PL207048B1 - Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, zastosowanie bakterii do detoksyfikacji mykotoksyn oraz sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn - Google Patents

Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, zastosowanie bakterii do detoksyfikacji mykotoksyn oraz sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn

Info

Publication number
PL207048B1
PL207048B1 PL368742A PL36874202A PL207048B1 PL 207048 B1 PL207048 B1 PL 207048B1 PL 368742 A PL368742 A PL 368742A PL 36874202 A PL36874202 A PL 36874202A PL 207048 B1 PL207048 B1 PL 207048B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
dsm
microorganism
bacteria
zearalenones
mycotoxins
Prior art date
Application number
PL368742A
Other languages
English (en)
Other versions
PL368742A1 (pl
Inventor
Gerd Schatzmayr
Dian Heidler
Elisabeth Fuchs
Eva-Maria Binder
Original Assignee
Erber Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Erber Ag filed Critical Erber Ag
Publication of PL368742A1 publication Critical patent/PL368742A1/pl
Publication of PL207048B1 publication Critical patent/PL207048B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065—Microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
    • A23L5/28—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/104—Fermentation of farinaceous cereal or cereal material; Addition of enzymes or microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy drobnoustroju do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, sposobu do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt przy pomocy przynajmniej jednego takiego drobnoustroju, jak również zastosowania bakterii i/lub drożdży do detoksyfikacji ochratoksyn i/lub zearalenonów w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt.
Mykotoksyny są naturalnie występującymi metabolitami wtórnymi śluzowców oddziałującymi na produkty rolne na całym świecie i już w małych ilościach wywołującymi toksyczne efekty. Zanieczyszczenie produktów rolnych mykotoksynami powoduje wyjątkowo duże zniszczenia i wywołuje również mykotoksykozy u ludzi i zwierząt, które czasami ujawniają dramatyczne skutki. Z uwagi na wysokie straty ekonomiczne i wpływ na człowieka i zwierzęta, wywoływany przez mykotoksyny, od dawna podejmowane są próby znalezienia sposobów zwalczania zanieczyszczeń mykotoksynami, przy czym zasadniczo z literatury znane są dwa podstawowe sposoby. Pierwszy sposób ma na celu zapobieganie wzrostowi śluzowca na produktach spożywczych i paszach dla zwierząt. Tym samym równocześnie zapobiega wytwarzaniu mykotoksyn. Drugie podejście jest ukierunkowane na kolejne niszczenie mykotoksyn lub odkażanie produktów spożywczych i/lub pasz dla zwierząt.
Tak, więc przykładowo, w publikacji WO 91/13555 opisano suplementy paszy, jak również sposób inaktywowania mykotoksyn, gdzie dla inaktywowania wspomnianych mykotoksyn do paszy dodawane są cząsteczki filokrzemianu. Dla wzmocnienia efektu filokrzemianów, cząsteczki są powlekane sekwestrantem mającym na celu wzmocnienie ich działania. Ponadto, jest znana pasza dla zwierząt, przykładowo z publikacji WO 92/05706, która to pasza dla zwierząt zawiera glinę montmorylonitową, jako suplement paszy. Uważa się, że te naturalne minerały gliniaste posiadające duże przestrzenie wewnętrzne z uwagi na ich porowatość wiążą mykotoksyny powierzchniowo i unieruchamiają je w ten sposób.
Ponadto, znane jest suplement paszy ze austriackiego wzoru użytkowego (Austrian Utility Model) AT-U 504, który jako suplement do paszy wykorzystuje preparat enzymu zdolny do wytworzenia epoksydaz i laktonaz oraz chemicznego degradowania mykotoksyn zarówno w paszach dla zwierząt, jak i w układzie pokarmowym zwierząt. Zgodnie z AT-U 504, aktywność tego preparatu enzymatycznego może być zwiększona przez dodanie zeolitów i im podobnych.
Dodanie do paszy dla zwierząt substancji wiążących mykotoksyny, które niezwłocznie wiążą się z mykotoksynami w układzie pokarmowym podczas trawienia może zminimalizować efekty toksyn u ż ywego inwentarza. Oprócz wyż ej wspomnianych opcji, dodawane substancje obejmują lucernę siewną, bentonit, zeolit, gliny, aktywny węgiel, uwodornione krzemiany sodowo wapniowe glinowe, filokrzemiany i ściany komórek drożdży lub bakterii (US 5,165,946; WO 99/57994; US 6,045,834; EP 9721741; US 5,165,946; US 5,935,623; WO 98/34503; WO 00/41806). Wiązanie toksyn z takimi materiałami jest funkcją właściwości strukturalnych toksyn. Dlatego do tej pory nie znaleziono skutecznej substancji wiążącej mykotoksyny dla trichotecenów. Ponadto, wadą właściwością substancji wiążących mykotoksyny jest, że są one zdolne do adsorbowania z pasz, poza wspomnianymi toksynami, również ważnych składników odżywczych, takich jak antybiotyki lub witaminy.
Obecnie stwierdzono, że mykotoksyny mogą być degradowane i co za tym idzie częściowo detoksyfikowane przez drobnoustroje. Przykład detoksyfikacji mykotoksyn, w szczególności trichotecenów znajduje się w AT-B 406 166, gdzie szczególna czysta hodowla drobnoustroju należącego do rodzaju Eubacterlum i zdeponowana pod numerem dostępu DSM 11798, jak również mieszana hodowla gatunku z rodzaju Eubacterlum i Enterococcus, która została zdeponowana pod numerem 11799, detoksyfikuje trichoteceny przez cięcie występującego w trichotecenach pierścienia epoksydowego.
Detoksyfikacja ochratoksyn przez hydrolizę enzymatyczną została opisana przez M.J. Pitout: The Hydrolysis of Ochratoxin A by Some Proteolytic Enzymes, Biochem. Pharmacol. 18, 485-491 (1969).
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie specjalnych drobnoustrojów zarówno jako hodowli mieszanych, jak i czystych hodowli, jak również ich kombinacji, które są zdolne do wybiórczego, biochemicznego degradowania mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów i przekształcania ich w fizjologicznie bezpieczne substancje, w szczególności substancje bezpieczne w przemyśle paszowym i spożywczym.
PL 207 048 B1
Dla uzyskania tego celu zastosowano drobnoustrój według niniejszego wynalazku, z pierwotnie określonego rodzaju, który jest zasadniczo scharakteryzowany jako drobnoustrój, w szczególności jako tlenowe lub beztlenowe bakterie lub drożdże detoksyfikujące, które odpowiednio tną grupę fenyloalaninową ochratoksyn i degradują zearalenony, przy czym bakterie detoksyfikujące mykotoksyny są wybrane spośród gatunków Sphingomonas, Stenotrophomonas, Ochrabactrum, Ralstonia i/lub Eubacterium i/lub detoksyfikujace drożdże są wybrane spośród gatunków Trichosporon, Cryptococcus i/lub Rhodotorula. Stosując drobnoustrój i w szczególności tlenowe lub beztlenowe detoksyfikujące bakterie lub drożdże, które odpowiednio tną grupę fenyloalaninową ochratoksyn i degradują zearalenony, jest możliwe przekształcenie ochratoksyn, w szczególności ochratoksyny A lub ochratoksyny B do takich metabolitów, które nie posiadają grupy fenyloalaninowej, co za tym idzie, nie ujawniają już toksycznych efektów ochratoksyn. Takie metabolizowanie ochratoksyn jest wywołane przez enzym podobny do karboksypeptydazy A tnącej wiązanie amidowe ochratoksyny bezpośrednio lub przez kompleks wielu enzymów, przez który pierścień fenyloalaniny jest hydroksylowany i następnie cięty i degradowany. Ostatecznie, pozostały aspartam jest cięty, dając w ten sposób inny nietoksyczny metabolit ochratoksyn. Szlak ten może być przedstawiony w prosty sposób:
Przez zastosowanie drobnoustrojów według wynalazku, które są wyselekcjonowane spośród bakterii i/lub drożdży, jest możliwa detoksyfikacja nie tylko ochratoksyny A i ochratoksyny B, lecz również metabolitów 4R-hydroksyochratoksyny A, 4S-hydroksyochratoksyny A, ochratoksyny C, estru metylowego ochratoksyny A, estru metylowego ochratoksyny B i estru etylowego ochratoksyny B. Ponadto, drobnoustroje te umożliwiają degradację i co za tym idzie detoksyfikację zearalenonów.
Przedmiotem wynalazku jest drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, charakteryzujący się tym, że stosowany jest drobnoustrój, a w szczególnoś ci tlenowe lub beztlenowe detoksyfikują ce bakterie lub droż d ż e, które odpowiednio odcinają grupę fenyloalaniny ochratoksyn i degradują zearalenony, przy czym bakterie detoksyfikujące mykotoksyny są wybrane spośród gatunków: Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacterium sp. DSM 14197, i/lub detoksyfikujące drożdże wybrane są spośród: Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162.
Korzystnie bakterie i/lub drożdże są stabilizowane, szczególnie przez liofilizację, suszenie rozpyłowe lub mikroenkapsulację.
Korzystnie bakterie lub drożdże są stosowane jako ekstrakty bezkomórkowe lub ekstrakty nieoczyszczone.
Korzystniej drobnoustrój stosowany jest jako ekstrakt bezkomórkowy w roztworze, w szczególności w roztworze wodnym.
Korzystniej ekstrakt nieoczyszczony uzyskany jest ze wspomnianych bakterii i drożdży przez zastosowanie ultradźwięków, trawienia enzymatycznego, kombinacji gwałtownego zamrażania i rozmrażania, homogenizacji przepływowej, prasy francuskiej, autolizy w NaCl o wysokim stężeniu i/lub młyna kulowego.
Korzystnie drobnoustrój stosowany jest w zbuforowanym roztworze zawierającym octan, cytrynian, fosforan lub bufor Tris-HCl (chlorowodorek tris(hydroksymetylo)-aminometanu) o pH pomiędzy 1 i 12, a w szczególnoś ci 2 i 8.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie bakterii wybranych spośród: Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacterium sp. DSM 14197 i/lub drożdży wybranych spośród: Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162 do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt przez odcinanie grupy fenyloalaninowej ochratoksyny lub degradowanie zearalenonu.
Korzystnie do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt stosowany jest Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Eubacterium sp. DSM 14197 lub Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168.
Korzystnie do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt stosowane są mieszane hodowle wspomnianych bakterii i/lub drożdży.
PL 207 048 B1
Przedmiotem wynalazku jest ponadto sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt przy pomocy drobnoustroju, polegający na tym, że drobnoustrój opisany powyżej miesza się z produktami spożywczymi lub paszami dla zwierząt w ilościach w zakresie od 0,01% wagowo do 1% wagowo i w szczególności 0,05% wagowo do 0,5% wagowo.
Korzystnie produkty spożywcze lub pasze dla zwierząt traktuje się przez mieszanie w zawiesinie wodnej wspomnianego drobnoustroju zawierającej wodę w 20 do 99% wagowo, w szczególności 35 do 85% wagowo, w temperaturze od 10 do 60°C, w szczególności 15 do 45°C, przez 2 minuty do 12 godzin, w szczególności 5 minut do 2 godzin.
Fakt, że zgodnie z niniejszym wynalazkiem zarówno tlenowe jak i beztlenowe detoksyfikujące bakterie lub drożdże mogą być stosowane jako drobnoustroje ma szczególne znaczenie, bowiem w przypadku niezmienionych produktów spoż ywczych i/lub pasz dla zwierzą t zanieczyszczonych odpowiednimi drobnoustrojami, detoksyfikacja może być osiągnięta nawet po spożyciu takich produktów spożywczych i/lub pasz dla zwierząt. Detoksyfikacja może nastąpić na dowolnym etapie lub w jakiejkolwiek fazie przechodzenia pokarmu lub paszy przez układ pokarmowy, ponieważ odpowiednie drobnoustroje lub ich kombinacje mogą być wybiórczo stosowane do wywołania efektu w każdym z tych przypadków. Wiadomo, ż e warunki w przewodzie pokarmowym od ż o łądka do okrężnicy s ą postępująco beztlenowe, co oznacza, że w sposób postępujący zmniejsza się potencjał redoks tak, że po spożyciu pokarmu i/lub paszy zanieczyszczonych odpowiednio mykotoksynami lub ochratoksynami i/lub zearalenonami, detoksyfikacja może najpierw być rozpoczęta przez tlenowe bakterie i/lub drożdże, a następnie pod koniec procesu trawienia może być kontynuowana przez beztlenowe bakterie i/lub drożdże, lub gdy pokarm lub pasza osiągnie już odcinek jelita gdzie dominują warunki beztlenowe.
Szczególnie pełna detoksyfikacja mykotoksyn, konkretnie ochratoksyn i/lub zearalenonów, jest możliwa, jeśli jako wspomniane drobnoustroje zastosuje się detoksyfikujące bakterie wyselekcjonowane spośród gatunków Sphingomonas, Stenotrophomonas, Ochrohactrum, Ralstonia i/lub Eubacterium, i/lub detoksyfikujące drożdże wybrane spośród gatunków Trichosporon, Cryptococcus i/lub Rhodotorula. Wśród tych całkowicie detoksyfikujących bakterii i/lub drożdży, jako szczególnie skuteczne potwierdzono detoksyfikujace bakterie wybrane spośród Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacterium sp. DSM 14197, oraz detoksyfikujące drożdże wybrane spośród Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162, bowiem nie tylko zapewniają pełną degradację mykotoksyn, lecz mogą dodatkowo być bezpiecznie zastosowane w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt, co niekoniecznie ma miejsce w przypadku licznych innych tnących mykotoksyny i/lub degradujących bakterii i drożdży.
Wśród innych bakterii lub drożdży, które są drobnoustrojami podobnie zdolnymi do degradacji, skutecznie można zastosować te, które wskazano poniżej, albo pożywce albo w buforze, lub skutecznie w obu tych substancjach.
Szczep Pochodzenie Degradacja w
Pożywka Bufor
1 2 3 4
Pseudomonas cepacia Gleba 60% 100%
Ochrohactrum Gleba/woda 100% 100%
Achromohacter Gleba/woda 50% 100%
Ralstonia Gleba/woda 100% 100%
Stenotrophomonas Gleba/woda 100% 100%
Rhodococcus erythropolis DSM 1069 75% 90%
Agrobacterlum sp. DSM 30201 20-100% 60-100%
Agrobacterium tumefaclens DSM 9674 25-40% 0-60%
Pseudomonas putida ATCC 700007 10-50% 0%
PL 207 048 B1 cd. tabeli 1
1 2 3 4
Comomonas acidovorans ATCC 11299a 20-57% 0-50%
Drożdże Ascomyceten HA 168 95% 40%
Cryptococcus flavus HB 402 90% 100%
Rhodotorula mucllaglnosa HB 4 03 20% 0%
Cryptococcus laurentii HB 404 50% 0%
Nieznany HB 508 30% 30%
Trichosporon spec. nov. HB 704 40% 40%
Nieznany HB 529 100% 95%
Drożdże Ascomycetes HA 1265 90% 0%
Drożdże Ascomycetes HA 1322 0% 95%
Trichosporon ovoides HB 519 100% 90%
Trlosporon dulcitum HB 523 100% 100%
Rhodotorula fujisanensis HB 711 30% 0%
Cryptococcus curvatus HB 782 20% 95%
Trichosporon guehoae HB 892 50% 20%
Trichosporon coremiiforme HB 896 40% 20%
Trichosporon mucoides HB 900 100% 100%
Trichosporon cutaneum ATCC 46446 0% 70%
Trichosporon dulcitum ATCC 90777 0% 100%
Trichosporon laibachii ATCC 90778 0% 100%
Trichosporon moniliiforme ATCC 90779 0% 60%
Cryptococcus humicolus ATCC 90770 0% 30%
Eubacterium sp. F6 30-70% 100%
Eubacterium callanderi Dil 8 90% 100%
Streptococcus sp. DO 20 40-70%
Lactobacillus vitulinus Ru 8 0-100%
Stenotrophomonas nitritreducens DSM 17575 100% 100%
Stenotrophomonas nitritreducens DSM 17576 50% 100%
Stenotrophomonas sp. DSM 13117 50% 95%
Szczególnie korzystne okazało się, w odniesieniu do dalszej korzystnej postaci niniejszego wynalazku, by bakterie i/lub drożdże były stabilizowane w szczególności przez liofilizację, suszenie rozpyłowe lub mikroenkapsulację. Przez stabilizowanie wspomnianych drobnoustrojów, ich żywotność i czas życia są poprawione lub wydłużone i ponadto będą mogły być one zastosowane na bardziej uniwersalną skalę i co za tym idzie będą użyteczne w każdej chwili w jakimkolwiek pożądanym zastosowaniu. Suszenie przez liofilizacje i suszenie rozpyłowe lub mikroenkapsulację jest znane per se jako metoda prosta i szybka w zastosowaniu, dająca stabilne, żywotne drobnoustroje.
Zgodnie z dalszą postacią wynalazku bakterie lub drożdże stosuje się jako ekstrakty bezkomórkowe lub ekstrakty nieoczyszczone. W ten sposób, w dalszej realizacji zastosowania ekstraktu bezkomórkowego bierze pod uwagę jego zastosowanie w roztworze i w szczególności w roztworze wodnym. Roztwory wodne ekstraktów bezkomórkowych mają tę zaletę, że będąc rozpylanymi na produkcie spożywczym lub paszy, które mają być traktowane, wchodzą w kontakt z zanieczyszczającymi
PL 207 048 B1 mykotoksynami bezpośrednio na ich powierzchniach, a co za tym idzie detoksyfikacja uzyskiwana jest bezpośrednio podczas opryskiwania wspomnianym ekstraktem. Zastosowanie nieoczyszczonego ekstraktu bakterii lub drożdży, który jest otrzymywany przez zastosowanie ultradźwięków, trawienia enzymatycznego, kombinacji gwałtownego zamrażania i rozmrażania, homogenizatora przepływowego, prasy francuskiej, autolizy przy wysokim stężeniu NaCl i/lub młyna kulowego ma tę zaletę, że taki nieoczyszczony ekstrakt może być otrzymany w sposób szczególnie szybki i bezproblemowy tak, że w szczególności w tych przypadkach, gdy wymagane jest szybkie zastosowanie detoksyfikacji lub substancji degradujących mykotoksyny, zastosowanie nieoczyszczonego ekstraktu daje szybkie i wiarygodne wyniki. Ponadto, nieoczyszczone ekstrakty mogą być bezpośrednio stosowane w produkcji paszy dla zwierząt tak, że pasza uzupełniona drobnoustrojami będzie spożywana przez zwierzęta i drobnoustroje, w szczególności drożdże lub bakterie, rozpoczną działanie jedynie w układzie pokarmowym zwierzęcia. W tym kontekście, wynalazek bierze również pod uwagę zastosowanie mieszaniny zawierającej nieoczyszczone ekstrakty różnych detoksyfikujących bakterii i/lub drożdży.
Zastosowanie drobnoustrojów w niebuforowanym lub buforowanym roztworze zawierającym fosforan lub bufor Tris-HCl przy wartości pH pomiędzy 1 a 12, i w szczególności 2 a 8, jak w przypadku korzystnej postaci, ma tę zaletę, że drobnoustroje mogą być podane bezpośrednio z produktem spożywczym lub paszą, co za tym idzie rozpoczynają działanie w układzie pokarmowym w tych rejonach, gdzie potencjał redoks jest dogodny dla optymalnego działania użytych drobnoustrojów. Zastosowanie zbuforowanego roztworu stwarza możliwość niezwłocznego dostosowania do odpowiedniego pH panującego w układzie pokarmowym tak, że z jednej strony produkty spożywcze lub produkty delikatesowe uzupełnione drobnoustrojami w buforowanym roztworze nie będą powodowały żadnego przesunięcia lub zaburzenia pH panującego w układzie pokarmowym, co za tym idzie będą zwiększały łatwość trawienia uzupełnionego tak pokarmu lub paszy, a z drugiej strony będą zapobiegały jakiemukolwiek zaburzeniu trawienia w środowisku żołądka i jelit.
Inny cel niniejszego wynalazku dotyczy dostarczenia substancji lub drobnoustrojów, które mogą być zastosowane do detoksyfikacji produktów spożywczych lub produktów delikatesowych bez zaburzania lub wpływania na stworzenie spożywające tego rodzaju pokarm, i bez zaburzania lub wpływania na traktowane nimi wspomniane produkty spożywcze lub produkty delikatesowe, poza detoksyfikacją mykotoksyn obecnych na wspomnianych produktach spożywczych lub produktach delikatesowych.
Dla uzyskania tego celu stwierdzono zgodnie z wynalazkiem, że zastosowanie bakterii wybranych spośród Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacterlum sp. DSM 14197 i/lub drożdży wybranych spośród Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162, umożliwia detoksyfikację mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn, obecnych na powierzchniach produktów spożywczych lub pasz dla zwierząt, przez cięcie grupy fenyloalaniny i zearalenonów, które będą cięte, bez zaburzania lub wpływania w jakikolwiek sposób na ten proces, niezależnie od tego jakie są traktowane nimi produkty spożywcze lub pasze dla zwierząt.
Zastosowanie Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Eubacterium sp. DSM 14197 lub Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168 okazało się szczególnie odpowiednie dla tego celu, gdyż powyższe drobnoustroje zapewniają, w szczególności, pełną degradację mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów bez stwarzania jakiegokolwiek ryzyka.
Dla umożliwienia, w szczególności, ekonomicznej detoksyfikacji mykotoksyn, w szczególności w produktach spożywczych lub paszach dla zwierząt, do detoksyfikcji ochratoksyn i zearalenonów w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierzą t stosuje się mieszane hodowle lub kombinacje szeregu bakterii i/lub drożdży.
Kolejny cel niniejszego wynalazku dotyczy dostarczenia sposobu biologicznej detoksyfikacji przez drobnoustrój mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt, które pozwalają na pełną i szybką dekontaminację zanieczyszczenia toksynami bezpośrednio po wejściu w kontakt z produktami spożywczymi lub paszami dla zwierząt lub w układzie pokarmowym żywych stworzeń spożywających wspomniane produkty spoż ywcze lub pasze dla zwierząt.
Aby uzyskać ten cel, sposób według wynalazku polega na tym, że drobnoustrój według wynalazku, w szczególności bakterie i/lub drożdże według wynalazku miesza się z produktem spożywczym lub paszami dla zwierząt w ilościach w zakresie od 0,01% wagowych do 1% wagowych, w szczególPL 207 048 B1 ności, 0,05% wagowych do 0,5% wagowych. Przez zmieszanie postaci stałej produktu spożywczego lub paszy dla zwierząt z drobnoustrojem według wynalazku i w szczególności z bakteriami lub drożdżami według wynalazku, produkt spożywczy lub pasza dla zwierząt, uzupełnione odpowiednio stabilizowanym drobnoustrojem, będzie otrzymany w postaci stabilnej. Jeśli taki produkt spożywczy lub pasza dla zwierząt uzupełniony drobnoustrojem według wynalazku zostanie spożyty, podczas mieszania ze śliną będzie tworzyła się zawiesina i rozpocznie się detoksyfikacja produktu spożywczego lub pasz dla zwierząt, w szczególności degradacja ochra toksyn, niezwłocznie po spożyciu wspomnianego produktu spożywczego lub paszy dla zwierząt odpowiednio przez człowieka lub zwierzę. W ten sposób peł na degradacja szkodliwych mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w układzie pokarmowym spożywającego pokarm zwierzęcia jest zapewniona tak, ż e organizm nie będzie zagrożony w jakikolwiek sposób szkodliwymi mykotoksynami.
W sytuacji gdy mają być spoż ywane już zdetoksyfikowane produkty spoż ywcze lub pasze dla zwierząt dostarczono dalszą realizację wynalazku, która obejmuje mieszanie wspomnianych produktów spożywczych lub pasz dla zwierząt przez mieszanie w zawiesinie wodnej wspomnianego drobnoustroju zawierającej wodę w 20 do 99% wagowych i w szczególności 35 do 85% wagowych, w temperaturze od 10 do 60°C, w szczególności 15 do 45°C, przez 2 minuty do 12 godzin i w szczególności 5 minut do 2 godzin. Przez traktowanie produktu spo ż ywczego lub paszy dla zwierzą t przez mieszanie odpowiedniego drobnoustroju w zawiesinie wodnej jest możliwe z jednej strony zapewnienie bezpośredniego kontaktu traktowanego produktu spożywczego lub paszy dla zwierząt z detoksyfikującymi drobnoustrojami, a z drugiej strony zapewnienie łagodnego traktowania drobnoustrojów, co za tym idzie uzyskanie pewności, że później nie zostaną one zniszczone lub zabite po zmieszaniu z produktem spożywczym lub paszą dla zwierząt. Ważnym jest ponad wszystko, aby zadbać, by temperatura podczas mieszania nie była zarówno za wysoka, jak i zbyt niska, oraz czas trwania i skład płynnej mieszanki lub kompozycji w pełni odpowiadał niniejszemu wynalazkowi tak, aby zabezpieczał przed zniszczeniem lub zabiciem drobnoustrojów.
Poniżej, wynalazek zostanie wytłumaczony bardziej szczegółowo przez przykłady dotyczące izolowania drobnoustrojów i sposoby ich działania.
1. Hodowanie, wytwarzanie i odzyskiwanie drożdży Trichosporum spec. nov. (DSM 14153).
Do hodowli drożdży stosowano poniższą pożywkę hodowlaną:
gramów ekstraktu z drożdży gramów ekstraktu słodowego g glukozy g peptonu
400 ppm ochratoksyny A l wody RO pH 5,5.
Poddano ją działaniu temperatury 121°C przez 25 minut w autoklawie. 30 ml pre-hodowli przygotowano w 100 ml kolbie stożkowej Erlenmeyera (współczynnik inokulacji 0,33%), inkubację prowadzono na wytrząsarce przez 72 godziny w 25°C. Ilość otrzymanych bakterii wynosiła około 5 x 107/ml.
Te 30 ml służyło następnie jako inokulum pre-hodowli do fermentacji w 75-litrowym fermentorze. Do fermentacji użyto następującej pożywki hodowlanej:
ekstrakt słodowy 4 g/l ekstrakt z drożdży 10 g/l pepton 5 g/l glukoza 10 g/l środek zapobiegający pienieniu 0,1% pH 5,5
Jako dodatkowe parametry ustalono pO2 wynoszące 40% i maksymalny poziom natleniania 3 m3/godz. Na począ tku pH wynosił o 5,00, dalsze zmiany zachodził y w trakcie wzrostu (osią gnęło 8,5). Po około 40 do 44 godz. zawartość można użyć jako inokulum dla fermentora produkcyjnego o objętości 3,6 m3. Dla tego ostatniego użyto następującej poż ywki:
ekstrakt słodowy 17 g/l ekstrakt drożdżowy 5 g/l pepton 2 g/l środek zapobiegający pienieniu 0,1%.
PL 207 048 B1
Poziom natleniania wynosił 15 m3 powietrza na godzinę. Po 40 do 48 godzinach komórki zatężono przy pomocy separatora przepływowego. Pożywkę fermentacyjną można zatężyć do około 1:10 przy pomocy separatora z uzyskaniem zawartości bakterii 3 x 109/ml.
Dalszą stabilizację uzyskano przez liofilizację lub suszenie rozpyłowe. Proszek serwatki służył jako cytoprotektor podczas liofilizacji.
Dodano 10%, w oparciu o objętość koncentratu. Następnie koncentrat zamrożono w -80°C. Liofilizację prowadzono przy ciśnieniu 0,400 mbar, przy temperaturze na półce 20°C. Czas trwania przy grubości warstwy 1,5 cm wynosił około 30 godzin.
Parametry suszenia rozpyłowego:
początkowa temperatura ośrodka suszącego (powietrza):
160°C końcowa temperatura: 80°C ciśnienie: 3 bary
2. Hodowanie, produkcja i odzyskiwanie bakterii Stenotrophomonas nitrireducens (DSM 14168).
Hodowanie tej bakterii miało miejsce w pożywce odżywczej, raz w Oxoid CM 001 B i raz w CM 067 B z 400 ppb ochratoksyny A. 30 ml pożywki autoklawowano w 100 ml kolbie stożkowej Erlenmeyera przez 25 minut w 121°C. Jako inokulum użyto 1,5 ml z banku przechowywanych komórek. Inkubację prowadzono na wytrząsarce w 30°C przez 72 godz.
Te 30 ml służyło następnie jako inokulum pre-hodowli do fermentacji w 75-litrowym fermentorze. Fermentację prowadzono w następującej pożywce hodowlanej:
pepton z mięsa 5 g/l ekstrakt z mięsa 3 g/l środek zapobiegający pienieniu 0,1%.
Jako dodatkowe parametry ustalono pO2 wynoszące 40% i maksymalny poziom podawania gazu 3 m3/godz. Szybkość mieszania wynosiła 200 obr./min. Na początku pH wynosiło 6,8 do 6,9, zmieniało się podczas wzrostu osiągając 8,3. Po około 40 do 44 godzinach zawartość może być użyta jako inokulum dla fermentora produkcyjnego o objętości 3,6 m3. Do tego ostatniego użyto następującej pożywki:
mąka sojowa 17 g/litr ekstrakt drożdżowy 5 g/litr pepton 2 g/litr środek zapobiegający pienieniu 0,1%.
Poziom natleniania ustalono na 15 m3 powietrza na godzinę. Szybkość mieszania wynosiła 250 obr./min.
Po 40 do 48 godzinach komórki mogą być zatężone przy pomocy separatora przepływowego. Poziom zatężenia wynosił około 1:100.
Dalszą stabilizację uzyskano przez liofilizację lub suszenie rozpyłowe. Proszek serwatki służył jako krioprotektor podczas liofilizacji.
W większości przypadków dodano 10%, w oparciu o objętość koncentratu. Następnie, koncentrat zamraża się w -80°C (10 godz.) lub przy pomocy ciekłego azotu (2 godz.). Liofilizację prowadzono przy ciśnieniu 0,40 mbar w temperaturze 20°C. Czas trwania przy grubości warstwy 1,5 cm wynosił około 30 godzin.
Parametry suszenia rozpyłowego:
początkowa temperatura ośrodka suszącego (powietrza): 160°C końcowa temperatura: 80°C ciśnienie: 3 bary
3. Hodowanie, produkcja i odzyskiwanie bakterii Eubacterium sp. (DSM 14197).
Do hodowli tej beztlenowej bakterii stosowano poniższą pożywkę:
D(+)-glukoza 4 g/litr pepton z kazeiny 2 g/litr ekstrakt z drożdży 2 g/litr roztwór minerałów I 75 ml/litr [KH2PO4 6 g/litr] roztwór minerałów II 75 ml/litr
[KH2PO4 6 g/litr; (NH4)SO4 6 g/litr; NaCl 12 g/litr; MgSO4 X 7 H2O 2,5 g/litr; CaCl2 x 2H2O 3 g/litr]
PL 207 048 B1 hemina 1 mg/litr mieszanina kwasów tłuszczowych 3,1 ml/litr cysteina-HCl 0,5 g/litr resazuryna 1 mg/litr ochratoksyna A 400 ppb pH 6,9.
Hodowlę prowadzono w 100 ml kolbie Pyrex z silikonowym korkiem. 80 ml autoklawowanej pożywki zdekantowano i zmieszano z buforem KH2PO4/Na2HPO4 (pH 7). Po dodaniu zawartości fiolki chłodniczej z banku komórek, górna część kolby została wypełniona N2 (1 min.). Po zamknięciu fiolki inkubację prowadzono dalej w 37°C przez 72 godziny.
Następnie, 4,5 litra wyżej wspomnianego roztworu hodowlanego autoklawowano w 5 l kolbie Schott. Ta ostatnia zawiera podłączenie wyprowadzające i dwa wężyki z jałowymi filtrami (do podawania gazu do inokulum). Po schłodzeniu pożywki do 37°C dodano roztwór buforu (1% bufor fosforanowy) i następnie 80 ml inokulum. Po doprowadzeniu azotu do części górnej (przez 5 min.) doprowadzenia zamknięto za pomocą zacisków i inokulum inkubowano w 37°C przez około 64 godziny. Po teście czystości można je użyć jako inokulum dla fermentora o pojemności 1 m3 (pojemność 700 litrów).
Do produkcji stosowano poniższą pożywkę:
glukoza 10 g/litr ekstrakt z drożdży 5 g/litr pepton 2 g/litr cysteina 0,5 g/litr pH 7,0.
Inokulum dodano po sterylizacji pożywki w zbiorniku fermentacyjnym (40 min., 121°C, 1,21 bara) i jej schłodzeniu do 37°C. Górną część fermentora wypłukano N2. Szybkość mieszania wynosiła 100 obr./min., do ustalenia pH użyto ługu sodowego (8 moli/l). Potencjał redoks wynosił początkowo około -240 mV, spadając w czasie wzrostu do poniżej -500 mV. Czas fermentacji wynosił około 48 godzin. Zatężanie prowadzono przy pomocy separatora przepływowego.
Dalszą stabilizację uzyskano przez liofilizację, mikroenkapsulację lub suszenie rozpyłowe. Proszek serwatki służył jako krioprotektor w liofilizacji.
Dodano 10%, w oparciu o objętość koncentratu. Następnie koncentrat zamrożono w -80°C (10 godz.) lub przy pomocy ciekłego azotu (2 godz.). Liofilizację prowadzono przy ciśnieniu 0,400 mbara, w temperaturze 20°C. Czas trwania przy grubości warstwy 1,5 cm wynosił około 30 godzin.
Drobnoustrój chroniono przed warunkami niekorzystnymi dla żywych organizmów podczas przechowywania przez granulowanie w złożu fluidyzacyjnym z użyciem tłuszczu roślinnego (proces Holtmelt, górny spray).
Szybkość rozpylania ok. 80-150 g/min.
Temperatura doprowadzonego powietrza: 50°C
Ciśnienie rozpylania: 3 bary
Ilość powietrza: 750-1500 m3/godz.
Temperatura produktu: poniżej 47°C
Parametry suszenia rozpyłowego:
początkowa temperatura ośrodka suszącego (gaz obojętny): 160°C końcowa temperatura: 80°C ciśnienie: 3 bary.
4. Detoksyfikacja ochratoksyny A (OTA) przez produkty bakteryjne i drożdżowe według przykładów 1 do 3.
Serię rozcieńczeń logarytmicznych do rozcieńczenia 10-4 przygotowano w fizjologicznym roztworze soli z produktów otrzymanych w przykładach 1 do 3. Z każdego rozcieńczenia 10-1 do 10-4 odpipetowano 2 ml do 18 ml odpowiedniej pożywki do rozcieńczania (pożywka minimalna (Na2HPO4 2,44 g/l; KH2PO4 1,52 g/l; (NH3)2SO4 0,50 g/l; MgSO4x7H2O 0,20 g/l; CaCl2x2H2O 0,05 g/l), pożywki dla drożdży lub pożywki odżywczej (Oxoid CM001B)) uzupełnionej 200 ppb OTA. Użyte kolby inkubowano w wytrząsarce poziomej w odpowiednich warunkach. Po 2,5, 5 i 24 godzinach pobrano próbki i zbadano je pod kątem cięcia OTA przez wysokociśnieniową chromatografię cieczową. W rozcieńczeniu 10-3 (odpowiadającemu liczbie bakterii 10-5), drożdże w pożywce minimalnej przecięły 90% ochratoksyny A po 5 godzinach i 100% po 24 godzinach.
PL 207 048 B1
Jeśli jako badaną macierz stosuje się złożoną pożywkę dla drożdży, produkty wykazują 90% współczynnik cięcia po 6 godzinach przy rozcieńczeniu 10-2. Po 24 godzinach cała OTA uległa detoksyfikacji.
Produkty bakteryjne w pożywce minimalnej przy rozcieńczeniu 10-3 (liczba bakterii 106-109) zdetoksyfikowały 40 do 100% ochratoksyny A po 2,5 godz. i 100% po 24 godz. W pożywce odżywczej detoksyfikacja zachodziła nieco wolniej. Przy trzecim rozcieńczeniu, 40 do 50% toksyny uległo detoksyfikacji po 2,5 godz. i 80 do 100% po 24 godz. Testy te pokazują, że drobnoustroje mogą być przekształcone do stabilnych produktów ujawniających właściwości detoksyfikujące zarówno w pożywce minimalnej jak i złożonej.
5. Degradacja ochratoksyny (OTA) przez liofilizaty w stymulowanym środowisku jelitowym.
Model testowy A
Model ten służy do badania liofilizatów szczepów drożdży DSM 14153, DSM 14154, DSM 15155, DSM 14156 i DSM 14162 jak również tlenowych (DSM 14170, DSM 14167, DSM 14168 i DSM 14169) i beztlenowych (DSM 14197) szczepów bakterii. Jelito cienkie świeżo ubitej świni cięto na kawałki o długości około 15 cm, do każdego z nich dodano 100 ml pożywki zawierającej OTA [200 ppb]. Porcje te ostatecznie inokulowano bezpośrednio 1 g liofilizatu i inkubowano w 35°C. Po O, 6, 24 i 48 godzinach pobrano próbki do dalszej analizy OTA przez HPLC i przechowywano zamrożone w niskiej temperaturze (-20°C) aż do wspomnianej analizy.
Potwierdzono, że najbardziej aktywne spośród drożdży są DSM 14153, DSM 14156 i DSM 14162. Już po pierwszych sześciu godzinach inkubacji odpowiednio 70 do 90%, 50 do 90% i 80 do 90% występującej toksyny zostało przekształcone (po 24 godz.: 90 do 95%). Dwa kolejne testowane drożdże (DSM 14154, DSM 14155) są w kategoriach aktywności nieco gorsze od trzech wyżej wspomnianych szczepów (0 do 20% degradacji po 6 godz.; 30 do 50% po 24 godz.; 80% po 48 godz.).
Wśród bakterii tlenowych, drobnoustrój DSM 14168 był najlepszy; po 6 godzinach, 50 do 100% występującej toksyny uległo już reakcji, po 24 godz. 80 do 100%. Okazało się, że DSM 14169 jest również całkowicie „akceptowalny: po 6 godzinach 0 do 90% OTA uległo detoksyfikacji, po 24 godzinach 70 do 95%. Dwa pozostałe szczepy bakterii wyraźnie sprawdzały się gorzej (0-40% po 6 godz.; 50 do 60% po 24 godz.; 60-80% po 48 godz.).
Beztlenowy izolat z jelita cienkiego DSM 14197 degradował obecną mykotoksynę po 6 godzinach inkubacji na poziomie 0 do 60%; po 24 godz. przereagowało od 50 do 100% OTA.
Analogiczne testy przeprowadzono dla następujących drobnoustrójów: izolat F6 z jelita cienkiego: 90-95% po 24 godz. izolat z okrężnicy Di 1-8: 80-95% po 24 godz.
Trichosporon ovoides: 40-50% po 24 godz.
Triosporon dulcitum: 50-90% po 24 godz.
Cryptococcus curvatus: 40-50% po 24 godz.
Trichosporon laibachii: 50% po 24 godz.
Stenotrophomonas nitritreducens: 60-95% po 24 godz.
Stenotrophomonas sp.: 50-70% po 24 godz.
Model ten pokazuje, że OTA może być deaktywowana przez wytworzone produkty w zbuforowanej pożywce zawierającej fragmenty jelita z odpowiednim środowiskiem (substancje odżywcze i flora jelitowa).
Model testowy B
Model ten służył do badania liofilizatów szczepów drożdży DSM 14153, DSM 14156 i DSM 14162, jak również szczepów bakteryjnych DSM 14168 (tlenowy), DSM 14169 (tlenowy) i DSM 14197 (beztlenowy).
Jelito cienkie świeżo ubitej świni pocięto na fragmenty o długości około 25 cm, które zamknięto na końcach przy pomocy sznurka. 1 g badanego produktu odważono do 50 ml probówki wirówkowej i rozpuszczono w 20 ml pożywki testowej zawierającej OTA [200 ppb] (tlenowe bakterie i drożdże pożywka minimalna; organizmy beztlenowe bufor dla organizmów beztlenowych). Wychodząc ze starannie wymieszanej zawiesiny sporządzono opcjonalnie również 10-krotne rozcieńczenia. Zmieszane rozcieńczenie(a) wstrzyknięto następnie bezpośrednio do fragmentów jelita. Po pobraniu wyjściowej próbki bezpośrednio z kawałka jelita inkubowano ją w 35°C zawieszoną w 250 ml butelce Pyrex (tj. sznurek na jednym końcu był przytwierdzony przez nakrętkę butelki). Po 6, 24 i 48 godz.
kolejne próbki pobierano do dalszej analizy transformacji OTA przez HPLC.
PL 207 048 B1
W przypadku drożdży (około 107 KBU/ml) degradację OTA do 90% (DSM 14153) zarejestrowano po 6 godzinach. Najwyżej po 24 godz. wysokie aktywności (80 do 100%) można było wykryć dla wszystkich z tych próbek.
Porównywalne wyniki otrzymano również dla 10-krotnych i 100-krotnych rozcieńczeń liofilizatów. Podobne wyniki otrzymano dla dwóch szczepów bakterii tlenowych, DSM 14168 i DSM 14169. Po 6 godz. 20 do 60% OTA zostało przekształcone, po 24 godz. 80 do 95%. Beztlenowy drobnoustrój DSM 14197 ujawniał zdolność do degradacji pomiędzy, 40 a 50% po 6 godzinach, która wzrastała do 90% po 24 godzinach. Fragmenty jelita inkubowane z OTA, bez jakichkolwiek produktów nie wykazywały żadnej aktywności detoksyfikującej.
Testy te pokazują, że drobnoustroje detoksyfikujące ochratoksyny były zdolne do degradowania tych toksyn również w środowisku odpowiadającym środowisku jelita. Co za tym idzie, przedstawiono niezbicie zastosowanie drobnoustrojów jako suplementów do produktów spożywczych lub pasz do detoksyfikacji ochratoksyn.
6. Detoksyfikacja produktów spożywczych i pasz dla zwierząt
Drobnoustroje detoksyfikujące ochratoksyny hodowano przez około 66 godzin zgodnie z przykładami 1 do 3 w odpowiednich warunkach. 25 ml zawiesiny wirowano przez 15 min. przy 3210 x g i pobrano w odpowiedniej objętoś ci minimalnej poż ywki uzupeł nionej 200 ppb OTA. Utworzoną zawiesinę użyto do inokulacji 25 g lub 25 ml produktu spożywczego, kawy w proszku, grubo mielonej mamałygi, semoliny, piwa i wina. Po starannym wymieszaniu produktu spożywczego z zawiesiną drobnoustroju pobrano próbkę (=próbka zero). Inkubację prób prowadzono w 25°C przez 9 dni. Następnie 5 g próbki zbadano w porównaniu z próbką zero. Dodatkowo inkubowano równocześnie próby ślepe. Dodano do nich OTA, ale bez drobnoustrojów. Dla zbadania ochratoksyn zawartych w pokarmach pł ynnych dokładnie 1 ml każ dego pokarmu wolnego od drobnoustrojów zakwaszono 0,5 ml 1 M kwasu fosforowego i ekstrahowano 5 ml chlorku metylenowego. 5 ml ekstraktu wysuszono pod azotem. Każdą próbkę poddano dwukrotnej obróbce, pozostałości po suszeniu zawieszono w acetonitryl/woda/kwas octowy (45:54:1) i raz w toluen/kwas octowy (99:1). Analizy próbek przeprowadzono przez HPLC i TLC. Gdy badano semolinę 5 g próbki odważono do 100 ml kolby Schott i wytrząsano przez 1 godz. z 20 ml acetonitryl/woda (60:40) przy 170 obr./min. Po filtrowaniu ekstrakt ten zbadano bezpośrednio przez HPLC. Obróbka grubo mielonej mamałygi i kawy do analiz OTA była w pewnym stopniu bardziej kłopotliwa. W tych przypadkach 5 g próbek odważono do 100 ml kolb Schott i wytrząsano z 20 ml acetonitryl: woda (60:40) przez 1 godzinę. Po filtrowaniu 4 ml ekstraktu zmieszano z 44 ml buforu PBS (0,1% Tween 20) i naniesiono na kolumnę powinowactwa immunologicznego. Następnie, przeprowadzono analizę HPLC. Oznaczano zarówno zmniejszenie ilości OTA i pojawienie się metabolitu OTA. W próbkach kawy i zboża nie można było wykryć OTA z uwagi na zastosowane oczyszczanie na kolumnie. Moż na było osią gnąć nastę pujące poziomy degradacji:
Szczep
Piwo Wino Zboże Kawa
DSM 14153 100 (+) 99 (+) 94 (+) 100 (+) ~67 (+)
DSM 14154 100 (+) 94 (+) 50 (+) 100 (+) 0 (-)
DSM 14155 30 (+) 0 (-) 99 (+) 100 (+) 0 (-)
DSM 14156 100 (+) 95 (+) 96 (+) 100 (+) 30 (+)
DSM 14162 83 (+) 12 (+) 100 (+) 100 (+) 0 (-)
DSM 14170 75 (+) 0 (-) 0 (-) 89 (+) 0 (-)
DSM 14167 100 (+) 4 (+) 39 (+) ~90 (+) 0 (-)
DSM 14168 100 (+) 0 (-) 50 (+) 94 (+) 0 (-)
DSM 14169 100 (+) 0 (-) 0 (-) 91 (+) 0 (-)
DSM 14171 100 (+) 0 (-) 79 (+) 81 (+) 0 (-)
PL 207 048 B1
7. Degradacja mykotoksyn.
Drobnoustroje hodowano przez około 66 godzin. Następnie odwirowano je (3210 x g, temperatura pokojowa) i otrzymane osady zawieszono w pożywce minimalnej. Do pożywki ninimalnej dodano 1 ppm deoksyniwalenolu, 1 ppm fumonizyny B1, 1 ppm zearalenonu, 200 ppb aflatoksyny B1 i 2 ppm cytryniny. Przed inkubacją porcji w 30°C pobrano próbkę („próbka zero). Czas inkubacji wynosił 96 godzin. Porcje oznaczono w dwóch powtórzeniach przez analizę HPLC, raz jako nadsącz (po wirowaniu) i raz jako pełną porcję. Dla oczyszczenia, odpowiednio 3 ml nadsączy i 2 ml ogólnej próbki, naniesiono na 15 g materiału Extrelut. Po 15 minutach, próbki rozcieńczono 40 ml octanu etylu. 7 ml octanu etylu wysuszono i zawieszono w odpowiednim rozpuszczalniku. Analizę aflatoksyny B1 i fumonizyny B1 przeprowadzono po wstępnej modyfikacji. Próbki po 96 godzinach zbadano pod kątem degradacji odpowiednich toksyn w porównaniu z próbkami na początku. W tym celu, zarówno nadsącza (rozdział biomasy przez wirowanie) i ogólne próbki (z biomasą) zbadano pod kątem DON, ZON i AFB1. Wyniki orzedstawiono w tabeli 2.
T a b e l a 2
Szczep Poziom degradacji ZON [%] Poziom degradacji FB1 [%] Poziom degradacji Poziom degradacji CIT [%]
AFB 1 [%]
Nadsącz Łącznie Nadsącz Nadsącz Łącznie Nadsącz
DSM 14170 0 24 0 0 0 100
DSM 14167 0 28 0 0 10 0
DSM 14168 0 32 0 0 10 0
DSM 14169 88 90 0 8 46 0
DSM 14171 0 43 0 0 24 0
DSM 14153 100 100 19 20 13 0
DSM 14154 19 67 22 64 63 0
DSM 14155 81 100 29 20 38 0
DSM 14156 100 100 6 0 61 0
DSM 14162 17 62 8 0 0 0
Z powyż szych oznaczeń jasno wynika, że pewne mykotoksyny takie jak zearelonon (ZON), aflatoksyna B1 (AFB1), fumonizyna B1 (FB1) mogą być częściowo degradowane wyjątkowo dobrze przez drobnoustroje według wynalazku. Cytrynina (CIT) może być degradowana w 100% jedynie przez bakterię Sphingomonas sp. (DSM 14170).
Podsumowując, stwierdzono, że drobnoustroje według wynalazku umożliwiają łatwą, w szczególności, degradację ochratoksyn w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt, i również w środowisku jelita, przy czym degradacja zearalenonu, cytryniny i podobnych daje szczególnie dobre wyniki.
Załącznik do zgłoszenia PCT/AT02/00356
Zgłaszający Erber Aktiengesellschaft i wsp.
Wyszczególnienie zgodnie z zasadą 13bis, paragraf 4 z Regulaminu do Układu o współpracy patentowej.
Wszystkie drobnoustroje cytowane w niniejszym zgłoszeniu PCT, PCT/AT02/00356 zostały zdeponowane w DSMZ -Niemiecki Zbór Drobnoustrojów i Hodowli Komórkowych GmbH, Mascheroder Weg 1b, 38123 Braunschweig, Niemcy (DE).
Numer zdeponowania Data zdeponowania
1 2
DSM 14156 08.03.2001
DSM 14155 08.03.2001
DSM 14154 08.03.2001
PL 207 048 B1 cd. tabeli
1 2
DSM 14153 08.03.2001
DSM 14197 15.03.2001
DSM 14171 08.03.2001
DSM 14169 08.03.2001
DSM 14168 08.03.2001
DSM 14167 08.03.2001
DSM 14170 08.03.2001
DSM 14162 08.03.2001
Zastrzeżenia patentowe

Claims (11)

Zastrzeżenia patentowe
1. Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, znamienny tym, że stosowany jest drobnoustrój, a w szczególności tlenowe lub beztlenowe detoksyfikujące bakterie lub drożdże, które odpowiednio odcinają grupę fenyloalaniny ochratoksyn i degradują zearalenony, przy czym bakterie detoksyfikują ce mykotoksyny są wybrane spoś ród gatunków: Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacteium sp. DSM 14197, i/lub detoksyfikujące drożdże wybrane są spośród: Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162.
2. Drobnoustrój wedł ug zastrz. 1, znamienny tym, ż e bakterie i/lub dro żd że są stabilizowane, szczególnie przez liofilizację, suszenie rozpyłowe lub mikroenkapsulację.
3. Drobnoustrój według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że bakterie lub drożdże są stosowane jako ekstrakty bezkomórkowe lub ekstrakty nieoczyszczone.
4. Drobnoustrój wedł ug zastrz. 3, znamienny tym, ż e drobnoustrój stosowany jest jako ekstrakt bezkomórkowy w roztworze, w szczególności w roztworze wodnym.
5. Drobnoustrój według zastrz. 3, znamienny tym, że ekstrakt nieoczyszczony uzyskany jest ze wspomnianych bakterii i drożdży przez zastosowanie ultradźwięków, trawienia enzymatycznego, kombinacji gwałtownego zamrażania i rozmrażania, homogenizacji przepływowej, prasy francuskiej, autolizy w NaCl o wysokim stężeniu i/lub młyna kulowego.
6. Drobnoustrój wedł ug jednego z zastrz. 1 do 4, znamienny tym, ż e drobnoustrój stosowany jest w zbuforowanym roztworze zawierającym octan, cytrynian, fosforan lub bufor Iris-HCl (chlorowodorek tris(hydroksymetylo)-aminometanu) o pH pomiędzy 1 i 12, a w szczególności 2 i 8.
7. Zastosowanie bakterii wybranych spośród: Sphingomonas sp. DSM 14170 i DSM 14167, Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168, Stenotrophomonas sp. DSM 14169, Ralstonia eutropha DSM 14171 i Eubacterium sp. DSM 14197 i/lub drożdży wybranych spośród: Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Cryptococcus sp. DSM 14154, Rhodotorula yarrowii DSM 14155, Trichosporon mucoides DSM 14156 i Trichosporon dulcitum DSM 14162 do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i paszach dla zwierząt przez odcinanie grupy fenyloalaninowej ochratoksyny lub degradowanie zearalenonu.
8. Zastosowanie według zastrz. 7, znamienne tym, że Trichosporon spec. nov. DSM 14153, Eubacterium sp. DSM 14197 lub Stenotrophomonas nitritreducens DSM 14168 stosowane są do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt.
9. Zastosowanie według zastrz. 7 albo 8, znamienne tym, ż e do detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt stosowane są mieszane hodowle wspomnianych bakterii i/lub drożdży.
10. Sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, w produktach spożywczych i/lub paszach dla zwierząt przy pomocy drobnoustroju, znamienny tym,
PL 207 048 B1 że drobnoustrój zdefiniowany w jednym z zastrz. 1 do 8 miesza się z produktami spożywczymi lub paszami dla zwierząt w ilościach w zakresie od 0,01% wagowo do 1% wagowo i w szczególności 0,05% wagowo do 0,5% wagowo.
11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że produkty spożywcze lub pasze dla zwierząt traktuje się przez mieszanie w zawiesinie wodnej wspomnianego drobnoustroju zawierającej wodę w 20 do 99% wagowo, w szczególnoś ci 35 do 85% wagowo, w temperaturze od 10 do 60°C, w szczególności 15 do 45°C, przez 2 minuty do 12 godzin, w szczególności 5 minut do 2 godzin.
PL368742A 2001-12-20 2002-12-19 Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, zastosowanie bakterii do detoksyfikacji mykotoksyn oraz sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn PL207048B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT0200001A AT413540B (de) 2001-12-20 2001-12-20 Mikroorganismus, welcher ochratoxine sowie ochratoxine und zearalenone entgiftet, sowie verfahren und verwendung hiefür

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL368742A1 PL368742A1 (pl) 2005-04-04
PL207048B1 true PL207048B1 (pl) 2010-10-29

Family

ID=3689579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL368742A PL207048B1 (pl) 2001-12-20 2002-12-19 Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, zastosowanie bakterii do detoksyfikacji mykotoksyn oraz sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn

Country Status (22)

Country Link
US (2) US20040208956A1 (pl)
EP (1) EP1455595B1 (pl)
AT (2) AT413540B (pl)
AU (1) AU2002363819A1 (pl)
BR (1) BR0207398B1 (pl)
CA (1) CA2467392C (pl)
CY (1) CY1108107T1 (pl)
DE (1) DE50212242D1 (pl)
DK (1) DK1455595T3 (pl)
EA (1) EA008598B1 (pl)
ES (1) ES2303563T3 (pl)
HU (1) HU229086B1 (pl)
IL (2) IL161847A0 (pl)
MA (1) MA26256A1 (pl)
MX (1) MXPA04005985A (pl)
NO (1) NO330925B1 (pl)
PL (1) PL207048B1 (pl)
PT (1) PT1455595E (pl)
SI (1) SI1455595T1 (pl)
TW (1) TW200302053A (pl)
WO (1) WO2003053161A1 (pl)
ZA (1) ZA200403653B (pl)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT501359B1 (de) * 2004-11-16 2007-10-15 Erber Ag Verfahren und mikroorganismus zur entgiftung von fumonisinen sowie verwendung und futtermittelzusatz
US20100080783A1 (en) * 2004-11-22 2010-04-01 Watson James B Microbial feed additive
US20080095890A1 (en) * 2004-11-22 2008-04-24 Watson James B Microbial feed additive
ES2442861T3 (es) * 2006-06-29 2014-02-13 Kraft Foods R & D, Inc. Zweigniederlassung München Proceso de modificación del sabor del café
GB0621792D0 (en) * 2006-11-01 2006-12-13 Mann Stephen P Composition
AU2009281683B2 (en) * 2008-07-21 2014-07-24 Erber Aktiengesellschaft Method for treating food silage for ruminants and food silage additive
PL214583B1 (pl) 2010-06-16 2013-08-30 Inst Biotechnologii Przemyslu Rolno Spozywczego Im Prof Waclawa Dabrowskiego Szczep bakterii Lactobacillus plantarum S, zastosowanie szczepu bakterii Lactobacillus plantarum S oraz preparat do kiszenia pasz objetosciowych
ES2373852B1 (es) * 2010-07-29 2012-12-18 Consejo Superrior De Investigaciones Cientificas (Csic) Degradación biológica de ocratoxina a en ocratoxina alfa.
JP2013540430A (ja) * 2010-09-06 2013-11-07 デュポン ニュートリション バイオサイエンシーズ エーピーエス オクラトキシン解毒用のアミダーゼ含有食品添加物
JP2013173710A (ja) * 2012-02-27 2013-09-05 Univ Of Tokyo アフラトキシン産生阻害剤及びその製造方法、アフラトキシン汚染防除方法、並びに、アフラトキシン産生阻害剤産生菌
US9068171B2 (en) 2012-09-06 2015-06-30 Mycotechnology, Inc. Method for myceliating coffee
US9427008B2 (en) 2012-09-06 2016-08-30 Mycotechnology, Inc. Method of myceliation of agricultural substates for producing functional foods and nutraceuticals
AT514775B1 (de) 2013-08-28 2017-11-15 Erber Ag Polypeptid zur hydrolytischen Spaltung von Zearalenon und/oder Zearalenon Derivaten, isoliertes Polynukleotid davon sowie Zusatzstoff enthaltend das Polypeptid
CN103599619B (zh) * 2013-11-15 2016-01-06 中国农业科学院农产品加工研究所 利用电子束辐照提高溶液中赭曲霉毒素a降解效果的方法
CN104745493A (zh) * 2013-12-27 2015-07-01 中粮营养健康研究院有限公司 降解黄曲霉毒素b1的红城红球菌菌株的分离、培养和使用方法
US10231469B2 (en) 2014-03-15 2019-03-19 Mycotechnology, Inc. Myceliated products and methods for making myceliated products from cacao and other agricultural substrates
US9572364B2 (en) 2014-08-26 2017-02-21 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of mycelial liquid tissue culture
KR102034835B1 (ko) 2014-08-26 2019-10-21 마이코테크놀로지, 인코포레이티드 균사체 액체 조직 배양물의 생산방법 및 용도
US10709157B2 (en) 2014-08-26 2020-07-14 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of mycelial liquid tissue culture
AT516457B1 (de) 2014-11-07 2017-03-15 Erber Ag Polypeptid zur enzymatischen Detoxifizierung von Zearalenon, sowie isoliertes Polynukleotid, sowie Zusatzstoff, Verwendung und Verfahren desselben
WO2016138476A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 Mycotechnology, Inc. Methods for lowering gluten content using fungal cultures
EP3451856B1 (en) 2016-04-14 2021-07-21 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of myceliated high protein food compositions
US10806101B2 (en) 2016-04-14 2020-10-20 Mycotechnology, Inc. Methods for the production and use of myceliated high protein food compositions
US11166477B2 (en) 2016-04-14 2021-11-09 Mycotechnology, Inc. Myceliated vegetable protein and food compositions comprising same
US11178875B2 (en) 2016-06-24 2021-11-23 AgBiome, Inc. Methods and compositions for spray drying gram-negative bacteria
RU2634914C2 (ru) * 2016-12-08 2017-11-08 Елена Николаевна Ефременко Способ биообезвреживания микотоксинов
CN108251309B (zh) * 2016-12-29 2020-09-01 中粮营养健康研究院有限公司 一种菌剂及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用
US11058137B2 (en) 2018-09-20 2021-07-13 The Better Meat Co. Enhanced aerobic fermentation methods for producing edible fungal mycelium blended meats and meat analogue compositions
US12274283B2 (en) 2018-09-20 2025-04-15 The Better Meat Co. Enhanced aerobic fermentation methods for producing edible fungal mycelium blended meats and meat analogue compositions
CN109321478B (zh) * 2018-11-17 2021-07-16 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种降解霉菌毒素的菌株yk18及其应用
CN110563499A (zh) * 2019-07-09 2019-12-13 湖北新保得生物科技有限公司 一种以黄酒糟为基质生产氨基酸叶面肥的方法
TWI698524B (zh) * 2019-07-15 2020-07-11 國立屏東科技大學 可以分解赭麴黴毒素的丁酸梭菌ml2菌株
CN112244202B (zh) * 2020-09-02 2022-09-16 江苏大学 一种隐球酵母用于葡萄汁中赭曲霉毒素a控制降解的用途
WO2022073649A1 (en) 2020-10-08 2022-04-14 Erber Aktiengesellschaft Tetrameric alpha/beta hydrolase variants with increased temperature stability and methods of using and producing thereof
CN114645037A (zh) 2020-12-18 2022-06-21 艾尔柏股份公司 用于使赭曲霉毒素a解毒的工具和方法
CN112641032B (zh) * 2020-12-18 2022-09-16 江苏大学 基于隐球酵母y3胞内酶降解赭曲霉毒素a的用途
WO2023025938A1 (en) 2021-08-27 2023-03-02 DSM Austria GmbH Means and methods for detoxifying ochratoxin a
CN115812893B (zh) * 2022-08-05 2024-09-17 河南农业大学 饲料用霉菌毒素降解剂及其应用
EP4593627A1 (en) * 2022-09-27 2025-08-06 DSM IP Assets B.V. Method for reducing asperphenamate concentration
CN121712497A (zh) 2023-08-17 2026-03-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于降低外源雌激素的雌激素作用的手段和方法
EP4537672A1 (de) 2023-10-11 2025-04-16 Agrana Beteiligungs- Aktiengesellschaft Verfahren zur herstellung eines pflanzenbasierten klebers mit reduziertem t2/ht2-gehalt
WO2026033079A1 (en) 2024-08-08 2026-02-12 Dsm Ip Assets B.V. Compositions for reducing the adverse effects of trichothecenes

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT504B (pl) 1897-06-29 1899-11-10 August Matitsch
US4004978A (en) * 1975-09-19 1977-01-25 Imc Chemical Group, Inc. Microbiological reduction of zearalenone and related compounds
US5165946A (en) * 1990-03-07 1992-11-24 Engelhard Corporation Animal feed additive and method for inactivating mycotoxins present in animal feeds
AU659796B2 (en) 1990-03-07 1995-06-01 Engelhard Corporation Animal feed additive and method for inactivating mycotoxins present in animal feeds
US5192547A (en) 1990-10-01 1993-03-09 Engelhard Corporation Animal feed containing selected montmorillonite clay as additive and method for selecting the clay
US5792931A (en) * 1994-08-12 1998-08-11 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Fumonisin detoxification compositions and methods
AT504U1 (de) * 1994-10-19 1995-12-27 Erber Erich Kg Futtermittelzusatz und verwendung desselben zur inaktivierung von mykotoxinen in futtermitteln bzw. im verdauungstrakt von tieren sowie verfahren zur herstellung eines futtermittels
US5639492A (en) 1995-01-13 1997-06-17 Amcol International Corporation Method and composition for achieving animal weight gain with mycotoxin-contaminated animal food
AUPO500597A0 (en) 1997-02-07 1997-03-06 Royal Melbourne Institute Of Technology Removal of mycotoxin contaminants from biological products
JP3133020B2 (ja) * 1997-09-03 2001-02-05 アサマ化成株式会社 真核微生物用抗菌剤およびそれを用いる真核微生物の増殖抑制方法
AT406166B (de) * 1997-12-30 2000-03-27 Erber Erich Kg Mikroorganismus, verfahren zur gewinnung desselben sowie futtermittelzusatz
US5935623A (en) * 1998-01-15 1999-08-10 Milwhite, Inc. Use of thermally treated clays in animal feeds
EP1079696B1 (en) * 1998-04-17 2007-03-07 Alltech, Inc. Compositions for removal of mycotoxins from feed
DE19821509A1 (de) 1998-05-13 1999-11-18 Manfred Brunner Verfahren zum Adsorbieren von toxischen Substanzen, insbesondere Mycotoxinen, bei der Herstellung von Human-Nahrungs- oder Tierfuttermitteln und die dabei erhaltenen Produkte
DE19900813A1 (de) 1999-01-12 2000-07-13 Sued Chemie Ag Mykotoxin-Adsorbens
US6812380B2 (en) * 2001-03-27 2004-11-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Compositions and methods of zearalenone detoxification

Also Published As

Publication number Publication date
BR0207398A (pt) 2004-02-10
BR0207398B1 (pt) 2014-12-23
HUP0402278A2 (hu) 2005-03-29
EP1455595B1 (de) 2008-05-07
SI1455595T1 (sl) 2008-08-31
AT413540B (de) 2006-03-15
NO20033664D0 (no) 2003-08-19
US20090098244A1 (en) 2009-04-16
ATE394034T1 (de) 2008-05-15
EA200400836A1 (ru) 2004-12-30
ATA20002001A (de) 2005-08-15
CA2467392C (en) 2011-04-19
EP1455595A1 (de) 2004-09-15
AU2002363819A1 (en) 2003-07-09
DK1455595T3 (da) 2008-08-11
PL368742A1 (pl) 2005-04-04
ZA200403653B (en) 2007-04-25
NO330925B1 (no) 2011-08-22
CA2467392A1 (en) 2003-07-03
IL161847A (en) 2010-11-30
MA26256A1 (fr) 2004-08-01
MXPA04005985A (es) 2005-03-31
US20040208956A1 (en) 2004-10-21
US8119172B2 (en) 2012-02-21
CY1108107T1 (el) 2014-02-12
EA008598B1 (ru) 2007-06-29
TW200302053A (en) 2003-08-01
DE50212242D1 (de) 2008-06-19
ES2303563T3 (es) 2008-08-16
IL161847A0 (en) 2005-11-20
PT1455595E (pt) 2008-08-01
WO2003053161A1 (de) 2003-07-03
HU229086B1 (en) 2013-07-29
HUP0402278A3 (en) 2005-04-28
NO20033664L (no) 2003-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL207048B1 (pl) Drobnoustrój do biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn, mianowicie ochratoksyn i/lub zearalenonów, zastosowanie bakterii do detoksyfikacji mykotoksyn oraz sposób biologicznej detoksyfikacji mykotoksyn
EP0946427B1 (en) Biochemical media system for reducing pollution
HU225391B1 (en) Microorganism, method for obtaining same and feed additive
EA013566B1 (ru) Микроорганизм для детоксикации фумонизинов, а также его применение, способ детоксикации фумонизинов и кормовая добавка, содержащая этот микроорганизм
KR101465233B1 (ko) 감태와 바실러스 속 is-2 균주를 포함하고 있는 어류용 사료 첨가제
US20040191233A1 (en) Bifidobacteria and siderophores produced thereby and methods of use
KR101230813B1 (ko) 사프로레그니아 속 미생물에 대한 생물학적 방제용 프로바이오틱스
WO1980002282A1 (en) Method for bacteriological treatment of manure and high bod industrial wastes
PH12014502245B1 (en) Novel separated bacillus licheniformis and probiotics using same
EP1022023B1 (en) Composition suitable as food integrator and for the treatment of intestinal disorders and alterations of the bacterial flora
KR20140077645A (ko) 수질 및 저질 개선용 미생물제제 제형
KR20160026263A (ko) 양식어류용 사료 조성물 및 이를 이용하여 양식시킨 양식어류
KR101306662B1 (ko) 면역증강제 및 항생제 대체 물질 및 그 제조 방법
KR20030063961A (ko) 돼지 전염성위장염 (TGE) 코로나바이러스 및 유해 미생물억제 활성을 갖는 신규 락토바실러스 프란타럼 Probio-38및 이를 함유하는 생균활성제
WO2003071874A1 (en) Aligicidal fermentated straw / barley matrix
CN112293605A (zh) 具有促进鱼类的消化、免疫活性以及生长效果的ep膨化发酵配合饲料及其制造方法
JP2000217566A (ja) ラクトバチラスクリアランスを培養するための培養基および該菌種の保存方法
CN114958638B (zh) 一种降低水产品中微囊藻毒素含量的复合菌剂及其使用方法
KR100585392B1 (ko) 돼지 전염성위장염 (TGE) 코로나바이러스 및 유해 미생물 억제 활성을 갖는 신규 락토바실러스 살리바리우스 Probio-37 및 이를 함유하는 생균활성제
Schatzmayr et al. A novel approach to deactivate ochratoxin A
KR100206454B1 (ko) 신규한 락토바실러스 속 디에스-12균주와 이를 이용한 어류용 프로바이오틱스
RU2850655C1 (ru) Кормовая добавка для сельскохозяйственных животных и птиц
JPH0739322A (ja) 飲食品中のシュウ酸含量の低減方法
MXPA00006525A (en) Microorganism, method for obtaining same and feed additive
HK1031685A (en) Composition suitable as food integrator and for the treatment of intestinal disorders and alterations of the bacterial flora

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification