PL202265B1

PL202265B1 - Method of receiving new analogues of somatostatine

Info

Publication number: PL202265B1
Application number: PL357230A
Authority: PL
Inventors: Józef Edward Przybylski; - Przybylska Krystyna Siemaszko
Original assignee: Przybylski Jozef Edward; Siemaszko Przybylska Krystyna
Priority date: 2002-11-20
Filing date: 2002-11-20
Publication date: 2009-06-30
Also published as: WO2004046174A2; PL357230A1; AU2003285839A1

Abstract

1. Sposób otrzymywania nowych analogów somatostatyny, wykazujących właściwości hamowania uwalniania hormonu wzrostu o wzorze ogólnym 7, w którym X jest resztą stanowiącą H lub NH2 lub CH2-CH2-NH2 lub CH2-CH2-OH lub C(CH2OH)2CH3 a Y jest resztą podaną we wzorze 3 lub wzorze 4 lub wzorze 5 lub wzorze 6, znamienny tym, że związek o wzorze ogólnym 10 osadza się na żywicy Merrifielda, poddaje się acylowaniu za pomocą związku o wzorze 11 lub wzorze 12 lub wzorze 13 lub wzorze 14, zdejmuje się z żywicy w reakcji aminolizy za pomocą związku NH2H; gdzie X ma podane wyżej znaczenia, usuwa się grupy ochronne w reakcji redukcji sodem w ciekłym amoniaku, a następnie utlenianiu produktu.1. A method for obtaining new somatostatin analogues exhibiting growth hormone release inhibiting properties of general formula 7, wherein X is a residue being H or NH2 or CH2-CH2-NH2 or CH2-CH2-OH or C(CH2OH)2CH3 and Y is a residue given in formula 3 or formula 4 or formula 5 or formula 6, characterized in that the compound of general formula 10 is deposited on Merrifield resin, acylated using a compound of formula 11 or formula 12 or formula 13 or formula 14, removed from the resin in an aminolysis reaction using a compound NH2H; where X has the meanings given above, the protecting groups are removed in a reduction reaction with sodium in liquid ammonia, and then the product is oxidized.

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nowych analogów somatostatyny wykazujących właściwości hamowania uwalniania hormonu wzrostu.The subject of the invention is a method of obtaining new somatostatin analogues with growth hormone release inhibitory properties.

Somatostatyna (SS-14) powstaje z prohormonu na drodze proteolizy i ma wzór strukturalny przedstawiony we wzorze 1. Znana jest jako czynnik hamujący uwalnianie somatotropiny (SRIF) lub hormon hamujący uwalnianie hormonu wzrostu (GHR-IH). Jej aktywność jest wielokierunkowa, uzależniona od obszaru, w którym jest wydzielana. I tak oprócz podwzgórza somatostatynę wytwarza na przykład gruczoł tarczowy, łożysko, trzustka, ośrodkowy układ nerwowy, błona śluzowa różnych odcinków przewodu pokarmowego, komórki D żołądka. Powstaje ona też w błonie śluzowej trzonu i części przedodźwiernikowej żołądka, dwunastnicy i dalszych odcinkach jelita cienkiego. Wykryto ją również w rdzeniowych zwojach nerwowych, krezkowych zwojach nerwowych, rdzeniu nerwowym całego ciała, a także w neuronach Auerbacha. Jest określana jako peptyd mózgowo-jelitowo-trawienny, zaś sposób działania może być endokrynalny, neurokrynalny oraz egzo i parakrynalny. Różnorodność działań somatostatyny w połączeniu z jej anatomicznym rozmieszczeniem ma wpływ na wiele istotnych funkcji życiowych, co znalazło lecznicze zastosowanie u chorych z obfitym krwawieniem z górnego odcinka przewodu pokarmowego, ograniczając przepływ krwi w obszarze trzewnym.Somatostatin (SS-14) is formed from prohormone by proteolysis and has the structural formula shown in Formula 1. It is known as somatotropin release inhibiting factor (SRIF) or growth hormone release inhibiting hormone (GHR-IH). Its activity is multidirectional, depending on the area in which it is secreted. Thus, in addition to the hypothalamus, somatostatin is produced by, for example, the thyroid gland, placenta, pancreas, central nervous system, mucosa of various sections of the gastrointestinal tract, stomach D cells. It is also formed in the mucosa of the stomach and the pre-antral part of the stomach, duodenum and other parts of the small intestine. It has also been found in the spinal ganglia, the mesenteric ganglia, the whole body nerve cord, and in Auerbach's neurons. It is referred to as a cerebral-enteric-digestive peptide and the mode of action can be endocrine, neurocrine, exo and paracrinal. The variety of somatostatin's actions, combined with its anatomical distribution, affect many important vital functions, which has been used therapeutically in patients with profuse bleeding from the upper gastrointestinal tract, limiting blood flow in the visceral area.

Ograniczenia terapeutycznej efektywności somatostatyny SS-14 wynikają z krótkiego okresu półtrwania (około 4 minut) oraz szerokiego spektrum działania.The limitations of the therapeutic effectiveness of somatostatin SS-14 result from the short half-life (about 4 minutes) and the broad spectrum of activity.

W badaniach zależności między strukturą a czynnością biologiczną stwierdzono, ż e istotnym dla wiązalności z receptorem jest fragment 7 - 10 natywnej somatostatyny o sekwencji przedstawionej we wzorze 2.In studies on the relationship between the structure and biological activity, it was found that the 7-10 fragment of native somatostatin with the sequence shown in formula 2 is important for binding to the receptor.

W stanie techniki znane jest z polskiego opisu patentowego nr 169867 rozwiązanie sposobu otrzymywania nowych analogów somatostatyny, wykazujących właściwości hamowania uwalniania hormonu wzrostu.In the state of the art, the Polish patent description No. 169867 describes a solution for the preparation of new somatostatin analogues showing growth hormone release inhibitory properties.

Niedogodnością znanego rozwiązania jest istnienie w strukturze chemicznej analogów deaminokwasów będących „obcym” dla organizmu ludzkiego.The disadvantage of the known solution is the existence in the chemical structure of analogs of deamino acids which are "foreign" to the human organism.

Istotą rozwiązania według wynalazku jest sposób otrzymywania nowych analogów somatostatyny o wzorze ogólnym 7, w którym X jest resztą stanowiącą H lub NH2 lub CH2-CH2-NH2 lub CH2-CH2-OH lub C(CH2OH)2CH3, a Y jest resztą podaną we wzorze 3 lub wzorze 4 lub wzorze 5 lub wzorze 6, według wynalazku polega na tym, że związek o wzorze ogólnym 10, osadzony na żywicy Merrifielda poddaje się acylowaniu za pomocą związku o wzorze 11 lub wzorze 12 lub wzorze 13 lub wzorze 14, zdejmuje się z żywicy w reakcji aminolizy za pomocą związku NH2X, gdzie X ma podane wyżej znaczenie, usuwa się grupy ochronne w reakcji redukcji sodem w ciekłym amoniaku, a następnie utlenianiu produktu. Ponadto istotnym jest, że stosuje się korzystnie związek o wzorze 10 otrzymany w wyniku osadzenia Boc-Cys(Bzl) na żywicy Merrifielda i poddania tak otrzymanego substratu kolejnym acylowaniom związkami o wzorach Boc-Thr(Bzl). Boc-Lys(Tos), Boc-Trp-(Boc-His-Tos) i Boc-Phe, poprzedzanym usuwaniem grupy Boc z każ dego kolejnego substratu acylowego.The essence of the solution according to the invention is the method of obtaining new somatostatin analogues of the general formula 7, in which X is a residue representing H or NH2 or CH2-CH2-NH2 or CH2-CH2-OH or C (CH2OH) 2CH3, and Y is the residue given in the formula 3 or Formula 4 or Formula 5 or Formula 6, according to the invention, the compound of Formula 10 supported on Merrifield resin is acylated with Formula 11 or Formula 12 or Formula 13 or Formula 14, is removed from of the resin by aminolysis with NH2X, where X is as defined above, the protective groups are removed by reduction with sodium in liquid ammonia followed by oxidation of the product. Moreover, it is significant that the compound of formula 10 obtained by depositing Boc-Cys (Bzl) on a Merrifield resin and subjecting the substrate thus obtained to further acylations with compounds of the formulas Boc-Thr (Bzl) is preferably used. Boc-Lys (Tos), Boc-Trp- (Boc-His-Tos) and Boc-Phe, followed by removal of the Boc group from each successive acyl substrate.

W sposobie wedł ug wynalazku został y wyeliminowane wszystkie deaminokwasy, które są nienaturalne dla organizmu ludzkiego. Dokonana zamiana tryptofanu na histydynę, eliminuje powstawanie w trakcie procesu utleniania wytwarzanych przez tryptofan fioletowych zabarwień.In the method according to the invention, all deamino acids which are unnatural for the human body have been eliminated. The replacement of tryptophan with histidine eliminates the purple coloration produced by tryptophan during the oxidation process.

Sposób według wynalazku prowadzi do uzyskania produktów według wzoru ogólnego 7, wykazujących wielokrotnie silniejsze właściwości hamujące wydzielanie hormonu wzrostu i wielokrotnie wyższą odporność na degradacje enzymatyczną, aniżeli natywna somatostatyna.The method according to the invention leads to the obtaining of products according to the general formula 7, showing many times stronger properties of inhibiting the secretion of growth hormone and many times higher resistance to enzymatic degradation than native somatostatin.

P r z y k ł a d. Związek o wzorze 10 powstaje w wyniku osadzenia Boc-Cys(Bzl) na ż ywicy Merrifielda i poddania tak otrzymanego substratu kolejnym acylowaniom związkami o wzorach Boc-Thr(Bzl), Boc-Lys(Tos), Boc-Trp-(Boc-His-Tos) i Boc-Phe poprzedzanym usuwaniem grupy Boc z każ dego kolejnego substratu acylowanego. Chroniony peptyd liniowy o strukturze przedstawionej we wzorze 8 otrzymuje się metodą syntezy na nośniku stałym. Przyłączenie reszty C-końcowej N-t-butyloksykarbonylo-S-benzylocysteiny do nośnika realizuje się w reakcji soli cezowej chronionego aminokwasu z chlorometylowaną żywicą poliestrową o stopniu osadzenia chloru 0,67 mmola/g żywicy.Example 10 The compound of formula 10 is formed by depositing Boc-Cys (Bzl) on a Merrifield resin and subjecting the substrate thus obtained to further acylations with compounds of the formulas Boc-Thr (Bzl), Boc-Lys (Tos), Boc- Trp- (Boc-His-Tos) and Boc-Phe followed by removal of the Boc group from each successive acylated substrate. The protected linear peptide with the structure shown in formula 8 is obtained by solid support synthesis. The C-terminal residue of N-t-butyloxycarbonyl-S-benzylcysteine is attached to the support by reacting the cesium salt of the protected amino acid with a chloromethylated polyester resin with a chlorine load of 0.67 mmol / g resin.

Grupy α-aminowe przyłączanych aminokwasów osłania się ugrupowaniem t-butylooooksykarbonyylowym (Boc), a aminokwasu N-końcowego ugrupowaniem benzyloksykarbonylowym (Z).The α-amino groups of the attached amino acids are protected by the t-butyloxycarbonyl (Boc) moiety and the N-terminal amino acid by the benzyloxycarbonyl (Z) moiety.

Grupy funkcyjne łańcuchów bocznych treoniny i cysteiny oraz grupę tiolową kwasu β-mercaptopropiowego i jego pochodnych zabezpiecza się przez zastosowanie osłony benzylowej (Bzl).The side chain functional groups of threonine and cysteine and the thiol group of β-mercaptopropic acid and its derivatives are protected by using a benzyl (Bzl) shield.

Boczną grupę aminową lizyny chroni się przez użycie reszty p-touenosulfonylowej (Tos).The lysine pendent amino group is protected by the use of a p-tetraenesulfonyl (Tos) residue.

PL 202 265 B1PL 202 265 B1

Syntezę na stałym nośniku przeprowadza się w następujący sposób.The solid support synthesis is carried out as follows.

Odpowiednią ilość polimeru zawierającego 0,5 mmola osadzonego aminokwasu, czyli Boc-Cys(Bzl) w ilości 1,05 g przy stopniu osadzenia 0,48 mmola/g, zalewa się 15 cm³ chlorku metylenu i pozostawia się układ na 12 godzin celem spęcznienia polimeru. Po up ływie tego czasu żywicę z osadzonym na niej aminokwasem poddaje się pięciu cyklom zło ż onym z odblokowania, neutralizacji i sprzęgania. Każdy cykl składa się z nastę pujących etapów. W etapie pierwszym przeprowadza się usunięcie grupy Boc poprzez użycie 40% roztworu kwasu trifluorooctowego w chlorku metylenu z dodatkiem 1% anizolu. W operacji pierwszej używa się tu 10 cm³ roztworu przez 5 minut, a w operacji drugiej 10 cm³ roztworu przez 25 minut. W etapie drugim przeprowadza się przemywanie w pię ciu kolejnych operacjach, które podano niż ej:The appropriate amount of polymer containing 0.5 mmol of deposited amino acid, i.e. Boc-Cys (Bzl) in the amount of 1.05 g with a degree of embedding of 0.48 mmol / g, is poured over with 15 cm ³ of methylene chloride and the system is left to swell for 12 hours. polymer. After this time has elapsed, the resin with the amino acid deposited thereon is subjected to five cycles of deblocking, neutralization and coupling. Each cycle consists of the following steps. In the first step, the removal of the Boc group is carried out by using a 40% solution of trifluoroacetic acid in methylene chloride with the addition of 1% anisole. The first operation is used here 10 cm ³ the solution for 5 minutes, and the second operation 10 cm ³ the solution for 25 minutes. In the second stage, washing is carried out in five successive operations, which are given below:

3x chlorkiem metylenu w ilości 10 cm³ przez czas 3 minut:3x with methylene chloride in an amount of 10 cm ³ for 3 minutes:

3x mieszaniną chlorek metylenu: metanol (1:1) w ilości 10 cm³ przez czas 3 minut;3x with methylene chloride: methanol (1: 1) in an amount of 10 cm ³ for 3 min;

3x metanolem w ilości 10 cm³ (1:1) w ilości 10 cm³ przez czas 3 minut:3x methanol in the amount of 10 cm ³ (1: 1) in the amount of 10 cm ³ for 3 minutes:

3x chlorkiem metylenu w ilości 10 cm³ przez czas 3 minut.3x with methylene chloride in an amount of 10 cm ³ for 3 minutes.

Po wykonaniu wszystkich opisanych wyżej operacji przemywania, realizuje się etap trzeci, polegający na zobojętnianiu trifluorooctanu peptydylożywicy 10% roztworem trietyloaminy w chlorku metylenu. W operacji pierwszej przeprowadza się zobojętnianie przy użyciu 10 cm³ roztworu przez 5 minut, a w drugiej operacji przy uż yciu tej samej iloś ci roztworu przez czas 10 minut. Po wykonaniu zoboję tniania przeprowadza się ponownie przemywanie w pięciu kolejnych operacjach opisanych wyżej dla etapu drugiego. W następującym teraz etapie czwartym przeprowadza się acylowanie. Do schłodzonego roztworu 1,5 mmola Boc-Thr(Bzl) i 1,5 mmola N-hydroksybenzotriazolu w najmniejszej objętości mieszaniny chlorek metylenu: dimetyloformamid (1:1) dodaje się 1,5 mmola dicykloheksyklokarbodiimidu w chlorku metylenu, przy czym ten etap wykonuje się odrębnie, poza właściwym naczyniem reakcyjnym. Po upływie co najmniej 15 minut odsącza się wytrącony dicykloheksylomocznik, a otrzymany w ten sposób przesącz wprowadza się do naczynia reakcyjnego i wytrząsa w wytrząsarce laboratoryjnej przez okres 2 do 3 godzin.After all the washing operations described above have been carried out, the third step is neutralized by neutralizing the peptidyl trifluoroacetate resin with a 10% solution of triethylamine in methylene chloride. In the first operation, neutralization is carried out with 10 cm ^{3 of} solution for 5 minutes, and in the second operation, with the same amount of solution for 10 minutes. After neutralization is performed, washing is performed again in five successive operations described above for the second step. In the now following fourth step, acylation is performed. To a cooled solution of 1.5 mmol Boc-Thr (Bzl) and 1.5 mmol N-hydroxybenzotriazole in the minimum volume of methylene chloride: dimethylformamide (1: 1) 1.5 mmol of dicyclohexycarbodiimide in methylene chloride are added. separate, outside the actual reaction vessel. After at least 15 minutes, the precipitated dicyclohexylurea is filtered off, and the filtrate thus obtained is introduced into the reaction vessel and shaken on a laboratory shaker for 2 to 3 hours.

W nastę pnym etapie pią tym, przeprowadza się ponowne przemywanie realizując w tym celu wszystkie zabiegi technologiczne, jak opisano dla etapu drugiego. W szóstym etapie cyklu technologicznego otrzymywania nowych analogów somatostatyny, prowadzi się kontrolę stopnia acylowania. Stopień ten kontroluje się przy pomocy ninhydrynowego testu Kaisera i testu chloranilowego. W przypadku pozytywnego wyniku testu, acylowanie powtarza się, natomiast uzyskanie negatywnego wyniku testu acylowania pozwala na przejście do następnego etapu, którym jest zdejmowanie grupy Boc z chronionego peptydu. Po przyłączeniu ostatniego N-końcowego aminokwasu i zdjęciu grupy t-butyloksykarbonylowej osadzony peptyd acyluje się kwasem e-mercapto-e,e-cyklopentametyleno-S-benzylopropionowym analogicznie jak w czasie acylowania aminokwasem i stosuje się ten sam ciąg przemywań i ten sam sposób kontroli przebiegu reakcji acylowania. Po przyłączeniu kwasu β-mercapto-e,e-cyklopentametyleno-S-benzylopropionowego żywicę z osadzonym na niej peptydem dokładnie przemywa się w dziewięciu kolejnych operacjach: trzykrotnie chlorkiem metylenu użytego za każdym razem w ilości 10 cm³, trzykrotnie etanolem użytym za każdym razem w ilości 10 cm³ oraz ponownie trzykrotnie chlorkiem metylenu w tej samej ilości.In the next fifth step, another washing is carried out, for this purpose all the processing steps described for the second step are carried out. In the sixth stage of the technological cycle for obtaining new somatostatin analogues, the acylation degree is controlled. This degree is monitored by the Kaiser ninhydrin test and the chloranil test. In case of a positive result of the test, the acylation is repeated, while obtaining a negative result of the acylation test allows to proceed to the next step, which is removal of the Boc group from the protected peptide. After attaching the last N-terminal amino acid and removing the t-butyloxycarbonyl group, the deposited peptide is acylated with e-mercapto-e, e-cyclopentamethylene-S-benzylpropionic acid in the same way as during acylation with amino acid and the same wash sequence and the same method of course control acylation reaction. After the addition of β-mercapto-e, e-cyclopentamethylene-S-benzylpropionic acid, the resin with the peptide deposited on it is thoroughly washed in nine successive operations: three times with methylene chloride each time in an amount of 10 cm ³ , three times with ethanol used each time in 10 cm ³ and again three times with methylene chloride in the same amount.

Otrzymany substrat suszy się w eksykatorze próżniowym nad pięciotlenkiem fosforu i wodorotlenkiem potasowym, a następnie waży. Tak otrzymany chroniony peptyd zdejmuje się z żywicy Merrifielda poprzez aminolizę etanoloaminą w następujący sposób. Do mieszaniny 0,5 mmola peptydu na żywicy i 14 cm³ metanolu dodaje się 0,05 mola etanoloaminy i całość ogrzewa się przez 5 godzin w temperaturze wrzenia metanolu. Następnie odsącza się żywicę, a do metanolowego roztworu peptydu dodaje się 200 cm³ wody. Wytrąca się biały osad, który odsącza się, przemywa wodą i krystalizuje z mieszaniny metanol: eter etylowy. Zdjęty z żywicy chroniony peptyd najpierw poddaje się deprotekcji poprzez redukcję sodem w ciekłym amoniaku, a następnie cyklizacji poprzez utworzenie mostka disulfidowego na drodze utleniania grup tiolowych przy pomocy 0,01 molowego wodnego roztworu żelazocyjanku potasowego lub 0,1 molowego roztworu jodu w metanolu. Surowy cykliczny peptyd odsala się metodą chromatografii kolumnowej z wypełnieniem Sephadex G-15 eluując 50% wodnym roztworem kwasu octowego. W drugim etapie odsolony peptyd poddaje się oczyszczaniu na kolumnie jonowymiennej, stosując jako wypełnienie Sephaarose. W ostatnim etapie peptyd poddaje się oczyszczaniu na kolumnie wypełnionej Sephadexem LH-20. Peptyd eluuje się 10% wodnym roztworem kwasu octowego, a połączone frakcje zawierające czysty produkt poddaje się liofilizacji. Uzyskuje sięThe obtained substrate is dried in a vacuum desiccator over phosphorus pentoxide and potassium hydroxide and then weighed. The protected peptide thus obtained is removed from the Merrifield resin by aminolysis with ethanolamine in the following manner. To a mixture of 0.5 mmol of the peptide resin and 14 cm ³ of methanol is added 0.05 mole of ethanolamine and the mixture is heated for 5 hours at the reflux temperature of methanol. The resin is then filtered off and the methanolic solution of the peptide treated with 200 cm ³ of water. A white precipitate forms which is filtered off, washed with water and crystallized from methanol: diethyl ether. The removed protected peptide from the resin is first deprotected by reduction with sodium in liquid ammonia and then cyclized by formation of a disulfide bridge by oxidation of the thiol groups with a 0.01 molar aqueous solution of potassium ferrocyanide or a 0.1 molar solution of iodine in methanol. The crude cyclic peptide is desalted by Sephadex G-15 column chromatography eluting with 50% aqueous acetic acid. In the second step, the desalted peptide is purified on an ion exchange column using Sephaarose as packing. In the last step, the peptide is purified on a column filled with Sephadex LH-20. The peptide is eluted with 10% aqueous acetic acid and the combined fractions containing pure product are freeze-dried. Is obtained

PL 202 265 B1 w ten sposób czysty peptyd przedstawiony wzorem 7, w którym X oznacza grupę D-etanoloamina a Y oznacza grupę o wzorze 3.Thus, a pure peptide represented by the formula 7, wherein X is the group D-ethanolamine and Y is the group of the formula 3.

Związek ten charakteryzuje skręcalność [a]²⁰D = -30,32 c = 0,5; 10% kwas octowy, jon molekularny 880, czas retencji w wysokosprawnej chromatografii cieczowej równy RT = 7,091 (peptyd eluowano izokratycznie w układzie rozpuszczalników 48% B i 52% A, gdzie A:0,1% kwas trifluorooctowy w wodzie, a B:80% acetonitryl w A, szybkość przepływu 1 cm na minutę, detekcja przy długości fali 226 nm). Skład aminokwasowy peptydu potwierdzono wykonując hydrolizę peptydu sześcionormalnym roztworem kwasu solnego w temperaturze 110°C, a następnie przeprowadzając analizę ilościową składu aminokwasowego przy pomocy automatycznego analizatora aminokwasów.This relationship is characterized by rotation [a] ²⁰ D = -30.32 c = 0.5; 10% acetic acid, molecular ion 880, retention time in high performance liquid chromatography equal to RT = 7.091 (the peptide was eluted isocratic in a 48% B and 52% A solvent system, where A: 0.1% trifluoroacetic acid in water and B: 80 % acetonitrile in A, flow rate 1 cm per minute, detection at 226 nm). The amino acid composition of the peptide was confirmed by hydrolysis of the peptide with a six-normal hydrochloric acid solution at 110 ° C, followed by quantitative analysis of the amino acid composition using an automatic amino acid analyzer.

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 142 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

AJa-Gly-Cys-Lys-Asu-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-CysAJa-Gly-Cys-Lys-Asu-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys

WZÓR 1MODEL 1

8 9 108 9 10

Phe-Trp-(His)-Lys-Thr o<Phe-Trp- (His) -Lys-Thr o <

CH_Z-COWZÓR2CH _Z -PATTERN2

WZÓR 3MODEL 3

H ch₂-coHCk /CH-CO-H ch ₂ -coHCk / CH-CO-

WZÓR 4MODEL 4

WZÓR 5 h₃c ,α^-co-MODEL 5 h ₃ c, α ^ -co-

Y-Phe-(His)-Trp-Lys-Thr-Cys-NH-XY-Phe- (His) -Trp-Lys-Thr-Cys-NH-X

WZÓR 6MODEL 6

WZÓR 7MODEL 7

CH2CO-Phe-(His)-Trp-Lys(Tos)Thr(Bzl)-Cys(Bzl)-NH-CH^-CH^OHCH2CO-Phe- (His) -Trp-Lys (Tos) Thr (Bzl) -Cys (Bzl) -NH-CH ^ -CH ^ OH

S-BzlS-Bzl

WZÓR 8MODEL 8

PL 202 265 B1PL 202 265 B1

Claims

Patent claims

1. The method of obtaining new somatostatin analogues showing growth hormone release inhibitory properties of general formula 7, in which X is the residue being H or NH2 or CH2-CH2-NH2 or CH2-CH2-OH or C (CH2OH) 2CH3 and Y is the residue according to formula 3 or formula 4 or formula 5 or formula 6, characterized in that the compound of formula 10 is deposited on a Merrifield resin, acylated with a compound of formula 11 or formula 12 or formula 13 or formula 14, is removed from the resin by an aminolysis reaction with the compound NH2H; where X is as defined above, the protective groups are removed by reduction with sodium in liquid ammonia followed by oxidation of the product.

2. The method according to p. A compound according to claim 1, characterized in that the compound of formula 10 obtained by depositing Boc-Cys (Bzl) on a Merrifield resin and subjecting the thus obtained substrate to further acylation with compounds of the formulas Boc-Thr (Bzl), Boc-Lys (Tos), Boc-Trp- (Boc-His-Tos) and Boc-Phe.