PL209406B1 - Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, sposób desorpcji i sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej oraz zastosowanie rozpuszczalnika do desorpcji tych epotylonów - Google Patents
Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, sposób desorpcji i sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej oraz zastosowanie rozpuszczalnika do desorpcji tych epotylonówInfo
- Publication number
- PL209406B1 PL209406B1 PL361884A PL36188401A PL209406B1 PL 209406 B1 PL209406 B1 PL 209406B1 PL 361884 A PL361884 A PL 361884A PL 36188401 A PL36188401 A PL 36188401A PL 209406 B1 PL209406 B1 PL 209406B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- epothilones
- epothilone
- lower alkyl
- mixture
- group
- Prior art date
Links
- 229930013356 epothilone Natural products 0.000 title claims abstract description 111
- HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N epothilone A Chemical class C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@@H]2CCC[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@@H](O)CC(=O)O1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 HESCAJZNRMSMJG-KKQRBIROSA-N 0.000 title claims abstract description 99
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title description 4
- HESCAJZNRMSMJG-HGYUPSKWSA-N epothilone A Natural products O=C1[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)CCC[C@H]2O[C@H]2C[C@@H](/C(=C\c2nc(C)sc2)/C)OC(=O)C[C@H](O)C1(C)C HESCAJZNRMSMJG-HGYUPSKWSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 238000003795 desorption Methods 0.000 claims abstract description 50
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 49
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 44
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 44
- QXRSDHAAWVKZLJ-OXZHEXMSSA-N Epothilone B Natural products O=C1[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)CCC[C@@]2(C)O[C@H]2C[C@@H](/C(=C\c2nc(C)sc2)/C)OC(=O)C[C@H](O)C1(C)C QXRSDHAAWVKZLJ-OXZHEXMSSA-N 0.000 claims abstract description 36
- QXRSDHAAWVKZLJ-PVYNADRNSA-N epothilone B Chemical compound C/C([C@@H]1C[C@@H]2O[C@]2(C)CCC[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)C(=O)C(C)(C)[C@@H](O)CC(=O)O1)O)C)=C\C1=CSC(C)=N1 QXRSDHAAWVKZLJ-PVYNADRNSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 59
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 55
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 150000003883 epothilone derivatives Chemical class 0.000 claims description 34
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 31
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 29
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 27
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 claims description 26
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 25
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 25
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 19
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 18
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 17
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 15
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 15
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 15
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 14
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 14
- -1 cyclic aliphatic hydrocarbon Chemical class 0.000 claims description 14
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 13
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 13
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 12
- 150000001555 benzenes Chemical group 0.000 claims description 11
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 11
- 239000003849 aromatic solvent Substances 0.000 claims description 10
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 9
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 8
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims description 8
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N isopropanol acetate Natural products CC(C)OC(C)=O JMMWKPVZQRWMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940011051 isopropyl acetate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 4
- 239000012527 feed solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 claims 1
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N isovaleric acid Chemical compound CC(C)CC(O)=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 abstract description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 22
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 16
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 8
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 7
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 7
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 5
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 5
- GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M isovalerate Chemical compound CC(C)CC([O-])=O GWYFCOCPABKNJV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- GWHJZXXIDMPWGX-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-trimethylbenzene Chemical compound CC1=CC=C(C)C(C)=C1 GWHJZXXIDMPWGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 1,3-Dimethylbenzene Natural products CC1=CC=CC(C)=C1 IVSZLXZYQVIEFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N Para-Xylene Chemical group CC1=CC=C(C)C=C1 URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920006026 co-polymeric resin Polymers 0.000 description 4
- RWGFKTVRMDUZSP-UHFFFAOYSA-N cumene Chemical compound CC(C)C1=CC=CC=C1 RWGFKTVRMDUZSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 125000005745 ethoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 1,2-Dichloroethane Chemical compound ClCCCl WSLDOOZREJYCGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000012485 toluene extract Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N Ethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- 241000863434 Myxococcales Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 2
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N bromobenzene Chemical compound BrC1=CC=CC=C1 QARVLSVVCXYDNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N mesitylene Substances CC1=CC(C)=CC(C)=C1 AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001827 mesitylenyl group Chemical group [H]C1=C(C(*)=C(C([H])=C1C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N n-propyl alcohol Natural products CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- HFPZCAJZSCWRBC-UHFFFAOYSA-N p-cymene Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1 HFPZCAJZSCWRBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- AXPZDYVDTMMLNB-UHFFFAOYSA-N Benzyl ethyl ether Chemical compound CCOCC1=CC=CC=C1 AXPZDYVDTMMLNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241001532577 Sorangium Species 0.000 description 1
- 241000862997 Sorangium cellulosum Species 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005224 alkoxybenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- YCOXTKKNXUZSKD-UHFFFAOYSA-N as-o-xylenol Natural products CC1=CC=C(O)C=C1C YCOXTKKNXUZSKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008139 complexing agent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000386 donor Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 150000005194 ethylbenzenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- CWIYRQKKNPTTER-UHFFFAOYSA-N hexane;propan-2-yl acetate Chemical compound CCCCCC.CC(C)OC(C)=O CWIYRQKKNPTTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNHMUERNLJLMHN-UHFFFAOYSA-N iodobenzene Chemical compound IC1=CC=CC=C1 SNHMUERNLJLMHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000401 methanolic extract Substances 0.000 description 1
- 239000002032 methanolic fraction Substances 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N monofluorobenzene Chemical compound FC1=CC=CC=C1 PYLWMHQQBFSUBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- DLRJIFUOBPOJNS-UHFFFAOYSA-N phenetole Chemical compound CCOC1=CC=CC=C1 DLRJIFUOBPOJNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000012508 resin bead Substances 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N taxol® Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(CC(C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3(C21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-XAZOAEDWSA-N 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- BHAROVLESINHSM-UHFFFAOYSA-N toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1.CC1=CC=CC=C1 BHAROVLESINHSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010977 unit operation Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D493/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Silicon Polymers (AREA)
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy nowego sposobu obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, sposobu desorpcji i sposobu wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej oraz zastosowania rozpuszczalnika do desorpcji tych epotylonów.
Epotylony A i B reprezentują nową klasę cytotoksycznych substancji aktywnych stabilizujących mikrotubule (por. Gerth K. i in., J. Antibiot. 49, 560-3 (1966)) o wzorze:
w którym R oznacza atom wodoru (epotylon A) lub metyl (epotylon B).
Od czasu opisania epotylonów (patrz WO 93/10121), ujawniono szereg metod syntezy i wytwarzania zarówno epotylonów, jak przede wszystkim ich licznych pochodnych (zbiorowo nazywanych dalej „epotylonami), na przykład opisanych w WO 99/03848, WO 00/49020, WO 00/47584, WO 00/00485, WO 00/23452, WO 99/03848, WO 00/49019, WO 99/07692, WO 98/22461, WO 99/65913, WO 98/38192, WO 00/50423, WO 00/22139, WO 99/58534, WO 97/19086, WO 98/25929, WO 99/67252, WO 99/67253, WO 00/21247, WO99/42602, WO 99/28324, WO 00/50423, WO 00/39276, WO 99/27890, WO 99/54319, WO 99/54318, WO 99/02514, WO 99/59985, WO 00/37473, WO 98/08849, US 6,043,372, US 5,969,145, WO 99/40047, WO 99/01124 i WO 99/43653. Oprócz epotylonów A i B, interesujące własności wykazują szczególnie epotylony D i E, opisane w WO 97/19086 i WO 98/22461, oraz epotylony E i F, opisane w WO 98/22461, jak również epotylony opisane w WO 99/02514.
Jako przykład zastosowania terapeutycznego, zgłoszenie międzynarodowe WO 99/43320 opisuje kilka sposobów podawania epotylonów jako środków przeciw chorobom proliferacyjnym, zwłaszcza chorobom nowotworowym, które, ze względu na zbliżony mechanizm, działają w sposób porównywalny do Taksolu®, dobrze znanego, znajdującego się w sprzedaży leku przeciwnowotworowego. WO 99/39694 ujawnia specjalne preparaty epotylonów, zwłaszcza A i B.
Epotylony, zwłaszcza epotylon A i najkorzystniej epotylon B, w porównaniu ze znanymi, ustalonymi sposobami leczenia oferują szereg korzyści, zwłaszcza w przypadkach oporności nowotworów na terapię Taxolem. Zatem nagląca stała się potrzeba znalezienia sposobów ich otrzymywania w większych ilościach, które zaspokoiłyby wzrastające zapotrzebowanie.
Najbardziej skuteczne dotychczas znane sposoby wytwarzania obejmują co najmniej kilka etapów biosyntetycznych i wyodrębnianie epotylonów z pożywki hodowlanej lub podobnej.
Pierwotnie, w literaturze opisana została ekstrakcja związków naturalnych przy pomocy bakterii śluzowych (myxobakteria), zwłaszcza epotylonów z komórek szczepu Sorangium Cellulosum Soce90 (zdeponowanego pod numerem 6773 w Niemieckim Zbiorze Mikroorganizmów, patrz WO 93/10121). Dotychczas, w celu uzyskania zadowalającego stężenia substancji naturalnych, zwłaszcza epotylonów, do pożywki hodowlanej w celu zaabsorbowania do pożywki zawsze dodawano żywicę absorpcyjną opartą na polistyrenie, na przykład Amberlite XAD-1180 (Rohm&Haas, Frankfurt, Niemcy).
Przy prowadzeniu tego procesu na większą skalę występuje szereg problemów. Zawory ulegają uszkodzeniu przez kulki żywicy, rury mogą ulegać zatkaniu, a aparatura może podlegać większym naprężeniom wskutek tarcia mechanicznego. Kulki żywicy są porowate, w związku z czym mają większe pole powierzchni wewnętrznej (około 825 m2/g żywicy). Problemem staje się wyjaławianie, gdyż powietrze zamknięte w żywicy nie ulega odessaniu. Zatem praktycznie proces ten nie może być prowadzony na dużą skalę sposobem obejmującym dodanie żywicy w trakcie hodowli mikroorganizmów wytwarzających epotylony.
W zwią zku z tym, znaleziono i opisano w WO 99/42602 ulepszony sposób wytwarzania epotylonów, zwłaszcza epotylonów A i B. Sposób ten obejmuje kompleksowanie epotylonów z pożywki hodowlanej mikroorganizmu wytwarzającego epotylony, przy czym pożywka zawiera cyklodekstryny
PL 209 406 B1 lub inne środki tworzące kompleksy, mieszanie pozbawionej komórek pożywki hodowlanej (np. odfiltrowanej lub odwirowanej od wspomnianej pożywki hodowlanej) z żywicą syntetyczną na przykład z ż ywicą opartą na kopolimerach styren/diwinylobenzen jako matrycy, taką jak Amberlite XAD-16 (Rohm&Haas Germany GmbH, Frankfurt, Niemcy) lub Diaion HP-20 (Resindion S.R.L., Mitsubishi Chemical Co., Mediolan, Włochy) w celu zaabsorbowania epotylonów, oraz desorpcję, korzystnie przy użyciu alkoholu, szczególnie korzystnie izopropanolu. Następnie do fazy alkoholowej dodaje się wodę, usuwa rozpuszczalnik (korzystnie przez odparowanie), a otrzymaną pozostałość rozdziela na fazy w obecnoś ci estru, zwł aszcza octanu etylu lub octanu izopropylu, zazwyczaj stosuj ą c filtrację czą steczkową (chromatografię żelową) wysuszonej fazy estrowej, rozdziela otrzymaną mieszaninę epotylonów przez HPLC w odwróconym układzie faz (korzystnie eluując mieszaniną nitryl/woda, np. acetonitryl/woda) i ewentualnie dalej oczyszcza przez rozdzielenie faz w obecności mieszaniny woda/eter, korzystnie następującą chromatografię adsorpcyjną na żelu krzemionkowym w celu dalszego usunięcia zanieczyszczeń i krystalizację/rekrystalizację.
Mimo znaczącego postępu i wydajności odpowiedniej dla produkcji na skalę przemysłową, metoda ta w dalszym ciągu posiada pewne niedogodności.
Na przykład, w celu uzyskania wystarczającej czystości, zalecane jest wykorzystanie albo filtracji cząsteczkowej albo chromatografii adsorpcyjnej na żelu krzemionkowym, albo obydwu. Większe trudności wynikają obecnie z rozdzielania faz w obecności estru, takiego jak octan etylu, co (zwłaszcza w wyniku długiego czasu rozdziału faz woda/ester w procesie na skalę przemysłową) jest bardzo czasochłonne, jak również z powodu następującego potem odparowania, które w dodatku jest trudne do przeprowadzenia z powodu pienienia się i rozpylania.
Problemy, których rozwiązanie stawia przed sobą obecny wynalazek, to uniknięcie możliwie wielu powyższych trudności i znalezienie nowych, korzystnych dróg wyodrębniania epotylonów, zwłaszcza epotylonów A i B, po ich adsorpcji na żywicy.
Obecnie nieoczekiwanie stwierdzono, że zwykłe zastąpienie alkoholi stosowanych jako rozpuszczalniki desorbujące przez pewne inne rozpuszczalniki (nazywane rozpuszczalnikami słabo polarnymi lub niepolarnymi, zgodnie z dalszą specyfikacją) stanowi przełom, umożliwiający rozwiązanie problemów wymienionych powyżej, prowadząc do dodatkowych korzyści, takich jak lepsza desorpcja i wyż sza wydajność końcowa. Do dodatkowych korzyś ci należą: (i) zwię kszenie selektywnoś ci desorpcji;
(ii) większa ilość desorbowanych epotylonów, oznaczająca pełniejszą desorpcję;
(iii) uniknięcie ponownej ekstrakcji estrem (np. octanem etylu) z wysoce kłopotliwym rozdziałem faz woda/ester i brak konieczności następującego odparowania eteru;
(iv) uniknięcie konieczności filtracji cząsteczkowej i zazwyczaj chromatografii absorpcyjnej; (v) znaczne skrócenie czasu potrzebnego do desorpcji; (vi) zmniejszenie ilości etapów reakcji; (vii) zmniejszenie ryzyka zanieczyszczenia (ważne w przypadku silnie toksycznych epotylonów); (viii) wygodniejsze i bezpieczniejsze manipulowanie (w zależności od rozpuszczalnika stosowanego do desorpcji = ekstrakcji); i (ix) również zależne od rozpuszczalnika nieoczekiwanie niższe ilości produktów ubocznych lub zanieczyszczeń o polarności zbliżonej do epotylonów, zwłaszcza do epotylonu B, koniecznych do usunięcia po chromatografii w odwróconym układzie faz.
Wynalazek dotyczy sposobu obróbki epotylonów, zwłaszcza po ich otrzymaniu w typowym środowisku reakcji chemicznej lub korzystnie w pożywce hodowlanej zawierającej mikroorganizmy, zwłaszcza bakterie śluzowe (myxobakteria), w szczególności rodzaju Sorangium, które są odpowiednie do wytwarzania epotylonów, zwłaszcza epotylonu A i/lub B oraz składnika tworzącego kompleks, który to sposób obejmuje zastosowanie do desorpcji wymienionych epotylonów z żywicy rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego.
Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, według wynalazku polega na tym, że obejmuje
- desorpcję epotylonów za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niż szego alkilu podstawionego przez niż szy alkoksyl, lub za pomocą mieszaniny tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla, przy czym etap desorpcji może być powtarzany w celu uzyskania desorpcji zbliżonej do całkowitej;
PL 209 406 B1
- usunięcie z otrzymanych roztworów rozpuszczalnika stosowanego do desorpcji przez odparowanie;
- ewentualnie krystalizację epotylonu(ów) po desorpcji; przy czym w szczególnoś ci przy krystalizacji epotylonu B dodawanie mieszaniny alkoholu i węglowodoru, korzystnie niższego alkanolu i cyklicznego węglowodoru alifatycznego zawierającego od 3 do 10 atomów w pierścieniu, oraz odparowanie fazy alkoholowej do sucha, oraz krystalizację epotylonu B z odpowiedniej mieszaniny rozpuszczalników;
- rozdzielenie epotylonów przez chromatografię w układzie odwróconych faz po rozprowadzeniu pozostałości z poprzedniego etapu w odpowiednim rozpuszczalniku, i eluowanie za pomocą mieszaniny nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody, następnie usunięcie przez odparowanie nitrylu z zebranych frakcji zawierających epotylon; i ekstrakcję pozostałej wody z epotylonem przy użyciu estru, zwłaszcza niższego alkanianu niższego alkilu, korzystnie octanu izopropylu, a następnie odparowanie do sucha fazy estrowej zawierającej epotylon;
- ewentualnie dalsze oczyszczanie metodą chromatografii adsorpcyjnej;
- końcową rekrystalizacj ę oczyszczonych epotylonów z odpowiednich rozpuszczalników lub mieszanin rozpuszczalników;
w którym, w razie konieczności i/lub potrzeby, pomiędzy każ dym z realizowanych etapów, otrzymane roztwory lub zawiesiny zatęża się, i/lub składniki ciekłe i stałe oddziela się od siebie.
Korzystnie w sposobie według wynalazku po desorpcji epotylonów z żywicy za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego, rozpuszczalnik usuwa się tak długo jak to konieczne, korzystnie aż do uzyskania suchej pozostałości, przy czym w razie potrzeby pozostałości rozprowadza się w stosunkowo małej objętości mieszaniny alkoholu i węglowodoru, korzystnie niższego alkanolu i cyklicznego wę glowodoru alifatycznego zawierają cego od 3 do 10 atomów wę gla w pierś cieniu; faz ę alkoholową odparowuje się, korzystnie do sucha, a ekstrakt alkoholowy krystalizuje się z mieszaniny alkoholu i węglowodoru, otrzymany stały krystaliczny produkt rozpuszcza się następnie w mieszaninie nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody, w stosunku objętościowym 2 do 3, a otrzymany roztwór zasilający podaje się, w razie konieczności, po podzieleniu na więcej niż jeden przebieg, na kolumnę preparatywną z układem odwróconych faz; następnie eluuje się mieszaniną nitrylu i wody; potem usuwa się nitryl z otrzymanych frakcji zawierających epotylon przez odparowanie, a otrzymaną fazę wodną ekstrahuje się estrem, po czym ekstrakt estrowy odparowuje się i następnie otrzymany produkt poddaje rekrystalizacji.
Korzystnie sposób według wynalazku realizuje się poprzez rozdział epotylonów A i B metodą chromatografii w symulowanym złożu ruchomym (SMB).
Przedmiotem wynalazku jest również sposób desorpcji epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen, który charakteryzuje sie tym, że stosuje się rozpuszczalnik słabo polarny lub niepolarny wybrany z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl, lub mieszaninę tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla.
Korzystnie desorpcji z żywicy podlegają epotylon A i/lub epotylon B.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z ż ywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen, charakteryzuj ą cy się tym, ż e obejmuje:
(i) desorpcję epotylonów z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niż szych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy skł adającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl; lub mieszaniny dwóch lub więcej tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla.
(ii) rozdzielenie epotylonów metodą chromatografii w układzie odwróconych faz po rozprowadzeniu w odpowiednim rozpuszczalniku i eluowaniu mieszaniną nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody.
PL 209 406 B1
Korzystnie w powyższym sposobie rozdzielenia epotylonów A i B dokonuje się metodą chromatografii w symulowanym złożu ruchomym (SMB).
Wynalazkiem jest również zastosowanie do desorpcji epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen, rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl; lub mieszaniny tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4 tych rozpuszczalników, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla.
Terminy ogólne stosowane powyżej i w dalszym opisie korzystnie mają następujące znaczenie:
Określenie „epotylony korzystnie odnosi się do dowolnego epotylonu lub pochodnej epotylonu wymienionej w zgłoszeniach patentowych WO 99/03848, WO 00/49020, WO 00/47584, WO 00/00485, WO 00/23452, WO 99/03848, WO 00/49019, WO 99/07692, WO 98/22461, WO 99/65913, WO 98/38192, WO 00/50423, WO 00/22139, WO 99/58534, WO 97/19086, WO 98/25929, WO 99/67252, WO 99/67253, WO 00/21247, WO99/42602, WO 99/28324, WO 00/50423, WO 00/39276, WO 99/27890, WO 99/54319, WO 99/54318, WO 99/02514, WO 99/59985, WO 00/37473, WO 98/08849, US 6,043,372, US 5,969,145, WO 99/40047, WO 99/01124 i WO 99/43653, bardziej korzystnie do epotylonu A, a zwłaszcza epotylonu B, ale w szerszym aspekcie wynalazku także do epotylonów D i E, opisanych w WO 97/19086 i WO 98/22461, epotylonów E i F, opisanych w WO 98/22461, jak również epotylonów opisanych w WO 99/02514. Wszystkie te dokumenty, zwłaszcza w odniesieniu do pochodnych epotylonu i korzystnych pochodnych epotylonów tutaj wymienionych, są niniejszym włączone jako odnośniki.
Rozpuszczalnik słabo polarny lub niepolarny korzystnie posiada następującą charakterystykę:
Korzystny rozpuszczalnik stanowi ten, który w rzędzie eluotropowym oznaczonym zgodnie z pracą Snyder i współ pracowników, J. Chromatogr.Sci. 16,223 (1978), wykazuje nastę pują c ą charakterystykę, gdzie xe oznacza parametr akceptora protonów (wskaźnik tendencji do tworzenia wiązania wodorowego w charakterze akceptora wodoru), Xd oznacza parametr donora protonów (wskaźnik tendencji do tworzenia wiązania wodorowego w charakterze donora wodoru), a xn oznacza parametr dipolowy (wskazujący na charakter dipolowy), przy założeniu, że xe + xd + xn =1, lub mieszanina takich rozpuszczalników:
xe =0,20-0,40; xd =0,15-0,36; i xn =0,38-0,60; korzystnie xe =0,22-0,32; xd =0,17-0,34; i xn =0,39-0,54.
Bardzo korzystne wśród rozpuszczalników słabo polarnych i niepolarnych są dichlorek metylenu (=chlorek metylenu) lub dichlorek etylenu; lub szczególnie korzystnie rozpuszczalniki aromatyczne, szczególnie benzen, benzen podstawiony przez jedną lub więcej, korzystnie jedną do trzech reszt wybranych z grupy składającej się z niższych alkili, zwłaszcza metylu, etylu lub izopropylu, niższych alkoksyli, zwłaszcza metoksylu lub etoksylu, fluorowców, zwłaszcza fluoru, chloru, bromu lub jodu, grupy nitrowej i niższych alkoksylo-niższych alkili, zwłaszcza etoksymetylu, szczególnie toluenu, etylobenzenu, ksylenu, zwłaszcza o-, m-, lub p-ksylenu, mezytylenu, pseudokumenu, hemellitenu, kumenu, izopropylotoluenu, halogenków fenylowych, zwłaszcza fluorobenzenu, chlorobenzenu, bromobenzenu lub jodobenzenu, niższych alkoksybenzenów, zwłaszcza etoksybenzenu lub metoksybenzenu, lub niższych alkoksylo-niższych alkilobenzenów, zwłaszcza etoksymetylobenzenu (eteru benzylowego); lub dowolnej mieszaniny dwu lub więcej z nich, na przykład 2 do 4 z tych rozpuszczalników; najbardziej korzystne są niższe alkilobenzeny, zwłaszcza etylobenzeny, ksylen, szczególnie o-, m- lub p-ksylen, mezytylen, pseudokumen, hemelliten, kumen, izopropylotoluen, a najkorzystniej toluen.
Określenie rozpuszczalnik słabo polarny lub niepolarny obejmuje także mieszaniny dwu lub więcej rozpuszczalników opisanych powyżej i poniżej, na przykład 2 do 4 takich rozpuszczalników.
Przedrostek „niższy alkil zawsze wskazuje, że odpowiednio nazwany rodnik zawiera maksymalnie do 7 atomów węgla, szczególnie do 4 atomów węgla, i jest rozgałęziony lub prostołańcuchowy. Niższy alkil może być na przykład nierozgałęziony lub rozgałęziony jednokrotnie lub więcej, i stanowi np. metyl, etyl, propyl, taki jak izopropyl lub n-propyl, butyl, taki jak izobutyl, sec-butyl, tert-butyl lub n-butyl, lub także pentyl, taki jak amyl lub n-pentyl.
Fluorowiec korzystnie stanowi jod, brom, chlor lub fluor.
Węglowodór korzystnie stanowi związek organiczny posiadający 4 do 32, bardziej korzystnie 4 do 20, jeszcze bardziej korzystnie 6 do 16 atomów węgla i może stanowić alifatyczny, np. liniowy,
PL 209 406 B1 rozgałęziony lub cykliczny nasycony alkan, np. cykloheksan, liniowym rozgałęziony lub cykliczny (niearomatyczny) związek organiczny z jednym lub więcej wiązaniem podwójnym i/lub potrójnym, lub węglowodór aromatyczny, ten ostatni nie podstawiony lub podstawiony przez jeden lub więcej, np. do trzech, podstawników wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, zwłaszcza metylu, etylu lub izopropylu, niższego alkoksylu, zwłaszcza metoksylu lub etoksylu, fluorowca, zwłaszcza fluoru, chloru, bromu lub jodu, nitro i niższych alkoksylo-niższych alkili, zwłaszcza etoksymetylu, korzystnie przez jedną do trzech reszt niższego alkilu.
Alkohol korzystnie stanowi hydroksy-niższy alkan, zwłaszcza metanol, etanol lub n- lub izo-propanol.
Żywicę korzystnie stanowi żywica syntetyczna, zwłaszcza żywica oparta na kopolimerach styrenu i diwinylobenzenu, bardziej korzystnie Amberlite XAD-4 lub korzystnie Amberlite XAD-16 [Rohm & Haas Germany GmbH, Frankfurt] lub Diaion HP-20 [Resindlon S.R.L., Mitsubishi Chemical Co., Mediolan]. Nie wymaga komentarza, że żywica, z której ma być desorbowany epotylon lub epotylony zgodnie z wynalazkiem, ma epotylony związane z nią nie kowalencyjnie (np. związane odwracalnie lub zaadsorbowane). Innymi słowy, kiedy stosuje się określenie „żywica, ma ono oznaczać „żywicę posiadającą jeden lub więcej epotylonów pozostających z nią w kontakcie, zwłaszcza związanych odwracalnie lub zaadsorbowanych.
Po przeprowadzeniu desorpcji epotylonów z żywicy w rozpuszczalniku słabo polarnym lub niepolarnym jak opisano powyżej, można prowadzić dalsze dowolne etapy oczyszczania konieczne lub potrzebne do uzyskania odpowiednich epotylonów w czystej postaci.
Obróbkę epotylonów poprzedza reakcja lub proces prowadzący do produktu reakcji zawierającego epotylony poddawane obróbce, które wyodrębnia się (i) albo z mieszanin po reakcji chemicznej po rozpuszczeniu w odpowiednim uwodnionym rozpuszczalniku niepolarnym, lub (ii) bardziej korzystnie z nadsączu (na przykład zawierającego cyklodekstryny, jak opisano w WO 99/42602) lub z pożywki hodowlanej mikroorganizmów produkujących epotylony, przez rozdzielenie hodowli na fazę ciekłą (np. roztwór po odwirowaniu lub filtrat) i fazę stałą (komórki), szczególnie przy użyciu filtracji lub odwirowania (wirówka rurowa lub separator).
Te czynności wstępne kontynuuje się, mieszając bezpośrednio roztwór ((i)) lub fazę ciekłą ((ii)) z żywicą zwłaszcza z żywicą syntetyczną, szczególnie z żywicą opartą na kopolimerach styrenu i diwinylobenzenu jako matrycy (dalej określanej także po prostu jako żywica polistyrenowa), taką jak Amberlite XAD-16 lub Diaion HP-20 (korzystnie w stosunku objętościowym roztworu po odwirowaniu do żywicy ok. 10:1 do 100:1, korzystnie około 50:1). Po okresie kontaktu, korzystnie 0,25 do 50 godzin, zwłaszcza 0,8 do 22 godzin, żywicę oddziela się, na przykład przez filtrację, sedymentację lub odwirowanie. W razie potrzeby żywicę po adsorpcji przemywa się silnie polarnym rozpuszczalnikiem, korzystnie wodą
Wówczas rozpoczyna się korzystny sposób obróbki zgodnie z wynalazkiem: desorpcję epotylonów (tworzącą bardzo korzystny aspekt wynalazku per se) prowadzi się przy użyciu rozpuszczalników słabo polarnych lub niepolarnych, zwłaszcza niższych halogenków alkilowych, szczególnie dichlorku metylenu lub dichlorku etylenu, lub bardziej korzystnie rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej, korzystnie jedną do trzech reszt wybranych spośród grup składających się z niższych alkili, zwłaszcza metylu, etylu lub izopropylu, niższych alkoksyli, zwłaszcza metoksylu lub etoksylu, fluorowców, zwłaszcza fluoru, chloru, bromu lub jodu, grupy nitrowej lub niższych alkoksylo-niższych alkili, zwłaszcza etoksymetylu, najbardziej korzystnie toluenu. Etap ekstrakcji w celu osiągnięcia, w razie potrzeby lub konieczności, bardziej całkowitej desorpcji, można powtarzać jeden lub więcej razy, korzystnie 0 do 3 razy, zwłaszcza raz.
Obróbkę (w przypadku połączenia powtórnych ekstrakcji) tak otrzymanych roztworów zdesorbowanych epotylonów kontynuuje się, usuwając rozpuszczalnik stosowany do desorpcji z otrzymanych roztworów przez odparowanie (destylację), korzystnie przez zatężenie w reaktorze i następnie w wyparce obrotowej pod próż nią .
Następnie ma miejsce dalsze postępowanie z realizowaniem następujących etapów, spośród których etap oczyszczania metodą chromatografii w odwróconym układzie faz z elucją za pomocą nitrylu jest obowiązkowy, podczas gdy inne etapy są fakultatywne:
- etap krystalizacji epotylonu(ów) po desorpcji; w szczególności przy krystalizacji epotylonu B dodaje się mieszaninę alkoholu i węglowodoru, zwłaszcza niższego alkanolu i cyklicznego węglowodoru alifatycznego zawierającego 3 do 10 atomów w pierścieniu, najbardziej korzystnie metanolu
PL 209 406 B1 i cykloheksanu (korzystnie w stosunku obję toś ciowym 1:10 do 10:1, zwł aszcza od 1:3 do 3:1). Dodanie wody powoduje szybkie rozdzielenie faz, fazę alkoholową odparowuje się do sucha, np. przy użyciu wyparki obrotowej pod próżnią. Otrzymany ekstrakt zawierający epotylon B krystalizuje się następnie z odpowiedniej mieszaniny rozpuszczalników, najbardziej korzystnie izopropanol/cykloheksan, korzystnie w stosunku objętościowym 1.10 do 10:1, korzystniej 1:6 do 6:1, jeszcze korzystniej 1:6 do 1:4;
- etap (obowią zkowy) rozdzielenia epotylonów przez chromatografię w odwróconym ukł adzie faz po rozprowadzeniu w odpowiednim rozpuszczalniku, zwłaszcza w mieszaninie nitrylu i wody, korzystnie acetonitryl/woda, w korzystnym stosunku objętościowym 1:10 do 10:1, zwłaszcza 1:3 do 1:1, i eluowanie mieszanin ą nitrylu i wody, korzystnie charakteryzują cy się tym, ż e chromatografię prowadzi się na kolumnie z wypełnieniem do faz odwróconych, ze związanymi łańcuchami węglowodorowymi, takimi jak łańcuchy węglowodorowe zawierające 18 łańcuchów węgla, szczególnie z wypełnieniem RP-18, i stosuje się eluent zawierający nitryl, zwłaszcza niższy alkilonitryl, szczególnie acetonitryl, w szczególności mieszaninę nitryl/woda, zwłaszcza mieszaninę acetonitryl/woda, korzystnie w stosunku obję toś ciowym nitrylu do wody około 1:99 do 99:1, przede wszystkim pomię dzy 1:9 do 9:1, np. pomiędzy 2:8 i 7:3, np. 3:7 lub 4:6; i usunięcie nitrylu z zebranych frakcji zawierających epotylon (zwłaszcza epotylon A lub w szczególności epotylon B) przez odparowanie (destylację); w razie konieczności pozostałą wodę z epotylonem ekstrahuje się następnie estrem, zwłaszcza niższym estrem niższego alkilu, korzystnie octanem izopropylu, z następnym odparowaniem do sucha fazy estrowej zawierającej epotylon (korzystnie najpierw w reaktorze, następnie w wyparce obrotowej pod próżnią); (w razie potrzeby, wyjściowy roztwór epotylonu może być podzielony i rozdzielany w więcej niż jednym cyklu rozdziału w odwróconym układzie faz);
- tylko w razie potrzeby (np. jako alternatywa dla krystalizacji po desorpcji), etap chromatografii adsorpcyjnej, zwłaszcza przez naniesienie na kolumnę z żelem krzemionkowym i eluowanie odpowiednim rozpuszczalnikiem lub mieszaniną rozpuszczalników, zwłaszcza mieszaniną ester/węglowodór, na przykład alkanian niższego alkilu/C4-C10-alkan, zwłaszcza octan etylu lub izopropylu n-heksan, w którym stosunek estru do węglowodoru korzystnie mieści się w zakresie 99:1 do 1:99, korzystnie 10:1 do 1:10, na przykład 4:1;
- i etap koń cowej rekrystalizacji, np. z odpowiednich rozpuszczalników lub mieszanin rozpuszczalników, na przykład składających się z estrów, mieszanin ester/węglowodór lub alkoholi, zwłaszcza octan etylu lub izopropylu/toluen, w którym stosunek estru do toluenu korzystnie mieści się w zakresie 1:10 do 10:1, korzystnie 2:3 (epotylon A) lub metanolu bądź octanu etylu (epotylon B);
w którym to sposobie, w razie koniecznoś ci lub potrzeby, pomię dzy każ dym ze stosowanych etapów otrzymane roztwory lub zawiesiny zatęża się, i/lub składniki ciekłe i stałe oddziela się od siebie, w szczególności przez sedymentację, filtrację lub odwirowanie roztworów/zawiesin. W powyższych poszczególnych operacjach mogą być korzystnie stosowane bardziej precyzyjne definicje przedstawione powyżej lub poniżej.
Korzystny aspekt wynalazku odnosi się także do sposobu wyodrębniania epotylonów, zwłaszcza epotylonu A lub w szczególności epotylonu B, zaadsorbowanych na żywicy syntetycznej, który to proces obejmuje (i) desorpcję epotylonów ze wspomnianej żywicy syntetycznej za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego, zwłaszcza halogenków niższych alkili, w szczególności dichlorku metylenu lub dichlorku etylenu, lub bardziej korzystnie rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej, korzystnie jedną do trzech reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, zwłaszcza metylu, etylu lub izopropylu, niższego alkoksylu, zwłaszcza metoksylu lub etoksylu, fluorowca, zwłaszcza fluoru, chloru, bromu lub jodu, grupy nitrowej i niższego alkoksylo-niższego alkilu, zwłaszcza etoksymetylu; najbardziej korzystnie toluenu; lub w szerszym aspekcie wynalazku mieszaniny dwu lub więcej rozpuszczalników; oraz (ii) rozdzielenie epotylonów metodą chromatografii w odwróconym układzie faz po rozprowadzeniu w odpowiednim rozpuszczalniku, zwłaszcza w mieszaninie nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu/wody, w korzystnym stosunku objętościowym 1:10 do 10:1, zwłaszcza 1:3 do 1:1, i eluowanie mieszaniną nitrylu lub wody, korzystnie charakteryzujące się tym, że chromatografię prowadzi się na kolumnie do faz odwróconych, zwłaszcza z wypełnieniem RP-18, ze związanymi łańcuchami węglowodorowymi, takimi jak łańcuchy węglowodorowe zawierające 18 atomów węgla, i stosuje się eluent składający się z nitrylu, zwłaszcza z niższego alkilonitrylu, w szczególności acetonitrylu, w szczegól8
PL 209 406 B1 ności mieszaninę acetonitryl/woda, korzystnie w stosunku nitrylu do wody około 1:99 do 99:1, przede wszystkim pomiędzy 1:9 a 9:1, np. pomiędzy 2:8 a 7:3, np. 3:7 lub 4:6.
Po przeprowadzeniu procesu z ostatniego punktu zaczynającego się od etapu (i) i obejmującego etap (ii) można prowadzić dowolne kolejne etapy oczyszczania konieczne lub wymagane do otrzymania odpowiednich epotylonów w czystej postaci.
Przygotowanie do obróbki korzystnie prowadzi się w sposób następujący: adsorpcji epotylonów, zwłaszcza z mieszaniny po reakcji chemicznej lub bardziej korzystnie z nadsączu pożywki mikroorganizmów, można dokonać zgodnie z opisem w WO 99/42602 lub analogicznie do niego; po prostu epotylony znajdują się w płynie po odwirowaniu, który następnie miesza się bezpośrednio z żywicą syntetyczną, zwłaszcza żywicą kopolimeru styren/diwinylobenzen, taką jak Amberlite XAD-16 lub Diaion HP-20 (korzystnie w stosunku objętościowym płynu po odwirowaniu do żywicy około 10:1 do 100:1, korzystnie około 50:1) i miesza się w mieszalniku. W etapie tym epotylony ulegają adsorpcji na żywicy. Po czasie wystarczającym do adsorpcji, na przykład po około 0,2 do 10 godzin, żywicę oddziela się przez odwirowanie lub filtrację. Adsorpcji epotylonów na żywicy można także dokonać na kolumnie chromatograficznej, umieszczając żywicę w kolumnie i przepuszczając przez nią płyn po odwirowaniu. Po adsorpcji żywicę przemywa się wodą.
Następnie zaczyna się proces według wynalazku, który przebiega następująco: desorpcji epotylonów z żywicy dokonuje się przy pomocy rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego według wynalazku, zwłaszcza opisanego jako korzystny powyżej lub poniżej, szczególnie chlorku metylenu lub szczególnie korzystnie toluenu. Rozpuszczalnik usuwa się wówczas tak długo, jak to konieczne, korzystnie aż do uzyskania suchej pozostałości. W razie potrzeby, pozostałość rozprowadza się w mieszaninie alkohol/wę glowodór, zwł aszcza metanol/cykloheksan, korzystnie w stosunku obję tościowym opisanym powyżej, w stosunkowo małej objętości. Fazę alkoholową odparowuje się, korzystnie do sucha, a następnie ekstrakt alkoholowy krystalizuje z mieszaniny alkoholu, zwłaszcza izopropanolu z węglowodorem, zwłaszcza cykloheksanem, korzystnie w proporcjach opisanych powyżej. Otrzymany stały krystaliczny produkt rozpuszcza się wówczas w mieszaninie nitryl/woda, korzystnie jak opisano powyżej, szczególnie w mieszaninie acetonitryl/woda w stosunku objętościowym 2:3 i otrzymany roztwór zasilają cy podaje się , w razie potrzeby po rozdzieleniu w jednym lub więcej cyklach, na kolumnę preparatywną do odwróconego układu faz. Następuje eluowanie mieszaniną nitryl/woda, zwłaszcza tą wymienioną powyżej. Acetonitryl z uzyskanych frakcji zawierających epotylon, zwłaszcza epotylon A, a szczególnie epotylon B, usuwa się przez odparowanie (oddestylowanie), a otrzymaną fazę wodną ekstrahuje się estrem, zwłaszcza octanem etylu. Ekstrakt estrowy odparowuje się, korzystnie do sucha, a następnie otrzymany produkt rekrystalizuje, na przykład frakcje epotylonu A rekrystalizuje się bezpośrednio z mieszaniny ester/węglowodór, np. octan etylu : toluen = 2:3, a frakcje epotylonu B z estru, zwł aszcza z octanu etylu lub korzystnie z alkoholu, zwł aszcza metanolu.
Okazało się, że szczególnie selektywny eluent (desorbent) stanowi toluen, który umożliwia uzyskanie około 100%-owej wydajności przy połowie czasu desorpcji potrzebnego w przypadku izopropanolu, stosowanego w WO 99/42602. Ilość desorbowanych epotylonów nieoczekiwanie wzrasta po desorpcji toluenem na przykład do 130% w porównaniu z desorpcją izopropanolem. (Jakkolwiek wydaje się to na pierwszy rzut oka niemożliwe z teoretycznego punktu widzenia, dobrze ilustruje główną zaletę obecnego wynalazku: rezultat jest podany w odniesieniu do wyników oznaczenia dla obciążonej żywicy. Ponieważ w oznaczeniu tym do desorpcji wykorzystuje się izopropanol, jako podstawę obliczeń trzeba było przyjąć niepełny proces desorpcji, pierwotnie prowadzący do niższych wartości oznaczenia, co obecnie okazało się mylące). Mieszaninę epotylonów można (bez lub z dalszym poddaniem krystalizacji) podawać bezpośrednio na kolumnę do faz odwróconych. Proces okazuje się bardzo silny, biorąc pod uwagę ilości rozpuszczalników, szybkości mieszania i temperatury. Podczas gdy w przypadku alkoholi (np. etanolu lub izopropanolu) podczas mieszania obserwuje się desorpcję dwufazową, gdzie pierwsza część produktu zawierającego epotylon ulega desorpcji w pierwszym okresie (można to wytłumaczyć rozkładem wielkości porów występującym w polistyrenie XAD-16, który to rozkład ma dwa maksima), a druga część po dalszym okresie, tego niekorzystnego zjawiska nie obserwuje się w przypadku toluenu ani dichlorometanu, gdzie cały produkt ulega desorpcji od razu w pierwszym okresie. W porównywalnych warunkach, pozostałość po odparowaniu dla epotylonów A i B w jednym przykł adzie w przypadku izopropanolu wynosi 40 g, dla chlorku metylenu 3,3 g, w przypadku toluenu tylko 0,9 g, przy ok. 17-18% wag. epotylonu B po desorpcji z ż ywic kopolimerów styren/diwinylobenzen otrzymanych z nadsączu kultury zawierającej cyklodekstrynę, jak to opisano w WO 99/42602, co wskazuje na znacznie większą czystość. Podczas gdy najbardziej znaczące koPL 209 406 B1 rzyści wykazuje toluen, dichlorometan posiada jedną zaletę, polegającą na łatwości usuwania, ze względu na niską temperaturę wrzenia.
Epotylon A można oddzielić od epotylonu B także metodą chromatografii opisaną niniejszym w wariancie symulowanego złoża ruchomego (SMB). Chromatografia SMB jest szeroko stosowana do rozdzielania mieszanin dwuskładnikowych, np. mieszanin racemicznych na chiralnych fazach stacjonarnych, np. procesy SORBEX w przemyśle petrochemicznym, jak Parex lub Molex, lub SAREX w przemyśle cukrowniczym. W porównaniu z chromatografią periodyczną chromatografia SMB posiada zaletę wynikającą z przeciwprądowej ciągłej operacji jednostkowej, która prowadzi do zwiększenia wydajności i zmniejszenia zużycia fazy ruchomej. Znany jest szereg systematycznych procedur rozwinięcia metody chromatografii SMB. Procedury takie opisane są np. przez R.M. Nicoud, M. Bailly, J. Kinkel, R.M Devant, T.R.E. Hampe i E.Kiisters w Proceedings of the 1st European Meeting on Simulated Moving Bed Chromatography, (1993), ISBN 2-905-267-21-6, str. 65-88; E.Kiisters, G.Gerber i F.D.Antia, Chromatographia, 40 (1995) 387; T.Proll i E.Kiisters, J. Chromatogr.A, 800 (1998) 135; lub C.Heuer, E.Kiisters, T.Plattner i A.Seidel-Morgenstern, J.Chromatogr.A, 827 (1998), 175. Podstawowe parametry rozdziału epotylonów A i B za pomocą chromatografii SMB można zaczerpnąć bezpośrednio z konwencjonalnego rozdziału metodą chromatografii cieczowej (LC). Korzystnie, jako fazę stacjonarną stosuje się żel krzemionkowy do faz odwróconych (RP 18), a jako fazę ruchomą mieszaniny woda/acetonitryl. Ostateczne ustalenie szybkości przepływu (dla poszczególnych stref przepływu opracowanym przez E.Kiisters i współpr. w J.Chromatogr.A (1995) 387 lub po ostrożnym obliczeniu izoterm absorbcji wyprowadzonych w J.Chromatogr.A, 800 (1998) 135 i J.Chromatogr.A, 827 (1998) 175. Strumienie ekstraktu i rafinatu można przerabiać zgodnie z opisem dla konwencjonalnej LC.
Wynalazek najbardziej korzystnie odnosi się do procesów i metod opisanych w następujących przykładach.
P r z y k ł a d y:
Następujące przykłady służą ilustracji wynalazku.
Ostrzeżenie: przy manipulowaniu epotylonami należy zachować wszelkie możliwe środki ostrożności ze względu na ich toksyczność.
P r z y k ł a d 1. Procedura obróbki dla epotylonu B
Desorpcji 591,7 kg obciążonej żywicy (żywica kopolimeru styren/diwinylobenzen XAD-16 obciążona epotylonami A i B z pożywki hodowlanej) dokonano mieszając żywicę w dwu porcjach z 720 l toluenu każda, w czterech częściach przez około 8 godzin. Fazę toluenową oddzielono od żywicy stosując filtr próżniowy. Połączone fazy toluenowe przemyto w dwu porcjach, po 250 ml wody każda. Po rozdzieleniu faz ekstrakt toluenowy zatężono w 1000-litrowym reaktorze do około 20-40 litrów, po czym zatężano do sucha w wyparce obrotowej pod próżnią. Otrzymano 4,095 kg ekstraktu toluenu zawierającego 209 g epotylonu B. Ekstrakt toluenowy rozpuszczono w 16,5 l metanolu i 24,5 l cykloheksanu. Po dodaniu 0,8 l wody natychmiast nastąpiło rozdzielenie faz. Frakcję metanolową odparowano do sucha w suszarce obrotowej pod próżnią uzyskując 1,025 kg pozostałości, zawierającej 194 g epotylonu B. Następnie ekstrakt metanolowy krystalizowano w mieszaninie rozpuszczalników składającej się z 2,05 l izopropanolu i 10,25 l cykloheksanu, otrzymując 0,4 kg krystalicznego produktu zawierającego 184 g epotylonu B. Kryształy rozpuszczono w 3,2 l mieszaniny acetonitryl/woda = 2:3 (obj/obj) i otrzymany roztwór zasilający przeniesiono w trzech odrębnych cyklach na kolumnę preparatywną do faz odwróconych (25 kg kulistego żelu krzemionkowego RP-18, YMC-Gel ODS-A 120; 5-15 μm.; Waters Corp., Milford, Massachusettes, USA). Eluowano stosując acetonitryl/wodę jako fazę ruchomą z szybkością przepływu 2,3 l/min; czas retencji epotylonu A=77-96 min, czas retencji epotylonu B = 96-119 min. Rozdział kontrolowano za pomocą detektora UV przy 250 nm. Acetonitryl z połączonych frakcji epotylonu B (z trzech przebiegów) oddestylowano a pozostałą fazę wodną ekstrahowano 504 l octanu izopropylu. Ekstrakt octanu izopropylu zatężono w reaktorze o pojemności 630 l do około 20-40 l, a następnie zatężono do sucha w wyparce próżniowej pod próżnią. Masa odparowanej pozostałości frakcji epotylonu B wynosiła 170 g, a zawartość 98,4% według HPLC (wzorzec zewnętrzny). Otrzymany produkt krystalizowano na koniec w 2,89 l metanolu w temp. 0-5°C, uzyskując 150 g czystego krystalicznego epotylonu B.
Temp. topn. 124-125°C.
PL 209 406 B1
Dane 1H-NMR dla epotylonu B (500 MHz-NMR, rozpuszczalnik: DMSO-d6; przesunięcia chemiczne δ w ppm w odniesieniu do TMS. S= singlet, d=dublet, m.= multiplet):
δ (wielokrotność)
7,34 (s)
6,50 (s)
5,28 (d)
5,08 (d)
4,46 (d)
4,08 (m)
3,47 (m)
3,11 (m)
2,83 (dd)
2,64 (s)
2,36 (m)
2,09 (s)
2,04 (m)
1,83 (m)
1,61 (m)
1,47-1,24 (m)
1,18 (s)
1,13 (m)
1,06 (d)
0,89 (d+s, nakładające się) Σ liczba całkowita (ilość H) 1 1 1 1 1 1 1 1 3 2 3 1 1 1 4 6 2 3 6
P r z y k ł a d 2. Porównanie różnych sposobów desorpcji dla epotylonu B:
Próbki wodnej zawiesiny żywicy kopolimeru styren/diwinylobenzen XAD-16 po 360 ml każda, obciążonej epotylonem A i B z pożywki hodowlanej myksobakterii sposobem opisanym w WO 99/42602 (odpowiadającej 194 g mokrej Amberlite® XAD-16) ekstrahowano różnymi rozpuszczalnikami w warunkach wymienionych w nastę pującej dalej tabeli, w mieszanym (zwykłym laboratoryjnym mieszadłem kotwicowym) reaktorze szklanym ze szkłem spiekanym na dnie (reaktor periodyczny do fazy stałej produkcji własnej, średnica wewnętrzna 10 cm, długość 20 cm, dalej „miesz./spiek).
T a b e l a 1: Porównanie sposobów desorpcji dla epotylonu B Żywica wyjściowa (żywica z zaadsorbowanym epotylonem B)
- #1001 obciążenie teoretyczne 70 mg na 360 ml zawiesiny żywicy (odpowiednik 70 mg na 194 g mokrej XAD-16)
- #1003 obciążenie teoretyczne 114 mg na 360 ml zawiesiny żywicy (odpowiednik 114 mg na 194 g mokrej XAD-16)
| Wariant | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Reaktor | Miesz./spiek (RT) | Miesz./spiek (RT) | Miesz./spiek (RT) | Miesz./spiek (RT) | Reflux (40°C) | Reflux (42-45°C) |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Żywica wyjściowa | #1001 | #1001 | #1003 | #1003 | #1003 | #1003 |
| Ilość zawiesiny żywicy | 360 | 360 | 360 | 360 | 360 | 180 |
| Rozpuszczalnik desorpcyjny | Izopropanol | Chlorek metylenu | Izopropanol | Chlorek metylenu | Chlorek metylenu | Izopropanol |
| Mieszanie (obr/min) | 250 | 250 | 250 | 250 | 250 | 250 |
| Objętość (l) | 8x0,2=1,6 | 3x0,36=1,1a | 5x0,72=3,6 | 3x0,72h=2,2 | 1x2,2 | 1x1,8 |
| Czas desorpcji (h) | 8 | 3 | 5 | 3 | 2 | 2 |
| Odparowanie (h) | 2e | 0,5 | 4e | Brak | Brak | 2 |
| Dodatek wody (l) | 0,7 | Brakb | 1,15 | Brak | Brak | 0,54 |
PL 209 406 B1 cd. tabeli 1
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
| Ekstrakcja octanem etylu (l) | 1,1 | Brak | 2,2 | Brak | Brak | 1,1 |
| Czas rozdziału faz (h) | 24c | Brak | 15 | Brak | Brak | 15 |
| Odparowanie (h) | 2 | Brak | 2 | 1 | 1 | 1 |
| Pozostałość po odparowaniu (g) | 5,84l | 3,37d | 3,31 | 2,68a | 3,24l | 1,70 |
| Zawartość (%) | 1,26 | 1,75 | 2,9 | 3,7 | 3,1 | 3,3 |
| Wydajność: mg (%) | 74(105)g | 59(84) | 96(84) | 99(87) | 101(89) | 56(98) |
| Wariant | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| Reaktor | Erl/Miesz. magn. | Miesz./spiek (RT) | Reflux (42-45°C) | Miesz./spiek (RT) | Miesz./spiek (RT) | Miesz./spiek (43°C) |
| Żywica wyjściowa | #1003 | #1003 | #1003 | #1003 | #1003 | #1003 |
| Ilość zawiasy żywicy | 100 | 360 | 180 | 360 | 360 | 360 |
| Rozpuszczalnik desorpcyjny | Chlorek metylenu | Toluen | Izopropanol | Toluen | Toluen | Toluen |
| Mieszanie (obr/min) | ? | 640 | 250 | 250 | 640 | 250 |
| Objętość (l) | 1x0,5=0,5 | 3x0,72=2,2 | 1x1,8=1,8 | 4x0,36=1,44 | 4x0,36=1,44 | 4x0,36=1,44 |
| Czas desorpcji (h) | 5 | 3 | 6 | 4 | 4 | 4 |
| Odparowanie (h) | Brak | 15 | Brak | Brak | Brak | |
| Dodatek wody (l) | Brak | 0,51 | 0,54 | 0,5k | 0,5k | 0,5k |
| Ekstrakcja octanem etylu (l) | Brak | Brak | 1,1 | Brak | Brak | Brak |
| Czas rozdziału faz (h) | Brak | 0,1 | 15 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Odparowanie (h) | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Pozostałość po odparowaniu (g) | 4,38 | 0,88 | 2,32 | 0,75 | 0,88 | 0,95 |
| Zawartość (%) | 0,5 | 17,4 | 2,69 | 17,6 | 17,1 | 15,8 |
| Wydajność: mg (5) | 22(69) | 153(134) | 62,5(110) | 132(116^ | 150(132) | 150(132) |
a - bez optymalizacji; w przypadku 2 ekstrakcji spadek wydajności ok. 5% b - trzykrotna ekstrakcja przeciwprądowa wodą nie powoduje usunięcia składników polarnych c - pierwszy z trzech rozdziałów faz przez noc d - produkt, który w porównaniu z pozostałością po odparowaniu octanu etylu, znacznie lepiej ulega chromatografowaniu na żelu krzemionkowym e - odpowiada pozostałości po odparowaniu około 25 do 30 g f - piec suszarniczy (wysoka próżnia) przez weekend g - prawdopodobnie wynik, w odniesieniu do zużytego czasu, generowania pierwszego rozdziału faz h - odzysk: 1-sza ekstrakcja = 700 ml; 2-ga ekstrakcja = 660 ml; 3-cia ekstrakcja = 680 ml i - odzysk: 1-sza ekstrakcja = 670 ml; 2-ga ekstrakcja = 710 ml; 3-cia ekstrakcja = 720 ml j - nie potwierdziła się konieczność dodatku wody k - ułatwia usunięcie wody oryginalnie występującej (XAD-16 zalewa się stosowaną wodą) l - w świetle rezultatów wariantu 8, 11 i 12 oraz krzywych elucji dla wszystkich prób z toluenem, nie można wykluczyć użycia mniejszych ilości żywicy
PL 209 406 B1 „Erl./miesz. magn.” oznacza mieszanie magnetyczne w kolbie Erlenmayera „chlorek metylenu” oznacza dichlorometan „miesz./spiek” oznacza mieszadło/spiek „RT” oznacza temperaturę pokojową
Z powyższych doświadczeń i dalszych danych można wyciągnąć wniosek, że w porównaniu z izopropanolem ekstrakcja chlorkiem metylenu zapewnia lepszą selektywność, krótszy czas ekstrakcji (około 2-krotnie), szybsze oddestylowanie rozpuszczalnika (temp. wrzenia chlorku metylenu wynosi ok. 40°C, izopropanolu (81-83°C), brak konieczności czasochłonnego i trudnego rozdzielania faz octan etylu/woda, uniknięcie drugiej destylacji rozpuszczalnika, w związku z czym możliwe jest zmniejszenie ilości etapów procesu powodujące mniejsze ryzyko zanieczyszczenia, lepsze i bezpieczniejsze manipulowanie; moż liwość obróbki przy połowie objętości (np. reaktory 1000-litrowe zamiast 2000-litrowych); otrzymanie produktu epotylon B o lepszym profilu czystości (mniej produktów ubocznych o polarności porównywalnej z epotylonem B), a ponadto pozostałość po odparowaniu nie zatyka aparatury i nie pieni się, jak w przypadku ekstrakcji octanem etylu. W przypadku desorpcji toluenem uzyskuje się wyższe niż w przypadku ekstrakcji izopropanolem wydajności (około 100% zamiast 80%), obserwuje się lepszą selektywność (przy izopropanolu desorpcji ulega około 10-krotnie większa ilość produktów ubocznych), skraca się znacząco czas ekstrakcji (około 3-krotnie), uproszczeniu ulega trudna filtracja po desorpcji izopropanolem (ekstrakcja izopropanolem okazała się trudna do wprowadzenia na skalę przemysłową), nie jest wymagana druga destylacja rozpuszczalnika, możliwa jest obróbka w mniejszych reaktorach (ponownie, dla przykładu, możliwe jest zastosowanie reaktora 1000 litrów zamiast 2000 litrów), możliwe jest zaniechanie chromatografii na żelu krzemionkowym (pozostałość po odparowaniu po desorpcji już zawiera około 40% mieszaniny epotylonów A/B), a pozostałość po odparowaniu po desorpcji nie pieni się, ani nie zatyka zaworów, jak obserwowano w przypadku ekstrakcji octanem etylu.
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, znamienny tym, że obejmuje- desorpcję epotylonów za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl, lub za pomocą mieszaniny tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy” oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla, przy czym etap desorpcji może być powtarzany w celu uzyskania desorpcji zbliżonej do całkowitej;- usunięcie z otrzymanych roztworów rozpuszczalnika stosowanego do desorpcji przez odparowanie;- ewentualnie krystalizację epotylonu(ów) po desorpcji; przy czym w szczególnoś ci przy krystalizacji epotylonu B dodawanie mieszaniny alkoholu i węglowodoru, korzystnie niższego alkanolu i cyklicznego węglowodoru alifatycznego zawierającego od 3 do 10 atomów w pierścieniu, oraz odparowanie fazy alkoholowej do sucha, oraz krystalizację epotylonu B z odpowiedniej mieszaniny rozpuszczalników;- rozdzielenie epotylonów przez chromatografię w układzie odwróconych faz po rozprowadzeniu pozostałości z poprzedniego etapu w odpowiednim rozpuszczalniku, i eluowanie za pomocą mieszaniny nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody, następnie usunięcie przez odparowanie nitrylu z zebranych frakcji zawierają cych epotylon; i ekstrakcję pozostał ej wody z epotylonem przy uż yciu estru, zwłaszcza niższego alkanianu niższego alkilu, korzystnie octanu izopropylu, a następnie odparowanie do sucha fazy estrowej zawierającej epotylon;- ewentualnie dalsze oczyszczanie metodą chromatografii adsorpcyjnej;- końcową rekrystalizacj ę oczyszczonych epotylonów z odpowiednich rozpuszczalników lub mieszanin rozpuszczalników;w którym, w razie konieczności i/lub potrzeby, pomiędzy każ dym z realizowanych etapów, otrzymane roztwory lub zawiesiny zatęża się, i/lub składniki ciekłe i stałe oddziela się od siebie.PL 209 406 B1
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że po desorpcji epotylonów z żywicy za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego, rozpuszczalnik usuwa się tak długo jak to konieczne, korzystnie aż do uzyskania suchej pozostałości, przy czym w razie potrzeby pozostałości rozprowadza się w stosunkowo małej objętości mieszaniny alkoholu i węglowodoru, korzystnie niższego alkanolu i cyklicznego węglowodoru alifatycznego zawierającego od 3 do 10 atomów węgla w pierścieniu; fazę alkoholową odparowuje się korzystnie do sucha, a ekstrakt alkoholowy krystalizuje się z mieszaniny alkoholu i węglowodoru, otrzymany stały krystaliczny produkt rozpuszcza się następnie w mieszaninie nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody, w stosunku objętościowym 2 do 3, a otrzymany roztwór zasilający podaje się, w razie konieczności, po podzieleniu na więcej niż jeden przebieg, na kolumnę preparatywną z układem odwróconych faz; następnie eluuje się mieszaniną nitrylu i wody; potem usuwa się nitryl z otrzymanych frakcji zawierających epotylon przez odparowanie, a otrzymaną fazę wodną ekstrahuje się estrem, po czym ekstrakt estrowy odparowuje się i następnie otrzymany produkt poddaje rekrystalizacji.
- 3. Sposób według zastrz. 1 albo 2, znamienny tym, że rozdziału epotylonów A i B dokonuje się metodą chromatografii w symulowanym złożu ruchomym (SMB).
- 4. Sposób desorpcji epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen, znamienny tym, że stosuje się rozpuszczalnik słabo polarny lub niepolarny wybrany z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl, lub mieszaninę tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla.
- 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że podlegającymi desorpcji epotylonami są epotylon A i/lub epotylon B.
- 6. Sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen, znamienny tym, że obejmuje (i) desorpcję epotylonów z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen za pomocą rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niż szych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu, niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl; lub mieszaniny dwóch lub więcej tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla.(ii) rozdzielenie epotylonów metodą chromatografii w układzie odwróconych faz po rozprowadzeniu w odpowiednim rozpuszczalniku i eluowaniu mieszaniną nitrylu i wody, korzystnie acetonitrylu i wody.
- 7. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że rozdziału epotylonów A i B dokonuje się metodą chromatografii w symulowanym złożu ruchomym (SMB).
- 8. Zastosowanie rozpuszczalnika słabo polarnego lub niepolarnego wybranego z grupy składającej się z halogenków niższych alkili oraz rozpuszczalników aromatycznych, wybranych z grupy składającej się z benzenu, benzenu podstawionego przez jedną lub więcej reszt wybranych z grupy składającej się z niższego alkilu niższego alkoksylu, fluorowca, grupy nitrowej i niższego alkilu podstawionego przez niższy alkoksyl; lub mieszaniny tych rozpuszczalników, korzystnie od 2 do 4 tych rozpuszczalników, gdzie przedrostek „niższy oznacza rodnik zawierający do 7 atomów węgla do desorpcji epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej opartej na kopolimerach styren/diwinylobenzen.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0029895.0A GB0029895D0 (en) | 2000-12-07 | 2000-12-07 | Organic compounds |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL361884A1 PL361884A1 (pl) | 2004-10-04 |
| PL209406B1 true PL209406B1 (pl) | 2011-08-31 |
Family
ID=9904660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL361884A PL209406B1 (pl) | 2000-12-07 | 2001-12-05 | Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, sposób desorpcji i sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej oraz zastosowanie rozpuszczalnika do desorpcji tych epotylonów |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6946561B2 (pl) |
| EP (1) | EP1345944B1 (pl) |
| JP (1) | JP4287650B2 (pl) |
| KR (1) | KR100894990B1 (pl) |
| CN (1) | CN1263761C (pl) |
| AR (1) | AR031902A1 (pl) |
| AT (1) | ATE292132T1 (pl) |
| AU (2) | AU2493602A (pl) |
| BR (1) | BR0115991A (pl) |
| CA (1) | CA2433414C (pl) |
| CZ (1) | CZ301664B6 (pl) |
| DE (1) | DE60109814T2 (pl) |
| DK (1) | DK1345944T3 (pl) |
| EC (1) | ECSP034641A (pl) |
| ES (1) | ES2239687T3 (pl) |
| GB (1) | GB0029895D0 (pl) |
| HU (1) | HU224910B1 (pl) |
| IL (2) | IL156088A0 (pl) |
| MX (1) | MXPA03005097A (pl) |
| MY (1) | MY128409A (pl) |
| NO (1) | NO329164B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ526197A (pl) |
| PE (1) | PE20020568A1 (pl) |
| PL (1) | PL209406B1 (pl) |
| PT (1) | PT1345944E (pl) |
| RU (1) | RU2285007C2 (pl) |
| SI (1) | SI1345944T1 (pl) |
| SK (1) | SK287356B6 (pl) |
| TW (1) | TWI286137B (pl) |
| WO (1) | WO2002046196A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA200304296B (pl) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6867305B2 (en) | 1996-12-03 | 2005-03-15 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof |
| US6204388B1 (en) | 1996-12-03 | 2001-03-20 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof |
| JP4579351B2 (ja) | 1996-12-03 | 2010-11-10 | スローン−ケッタリング インスティトュート フォア キャンサー リサーチ | エポチロンの合成とその中間体及びその類似物並びにその使用 |
| US6194181B1 (en) * | 1998-02-19 | 2001-02-27 | Novartis Ag | Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics |
| US20020058286A1 (en) * | 1999-02-24 | 2002-05-16 | Danishefsky Samuel J. | Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof |
| GB0029895D0 (en) * | 2000-12-07 | 2001-01-24 | Novartis Ag | Organic compounds |
| US6921769B2 (en) | 2002-08-23 | 2005-07-26 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof |
| US7649006B2 (en) | 2002-08-23 | 2010-01-19 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof |
| PT1506203E (pt) * | 2002-08-23 | 2007-04-30 | Sloan Kettering Inst Cancer | Síntese de epotilonas, seus intermediários, seus análogos e suas utilizações |
| TWI291464B (en) * | 2002-09-23 | 2007-12-21 | Bristol Myers Squibb Co | Methods for the preparation, isolation and purification of epothilone B, and X-ray crystal structures of epothilone B |
| FR2846520B1 (fr) | 2002-11-06 | 2006-09-29 | Roquette Freres | Utilisation de maltodextrines branchees comme liants de granulation |
| KR100681811B1 (ko) * | 2005-03-15 | 2007-02-12 | 성균관대학교산학협력단 | 생물학적 대사부산물의 효율적인 제거를 통한 유용 이차대사산물의 제조방법 |
| AR062375A1 (es) | 2006-08-16 | 2008-11-05 | Novartis Ag | Cristal de epotilona b y composiciones farmaceuticas |
| JP5180321B2 (ja) | 2008-02-01 | 2013-04-10 | 浙江海正薬業股▲ふん▼有限公司 | エポチロンの分離及び精製方法 |
| CA2799202C (en) | 2010-05-18 | 2016-07-05 | Cerulean Pharma Inc. | Compositions and methods for treatment of autoimmune and other diseases |
| KR101372563B1 (ko) * | 2011-12-26 | 2014-03-14 | 주식회사 삼양바이오팜 | 에포틸론 함유물질로부터 에포틸론 ａ와 ｂ의 추출 및 정제 방법 |
| CN110964029B (zh) * | 2019-12-19 | 2020-11-03 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种埃博霉素b发酵液的预处理方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4138042C2 (de) * | 1991-11-19 | 1993-10-14 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Epothilone, deren Herstellungsverfahren sowie diese Verbindungen enthaltende Mittel |
| EP0923583A1 (de) * | 1996-08-30 | 1999-06-23 | Novartis AG | Verfahren zur herstellung von epothilonen und zwischenprodukte innerhalb des verfahrens |
| ES2312695T3 (es) * | 1996-11-18 | 2009-03-01 | Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf) | Epotilones e y f. |
| US6384230B1 (en) * | 1997-07-16 | 2002-05-07 | Schering Aktiengesellschaft | Thiazole derivatives, method for their production and use |
| US6365749B1 (en) * | 1997-12-04 | 2002-04-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of ring-opened epothilone intermediates which are useful for the preparation of epothilone analogs |
| US6194181B1 (en) * | 1998-02-19 | 2001-02-27 | Novartis Ag | Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics |
| DE19826988A1 (de) * | 1998-06-18 | 1999-12-23 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Epothilon-Nebenkomponenten |
| AU2001295195B2 (en) * | 2000-04-28 | 2007-02-01 | Kosan Biosciences, Inc. | Myxococcus host cells for the production of epothilones |
| GB0029895D0 (en) * | 2000-12-07 | 2001-01-24 | Novartis Ag | Organic compounds |
-
2000
- 2000-12-07 GB GBGB0029895.0A patent/GB0029895D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-11-28 PE PE2001001192A patent/PE20020568A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-12-03 TW TW090129838A patent/TWI286137B/zh not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 HU HU0302579A patent/HU224910B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 ES ES01994791T patent/ES2239687T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-05 NZ NZ526197A patent/NZ526197A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 EP EP01994791A patent/EP1345944B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-05 PL PL361884A patent/PL209406B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 DE DE60109814T patent/DE60109814T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-12-05 MY MYPI20015563A patent/MY128409A/en unknown
- 2001-12-05 CN CNB018201415A patent/CN1263761C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-05 DK DK01994791T patent/DK1345944T3/da active
- 2001-12-05 AT AT01994791T patent/ATE292132T1/de active
- 2001-12-05 CZ CZ20031565A patent/CZ301664B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 RU RU2003119659/04A patent/RU2285007C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 CA CA2433414A patent/CA2433414C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-05 WO PCT/EP2001/014771 patent/WO2002046196A1/en not_active Ceased
- 2001-12-05 IL IL15608801A patent/IL156088A0/xx active IP Right Grant
- 2001-12-05 SI SI200130358T patent/SI1345944T1/sl unknown
- 2001-12-05 SK SK689-2003A patent/SK287356B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 BR BR0115991-7A patent/BR0115991A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-12-05 KR KR1020037007114A patent/KR100894990B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-05 MX MXPA03005097A patent/MXPA03005097A/es active IP Right Grant
- 2001-12-05 PT PT01994791T patent/PT1345944E/pt unknown
- 2001-12-05 AU AU2493602A patent/AU2493602A/xx active Pending
- 2001-12-05 AU AU2002224936A patent/AU2002224936B2/en not_active Ceased
- 2001-12-05 AR ARP010105667A patent/AR031902A1/es active IP Right Grant
- 2001-12-05 JP JP2002547933A patent/JP4287650B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-05 US US10/433,808 patent/US6946561B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-05-22 IL IL156088A patent/IL156088A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-06-02 ZA ZA200304296A patent/ZA200304296B/en unknown
- 2003-06-03 EC EC2003004641A patent/ECSP034641A/es unknown
- 2003-06-06 NO NO20032591A patent/NO329164B1/no not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-17 US US11/205,892 patent/US7569698B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL209406B1 (pl) | Sposób obróbki epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z mieszaniny reakcyjnej, sposób desorpcji i sposób wyodrębniania epotylonów A i/lub B i/lub E i/lub F z żywicy syntetycznej oraz zastosowanie rozpuszczalnika do desorpcji tych epotylonów | |
| AU2002224936A1 (en) | Process for the isolation and purification of epothilones | |
| CA2636807A1 (en) | Methods for obtaining cyclopamine | |
| JP4482555B2 (ja) | ポリエチレンイミン−結合樹脂を使用するタキサンおよびタキサン混合物の精製 | |
| JP2010509317A (ja) | 純粋な形態のラパマイシンならびにこの回収方法および精製方法 | |
| KR100859670B1 (ko) | 타크로리무스를 고수율 및 고순도로 정제하는 방법 | |
| HK1059618B (en) | Process for the isolation and purification of epothilones | |
| WO2009130706A1 (en) | A process for isolation and purification of geldanamycin | |
| US8193345B2 (en) | Purification method of lactone compounds containing unsaturated alkyl group by extraction with silver ion solution | |
| KR20130074601A (ko) | 에포틸론 함유물질로부터 에포틸론 ａ와 ｂ의 추출 및 정제 방법 | |
| RU2745293C1 (ru) | Способ получения кристаллической формы 8 софосбувира (варианты) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20131205 |