PL208420B1 - New strain Lactobacillus plantarum and composition containing the new strain Lactobacillus plantarum - Google Patents
New strain Lactobacillus plantarum and composition containing the new strain Lactobacillus plantarumInfo
- Publication number
- PL208420B1 PL208420B1 PL380802A PL38080206A PL208420B1 PL 208420 B1 PL208420 B1 PL 208420B1 PL 380802 A PL380802 A PL 380802A PL 38080206 A PL38080206 A PL 38080206A PL 208420 B1 PL208420 B1 PL 208420B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- strain
- lactobacillus
- bacteria
- new strain
- Prior art date
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims description 58
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims description 49
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims description 49
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 22
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 19
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 19
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 17
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 13
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 12
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 8
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 6
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 5
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 3
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 3
- 241000917009 Lactobacillus rhamnosus GG Species 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000002368 bacteriocinic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 2
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 2
- 229940059406 lactobacillus rhamnosus gg Drugs 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- WZRJTRPJURQBRM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-n-(5-methyl-1,2-oxazol-3-yl)benzenesulfonamide;5-[(3,4,5-trimethoxyphenyl)methyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1.COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 WZRJTRPJURQBRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000000412 Avitaminosis Diseases 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 1
- 241000186014 Bifidobacterium angulatum Species 0.000 description 1
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 1
- 241000186011 Bifidobacterium catenulatum Species 0.000 description 1
- 241000186020 Bifidobacterium dentium Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 206010061166 Gastroenteritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001185310 Symbiotes <prokaryote> Species 0.000 description 1
- 206010047627 Vitamin deficiencies Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N cefaclor Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=C(Cl)CS[C@@H]32)C(O)=O)=O)N)=CC=CC=C1 QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N 0.000 description 1
- 229960005361 cefaclor Drugs 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- 229940047766 co-trimoxazole Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002828 disc diffusion antibiotic sensitivity testing Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 1
- 108010042648 lactocin Proteins 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000001374 post-anti-biotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013334 tissue model Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep Lactobacillus plantarum i kompozycja zawierająca nowy szczep Lactobacillus plantarum.The subject of the invention is a new Lactobacillus plantarum strain and a composition containing the new Lactobacillus plantarum strain.
Podstawowymi gatunkami z rodzaju Lactobacillus zasiedlającymi ludzki przewód pokarmowy są między innymi: Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, zaś z rodzaju Bifidobacterium od ludzi izolowane zostały: Bifidobacterium infantis (z dwoma podgatunkami), Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium catenulatum i Bifidobacterium angulatum.The basic species of the genus Lactobacillus inhabiting the human gastrointestinal tract are, among others: Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophilus, while from the genus Bifidobacterium from humans were isolated: Bifidobacterium Bifunkimus, Bifidobacterium longobacterium, , Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium catenulatum and Bifidobacterium angulatum.
Obecność bakterii z rodzaju Lactobacillus i Bifidobacterium zarówno w górnym jak i w dolnym odcinku, nie wyłączając śluzówki żołądka, jest uważana za szczególnie pożądaną. Posługując się określeniem Fullera bakterie te zaliczamy do probiotyków.The presence of Lactobacillus and Bifidobacterium in both the upper and lower regions, including the gastric mucosa, is considered particularly desirable. Using the term Fuller, these bacteria are classified as probiotics.
Probiotyki są to żywe, bakteryjne dodatki do żywności, stymulujące i poprawiające funkcjonowanie przewodu pokarmowego gospodarza.Probiotics are live, bacterial food additives that stimulate and improve the functioning of the host's gastrointestinal tract.
Wymagania stawiane szczepom probiotycznym są bardzo wysokie, a mianowicie powinny one:The requirements for probiotic strains are very high, namely they should:
1. pochodzić ze zdrowej mikroflory ludzkiego organizmu,1. come from a healthy microflora of the human body,
2. posiadać precyzyjnie określony rodzaj i gatunek, potwierdzony najnowszymi badaniami molekularnymi,2. have a precisely defined type and species, confirmed by the latest molecular tests,
3. wykazywać wyjątkową, antagonistyczną aktywność wobec typowych patogenów przewodu pokarmowego,3.show exceptional, antagonistic activity against typical pathogens of the gastrointestinal tract,
4. posiadać zdefiniowane właściwości powierzchniowe i adherencyjne potwierdzone za pomocą badań przeprowadzonych przy u ż yciu hodowli tkankowej,4.have defined surface and adherence properties confirmed by tests carried out with the use of tissue culture,
5. wykazywać oporność na sole żółci i niskie pH soku żołądkowego,5.show resistance to bile salts and low pH of gastric juice,
6. wykazywać wzór oporności na dane antybiotyki typowy dla poszczególnych gatunków, a ponadto, nie posiadać plazmidowego DNA kodują cego oporność.6. show a pattern of resistance to a given antibiotic that is typical of a particular species, and, moreover, no plasmid DNA encoding resistance.
Bakterie probiotyczne wykorzystywane są do uzupełnienia, odtwarzania i podtrzymywania prawidłowego składu normalnej flory po zakończonej kuracji antybiotykowej. Dzięki zdolności do adherencji bakterie probiotyczne blokują uwolnione na powierzchni jelita receptory przez co uniemożliwiają przytwierdzenie się i kolonizację bakteriom chorobotwórczym wywołującym biegunki poantybiotykowe. Ponadto coraz więcej prac naukowych mówi o celowym wykorzystaniu bakterii probiotycznych do profilaktyki i leczenia ostrych zakażeń jelitowych, których czynnikami chorobotwórczymi są najczęściej E. coli, Shigella, Salmonella, Capylobacter, a także rotawirusy. Badania wykazują wzajemne zależności pomiędzy Helicobacter pylori, a bakteriami probiotycznymi. Bakterie probiotyczne wzmacniają mechanizmy obronne organizmu człowieka. W celu odtworzenia naturalnej flory bakteryjnej podaje się zwiększone ilości bakterii probiotycznych w kompozycjach leczniczych. Znane jest z polskiego opisu patentowego nr 184037 zastosowanie Lactobacillus plantarum zawierających specyficzną względem mannozy adhezynę, do wytwarzania środka farmaceutycznego hamującego wiązanie się bakterii patogenicznych eksprymujących specyficzne względem mannozy adhezyny z powierzchnią komórek nabłonkowych. Szczep Lactobacillus plantarum, który można zastosować zgodnie z wynalazkiem przywiera do kuleczek agarozowych powleczonych Dmannozą. Wynalazek dotyczy ponadto zastosowania takich szczepów do wytwarzania środka farmaceutycznego do stosowania w profilaktyce i/lub leczeniu stanów związanych z translokacją bakteryjną, zapalenia żołądka i jelit oraz innych chorób wywołanych przez bakterie eksprymujące specyficzne względem mannozy adhezyny. Znany jest z polskiego opisu patentowego nr 184603 środek farmaceutyczny do leczenia i/lub profilaktyki uszkodzenia i niewydolności wątroby. Środek ten zawiera szczep Lactobacillus plantarum zdolny do kolonizacji ludzkiej błony śluzowej jelita in vivo w połączeniu z argininą i farmaceutycznie dopuszczalnym noś nikiem. W szczególności przedmiotem wynalazku jest środek zawierający nowy szczep Lactobacillus plantarum 299 lub Lactobacillus plantarum 299v zdeponowane w DSM.Probiotic bacteria are used to supplement, restore and maintain the correct composition of the normal flora after the end of antibiotic treatment. Thanks to their ability to adhere, probiotic bacteria block the receptors released on the surface of the intestine, which prevents the attachment and colonization of pathogenic bacteria that cause post-antibiotic diarrhea. In addition, more and more scientific works talk about the deliberate use of probiotic bacteria for the prevention and treatment of acute intestinal infections, the pathogenic factors of which are most often E. coli, Shigella, Salmonella, Capylobacter, and also rotaviruses. Research shows the interdependence between Helicobacter pylori and probiotic bacteria. Probiotic bacteria strengthen the defense mechanisms of the human body. In order to restore the natural bacterial flora, increased amounts of probiotic bacteria are administered in therapeutic compositions. It is known from the Polish patent specification No. 184037 the use of Lactobacillus plantarum containing mannose-specific adhesin for the production of a pharmaceutical agent that inhibits the binding of pathogenic bacteria expressing mannose-specific adhesin to the surface of epithelial cells. The Lactobacillus plantarum strain that can be used according to the invention adheres to the Dmannose coated agarose beads. The invention further relates to the use of such strains for the production of a pharmaceutical for use in the prophylaxis and / or treatment of conditions associated with bacterial translocation, gastroenteritis and other diseases caused by bacteria expressing mannose-specific adhesins. A pharmaceutical agent for the treatment and / or prophylaxis of liver damage and failure is known from the Polish patent description No. 184603. This agent comprises a strain of Lactobacillus plantarum capable of colonizing the human intestinal mucosa in vivo in combination with arginine and a pharmaceutically acceptable carrier. In particular, the invention relates to an agent containing a new strain of Lactobacillus plantarum 299 or Lactobacillus plantarum 299v deposited in the DSM.
Celem wynalazku jest wyizolowanie nowego szczepu bakterii kwasu mlekowego o silnych właściwościach probiotycznych, który będzie miał optymalne oddziaływanie na przewód pokarmowy.The aim of the invention is to isolate a new strain of lactic acid bacteria with strong probiotic properties, which will have an optimal effect on the gastrointestinal tract.
Istotą wynalazku jest nowy szczep Lactobacillus plantarum PL02, nr depozytu B/00012, zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej PAN we Wrocławiu i kompozycja zawierająca nowy szczep bakterii Lactobacillus plantarum PL02.The essence of the invention is a new strain of Lactobacillus plantarum PL02, deposit no. B / 00012, deposited at the Polish Collection of Microorganisms at the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences in Wrocław, and a composition containing a new strain of Lactobacillus plantarum PL02.
PL 208 420 B1PL 208 420 B1
1. Identyfikacja szczepu.1. Strain identification.
Szczep Lactobacillus plantarum PL02 pochodzi z przewodu pokarmowego zdrowych noworodków karmionych mlekiem matki. Szczep został zdeponowany zgodnie z traktatem Budapeszteńskim w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM) w Instytucie Immunologii i Terapii Doś wiadczalnej Polskiej Akademii Nauk, 53-114 Wrocław, ul. Rudolfa Weigla 12.The Lactobacillus plantarum PL02 strain comes from the digestive tract of healthy newborns fed with mother's milk. The strain was deposited in accordance with the Budapest Treaty at the Polish Collection of Microorganisms (PCM) at the Institute of Immunology and Experimental Therapy of the Polish Academy of Sciences, 53-114 Wrocław, ul. Rudolf Weigl 12.
Depozyt złożono w dniu 16. 06. 2005 r.The deposit was made on 16.06.2005.
Depozytowi nadano numer B/00012The deposit was given the number B / 00012
2. Oznaczanie przynależności gatunkowej szczepu Lactobacillus plantarum PL02.2. Determination of species affiliation of the Lactobacillus plantarum PL02 strain.
W celu zbadania przynależności gatunkowej szczepu Lactobacillus plantarum PL02 posłużono się zarówno metodą fenotypową za pomocą zestawu API 50CHL jak i genotypową (metoda PCR z zastosowaniem gatunkowo swoistych starterów) ponadto wykonano sekwencjonowanie podjednostki 16S rRNA. Potwierdzono zarówno metodami fenotypowymi jak i genotypowymi, że badany szczep PL02 należy do gatunku Lactobacillus plantarum.In order to investigate the species affiliation of the Lactobacillus plantarum PL02 strain, both the phenotypic method using the API 50CHL kit and the genotypic method (PCR method with the use of species-specific primers) was used, in addition, sequencing of the 16S rRNA subunit was performed. It was confirmed by both phenotypic and genotypic methods that the tested PL02 strain belongs to the species Lactobacillus plantarum.
3. Oznaczanie antagonistycznych właściwości szczepu Lactobacillus plantarum PL02 wobec typowych czynników patogennych przewodu pokarmowego za pomocą metody słupkowej.3. Determination of the antagonistic properties of the Lactobacillus plantarum PL02 strain against typical pathogenic factors of the gastrointestinal tract using the bar method.
Antagonizm wobec innych bakterii i grzybów jest jednym z dokładniej poznanych i udowodnionych mechanizmów działania bakterii probiotycznych w przewodzie pokarmowym. Polega on na eliminacji drobnoustrojów chorobotwórczychAntagonism against other bacteria and fungi is one of the more thoroughly known and proven mechanisms of action of probiotic bacteria in the gastrointestinal tract. It is based on the elimination of pathogenic microorganisms
- dzię ki wytwarzanym metabolitom, takim jak kwas mlekowy i octowy pochodzących gł ównie z fermentacji wę glowodanów,- thanks to the metabolites produced, such as lactic acid and acetic acid, mainly derived from carbohydrate fermentation,
- dzięki syntezie swoistych zwią zków antybakteryjnych (substancji podobnych do bakteriocyn, lantybiotyków), takich jak laktocyna (Lactobacillus spp.), czy acidofilina (Lactobacillus acidophilus)- thanks to the synthesis of specific antibacterial compounds (bacteriocin-like substances, lantibiotics), such as lactocin (Lactobacillus spp.) or acidophilin (Lactobacillus acidophilus)
Substancje podobne do bakteriocyn lub bardziej precyzyjnie lantybiotyki są aktywnymi biologicznie, peptydowymi substancjami działającymi bakteriobójczo na blisko spokrewnione drobnoustroje. Mechanizm ich działania polega na wytwarzaniu por w ścianie komórek wrażliwych bakterii, przez które wypływają niskocząsteczkowe substancje, takie jak jony i elektrolity zawarte w cytoplazmie, co w konsekwencji prowadzi do zniszczenia komórki. Szczepy wytwarzające bakteriocyny mają jednocześnie geny zabezpieczające je przed samounicestwieniem.Bacteriocin-like substances or more precisely lantibiotics are biologically active, peptide substances with a bactericidal activity against closely related microorganisms. The mechanism of their action is based on the production of pores in the cell wall of sensitive bacteria, through which low-molecular substances such as ions and electrolytes contained in the cytoplasm flow out, which in turn leads to the destruction of the cell. The strains producing bacteriocins also have genes that protect them against self-annihilation.
Badanie antagonizmu przeprowadzono za pomocą metody słupkowej. Wybrano drobnoustroje wskaźnikowe (Tabela 1), które stanowią tlenowe i beztlenowe czynniki patogenne zakażeń ludzkiego przewodu pokarmowego, oraz stanowią element składowy lokalnej flory przewodu pokarmowego (wybrane gatunki Lactobacillus i Bifidobacterium).Antagonism testing was performed using the bar method. Indicator microorganisms were selected (Table 1), which are aerobic and anaerobic pathogens of human gastrointestinal tract infections and constitute a component of the local flora of the gastrointestinal tract (selected Lactobacillus and Bifidobacterium species).
T a b e l a 1: Antagonizm badanego szczepu Lactobacillus plantarum PL02.T a b e l a 1: Antagonism of the tested Lactobacillus plantarum PL02 strain.
Skala zahamowania wzrostu: 1 - Średnica strefy zahamowania wynosi: 12-16 mm 2 - Średnica strefy zahamowania wynosi: 17-21 mm 3 - Średnica strefy zahamowania wynosi: 22-26 mm 4 - Średnica strefy zahamowania wynosi: 27-35 mmThe scale of growth inhibition: 1 - The diameter of the inhibition zone is: 12-16 mm 2 - The diameter of the inhibition zone is: 17-21 mm 3 - The diameter of the inhibition zone is: 22-26 mm 4 - The diameter of the inhibition zone is: 27-35 mm
PL 208 420 B1PL 208 420 B1
Badany szczep Lactobacillus plantarum PL02 wykazuje bardzo silne i silne antagonistyczne właściwości wobec bakterii wskaźnikowych należących do rodzajów: Campylobacter, Helicobacter, Clostridium, Shigella, Salmonella, Escherichia, czyli do bakterii będących typowymi patogenami ludzkiego przewodu pokarmowego, zaś słabe działanie wobec innych bakterii z rodzaju Lactobacillus, które mogą kolonizować przewód pokarmowy drogą naturalną.The tested Lactobacillus plantarum PL02 strain shows very strong and strong antagonistic properties against indicator bacteria belonging to the genera: Campylobacter, Helicobacter, Clostridium, Shigella, Salmonella, Escherichia, i.e. bacteria that are typical pathogens of the human gastrointestinal tract, and weakly active against other bacteria of the Lactobacillus genus that can colonize the digestive tract naturally.
4. Oznaczanie właściwości adherencyjnych szczepu Lactobacillus plantarum PL02 do ludzkiej linii tkankowej HT-29MTX.4. Determination of the adherence properties of the Lactobacillus plantarum PL02 strain to the HT-29MTX human tissue line.
Właściwości adherencyjne szczepu Lactobacillus plantarum PL02 zostały przeprowadzone na ludzkiej linii komórek jelitowych HT-29MTX. Działanie metotrexatu (MTX) indukuje tkankę HT-29 do wydzielania zwiększonej ilości śluzu, dzięki czemu ten model tkankowy bardziej przypomina naturalne właściwości jelita grubego zdrowego człowieka. Hodowlę tkankową prowadzono metodą wielokrotnych pasaży przez okres 20 dni do uzyskania jednolitej warstwy (monolayer). Stosowano podłożeThe adherence properties of the Lactobacillus plantarum PL02 strain were carried out on the human intestinal cell line HT-29MTX. The action of methotrexate (MTX) induces HT-29 tissue to secrete an increased amount of mucus, making this tissue model more similar to the natural properties of the healthy human colon. Tissue culture was carried out by the method of multiple passages for a period of 20 days until obtaining a uniform layer (monolayer). A substrate was used
DMEM, wzbogacone dodatkiem 10% inaktywowanej, płodowej surowicy cielęcej. Ponadto, podłoże to zawierało 3 mM/ml L-glutaminy oraz antybiotyki: 100 μg/ml-1 streptomycyny i 100 U/ml-1 penicyliny. Hodowle prowadzono w temperaturze 37°C w atmosferze o zwiększonej wilgotności zawierającej 10% CO2, zmieniając podłoże odżywcze 2 razy w tygodniu. Zliofilizowany szczep Lactobacillus plantarum PL02 zawieszano w 10 ml bulionu MRS i inkubowano przez pół godziny w cieplarce, w temperaturze 37°C, a następnie sprawdzono gęstość mieszaniny szczepów za pomocą dziesiątkowych rozcieńczeń. Do testu adherencji pobrano 500 μl badanego szczepu o gęstości około 2x109 i 500 μl płynu hodowlanego DMEM. Tak przygotowaną mieszaninę dodawano do dołków zawierających komórki Ht-29MTX. Komórki linii tkankowej wraz z badanym szczepem inkubowano w temperaturze 37°C, w atmosferze wzbogaconej 10% CO2 przez 30 minut. Po inkubacji komórki przemywano dwukrotnie PBS w celu usunięcia nie przyczepionych bakterii, a następnie utrwalano 3,7% formaldehydem w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Po utrwaleniu komórki ponownie przemywano PBS i barwiono fioletem krystalicznym przez 3 minuty. Preparat oceniano mikroskopowo przy powiększeniu 1000 x. Zliczano komórki Lactobacillus plantarum PL02, które zaadherowały do linii tkankowej w 20 polach widzenia preparatu. Badanie adherencji szczepu Lactobacillus plantarum PL02 do tkanki HT-29MTX było przeprowadzone dwukrotnie w dniu 05.06.2006,12.06.2006.DMEM, enriched with 10% inactivated fetal calf serum. Moreover, the medium contained 3 mM / ml L-glutamine and antibiotics: 100 μg / ml -1 streptomycin and 100 U / ml -1 penicillin. Cultures were carried out at 37 ° C in an atmosphere with increased humidity containing 10% CO2, changing the nutrient medium twice a week. The lyophilized strain of Lactobacillus plantarum PL02 was suspended in 10 ml of MRS broth and incubated for half an hour in an incubator at 37 ° C, and then the density of the strain mixture was checked by decimal dilutions. For the adherence test, 500 µl of the test strain with a density of approximately 2x10 9 and 500 µl of DMEM culture fluid were taken. The mixture prepared in this way was added to the wells containing Ht-29MTX cells. The cells of the tissue line with the test strain were incubated at 37 ° C in an atmosphere enriched with 10% CO2 for 30 minutes. After incubation, cells were washed twice with PBS to remove non-attached bacteria, then fixed with 3.7% formaldehyde at room temperature for 1 hour. After fixation, cells were washed again with PBS and stained with crystal violet for 3 minutes. The preparation was examined microscopically at 1000 x magnification. Lactobacillus plantarum PL02 cells were counted and adhered to the tissue line in 20 fields of view of the preparation. The adherence of Lactobacillus plantarum PL02 strain to HT-29MTX tissue was tested twice on June 5, 2006, and June 12, 2006.
T a b e l a 2. Wynik adherencja szczepu Lactobacillus plantarum PL02 do ludzkiej linii tkankowej HT-29MTX.T a b e l a 2. Result adherence of the Lactobacillus plantarum PL02 strain to the HT-29MTX human tissue line.
Legenda dotycząca określenia stopnia adherencji do tkanki HT-29-MTX wg standardu wewnętrznego.Legend for determining the degree of adherence to HT-29-MTX tissue according to the internal standard.
• Liczbę komórek bakteryjnych podaje się jako ś rednią z 20 pól widzenia w preparacie.• The number of bacterial cells is reported as the mean of the 20 fields of view in the slide.
• Komórki HT29-MTX stosuje się do badań w postaci hodowli jednowarstwowej (monolayeru).• HT29-MTX cells are used for studies in the form of monolayer culture (monolayer).
Ś rednia z 20 pól widzenia z dwóch badań wynosiła 85 komórek bakteryjnych dając bardzo wysoki stopień adherencji (+++).The mean of the 20 fields of view from the two studies was 85 bacterial cells giving a very high degree of adherence (+++).
Badany szczep Lactobacillus plantarum PL02 wyizolowany z normalnej mikroflory ustroju ludzkiego wykazywał bardzo wysoki stopień adherencji do ludzkiej linii komórkowej nabłonka jelitowegoThe tested Lactobacillus plantarum PL02 strain, isolated from the normal microflora of the human organism, showed a very high degree of adherence to the human intestinal epithelial cell line
HT-29MTX.HT-29MTX.
PL 208 420 B1PL 208 420 B1
5. Oznaczanie oporności na antybiotyki szczepu Lactobacillus plantarum PL02 za pomocą metody dyfuzyjno krążkowej.5. Determination of resistance to antibiotics of the Lactobacillus plantarum PL02 strain using the disc diffusion method.
Szczep Lactobacillus plantarum PL02 oraz wzorzec tego samego gatunku tj. Lactobacillus plantarum DSMZ 20174 posiewano metodą redukcyjną na płytki ze stałym podłożem MRS, a następnie inkubowano w standardowych warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C przez 24 godz. Uzyskane w ten sposób pojedyncze kolonie zawieszano w 1 ml płynnego podłoża MRS i inkubowano w tych samych warunkach przez 24 godz. Nastę pnie przy wykorzystaniu soli fizjologicznej doprowadzano gęstość hodowli do 0,5 według skali McFarland'a. Tak przygotowane zawiesiny bakteryjne rozprowadzano przy użyciu jałowego wacika po całej powierzchni uprzednio przygotowanych płytek ze stałym podłożem MRS w objętości 20 ml. Na płytki nakładano krążki nasycone antybiotykami, a nastę pnie inkubowano w warunkach beztlenowych w temperaturze 37°C przez 24 godz.The Lactobacillus plantarum PL02 strain and the standard of the same species, i.e. Lactobacillus plantarum DSMZ 20174, were inoculated on plates with solid MRS medium, and then incubated under standard anaerobic conditions at 37 ° C for 24 hours. Single colonies obtained in this way were suspended in 1 ml of liquid MRS medium and incubated under the same conditions for 24 hours. The culture density was then adjusted to 0.5 on the McFarland scale using saline. The bacterial suspensions prepared in this way were spread with a sterile swab over the entire surface of the previously prepared plates with the solid MRS medium in a volume of 20 ml. The plates were discs impregnated with antibiotics and then incubated anaerobically at 37 ° C for 24 hours.
T a b e l a 3: Wrażliwość badanych szczepów Lactobacillus plantarum PL02 i Lactobacillus plantarum DSMZ 20174 na antybiotyki oznaczone metodą krążkową.T a b e l a 3: Sensitivity of the tested Lactobacillus plantarum PL02 and Lactobacillus plantarum DSMZ 20174 strains to antibiotics determined by the disc method.
Oporność szczepów bakterii probiotycznych na leki przeciwbakteryjne jest przedmiotem szczegółowych badań ze względów bezpieczeństwa przyszłych preparatów leczniczych. Chodzi tu głównie o mo ż liwość przeniesienia genów opornoś ci na antybiotyki z podanych w preparacie, ż ywych bakterii na inne składniki flory chorego i rozpowszechnienie genów oporności wśród składników normalnej flory, co może spowodować uniemożliwienie leczenia ewentualnych zakażeń tego chorego lub jego kontaktów. Bakterie z rodzaju Lactobacillus wykazują oporność gatunkową, tzn. oporność, która na stałe związana jest z danym gatunkiem (np. bakterie Lactobacillus acidophilus są zawsze wrażliwe na wankomycynę, zaś np. Lactobacillus rhamnosus są na ten lek zawsze oporne). Oporność na dany antybiotyk pojawiająca się w jednym lub kilku szczepach danego gatunku odbiegająca od generalnej wrażliwości całego gatunku, lub znajdowana w szczepach wyizolowanych od chorego w trakcie leczenia antybiotykiem może oznaczać jednostkowe nabycie cechy oporności na drodze mutacji lub wymiany materiału genetycznego zlokalizowanego na plazmidzie, jest to już oporność plazmidowa (nabyta). Zjawisko nabywania oporności przez bakterie z rodzaju Lactobacillus nie jest korzystne, istnieje bowiem zagrożenie jej przekazywania enterokokom (również drogą plazmidową), które wraz ze szczepami Lactobacillus są naturalnym symbiontem przewodu pokarmowego.The resistance of probiotic bacteria strains to antibacterial drugs is the subject of detailed studies for the safety of future medicinal preparations. It is mainly about the possibility of transferring the antibiotic resistance genes from the live bacteria given in the preparation to other components of the patient's flora and the dissemination of resistance genes among the components of the normal flora, which may prevent the treatment of possible infections of the patient or his contacts. Lactobacillus bacteria show resistance to species, i.e. resistance that is permanently associated with a given species (e.g. Lactobacillus acidophilus bacteria are always sensitive to vancomycin, and e.g. Lactobacillus rhamnosus are always resistant to this drug). Resistance to a given antibiotic, occurring in one or more strains of a given species, deviating from the general susceptibility of the whole species, or found in strains isolated from the patient during antibiotic treatment, may mean individual acquisition of a resistance trait by mutation or replacement of genetic material located on the plasmid, this is already plasmid resistance (acquired). The phenomenon of acquiring resistance by bacteria of the genus Lactobacillus is not favorable, because there is a risk of its transmission to enterococci (also via plasmid), which, together with Lactobacillus strains, are a natural symbiote of the gastrointestinal tract.
6.1. Izolacja DNA chromosomalnego metodą kolumienkową.6.1. Isolation of chromosomal DNA by column method.
Na zdjęciu (a) widoczny prążek odpowiadający DNA chromosomalnemu (na wysokości prążka 23130pz markera wielkości λ/Hind III). Nie widać żadnych prążków poniżej ani powyżej DNA chromosomalnego, które mogłyby świadczyć o obecności DNA plazmidowego. Kontrolą pozytywną jest szczep Lactobacillus rhamnosus u którego poniżej DNA chromosomalnego(prążek na wysokości 23130pz) widoczne są dodatkowe prążki świadczące o obecności DNA plazmidowego - zdjęcie (b).The picture (a) shows a band corresponding to chromosomal DNA (at the 23130 bp band of the λ / Hind III size marker). There are no bands below or above the chromosomal DNA that might indicate the presence of plasmid DNA. The positive control is the Lactobacillus rhamnosus strain, in which additional bands are visible below the chromosomal DNA (band at the level of 23130 bp) indicating the presence of plasmid DNA - photo (b).
PL 208 420 B1PL 208 420 B1
6.2. Izolacja DNA plazmidowego wg metody O'Sullivan.6.2. Isolation of plasmid DNA according to the O'Sullivan method.
Metoda używana do rodzaju Latobacillus i Lactococcus. Na zdjęciu (c) widać niewielkie ilościThe method is used for the genus Latobacillus and Lactococcus. In photo (c) you can see small amounts
DNA chromosomalnego (na wysokości prążka 23130pz markera wielkości λ/Hind III), które pozostało w trakcie izolacji DNA plazmidowego, nie widać prążków odpowiadających wielkością DNA plazmidowemu (poniżej wysokości 23130pz).The chromosomal DNA (at the level of the 23130bp band of the λ / Hind III size marker) that remained during the isolation of plasmid DNA, no bands corresponding to the size of plasmid DNA (below the height of 23130bp) are visible.
Lekooporność szczepu należącego do gatunków Lactobacillus plantarum (PL02), reprezentuje wzór oporności typowy dla danego gatunku. Ponadto w wyniku zastosowania dwóch metod wykazano brak obecności dodatkowego prążka DNA (poniżej wysokości 23130pz), który mógłby być obrazem plazmidowego DNA.The drug resistance of a strain belonging to the species Lactobacillus plantarum (PL02), represents a resistance pattern typical of a given species. Moreover, as a result of the application of two methods, it was shown that there was no additional DNA band (below the height of 23,130 bp), which could be an image of plasmid DNA.
7. Oznaczenie oporności szczepu Lactobacillus plantarum PL02 na niskie pH.7. Determination of Lactobacillus plantarum PL02 strain resistance to low pH.
Szczep Lactobacillus plantarum PL02 namnożono w płynnym podłożu MRS. Hodowlę prowadzono w warunkach beztlenowych w 37°C przez 24 godziny, a po upływie tego czasu, za pomocą dziesiątkowych rozcieńczeń, określono uzyskaną gęstość poszczególnych bakterii. Następnie przy pomocy 1N HCl obniżano pH medium hodowlanego do wartości 1,2 równej wartości pH soku żołądkowego. Hodowle dalej inkubowano przez 20 minut w warunkach beztlenowych w 37°C, a następnie ponownie ją wysiewano w celu określenia stopnia redukcji badanych populacji bakterii pod wpływem niskiego pH.The Lactobacillus plantarum PL02 strain was grown in the liquid MRS medium. The cultivation was carried out in anaerobic conditions at 37 ° C for 24 hours, after which time the obtained density of individual bacteria was determined by means of decimal dilutions. Then the pH of the culture medium was lowered with 1N HCl to a value of 1.2, equal to the pH of gastric juice. Cultures were further incubated for 20 minutes under anaerobic conditions at 37 ° C, and then reseeded to determine the degree of reduction of the tested bacterial populations under the influence of low pH.
PL 208 420 B1PL 208 420 B1
T a b e l a 4: Oporność szczepów: Lactobacillus plantarum PL02 i szczepu wzorcowego Lactobacillus plantarum DSMZ 20174 na niskie pH.T a b e l a 4: Resistance of the strains: Lactobacillus plantarum PL02 and the reference strain Lactobacillus plantarum DSMZ 20174 to low pH.
8. Oznaczanie oporności szczepu Lactobacillus plantarum PL02 na sole żółci.8. Determination of resistance of Lactobacillus plantarum PL02 strain to bile salts.
W celu oznaczenia oporności badanego szczepu Lactobacillus plantarum PL02 na sole żółci posłużono się metodą Dashkevicz'a i Feighner'a. Metoda ta polegała na dodaniu do agaru MRS barwnika wskaźnikowego - purpury bromokrezolowej w ilości 0,17 g/l oraz soli żółci w pięciu kolejnych stężeniach: 1 g/l, 2 g/l, 5 g/l, 10 g/l, 20 g/l. Na tak przygotowane, stałe podłoża MRS posiewano metodą redukcyjną 100 μΐ hodowli szczepu Lactobacillus plantarum PL02, który następnie inkubowano w standardowych warunkach beztlenowych przez 48 godz. Po zakończonej inkubacji oceniano zmianę barwy kolonii szczepu Lactobacillus plantarum PL02, które oporne na dane stężenie soli żółci nabierały koloru jasno żółtego, jak również podłoże wzrostowe zmieniało swoje zabarwienie z fioletowego na żółte.The method of Dashkevicz and Feighner was used to determine the resistance of the tested Lactobacillus plantarum PL02 strain to bile salts. This method consisted in adding to the MRS agar the indicator dye - bromocresol purple in the amount of 0.17 g / l and bile salt in five successive concentrations: 1 g / l, 2 g / l, 5 g / l, 10 g / l, 20 g / l. 100 μΐ of the Lactobacillus plantarum PL02 strain was inoculated on the solid MRS media prepared in this way, and then incubated under standard anaerobic conditions for 48 hours. After the incubation was completed, the color change of the colonies of the Lactobacillus plantarum PL02 strain, which resistant to the given concentration of bile salts became light yellow, was assessed, as well as the growth medium changed its color from purple to yellow.
T a b e l a 5: Wzrost szczepu Lactobacillus plantarum PL02 w obecności soli żółci w stężeniach: 1, 2, 5, 10, 20 g/l.T a b e l a 5: Growth of the Lactobacillus plantarum PL02 strain in the presence of bile salt in the following concentrations: 1, 2, 5, 10, 20 g / l.
Przebadany szczep Lactobacillus plantarum PL02 wykazał dużą oporność zarówno na niskie pH (równe wartości pH występujące w soku żołądkowym) jak i na sole żółci, co może świadczyć o przystosowaniu tego szczepu do warunków panujących w ludzkim przewodzie pokarmowym.The tested Lactobacillus plantarum PL02 strain showed high resistance to both low pH (equal to the pH values found in gastric juice) and to bile salts, which may indicate that this strain is adapted to the conditions in the human gastrointestinal tract.
9. Badanie antagonistycznego działania Lactobacillus plantarum PL02 na wzrost Candia albicans.9. Study of the antagonistic effect of Lactobacillus plantarum PL02 on the growth of Candia albicans.
Do badania antagonistycznego działaniem Lactobacillus plantarum PL02 na wzrost Candida albicans wybrano 4 grzyby z których 3 pochodziły z przewodu pokarmowego, zaś jeden był szczepem kolekcyjnym (Candida albicans ATCC 10231). Ponadto jako kontrolę antygrzybiczego działania bakterii kwasu mlekowego na grzyby zastosowano również szczep Lactobacillus rhamnosus GG. Do badania posłużono się zmodyfikowaną metodą półilościową według Fitzsimmons i Berry. Metoda polegała na zastosowaniu podłóż dwuwarstwowych. Pierwszą warstwę stanowiło podłoże MRS agar (Oxoid) na którym posiewano w formie paska o szerokości 2 cm badane szczepy probiotyczne z rodzaju Lactobacillus. Po wymazaniu płytki inkubowano przez 48 godzin w warunkach beztlenowych, a po upływie tego czasu na wierzch wylewano drugie, lekko przestudzone, płynne podłoże MYPG agar (Bacto YM Agar, Difco) w kierunku wzrostu grzybów wskaźnikowych. Po zastygnięciu na podłoże wysiewano grzyby z rodzaju Candida o gęstości 0,5 MacFarlanda. Następnie płytki były wkładane na 4 godziny do lodówki na 4°C, a następnie dalszą inkubacje prowadzono już w warunkach tlenowych w 37°C przez 24 godziny. Uzyskane wyniki oceniono według następującej legendy:4 fungi were selected for the antagonistic study of the activity of Lactobacillus plantarum PL02 on the growth of Candida albicans, 3 of which originated from the gastrointestinal tract, and one was a collection strain (Candida albicans ATCC 10231). Moreover, the Lactobacillus rhamnosus GG strain was also used to control the antifungal activity of lactic acid bacteria on fungi. The modified semi-quantitative method according to Fitzsimmons and Berry was used for the study. The method was based on the use of two-layer substrates. The first layer was MRS agar (Oxoid) on which the tested probiotic strains of the Lactobacillus genus were inoculated in the form of a 2 cm wide strip. After blotting, the plates were incubated for 48 hours under anaerobic conditions, after which time a second, slightly cooled, liquid MYPG agar (Bacto YM Agar, Difco) was poured over the top for growth of the indicator fungi. After setting, fungi of the genus Candida with a density of 0.5 MacFarland were sown on the substrate. The plates were then placed in a refrigerator at 4 ° C for 4 hours, and then further incubations were already carried out under aerobic conditions at 37 ° C for 24 hours. The obtained results were assessed according to the following legend:
- Brak działania antagonistycznego Lactobacillus wobec Candida albicans nie zaobserwowano żadnej strefy zahamowania wzrostu Candida wzdłuż paska z wymazanym szczepem probiotycznym.- No Lactobacillus antagonist activity against Candida albicans, no zone of Candida growth inhibition was observed along the strip with the probiotic strain erased.
+ Częściowe działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec Candida albicans obserwuje się lekkie przyhamowanie wzrostu Candida jedynie nad paskiem z wymazanym szczepem probiotycznym.+ Partial antagonism of Lactobacillus against Candida albicans, slight inhibition of Candida growth is observed only above the strip with the erased probiotic strain.
PL 208 420 B1 ++ Wyraźne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec Candida albicans obserwuje się wyraźne przyhamowanie wzrostu Candida nad paskiem z wymazanym szczepem probiotycznym czasami wyraźniej w jego górnej i dolnej części.A pronounced antagonistic effect of Lactobacillus against Candida albicans, a marked inhibition of Candida growth over the probiotic strain erased strip is observed, sometimes more clearly in its upper and lower parts.
+++ Bardzo silne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec Candida albicans obserwuje się wyraźne przyhamowanie wzrostu Candida nad paskiem i poza jego powierzchnią wzdłuż całej linii posiewu szczepu probiotycznego.+++ Very strong antagonistic effect of Lactobacillus against Candida albicans, a marked inhibition of Candida growth is observed above the strip and beyond its surface along the entire inoculation line of the probiotic strain.
Badanie antagonistycznego działania Lactobacillus plantarum PL02 za pomocą metody półilościowej w warunkach in vitro wykazało, że badany szczep wykazuje działanie wobec 4 wybranych szczepów grzybów Candida albicans.The study of the antagonistic activity of Lactobacillus plantarum PL02 using the semi-quantitative method in in vitro conditions showed that the tested strain showed activity against 4 selected strains of Candida albicans fungi.
T a b e l a 1. Antagonistyczne działanie Lactobacillus plantarum PL02 na wybrane szczepy Candida albicans.T a b e l a 1. Antagonistic effect of Lactobacillus plantarum PL02 on selected strains of Candida albicans.
Przeprowadzone badania laboratoryjne wykazały, że badany szczep Lactobacillus plantarum PL02 można uznać za szczep probiotyczny pochodzenia ludzkiego, ponieważ spełnia wszystkie kryteria funkcjonalności i bezpieczeństwa wymagane od probiotyków doustnych i pochodzi z ludzkiego przewodu pokarmowego. Tak więc z punktu widzenia mikrobiologicznego może on być zalecany jako dodatek żywnościowy w celu uzupełniania składu fizjologicznej flory przewodu pokarmowego dzieci i dorosłych we wszystkich stanach wskazujących na zaburzenia tego składu z różnych przyczyn, np. związanych z leczeniem antybiotykami, biegunką na różnym tle, niedoborami witamin i innych składników pokarmowych itp.The conducted laboratory tests showed that the tested Lactobacillus plantarum PL02 strain can be considered a probiotic strain of human origin, as it meets all the functionality and safety criteria required for oral probiotics and comes from the human gastrointestinal tract. Thus, from the microbiological point of view, it can be recommended as a food supplement to supplement the physiological composition of the gastrointestinal flora of children and adults in all conditions indicating disorders of this composition for various reasons, e.g. related to treatment with antibiotics, diarrhea on various grounds, vitamin deficiencies. and other nutrients, etc.
P r z y k ł a d w y k o n a n i aP r z o l a d e c o n a n i a
Kompozycja probiotyczna według wynalazku została zastosowana w produkcie będącym suplementem diety. Produkt ten ma postać kapsułek. Jedna kapsułka zawiera 1·109 bakterii Lactobacillus plantarum PL02 oraz maltodekstrynę, mleko i sacharozę. Preparat stosuje się w celu ochrony przewodu pokarmowego, np. w czasie stosowania antybiotyków.The probiotic composition according to the invention has been used in a dietary supplement product. This product is in the form of capsules. One capsule contains 1 · 10 9 Lactobacillus plantarum PL02 bacteria as well as maltodextrin, milk and sucrose. The preparation is used to protect the gastrointestinal tract, e.g. when using antibiotics.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL380802A PL208420B1 (en) | 2006-10-10 | 2006-10-10 | New strain Lactobacillus plantarum and composition containing the new strain Lactobacillus plantarum |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL380802A PL208420B1 (en) | 2006-10-10 | 2006-10-10 | New strain Lactobacillus plantarum and composition containing the new strain Lactobacillus plantarum |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL380802A1 PL380802A1 (en) | 2008-04-14 |
| PL208420B1 true PL208420B1 (en) | 2011-04-29 |
Family
ID=43033805
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL380802A PL208420B1 (en) | 2006-10-10 | 2006-10-10 | New strain Lactobacillus plantarum and composition containing the new strain Lactobacillus plantarum |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL208420B1 (en) |
-
2006
- 2006-10-10 PL PL380802A patent/PL208420B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL380802A1 (en) | 2008-04-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111484957B (en) | Bifidobacterium animalis subsp lactis i797, and separation and purification method and application thereof | |
| Dodoo et al. | Targeted delivery of probiotics to enhance gastrointestinal stability and intestinal colonisation | |
| Presti et al. | Evaluation of the probiotic properties of new Lactobacillus and Bifidobacterium strains and their in vitro effect | |
| Rönkä et al. | Probiotic and milk technological properties of Lactobacillus brevis | |
| ES2534750T3 (en) | Lactobacillus pentosus that produces and uses bacteriocins in food and pharmaceutical compositions | |
| KR101255894B1 (en) | Lactobacillus plantarum and uses thereof | |
| EP2000530B1 (en) | Composition of lactobacillus strains and the application of the composition of lactobacillus strains | |
| ES2540569T3 (en) | Bifidobacteria producing folic acid, food composition and use of said bifidobacteria | |
| Iyer et al. | Probiotic properties of folate producing Streptococcus thermophilus strains | |
| BG110506A (en) | New strains of yoghurt bacteria and their combinations for the production of probiotic preparations | |
| US20200199692A1 (en) | Lactic bacteria and the use thereof for the preventive, inhibitory and/or reductive treatment of the formation of bacterial biofilms | |
| US8440450B2 (en) | Antibiotic-sensitive lactic acid bacteria strains | |
| KR20140067094A (en) | Composition comprising n-acetylcysteine and/or microencapsulated gastroprotected lysozyme in association with probiotic bacteria capable of restoring the stomach's own barrier effect which is lost during the pharmacological treatment of gastric hyperacidity | |
| Saini et al. | In vitro evaluation of probiotic potential of Lactobacillus cultures of human origin capable of selenium bioaccumulation | |
| Mandal | Curd lactobacilli with probiotic potentiality | |
| KR100435505B1 (en) | Lactobacillus plantarum isolated from kimchi with inhibiting activities on helicobacter pylori | |
| CA2890965C (en) | Probiotic strains isolated from dogs for use in dog food, treats and/or supplements | |
| Gomes et al. | Comparison of antagonistic ability against enteropathogens by G+ and G− anaerobic dominant components of human fecal microbiota | |
| Kiray et al. | Evaluation of vaginal lactobacilli with potential probiotic properties and biotherapeutic effects isolated from healthy Turkish women | |
| PL208421B1 (en) | New strain Bifidobacterium longum | |
| JP5980785B2 (en) | New bifidobacteria and their use | |
| PL208422B1 (en) | New strain Lactobacillus rhamnosus | |
| PL209430B1 (en) | Probiotic composition and application of probiotic composition | |
| CN102337227A (en) | Lactobacillus plantarum and uses thereof | |
| KR102787888B1 (en) | Lactiplantibacillus plantarum ND88 and composition containing the same for improving, preventing or treating dental caries |