PL214427B1 - Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy - Google Patents
Sposób wytwarzania fruktozylotransferazyInfo
- Publication number
- PL214427B1 PL214427B1 PL384639A PL38463908A PL214427B1 PL 214427 B1 PL214427 B1 PL 214427B1 PL 384639 A PL384639 A PL 384639A PL 38463908 A PL38463908 A PL 38463908A PL 214427 B1 PL214427 B1 PL 214427B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mycelium
- culture
- liquid
- sucrose
- medium
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 41
- 108010042889 Inulosucrase Proteins 0.000 claims description 40
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 24
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 24
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 19
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 18
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 11
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 9
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 9
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 8
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 3
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical class OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 6
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 5
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 5
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 2
- CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 2,2-Bis(bromomethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CBr)CBr CHUGKEQJSLOLHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 description 1
- 241001480052 Aspergillus japonicus Species 0.000 description 1
- 241000228251 Aspergillus phoenicis Species 0.000 description 1
- 241000223678 Aureobasidium pullulans Species 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000058445 Celina Species 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 235000021391 short chain fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Rzeczypospolitej Polskiej (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 214427 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 384639 (51) Int.Cl.
C12N 9/10 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C07K 14/38 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 10.03.2008 C12R 1/685 (2006.01) (54)
Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy
| (73) Uprawniony z patentu: POLITECHNIKA ŁÓDZKA, Łódź, PL | |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: | (72) Twórca(y) wynalazku: |
| 14.09.2009 BUP 19/09 | CELINA KUBIK, Łódź, PL |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | ANETA ANYSZKA, Karsznice Duże, PL STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL KATARZYNA PIASECKA-CHUDZIK, Łódź, PL BARBARA SIKORA, Łódź, PL |
| 31.07.2013 WUP 07/13 | (74) Pełnomocnik: rzecz. pat. Zbigniew Wojciech Bałczewski |
PL 214 427 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w formie wolnej lub związanej z grzybnią.
Fruktozylotransferaza (FT) jest enzymem stosowanym do otrzymywania z sacharozy prebiotycznych fruktooligosacharydów (FOS). Do zalet prebiotycznych oligosacharydów należą: słodycz i kaloryczność niższa niż sacharozy; odporność na działanie enzymów wytwarzanych przez bakterie bytujące w jamie ustnej, dzięki czemu nie sprzyjają tworzeniu się próchnicy; odporność na działanie enzymów trawiennych przewodu pokarmowego, dzięki czemu docierają w stanie nienaruszonym do okrężnicy, w której są wybiórczo metabolizowane przez przyjazne dla gospodarza bakterie z rodzajów Lactobacillus i Bifidobacterium. Produktami ich metabolizmu są krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe, które zakwaszając środowisko ograniczają rozwój bakterii patogennych. Niektóre z wymienionych korzystnych bakterii wytwarzają bakteriocyny, również spowalniające wzrost bakterii chorobotwórczych. Wiele bakterii z rodzaju Bifidobacterium syntetyzuje witaminy z grupy B.
FOS są coraz częściej stosowane w przemyśle spożywczym jako prozdrowotny dodatek do żywności. Dodawane są, między innymi, do mleka i jego przetworów, napojów, pieczywa, szerokiego asortymentu produktów cukierniczych.
Fruktozylotransferaza jest wytwarzana przez wiele roślin, ale opłacalne dla celów przemysłowych ilości enzymu są otrzymywane w drodze hodowli szczepów grzybów strzępkowych, przy czym szczepy grzybów stosowane do wytwarzania fruktozylotransferazy musi cechować niska aktywność towarzyszącej β-fruktofuranozydazy (inwertazy).
Znane są, między innymi, sposoby wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepów Aspergillus niger ATTC 2061, Aspergillus niger ANlOa, Aspergillus niger I, Aspergillus niger II,
Aspergillus japonicus, Aspergillus foetidus, Aspergillus phoenicis, Aureobasidium pullulans, Fusarium oxysporum, na podłożach hodowlanych zawierających sacharozę. Sposoby te są opisane w czasopismach: Agricultural and Biological Chemistry, 52, 1181-1187 (1988), Biotechnology Letters, 18(2) 211-212 (1996), Enzyme and Microbial Technology, 16, 334-339 (1994), Biotechnology Letters 17, 295-298 (1995), Applied Microbiology and Biotechnology 35, 216-221 (1991), Methods in Biotechnology, vol.10, Biotechnology Letters, 16, 1139-1144(1994).
Znany jest także, z opisu patentowego PL 195342, sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0434 ŁOCK, polegający na przeniesieniu szczepu grzyba przechowywanego na 5 Blg brzeczce zestalonej agarem, na skosy agarowe zawierające sacharozę, sole mineralne i ekstrakt drożdżowy i inkubacji w temperaturze 29-31°C w ciągu 7 dni, przechowywaniu szczepu w temperaturze 4°C w ciągu 7-14 dni, przygotowaniu z 7-14 dniowych skosów zawiesiny zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005-0,01% objętościowych monolaurynianu polioksyetylenosorbitanu, którą zaszczepia się płynne podłoże posiewowe zawierają55 ce 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowego, stosując 105- 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzi hodowlę wstrząsaną w temperaturze 29-31°C w czasie 24-30 godzin przy amplitudzie drgań 150-175 minut-1, po czym zawiesiną grzybni z hodowli posiewowej zaszczepia się płynne, wysterylizowane podłoże produkcyjne, zawierające sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne, o wyjściowym pH 6,5 - 7,0 stosując 5-10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną wstrząsaną w temperaturze 29-31°C w czasie
72-120 godzin przy amplitudzie drgań 150-175 minut-1.
Z opisu PL 195342 jest także znany sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0431 ŁOCK, który uaktywnia się i przechowuje jak opisano wyżej, po czym sporządza zawiesinę grzybni w soli fizjologicznej z dodatkiem monolaurynianu polioksyetylenosorbitanu, którą zaszczepia się płynne podłoże produkcyjne o składzie i wyjściowym pH jak podano wyżej, stosując 1-2% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w temperaturze i przy amplitudzie drgań jak opisano wyżej w czasie 72-96 godzin.
Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy w formie wolnej lub związanej z grzybnią, w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego z rodzaju Aspergillus, polegający na uaktywnieniu szczepu grzyba przechowywanego w temperaturze 4°C na 5 Blg brzeczce zestalonej agarem, przechowywaniu uaktywnionego szczepu w temperaturze 4°C w czasie 6-14 dni, sporządzeniu z niego zawiesiny zarodników w soli fizjologicznej, zaszczepieniu tą zawiesiną płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowego stosując
PL 214 427 B1
105 - 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzeniu hodowli wstrząsanej w temperaturze 29-31°C, następnie zaszczepieniu zawiesiną grzybni z hodowli posiewowej płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego zawierającego sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne, o wyjściowym pH 6,5 - 7,0 stosując 5-10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wstrząsanej w temperaturze 29-31°C i w końcu oddzieleniu grzybni od cieczy hodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0430 ŁOCK, który uaktywnia się przez przeniesienie na świeży skos z zestaloną brzeczką lub na skos agarowy zawierający sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne i inkubację w temperaturze 29-31°C w czasie 6-7 dni, podłoże posiewowe szczepi się zawiesiną zarodników z uaktywnionego szczepu w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005-0,01% objętościowych monooleinianu polioksyetylenosorbitanu i hodowlę na podłożu posiewowym prowadzi się w czasie 24-36 go-1 dzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu produkcyjnym o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05-0,2% MgSO4 x 7 H2O, 0,5% K2HPO4, 1-2% NaNO3 i woda do 100% w czasie 24-120 godzin -1 przy amplitudzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, po czym grzybnię oddziela się od cieczy hodowlanej zawierającej uwolnioną do niej fruktozylotransferazę w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami ze skosów na brzeczce względnie grzybnię zawierającą związaną z nią fruktozylotransferazę oddziela się od cieczy hodowlanej w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami z zestalonego agarem podłoża z sacharozą, ekstraktem drożdżowym i solami mineralnymi.
W hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami ze skosów na brzeczce 70-90% fruktozylotransferazy jest uwalniane do cieczy fermentacyjnej, natomiast szczepionej zarodnikami z zestalonego agarem podłoża z sacharozą, ekstraktem drożdżowym i solami mineralnymi 53-98% fruktozylotransferazy pozostaje ściśle związane z biomasą grzybni.
Świeżą lub zliofilizowaną biomasę oraz zatężoną ciecz pohodowlaną używa się, bezpośrednio lub po ich uprzednim unieruchomieniu, jako preparaty enzymatyczne fruktozylotransferazy, do syntezy FOS.
W hodowli według wynalazku, w zależności od sposobu uaktywniania materiału biologicznego, wytwarza się fruktozylotransferazę albo w większości pozakomórkową, albo związaną z biomasą. W hodowli sposobem według wynalazku aktywność fruktozylotransferazy w grzybni osiąga przeciętnie wartość 100-500 J/g mokrej biomasy, a w cieczach - od kilkunastu do 60 J/ml. Aktywność inwertazy (I) w materiale otrzymywanym sposobem według wynalazku wynosi od około 15 do około 50 J/g mokrej biomasy, a w cieczy - od kilku do kilkunastu J/ml. Stosunek aktywności fruktozylotransferazy (FT) do inwertazy (FT/I) waha się od kilku do powyżej 50. Aktywność fruktozylotransferazy (FT) jest definiowana jako ilość μmoli fruktozy przeniesionej z sacharozy w ciągu 1 minuty w ustalonych warunkach reakcji, a inwertazy (I) - jako ilość μmoli fruktozy uwolnionej z sacharozy w tych samych warunkach.
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I
Szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0430 ŁOCK, przechowywany w temperaturze 4°C na zestalonej agarem 5 Blg brzeczce, przesiano na świeży skos z zestaloną agarem brzeczką i inkubowano w temperaturze 30°C w czasie 7 dni, po czym z 7-dniowego skosu sporządzono zawiesinę zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005% objętościowych monooleinianu polioksyetylenosorbitanu o nazwie handlowej tween 80. Zawiesiną zarodników zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych eks5 traktu drożdżowego, stosując 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 30°C w czasie 24 godzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 200 minut-1. Otrzymaną w wyniku hodowli zawiesiną grzybni zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05% MgSO4 x 7 H2O, 0,5% K2HPO4, 1% NaNO3 i woda do 100%, o wyjściowym pH 6,5, stosując 10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną na wstrząsarce w temperaturze 30°C w czasie 24-120 godzin przy amplitudzie drgań 200 minut-1, po czym grzybnię oddzielano od cieczy hodowlanej.
Ilość grzybni oraz cieczy hodowlanej, aktywność FT i I w grzybni oraz w cieczy, stosunek aktywności FT/I w grzybni i cieczy oraz procentową zawartość FT w grzybni i cieczy po 24, 48, 72, 96 i 120 godzinach hodowli podano w tablicy 1.
PL 214 427 B1
Tablica 1
| 120 godzin | 00 Ch | 37,5 ml | 35,5 J/g Σ 173,9 J | 0,9 J/g Σ4,4 J | 39,5 | 53,8 J/ml, Σ 2017,5 J | 0,9 J/ml Σ 33,7 J | 59,7 | sO O\ |
| 96 godzin | 00 'sO | 39 ml | 60,8 J/g Σ 218,9 J | OC^ W | ł—1 | 55,8 J/ml, Σ 2176,2 J | 1,1 J/ml Σ 42,9 J | 50,7 | 9,1% 90,9% |
| 72 godziny | 00 r<T | 43 ml | 85,4 J/g Σ 264,7 J | 4,3 J/g Σ13.3 J | ^4 | 58,2 J/ml, Σ 2502,6 J | 2,9 J/ml Σ 124,7 J | 20,1 | 9,5% 90,5% |
| 48 godzin | 00 in c-f | 45 | 186,1 J/g Σ 465,2 J | 4,9 J/g Σ12,2 J | 37,8 | 44,3 J/ml, Σ 1993,5 J | 4,3 J/ml Σ 193,5 J | n o | 19,6% 80,4% |
| 24 godziny | 00 r- o' | 49,5 | 721,0 J/g Σ 504,7 J | 35,4 J/g Σ 24,8 J | 20,9 | 25,2 J/ml, Σ 1247,4 J | 3,5 J/ml Σ 173,0 J | rz, | 29,4% 70,6% |
| Czas trwania hodowli | Bóść grzybni | Bóść cieczy | Aktywność FT w grzybni | Aktywność 1 w grzybni | Stosunek FT/I w grzybni | Aktywność FT w cieczy | Aktywność I w cieczy | Stosunek FT/I w cieczy | Zawartość FT w: grzybni cieczy |
(Λ
O
u.
c >>
ΐΛ '5?
&
E
H
Uu o
-Ó *o o
c (?5 ctf c
£
-§ o
x:
o o,
N o
O *Q c
o
N
4>
ΐβ
N
PL 214 427 B1
P r z y k ł a d II
Szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger ŁOCK 0430, przechowywany w temperaturze 4°C na zestalonej agarem 5 Blg brzeczce, przesiano na zestalone agarem podłoże zawierające sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne i inkubowano w temperaturze 30°C w czasie 7 dni, po czym z 7-dniowego skosu sporządzono zawiesinę zarodników w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,01% objętościowych tweenu 80. Zawiesiną zarodników zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowe5 go, stosując 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze -1
30°C w czasie 36 godzin przy amplitudzie drgań wstrząsarki 175 minut-1. Otrzymaną w wyniku hodowli zawiesiną grzybni zaszczepiono 50 ml płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05% MgSO4 x 7 H2O,
0,5% K2HPO4, 1% NaNO3 i woda do 100%, o wyjściowym pH 6,7 i prowadzono hodowlę produkcyjną -1 na wstrząsarce w temperaturze 30°C w czasie 48-120 godzin przy amplitudzie drgań 175 minut-1, po czym grzybnię oddzielano od cieczy hodowlanej.
Ilość grzybni oraz cieczy hodowlanej, aktywność FT i I w grzybni i w cieczy, stosunek aktywności FT/I w grzybni i w cieczy, oraz procentową zawartość FT w grzybni i w cieczy po 48, 72, 96 i 120 godzinach hodowli podano w tablicy 2.
PL 214 427 B1
Tablica 2
| 120 godziny | 00 r- en | 33 ml | 170,3 J/g Σ 630,0 J | 28.4 J/g Σ 105,0 J | 6,0 | 16,9 J/ml Σ 557,7 J | 9,1 J/ml Σ 300,3 J | W | O <o en |
| 96 godzin | 00 00^ en | 36 ml | 263,0 J/g Σ 999,4 J | 00^ o o o ,_f oo C-l W | STl | 9,75 J/ml Σ351,0Ι | 8,9 J/ml Σ 320,4 J | n | 74,0 26.0 |
| 72 godziny | oo en | 40 ml | 281,0 J/g Σ 1039,7 J | 00^ <o oo O\ | 15,0 | 1-, 00 CO o“ W | 6,0 J/ml Σ 240,0 J | 0,13 | ©O & |
| 48 godzin | § Z‘£ | 44 ml | 00^ ·—» „ ' c-q I—· C\ 'w | Ν» OO LD A | Γ | 0,46 J/ml Σ20.20 J | e°„ ^o© r-ł W | o | © |
| Czas trwania hodowli | ilość grzybni | Ilość cieczy | Aktywność FT w grzybni | Aktywność I w grzybni | 4> C w esS 00 [L, | Aktywność FT w cieczy | Aktywność I w cieczy | Stosunek FT/Iw cieczy | Zawartość FT w: grzybni cieczy |
CZ)
O
Ph &
<υ c
<D c
H
Łł
O i
od +-*
CA £
o £
o
Ό o
-C
-C o
od c
‘n g
o
Ofi \o σ>
(N roo o
o, ’S x>
PL 214 427 B1
Claims (1)
- Zastrzeżenie patentoweSposób wytwarzania fruktozylotransferazy w formie wolnej lub związanej z grzybnią, w drodze hodowli szczepu grzyba strzępkowego z rodzaju Aspergillus, polegający na uaktywnieniu szczepu grzyba, przechowywanego w temperaturze 4°C na 5 Blg brzeczce zestalonej agarem, przechowywaniu uaktywnionego szczepu w temperaturze 4°C w czasie 6-14 dni, sporządzeniu z niego zawiesiny zarodników w soli fizjologicznej, zaszczepieniu tą zawiesiną płynnego, wysterylizowanego podłoża posiewowego zawierającego 1% wagowy sacharozy i 0,2% wagowych ekstraktu drożdżowego stosu55 jąc 105 - 5 x 105 zarodników na 1 ml pożywki i prowadzeniu hodowli wstrząsanej w temperaturze 29-31°C, następnie zaszczepieniu zawiesiną grzybni z hodowli posiewowej płynnego, wysterylizowanego podłoża produkcyjnego zawierającego sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne, o wyjściowym pH 6,5 - 7,0 stosując 5-10% objętościowych zawiesiny grzybni na 1 część objętościową podłoża i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wstrząsanej w temperaturze 29-31°C i w końcu oddzieleniu grzybni od cieczy hodowlanej, znamienny tym, że stosuje się szczep grzyba strzępkowego Aspergillus niger 0430 ŁOCK, który uaktywnia się przez przeniesienie na świeży skos z zestaloną brzeczką lub na skos agarowy zawierający sacharozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne i inkubację w temperaturze 29-31°C w czasie 6-7 dni, podłoże posiewowe szczepi się zawiesiną zarodników z uaktywnionego szczepu w soli fizjologicznej z dodatkiem 0,005-0,01% objętościowych monooleinianu polioksyetylenosorbitanu i hodowlę na podłożu posiewowym prowadzi się w czasie 24-36 godzin przy amplitu-1 dzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, zaś hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu produkcyjnym o składzie w procentach wagowych: 20% sacharozy, 2% ekstraktu drożdżowego, 0,05-0,2%MgSO4 x 7 H2O, 0,5% K2HPO4, 1-2% NaNO3 i woda do 100% w czasie 24-120 godzin przy amplitu-1 dzie drgań wstrząsarki 150-220 minut-1, po czym grzybnię oddziela się od cieczy hodowlanej zawierającej uwolnioną do niej fruktozylotransferazę w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami ze skosów na brzeczce względnie grzybnię zawierającą związaną z nią fruktozylotransferazę oddziela się od cieczy hodowlanej w przypadku hodowli produkcyjnej szczepionej zarodnikami z zestalonego agarem podłoża z sacharozą, ekstraktem drożdżowym i solami mineralnymi.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (pl) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (pl) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL384639A1 PL384639A1 (pl) | 2009-09-14 |
| PL214427B1 true PL214427B1 (pl) | 2013-07-31 |
Family
ID=42988904
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL384639A PL214427B1 (pl) | 2008-03-10 | 2008-03-10 | Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL214427B1 (pl) |
-
2008
- 2008-03-10 PL PL384639A patent/PL214427B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL384639A1 (pl) | 2009-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101884394B (zh) | 一种雏鸡用复合微生物饲料添加剂及其制备方法 | |
| JP3461856B2 (ja) | 納豆菌株と、この納豆菌株を用いて製造した納豆 | |
| TW588110B (en) | Polypeptide having alpha-isomaltosyl-transferring enzyme activity | |
| KR102558524B1 (ko) | 올리고당의 고효율 생산을 위한 신규 아우레오바시디움 플루란스 균주 및 이의 용도 | |
| JP7497082B1 (ja) | マツタケ類の子実体原基の誘導方法、マツタケ類の子実体原基の製造方法、菌床培地、培養液 | |
| JP2010284100A (ja) | ステビア発酵液の製造方法 | |
| JP4630627B2 (ja) | 植物種子発芽率向上剤 | |
| KR20170116988A (ko) | 올리고당 고함유 오미자청의 제조 방법, 이에 의하여 제조된 올리고당 고함유 오미자청 및 이의 용도 | |
| JP6955808B1 (ja) | 蜂蜜発酵物の製造方法 | |
| PL214427B1 (pl) | Sposób wytwarzania fruktozylotransferazy | |
| CN103652329A (zh) | 一种复合有益菌生物制剂 | |
| JPWO2010079763A1 (ja) | インドリルアルキルコハク酸アミド化合物の製造法 | |
| CN108076968A (zh) | 一种金针菇培养基 | |
| JP6583847B2 (ja) | セルロースおよびデンプン分解能を有する微生物 | |
| KR20120111211A (ko) | 제빵용 효모의 대량생산방법 | |
| JP2017209021A (ja) | 新規な植物性乳酸菌 | |
| CN1692158A (zh) | 乳杆菌制备食用组合物和药物组合物中的外多糖的用途 | |
| JP2016506725A (ja) | アワビの水産養殖において用いるためのプロバイオティクスの製造 | |
| KR20060021162A (ko) | 신규한 항진균성 작물생육촉진 미생물 바실러스아밀로리퀴파시엔스 ｍｊ-3 및 이를 이용한 미생물 상토 | |
| WO2022195075A1 (en) | Novel lactic acid bacterial species and its uses | |
| CN106966769A (zh) | 一种利用辣木枝杆制备食用菌包的方法 | |
| WO1992000663A1 (fr) | Terre de couverture pour cultiver des champignons et procede de culture | |
| Rusu et al. | Research on obtaining liquid mycelia from pleurotus spp. strains and testing their fruiting potential | |
| RU2753359C1 (ru) | Способ повышения жизнеспособности лактобактерий | |
| CN120192871A (zh) | 一种益生菌液剂及其应用 |