PL214427B1 - Production method of immobilized fructozylotransferaze - Google Patents
Production method of immobilized fructozylotransferazeInfo
- Publication number
- PL214427B1 PL214427B1 PL384639A PL38463908A PL214427B1 PL 214427 B1 PL214427 B1 PL 214427B1 PL 384639 A PL384639 A PL 384639A PL 38463908 A PL38463908 A PL 38463908A PL 214427 B1 PL214427 B1 PL 214427B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mycelium
- culture
- liquid
- sucrose
- medium
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 41
- 108010042889 Inulosucrase Proteins 0.000 claims description 40
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 24
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 19
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 18
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 11
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 9
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 8
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical class OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 5
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 5
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 2
- CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 2,2-Bis(bromomethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CBr)CBr CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 description 1
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 description 1
- 241000228251 Aspergillus phoenicis Species 0.000 description 1
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000058445 Celina Species 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Rzeczypospolitej Polskiej (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 214427 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 384639 (51) Int.Cl. Rzeczpospolitej Polskiej (12) PATENT DESCRIPTION (19) PL (11) 214427 (13) B1 (21) Application number: 384639 (51) Int.Cl.
C12N 9/10 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C07K 14/38 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 10.03.2008 C12R 1/685 (2006.01) (54)C12N 9/10 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C07K 14/38 (2006.01) (22) Date of notification: 10.03.2008 C12R 1/685 (2006.01) (54)
Sposób wytwarzania fruktozylotransferazyMethod for the production of fructosyltransferase
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w formie wolnej lub związanej z grzybnią.The present invention relates to a process for the production of free or mycelial bound fructosyltransferase.
Fruktozylotransferaza (FT) jest enzymem stosowanym do otrzymywania z sacharozy prebiotycznych fruktooligosacharydów (FOS). Do zalet prebiotycznych oligosacharydów należą: słodycz i kaloryczność niższa niż sacharozy; odporność na działanie enzymów wytwarzanych przez bakterie bytujące w jamie ustnej, dzięki czemu nie sprzyjają tworzeniu się próchnicy; odporność na działanie enzymów trawiennych przewodu pokarmowego, dzięki czemu docierają w stanie nienaruszonym do okrężnicy, w której są wybiórczo metabolizowane przez przyjazne dla gospodarza bakterie z rodzajów Lactobacillus i Bifidobacterium. Produktami ich metabolizmu są krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe, które zakwaszając środowisko ograniczają rozwój bakterii patogennych. Niektóre z wymienionych korzystnych bakterii wytwarzają bakteriocyny, również spowalniające wzrost bakterii chorobotwórczych. Wiele bakterii z rodzaju Bifidobacterium syntetyzuje witaminy z grupy B.Fructosyltransferase (FT) is an enzyme used to obtain prebiotic fructooligosaccharides (FOS) from sucrose. The advantages of prebiotic oligosaccharides include: sweetness and lower calories than sucrose; resistance to the action of enzymes produced by bacteria living in the oral cavity, thanks to which they are not conducive to the formation of caries; resistance to digestive enzymes of the digestive tract, thanks to which they reach the colon intact, where they are selectively metabolized by host-friendly bacteria from the genera Lactobacillus and Bifidobacterium. The products of their metabolism are short-chain fatty acids, which by acidifying the environment limit the growth of pathogenic bacteria. Some of the beneficial bacteria listed produce bacteriocins, which also slow the growth of pathogenic bacteria. Many bacteria of the genus Bifidobacterium synthesize B vitamins.
FOS są coraz częściej stosowane w przemyśle spożywczym jako prozdrowotny dodatek do żywności. Dodawane są, między innymi, do mleka i jego przetworów, napojów, pieczywa, szerokiego asortymentu produktów cukierniczych.FOS are increasingly used in the food industry as a health-promoting food additive. They are added, among others, to milk and its products, beverages, bread, a wide range of confectionery products.
Fruktozylotransferaza jest wytwarzana przez wiele roślin, ale opłacalne dla celów przemysłowych ilości enzymu są otrzymywane w drodze hodowli szczepów grzybów strzępkowych, przy czym szczepy grzybów stosowane do wytwarzania fruktozylotransferazy musi cechować niska aktywność towarzyszącej β-fruktofuranozydazy (inwertazy).Fructosyltransferase is produced by many plants, but commercially viable amounts of enzyme are obtained by culturing strains of filamentous fungi, and the fungal strains used to produce fructosyltransferase must have low β-fructofuranosidase (invertase) activity.
Znane są, między innymi, sposoby wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepów Aspergillus niger ATTC 2061, Aspergillus niger ANlOa, Aspergillus niger I, Aspergillus niger II,There are known, inter alia, methods of producing fructosyltransferase by culturing the strains Aspergillus niger ATTC 2061, Aspergillus niger AN10a, Aspergillus niger I, Aspergillus niger II,
Aspergillus japonicus, Aspergillus foetidus, Aspergillus phoenicis, Aureobasidium pullulans, Fusarium oxysporum, na podłożach hodowlanych zawierających sacharozę. Sposoby te są opisane w czasopismach: Agricultural and Biological Chemistry, 52, 1181-1187 (1988), Biotechnology Letters, 18(2) 211-212 (1996), Enzyme and Microbial Technology, 16, 334-339 (1994), Biotechnology Letters 17, 295-298 (1995), Applied Microbiology and Biotechnology 35, 216-221 (1991), Methods in Biotechnology, vol.10, Biotechnology Letters, 16, 1139-1144(1994).Aspergillus japonicus, Aspergillus foetidus, Aspergillus phoenicis, Aureobasidium pullulans, Fusarium oxysporum, on sucrose-containing culture media. These methods are described in the journals: Agricultural and Biological Chemistry, 52, 1181-1187 (1988), Biotechnology Letters, 18 (2) 211-212 (1996), Enzyme and Microbial Technology, 16, 334-339 (1994), Biotechnology Letters 17, 295-298 (1995), Applied Microbiology and Biotechnology 35, 216-221 (1991), Methods in Biotechnology, vol. 10, Biotechnology Letters, 16, 1139-1144 (1994).
Znany jest także, z opisu patentowego PL 195342, sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0434 ŁOCK, polegający na przeniesieniu szczepu grzyba przechowywanego na 5 Blg brzeczce zestalonej agarem, na skosy agarowe zawierające sacharozę, sole mineralne i ekstrakt drożdżowy i inkubacji w temperaturze 29-31°C w ciągu 7 dni, przechowywaniu szczepu w temperaturze 4°C w ciągu 7-14 dni, przygotowaniu z 7-14 dniowych skosów zawiesiny zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005-0,01% objętościowych monolaurynianu polioksyetylenosorbitanu, którą zaszczepia się płynne podłoże posiewowe zawierają55 ce 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowego, stosując 105- 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzi hodowlę wstrząsaną w temperaturze 29-31°C w czasie 24-30 godzin przy amplitudzie drgań 150-175 minut-1, po czym zawiesiną grzybni z hodowli posiewowej zaszczepia się płynne, wysterylizowane podłoże produkcyjne, zawierające sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne, o wyjściowym pH 6,5 - 7,0 stosując 5-10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną wstrząsaną w temperaturze 29-31°C w czasieThere is also known, from the patent description PL 195342, a method of producing fructosyltransferase by culturing a filamentous fungus strain Aspergillus niger 0434 ŁOCK, which consists in transferring the fungus strain stored on 5 Blg agar-solidified wort, onto agar slants containing sucrose, mineral salts and yeast extract and incubation at the temperature of 29-31 ° C for 7 days, the strain was stored at 4 ° C for 7-14 days, preparation of a spore suspension in saline from 7-14 days of slants with the addition of 0.005-0.01% by volume of polyoxyethylene sorbitan monolaurate, which is inoculated with a liquid seed medium containing 1% by weight of sucrose and 0.2% by weight of yeast extract, using 10 5 - 5 x 10 5 spores per 1 ml of medium, and a shake culture is carried out at 29-31 ° C for 24-30 hours with a vibration amplitude of 150-175 minutes -1 , after which the mycelium suspension from the seed culture is inoculated into a liquid, sterilized production medium , containing sucrose, yeast extract and mineral salts, with a starting pH of 6.5 - 7.0, using 5-10% by volume of mycelium suspension per 1 part by volume of medium, and conducts the production culture shaken at 29-31 ° C with time
72-120 godzin przy amplitudzie drgań 150-175 minut-1.72-120 hours with a vibration amplitude of 150-175 minutes -1 .
Z opisu PL 195342 jest także znany sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0431 ŁOCK, który uaktywnia się i przechowuje jak opisano wyżej, po czym sporządza zawiesinę grzybni w soli fizjologicznej z dodatkiem monolaurynianu polioksyetylenosorbitanu, którą zaszczepia się płynne podłoże produkcyjne o składzie i wyjściowym pH jak podano wyżej, stosując 1-2% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w temperaturze i przy amplitudzie drgań jak opisano wyżej w czasie 72-96 godzin.From the description PL 195342 there is also known a method of producing fructosyltransferase by culturing the filamentous fungus strain Aspergillus niger 0431 ŁOCK, which is activated and stored as described above, and then the mycelium is suspended in physiological saline with the addition of polyoxyethylene sorbitan monolaurate, which is inoculated into a liquid production medium with composition and starting pH as above, using 1-2% by volume of mycelial suspension per 1 part by volume of medium and cultivating the production culture at the temperature and vibration amplitude as described above for 72-96 hours.
Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w formie wolnej lub związanej z grzybnią, w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego z rodzaju Aspergillus, polegający na uaktywnieniu szczepu grzyba przechowywanego w temperaturze 4°C na 5 Blg brzeczce zestalonej agarem, przechowywaniu uaktywnionego szczepu w temperaturze 4°C w czasie 6-14 dni, sporządzeniu z niego zawiesiny zarodników w soli fizjologicznej, zaszczepieniu tą zawiesiną płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowego stosującA method of producing free or mycelial-bound fructosyltransferase by culturing a filamentous fungus strain of the genus Aspergillus, which consists in activating a fungal strain stored at 4 ° C per 5 Blg agar solidified broth, storing the activated strain at 4 ° C for 6 -14 days, preparing a spore suspension in physiological saline, inoculating with this suspension a liquid, sterilized seed medium containing 1% by weight of sucrose and 0.2% by weight of yeast extract using
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
105 - 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzeniu hodowli wstrząsanej w temperaturze 29-31°C, następnie zaszczepieniu zawiesiną grzybni z hodowli posiewowej płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego zawierającego sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne, o wyjściowym pH 6,5 - 7,0 stosując 5-10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wstrząsanej w temperaturze 29-31°C i w końcu oddzieleniu grzybni od cieczy hodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0430 ŁOCK, który uaktywnia się przez przeniesienie na świeży skos z zestaloną brzeczką lub na skos agarowy zawierający sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne i inkubację w temperaturze 29-31°C w czasie 6-7 dni, podłoże posiewowe szczepi się zawiesiną zarodników z uaktywnionego szczepu w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005-0,01% objętościowych monooleinianu polioksyetylenosorbitanu i hodowlę na podłożu posiewowym prowadzi się w czasie 24-36 go-1 dzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu produkcyjnym o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05-0,2% MgSO4 x 7 H2O, 0,5% K2HPO4, 1-2% NaNO3 i woda do 100% w czasie 24-120 godzin -1 przy amplitudzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, po czym grzybnię oddziela się od cieczy hodowlanej zawierającej uwolnioną do niej fruktozylotransferazę w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami ze skosów na brzeczce względnie grzybnię zawierającą związaną z nią fruktozylotransferazę oddziela się od cieczy hodowlanej w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami z zestalonego agarem podłoża z sacharozą, ekstraktem drożdżowym i solami mineralnymi.10 5 - 5 x 10 5 spores per 1 ml of medium and conducting shaking culture at 29-31 ° C, then inoculating with a suspension of mycelium from the seed culture in a liquid, sterilized production medium containing sucrose, yeast extract and mineral salts, with an initial pH of 6, 5 - 7.0 by using 5-10% by volume of the mycelium suspension per 1 part by volume of the medium and running the shaken production culture at 29-31 ° C and finally separating the mycelium from the culture liquid, according to the invention it is characterized by the use of a filamentous fungus strain Aspergillus niger 0430 ŁOCK, which is activated by transfer to a fresh slant with a solidified wort or to an agar slope containing sucrose, yeast extract and mineral salts and incubation at 29-31 ° C for 6-7 days, the seed medium is inoculated with a spore suspension from the activated strain in saline with the addition of 0.005-0.01% by volume polyoxyethylene sorbitan monooleate and the culture on the seed medium is carried out for 24-36 hours-1 day with the vibration amplitude of the shaker 150-220 minutes -1 , while the production culture is carried out on the production medium with the composition in percent by weight: 20% of sucrose, 2% of yeast extract, 0 , 05-0.2% MgSO4 x 7 H2O, 0.5% K2HPO4, 1-2% NaNO3 and water up to 100% in 24-120 hours -1 with a vibration amplitude of the shaker 150-220 minutes -1 , then mycelium is separated from the culture liquid containing the fructosyltransferase released thereto in the case of the production culture grafted with spores from slants on the broth or the mycelium containing the related fructosyltransferase is separated from the culture liquid in the case of the production culture inoculated with spores from agar solidified substrate with sucrose, yeast mineral extract and yeast extract .
W hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami ze skosów na brzeczce 70-90% fruktozylotransferazy jest uwalniane do cieczy fermentacyjnej, natomiast szczepionej zarodnikami z zestalonego agarem podłoża z sacharozą, ekstraktem drożdżowym i solami mineralnymi 53-98% fruktozylotransferazy pozostaje ściśle związane z biomasą grzybni.In the production culture inoculated with spores from the slants on the broth, 70-90% of fructosyltransferase is released into the fermentation liquid, while the spore-inoculated medium with agar solidified sucrose, yeast extract and mineral salts 53-98% of fructosyltransferase remains closely related to the mycelial biomass.
Świeżą lub zliofilizowaną biomasę oraz zatężoną ciecz pohodowlaną używa się, bezpośrednio lub po ich uprzednim unieruchomieniu, jako preparaty enzymatyczne fruktozylotransferazy, do syntezy FOS.Fresh or freeze-dried biomass and concentrated post-culture liquid are used, either directly or after their previous immobilization, as fructosyltransferase enzyme preparations for the synthesis of FOS.
W hodowli według wynalazku, w zależności od sposobu uaktywniania materiału biologicznego, wytwarza się fruktozylotransferazę albo w większości pozakomórkową, albo związaną z biomasą. W hodowli sposobem według wynalazku aktywność fruktozylotransferazy w grzybni osiąga przeciętnie wartość 100-500 J/g mokrej biomasy, a w cieczach - od kilkunastu do 60 J/ml. Aktywność inwertazy (I) w materiale otrzymywanym sposobem według wynalazku wynosi od około 15 do około 50 J/g mokrej biomasy, a w cieczy - od kilku do kilkunastu J/ml. Stosunek aktywności fruktozylotransferazy (FT) do inwertazy (FT/I) waha się od kilku do powyżej 50. Aktywność fruktozylotransferazy (FT) jest definiowana jako ilość μmoli fruktozy przeniesionej z sacharozy w ciągu 1 minuty w ustalonych warunkach reakcji, a inwertazy (I) - jako ilość μmoli fruktozy uwolnionej z sacharozy w tych samych warunkach.In the culture according to the invention, depending on the method of activating the biological material, either largely extracellular or biomass-bound fructosyltransferase is produced. In cultivation using the method according to the invention, the fructosyltransferase activity in the mycelium reaches the average value of 100-500 J / g of wet biomass, and in liquids - from several to 60 J / ml. The activity of invertase (I) in the material obtained by the method according to the invention ranges from about 15 to about 50 J / g of wet biomass, and in the liquid - from a few to several J / ml. The ratio of fructosyltransferase (FT) activity to invertase (FT / I) ranges from a few to more than 50. Fructosyltransferase (FT) activity is defined as the amount of μmoles of fructose transferred from sucrose in 1 minute under the prescribed reaction conditions, and invertase (I) - as the amount of μmoles of fructose released from sucrose under the same conditions.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej poniższe przykłady.The process according to the invention is illustrated by the following examples.
P r z y k ł a d IP r z k ł a d I
Szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0430 ŁOCK, przechowywany w temperaturze 4°C na zestalonej agarem 5 Blg brzeczce, przesiano na świeży skos z zestaloną agarem brzeczką i inkubowano w temperaturze 30°C w czasie 7 dni, po czym z 7-dniowego skosu sporządzono zawiesinę zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005% objętościowych monooleinianu polioksyetylenosorbitanu o nazwie handlowej tween 80. Zawiesiną zarodników zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych eks5 traktu drożdżowego, stosując 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 30°C w czasie 24 godzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 200 minut-1. Otrzymaną w wyniku hodowli zawiesiną grzybni zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05% MgSO4 x 7 H2O, 0,5% K2HPO4, 1% NaNO3 i woda do 100%, o wyjściowym pH 6,5, stosując 10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną na wstrząsarce w temperaturze 30°C w czasie 24-120 godzin przy amplitudzie drgań 200 minut-1, po czym grzybnię oddzielano od cieczy hodowlanej.The filamentous fungus strain Aspergillus niger 0430 ŁOCK, stored at 4 ° C on agar solidified 5 Blg broth, was screened on a fresh slant with solidified agar broth and incubated at 30 ° C for 7 days, after which a 7-day slant was resuspended spores in saline containing 0.005% by volume of polyoxyethylene sorbitan monooleate having the trade name tween 80. the spore suspension was inoculated into 50 ml of liquid, sterilized seed medium containing 1% by weight of sucrose and 0.2% by weight of the former route of 5 yeast, using 5 x 10 5 spores per 1 ml of medium and the shaking culture was carried out at 30 ° C for 24 hours with a vibration amplitude of the shaker of 200 minutes -1 . The mycelial suspension obtained as a result of the cultivation was inoculated with 50 ml of liquid, sterilized production medium with the composition in percent by weight: 20% sucrose, 2% yeast extract, 0.05% MgSO4 x 7 H2O, 0.5% K2HPO4, 1% NaNO3 and water for 100%, with an initial pH of 6.5, using 10% by volume of mycelium suspension per 1 part by volume of medium, and the production culture was carried out on a shaker at 30 ° C for 24-120 hours with a vibration amplitude of 200 minutes -1 , after which the mycelium was separated from the culture liquid.
Ilość grzybni oraz cieczy hodowlanej, aktywność FT i I w grzybni oraz w cieczy, stosunek aktywności FT/I w grzybni i cieczy oraz procentową zawartość FT w grzybni i cieczy po 24, 48, 72, 96 i 120 godzinach hodowli podano w tablicy 1.The amount of mycelium and the culture liquid, the activity of FT and I in the mycelium and in the liquid, the ratio of FT / I activity in the mycelium and the liquid, and the percentage of FT in the mycelium and the liquid after 24, 48, 72, 96 and 120 hours of cultivation are given in Table 1.
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
Tablica 1Table 1
(Λ(Λ
OABOUT
u.at.
c >>c >>
ΐΛ '5?ΐΛ '5?
&&
EE.
HH.
Uu oUu o
-Ó *o o-O * o
c (?5 ctf cc (? 5 ctf c
££
-§ o-§ about
x:x:
o o,oh oh
N oN o
O *Q cO * Q c
oabout
NN
4>4>
ΐβΐβ
NN
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
P r z y k ł a d IIP r z x l a d II
Szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger ŁOCK 0430, przechowywany w temperaturze 4°C na zestalonej agarem 5 Blg brzeczce, przesiano na zestalone agarem podłoże zawierające sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne i inkubowano w temperaturze 30°C w czasie 7 dni, po czym z 7-dniowego skosu sporządzono zawiesinę zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,01% objętościowych tweenu 80. Zawiesiną zarodników zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowe5 go, stosując 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze -1The filamentous fungus strain Aspergillus niger ŁOCK 0430, stored at 4 ° C on agar solidified 5 Blg broth, was sieved onto agar-solidified media containing sucrose, yeast extract and mineral salts and incubated at 30 ° C for 7 days, then 7 -dniowego bevel spores suspended in saline with 0.01% by volume Tween 80. the spore suspension was inoculated into 50 ml of liquid, sterilized seed medium containing 1% by weight of sucrose and 0.2% by weight of yeast extract, 5 of it, using 5 x 10 5 spores per 1 ml of medium and the shake culture was carried out at -1
30°C w czasie 36 godzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 175 minut-1. Otrzymaną w wyniku hodowli zawiesiną grzybni zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05% MgSO4 x 7 H2O,30 ° C during 36 hours with a vibration amplitude of the shaker of 175 minutes -1 . The mycelial suspension obtained as a result of the cultivation was inoculated with 50 ml of liquid, sterilized production medium with the composition in percent by weight: 20% sucrose, 2% yeast extract, 0.05% MgSO4 x 7 H2O,
0,5% K2HPO4, 1% NaNO3 i woda do 100%, o wyjściowym pH 6,7 i prowadzono hodowlę produkcyjną -1 na wstrząsarce w temperaturze 30°C w czasie 48-120 godzin przy amplitudzie drgań 175 minut-1, po czym grzybnię oddzielano od cieczy hodowlanej.0.5% K2HPO4, 1% NaNO3 and water to 100%, with an initial pH of 6.7 and a production culture of -1 was carried out on a shaker at 30 ° C for 48-120 hours with a vibration amplitude of 175 minutes -1 , then the mycelium was separated from the culture liquid.
Ilość grzybni oraz cieczy hodowlanej, aktywność FT i I w grzybni i w cieczy, stosunek aktywności FT/I w grzybni i w cieczy, oraz procentową zawartość FT w grzybni i w cieczy po 48, 72, 96 i 120 godzinach hodowli podano w tablicy 2.The amount of mycelium and culture liquid, FT and I activity in the mycelium and in the liquid, the ratio of FT / I activity in the mycelium and in the liquid, and the percentage of FT in the mycelium and in the liquid after 48, 72, 96 and 120 hours of cultivation are given in Table 2.
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
Tablica 2Table 2
CZ)CZ)
OABOUT
Ph &Ph &
<υ c<υ c
<D c<D c
HH.
ŁłŁł
O iAbout and
od +-*from + - *
CA £CA £
o £about £
oabout
Ό oΌ o
-C-C
-C o-What
od cfrom c
‘n g'N g
oabout
Ofi \o σ>Victim \ o σ>
(N roo o(N roo o
o, ’S x>o, 'S x>
PL 214 427 B1PL 214 427 B1
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (en) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Production method of immobilized fructozylotransferaze |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (en) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Production method of immobilized fructozylotransferaze |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL384639A1 PL384639A1 (en) | 2009-09-14 |
| PL214427B1 true PL214427B1 (en) | 2013-07-31 |
Family
ID=42988904
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (en) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Production method of immobilized fructozylotransferaze |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL214427B1 (en) |
-
2008
- 2008-03-10 PL PL384639A patent/PL214427B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL384639A1 (en) | 2009-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101884394B (en) | Composite microbial feed additive for chicken and preparation method thereof | |
| JP3461856B2 (en) | Natto strain and natto produced using this natto strain | |
| TW588110B (en) | Polypeptide having alpha-isomaltosyl-transferring enzyme activity | |
| KR102558524B1 (en) | Novel Aureobasidium pulluans strain and uses thereof for high-efficiency production of oligosaccharides | |
| JP2010284100A (en) | Method for producing stevia fermentation broth | |
| JP5395811B2 (en) | Method for producing indolylalkyl succinamide compounds | |
| JP4630627B2 (en) | Plant seed germination rate improver | |
| KR20170116988A (en) | Method for producing oligosaccharide-rich schisandra berry, oligosaccharide-rich schisandra berry produced by the same and use thereof | |
| JP6955808B1 (en) | How to make fermented honey | |
| CN103652329A (en) | Compound probiotic biological agent | |
| CN108076968A (en) | A kind of culture medium for golden mushroom | |
| JP6583847B2 (en) | Microorganisms with cellulose and starch degradability | |
| JP7497082B1 (en) | Method for inducing primordia of Matsutake mushrooms, method for producing primordia of Matsutake mushrooms, fungal bed medium, culture solution | |
| KR20120111211A (en) | Method for mass production method of baker's yeast | |
| JP2017209021A (en) | Novel plant lactic acid bacteria | |
| CN1692158A (en) | Use of lactobacillus to produce exopolysaccharides in food and pharmaceutical compositions | |
| KR20060021162A (en) | New antifungal crop growth promoting microorganisms Bacillus amyloliquifaciens MV-3 and microbial soil using the same | |
| JP2016506725A (en) | Probiotic production for use in aquaculture of abalone | |
| WO2022195075A1 (en) | Novel lactic acid bacterial species and its uses | |
| CN106966769A (en) | A kind of method that utilization Moringa branch bar prepares edible bacterium bag | |
| WO1992000663A1 (en) | Covering soil for cultivating mushroom and method of cultivation | |
| JP3436768B2 (en) | Culture and cultivation method of new strain | |
| Rusu et al. | Research on obtaining liquid mycelia from Pleurotus spp. strains and testing their fruiting potential | |
| RU2753359C1 (en) | Method for increasing viability of lactobacilli | |
| CN101415331B (en) | Method for producing filamentous fungal spores and method for preventing and controlling plant diseases |