PL209623B1

PL209623B1 - New compounds, sulphorafan analogues and the pharmaceutical compound

Info

Publication number: PL209623B1
Application number: PL371356A
Authority: PL
Inventors: Guttman Teresa Kasprzycka; Zbigniew Fijałek; Grzegorz Litwinienko; Irena Misiewicz; Katarzyna Skupińska
Original assignee: Narodowy Inst Zdrowia Publicznego
Priority date: 2004-11-24
Filing date: 2004-11-24
Publication date: 2011-09-30
Also published as: PL371356A1

Description

Wynalazek dotyczy nowych związków chemicznych, analogów sulforafanu, które wykazują właściwości cytotoksyczne oraz środka farmaceutycznego zawierającego te związki.The invention relates to novel chemical compounds, sulforaphane analogs that exhibit cytotoxic properties, and a pharmaceutical composition containing these compounds.

Sulforafan jest związkiem biologicznie czynnym, występuje w postaci glukozynolatów w warzywach takich jak brokuły, kiełki brokułów, rzodkiewka, chrzan, brukselka.Sulforaphane is a biologically active compound, it occurs in the form of glucosinolates in vegetables such as broccoli, broccoli sprouts, radishes, horseradish, Brussels sprouts.

W literaturze istnieje wzmianka o analogu sulforafanu, 2-oksoheksylu, zawierają cym węgiel zamiast atomu siarki, bez opisu syntezy tego analogu i podobnie jak sulforafan zawierającego cztery grupy CH2 (Proc. Natl. Acad. Sci . USA, 89,2399-2403, 1992).There is mention in the literature of a sulforaphane analogue, 2-oxohexyl, containing carbon instead of a sulfur atom, without describing the synthesis of this analog, and similarly to sulforaphane containing four CH2 groups (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 2399-2403, 1992, 1992). ).

Wynalazek dotyczy związków o wzorze ogólnym, w którym R oznacza atom węgla lub siarki, a n wynosi 5 i oznacza ilość grup metylowych.The invention relates to compounds of the general formula in which R is carbon or sulfur and n is 5 and represents the number of methyl groups.

Zarówno nowy związek o wzorze 1 reprezentowany przez strukturę 2, w której R oznacza atom węgla zaś n wynosi 5 (izotiocyjanian 2-oksoamylu) jak i nowy związek o wzorze 1 reprezentowany przez strukturę 3, w której R^- oznacza atom siarki zaś n wynosi 5,(5-(metylo-sulfinylo)-amyl) otrzymuje się w syntezach wieloetapowych. Nie stwierdzono występowania tych związków w surowcach naturalnych bogatych w izotiocyjaniany.Both the new compound of formula 1, represented by structure 2, where R is carbon and n is 5 (2-oxoamyl isothiocyanate), and the new compound of formula 1, represented by structure 3, where R ^- is sulfur and n is 5 , (5- (methylsulfinyl) amyl) is obtained in multi-step syntheses. These compounds were not found in natural raw materials rich in isothiocyanates.

Synteza nowego związku izotiocyjanianu 2-oksoamylu opisanego wzorem 2 jest czteroetapowa, przedstawiona została na schematach 1 - 4.The synthesis of the new 2-oxoamyl isothiocyanate compound described by the formula 2 is a four-step synthesis, as shown in schemes 1-4.

W pierwszym etapie mieszaninę reakcyjną alkoholu metylo-benzenowego, suchego K2CO3 oraz chloroformu miesza się i schładza do temperatury 0°C, potem dodaje się bromu i znowu miesza się przez 5 godzin w temperaturze 0°C. Przebieg reakcji kontroluje się metodą TLC. Po przereagowaniu alkoholu do mieszaniny wkrapla się nasycony roztwór Na2S2O3 w temperaturze poniżej 10°C. Po zneutralizowaniu bromu sączy się mieszaninę, a osad przemywa się CHCl3 i odrzuca. Następnie roztwór rozdziela się, warstwę wodną ekstrahuje się chloroformem. Ekstrakty suszy się bezwodnym MgSO4 i odparowuje. Otrzymany ekstrakt stanowi bromo-keton w postaci jasnożółtego oleju.In the first step, the reaction mixture of methyl benzene alcohol, dry K 2 CO 3 and chloroform is stirred and cooled to 0 ° C, then bromine is added and stirred again for 5 hours at 0 ° C. The course of the reaction is monitored by TLC. After the alcohol has reacted, saturated Na2S2O3 solution is added dropwise to the mixture at a temperature below 10 ° C. After the bromine has been neutralized, the mixture is filtered and the solid is washed with CHCl3 and discarded. The solution was then separated, and the aqueous layer was extracted with chloroform. The extracts are dried with anhydrous MgSO4 and evaporated. The extract obtained is a bromo-ketone in the form of a light yellow oil.

W drugim etapie mieszaninę reakcyjną roztworu bromo-ketonu w acetonie z dodatkiem ftalamidku potasu ogrzewa się do temperatury wrzenia i przetrzymuje przez 48 godzin. Potem mieszaninę schładza się, odsącza, roztwór odparowuje się, a pozostały osad przemywa eterem. Otrzymanym produktem jest ftalimid w postaci krystalizującego, brązowego oleju.In the second stage, the reaction mixture of the bromoketone solution in acetone with the addition of potassium phthalamide was heated to reflux and held for 48 hours. The mixture is then cooled, filtered, the solution is evaporated and the remaining precipitate is washed with ether. The product obtained is a phthalimide in the form of a crystallizing brown oil.

W trzecim etapie mieszaninę reakcyjną ftalimidu i stężonego HCl ogrzewa się w temperaturze wrzenia przez 24 godziny. Następnie mieszaninę schładza się, odsącza osad i zatęża się roztwór do objętości 500 ml. Roztwór ekstrahuje się czterokrotnie CHCl3. Warstwę organiczną odrzuca się, a do warstwy wodnej dodaje się węgiel aktywny i ogrzewa do temperatury wrzenia. Potem odsącza się osad. Klarowny, brązowy roztwór odparowuje się do sucha. Otrzymany osad jest chlorowodorkiem aminy.In the third step, the reaction mixture of phthalimide and concentrated HCl is heated to reflux for 24 hours. Then the mixture is cooled, the precipitate is filtered off and the solution is concentrated to a volume of 500 ml. The solution was extracted four times with CHCl3. The organic layer is discarded and activated carbon is added to the aqueous layer and heated to reflux. The precipitate is then filtered off. The clear brown solution is evaporated to dryness. The obtained precipitate is the hydrochloride of the amine.

W czwartym etapie mieszaninę reakcyjną roztworu wodnego chlorowodorku aminy i CH2Cl2 schładza się do temperatury 0°C, po czym dodaje się tiofosgen i miesza intensywnie wkraplając roztwór wodny NaOH. Temperaturę reakcji utrzymuje się w zakresie 0 - 5°C. Po zakończeniu wkraplania i dalszym mieszaniu mieszaninę sączy się, a z otrzymanego roztworu oddziela się CH2Cl2. Warstwę wodną ekstrahuje się trzykrotnie CH2Cl2. Ekstrakty suszy się, odparowuje i poddaje badaniu na chromatografii kolumnowej w układzie heksan : octan etylu 8 : 2 1 : 1. Otrzymany produkt poddaje się destylacji w temperaturze 130°C / 0,1 mm Hg. W rezultacie otrzymuje się izotiocyjanian 2-okso-amylu w postaci jasnożółtego oleju.In the fourth step, the reaction mixture of the amine hydrochloride aqueous solution and CH2Cl2 is cooled to 0 ° C, then thiophosgene is added and the mixture is stirred intensively by dropwise addition of NaOH aqueous solution. The reaction temperature is kept at 0-5 ° C. After completion of the dropwise addition and further stirring, the mixture was filtered and CH2Cl2 was separated from the resulting solution. The aqueous layer is extracted three times with CH2Cl2. The extracts are dried, evaporated and subjected to column chromatography in hexane: ethyl acetate 8: 2 1: 1. The obtained product is distilled at 130 ° C / 0.1 mm Hg. As a result, 2-oxo-amyl isothiocyanate is obtained as a light yellow oil.

Synteza nowego związku izotiocyjanianu 5-(metylo-sulfinylo) amylu opisanego wzorem 3 jest pięcioetapowa i przedstawiona została na schematach 5 - 9.The synthesis of the novel 5- (methylsulfinyl) amyl isothiocyanate compound represented by the formula 3 is a five-step synthesis and is shown in schemes 5-9.

W pierwszym etapie mieszanin ę reakcyjną odmytego heksanem NaH i dwumetyloformamidu (DMF) miesza się powoli dodając ftalimid. W trakcie tej operacji w wyniku silnego rozgrzania mieszaniny wydziela się wodór. Następnie mieszaninę umieszcza się w łaźni wodnej i ogrzewa przez 30 minut w temperaturze 70°C. Po schłodzeniu do temperatury 0°C do mieszaniny dodaje się 1,5-dibromopentan rozpuszczony w acetonie. Całość miesza się i pozostawia w temperaturze wrzenia przez 16 godzin. Następnie mieszaninę schładza się i odsącza osad. Roztwór zatęża się i oddestylowuje pod próżnią nieprzereagowany 1,5-dibromopentan i DMF. Otrzymanym produktem jest N-5-bromopentanoftalimid o wysokim stopniu czystości w postaci brązowego oleju.In the first step, the reaction mixture of hexane-washed NaH and dimethylformamide (DMF) is stirred while slowly adding phthalimide. During this operation, hydrogen is released as a result of the strong heating of the mixture. The mixture is then placed in a water bath and heated for 30 minutes at 70 ° C. After cooling to 0 ° C, 1,5-dibromopentane dissolved in acetone is added to the mixture. The mixture is stirred and allowed to reflux for 16 hours. Then the mixture is cooled and the precipitate is filtered off. The solution is concentrated and unreacted 1,5-dibromopentane and DMF are distilled off in vacuo. The resulting product is highly pure N-5-bromopentane phthalimide as a brown oil.

W drugim etapie mieszaninę reakcyjną N-5-bromopentano-ftalimidu, benzenu, wodnego roztworu NaSCH3 i Bu4N⁺Br^- miesza się w temperaturze wrzenia przez 10 godzin. Potem mieszaninę schładza się i pozostawia do rozdzielenia warstw na benzenową i wodną. Warstwę benzenową i chloroforPL 209 623 B1 mową łączy się, przemywa wodą, suszy bezwodnym MgSO4, przesącza i odparowuje na wyparce.In the second step, the reaction mixture of N-5-bromopentane-phthalimide, benzene, NaSCH3 aqueous solution and Bu4N ⁺ Br ^- is stirred at reflux for 10 hours. The mixture was then cooled and allowed to separate the benzene and the aqueous layers. The benzene layer and the chloroform layer are combined, washed with water, dried with anhydrous MgSO4, filtered and evaporated on an evaporator.

W rezultacie otrzymuje się siarczek w postaci brązowego oleju.As a result, a brown oil sulfide is obtained.

W trzecim etapie mieszaninę siarczku i lodowatego kwasu octowego miesza się i schładza do temperatury 10°C. Następnie powoli wkrapla się H2O2 tak, by temperatura nie przekroczyła 40°C. Potem mieszaninę reakcyjną miesza się przez jedną godzinę i odparowuje się cały rozpuszczalnik. W rezultacie otrzymuje się sulfotlenek w postaci krystalicznej.In the third step, the mixture of sulfide and glacial acetic acid is mixed and cooled to 10 ° C. H 2 O 2 is then slowly added dropwise so that the temperature does not exceed 40 ° C. The reaction mixture was then stirred for one hour and all the solvent was evaporated. As a result, a crystalline sulfoxide is obtained.

W czwartym etapie mieszanin ę reakcyjną sulfotlenku, bezwodnego etanolu i wodzianu hydrazyny NH2NH2 ^. H2O miesza się przez jedną godzinę i pozostawia w temperaturze wrzenia przez sześć godzin. Następnie dodaje się powoli mieszaninę HCl : H2O i pozostawia w temperaturze wrzenia przez 30 minut. Potem mieszaninę schładza się do temperatury pokojowej i przesącza. Przesącz zatęża się i przemywa kilkakrotnie CHCl3. Warstwę organiczną odrzuca się, a do warstwy wodnej dodaje się NaOH aż do uzyskania odczynu alkalicznego. Następnie warstwę wodną ekstrahuje się chloroforem. Warstwę organiczną suszy się bezwodnym MgSO4, sączy i usuwa CHCl3. W rezultacie otrzymuje się aminę w postaci brązowego oleju.In the fourth step, a reaction mixture of sulfoxide, anhydrous ethanol and hydrazine hydrate NH2NH2 ^. H 2 O is stirred for one hour and allowed to reflux for six hours. Then a mixture of HCl: H 2 O is added slowly and allowed to reflux for 30 minutes. The mixture is then cooled to room temperature and filtered. The filtrate was concentrated and washed several times with CHCl3. The organic layer was discarded and NaOH was added to the aqueous layer until it was alkaline. The aqueous layer is then extracted with a chlorophore. The organic layer was dried with anhydrous MgSO4, filtered and CHCl3 was removed. As a result, the amine is obtained in the form of a brown oil.

W pią tym etapie mieszaninę reakcyjną tiofosgenu (CSCl2) i chloroformu miesza się i powoli wkrapla aminę z chloroformem tak, by utrzymać temperaturę w przedziale 0 - 5°C. Następnie do otrzymanej mieszaniny wkrapla się roztwór wodny NaOH tak, by temperatura nie przekroczyła 0 - 5°C. Potem całość miesza się w temperaturze 0°C przez 30 minut. Warstwę organiczną oddziela się, a warstwę wodną ekstrahuje kilkakrotnie CHCl3. Warstwę chloroformową przemywa się H2O, potem suszy bezwodnym MgSO4, następnie przesącza się i odparowuje rozpuszczalnik. Surowy produkt poddaje się oczyszczaniu za pomocą chromatografii kolumnowej w układzie octan etylu, a potem w mieszaninie alkoholu metylowego w chloroformie. Otrzymany produkt destyluje się pod ciś nieniem co najmniej 0,15 mm Hg. W rezultacie otrzymuje się izotiocyjanian 5-(metylo-sulfinylo)-amylu w postaci jasnożółtego oleju.In the fifth step, the reaction mixture of thiophosgene (CSCl2) and chloroform is stirred and the amine is slowly added dropwise with chloroform so as to maintain the temperature at 0-5 ° C. Then, an aqueous solution of NaOH is added dropwise to the mixture obtained so that the temperature does not exceed 0-5 ° C. Then it was stirred at 0 ° C for 30 minutes. The organic layer is separated and the aqueous layer is extracted several times with CHCl3. The chloroform layer is washed with H 2 O then dried with anhydrous MgSO 4, then filtered and the solvent is evaporated. The crude product is purified by column chromatography in an ethyl acetate system and then in a mixture of methyl alcohol in chloroform. The product obtained is distilled at a pressure of at least 0.15 mm Hg. As a result, 5- (methylsulfinyl) amyl isothiocyanate is obtained as a light yellow oil.

Analogi sulforafanu według wynalazku są induktorami enzymów fazy 2, do których należą między innymi transferaza glutationowa, reduktaza chinonowa NAD(P)H(QR), hydrolaza epoksydowa i są substancjami, które odgrywają ważną rolę w detoksykacji elektrofilowej, a ich wysoki poziom chroni komórki i tkanki przed atakiem reaktywnych form tlenu, karcynogenezą i mutagenami.The sulforaphane analogs of the invention are phase 2 enzyme inducers, which include, but are not limited to, glutathione transferase, quinone NAD (P) H (QR) reductase, epoxide hydrolase and are substances that play an important role in electrophilic detoxification, and their high levels protect cells and tissues against attack by reactive oxygen species, carcinogenesis and mutagens.

Zakresem wynalazku objęty jest również środek farmaceutyczny zawierający substancję czynną i substancje pomocnicze, którego cechą jest to, ze jako substancję czynną zawiera zwi ą zek o ogólnym wzorze 1, w którym R i n mają wyżej podane znaczenie.Also within the scope of the invention is a pharmaceutical composition containing the active ingredient and excipients, the feature of which is that it contains as active ingredient a compound of the general formula I, in which R and n are as defined above.

Środek farmaceutyczny według wynalazku ma postać kapsułek. Jest dobrze rozpuszczalny w wodzie i moż na go podawać bez takich efektów jak tworzenie się heterofazy, wytrącania, czy niekompatybilności. pH związku jest zgodne z pH krwi. Wielkości, jakie można podawać, zostały określone na podstawie badań in vitro. Podane w ilości 5 μΜ - 50 μΜ / dobę wykazują działanie cytostatyczne, zaś w ilości 0,5 μM - 50 μM / dobę działanie chemoprewentywne. Związki według wynalazku jako induktory zwiększają szybkość przemiany szkodliwych ksenobiotyków, a co za tym idzie wydalanie ich z organizmu.The pharmaceutical composition according to the invention is in the form of capsules. It is highly soluble in water and can be administered without effects such as heterophase formation, precipitation, or incompatibility. The pH of the compound is consistent with the pH of the blood. The amounts that can be administered have been determined on the basis of in vitro studies. When administered in the amount of 5 μΜ - 50 μΜ / day, they show a cytostatic effect, and in the amount of 0.5 μM - 50 μM / day, they are chemopreventive. The compounds according to the invention as inducers increase the rate of conversion of harmful xenobiotics, and thus their excretion from the body.

Przykłady otrzymywania oraz charakterystykę nowych związków opisanych wzorami 2 i 3 podano poni ż ej.Preparation examples and characteristics of the new compounds described by formulas 2 and 3 are given below.

P r z y k ł a d 1. Synteza nowego związku izotiocyjanianu 2-okso-amylu opisanego wzorem 2 jest czteroetapowa.Example 1. The synthesis of the new 2-oxo-amyl isothiocyanate compound described by the formula 2 is a four-step synthesis.

Etap 1: W kolbie o pojemności około 3 litrów umieszczono 28 ml alkoholu metylobenzenowego, 30 g suchego K2CO3 i 700 ml chloroformu. Całość mieszano i schłodzono do temperatury 0°C. Następnie dodano 80 ml bromu i mieszano przez 5 godzin w temperaturze 0°C. Przebieg reakcji kontrolowano metodą TLC. Po przereagowaniu alkoholu, do mieszaniny wkroplono nasycony roztwór Na2S2O3, kontrolując by mieszanina nie rozgrzała się powyżej temperatury 10°C. Po zneutralizowaniu bromu przerwano mieszanie i sączono mieszaninę, osad przemyto CHCl3 i odrzucono. Roztwór rozdzielono. Warstwę wodną ekstrahowano chloroformem. Ekstrakty suszono bezwodnym MgSO₄i odparowywano. Produktem był bromoketon w postaci jasnożółtego oleju. Wydajność reakcji 90%. Produkt poddano analizie ¹HNMR i ¹³CNMR. ¹HNMR, 400 MHz (CDCl₃) : δ=3.38 (t, 2H, J=6.8): 2.43 (t, 2H, J=7.6): 2.12 (s, 3H): 1.83 (m, 2H):1.57 (m,2H): 1.41 (m,2H) ¹³CNMR, 100 MHz (CDCl₃) : δ=208.8, 43.4, 33.6, 32.5, 29.9, 27.6-22.8.Step 1: In an approximately 3 liter flask, 28 ml methylbenzene alcohol, 30 g dry K2CO3 and 700 ml chloroform were placed. It was stirred and cooled to 0 ° C. Then 80 ml of bromine was added and stirred for 5 hours at 0 ° C. The course of the reaction was monitored by TLC. After the alcohol had reacted, saturated Na2S2O3 solution was added dropwise to the mixture, ensuring that the mixture did not get warm to above 10 ° C. After neutralization of the bromine, stirring was discontinued and the mixture filtered, the precipitate was washed with CHCl3 and discarded. The solution was separated. The aqueous layer was extracted with chloroform. The extracts were dried with anhydrous MgSO ₄ and evaporated. The product was a bromoketone as a light yellow oil. The reaction yield was 90%. The product was analyzed with ¹ HNMR and ¹³ CNMR. ¹ HNMR, 400 MHz (CDCl ₃ ): δ = 3.38 (t, 2H, J = 6.8): 2.43 (t, 2H, J = 7.6): 2.12 (s, 3H): 1.83 (m, 2H): 1.57 ( m, 2H): 1.41 (m, 2H) ¹³ CNMR, 100 MHz (CDCl ₃ ): δ = 208.8, 43.4, 33.6, 32.5, 29.9, 27.6-22.8.

Etap 2: W kolbie o pojemności 3 dm³ umieszczono roztwór 480 g bromo-ketonu w 2 dm³ acetonu. Następnie dodano 460 g ftalimidu potasu. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 48 godzin. Potem całość schłodzono, odsączono osad, a roztwór odparowano.Step 2: In a three-necked flask provided dm ³ solution of 480 g of bromo-ketone with 2 dm ³ of acetone. Then 460 g of potassium phthalimide was added. The reaction mixture was heated to reflux for 48 hours. It was then cooled, the precipitate was filtered off and the solution was evaporated.

PL 209 623 B1PL 209 623 B1

Po schłodzeniu przemyto eterem. Otrzymano ftalimid w ilości 530 g w postaci krystalizującego brązowego oleju. Wydajność reakcji 85%. Produkt poddano analizie:After cooling, it was washed with ether. Phthalimide was obtained in the amount of 530 g in the form of a crystallizing brown oil. The reaction yield was 85%. The product was analyzed:

¹HNMR, 200 MHz (aceton): δ=7.87 (m, 4H) : 3.66 (t, 2H, J=6.8): 2.47 (t, 2H, J=7.1): 2.10 (s,3H): 1.79-1.53 (m,4H): 1.45-1.26 (m,2H) ¹³CNMR, 50 MHz (CDCl3): δ=168.3, 133.8, 132.0, 123.1, 37.7, 33.9, 28.5, 28.1, 25.8, 15.4 ¹ HNMR, 200 MHz (acetone): δ = 7.87 (m, 4H): 3.66 (t, 2H, J = 6.8): 2.47 (t, 2H, J = 7.1): 2.10 (s, 3H): 1.79-1.53 (m, 4H): 1.45-1.26 (m, 2H) ¹³ CNMR, 50 MHz (CDCl3): δ = 168.3, 133.8, 132.0, 123.1, 37.7, 33.9, 28.5, 28.1, 25.8, 15.4

Etap 3: W kolbie o pojemności 3 dm³ umieszczono 470 g ftalimidu i dodano 1200 ml stężonego HCl. Całość ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 24 godziny. Potem mieszaninę schłodzono, odsączono osad, a roztwór zatężono do objętości 500 ml. Roztwór ekstrahowano czterokrotnie CHCl3. Warstwę organiczną odrzucono, a do warstwy wodnej dodano 50 g węgla aktywnego i ogrzewano do wrzenia. Po schłodzeniu osad odsączono. Klarowny, brązowy roztwór odparowano do sucha. W rezultacie otrzymano 135 g surowego chlorowodorku aminy w postaci osadu bezpostaciowego. Wydajność reakcji 45%. Produkt poddano analizie ¹HNMR. ¹HNMR, 200 MHz (CD3OD): δ=5.03 (s, -NH3⁺): 2.96 (t, 2H, J=6.8): 2.57 (t, 2H, J=6.7): 2.17 (s, 3H) : 1.85-1.53 (m,4H) : 1.50-1.35 (m,2H).Step 3: In a flask provided 3 dm ³ 470 g of phthalimide and 1200 ml of concentrated HCl. It was heated to reflux for 24 hours. The mixture was then cooled, the precipitate was filtered off and the solution was concentrated to a volume of 500 ml. The solution was extracted four times with CHCl3. The organic layer was discarded and 50 g of activated carbon was added to the aqueous layer and heated to reflux. After cooling, the precipitate was filtered off. The clear brown solution was evaporated to dryness. As a result, 135 g of crude amine hydrochloride were obtained in the form of an amorphous solid. The reaction yield was 45%. The product was analyzed with ¹ HNMR. ¹ HNMR, 200 MHz (CD3OD): δ = 5.03 (s, -NH3 ⁺ ): 2.96 (t, 2H, J = 6.8): 2.57 (t, 2H, J = 6.7): 2.17 (s, 3H): 1.85 -1.53 (m, 4H): 1.50-1.35 (m, 2H).

Etap 4: W kolbie o pojemności 2 dm³ umieszczono 135 g chlorowodorku aminy w 500 ml wody i 600 ml CH2Cl2. Ca ł o ść schł odzono do temperatury 0°C, po czym dodano 70 ml tiofosgenu. Mieszają c intensywnie wkraplano roztwór 115 g NaOH w 300 ml wody utrzymując temperaturę reakcji w zakresie 0 - 5°C. Po wkropleniu kontynuowano mieszanie przez 20 minut. Następnie całość sączono, a otrzymany roztwór wlano do rozdzielacza i oddzielono CH2Cl2. Warstwę wodną ekstrahowano trzykrotnie CH2Cl2. Ekstrakty suszono, odparowano i poddano rozdziałowi na chromatografii kolumnowej w układzie heksan : octan etylu 8 : 2 —> 1 : 1. Otrzymany produkt poddano destylacji w temperaturze 130°C / 0,1 mm Hg. Otrzymano 58 g izotiocyjanianu 2-oksomaylu w postaci jasnoż ó ł tego osadu. Wydajność reakcji 80%. Wykonano analizę ¹HNMR, ¹³CNMR, IR(CHCl3) oraz analizę elementarną. Analiza ¹HNMR, 200 MHz (CDCl3): δ=3.43 (t,H, J=6.5): 2.37 (t, 2H, J=7.0): 2.04 (s, 3H): 1.69-1.42 (m,4H): 1.40-1.25 (m,2H) Analiza ¹³CNMR, 50 MHz (CDCl3) : δ=208.1, 44.6, 42.9, 29.7, 29.5, 25.8, 22.5Step 4: In a flask of 2-liter ³ provided 135 g of the amine hydrochloride in 500 ml of water and 600 ml CH2Cl2. It was cooled to 0 ° C, then 70 ml of thiophosgene was added. While stirring vigorously, a solution of 115 g of NaOH in 300 ml of water was added dropwise keeping the reaction temperature at 0-5 ° C. After the dropwise addition, stirring was continued for 20 minutes. It was then filtered, and the resulting solution was poured into a separating funnel and CH2Cl2 was separated. The aqueous layer was extracted three times with CH2Cl2. The extracts were dried, evaporated and subjected to column chromatography separation in hexane: ethyl acetate 8: 2 → 1: 1. The obtained product was distilled at 130 ° C / 0.1 mm Hg. 58 g of 2-oxomayl isothiocyanate are obtained in the form of a light yellow solid. The reaction yield was 80%. ¹ HNMR, ¹³ CNMR, IR (CHCl3) analysis and elemental analysis were performed. Analysis of ¹ HNMR, 200 MHz (CDCl3): δ = 3.43 (t, H, J = 6.5): 2.37 (t, 2H, J = 7.0): 2.04 (s, 3H): 1.69-1.42 (m, 4H): 1.40-1.25 (m, 2H) ¹³ CNMR analysis, 50 MHz (CDCl3): δ = 208.1, 44.6, 42.9, 29.7, 29.5, 25.8, 22.5

Analiza IR (CHCl3): 2947(m): 2191 (s): 2108(s): 1713(s)cm^-1 IR analysis (CHCl3): 2947 (m): 2191 (s): 2108 (s): 1713 (s) cm ^-1

Analiza elementarna:Elemental analysis:

obliczono: C-56.14; H-7.60; N-8.18; S-18.71 zmierzono: C-56.19; H-7.54; N-8.15; S-18.56calcd: C-56.14; H-7.60; N-8.18; S-18.71 measured: C-56.19; H-7.54; N-8.15; S-18.56

P r z y k ł a d 2. Synteza nowego zwią zku izotiocyjanianu 5-(metylo-sulfonylo)-amylu opisanego wzorem 3 jest pięcioetapowa.Example 3 2. The synthesis of the new 5- (methylsulfonyl) amyl isothiocyanate compound described by the formula 3 is a five-step synthesis.

Etap 1: W kolbie o pojemności 3 l umieszczono 57 g odmytego heksanem NaH (60%) i 800 ml dwumetyloformamidu (DMF). Mieszając powoli dodawano 190 g ftalimidu. Mieszanina silnie się rozgrzewała i wydzielał się wodór. Po dodaniu całej ilości ftalimidu kolbę umieszczono na łaźni wodnej i ogrzewano przez 30 minut w temperaturze 70°C. Następnie mieszaninę schłodzono do temperatury 0°C i dodano 350 ml 1,5-dibromopentanu w 800 ml acetonu. Całość mieszano i pozostawiono w temperaturze wrzenia przez 16 godzin. Następnie mieszaninę schłodzono i odsączono osad. Roztwór zatężono na wyparce i oddestylowano na pompie olejowej nieprzereagowany 1,5-dibromopentan i (DMF). Produktem był brązowy olej w ilości 288 g N-5-bromopentano-ftalimidu. Wydajność reakcji: 75%.Step 1: 57 g of hexane-washed NaH (60%) and 800 ml of dimethylformamide (DMF) were placed in a 3 L flask. 190 g of phthalimide was slowly added while stirring. The mixture became very hot and hydrogen was evolved. After all the phthalimide had been added, the flask was placed in a water bath and heated for 30 minutes at 70 ° C. The mixture was then cooled to 0 ° C and 350 ml of 1,5-dibromopentane in 800 ml of acetone were added. The mixture was stirred and allowed to reflux for 16 hours. The mixture was then cooled and the precipitate was filtered off. The solution was concentrated on an evaporator and unreacted 1,5-dibromopentane and (DMF) was distilled on an oil pump. The product was a brown oil with 288 g of N-5-bromopentane-phthalimide. Reaction yield: 75%.

Etap 2: W kolbie o pojemności 1,5 l umieszczono 288 g N-5-bromopentanoftalimidu, 300 ml benzenu, 360 ml wodnego roztworu NaSCH3 (21%) oraz 2 g Bu4N⁺Br^-. Całość mieszano w temperaturze wrzenia przez 10 godzin. Następnie mieszaninę schłodzono i pozostawiono do rozdzielenia się na warstwy. Warstwy benzenową oraz chloroformową złączono, przemyto wodą, suszono bezwodnym MgSO4, następnie przesączono i odparowano na wyparce. Otrzymano siarczek w postaci brązowego oleju w ilości 170 g. Wydajność reakcji 65%.Stage 2: 288 g of N-5-bromopentane phthalimide, 300 ml of benzene, 360 ml of aqueous NaSCH3 (21%) and 2 g of Bu4N ⁺ Br ^{- were} placed in a 1.5 L flask. The mixture was stirred under reflux for 10 hours. The mixture was then cooled and allowed to separate into its layers. The benzene and chloroform layers were combined, washed with water, dried with anhydrous MgSO4, then filtered and evaporated. A brown oil sulfide of 170 g was obtained. Yield 65%.

Etap 3: W kolbie o pojemności 500 ml umieszczono 166 g siarczku i 300 ml lodowatego kwasu octowego. Całość mieszano i schłodzono do temperatury 10°C. Następnie powoli wkroplono 70,8 ml H2O2 (30%) tak, aby temperatura nie wzrosła powyżej 40°C. Potem mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, następnie odparowano cały rozpuszczalnik. Otrzymano 158 g sulfotlenku w postaci osadu. Wydajność reakcji 90%.Step 3: 166 g of sulphide and 300 ml of glacial acetic acid were placed in a 500 ml flask. It was stirred and cooled to 10 ° C. Then 70.8 ml of H 2 O 2 (30%) was slowly added dropwise so that the temperature did not rise above 40 ° C. The reaction mixture was then stirred for 1 hour then all the solvent was evaporated. 158 g of sulfoxide are obtained in the form of a solid. The reaction yield was 90%.

Etap 4: W kolbie o pojemności 2 l umieszczono 158 g sulfotlenku w 110 ml bezwodnego etanolu oraz 31 ml wodzianu hydrazyny (100%). Całość mieszano i utrzymywano w temperaturze wrzenia przez 6 godzin. Następnie do mieszaniny dodano powoli HCl rozcieńczony wodą (124 stęż. HCl : 200 ml H2O) i utrzymywano w temperaturze wrzenia przez 30 minut. Potem mieszaninę schładzano do temperatury pokojowej i przesączono. Przesącz zatężono do objętości 150 ml i przemyto go trzykrotnie CHCl3. Warstwę organiczną odrzucono, a do warstwy wodnej dodano 10 M NaOH aż do uzyskania zasadowego odczynu. Następnie warstwę wodną ekstrahowano ośmiokrotnie CHCl3. WarstwęStep 4: Place 158 g of sulfoxide in 110 ml of absolute ethanol and 31 ml of hydrazine hydrate (100%) in a 2 L flask. The mixture was stirred and refluxed for 6 hours. HCl diluted with water (124 conc HCl: 200 ml H 2 O) was then added slowly to the mixture and kept at reflux for 30 minutes. The mixture was then cooled to room temperature and filtered. The filtrate was concentrated to a volume of 150 mL and washed three times with CHCl3. The organic layer was discarded and 10 M NaOH was added to the aqueous layer until the pH was basic. The aqueous layer was then extracted eight times with CHCl3. Layer

PL 209 623 B1 organiczną suszono bezwodnym MgSO4, przesączono i odparowano. W rezultacie otrzymano 54 g aminy w postaci brązowego oleju. Wydajność reakcji 65%.The organic was dried with anhydrous MgSO4, filtered and evaporated. As a result, 54 g of the amine was obtained as a brown oil. The reaction yield was 65%.

Etap 5: W kolbie o pojemności 1 l umieszczono 31 ml tiofosgenu w 200 ml CHCl3, całość mieszano i schłodzono do temperatury 0°C. Następnie wkroplono 54 g aminy w 200 ml CHCl3 tak, aby temperatura utrzymywała się w zakresie 0 - 5°C. Potem do mieszaniny wkroplono 29 g NaOH w 200 ml H2O tak, aby temperatura utrzymywała się w przedziale 0 - 5°C. Całość mieszano przez 30 minut w temperaturze 0°C. Nastę pnie warstwę organiczn ą oddzielono, a warstwę wodną ekstrahowano trzykrotnie CHCl3. Połączone warstwy przemyto wodą i suszono bezwodnym MgSO4, potem przesączono i odparowano rozpuszczalnik. Surowy produkt poddano oczyszczeniu za pomocą chromatografii kolumnowej w układzie octan etylu, a następnie 2% MeOH w CHCl3. Wydzielony brązowy produkt przedestylowano pod ciśnieniem 0,15 mm Hg. W rezultacie otrzymano 24 g izotiocyjanianu 5-(metylo-sulfinylo)-amylu w postaci jasnożółtego oleju. Wydajność reakcji 35%.Step 5: In a 1 L flask, 31 ml of thiophosgene in 200 ml of CHCl 3 were placed, stirred and cooled to 0 ° C. Then 54 g of the amine in 200 ml of CHCl3 was added dropwise such that the temperature was kept in the range of 0-5 ° C. Then 29 g of NaOH in 200 ml of H 2 O was added dropwise to the mixture so that the temperature was kept in the range of 0-5 ° C. The mixture was stirred for 30 minutes at 0 ° C. The organic layer was then separated and the aqueous layer was extracted three times with CHCl3. The combined layers were washed with water and dried over anhydrous MgSO4, then filtered and the solvent was evaporated. The crude product was purified by column chromatography with ethyl acetate followed by 2% MeOH in CHCl3. The separated brown product was distilled at 0.15 mm Hg. As a result, 24 g of 5- (methylsulfinyl) amyl isothiocyanate were obtained as a light yellow oil. The reaction yield was 35%.

Produkt końcowy poddano analizie ¹HNMR, ¹³CNMR i IR.The final product was analyzed with ¹ HNMR, ¹³ CNMR and IR.

¹HNMR, 200 MHz (CDCl3): δ=3.55 (t,2H, J=6.4): 2.76-2.64 (m,2H): 2.57 (s,3H): 1.92-1.54 (m,6H) ¹³CNMR, 50 MHz (CDCl3): δ=5.41, 44.6, 38.6, 29.5, 25.7, 21.8 ¹ HNMR, 200 MHz (CDCl3): δ = 3.55 (t, 2H, J = 6.4): 2.76-2.64 (m, 2H): 2.57 (s, 3H): 1.92-1.54 (m, 6H) ¹³ CNMR, 50 MHz (CDCl3): δ = 5.41, 44.6, 38.6, 29.5, 25.7, 21.8

IR (film): 343 (m): 2940 (m): 2110 (s) cm^-1.IR (movie): 343 (m): 2940 (m): 2110 (s) cm ^-1 .

Claims

1. New compounds, sulforaphane analogs of general formula I, in which R is carbon or sulfur and n is 5.

2. A compound according to claim 1, represented by structure 2, when in general formula 1 R is carbon and n is 5.

3. The compound according to p. 1, represented by structure 3, when in general formula 1 R is sulfur and n is 5.

4. A pharmaceutical composition containing the active ingredient and excipients, characterized in that the active ingredient is a compound of the general formula I in which R is carbon or sulfur and n is 5.