PL204909B1 - Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus - Google Patents

Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus

Info

Publication number
PL204909B1
PL204909B1 PL366413A PL36641304A PL204909B1 PL 204909 B1 PL204909 B1 PL 204909B1 PL 366413 A PL366413 A PL 366413A PL 36641304 A PL36641304 A PL 36641304A PL 204909 B1 PL204909 B1 PL 204909B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
lipase
mixture
solution
polymer
dehydrated
Prior art date
Application number
PL366413A
Other languages
English (en)
Other versions
PL366413A1 (pl
Inventor
Tadeusz Antczak
Mirosława Szczęsna-Antczak
Stanisław Bielecki
Małgorzata Rzyska
Original Assignee
Politechnika Lodzka
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Politechnika Lodzka filed Critical Politechnika Lodzka
Priority to PL366413A priority Critical patent/PL204909B1/pl
Publication of PL366413A1 publication Critical patent/PL366413A1/pl
Publication of PL204909B1 publication Critical patent/PL204909B1/pl

Links

Landscapes

  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus.
Z czasopisma Biotechnologia PI 44 (1999) s. 172 jest znany sposób kapsułkowania immobilizowanych in situ endolipaz Mucor w żelu alginianowym i karagenowym.
W czasopiśmie Biotechnology Techniques 11 (1997) s. 9 opisano sposób pułapkowania immobilizowanej in situ endolipazy Mucor javanicus w żelu krzemionkowym.
Natomiast w czasopiśmie Journal Molecular Catalysis B: Enzymatic 19-20 (2002) s. 261 opisano sposób pułapkowania związanych z membranami komórkowymi lipaz Mucor w alkoholu poliwinylowym.
Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus, w drodze zmieszania immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych lipazy z roztworem polimeru, korzystnie chitozanu, ż elatyny, alkoholu poliwinylowego lub ich mieszaniny, w buforze oraz umieszczenia mieszaniny polimeru i lipazy w roztworze koagulującym, według wynalazku polega na tym, że immobilizacji poddaje się lipazę w postaci odwodnionego i rozdrobnionego do wielkości drobin 3 - 10 μm mycelium, którą miesza się z roztworem polimeru w kwasie octowym lub mlekowym, wzbogaconym korzystnie gliceryną lub poliwinylopirolidonem dodanymi w ilości 1 - 12% w stosunku do masy całej mieszaniny, ewentualnie zawierającym zagęszczacz, stosując 1 - 10% lipazy w stosunku do masy polimeru, po czym otrzymaną jednorodną mieszaninę odpowietrza się pod próżnią w czasie 15 - 45 minut, wkrapla się do roztworu koagulującego i inkubuje w temperaturze pokojowej w czasie 60 - 360 minut. Otrzymany w wyniku inkubacji preparat lipazy, w postaci kulek o wymiarach 1 - 4 mm lub nitek o średnicy 1 - 5 mm, odwadnia się acetonem lub liofilizuje i przechowuje w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C. Stosuje się chitozan o masie cząsteczkowej 10000 - 70000 kD, stopniu deacetylacji 20 - 90% i wilgotności 9 - 14% oraz alkohol poliwinylowy o masie cząsteczkowej 20000 - 80000 kD. Jako roztwór koagulujący stosuje się 1 - 10% roztwór tripolifosforanu lub heksametapolifosforanu w buforze o pH 5 - 8 lub 0,1 - 5% roztwór aldehydu glutarowego w buforze o pH 5 - 8, zawierający 0,05 - 5% CaCl2. Jako zagęszczacz używa się poliwinylopirolidon lub alginian sodowy.
Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus, w drodze zmieszania immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych lipazy z roztworem polimeru, korzystnie chitozanu, żelatyny, alkoholu poliwinylowego lub ich mieszaniny, w buforze oraz umieszczenia mieszaniny polimeru i lipazy w roztworze koagulującym w postaci oleju rzepakowego, według wynalazku polega również na tym, że odpowietrzoną mieszaninę lipazy z polimerem wkrapla się do oleju rzepakowego schłodzonego do temperatury od -40°C do -15°C i inkubuje w czasie 5-48 godzin, po czym otrzymany preparat ogrzewa do temperatury 25°C i ponownie zamraża do temperatury od -40°C do -15°C, powtarzając czynności zamrażania i ogrzewania 2-5- krotnie, następnie preparat przemywa się, odwadnia acetonem lub liofilizuje i przechowuje w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie aktywnych i stabilnych preparatów lipazy Mucor racemosus o rozkładzie objętości porów umożliwiającym efektywny transport substratów i produktów. Preparaty lipaz wytworzone sposobem według wynalazku są przeznaczone do katalizy reakcji estryfikacji w środowisku rozpuszczalników organicznych, korzystnie sacharydów i kwasów tłuszczowych, alkoholi i kwasów tłuszczowych oraz do hydrolizy estrów w środowisku wodnym.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d I.
Do 100 ml 2,7% roztworu chitozanu o masie cząsteczkowej 45800 kD, stopniu deacetylacji 77,6% i wilgotności 12,8%, w 1,2% kwasie octowym dodano 2,5 g lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych, w postaci odwodnionego i rozdrobnionego mycelium i całość mieszano do osiągnięcia jednorodnej mieszaniny, którą następnie odpowietrzano pod próżnią w czasie 25 minut. Otrzymaną mieszaninę lipaza-chitozan wkroplono do 5% roztworu heksametapolifosforanu w buforze Tris-HCl o pH 7,0 i inkubowano w czasie 75 minut. Wytworzony preparat lipazy w postaci kulek przemyto 3-razy acetonem i pozostawiano do wysuszenia w temperaturze pokojowej. Preparat immobilizowanej lipazy przechowywano w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C.
P r z y k ł a d II.
Do 100 ml 4,5% roztworu chitozanu o masie cząsteczkowej 45800 kD, stopniu deacetylacji 77,6% i wilgotności 12,8%, w 1,8% kwasie octowym dodano 6% poliwinylopirolidonu i 4,5 g lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych, w postaci odwodnionego i rozdrobnionego mycelium. Całość mieszano do osiągnięcia jednorodnej mieszaniny, którą następnie
PL 204 909 B1 odpowietrzano pod próżnią w czasie 45 minut. Wytworzoną mieszaninę lipaza-chitozan wkraplano do 5% roztworu heksametapolifosforanu w buforze Tris-HCl o pH 7,0 i inkubowano w czasie 75 minut. Otrzymano preparat lipazy w postaci kulek. Dalej postępowano jak w przykładzie I.
P r z y k ł a d III.
Do 100 ml 4,5% roztworu chitozanu o masie cząsteczkowej 45800, stopniu deacetylacji 77,6% i wilgotno ś ci 12,8%, w 1,8% kwasie mlekowym dodano 1,2 g alkoholu poliwinylowego o masie czą steczkowej 72000 kD, stopniu polimeryzacji 1600 i stopniu deacetylalacji 97,5 - 99,5% oraz 4,5 g lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych, w postaci odwodnionego i rozdrobnionego mycelium. Cał ość mieszano do osią gnięcia jednorodnej mieszaniny, którą nastę pnie odpowietrzano pod próżnią w czasie 45 minut. Wytworzoną mieszaninę lipaza-chitozan wkraplano do 5% roztworu tripolifosforanu w buforze Tris-HCl o pH 7,0 i inkubowano w czasie 240 minut. Otrzymano preparat lipazy w postaci kulek. Dalej postępowano jak w przykładzie I.
P r z y k ł a d IV.
Do 40 ml 25% roztworu żelatyny w buforze octanowym o pH 5 dodano 2,5 g alginianu sodu, 60 ml glicerolu i 2 g lipazy w postaci odwodnionego i rozdrobnionego mycelium lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych. Całość mieszano do osiągnięcia jednorodnej mieszaniny, którą odpowietrzano pod próżnią w czasie 15 minut. Wytworzoną mieszaninę wstrzykiwano do 250 ml 1% aldehydu glutarowego, zawierającego 20 mM CaCl2 i inkubowano w czasie 1 godziny w temperaturze 25°C. Wytworzony preparat lipazy, w postaci nitek o średnicy 3 mm, przemyto wodą liofilizowano i przechowywano w temperaturze 4°C.
P r z y k ł a d V.
Do 100 ml 14% roztworu alkoholu poliwinylowego o masie cząsteczkowej 72000 kD, stopniu polimeryzacji 1600 i stopniu deacetylacji 97,5 - 99,5%, w wodzie destylowanej dodano 2 g lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych, w postaci odwodnionego i rozdrobnionego cymelium i całość mieszano do osiągnięcia jednorodnej mieszaniny. Wytworzoną mieszaninę odpowietrzano pod próżnią w czasie 45 minut, wkraplano do oleju rzepakowego schłodzonego do temperatury 0°C i inkubowano w temperaturze -20°C w czasie 10 godzin. Następnie uformowany w postaci kulek preparat lipazy ogrzewano do temperatury 25°C i ponownie zamrażano do temperatury -20°C. Czynność tę powtarzano trzykrotnie. Kuleczki preparatu przemyto następnie wodą z dodatkiem 0,1% tritonu X-100 i dalej postępowano jak w przykładzie I.
P r z y k ł a d VI.
ml 4,5% roztworu chitozanu o masie cząsteczkowej 45800 kD, stopniu deacetylacji 77,6% i wilgotności 12,8%, w 1,8% kwasie octowym zmieszano z 20 ml 25% roztworu żelatyny napęczniałej w wodzie i dodano 4,5 g lipazy Mucor racemosus immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych, w postaci odwodnionego i rozdrobnionego mycelium. Cał o ść mieszano do osią gnię cia jednorodnej mieszaniny, którą następnie odpowietrzano pod próżnią w czasie 45 minut. Otrzymaną mieszaninę lipaza-chitozan-żelatyna wkraplano do 5% roztworu heksametapolifosforanu w buforze Tris-HCl o pH 7,0 i inkubowano w czasie 75 minut. Wytworzony preparat lipazy, w postaci kulek, sieciowano 1% roztworem aldehydu glutarowego, przemyto 1% glicyną odwodniono przemywając 3-razy acetonem i liofilizowano. Preparat immobilizowanej lipazy przechowywano w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C.

Claims (10)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus, w drodze zmieszania immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych lipazy z roztworem polimeru, korzystnie chitozanu, ż elatyny, alkoholu poliwinylowego lub ich mieszaniny, w buforze oraz umieszczenia mieszaniny polimeru i lipazy w roztworze koagulującym, znamienny tym, że immobilizacji poddaje się lipazę w postaci odwodnionego i rozdrobnionego do wielkości drobin 3 - 10 μ m mycelium, którą miesza się z roztworem polimeru w kwasie octowym lub mlekowym, wzbogaconym korzystnie gliceryn ą lub poliwinylopirolidonem dodanymi w ilości 1 - 12% w stosunku do masy całej mieszaniny, ewentualnie zawierającym zagęszczacz, stosując 1 - 10% lipazy w stosunku do masy polimeru, po czym otrzymaną, jednorodną mieszaninę odpowietrza się pod próżnią w czasie 15 - 45 minut, wkrapla się do roztworu koagulującego i inkubuje w temperaturze pokojowej w czasie 60 - 360 minut, po czym otrzymany w wyniku inkubacji preparat
    PL 204 909 B1 lipazy, w postaci kulek o wymiarach 1 - 4 mm lub nitek o średnicy 1 - 5 mm, odwadnia się acetonem lub liofilizuje i przechowuje w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C.
  2. 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się chitozan o masie cząsteczkowej 10000 - 70000 kD, stopniu deacetylacji 20 - 90% i wilgotności 9 - 14%.
  3. 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się alkohol poliwinylowy o masie cząsteczkowej 20000 - 80000 kD.
  4. 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako roztwór koagulujący stosuje się 1 - 10% roztwór tripolifosforanu lub heksametapolifosforanu w buforze o pH 5 - 8.
  5. 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako roztwór koagulujący stosuje się 0,1 - 5% roztwór aldehydu glutarowego w buforze o pH 5 - 8, zawierający 0,05 - 5% CaCl2.
  6. 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako zagęszczacz używa się poliwinylopirolidon lub alginian sodowy.
  7. 7. Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus, w drodze zmieszania immobilizowanej in situ w strukturach komórkowych lipazy z roztworem polimeru, korzystnie chitozanu, żelatyny, alkoholu poliwinylowego lub ich mieszaniny, w buforze oraz umieszczenia mieszaniny polimeru i lipazy w roztworze koagulującym w postaci oleju rzepakowego, znamienny tym, że immobilizacji poddaje się lipazę w postaci odwodnionego i rozdrobnionego do wielkości drobin 3 - 10 μm mycelium, którą miesza się z roztworem polimeru w kwasie octowym lub mlekowym, wzbogaconymi korzystnie gliceryną lub poliwinylopirolidonem dodanymi w ilości 1 - 12% w stosunku do masy całej mieszaniny, ewentualnie zawierającym zagęszczacz, stosując 1 - 10% lipazy w stosunku do masy polimeru, po czym otrzymaną, jednorodną mieszaninę odpowietrza się pod próżnią w czasie 15 - 45 minut, odpowietrzoną mieszaninę wkrapla się do oleju rzepakowego schłodzonego do temperatury od -40°C do -15°C
    1 inkubuje w czasie 5 - 48 godzin, po czym otrzymany preparat ogrzewa do temperatury 25°C i ponownie zamraża do temperatury od -40°C do -15°C, powtarzając czynności zamrażania i ogrzewania
    2 - 5- krotnie, następnie preparat przemywa się, odwadnia acetonem lub liofilizuje i przechowuje w zamkniętych naczyniach w temperaturze 4°C.
  8. 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się chitozan o masie cząsteczkowej 10000 - 70000 kD, stopniu deacetylacji 20 - 90% i wilgotności 9 - 14%.
  9. 9. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się alkohol poliwinylowy o masie cząsteczkowej 20000 - 80000 kD.
  10. 10. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako zagęszczacz używa się poliwinylopirolidon lub alginian sodowy.
PL366413A 2004-03-18 2004-03-18 Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus PL204909B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL366413A PL204909B1 (pl) 2004-03-18 2004-03-18 Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL366413A PL204909B1 (pl) 2004-03-18 2004-03-18 Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL366413A1 PL366413A1 (pl) 2005-09-19
PL204909B1 true PL204909B1 (pl) 2010-02-26

Family

ID=36645414

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL366413A PL204909B1 (pl) 2004-03-18 2004-03-18 Sposób immobilizacji lipazy Mucor racemosus

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL204909B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL366413A1 (pl) 2005-09-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Betigeri et al. Immobilization of lipase using hydrophilic polymers in the form of hydrogel beads
EP0102985B1 (en) A method of immobilizing bio material in bead polymers
CN103224926B (zh) 一种制备固定化脂肪酶的方法
Arica et al. Immobilization of glucoamylase onto activated pHEMA/EGDMA microspheres: properties and application to a packed-bed reactor
CA2673589A1 (en) Method of drying biological material
PT83746B (pt) Processo para a preparacao de novos biocatalisadores imobilizados e para a producao de etanol por fermentacao
KR920009499B1 (ko) Pva-겔에 의해 고정된 효소를 함유하는 다공성 물질의 제조방법
US10041059B2 (en) Methods for the preparation of hydrogels
EP0034609B1 (en) Immobilized enzyme(s) and microorganism(s) and their production
US8110386B2 (en) Lipase powder, methods for producing the same and use thereof
JP2678341B2 (ja) 固定化リパーゼ
Hsu et al. Immobilization of lipoxygenase in an alginate-silicate solgel matrix: formation of fatty acid hydroperoxides
CN103289984A (zh) 壳聚糖固定化海洋微生物Bohai Sea-9145脂肪酶的制备方法
PL204826B1 (pl) Sposób immobilizacji lipazy Mucor circinelloides
CN114317700A (zh) 荧光pcr试剂冻干保护剂、冻干方法及应用
Stolarzewicz et al. Study on the properties of immobilized biocatalysts with lipase activity produced by Yarrowia lipolytica in batch culture
Chen et al. Polyvinyl formal resin plates impregnated with lipase-entrapped sol–gel polymer for flavor ester synthesis
Sawangpanya et al. Immobilization of lipase on CaCO3 and entrapment in calcium alginate bead for biodiesel production
CN108690842A (zh) 海洋微生物脂肪酶ys2071的固定化方法
WO2011068076A1 (ja) リパーゼ粉末製剤及びその使用
EP1734115A1 (en) 1,3-specific lipase powder, method of producing the same and utilization of the same
de Alteriis et al. Entrapment of microbial cells within a gelatin matrix: a comparison of three procedures
US4184919A (en) Method of gelling microbial mycelia
CN117305278A (zh) 一种β-1,3-葡聚糖酶固体制剂的制备方法及其应用
Ray Purification and immobilization of human carbonic anhydrase B by using polyacrylamide gel