PL195067B1

PL195067B1 - Method of receiving 19-norandrost-4-ene-3,17-dione

Info

Publication number: PL195067B1
Application number: PL353601A
Authority: PL
Inventors: Ewa Brzezowska; Tadeusz Kowalski
Original assignee: Wrocław University Of Environmental And Life Sciences
Priority date: 2002-04-24
Filing date: 2002-04-24
Publication date: 2007-08-31
Also published as: PL353601A1

Abstract

Sposób otrzymywania 19-norandrost-4- -en-3,17-dionu o wzorze 2, drogą mikrobiologiczną, znamienny tym, że substrat, którym jest 19-nortestosteron, o wzorze 1, poddaje się biotransformacji z wykorzystaniem kultury szczepu z gatunku Sclerophoma pythiophila.A method for obtaining 19-norandrost-4-ene-3,17-dione of formula 2 by microbiological means, characterized in that the substrate, which is 19-nortestosterone of formula 1, is subjected to biotransformation using a culture of a strain of the Sclerophoma pythiophila species.

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania 19-norandrost-4-en-3,17-dionu, o wzorze 2 przedstawionym na rysunku, na drodze biotransformacji.The subject of the invention is a process for the preparation of 19-norandrost-4-ene-3,17-dione of formula 2 shown in the drawing by biotransformation.

Związek ten wykazuje działanie androgenne i może znaleźć zastosowanie w przemyśle farmaceutycznym.This compound has an androgenic effect and can be used in the pharmaceutical industry.

Znane są reakcje utlenienia 17β alkoholu do ketonu, które zachodzą w organizmach żywych (B.A. Cooke, R.J.B. King and van der Molen, Hormones and their Actions, Part I, Elsevier Science Publishers BV, 1988.The oxidation reactions of 17β alcohol to ketone are known, which take place in living organisms (B.A. Cooke, R.J.B. King and van der Molen, Hormones and their Actions, Part I, Elsevier Science Publishers BV, 1988.

Znane są również przekształcenia testosteronu z utworzeniem androstendionu na drodze biotransformacji z wykorzystaniem systemów enzymatycznych drobnoustrojów (Atta-ur-Rahman, M. lqbal Choudghary, Fahim Asif, Afgan Farooq, M. Yaqoob Nat. Prod. Lett, 12(4), ss. 255-261. W tym przypadku otrzymano androstendion z testosteronu, przy czym biotransformację prowadzono przy użyciu kultur drobnoustrojów Curvularia lunata i Pleurotus ostreatus.There are also known transformations of testosterone to form androstenedione by biotransformation using microbial enzyme systems (Atta-ur-Rahman, M. lqbal Choudghary, Fahim Asif, Afgan Farooq, M. Yaqoob Nat. Prod. Lett, 12 (4), pp. 255-261 In this case, androstenedione was obtained from testosterone, and the biotransformation was carried out using cultures of Curvularia lunata and Pleurotus ostreatus.

Znany też jest sposób otrzymywania 19-norandrost-4-en-3,17-diomi z 19-nortestosteromi na drodze chemicznej (John Fried i John A. Edwards Organic Reactions in Steroid Chemistry vol. I, s. 239, 1972).There is also known a method of obtaining 19-norandrost-4-ene-3,17-diomi from 19-nortestosteromi by chemical means (John Fried and John A. Edwards Organic Reactions in Steroid Chemistry vol. I, p. 239, 1972).

Wynalazek dotyczy mikrobiologicznego sposobu wytwarzania 19-norandrost-4-en-3,17-dionu.The invention relates to a microbial process for the preparation of 19-norandrost-4-ene-3,17-dione.

Istota wynalazku polega na tym, że substrat, którym jest 19-nortestosteron, o wzorze 1, poddaje się biotransformacji, w której jako bioreagenta używa się systemu enzymatycznego drobnoustroju Sclerophoma pythiophila.The essence of the invention consists in that the substrate, which is 19-nortestosterone of formula 1, is subjected to a biotransformation in which the enzyme system of the microorganism Sclerophoma pythiophila is used as a bioreactant.

W wyniku działania układu enzymatycznego kultury Sclerophoma pythiophila zachodzi utlenienie 17β alkoholu do ketonu.As a result of the enzyme system of the Sclerophoma pythiophila culture, the alcohol 17β is oxidized to the ketone.

Zaletą wynalazku jest otrzymanie 19-norandrost-4-en-3,17-dionu, jako głównego produktu reakcji, z wydajnością około 93%.An advantage of the invention is to obtain 19-norandrost-4-ene-3,17-dione as the main reaction product with a yield of about 93%.

Przedmiot wynalazku jest bliżej objaśniony w przykładach wykonania.The subject of the invention is explained in more detail in the working examples.

P r z y k ł a d 1. Hodowlę mikroorganizmu Sclerophoma pythiophila prowadzi się, w hodowli wstrząsanej przez okres 6 dni (144 godziny), w kolbie zawierającej 350 cm³ pożywki sporządzonej przez rozpuszczenie 30 g glukozy i 10 g peptonu w 1 dm3 wody. Następnie do narośniętej kultury dodaje się 100 mg, rozpuszczonego w acetonie (ok. 1 cm³), substratu - 19-nortestosteronu (wzór 1). Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 5 dni (120 godzin). Następnie, uzyskany roztwór transformacyjny ekstrahuje się trzykrotnie chlorkiem metylenu, osusza siarczanem magnezu i odparowuje się rozpuszczalnik na wyparce rotacyjnej. Uzyskuje się w ten sposób 96 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie, używając jako eluentu mieszaniny heksan-aceton w stosunku 2:1. Na tej drodze otrzymuje się 93 mg 19-norandrost-4-en-3,17-dionu, z wydajnością około 93%.EXAMPLE 1 Culturing of the microorganism Sclerophoma pythiophila carried out in shaking culture for a period of 6 days (144 hours) in a flask containing 350 cm ^{3 of} culture medium prepared by dissolving 30 g of glucose and 10 g of peptone in 1 dm3 of water. Then, 100 mg of the substrate 19-nortestosterone (formula 1) dissolved in acetone (approx. 1 cm ^{3) is added to the grown culture.} The transformation is carried out under continuous shaking for 5 days (120 hours). Then, the resulting transformation solution was extracted three times with methylene chloride, dried with magnesium sulfate and the solvent was evaporated on a rotary evaporator. This gives 96 mg of crude product which is purified by chromatography using a 2: 1 hexane-acetone mixture as eluent. In this way, 93 mg of 19-norandrost-4-ene-3,17-dione are obtained with a yield of about 93%.

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi:The obtained product is characterized by the following data:

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ^: 5^,79 ⁽C^-4H) 0^,78 ⁽3H s^, C^-18H) ¹ H NMR ^_(CDCl3) ^δ: ^5, 79 ^(C ^- 4H), ⁰ 78 ^(3H, ^s, C ^- 18H)

Temperatura topnienia: 443-445 K.Melting point: 443-445 K.

Skręcalność właściwa [α]₅₄6 = + 139Specific rotation [α] ₅₄ 6 = + 139

P r z y k ł a d 2. Postępuje się analogicznie tak jak w przykładzie 1, z tym że transformację substratu prowadzi się przez 2 dni (48 godzin). Z powodu zbyt krótkiego czasu trwania transformacji uzyskuje się około 84% wydajności.Example 2 The procedure is analogous to that in example 1, except that the transformation of the substrate is carried out for 2 days (48 hours). Due to the too short transformation time, about 84% efficiency is obtained.

P r z y k ł a d 3. Postępuje się analogicznie tak jak w przykładzie 1, z tym że transformację substratu prowadzi się przez 7 dni (168 godzin). Uzyskuje się około 89% wydajności. Uzyskanie mniejszej wydajności, w porównaniu do przykładu 1, tłumaczy się tym, że po 7 dniowej transformacji w mieszaninie poreakcyjnej stwierdza się, oprócz 19-norandrost-4-en-3,17-dionu, obecność niewielkich ilości innych, nowopowstałych związków.Example 3 The procedure is analogous to that of Example 1, except that the transformation of the substrate is carried out for 7 days (168 hours). About 89% efficiency is achieved. The lower yield compared to Example 1 was explained by the fact that, after the 7-day transformation, in addition to 19-norandrost-4-ene-3,17-dione in the reaction mixture, small amounts of other newly formed compounds were found.

Claims

Patent claims

1. The method of obtaining 19-norandrost-4-en-3.17-dione of formula 2 by microbiological method, characterized by the fact that there is a yellow thread, which is a wax 1, ondajn it is a bigtznuófszmncji about the excitement of the gonghunnm.

2. Make up ^with yntrz. 1, with the changed, that the rennery of the provinces is made up of a continual diminution.

3. Way of the defect of the shingle. 1, with the fact that s Óubtat dbaje s ięw il obci 60 d dt 70 mmi d2 20 ds 40d cm0 ołyuunj Kultzy dzsbuguótzgju.