PL214871B1 - Pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego, zwiazki posrednie oraz sposób wytwarzania pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowego - Google Patents
Pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego, zwiazki posrednie oraz sposób wytwarzania pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowegoInfo
- Publication number
- PL214871B1 PL214871B1 PL375266A PL37526603A PL214871B1 PL 214871 B1 PL214871 B1 PL 214871B1 PL 375266 A PL375266 A PL 375266A PL 37526603 A PL37526603 A PL 37526603A PL 214871 B1 PL214871 B1 PL 214871B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- formula
- polyethylene glycol
- peg
- methoxy
- aldehyde
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/321—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds
- C08G65/324—Polymers modified by chemical after-treatment with inorganic compounds containing oxygen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
- C08G65/2603—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen
- C08G65/2615—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen the other compounds containing carboxylic acid, ester or anhydride groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
- C08G65/2618—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen
- C08G65/2621—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen containing amine groups
- C08G65/2624—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen containing amine groups containing aliphatic amine groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
- C08G65/331—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing oxygen
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Hydrogenated Pyridines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku są pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego, związki pośrednie oraz sposób wytwarzania pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowego.
Glikol polietylenowy („PEG”) jest liniowym lub rozgałęzionym, obojętnym polieterem, dostępnym w postaciach o różnej masie cząsteczkowej. Budowę PEG można przedstawić wzorem HO-(CH2-CH2-O)n-H, gdzie n oznacza liczbę powtórek jednostek tlenku etylenu w PEG.
PEG i pochodne PEG zastosowano do modyfikacji różnych biocząsteczek. Po przyłączeniu do takich cząsteczek, PEG powoduje wzrost ich rozpuszczalności i wzrost ich wielkości, ale wywiera niewielki wpływ na ich pożądane właściwości. Dogodnie biocząsteczki sprzężone z PEG mogą wykazywać zwiększoną retencję i opóźniony metabolizm w organizmie.
Opracowano wiele pochodnych PEG do takich zastosowań. Takie pochodne PEG opisano np. w US 5252714, US 5672662, US 5959265, US 5990237 i US 6340742.
Zastosowano dwa ogólne podejścia do wprowadzania grup funkcyjnych do PEG: (1) zmianę końcowej grupy hydroksylowej, w serii reakcji, w bardziej aktywną grupę funkcyjną i/lub (2) reakcję PEG w kontrolowanych warunkach z dwufunkcyjnym związkiem, tak że jedna z jego grup funkcyjnych reaguje z polimerem PEG, a druga pozostaje aktywna. W większości przypadków przeprowadzić trzeba kilka etapów, aby otrzymać pożądane pochodne PEG. Pożądane pochodne PEG często wytwarza się z małą wydajnością i wymagają one przy wydzielaniu skomplikowanych procesów oczyszczania. Na dodatek pochodne PEG mogą wykazywać niespecyficzne wiązanie z interesującymi biocząsteczkami, co może spowodować przyłączenie wielu cząsteczek PEG do jednej biocząsteczki i/lub przyłączenie PEG w centrum aktywnym. Przyłączenie wielu cząsteczek PEG może spowodować trudności w oczyszczaniu pegylowanej biocząsteczki. Przyłączenie wielu cząsteczek PEG, i/lub pegylowanie w centrum aktywnym może również doprowadzić do zmniejszenia aktywności biocząsteczki.
Z tego względu pożądane byłoby dostarczenie ulepszonych pochodnych PEG, nadających się do sprzęgania z wieloma innymi cząsteczkami, w tym z polipeptydami i innymi biocząsteczkami zawierającymi grupę α-aminową. Pozostaje potrzeba dostarczenia pochodnych PEG, które można wytwarzać z wysoką wydajnością i czystością i które można sprzęgać w celu dostarczenia biocząsteczek o ulepszonej charakterystyce użytkowej.
Te i inne cele wynalazku opisano bardziej szczegółowo poniżej.
Wynalazek zatem dotyczy pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowego o wzorze (I):
Rl-(CH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH<CH2)p-CHO (I) w którym R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub
O 'CH2CH2-0-(cą)m- c-nh-(ch2)p-cho
X oznacza O,
Y jest wybrany z grupy obejmującej
Z oznacza boczny łańcuch aminokwasu, m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
PL 214 871 B1
Korzystne są pochodne, w których R1 oznacza metoksyl. Korzystne są pochodne o wzorze (III):
Korzystne są pochodne o wzorze (V):
OH
R,-(CH2CiI2O)ri- CH,CH2-O-CH?-CH-CłI2- NH-(CH2)p-CHO
Korzystne są pochodne o wzorze (VI):
O o
Rr(CJI2CT2O)n-CH2CH2-O- C-NH-CH-C- NH-(CHJp-CHO (VI) .
Korzystne są pochodne o wzorze (II):
O
Rr(CH2cH2o)n-cH2CH2-o-(CH2)m-c-NH-(CH2)p-cHO (II) w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub
m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
Korzystniejsze są pochodne, w których p oznacza 3. Korzystniejsze są pochodne, w których p oznacza 3. R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Korzystne są pochodne o wzorze (VIII):
w którym m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
PL 214 871 B1 (IX)
Wynalazek dotyczy ponadto związków pośrednich o wzorze (IX):
w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl
X oznacza O,
Y jest wybrany z grupy obejmującej
Z oznacza boczny łańcuch aminokwasu, m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
Korzystne są związki pośrednie o wzorze (X):
(X) w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
Wynalazek dotyczy również sposobu wytwarzania aldehydowych pochodnych glikolu polietylenowego, polegającego na tym, że związek o wzorze (IX):
poddaje się hydrolizie w obecności kwasu, korzystnie chlorowcowanego kwasu karboksylowego, a najkorzystniej kwasu trifluorooctowego, z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (I):
R1-(CH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CHO (I} w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub
O
CHjCRj-CHCH^- C-NH-(CH2)p-CHO
X oznacza O,
Y jest wybrany z grupy obejmującej
PL 214 871 B1
Z oznacza boczny łańcuch aminokwasu, m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
Korzystny jest sposób, polegający na tym, że związek o wzorze (X):
ο
I!
Rr (CH2CH2O)n-CH2CH2-O-(CH2)m- C-NH-(CH2)p- CH-(OCH2CH3)2 {χ} poddaje się hydrolizie w obecności kwasu, korzystnie chlorowcowanego kwasu karboksylowego, a najkorzystniej kwasu trifluorooctowego, z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (II):
w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub
O
CYCY-O-CCH, V C-NKKCH^p-CHO m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania aldehydowych pochodnych glikolu polietylenowego, polegającego na tym, że związek o wzorze (XI):
poddaje się hydrolizie w obecności kwasu, korzystnie chlorowcowanego kwasu karboksylowego, a najkorzystniej kwasu trifluorooctowego z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (VIII):
θ O '* li
OHC-(CH2)p-NH-C-(CH2)m-O-CąCH2-(CH2CH2O)n-CH2C.H2-O-(CH2)m-C-NH-<CH2)p-CHO (VIII) w którym m oznacza 1-17, n oznacza 10-0000, a p oznacza 1-3.
Gdy wynalazek dotyczy „sposobu wytwarzania”, oznacza to „proces wytwarzania”.
W opisie określenie „grupa końcowa” R1 oznacza dowolną odpowiednią grupę chemiczną, która, w zależności od preferencji, jest zasadniczo niereaktywna lub ogólnie reagująca z innymi grupami chemicznymi. Końcowa grupa aldehydowa w związku o powyższym wzorze umożliwia łatwe kowalencyjne połączenie z interesującą grupą chemiczną, np. z grupą α-aminową polipeptydu. Grupę końcową R1 dobiera się tak, aby umożliwić lub uniemożliwić wystąpienie dwufunkcyjności, czyli kowalencyjne połączenie z drugą interesującą grupą chemiczną.
PL 214 871 B1
W przypadku, gdy grupa końcowa jest zasadniczo niereaktywna z innymi grupami chemicznymi, R1 jest stosunkowo obojętną grupą. Gdy R1 jest stosunkowo obojętną grupą, struktura otrzymanej aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego jest monofunkcyjna i z tego względu wiąże się ona kowalencyjnie tylko z jedną interesującą grupą chemiczną. Do odpowiednich zasadniczo niereaktywnych grup końcowych R1 należy niższy alkoksyl.
Określenie „niższy alkoksyl” oznacza niższy alkil, określony powyżej, połączony przez atom tlenu, przy czym do przykładowych niższych alkoksyli należy metoksyl, etoksyl, n-propoksyl, izopropoksyl, n-butoksyl, s-butoksyl, t-butoksyl, n-pentoksyl itp.
Szczególnie korzystną grupą końcową R1 jest metoksyl. Gdy R1 oznacza metoksyl, aldehydy i pokrewne związki określa się czasami w opisie jako związki „mPEG”, gdzie „m oznacza metoksyl.
Gdy grupa końcowa R1 zasadniczo reaguje z innymi grupami chemicznymi, to wówczas R1 stanowi grupa funkcyjna zdolna do reagowania z pewnymi innymi grupami funkcyjnymi, takimi jak grupa aminowa i/lub sulfhydrylowa w peptydzie i/lub białku. W takim przypadku R1 może oznaczać grupę funkcyjną zdolną do reagowania łatwo z grupami elektrofilowymi lub nukleofilowymi na innych cząsteczkach, w przeciwieństwie do takich grup, które wymagają silnych katalizatorów lub bardzo niepraktycznych warunków reakcji w celu przereagowania. Gdy R1 jest stosunkowo reaktywny, aldehydowa pochodna glikolu polietylenowego jest dwufunkcyjna i może z tego względu utworzyć wiązanie kowalencyjne z dwoma grupami chemicznymi.
Korzystną zasadniczo reaktywną grupę końcową R1 stanowi ο
-CHjCHj-O-iCHj)^ C-NH<CHj) -CHO * a
W wyniku zastosowania takiej grupy R1 otrzymuje się aldehydową pochodną glikolu polietylenowego z grupami aldehydowymi na obydwu końcach aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego. W związku z tym otrzymana aldehydowa pochodna glikolu polietylenowego charakteryzuje się zdolnością wiązania przez obydwa końce. Jednakże należy zdawać sobie sprawę, że takie związki dwufunkcyjne nie muszą być idealnie symetryczne, a pierwsze wartości m, n, i/lub p mogą być takie same lub inne niż drugie wartości m, n, i/lub p we wzorze. Jednakże korzystnie związek jest symetryczny, co oznacza że obydwa m mają taką samą wartość, obydwa n mają taką samą wartość i obydwa p mają taką samą wartość.
W przypadku grupy Y o ogólnym wzorze:
grupa Y jest połączona z aminokwasem wiązaniem peptydowym. W związku z tym ta ogólna struktura sprowadza się do konkretnych struktur, tak prostych jak:
gdy pojedyncza glicyna jest stosowana jako aminokwas. Gdy Z oznacza CH3, aminokwasem jest alanina. Gdy Z oznacza CH2OH, aminokwasem jest seryna.
Oczywiście możliwe są bardziej złożone struktury, gdy stosuje się większą liczbę różnych aminokwasów, z czego można zdać sobie sprawę po zapoznaniu się ze strukturami różnych aminokwasów, przedstawionymi poniżej.
PL 214 871 B1
Korzystnie stosuje się tylko jeden aminokwas.
W opisie n oznacza 10-10000. W korzystnej postaci wynalazku n oznacza 20-5000. Korzystnie n oznacza 50-2500, jeszcze korzystniej n oznacza 75-1000. Najkorzystniej n oznacza 100-750.
W opisie p oznacza 1-3. Korzystnie p oznacza 3.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza
100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
PL 214 871 B1
Wynalazek obejmuje swym zakresem, ale nie wyłącznie, związki o wzorze I, będące związkami o następujących wzorach II-VI:
(A) (Β) (C) (D)
(II) (III) (V) (VI)
Korzystne są zasadniczo niereaktywne grupy końcowe R1, korzystnie metoksyl.
Zgodnie z wynalazkiem dostarcza się także różne chemiczne związki pośrednie, które można przeprowadzić w opisane powyżej aldehydowe pochodne glikolu polietylenowego jako związki według wynalazku. Do tych związków pośrednich należą związki o wzorze (IX):
w którym R1, X, Y, Z, m, n i p mają wyżej podane znaczenie.
W korzystnej postaci p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750;
albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Zgodnie z wynalazkiem dostarcza się ponadto związki pośrednie o wzorze (X): o
II
R.-iCH^Oi.CH^-O-iC^-C-NH^CąyCH-iOCHjCH,), w którym R1, m, n i p mają wyżej podane znaczenie.
W korzystnej postaci p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750;
albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Stosuje się także związki pośrednie o wzorze (XI): θ 0 (XI) w którym poszczególne m, n i p są takie same lub różne i mają wyżej podane znaczenie.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza
100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
PL 214 871 B1
Związki według wynalazku można wytwarzać dowolnym odpowiednim sposobem, z użyciem znanych reagentów i sposobów. Jednakże wynalazek dostarcza konkretny sposób wytwarzania aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego, obejmujący hydrolizę związku o wzorze (IX):
R1-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-X’Y-NH-(CH2)p-CH-(OCH2-CH3)2 (IX) z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (I):
RKCH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH'(CH2)p-CHO iI) w którym R1, X, Y, Z, m, n i p mają wyżej podane znaczenie.
Korzystnie hydroliza jest katalizowana kwasem. Do odpowiednich katalizatorów kwasowych należą: kwas trifluorooctowy, kwas chlorowodorowy, kwas fosforowy, kwas siarkowy i kwas azotowy. Korzystnie, kwasem jest kwas trifluorooctowy.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Aldehydowe pochodne glikolu polietylenowego jako związki o wzorze (II) można również wytwarzać dowolnym odpowiednim sposobem. Jednakże przykładowo aldehydowe pochodne glikolu polietylenowego o wzorze (II) można wytwarzać w sposób następujący: Po pierwsze glikol polietylenowy suszy się. Po drugie, glikol polietylenowy poddaje się reakcji z chlorowcowaną pochodną kwasu octowego. W wyniku hydrolizy otrzymanej mieszaniny reakcyjnej otrzymuje się PEG-kwas karboksylowy. Alternatywnie, produkt w postaci PEG-kwasu karboksylowego można również otrzymać przez bezpośrednie utlenianie PEG po etapie suszenia. Następnie na PEG-kwas karboksylowy działa się aminową pochodną dietyloacetalu z wytworzeniem PEG-acetaloaminy, którą poddaje się reakcji z chlorowcowanym kwasem karboksylowym z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (I). Produkt w postaci aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego zbiera się następnie i oczyszcza.
Produkt w postaci aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego można zebrać i oczyszczać w dowolny odpowiedni sposób. Przykładowo produkt w postaci aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego można wyekstrahować dichlorometanem. Warstwę organiczną suszy się nad siarczanem sodu, sączy, zatęża i wytrąca eterem dietylowym. Produkt, PEG-aldehyd, odsącza się i suszy pod próżnią.
Zgodnie z wynalazkiem zatem dostarcza się sposób wytwarzania aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego, obejmujący hydrolizę związku o wzorze (X):
O
II
Rr(CH2CąO)n-CH2CH2-O-(CH2)m-C-NH-<CH2)p-CH-(OCH2CH3)2 z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (II):
M^-c^CHp^c^cHO (T w którym R1, m, n i p mają wyżej podane znaczenie.
Związek o wzorze (X) można wytworzyć w reakcji związku o wzorze (XII):
R1-(CH2-CH2-0)n-CH2CH2-0-(CH2)m-C0OH (XII) ze związkiem o wzorze (XIII):
PL 214 871 B1
Inny sposób wytwarzania PEG-kwasu lub PEG-kwasu karboksylowego stanowi bezpośrednie utlenianie. W tym przypadku można zastosować utleniacze, takie jak CrO3 lub K2Cr2O7/H2SO4, HNO3 w obecności wanadanu amonu lub odczynnik Jonesa (CrO3 i H2SO4).
Związek o wzorze (XII) można otrzymać przez hydrolizę związku o wzorze (XIV):
Ri -O-(CH7-CH2-O)n’CH2CH2-O-(CH2)m-COOR3 (XIV)
A -- JU Λ. ' - 4^ Z 4kA.A fMw którym R3 oznacza rozgałęziony lub nierozgałęziony C1-C4 alkil.
Związek o wzorze (XIV) można wytworzyć w reakcji związku o wzorze (XV):
R i -(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-OH (XV) ze związkiem o wzorze (XVI):
R2-(CH2)m-COOR3 (XVI) w którym R2 oznacza atom chlorowca. Korzystnie R2 oznacza atom bromu lub chloru. Do odpowiednich związków o wzorze (XVI) należy bromooctan t-butylu, bromooctan metylu, bromooctan etylu, chlorooctan t-butylu, chlorooctan metylu i chlorooctan etylu. Do innych reagentów, które można zastosować w tym etapie reakcji, np. jako zamiennik związku o wzorze (XVI), należy np. bromooctan t-butylu, bromooctan metylu, bromooctan etylu, chlorooctan t-butylu, chlorooctan metylu lub chlorooctan etylu w obecności t-butanolanu potasu, wodorku metalu alkalicznego, takiego jak wodorek sodu, lub naftalidku potasu. Korzystnie, związkiem o wzorze (XVI) jest bromooctan t-butylu.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Związki o wzorach (III), (v) i (VI) (określane również jako związki odpowiednio z grup B-D można również wytwarzać dowolnym odpowiednim sposobem. Jednakże przykładowo poniższe schematy reakcji można wykorzystać do wytwarzania związków o wzorach (III), (v) i (VI) (z grup B-D).
Podobnie jak w przypadku przedstawionych powyżej aldehydowych pochodnych glikolu polietylenowego, dwufunkcyjne aldehydowe pochodne glikolu polietylenowego można wytwarzać dowolnym odpowiednim sposobem. Można prowadzić także sposób wytwarzania aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego, obejmujący hydrolizę związku o wzorze (XVII):
z wytworzeniem aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (VIII):
w którym m, n i p mają wyżej podane znaczenie.
Związek o wzorze (VI) można wytworzyć w reakcji związku o wzorze (XVIII):
HO0C-(CH2)m-O-CH2CH2-(CH2-CH2-0)n~CH2CH2-O-(CH2)m-CO0H (XVIII) ze związkiem o wzorze (XIX):
PL 214 871 B1
Związek o wzorze (XVIII) można wytworzyć na drodze hydrolizy związku o wzorze (XX):
R3OOC-(CH2)m-CH2CH2-O-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-O-(CH2)ni-COOR3 (XX) w którym R3 oznacza rozgałęziony lub nierozgałęziony C1-C4 alkil.
Związek o wzorze (XX) można wytworzyć w reakcji związku o wzorze (XXI):
HO-CH2CH2-(CH2-CH2-O)n-CH2CH2-OH (XXI) ze związkiem o wzorze (XVI):
R2-(CH2)m-COOR3 (XVI) w którym R2 oznacza atom chlorowca.
Przedstawione powyżej kompozycje aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego zgodnie z wynalazkiem można stosować do przeprowadzania w pochodne wielu cząsteczek, w tym biocząsteczek, z zastosowaniem dowolnego z odpowiednich sposobów.
Związki PEG-aldehydowe według wynalazku są specyficzne względem końca N w pegylowaniu peptydów i innych biocząsteczek. PEG-aldehydy według wynalazku tworzą koniugat z N-końcową grupą α-aminową biocząsteczki lub białka, z utworzeniem trwałego drugorzędowego połączenia aminowego pomiędzy PEG i biocząsteczką lub białkiem.
Biocząsteczki pegylowane PEG-aldehydami według wynalazku wykazują powtarzalność w liczbie i położeniu przyłączonych PEG, co powoduje, że strategia oczyszczania jest mniej skomplikowana. Takie ukierunkowane pegylowanie może doprowadzić do koniugatu, w którym miejsce pegylowania jest oddalone od miejsca, przez które biocząsteczka lub peptyd wiąże się z receptorami komórkowymi, co umożliwi utrzymanie przez pegylowane biocząsteczki, białka lub peptydy większości lub całości ich aktywności biologicznej. PEG-aldehydy według wynalazku mogą reagować z dowolnymi biocząsteczkami, które zawierają grupę alfa ^-aminową.
W zależności od wybranej aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego glikol polietylenowy może być kowalencyjnie związany z biocząsteczką na jednym końcu (monofunkcyjna aldehydowa pochodna glikolu polietylenowego) lub na obydwu końcach (dwufunkcyjna aldehydowa pochodna glikolu polietylenowego).
Jak to zaznaczono, aldehydowe pochodne glikolu polietylenowego według wynalazku można stosować do ukierunkowanego pegylowania N-końca. W wyniku ukierunkowanego połączenia z N-końcem otrzymuje się pegylowane polipeptydy, w przypadku których unika się usieciowania i wielokrotnych pochodnych jednego polipeptydu. W celu osiągnięcia ukierunkowanego wiązania kowalencyjnego, można zastosować dowolne odpowiednie warunki reakcji. Ogólnie, wartość pH mieszaniny reakcyjnej jest wystarczająco kwasowa, aby uaktywnić α-aminokwas polipeptydu do pegylowania. Zazwyczaj wartość pH wynosi około 5,5-7,4, korzystnie około 6,5.
W związku z tym sposób przyłączania cząsteczki glikolu polietylenowego do polipeptydu polega na tym, że: co najmniej jeden polipeptyd o wzorze (XXII):
NH2B (XXII);
poddaje się reakcji z cząsteczką aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (I): R1-(CH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-CHO (i} w którym R1, X, Y, Z, m, n i p mają wyżej podane znaczenie; z wytworzeniem związku o wzorze (XXIII):
Rj -(CH2CH2O)n-CH2CH2-X-Y-NH-(CH2)p-NHB (XXIII)
PL 214 871 B1 przy czym cząsteczka aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego jest związana z N-końcową grupą aminową polipeptydu.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1,
R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Związkiem o wzorze (XXII) może być dowolny polipeptyd, w tym interferon-α, interferon-β, interferon consensusu, erytropoetyna (EPO), czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów (GCSF), czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów/makrofagów (GM-CSF), interleukiny (w tym IL-2, IL-10 i IL-12) i czynnik stymulujący wzrost kolonii.
Związkami o wzorze (XXII) mogą być także immunoglobuliny, takie jak IgG, IgE, IgM, IgA, IgD oraz ich podklasy i ich fragmenty. Określenie „przeciwciało” lub „fragmenty przeciwciał” dotyczy przeciwciał poliklonalnych i monoklonalnych, całej immunoglobuliny lub przeciwciała, albo dowolnego funkcyjnego fragmentu cząsteczki immunoglobiny, który wiąże się z docelowym antygenem. Do takich fragmentów przeciwciał przykładowo należy Fv (fragment zmienny), jednołańcuchowy Fv, regiony określające komplementarność (CDR), VL (zmienny region lekkiego łańcucha), VH (zmienny region ciężkiego łańcucha), Fab (fragment wiążący antygen), F(ab)2' oraz dowolna kombinacja tych lub dowolnych innych grup funkcyjnych peptydu immunoglobiny, zdolnych do wiązania się z docelowym antygenem.
Jak to podano, pegylowany związek można wytwarzać w dowolny żądany sposób. Należy dobrać takie warunki, np. pH, które faworyzują ukierunkowane pegylowanie grup α-aminowych.
Ogólnie, polipeptydy można pegylować pochodnymi glikolu polietylenowego według wynalazku przez połączenie związku o wzorze (XXII) i reagenta PEG w stosunku molowym od 1:1 do 1:100. Reagenty można umieścić w buforze boranowym, fosforanowym lub tris, w temperaturze pokojowej lub w 4°C na około 0,5-24 godziny przy pH w zakresie 5,5-9,0. Stosunek molowy reagenta PEG do peptydów/białek wynosi zazwyczaj od 1:1 do 100:1. Stężenie peptydów/białek wynosi zazwyczaj 1-10 mg/ml. Stężenie buforu jest zazwyczaj 10-500 mM.
Pegylowany związek można wydzielić lub oczyścić dowolnym żądanym sposobem. Przykładowo, otrzymaną mieszaninę reakcyjną można rozcieńczyć buforem równoważącym (20mM Tris, pH 7,5), po czym otrzymaną mieszaninę nanosi się na kolumnę Q-Sepharose. Po naniesieniu mieszaniny kolumnę QA przemywa się buforem równoważącym i eluuje 75M NaCl; eluuje 200mM NaCl; eluuje 1M NaCl; i regeneruje 1M HOAc + 1M NaCl i 0,5M NaOH. W wyniku zastosowania HPLC z odwróconym układem faz można rozdzielić i wydzielić produkt mono-pegylowany na końcu N od innych produktów ubocznych w mieszaninie. Tożsamość każdego zebranego produktu można następnie potwierdzić techniką spektrometrii masowej z desorpcją/jonizacją laserową wspomaganą matrycą-analizą czasu przelotu (MALDI-TOF).
W jednej z postaci sposobu pegylowania polipeptyd o wzorze (XXII):
NH2B (XXII);
poddaje się reakcji z cząsteczką aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (II):
w którym R1, m, n i p mają wyżej podane znaczenie; z wytworzeniem związku o wzorze (XXIV):
Rj -(CH2CH2O)n-CH2CH2-O-(CH2)m-CO-NH-(CH2)p-NHB (χχιν) przy czym cząsteczka aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego jest związana N-końcową grupą aminową polipeptydu.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 2, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
PL 214 871 B1
Dodatkowe przykłady ilustrujące zastosowanie związków według wynalazku ujawniono w równocześnie złożonych zgłoszeniach patentowych USA, zatytułowanych „Pegylated T20 Polypeptide”, nr 60/398195 z 24 lipca 2002 r., „Pegylated T1249 Polypeptide”, nr 60/398190 z 24 lipca 2002 r., oraz nr 60/439213, z 10 stycznia 2003 r., które wprowadza się tu w całości jako źródła literaturowe.
Możliwy jest także sposób przyłączania cząsteczki glikolu polietylenowego do polipeptydu, polegający na tym, że: polipeptyd o wzorze (XXII):
ΝΗ2Β (XXII);
poddaje się reakcji z cząsteczką aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego o wzorze (VIII):
Ο
I!
Ο ιι
OHC-fCHj^-NH-c-ccHj^-o-cącą-ccącąo^-cącą-o-ccą^-c-NH-ccą^CHO w którym poszczególne m, n i p są takie same lub różne i mają wyżej podane znaczenie; z wytworzeniem związku o wzorze (XXV):
przy czym cząsteczka aldehydowej pochodnej glikolu polietylenowego jest związana z N-końcową grupą aminową polipeptydów.
W korzystnych postaciach p oznacza 3, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 2, m oznacza 1, a n oznacza 100-750; albo p oznacza 1, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
Pegylowane polipeptydy można stosować w dowolny pożądany sposób. Jednakże dogodnie stosuje się je do wytwarzania środków farmaceutycznych, przez zmieszanie z farmaceutycznie dopuszczalną zaróbką. Takie środki farmaceutyczne mogą być w jednostkowej postaci dawkowanej. Mogą to być roztwory lub zawiesiny do iniekcji, urządzenia do podawania przezskórnego lub dowolna inna pożądana postać.
Poniższe przykłady podano w celu dokładniejszego zilustrowania wynalazku. Mają one jedynie charakter ilustrujący i w żaden sposób nie ograniczają zakresu wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Wytwarzanie związków PEG-aldehydowych
Porcję 5 g PEG (masa cząsteczkowa 1000-60000 daltonów) w 50-100 ml toluenu wysuszono azeotropowo przez ogrzewanie w temperaturze wrzenia przez 1-3 godziny, po czym usunięto 20-30 ml toluenu. Otrzymany roztwór ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym do roztworu PEG dodano t-butanolanu potasu (1-10-krotny nadmiar molowy) w 20-50 ml absolutnego t-butanolu i 20-50 ml toluenu. Otrzymaną mieszaninę mieszano następnie przez 2 godziny w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu.
Bromooctan t-butylu (1-10-krotny nadmiar molowy) dodano do mieszaniny ze strzykawki i mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. W zależności od żądanej wielkości grupy „m” określonej we wzorze (XVI), bromooctan t-butylu można zastąpić chlorowcowaną pochodną kwasu innego niż kwas octowy, np. kwasu propionowego, kwasu masłowego itp.
Roztwór reakcyjny zatężono następnie w wyparce obrotowej, a pozostałość wytrącono przez dodanie eteru dietylowego. Wytrącony produkt, ester t-butylowy karboksy-PEG, odsączono i wysuszono pod próżnią.
Ester t-butylowy karboksy-PEG (4 g) rozpuszczono następnie w 50-100 ml 1N wodorotlenku sodu i roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Wartość pH mieszaniny doprowadzono do 2,5-3,0 przez dodanie 1-6N kwasu chlorowodorowego i mieszaninę wyekstrahowano dichlorometanem. Następnie warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono w eterze dietylowym. Produkt, kwas PEG-karboksylowy, odsączono i wysuszono pod próżnią.
PL 214 871 B1
Kwas PEG-karboksylowy (3 g) rozpuszczono następnie w bezwodnym dichlorometanie (20-30 ml), po czym dodano dietyloacetalu aldehydu 4-aminomasłowego (1-5-krotny nadmiar molowy), 1-hydroksybenzotriazolu (1-5-nadmiar molowy) i dicykloheksylokarbodiimidu (1-5-nadmiar molowy). W zależności od żądanej wielkości wskaźnika „p” zdefiniowanego we wzorze (XIII), dietyloacetal aldehydu 4-aminomasłowego można zastąpić dietyloacetalem innej pochodnej aminowej, np. dietyloacetalem aldehydu 3-aminopropionowego lub dietyloacetalem aldehydu 2-aminooctowego.
Otrzymaną mieszaninę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Mieszaninę reakcyjną przesączono, zatężono i wytrącono mieszaniną 2-propanolu i eteru dietylowego (1:1). Produkt w postaci PEG-acetalu wysuszono przez noc pod próżnią.
Produkt w postaci PEG-acetalu rozpuszczono następnie w 10-200 ml 1-90% CF3COOH i roztwór mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Wartość pH mieszaniny doprowadzono do 6,0 przez dodanie 1N roztworu NaOH, po czym dodano chlorku sodu (10% wag.) i wartość pH roztworu doprowadzono do 7,0 przez dodanie 1N NaOH. Mieszaninę wyekstrahowano następnie dichlorometanem. Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, PEG-aldehyd, odsączono i wysuszono pod próżnią.
P r z y k ł a d 2
Wytwarzanie mPEGiok-butanoaldehydu
Poniżej przedstawiono ogólny schemat reakcji wytwarzania mPEG10k-butanoaldehydu według wynalazku:
Schemat reakcji dla mPEG10k-butanoaldehydu
Najpierw metoksy-PEG (mPEG) o masie cząsteczkowej 10000 daltonów (30,0 g, 3 mmole) w 300 ml toluenu wysuszono azeotropowo przez ogrzewanie w temperaturze wrzenia przez 2 godziny, po czym usunięto 100 ml toluenu. Otrzymany roztwór ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym do roztworu PEG (1) dodano t-butanolanu potasu (0,68 g, 6 mmoli) w 20 ml absolutnego t-butanolu i 20 ml toluenu. Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Do mieszaniny reakcyjnej dodano ze strzykawki bromooctanu t-butylu (1,00 ml, 6,75 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Roztwór reakcyjny zatężono następnie w wyparce obrotowej. Pozostałość wytrącono przez dodanie eteru dietylowego. Wytrącony produkt odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 28 g. NMR (d6-DMSO): 1,40 ppm (t, 9H, -CH3); 3,21 ppm (s, -OCH3); 3,50 ppm (s, -O-CH2CH2-O-); 3,96 ppm (s, 2H, -O-CH2-COO-).
PL 214 871 B1
Następnie ester t-butylowy karboksymetylo-mPEG10k (20 g) rozpuszczono w 200 ml 1N wodorotlenku sodu i roztwór mieszano przez noc w temperaturze pokojowej (2). Wartość pH mieszaniny doprowadzono do 2,5 przez dodanie 6N kwasu chlorowodorowego i mieszaninę wyekstrahowano dichlorometanem (50 ml, 40 ml i 30 ml). Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, kwas m-PEG10k-karboksymetylowy, odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 18 g. NMR (d6-DMSO): 3,21 ppm (s, -OCH3); 3,5 ppm (s,
-O-CH2CH2-O-); 3,99 ppm (s, 2H, -O-CH2-COOH).
Kwas mPEG10k-karboksymetylowy (3 g, 0,3 mmola) rozpuszczono w bezwodnym dichlorometanie (20 ml), po czym dodano dietyloacetalu aldehydu 4-aminomasłowego (50 mg, 0,3 mmola), 1-hydroksybenzotriazolu (40 mg, 0,3 mmola) i dicykloheksylokarbodiimidu (80 mg, 0,39 mmola) (3).
Mieszaninę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Mieszaninę reakcyjną przesączono, zatężono i wytrącono mieszaniną 2-propanolu i eteru dietylowego (1:1). Produkt, mPEG10k-butanoacetal, wysuszono pod próżnią przez noc. Wydajność: 2,7 g. NMR (d6-DMSO):
1,07-1,12 ppm (t, 6H, (-O-CH2-CH3)2); 1,46 ppm (m, 4H, -NHCH2CH2CH2-CH-); 3,08-3,11 ppm (q, 2H, -NHCH2CH2CH2-CH-); 3,21 ppm (s, -OCH3); 3,5 ppm (s, -O-CH2CH2-O-); 3,85 ppm (s, 2H, -O-CH2-CO-NH-); 4,44 ppm (t, 1H, -NHCH2CH2CH2-CH-); 7,67 ppm (-NH-).
Na koniec mPEG10k-butanoacetal (5 g, 0,5 mmola) rozpuszczono w 50 ml 10% CF3COOH i roztwór mieszano przez noc w temperaturze pokojowej (4). Wartość pH mieszaniny doprowadzono do 6,0 przez dodanie 1N roztworu NaOH i dodano chlorku sodu (10% wag.), po czym wartość pH roztworu doprowadzono do 7,0 przez dodanie 1N NaOH. Mieszaninę wyekstrahowano dichlorometanem. Warstwę organiczną wysuszono nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono do eteru dietylowego. Produkt, mPEG10k-butanoaldehyd (5), odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność:
4,1 g (82%). NMR (d6-DMSO): 3,21 ppm (s, -OCH3); 3,5 ppm (s, -O-CH2CH2-O); 3,85 ppm (s, 2H,
-O-CH2-CO-NH-); 7,67 ppm (-NH-); 9,66 ppm (-CHO-).
P r z y k ł a d 3
Wytwarzanie acetalu mPEGiok-aldehydu
Acetal mPEG10k-aldehydu otrzymano przez rozpuszczenie dietyloacetalu mPEG10k (1 g, masa cząsteczkowa 10000), który otrzymano zgodnie z procedurą z przykładu 1, w 10 ml 80% kwasu trifluorooctowego (Aldrich, 99+%). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Następnie do roztworu reakcyjnego wkroplono 1N NaOH do osiągnięcia wartości pH 6,0. Z kolei do powyższego roztworu dodano NaCl (10% wag.). Wartość pH doprowadzono następnie do 6,95 ± 0,05 przez dodanie 0,1N NaOH. Roztwór wyekstrahowano następnie chlorkiem metylenu. Warstwę organiczną wysuszono potem nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, acetal mPEG10k-aIdehydu, odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 0,85 g (85%).
P r z y k ł a d 4
Wytwarzanie aldehydu mPEG10k-propionowego
Aldehyd mPEG10k-propionowy otrzymano przez rozpuszczenie acetalu mPEG10k-propionowego (2 g, masa cząsteczkowa 10000), który otrzymano zgodnie z procedurą z przykładu 1, w 20 ml 80% kwasu trifluorooctowego (Aldrich, 99+%). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Następnie do roztworu reakcyjnego wkroplono 1N NaOH do osiągnięcia wartości pH 6,0. Z kolei do powyższego roztworu dodano NaCl (10% wag.). Wartość pH doprowadzono następnie do 6,95 ± 0,05 przez dodanie 1N NaOH. Roztwór wyekstrahowano następnie chlorkiem metylenu. Warstwę organiczną wysuszono potem nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, aldehyd mPEG10k-propionowy, odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 1,8 g (90%).
P r z y k ł a d 5
Wytwarzanie dialdehydu PEG2nk-butanowego
Aldehyd PEG2ok-di-butanowy otrzymano przez rozpuszczenie dietyloacetalu aldehydu PEG20k-di-masłowego (3,1 g, masa cząsteczkowa 20000), który otrzymano zgodnie z procedurą z przykładu 1, w 20 ml 80% kwasu trifluorooctowego (Aldrich, 99+%). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu. Następnie do roztworu reakcyjnego wkroplono 1N NaOH do osiągnięcia wartości pH 6,0. Z kolei do powyższego roztworu dodano NaCl (10% wag.). Wartość pH doprowadzono następnie do 6,95 ± 0,05 przez dodanie o,1N NaOH. Roztwór wyekstrahowano następnie chlorkiem metylenu. Warstwę organiczną wysuszono potem nad siarczanem sodu,
PL 214 871 B1 przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, dialdehyd PEG20k-butanowy, odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 2,5 g (81%).
P r z y k ł a d 6
Wytwarzanie aldehydu mPEG20k-butanowego
Aldehyd mPEG20k-butanowy otrzymano przez rozpuszczenie dietyloacetalu aldehydu mPEG20k-masłowego (3,0 g, masa cząsteczkowa 20000), który otrzymano zgodnie z procedurą z przykładu 1, w 30 ml 80% kwasu trifluorooctowego (Aldrich, 99+%). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu, po czym do roztworu reakcyjnego wkroplono 1N NaOH do osiągnięcia wartości pH 6,0. Z kolei do powyższego roztworu dodano NaCl (10% wag.). Wartość pH doprowadzono następnie do 6,95 ± 0,05 przez dodanie 1N NaOH. Roztwór wyekstrahowano następnie chlorkiem metylenu. Warstwę organiczną wysuszono potem nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, aldehyd mPEG20k-butanowy, odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 2,5 g (83,3%).
P r z y k ł a d 7
Wytwarzanie aldehydu mPEG20k-butanowego
Aldehyd mPEG20k-butanowy otrzymano przez rozpuszczenie dietyloacetalu aldehydu mPEG20kmasłowego (14,7 g, masa cząsteczkowa 20000), który otrzymano zgodnie z procedurą z przykładu 1, w 200 ml 10% kwasu trifluorooctowego (Aldrich, 99+%). Roztwór reakcyjny mieszano przez noc w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu, po czym do roztworu reakcyjnego wkroplono 1N
NaOH do osiągnięcia wartości pH 6,0. Z kolei do powyższego roztworu dodano NaCl (10% wag.). Wartość pH doprowadzono następnie do 6,95 ± 0,05 przez dodanie 0,1 N NaOH. Roztwór wyekstrahowano następnie chlorkiem metylenu. Warstwę organiczną wysuszono potem nad siarczanem sodu, przesączono, zatężono i wytrącono eterem dietylowym. Produkt, aldehyd mPEG20k-butanowy odsączono i wysuszono pod próżnią. Wydajność: 13,1 g (89%).
Claims (9)
1. Pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego o wzorze (I):
Rl^CHjO^CH^-Y-NH-CCHiJp-CHO (I) w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub
X oznacza O,
Y jest wybrany z grupy obejmującej 0 0 OH n O
II II I n fi <CH2VC-’ -C-’ -(CH2)i-8-CH-(CH2)i-8’ -C-(NH-CH-C)j.5, z
Z oznacza boczny łańcuch aminokwasu, m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
2. Pochodne według zastrz. 1, w których R1 oznacza metoksyl.
PL 214 871 B1
3. Pochodna według zastrz. 1 o wzorze (III):
ο
R^CH^Hp^HjCIŁrO- C-I
4. Pochodna według zastrz. 1 o wzorze (V):
(CH2)p-CHO (III).
5. Pochodna według zastrz. 1 o wzorze (VI):
6. Pochodne według zastrz. 1 o wzorze (II):
Rł*(CH2CH2O)n- CH2CH2-O-<
2)m-C-NH-(CH2) -CHO (II) w którym
R1 oznacza C1-7-alkoksyl lub m oznacza 1-17, n oznacza 10-10000, a p oznacza 1-3.
7. Pochodne według zastrz. 6, w których p oznacza 3.
8. Pochodne według zastrz. 6, w których p oznacza 3, R1 oznacza metoksyl, m oznacza 1, a n oznacza 100-750.
9. Pochodne według zastrz. 1 o wzorze (VIII):
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US39819602P | 2002-07-24 | 2002-07-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL375266A1 PL375266A1 (pl) | 2005-11-28 |
| PL214871B1 true PL214871B1 (pl) | 2013-09-30 |
Family
ID=31495721
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL375266A PL214871B1 (pl) | 2002-07-24 | 2003-07-16 | Pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego, zwiazki posrednie oraz sposób wytwarzania pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowego |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7273909B2 (pl) |
| EP (1) | EP1539857B1 (pl) |
| JP (1) | JP4071238B2 (pl) |
| KR (1) | KR100615753B1 (pl) |
| CN (1) | CN1671769B (pl) |
| AR (1) | AR040607A1 (pl) |
| AT (1) | ATE344289T1 (pl) |
| AU (1) | AU2003250971B2 (pl) |
| BR (1) | BR0312863B1 (pl) |
| CA (1) | CA2493221C (pl) |
| DE (1) | DE60309482T2 (pl) |
| DK (1) | DK1539857T3 (pl) |
| ES (1) | ES2274277T3 (pl) |
| GT (1) | GT200300154A (pl) |
| HR (1) | HRP20050026A2 (pl) |
| IL (1) | IL165920A0 (pl) |
| JO (1) | JO2400B1 (pl) |
| MX (1) | MXPA05000799A (pl) |
| NO (1) | NO336974B1 (pl) |
| PA (1) | PA8577601A1 (pl) |
| PE (1) | PE20040703A1 (pl) |
| PL (1) | PL214871B1 (pl) |
| PT (1) | PT1539857E (pl) |
| RU (1) | RU2288212C2 (pl) |
| TW (1) | TWI276647B (pl) |
| UY (1) | UY27902A1 (pl) |
| WO (1) | WO2004013205A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA200410296B (pl) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20050093856A (ko) | 2002-09-09 | 2005-09-23 | 넥타르 테라퓨틱스 에이엘, 코포레이션 | 수용성 중합체 알카날 |
| ATE412684T1 (de) | 2002-09-09 | 2008-11-15 | Nektar Therapeutics Al Corp | Verfahren zur herstellung von wasserlöslichen polymerderivaten mit terminalen carboxylgruppen |
| US20050214250A1 (en) | 2003-11-06 | 2005-09-29 | Harris J M | Method of preparing carboxylic acid functionalized polymers |
| US7989554B2 (en) * | 2006-01-10 | 2011-08-02 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Reacting polyalkylene oxide with base, tertiary alkyl haloacetate, then acid to prepare polyalkylene oxide carboxylic acid |
| WO2008051383A2 (en) * | 2006-10-19 | 2008-05-02 | Amgen Inc. | Use of alcohol co-solvents to improve pegylation reaction yields |
| WO2008048079A1 (en) * | 2006-10-20 | 2008-04-24 | Postech Academy-Industry Foundation | Long acting formulation of biopharmaceutical |
| US8247493B2 (en) * | 2007-10-22 | 2012-08-21 | Postech Academy-Industry Foundation | Long acting formulation of biopharmaceutical |
| KR100967833B1 (ko) * | 2008-05-20 | 2010-07-05 | 아이디비켐(주) | 고순도의 폴리에틸렌글리콜 알데하이드 유도체의 제조방법 |
| JP5766118B2 (ja) * | 2008-09-11 | 2015-08-19 | ウェルズ ファーゴ バンク ナショナル アソシエイション | ポリマー性アルファ−ヒドロキシアルデヒドおよびケトン反応剤ならびに抱合方法 |
| RU2439091C1 (ru) * | 2010-10-06 | 2012-01-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Форт" (Ооо "Форт") | Производные полиэтиленгликоля, содержащие ароматическую диазогруппу |
| EP2592103A1 (en) | 2011-11-08 | 2013-05-15 | Adriacell S.p.A. | Polymer aldehyde derivatives |
| US10071170B2 (en) * | 2013-06-24 | 2018-09-11 | Ablbio | Antibody-drug conjugate having improved stability and use thereof |
| TWI689310B (zh) * | 2014-07-11 | 2020-04-01 | 巨生生醫股份有限公司 | 治療鐵缺乏症之方法 |
| KR102247701B1 (ko) | 2016-02-26 | 2021-05-03 | 한미정밀화학주식회사 | 폴리에틸렌글리콜 디알데히드 유도체의 제조방법 |
| JP6937773B2 (ja) | 2016-03-07 | 2021-09-22 | ハンミ ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | ポリエチレングリコール誘導体及びその用途 |
| US11357861B2 (en) | 2017-09-29 | 2022-06-14 | Hanmi Pharm. Co., Ltd | Protein complex comprising non-peptidyl polymer-coupled fatty acid derivative compound as linker and preparation method therefor |
| WO2023111213A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Rdp Pharma Ag | Cell penetrating polypeptides (cpps) and their use in human therapy |
| EP4480497A1 (en) | 2023-06-21 | 2024-12-25 | RDP Pharma AG | Bio-conjugates for oncology |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5252714A (en) * | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
| US5770577A (en) * | 1994-11-14 | 1998-06-23 | Amgen Inc. | BDNF and NT-3 polypeptides selectively linked to polyethylene glycol |
| CH690143A5 (de) * | 1995-01-27 | 2000-05-15 | Rieter Automotive Int Ag | Lambda/4-Schallabsorber. |
| US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
| US5990237A (en) * | 1997-05-21 | 1999-11-23 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines |
| AU1325400A (en) * | 1998-10-26 | 2000-05-15 | University Of Utah Research Foundation | Method for preparation of polyethylene glycol aldehyde derivatives |
| JO2291B1 (en) * | 1999-07-02 | 2005-09-12 | اف . هوفمان لاروش ايه جي | Erythropoietin derivatives |
| AU2002357806A1 (en) | 2001-12-11 | 2003-06-23 | Sun Bio, Inc. | Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes |
| KR100488351B1 (ko) * | 2001-12-11 | 2005-05-11 | 선바이오(주) | 신규한 폴리에틸렌글리콜-프로피온알데히드 유도체 |
-
2003
- 2003-07-16 AT AT03766194T patent/ATE344289T1/de active
- 2003-07-16 EP EP03766194A patent/EP1539857B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-16 WO PCT/EP2003/007734 patent/WO2004013205A1/en not_active Ceased
- 2003-07-16 DK DK03766194T patent/DK1539857T3/da active
- 2003-07-16 KR KR1020057001223A patent/KR100615753B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-16 AU AU2003250971A patent/AU2003250971B2/en not_active Ceased
- 2003-07-16 RU RU2005105568/04A patent/RU2288212C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-07-16 PT PT03766194T patent/PT1539857E/pt unknown
- 2003-07-16 HR HR20050026A patent/HRP20050026A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2003-07-16 PL PL375266A patent/PL214871B1/pl unknown
- 2003-07-16 CA CA002493221A patent/CA2493221C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-16 BR BRPI0312863-6A patent/BR0312863B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2003-07-16 ES ES03766194T patent/ES2274277T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-16 JP JP2004525223A patent/JP4071238B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-16 DE DE60309482T patent/DE60309482T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-16 CN CN038176491A patent/CN1671769B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-16 MX MXPA05000799A patent/MXPA05000799A/es active IP Right Grant
- 2003-07-20 JO JO200383A patent/JO2400B1/en active
- 2003-07-21 AR AR20030102609A patent/AR040607A1/es not_active Application Discontinuation
- 2003-07-21 PA PA20038577601A patent/PA8577601A1/es unknown
- 2003-07-21 PE PE2003000727A patent/PE20040703A1/es not_active Application Discontinuation
- 2003-07-21 TW TW092119827A patent/TWI276647B/zh not_active IP Right Cessation
- 2003-07-21 US US10/623,978 patent/US7273909B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-22 UY UY27902A patent/UY27902A1/es not_active Application Discontinuation
- 2003-07-23 GT GT200300154A patent/GT200300154A/es unknown
-
2004
- 2004-12-21 ZA ZA200410296A patent/ZA200410296B/en unknown
- 2004-12-22 IL IL16592004A patent/IL165920A0/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-01-03 NO NO20050019A patent/NO336974B1/no not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-14 US US11/724,009 patent/US20070167606A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL214871B1 (pl) | Pochodne aldehydowe glikolu polietylenowego, zwiazki posrednie oraz sposób wytwarzania pochodnych aldehydowych glikolu polietylenowego | |
| AU2002360257B2 (en) | Thioester-terminated water soluble polymers and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith | |
| US7193031B2 (en) | Polyalkylene glycol acid additives | |
| EP1857462B9 (en) | Polyoxyalkylene derivative | |
| US20040115165A1 (en) | Bifunctional polyethylene glycol derivatives | |
| AU2002360257A1 (en) | Thioester-terminated water soluble polymers and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith | |
| JP2013533900A (ja) | 膜により改善されたポリマー合成 | |
| US6916962B2 (en) | Monofunctional polyethylene glycol aldehydes | |
| CN102822235B (zh) | 多官能聚氧化烯化合物、其生产方法及其中间体 | |
| WO2020203626A1 (ja) | 分岐型分解性ポリエチレングリコール結合体 | |
| US20030153694A1 (en) | Novel monofunctional polyethylene glycol aldehydes | |
| JP3508234B2 (ja) | ポリオキシアルキレン誘導体の製造方法 | |
| JP3465306B2 (ja) | ポリアルキレンオキシド誘導体および製造方法 | |
| KR102836637B1 (ko) | 분기형 분해성 폴리에틸렌 글리콜 유도체 | |
| CN101724142A (zh) | 一种以硫代磺酸酯为端基的聚烷基醚聚合物及合成和用途 | |
| KR20220069994A (ko) | 비대칭 분기형 분해성 폴리에틸렌글리콜 유도체 | |
| Li et al. | A facile synthesis of branched poly (ethylene glycol) and its heterobifunctional derivatives | |
| JP3873923B2 (ja) | ポリオキシアルキレン誘導体の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RECP | Rectifications of patent specification |