PL195275B1 - Zastosowanie leptyny, białek fuzyjnych leptyny, mutein leptyny, aktywnych fragmentów albo frakcji jednego z powyższych, aktywnych analogów albo pochodnych jednego z powyższych oraz ich soli - Google Patents
Zastosowanie leptyny, białek fuzyjnych leptyny, mutein leptyny, aktywnych fragmentów albo frakcji jednego z powyższych, aktywnych analogów albo pochodnych jednego z powyższych oraz ich soliInfo
- Publication number
- PL195275B1 PL195275B1 PL98336582A PL33658298A PL195275B1 PL 195275 B1 PL195275 B1 PL 195275B1 PL 98336582 A PL98336582 A PL 98336582A PL 33658298 A PL33658298 A PL 33658298A PL 195275 B1 PL195275 B1 PL 195275B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- leptin
- insulin
- cells
- human breast
- cell proliferation
- Prior art date
Links
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 title claims abstract description 103
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 title claims abstract description 97
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 title claims abstract description 97
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 title claims abstract description 96
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 title claims description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title description 31
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title description 3
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 30
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 30
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 30
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 27
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 27
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 20
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 20
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 18
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 16
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 16
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 16
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000008747 mitogenic response Effects 0.000 claims description 6
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 4
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 claims description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 4
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 claims description 2
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 claims 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 28
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 102100031775 Leptin receptor Human genes 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 16
- 102000009433 Insulin Receptor Substrate Proteins Human genes 0.000 description 15
- 101001063890 Mus musculus Leptin Proteins 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 11
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 10
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 9
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 9
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000003235 crystal violet staining Methods 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 102100033067 Growth factor receptor-bound protein 2 Human genes 0.000 description 4
- 101000871017 Homo sapiens Growth factor receptor-bound protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 241000201776 Steno Species 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- -1 DNA or RNA Chemical class 0.000 description 3
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 3
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M N,N,N-Trimethylmethanaminium chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C OKIZCWYLBDKLSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N (4r,4ar,7ar,12bs)-9-methoxy-3-methyl-1,2,4,4a,5,6,7a,13-octahydro-4,12-methanobenzofuro[3,2-e]isoquinoline-7-one;2,3-dihydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)C(O)C(O)C(O)=O.O=C([C@@H]1O2)CC[C@H]3[C@]4([H])N(C)CC[C@]13C1=C2C(OC)=CC=C1C4 OJHZNMVJJKMFGX-RNWHKREASA-N 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NTAZNGWBXRVEDJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N Arg-His Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 BNODVYXZAAXSHW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- NPDLYUOYAGBHFB-WDSKDSINSA-N Asn-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NPDLYUOYAGBHFB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N Asn-Gln Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N Asn-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N Asn-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FBODFHMLALOPHP-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ZYPWIUFLYMQZBS-SRVKXCTJSA-N Asn-Lys-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ZYPWIUFLYMQZBS-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O XAJRHVUUVUPFQL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N Cys-His-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPENUVBHAKRDQR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 208000006402 Ductal Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMNVOTCFQQLEQU-CIUDSAMLSA-N His-Asn-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N OMNVOTCFQQLEQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N Leu-Trp-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O WPIKRJDRQVFRHP-TUSQITKMSA-N 0.000 description 1
- OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N Lys-Asp-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O OVIVOCSURJYCTM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 JMCOUWKXLXDERB-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FRMKIPSIZSFTTE-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N Phe-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O IPVPGAADZXRZSH-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N Pro-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O AIOWVDNPESPXRB-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N Pro-Thr-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZNYIXWOIUFLGO-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N Thr-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O TYVAWPFQYFPSBR-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N Trp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(O)=O)=CNC2=C1 NQIHMZLGCZNZBN-PXNSSMCTSA-N 0.000 description 1
- WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N Tyr-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CGDZGRLRXPNCOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])C(C)C XCTHZFGSVQBHBW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000001621 anti-mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 201000003163 breast adenoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000014101 glucose homeostasis Effects 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 102000044162 human IGF1 Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000035924 thermogenesis Effects 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 108010045269 tryptophyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 108010036320 valylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2264—Obesity-gene products, e.g. leptin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1. Zastosowanie skladnika aktywnego wybranego z grupy obejmujacej leptyne, bialka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyzszych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyzszych i ich sole do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do hamowa- nia proliferacji komórek ludzkiego raka sutka. PL PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie składnika aktywnego wybranego z grupy obejmującej leptynę, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych i ich sole.
Niniejszym ujawnione zostały zastosowania leptyny, tj. wytwarzanej przez adipocyty cytokiny wpływającej na różnorodne komórki i tkanki, oraz jej pochodnych w dziedzinie onkologii.
Leptyna, cytokina pochodząca z adipocytów, która reguluje ciężar ciała, została zidentyfikowana przez pozycyjne klonowanie mysiego genu ob (Zhang i in., 1994) i wykazano, że wpływa na przyjmowanie pożywienia oraz termogenezę (Campfield i in., 1995, Collins i in., 1996, Halaas i in., 1995, Pelleymounter i in., 1995, Weigle i in., 1995). Obecność miejsca wiązania leptyny o wysokim powinowactwie stwierdzono w splocie naczyniowym; klonowanie ekspresyjne cDNA z tej tkanki dostarczyło receptora leptyny (OB-R) (Tartaglia i in., 1995). Znane aktywności leptyny zachodzą za pośrednictwem jej receptora w podwzgórzu.
Niemniej jednak receptory leptyny ulegają również ekspresji w innych narządach, w szczególności w nerkach, płucach i wątrobie (Cioffi i in., 1996, Lee i in., 1996, Tartaglia i in., 1995). Ponadto, różny repertuar wariantów składania receptorów leptyny różniących się domeną cytoplazmatyczną ulega ekspresji u myszy w sposób swoisty wobec tkanki (Lee i in., 1996). Stąd, oprócz kontrolowania przyjmowania pożywienia i temperatury ciała, leptyna może wywierać inne działania fizjologiczne.
Mimo, że leptyna jest wytwarzana w adipocytach, ostatnie ujawnienie korelacji pomiędzy nadmiarem tłuszczu i wysokim poziomem leptyny w surowicy było sprzeczne z obserwacjami, że leptyna zmniejsza przyjmowanie pożywienia i ciężar ciała (Considine i in., 1996, Friedrich i in., 1995, Lonnqvist i in., 1995, Maffei i in., 1995). Ta korelacja i dobrze znane połączenie pomiędzy otyłością i opornością na insulinę (Felber i Golay, 1995) wskazuje, że leptyna może modulować reakcje regulowane przez insulinę. W rzeczywistości, ostatnio doniesiono, że leptyna zmniejsza istotnie podstawową i indukowaną insuliną fosforylację tyrozyny substratu-1 receptora insuliny (IRS-1). Takie działanie leptyny wobec fosforylacji IRS-1 było działaniem swoistym, ponieważ nie zmniejszało fosforylacji tyrozyny łańcucha β receptora insuliny (IR) (Cohen i in., 1996).
Fosforylacja tyrozyny IRS-1 przez kinazę IR jest kluczowym etapem w kaskadzie sygnalizacji przez receptor insuliny, prowadzącym do wielu znanych aktywności insuliny (Araki i in., 1994, Cheatham i Kahn, 1995, Myers i in., 1994, Myers i in., 1994, Myers i White, 1993, Rose i in., 1994, Tamemoto i in., 1994, White i Kahn, 1994). Sygnalizacja poniżej IRS-1 zachodzi przez kilka związanych białek, wśród których jednym jest białko wiążące-2 związane z receptorem czynnika wzrostowego (GRB-2) (Cheatham i Kahn, 1995).
Receptor insuliny (IR) jest uważany za receptor metaboliczny, pośredniczący w działaniu insuliny na homeostazę glukozy. Jako taki, ulega on ekspresji na tkankach końcowo zróżnicowanych, takich jak tkanka tłuszczowa, wątroba i mięśnie. Jednakże, wiele badań wykazało, że w przypadku ekspresji na komórkach nowotworowych IR jest silnym receptorem mitogennym in vivo i in vitro. Przykładowo funkcjonalny IR zidentyfikowano na kilku liniach komórkowych raka sutka, co stwierdzono przez fosforylację tyrozyny IR w odpowiedzi na działanie insuliną.
Ponadto, IR pośredniczy w reakcji mitogennej w tych komórkach, co stwierdzono przez włączme [3H]-tymidyny (IMNazzo i in., 1997, IMNazzo i in., 1992).
Do tej pory zastosowanie leptyny do hamowania wzrostu nowotworu przez indukowanie terminalnego różnicowania komórek nowotworowych było ujawnionej jedynie w publikacji WO 97/27286. Jednakże w publikacji tej wskazane zostały konkretne komórki nowotworowe charakterystyczne dla nowotworów nielitych, tj. komórki białaczkowe pochodzenia hematopoetycznego wyrażające Hu-B1.219 (zobacz strona 33, wiersze 25-28 publikacji WO 97/27286). Jednakże w publikacji tej nie ujawniono, ani nie zasugerowano zastosowania leptyny do supresji innych nowotworów, w szczególności guzów litych, takich jak rak sutka.
Streszczenie wynalazku
Niniejszym ujawniono zastosowanie leptyny jako inhibitora proliferacji komórek, przykładowo proliferacji komórek nowotworowych. Zatem rozwiązania według wynalazku umożliwiają zastosowanie samej leptyny albo w kombinacji z innymi środkami terapeutycznymi do leczenia różnych nowotworów. Ujawnienia niniejszego zgłoszenia wskazują również, że oprócz zastosowania samej leptyny, możliwe jest również zastosowanie białek fuzyjnych leptyny, mutein leptyny, agonistów receptora leptyny, aktywnych fragmentów albo frakcji jednego z powyższych, aktywnych analogów albo pochodnych jedPL 195 275 B1 nego z powyższych, ich soli i mieszanin do leczenia różnych nowotworów. W obecnym opisie przedstawione zostały również kompozycje farmaceutyczne zawierające jeden albo więcej czynników wybranych spośród leptyny, białek fuzyjnych leptyny, mutein leptyny, agonistów receptora leptyny, aktywnych fragmentów albo frakcji jednego z powyższych, aktywnych analogów albo pochodnych jednego z powyższych, ich soli i mieszanin do leczenia różnych nowotworów.
Proliferacja wielu różnych rodzajów komórek nowotworowych jest zwiększona w obecności różnych czynników wzrostowych, takich jak insulina albo IGF-I. Działanie insuliny i IGF-I pobudzające wzrost komórek, zachodzi przynajmniej częściowo przez szlak IRS-1/GRB2 (Myers i in., 1993). Szlak ten jest hamowany przez leptynę. Ponadto IRS-1 jest substratem receptorów kinazowych dodatkowych czynników wzrostowych i cytokin, w tym IL-4 i IL-9 (Pernis i in., 1995, Yin i in., 1995, Yin i in., 1994). Stąd, leptyna może hamować reakcje mitogenne niektórych albo wszystkich wymienionych powyżej czynników wzrostowych i cytokin, jak również innych czynników wzrostowych, tym samym hamując proliferację różnych komórek nowotworowych. Dostarczone przykłady obejmują hamowanie wywołanej przez IGF-I i wywołanej przez insulinę proliferacji linii komórkowych ludzkiego raka sutka T-47D i MCF7. Jednakże leptyna, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, agoniści receptora leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych, ich sole i mieszaniny mogą być stosowane do leczenia innych nowotworów.
W zakres wynalazku wchodzi zastosowanie składnika aktywnego wybranego z grupy obejmującej leptynę, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych i ich sole do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do hamowania proliferacji komórek ludzkiego raka sutka. Korzystnie, kompozycja otrzymywana zgodnie z zastosowaniem według wynalazku jest przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka.
Również korzystnie kompozycja otrzymywana zgodnie z zastosowaniem według wynalazku jest przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowane jest działanie insuliny pobudzające wzrost komórek nowotworowych, zachodzące przynajmniej częściowo przez szlak substrat-1 receptora insuliny (IRS-1)/białko wiążące-2 związane z receptorem czynnika wzrostowego (GRB2).
Ponadto, korzystnie kompozycja otrzymywana zgodnie z zastosowaniem według wynalazku jest przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowana jest reakcja mitogenna w komórkach nowotworowych wobec jednego albo wielu kinaz receptorowych, czynników wzrostowych i cytokin z grupy składającej się z IGF-I, IL-4 i IL-9, dla których IRS-1 jest substratem.
Korzystniej kompozycja farmaceutyczna otrzymana zgodnie z zastosowaniem według wynalazku jest przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowana jest podstawowa i indukowana insuliną proliferacja komórek nowotworowych. Najkorzystniej składnikiem aktywnym w zastosowaniu według wynalazku jest leptyna.
Niniejszym opisane zostały również sposoby leczenia nowotworów u ssaków oraz sposoby hamowania proliferacji komórek nowotworowych u ssaków, obejmujące podawanie pacjentowi kompozycji farmaceutycznej otrzymanej zgodnie z zastosowaniem według wynalazku w odpowiedniej postaci dawkowania i odpowiednią drogą podawania. Postaci dawkowania i drogi podawania lekarze określają po zbadaniu pacjenta.
Inne aspekty i wykonania wynalazku są podane albo staną się zrozumiałe w oparciu o poniższy szczegółowy opis wynalazku.
Opis figur
Figura 1 przedstawia zależność proliferacji komórek T-47D od insuliny, jak określono przez barwienie MTT.
Figura 2 przedstawia zależność proliferacji komórek T-47D od IGF-I, jak określono przez barwienie MTT.
Figura 3 przedstawia zahamowanie wywołanej insuliną proliferacji komórek T-47D w 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez mysią leptynę, jak określono przez barwienie MTT.
Figura 4 przedstawia zahamowanie wywołanej insuliną proliferacji komórek T-47D w 2% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez mysią leptynę, jak stwierdzono przez barwienie fioletem krystalicznym.
Figura 5 przedstawia zahamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek T-47D w 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez mysią leptynę, jak określono przez barwienie MTT.
Figura 6 przedstawia zahamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek T-47D w 2% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez mysią leptynę, jak określono przez barwienie fioletem krystalicznym.
PL 195 275 B1
Figura 7 przedstawia zahamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek T-47D w 2% płodowej surowicy bydlęcej (FBS) przez ludzką leptynę, jak określono przez barwienie fioletem krystalicznym.
Figura 8 przedstawia zahamowanie wywołanej insuliną proliferacji komórek MCF7 w pożywce bezsurowiczej przez mysią leptynę, jak określono przez barwienie fioletem krystalicznym.
Figura 9 przedstawia zahamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek MCF7 w pożywce bezsurowiczej przez mysią leptynę, jak określono przez barwienie fioletem krystalicznym.
Szczegółowy opis wynalazku
Rozwiązania według wynalazku umożliwiają zastosowanie leptyny jako inhibitora proliferacji komórek nowotworowych. Zwykle, linie komórkowe pochodzenia ludzkiego, pochodzące z różnych nowotworów, można hodować w obecności pożywki hodowlanej z dodatkiem płodowej surowicy bydlęcej w stężeniu około 10% objętościowo. Proliferacja komórek w tych warunkach określana jest jako „podstawowa proliferacja komórkowa.
Wzrost wielu linii komórek nowotworowych jest istotnie zwiększony, gdy do wskazanej powyżej wzbogaconej w surowicę pożywki hodowlanej dodane są różne czynniki wzrostowe, takie jak insulina, naskórkowy czynnik wzrostu albo insulinopodobny czynnik wzrostu-I (IGF-I). Włączenie leptyny w stężeniu 3 do 600 nanomolarnym do pożywki hodowlanej zmniejsza podstawową proliferację komórkową oraz proliferację komórek zależną od czynników wzrostowych.
Wyniki tych doświadczeń na komórkach podane w poniższych przykładach wskazują, że leptyna jest przydatna do hamowania wzrostu różnych nowotworów. Zatem, leptyna może być przydatna do leczenia różnych nowotworów.
Leptynę można stosować do hamowania proliferacji komórek raka sutka. Gdy leptynę dodaje się hodowli komórek ludzkiego przewodowego raka sutka T-47D (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, szczep nr ATCC HTB 133), zakres proliferacji jest zmniejszony. Podobnie, gdy leptynę dodaje się do hodowli ludzkiego gruczolaka sutka MCF7 (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, szczep nr ATCC HTB 22), zakres proliferacji jest zmniejszony. Leptyna hamuje zarówno podstawową, jak i wywołaną przez IGF-I i wywołaną insuliną proliferację komórek T-47D i MCF7. Zatem, leptyna może być przydatna do leczenia raka sutka.
Pobudzające wzrost działanie insuliny i IGF-I na komórki zachodzi, przynajmniej częściowo, przez fosforylację tyrozyny IRS-1, a następnie połączenie się IRS-1 z GRB2, co prowadzi do reakcji mitogennej. Działanie antymitogenne leptyny może wynikać z jej zdolności do zmniejszania podstawowej, wywołanej insuliną i wywołanej IGF-I fosforylacji tyrozyny IRS-1, co prowadzi do zmniejszonego wiązania się GRB2 z IRS-1. Ponadto, IRS-1 jest substratem receptorów kinazowych innych czynników wzrostowych i cytokin, w tym IL-4 i IL-9 (Pernis i in., 1995, Yin i in., 1995, Yin i in., 1994). Stąd, leptyna może hamować reakcję mitogenną niektórych albo wszystkich wspomnianych czynników wzrostowych i cytokin, jak również innych mitogenów, hamując w ten sposób proliferację różnych komórek nowotworowych.
Niniejszym opisane zostały również pochodne i analogi leptyny, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, agoniści receptora leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych, ich sole oraz kompozycje farmaceutyczne zawierające leptynę, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, agonistów receptora leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych, ich sole, do leczenia różnych nowotworów.
W znaczeniu tu zastosowanym, określenie „muteiny dotyczy analogów leptyny, w których jedną albo więcej reszt aminokwasowych zastąpiono innymi resztami aminokwasowymi, albo usunięto, albo dodano jedną albo więcej reszt aminokwasowych do oryginalnej sekwencji leptyny bez istotnej zmiany aktywności powstałego produktu, w porównaniu z leptyną typu dzikiego albo jej aktywnymi fragmentami albo frakcjami. Muteiny te wytwarza się znaną syntezą i/lub technikami kierowanej mutagenezy, albo dowolną inną, przydatną znaną techniką.
Dowolna taka muteina ma korzystnie sekwencję aminokwasową wystarczająco naśladującą sekwencję leptyny tak, że wykazuje zasadniczo aktywność leptyny albo jej aktywnych fragmentów albo frakcji. Tak więc, można określić czy dana muteina ma zasadniczo tą samą aktywność przy użyciu rutynowych testów obejmujących poddanie takiej muteiny np. prostemu testowi proliferacji komórek, ponieważ muteina, która blokuje proliferację komórkową zachowuje wystarczającą aktywność leptyny, a więc wykazuje przynajmniej jedną z ujawnionych zalet leptyny, a tym samym ma zasadniczo podobną aktywność.
PL 195 275 B1
W korzystnym wykonaniu, każda taka muteina ma przynajmniej 40% identyczność albo homologię z sekwencją jednej z leptyn. Korzystniej, ma przynajmniej 50%, przynajmniej 60%, przynajmniej 70%, przynajmniej 80% albo, najkorzystniej, przynajmniej 90% identyczność albo homologię.
Muteiny leptyny albo jej aktywne fragmenty albo frakcje, które można zastosować zgodnie z rozwiązaniami według wynalazku, albo kodujące je kwasy nukleinowe, obejmują skończony zestaw zasadniczo odpowiadających sekwencji w postaci substytucyjnych peptydów albo polinukleotydów, które specjalista w dziedzinie może rutynowo otrzymać, bez nadmiernego eksperymentowania, w oparciu o przedstawione tu ujawnienie i wskazówki.
Szczegółowy opis chemii i budowy białek przedstawiono w Schulz, G. E. i in., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York, 1978, oraz w Creighton, T. E., Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, które są załączone niniejszym jako odnośniki literaturowe. Prezentacja zastąpień w sekwencji nukleotydowej, taka jak np. preferencja kodonów, została przedstawiona w Ausubel i in., powyżej, w §§ A.1.1.-A.1.24 oraz w Sambrook i in., Current Protocols in Molecular Biology, Interscience NY §§ 6.3 i 6.4 (1987, 1992) w dodatku C i D.
Korzystne zmiany dla mutein, zgodnie z rozwiązaniami według wynalazku, znane są jako zastąpienia „konserwatywne. Konserwatywne zastąpienia aminokwasów w polipeptydach albo białkach leptyny albo jej aktywnych fragmentach albo frakcjach, mogą obejmować aminokwasy synonimiczne, w grupie, która ma podobne właściwości fizykochemiczne, tak że substytucja pomiędzy członkami danej grupy zachowuje właściwości biologiczne cząsteczki (Grantham, Science 185:862-864 (1974)). Można również dokonać insercji i delecji aminokwasów w powyższych sekwencjach, bez zmiany ich funkcji, szczególnie gdy insercje albo delecje obejmują tylko kilka aminokwasów, np. poniżej trzydziestu, zaś korzystnie poniżej dziesięciu i nie usuwają albo zastępują aminokwasów, które są kluczowe dla konformacji funkcyjnej, np. reszty cysteinowe (Anfinsen, Principles That Govern The Folding of Protein Chains, Science 181:223-230 (1973)). Białka i muteiny wytworzone przez takie delecje i/lub insercje mogą być stosowane w rozwiązaniach według wynalazku.
Korzystne synonimiczne grupy aminokwasowe zostały przedstawione w tabeli I. Korzystniejsze synonimiczne grupy aminokwasowe zostały przedstawione w tabeli II, zaś najkorzystniejsze synonimiczne grupy aminokwasowe zostały przedstawione w tabeli III.
T a b e l a I
Korzystne grupy aminokwasów synonimicznych
| Aminokwas | Grupa synonimiczna | ||||||
| Ser | Ser, | Thr, | Gil/, | Asn | |||
| Arg | A(g, | Gln, | Lys, | Gl^, | His | ||
| Leu | Ile, | Phe, | Tyr, | Met, | Val, | Leu | |
| Pro | Gly, | AA, | Thr, | Pro | |||
| Thr | Pro, | Ser, | aa, | Gly, | His, | Gln, | Thr |
| Ala | Gly, | ΤΙΊΙ, | Pro, | Ala | |||
| Val | Met, | Tyr, | Phi, | LA, | Leu, | Val | |
| Gly | Ala, | Thr, | Pro, | Ser, | Gly | ||
| Ile | Met, | Tyr | Phi, | VaL | Leu, | Lle | |
| Phe | Trp, | Met, | Ttl | LA, | Va( | Leu, | Phe |
| Tyr | Trp, | Met, | Phi, | LA, | Va( | Leu, | Tyr |
| Cys | Ser, | ΤΙΊΙ, | Cys | ||||
| His | Glu, | Lys, | Gln, | Thr, | Arg, | His | |
| Gln | Glu, | Lys, | Αρπ, | His, | Thr, | Ar^^, | Gln |
| Asn | Gln, | Asp, | Ser, | Asn | |||
| Lys | Glu, | Gln, | HiSi | Arg, | Lys | ||
| Asp | Glu, | Arn, | Asp | ||||
| Glu | Asp, | Lys, | Αρπ, | Gin, | His, | Ar^^, | Glu |
| Met | Phe, | Lle, | Val, | Leu, | Met | ||
| Trp | Trp |
PL 195 275 B1
T a b e l a II
Korzystniejsze grupy aminokwasów synonimicznych
| Aminokwas | Grupa synonimiezna | ||||
| Ser | Ser | ||||
| Arg | His, | Lys, | Arg | ||
| Leu | Leu, | Ile, | Phe, | Met | |
| Pro | Ala, | Pro | |||
| Thr | Thr | ||||
| Ala | Pro, | Ala | |||
| Val | Val, | Met, | Ile | ||
| Gly | Gly | ||||
| Ile | Ile, | Met, | Phe, | Val, | Leu |
| Phe | Met, | Tyr, | Lle, | Leu, | Phe |
| Tyr | Phe, | Tyr | |||
| Cys | Cys, | Ser | |||
| His | His, | Gln, | Arg | ||
| Gln | Glu, | Gln, | His | ||
| Asn | Asp, | Asn | |||
| Lys | Lys, | Arg | |||
| Asp | Asp, | Asn | |||
| Glu | Glu, | Gln | |||
| Met | Met, | Phe, | Ile, | Val, | Leu |
| Trp | Trp | ||||
| Tabela | III |
Najkorzystniejsze grupy aminokwasów synonimicznych
Aminokwas
Ser
Arg
Leu
Pro
Thr
Ala
Val
Gly
Ile
Phe
Tyr
Cys
His
Gln
Asn
Lys
Asp
Glu
Met
Trp
Grupa synonimiczna
Ser
Arg
Leu,
Pro
Thr
Ala
Val
Gly
Ile,
Phe
Tyr
Cys,
His
Gln
Asn
Lys
Asp
Glu
Met,
Met
Ile,
Met
Met ,
Ser eeu
Ile,
Przykłady wprowadzania zastąpień aminokwasowych w białkach, które można zastosować w celu otrzymania mutein leptyny albo ich aktywnych frakcji do zastosowania w rozwiązaniach według wynalazku obejmują znane etapy, jak przedstawione w patentach USA nr RE 33653, 4959314, 4588585 i 4737462, udzielonych dla Mark i in., 5116943 dla Koths i in., 4965195 dla Namen i in., 4879111 dla Chong i in., oraz 5017691 dla Lee i in., oraz białka podstawione lizyną przedstawione w patencie USA nr 4904584 (Shaw i in.).
PL 195 275 B1
Dowolna muteina leptyny albo jej aktywna frakcja do zastosowania w rozwiązaniach według wynalazku ma sekwencję aminokwasową zasadniczo odpowiadającą sekwencji leptyny. Określenie „zasadniczo odpowiadającą oznacza białka z niewielkimi zmianami sekwencji naturalnego białka, które nie wpływają na podstawową charakterystykę naturalnych białek, szczególnie gdy rozważa się zdolność do hamowania proliferacji komórek. Typem zmian, które uważa się za objęte określeniem „zasadniczo odpowiadające są takie, które wynikają z konwencjonalnych technik mutagenezy DNA kodującego leptynę, prowadzących do powstania kilku niewielkich modyfikacji oraz z badania przesiewowego w kierunku pożądanej aktywności w sposób omówiony wyżej.
Muteiny stosowane w rozwiązaniach według wynalazku obejmują białka kodowane przez kwas nukleinowy, taki jak DNA albo RNA, który hybrydyzuje w ostrych warunkach z DNA albo RNA kodującym leptynę. Taki kwas nukleinowy powinien być głównym kandydatem do określenia czy koduje polipeptyd zachowujący aktywność funkcjonalną leptyny. Określenie „ostre warunki dotyczy warunków hybrydyzacji i płukania, które specjaliści w dziedzinie określają jako „ostre (patrz, Ausubel i in., Current Protocols in Molecular Biology, Interscience NY §§ 6.3 i 6.4 (1987, 1992) i Sambrook i in. wyżej).
Bez ograniczania, przykłady ostrych warunków płukania obejmują 12-20°C poniżej wyliczonej Tm badanej hybrydy w np. 2 X SSC i 0,5% SDS przez 5 minut, 2 X SSC i 0,1% SDS przez 15 minut, 0,1 X SSC i 0,5% SDS w 37°C przez 30-60 minut, a następnie 0,1 X SSC i 0,5% SDS w 68°C przez 30-60 minut. Specjaliści w dziedzinie rozumieją, że ostrość warunków zależy również od długości sekwencji DNA, sond oligonukleotydowych (takich jak 10-40 zasad) albo mieszanych sond oligonukleotydowych. Jeżeli stosuje się mieszane sondy oligonukleotydowe, korzystne jest zastosowanie chlorku tetrametyloamoniowego (TMAC) zamiast SSC (patrz, Ausubel i in., wyżej).
Określenia „białka fuzyjne leptyny albo prościej „białka fuzyjne dotyczą polipeptydu obejmującego leptynę albo jej aktywne frakcje albo muteiny, poddane fuzji z innym białkiem, które np. wykazuje wydłużony czas obecności w płynach ustrojowych. Leptyna albo jej aktywne frakcje można więc poddawać fuzji z innym białkiem, polipeptydem i tym podobnym.
Określenie „sole oznacza niniejszym zarówno sole grup karboksylowych oraz sole addycyjne z kwasem grup aminowych leptyny, jej aktywnych frakcji, mutein albo ich białek fuzyjnych. Sole grup karboksylowych można wytworzyć sposobami znanymi w dziedzinie i obejmują one sole nieorganiczne, przykładowo, sole sodu, wapnia, amonu, żelaza albo cynku, itp., oraz sole zasad organicznych jak te wytworzone, przykładowo, z aminami, takimi jak trietanoloamina, arginina albo lizyna, piperydyna, prokaina itp.
Sole addycyjne z kwasem obejmują, przykładowo, sole z kwasami mineralnymi, przykładowo, kwasem chlorowodorowym albo siarkowym i sole z kwasami organicznymi, na przykład, z kwasem octowym albo szczawiowym. Oczywiście każda taka sól musi mieć aktywność zasadniczo podobną do aktywności leptyny albo jej aktywnych frakcji.
„Pochodne funkcyjne w znaczeniu tu zastosowanym obejmują pochodne leptyny albo jej aktywnych fragmentów albo frakcji i jej mutein i białek fuzyjnych leptyny, które można wytworzyć z grup funkcyjnych występujących w łańcuchach bocznych reszt albo grup końca N albo C, sposobami znanymi w dziedzinie, i znajdują zastosowanie w rozwiązaniach według wynalazku o ile są dopuszczalne farmaceutycznie, tj. nie niszczą aktywności białka, która jest zasadniczo podobna do aktywności leptyny i nie nadają właściwości toksycznych kompozycji, która je zawiera.
Pochodne te mogą, przykładowo, obejmować łańcuchy boczne poliglikolu etylenowego, które mogą maskować miejsca antygenowe i wydłużać czas przebywania leptyny albo jej aktywnych frakcji w płynach ustrojowych. Inne pochodne obejmują estry alifatyczne grup karboksylowych, amidy grup karboksylowych z amoniakiem albo pierwszorzędowymi albo drugorzędowymi aminami, N-acylowe pochodne wolnych grup aminowych reszt aminokwasowych wytworzone z grupami acylowymi (np. alkanoilowymi albo karbocyklicznymi grupami aroilowymi) albo pochodne O-acylowe wolnych grup hydroksylowych (przykładowo, reszt serylowych albo treonylowych) wytworzone z grupami acylowymi.
Przez określenie „aktywne fragmenty albo frakcje leptyny, mutein leptyny albo białek fuzyjnych leptyny, należy rozumieć dowolny fragment albo prekursor łańcucha polipeptydowego leptyny albo białek fuzyjnych zawierających takie fragmenty leptyny, same albo wraz ze związanymi cząsteczkami albo resztami przyłączonymi do nich, np. resztami cukrowymi albo fosforanowymi, albo agregatami dowolnej z tych pochodnych, jeżeli frakcja ta wykazuje aktywność zasadniczo podobną do leptyny.
PL 195 275 B1
Niniejszym ujawniono również zastosowania naturalnych albo syntetycznych agonistów receptora leptyny, które są zasadniczo podobne do leptyny pod względem zdolności do hamowania proliferacji komórek. Takich agonistów można wybrać z biblioteki peptydów, biblioteki analogów peptydowych albo losowej biblioteki cząsteczek organicznych. Selekcję przeprowadza się znanymi w dziedzinie sposobami, zasadniczo wykorzystując zdolność wybranego agonisty do wiązania receptora leptyny.
Przykładowo, bibliotekę losowych peptydów można wytworzyć w postaci prokariotycznych plazmidów ekspresyjnych, niosących DNA kodujący losowy peptyd w fuzji z białkiem nośnikowym. Innym przykładem jest układ prezentacji na fagu, w którym układem ekspresyjnym jest fag zawierający DNA kodujący losowy peptyd, który jest włączony do jednego z zewnętrznych białek faga.
Fagi kodujące poddanych fuzji agonistów albo antagonistów peptydowych izoluje się z biblioteki fagowej przez, np. odpłukiwanie (ang. panning) nad powierzchnią pokrytą receptorami leptyny. Związane fagi izoluje się, a następnie namnaża w bakteriach. Zwykle, koniecznych jest kilka rund odpłukiwanie-amplifikacja w celu otrzymania fagów wyrażających peptydy fuzyjne o wysokim powinowactwie wobec receptora leptyny. Izolowany fag jest następnie namnażany i określana jest sekwencja DNA kodującą peptyd.
Alternatywnie, wytwarza się znanym w dziedzinie sposobem biblioteki peptydów losowych albo biblioteki innych cząsteczek metodą syntezy na podłożu stałym, na perełkach polimerowych. Perełki niosące peptyd albo inną cząsteczkę o powinowactwie względem receptora leptyny selekcjonuje się z biblioteki, np. przez wiązanie ze znakowanym receptorem leptyny, np. receptorem leptyny znakowanym fluorescencyjnie.
Perełki pozytywne pobiera się i określa się budowę peptydu albo innej cząsteczki obecnej na perełce. Jeżeli perełka niesie peptyd, sekwencję peptydu określa się przez analizę sekwencji białka. Jeżeli perełka jest reprezentantem losowej biblioteki związków organicznych, to cząsteczkę odcina się od perełki i bada się jej strukturę znanymi sposobami, takimi jak np. spektrometria mas, jądrowy rezonans magnetyczny i tym podobnymi. Kandydujące peptydy zidentyfikowane pod względem ich powinowactwa do receptora leptyny dalej się selekcjonuje pod względem ich zdolności do hamowania proliferacji komórek w opisany wyżej sposób.
Tak więc, leptyna, jej aktywne frakcje, muteiny leptyny, białka fuzyjne leptyny, agoniści receptora leptyny i ich sole, pochodne funkcyjne i aktywne fragmenty albo frakcje są wskazane do leczenia różnych nowotworów, w szczególności nowotworów zależnych od czynników wzrostowych, a konkretnie zaś raka sutka.
Niniejszym opisano również zastosowania kompozycji farmaceutycznej, obejmującej dopuszczalny farmaceutycznie nośnik i leptynę, albo jej aktywne muteiny, białka fuzyjne, agonistów receptora leptyny i ich sole, pochodne funkcyjne albo ich aktywne frakcje.
Kompozycje farmaceutyczne do podawania wytwarza się przez mieszanie leptyny albo jej pochodnych albo agonistów receptora leptyny z dopuszczalnymi farmaceutycznie nośnikami i/lub stabilizatorami i/lub zaróbkami. Możliwe jest wytwarzanie postaci dawkowania np. przez liofilizację w fiolkach do dawkowania.
Sposób podawania może obejmować dowolny z dopuszczalnych sposobów podawania podobnych środków, np. podawanie dożylne, domięśniowe, podskórne, przez wstrzyknięcie miejscowe albo zastosowanie miejscowe, albo w sposób ciągły przez wlew, itp., i zależy od leczonego stanu. Ilość składnika czynnego do podawania zależeć będzie od drogi podania, leczonej choroby i stanu pacjenta. Wstrzyknięcie miejscowe, przykładowo, wymaga niższych dawek białka na ciężar ciała pacjenta niż wstrzyknięcie dożylne.
Typowa aktywna ilość wstrzykiwanej leptyny wynosi 0,1 do 1000 mg/kg ciężaru ciała, zaś korzystnie 1 do 10 mg/kg. Aktywna ilość pochodnych leptyny i agonistów receptora leptyny może być zasadniczo taka sama jak ilość leptyny, w przeliczeniu molarnym.
Wynalazek zostanie zilustrowany poniższymi nieograniczającymi przykładami.
P r z y k ł a d 1: Określanie proliferacji komórek przez barwienie MTT
Reagenty:
Roztwór MTT: Bromek 3-[4,5-dimetylotiazol-2-ilo]-2,5-difenylotetrazolowy 5 mg/ml w buforowanym fosforanem roztworze soli. Przechowywany w -20°C do momentu zastosowania.
Rozpuszczalnik: Stęż. HCl (450 ml) w 2-propanolu (100 ml).
PL 195 275 B1
Procedura:
Komórki hodowano na 96-studźienkowych płytkach w obecności różnych stymulatorów i inhibitorów wzrostu. W odpowiednim momencie dodano roztwór wyjściowy MTT (10 ml) do każdej ze studzienek. Płytki inkubowano 2,5-3 godziny w 37°C.
Nadsącz zaaspirowano pod próżnią stosując igłę o małym przekroju. Dodano rozpuszczalnik (100 ml) i odczytywano absorbancję na czytniku do płytek stosując filtr 570 nM po odjęciu tła przy 630 nm.
P r z y k ł a d 2: Określenie proliferacji komórek przez barwienie filetem krystalicznym
Procedura:
Komórki hodowano na 96-studzienkowych płytkach w obecności różnych stymulatorów i inhibitorów wzrostu. W odpowiednim momencie dodano 12,5% roztwór glutaraldehydu (40 ml do każdej ze studzienek. Płytki inkubowano 30 minut w temperaturze pokojowej. Płytkę następnie wypłukano wodą, wysuszono i do każdej studzienki dodano roztwór wodny fioletu krystalicznego (0,1%, 0,1 ml). Płytkę inkubowano dalej przez 30 minut, płukano wodą i odczytywano absorbancję na czytniku do płytek stosując filtr 540 nM po odjęciu tła przy 630 nm.
P r z y k ł a d 3: Określenie zależnej od insuliny proliferacji komórek T-47D
Ludzkie komórki T-47D (American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, szczep nr ATCC HTB 133) wysiano do 96-studzienkowych płytek w gęstości 3x105 komórek/ml w DMEM i 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), po 0,1 ml na studzienkę. Do różnych studzienek dodano insulinę ludzką w rosnących stężeniach, płytki inkubowano przez 72 godziny, zaś liczbę komórek określono przez barwienie MTT (fig. 1). Wyniki są średnią z 8 powtórzeń. W oparciu o zakres proliferacji komórkowej, jak przedstawiono na fig. 1, stężenie insuliny 50 nM stosowano do dalszych badań.
P r z y k ł a d 4: Określenie zależnej od IGF-I proliferacji komórek T-47D
Ludzkie komórki T-47D wysiano do 96-studzienkowych płytek w gęstości 3x105 komórek/ml w DMEM i 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), po 0,1 ml na studzienkę. Do różnych studzienek dodano ludzki IGF-I w rosnących stężeniach, płytki inkubowano przez 3 dni, zaś liczbę komórek określono przez barwienie MTT (fig. 2). Wyniki są średnią z 8 powtórzeń. W oparciu o zakres proliferacji komórkowej, jak przedstawiono na fig. 2, stężenie IGF-I 50 ng/ml stosowano do dalszych badań.
P r z y k ł a d 5: Hamowanie indukowanej insuliną proliferacji komórek T-47D przez leptynę Komórki T-47D (3xW5 komórek/ml) w DMEM uzupełmonej 10% FBS wysteno do ^-sk^zonkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Komórki traktowano insuliną (50 nM) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Następnie, komórki barwiono MTT. Dane oznaczają średnią ± błąd standardowy (SE, n=8).
Wyniki pokazują, że leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną insuliną (fig. 3).
Komórki T-47D (3xW5 komórek/ml) w DMEM uzupełmonej 10% FBS wysteno do ^-sk^zonkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Po jednym dniu pożywkę zastąpiono DMEM uzupełnionej 2% FBS, a następnego dnia traktowano insuliną (50 nM) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny w DMEM-2% FBS. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Komórki barwiono fioletem krystalicznym. Dane oznaczają średnią ± SE (n=8).
Wyniki pokazują, że leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną insuliną (fig. 4).
P r z y k ł a d 6: Hamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek T-47D przez leptynę Komórki T-47D (3xW5 komórek/ml) w DMEM uzupełmonej 10% FBS wysteno do ^-sk^zonkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Komórki traktowano IGF-I (50 ng/ml) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Następnie, komórki barwiono MTT. Dane oznaczają średnią ± błąd standardowy (SE, n=8).
Wyniki pokazują, że leptyna hamowała w sposób istotny proliferację komórek wywołaną IGF-I (fig. 5).
Komórki T-47D (3xW5 komórek/ml) w DMEM uzupełmonej 10% FBS wysteno do ^-sk^zonkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Po jednym dniu pożywkę zastąpiono DMEM uzupełnionej 2% FBS, a następnego dnia traktowano IGF-I (50 ng/ml) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny w DMEM-2% FBS. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Komórki barwiono fioletem krystalicznym. Dane oznaczają średnią ± SE (n=8). Wyniki pokazują, że leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną IGF-I (fig. 6).
PL 195 275 B1
Komórki T-47D (3x105 komórek/ml) w DMEM uzupełnionej 10% FBS wysiano do 96-studzienkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Po jednym dniu pożywkę zastąpiono DMEM uzupełnionej 2% FBS, a następnego dnia traktowano IGF-I (50 ng/ml) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia ludzkiej leptyny w DMEM-2% FBS. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Komórki barwiono fioletem krystalicznym. Dane oznaczają średnią ± SE (n=8).
Wyniki pokazują, że ludzka leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną IGF-I (fig. 7).
P r z y k ł a d 7: Zahamowanie wywołanej insuliną proliferacji komórek MCF7 przez leptynę
Komórki ludzkiego gruczolakoraka sutka MCF7 (3x104 komórek/ml, American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA, szczep nr ATCC HTB 22) uzupełnione 6% FBS wysiano do 96-studzienkowych płytek (0,1 ml na studzienkę). Po jednym dniu pożywkę zastąpiono bezsurowiczą DMEM, a następnego dnia traktowano insuliną (50 nM) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny w pożywce bezsurowiczej. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Komórki barwiono fioletem krystalicznym. Dane oznaczają średnią ± SE (n=8).
Wyniki pokazują, że leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną insuliną (fig. 8).
P r z y k ł a d 8: Zahamowanie wywołanej IGF-I proliferacji komórek MCF7 przez leptynę
Komórki ludzkiego gruczolakoraka sutka MCF7 w DMEM uzupełnionej 10% FBS wysiano do 96-studzienkowych płytek (3x104 komórek/ml, 0,1 ml na studzienkę). Po jednym dniu pożywkę zastąpiono pożywką bezsurowiczą. Następnego dnia komórki traktowano IGF-I (50 ng/ml) w obecności lub nieobecności wskazanego stężenia mysiej leptyny w pożywce bezsurowiczej. Płytki inkubowano w 37°C w 5% CO2 przez 48 godzin. Komórki barwiono fioletem krystalicznym.
Dane oznaczają średnią ± SE (n=8). Wyniki pokazują, że leptyna hamowała istotnie proliferację komórek wywołaną IGF-I (fig. 9).
PL 195 275 B1
Literatura
Araki, E., Lipes, M. A., Patti, M. E., Bruning, J. C., Haag, B. R., Johnson, R. S., and Kahn, C. R. (1994). Alternative pathway of insulin signalling in mice with targeted disruption of the IRS-1 gene [zobacz komentarze]. Nature 372, 186-90.
Ausubel, F.M. et al., red., Current Protocols In Molecular Biology.
Campfield, L. A., Smith, F. J., Guisez, Y., Devos, R, i Burn, P. (1995). Recombinant mouse OB protein: Evidence for a peripheral signal linking adiposity and central neural networks. Science 269, 546-549.
Cheatham, B., and Kahn, C. R. (1995). Insulin action and the insulin signaling network. Endocr Rev 16, 117-42.
Cioffi, J. A., Shafer, A. W., Zupancic, T. J., Smith-Gbur, J., Mikhail, A., Platika, D. i Snodgrass, H. R. ( (999). NnvvIB219/O0 reecetor isoforms:Possible roleofleetin i n hematoopiesisand reeroouction. Nature Medicine 2, 585-589.
Cohen, B., Novick, D. i Rubinstein, M. (1996). Modulation of insulin activities by leptin. Science 274, 1185-1188.
Collins, S., Kuhn, C. M., Petro, A. E., Swick, A. G., Chrunyk, B. A. i Surwit, R. S. (1996). Role of leptin in fat regulation. Nature 380, 677.
Considine, R. V., Sinha, M. K., Heiman, M. L., Kriauciunas, A., Stephens, T. W., Nyce, M. R., Ohannesian, J. P., Marco, C. C., Mckee, L. J., Bauer, T. L. i Caro, J. F. (1996). Serum immunoreactive leptin concentrations in normal-weight and obese humans. N Engl J Med 334, 292-295.
Felber, J. P. i Golay, A. (1995). Regulation of nutrient metabolism and energy expenditure. Metabolism 44, Suppl 2), 4-9.
Frederich, R. C., Hamann, A., Anderson, S., Lollmann, B., Lowell, B. B. i Flier, J. S. (1995). Leptin levels reflect body lipid content in mice: Evidence for diet-induced resistance to leptin action. Nature Med l, 1311-1314.
Halaas, J. L., Gajiwala, K. S., Maffei, M., Cohen, S. L., Chait, B. T., Rabinowitz, D., Lallone, R. L., Burley, S. K., and Friedman, J. M. (1995). Weight-reducing effects of the plasma protein encoded by the obese gene [zobacz komentarze]. Science 26Y9, 543-6.
Lee, G. H., Proenca, R., Montez, J. M., Carroll, K. M., Darvishzadeh, J. G., Lee, J. I. i Friedman, J. M. (1996). Abnormal splicing of the leptin receptor in diabetic mice. Nature 379, 632-635.
Lonnqvist, F., Arner, P., Nordfors, L. i Schalling, M. (1995). Overexpression of the obese (ob) gene in adipose tissue of human obese subjects. Nature Med 1,950-953.
Maffei, M., Halaas, J., Ravussin, E., Pratley, R. E., Lee, G. H., Zhang, Y., Fei, H., Kim, S., Lallone, R., Ranganathan, S., Kern, P. A. i Friedman, J. M. (1995). Leptin levels in human and rodent: Measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects. Nature Med 1, 1155-1161.
Milazzo, G., Sciatta, L., Papa, V., Goldfine, I. D. i Yigneri, R. (1997). ASPB-10 insulin induction of increased mitogenic responses and phenotypic changes in human breast epithelial cells: evidence for enhanced interactions with the insulin-like growth factor-1 receptor. Molec. Carcinogenesis 18, 19-25.
Millazzo, G., Giorgino, F., Damante, G., Sung, C., Stampfer, M.R., Vigneri, R., Goldfine, L. i Belfiore, A. (1992). Insulin receptor expression in human breast cancer cell lines. Cancer Res. 52, 3924-3930.
Myers, M. G., Jr., Sun, X. J., Cheatham, B., Jachna, B. R., Glasheen, E. M., Backer, J. M. i White, M. F. (1993). IRS-1 is a common element in insulin and insulin-like growth factor-I signaling to the phosphatidylinositol 3'-kinase. Endocrinology 132, 1421-30.
Myers, M. G., Jr., Sun, X. J., and White, M. F. (1994). The IRS-1 signaling system. Trends Biochem Sci I9, 289-93.
Myers, M. G., Jr., Wang, L. M., Sun, X. J., Zhang, Y., Yenush, L., Schlessinger, J., Pierce, J. H. i White, M. F. (1994). Role of IRS-1-GRB-2 complexes in insulin signaling. Mol Cell Biol 14, 3577-87.
Myers, M. G., Jr. i White, M. F. (1993). The new elements of insulin signaling. Insulin receptor substrate-1 and proteins with SH2 domains . Diabetes 42, 643-50.
Pelleymounter, M. A., Cullen, M. J., Baker, M. B., Hecht, R., Winters, D., Boone, T. i Collins, F. (1995). Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice [zobacz komentarze]. Science 269, 540-3.
PL 195 275 B1
Pernis, A., Witthuhn, B., Keegan, A. D., Nelms, K., Garfein, E., Ihle, J. N., Paul, W. E., Pierce, J. H. i Rothman, P. (1995). Interleukin 4 signals through two related pathways. Proc Natl Acad Sci USA 92, 7971-7975.
Rose, D. W., Saltiel, A. R., Majumdar, M., Decker, S. J. i Olefsky, J. M. (1994). Insulin receptor substrate 1 is required for insulin-mediated mitogenic signal transduction. Proc Natl Acad Sci USA 91, 797-801.
Sambrook et al., (1989) Molecular cloning: A laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.
Tamemoto, H., Kadowaki, T., Tobe, K., Yagi, T., Sakura, H., Hayakawa, T., Terauchi, Y., Ueki, K., Kaburagi, Y., Satoh, S. et al. (1994). Insulin resistance and growth retardation in mice lacking insulin receptor substrate-1 [zobacz komentarze]. Nature 372, 182-6.
Tartaglia, L. A., Dembski, M., Weng, X., Deng, N. H., Culpepper, J., Devos, R., Richards, G. J., Campfield, L. A., Clark, F. T., Deeds, J., Muir, C., Sanker, S., Moriarty, A., Moore, K. J., Smutko, J. S., Mays, G. G., Woolf, E. A., Monroe, C. A. i Tepper, R. I. (1995). Identification and expression cloning of a leptin receptor, OB-R. Cell 83, 1263- 1271.
Weigle, D. S., Bukowski, T. R., Foster, D. C., Holderman, S., Kramer, J. M., Lasser, G., Loftonday, C. E., Prunkard, D. E., Raymond, C. i Kuijper, J. L. (1995). Recombinant ob protein reduces feeding and body weight in the ob/ob mouse. J Glin Invest 96, 2065-2070.
White, M. F. i Kahn, C. R. (1994). The insulin signaling system. J Biol Chem 269, 1-4.
Yin, T. G., Keller, S. R., Quelle, F. W., Witthuhn, B. A., Tsang, M. L. S., Lienhard, G. E., Ihle, J. N. i Yang, Y. C. (1995). Interleukin-9 induces tyrosine phosphorylation of insulin receptor substrate-1 via JAK tyrosine kinases. J Biol Chem 270, 20497-20502.
Yin, T. G., Tsang, M. L. S. i Yang, Y. C. (1994). JAKI kinase forms complexes with interleukin-4 receptor and 4PS/insulin receptorsubstrate-1-like protein and is activated by interleukin-4 and interleukin-9 in T lymphocytes. J Biol Chem 269, 26614-26617.
Zhang, Y., Proenca, R., Maffei, M., Barone, M., Leopold, L. i Friedman, J. M. (1994). Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue. Nature 372, 425-432.
Claims (6)
- Zastrzeżenia patentowe1. Zastosowańie składnika aktywnego \wykrane90 z grupy obejmującej leptynę, białka fuzyjne leptyny, muteiny leptyny, aktywne fragmenty albo frakcje jednego z powyższych, aktywne analogi albo pochodne jednego z powyższych i ich sole do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do hamowania proliferacji komórek ludzkiego raka sutka.
- 2. Zastosowanie według z^^srr^. 1, znamienne tym, że farmaceuuyczna jess przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka.
- 3. Zastosowanie według zantrz. 1 albo 2, znamiennn tym, że kk^r^f^c^^z^c^j^ f^^r^^co^L^Jt<jo^r^^jees przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowane jest działanie insuliny pobudzające wzrost komórek nowotworowych, zachodzące przynajmniej częściowo przez szlak substrat-1 receptora insuliny (IRS-1)/białko wiążące-2 związane z receptorem czynnika wzrostowego (GRB2).
- 4. Zastopowanie według zaas^. 1 albo 2, znamiennn tym, że kompooycja f^^r^^co^L^Jt<jo^r^^jees przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowana jest reakcja mitogenna w komórkach nowotworowych wobec jednego albo wielu kinaz receptorowych, czynników wzrostowych i cytokin z grupy składającej się z IGF-I, IL-4 i IL-9, dla których IRS-1 jest substratem.
- 5. Zastosowań ie według 1 albo 2, albo 3, albo 4, znamienne tym. żte kł^ιmf^c^^z^c^j^ farmaceutyczna jest przeznaczona do leczenia ludzkich raków sutka, przy czym hamowana jest podstawowa i indukowana insuliną proliferacja komórek nowotworowych.
- 6. Z£^^st^^s^\^^r^i^ według 1 albo 2, albo 3, albo 4, albo 5, znamienne tym. że skkadnikiem aktywnym jest leptyna.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL12073397A IL120733A0 (en) | 1997-04-29 | 1997-04-29 | Leptin as an inhibitor of cell proliferation |
| PCT/IL1998/000196 WO1998048831A1 (en) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL336582A1 PL336582A1 (en) | 2000-07-03 |
| PL195275B1 true PL195275B1 (pl) | 2007-08-31 |
Family
ID=11070075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL98336582A PL195275B1 (pl) | 1997-04-29 | 1998-04-26 | Zastosowanie leptyny, białek fuzyjnych leptyny, mutein leptyny, aktywnych fragmentów albo frakcji jednego z powyższych, aktywnych analogów albo pochodnych jednego z powyższych oraz ich soli |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7109159B1 (pl) |
| EP (1) | EP0981365B1 (pl) |
| JP (1) | JP4330662B2 (pl) |
| KR (1) | KR100507731B1 (pl) |
| CN (1) | CN1168497C (pl) |
| AR (1) | AR012626A1 (pl) |
| AT (1) | ATE283702T1 (pl) |
| AU (1) | AU742927B2 (pl) |
| BG (1) | BG63490B1 (pl) |
| CA (1) | CA2288238A1 (pl) |
| CZ (1) | CZ299872B6 (pl) |
| DE (1) | DE69827942T2 (pl) |
| EA (1) | EA002353B1 (pl) |
| EE (1) | EE04801B1 (pl) |
| ES (1) | ES2232944T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0002427A3 (pl) |
| IL (2) | IL120733A0 (pl) |
| NO (1) | NO322304B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ500589A (pl) |
| PL (1) | PL195275B1 (pl) |
| PT (1) | PT981365E (pl) |
| SK (1) | SK284848B6 (pl) |
| UA (1) | UA66793C2 (pl) |
| WO (1) | WO1998048831A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA983608B (pl) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7208572B2 (en) | 1998-08-21 | 2007-04-24 | Albany Medical College | Leptin-related peptides |
| US6777388B1 (en) | 1998-08-21 | 2004-08-17 | Clf Medical Technology Acceleration Program, Inc. | Leptin-related peptides |
| US20050272652A1 (en) | 1999-03-29 | 2005-12-08 | Gault Victor A | Peptide analogues of GIP for treatment of diabetes, insulin resistance and obesity |
| IL132312A0 (en) * | 1999-09-05 | 2001-03-19 | Yeda Res & Dev | Use of leptin in inhibition of endothelial cell proliferation |
| KR20140011431A (ko) | 2004-02-11 | 2014-01-28 | 아밀린 파마슈티칼스, 엘엘씨. | 선택가능한 특성을 갖는 하이브리드 폴리펩티드 |
| US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
| US8969291B2 (en) | 2004-10-08 | 2015-03-03 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods for decreasing leptin levels or activity for treating inflammation |
| US7863240B2 (en) * | 2004-10-08 | 2011-01-04 | Enzo Therapeutics, Inc. | Methods and uses of leptin in hepatocellular carcinoma |
| CA2597649A1 (en) | 2005-02-11 | 2006-08-17 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Gip analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8263545B2 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-11 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | GIP analog and hybrid polypeptides with selectable properties |
| EP2330125A3 (en) | 2005-08-11 | 2012-12-12 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| EP1922336B1 (en) | 2005-08-11 | 2012-11-21 | Amylin Pharmaceuticals, LLC | Hybrid polypeptides with selectable properties |
| US8227408B2 (en) * | 2005-09-07 | 2012-07-24 | Neurotez, Inc. | Leptin as an anti-amyloidogenic biologic and methods for delaying the onset and reducing Alzheimer's disease-like pathology |
| US8497240B2 (en) | 2006-08-17 | 2013-07-30 | Amylin Pharmaceuticals, Llc | DPP-IV resistant GIP hybrid polypeptides with selectable properties |
| SG188143A1 (en) * | 2008-02-08 | 2013-03-28 | Ambrx Inc | Modified leptin polypeptides and their uses |
| KR20110028457A (ko) * | 2008-05-21 | 2011-03-18 | 뉴로테즈 인코포레이티드 | 신경섬유 매듭과 연관된 신경변성 장애를 치료하는 방법 |
| CA2742600A1 (en) * | 2008-11-04 | 2010-05-14 | Nikolaos Tezapsidis | Leptin compositions and methods for treating progressive cognitive function disorders resulting from accumulation of neurofibrillary tangles and amlyoid beta |
| WO2010146059A2 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy |
| TWI824372B (zh) | 2015-10-12 | 2023-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | 活化瘦素受體的抗原結合蛋白 |
| MA45801B1 (fr) | 2016-11-08 | 2021-11-30 | Regeneron Pharma | Protéines de liaison à l'antigène qui sont des antagonistes du récepteur de leptine |
| SG11202005146VA (en) | 2017-12-18 | 2020-06-29 | Regeneron Pharma | Bispecific antigen binding molecules that bind leptin receptor and/or gp130, and methods of use thereof |
| SMT202500283T1 (it) | 2018-04-06 | 2025-09-12 | Regeneron Pharma | Un anticorpo agonista del recettore della leptina da utilizzare per aumentare la massa ossea in un soggetto affetto da disfunzione metabolica o ipoleptinemia |
| CN120629571B (zh) * | 2025-06-13 | 2026-03-27 | 蚌埠医学院第一附属医院（蚌埠医学院附属肿瘤医院） | Lepr基因或蛋白作为靶标在制备胆管细胞癌治疗产品中的用途 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU695934B2 (en) * | 1995-06-30 | 1998-08-27 | Eli Lilly And Company | Methods for treating diabetes |
| AU7072896A (en) * | 1995-09-19 | 1997-04-09 | Eli Lilly And Company | Dna encoding medicinal proteins |
| AU731685C (en) * | 1996-01-23 | 2002-08-22 | Indevus Pharmaceuticals, Inc. | Methods for using the obese gene and its gene product to stimulate hematopoietic development |
-
1997
- 1997-04-29 IL IL12073397A patent/IL120733A0/xx unknown
-
1998
- 1998-04-26 UA UA99116415A patent/UA66793C2/uk unknown
- 1998-04-26 EE EEP199900510A patent/EE04801B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 ES ES98917580T patent/ES2232944T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 JP JP54678798A patent/JP4330662B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 CA CA002288238A patent/CA2288238A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-26 AU AU70762/98A patent/AU742927B2/en not_active Ceased
- 1998-04-26 HU HU0002427A patent/HUP0002427A3/hu unknown
- 1998-04-26 AT AT98917580T patent/ATE283702T1/de active
- 1998-04-26 CN CNB988066920A patent/CN1168497C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 DE DE69827942T patent/DE69827942T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 EP EP98917580A patent/EP0981365B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-26 NZ NZ500589A patent/NZ500589A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 PT PT98917580T patent/PT981365E/pt unknown
- 1998-04-26 EA EA199900981A patent/EA002353B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 CZ CZ0384899A patent/CZ299872B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 SK SK1471-99A patent/SK284848B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 US US09/403,897 patent/US7109159B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 PL PL98336582A patent/PL195275B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-04-26 KR KR10-1999-7009705A patent/KR100507731B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-26 WO PCT/IL1998/000196 patent/WO1998048831A1/en not_active Ceased
- 1998-04-29 ZA ZA983608A patent/ZA983608B/xx unknown
- 1998-04-29 AR ARP980102003A patent/AR012626A1/es unknown
-
1999
- 1999-10-25 BG BG103832A patent/BG63490B1/bg unknown
- 1999-10-28 NO NO19995267A patent/NO322304B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-10-28 IL IL132633A patent/IL132633A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0981365B1 (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation | |
| AU727174B2 (en) | Use of CNTF (ciliary neurotrophic factor) receptor activators for the treatment of obesity | |
| AU2012240102B2 (en) | Method of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (GDF-15) | |
| RU2738158C2 (ru) | Состав препарата нейрегулина | |
| Chapman et al. | Insulin aspart: a review of its use in the management of type 1 and 2 diabetes mellitus | |
| US5681814A (en) | Formulated IGF-I Composition | |
| US20110195896A1 (en) | Isoform-specific insulin analogues | |
| JP2009528355A (ja) | 代謝調節因子およびその使用 | |
| US7825090B2 (en) | Use of ghrelin and unacylated ghrelin compositions for treating insulin resistance | |
| CA2145501C (en) | Method for treatment or prevention of obesity | |
| US20140038887A1 (en) | Glial cell line derived neurotrophic factor, obesity, and obesity-related diseases and conditions | |
| US10682393B2 (en) | Glial cell line derived neurotrophic factor, obesity, and obesity-related diseases and conditions | |
| MXPA99009972A (en) | Leptin as an inhibitor of tumor cell proliferation | |
| KR100361717B1 (ko) | 조골세포증식인자 | |
| Mercer et al. | Leptin and obesity: the story so far and its therapeutic implications | |
| US20200000884A1 (en) | Treatment of adult growth hormone deficiency with human growth hormone analogues | |
| EA050539B1 (ru) | Жидкие составы аналогов глюкагона | |
| Schliess et al. | Insulin glulisine: preclinical hallmarks and clinical efficacy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20130426 |