lower alkyl.

Preferably with 1-3 carbon atoms, cyclized in an inert organic solvent with an activated benzaldehyde dimethyl acetal of formula 2a, where R2 and R3 are independently hydrogen or an alkoxy group of 1-3 carbon atoms under acidic catalysis conditions, simultaneous removal of methanol to give an oxazole derivative of formula III, where R is as defined above, R1 is short alkyl, preferably of 1-3 carbon atoms, R2 is O-alkyl, preferably of 1-3 carbon atoms, and R3 is O- alkyl, preferably with 1 to 3 carbon atoms, or hydrogen, which is hydrolyzed with a base and acidified to give the carboxylic acid of formula 4 wherein R, R2 and R3 are as defined above, and then compound 4 is combined with compound 5 by using dicyclohexyldicarbodiimide (DCC) with DMAP to prepare compound 6 where R, R2 and R3 are as defined above, then the protecting groups are removed to give a compound of formula 7 where R is the meaning given below, which is benzoylated in the 2 'position, by one of the known methods, preferably using a mixture of benzoyl chloride, triethylamine, sodium bicarbonate in methylene chloride, to produce the amide olefin of formula 8, from which by oxidative cleavage with ozone, compound 9, which rearranges to compound 1 in the presence of o-phenylenediamine and p-toluenesulfonic acid.

2. The method according to p. 2. The process of claim 1, characterized in that the a, b-unsaturated 2R, 3S-phenylisoserine amide of formula 2 is used, where R is hydrogen or methyl, obtained by esterification of 2R, 3S-phenylisoserine hydrochloride with the R1-OH alcohol, where R1 is as defined above, in the presence of thionyl chloride, and the ester formed is reacted with? -methylcinnamic acid chloride in an alkaline or neutral environment to produce crystalline compound 2.

3. The method according to p. The process of claim 1, characterized in that toluene is preferably used in the cyclization reaction.

4. The method according to p. The process of claim 1, wherein the activated benzaldehyde is benzaldehyde containing at least one O-alkyl group in which the alkyl is lower alkyl, preferably containing 1-3 carbon atoms.

5. A compound of formula 3, where R is methyl or hydrogen, R1 is lower alkyl, preferably of 1-3 carbon atoms, R2 is -O-alkyl and R3 is -O-alkyl or hydrogen, where alkyl is lower alkyl, preferably containing 1-3 carbon atoms.

PL 193 190 B1

6. The compound according to p. 5. The process according to claim 5, characterized in that in formula 3, R is methyl, R1 is methyl or ethyl, R2 is OMe and R3 is OMe or hydrogen.

7. A compound of formula 6, where R is lower alkyl or hydrogen, R2 is -O-alkyl and R3 is -O-alkyl or hydrogen, where alkyl is lower alkyl, preferably containing 1-3 carbon atoms.

PL 193 190 B1

8. A compound of formula 4 where R is methyl or hydrogen, R2 -O-alkyl where alkyl is lower alkyl), R3 is O-alkyl (lower alkyl) or hydrogen.

9. A compound of Formula 7 wherein R is methyl.

PL 193 190 B1

10. A compound of Formula 8 wherein R is methyl.