PL215209B1 - New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids - Google Patents
New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acidsInfo
- Publication number
- PL215209B1 PL215209B1 PL385906A PL38590608A PL215209B1 PL 215209 B1 PL215209 B1 PL 215209B1 PL 385906 A PL385906 A PL 385906A PL 38590608 A PL38590608 A PL 38590608A PL 215209 B1 PL215209 B1 PL 215209B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- acid
- valine
- group
- mmol
- phosphite
- Prior art date
Links
- -1 derivatives of aryl diesters Chemical class 0.000 title claims description 107
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims description 34
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 115
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 99
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 44
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 39
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 37
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 36
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 32
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 32
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 31
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 20
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N phosphorous acid Chemical compound OP(O)O OJMIONKXNSYLSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 16
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 claims description 16
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 16
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 16
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 14
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 14
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 14
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 12
- HVLLSGMXQDNUAL-UHFFFAOYSA-N triphenyl phosphite Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(OC=1C=CC=CC=1)OC1=CC=CC=C1 HVLLSGMXQDNUAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 11
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 9
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical compound CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 claims description 8
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 7
- FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N phosphorus trichloride Chemical compound ClP(Cl)Cl FAIAAWCVCHQXDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 6
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 6
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 5
- AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N Isopropylaldehyde Chemical compound CC(C)C=O AMIMRNSIRUDHCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001476 phosphono group Chemical group [H]OP(*)(=O)O[H] 0.000 claims description 4
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 claims description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 102
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 99
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 51
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 51
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 40
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 39
- HAEFDDOAYBQRGK-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropylphosphonic acid Chemical class CC(C)CP(O)(O)=O HAEFDDOAYBQRGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 38
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 38
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 37
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 34
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 32
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 24
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 21
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 20
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 17
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 17
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 17
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 17
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 17
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 17
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 14
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 14
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 12
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 12
- 238000001394 phosphorus-31 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 12
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 12
- UOKRBSXOBUKDGE-UHFFFAOYSA-N butylphosphonic acid Chemical class CCCCP(O)(O)=O UOKRBSXOBUKDGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 4-methoxybenzoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ZEYHEAKUIGZSGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 10
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 10
- PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N benzyl carbamate Chemical compound NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 PUJDIJCNWFYVJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 10
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 10
- CKVICYBZYGZLLP-UHFFFAOYSA-N pentylphosphonic acid Chemical class CCCCCP(O)(O)=O CKVICYBZYGZLLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 7
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 6
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 6
- SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C SZXBQTSZISFIAO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- LKMDHQMGVTVIRI-UHFFFAOYSA-N [butyl(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical class C=1C=CC=CC=1OP(=O)(CCCC)OC1=CC=CC=C1 LKMDHQMGVTVIRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GRKDCROEGSBEOZ-UHFFFAOYSA-N [pentyl(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical class C=1C=CC=CC=1OP(=O)(CCCCC)OC1=CC=CC=C1 GRKDCROEGSBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 5
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 4
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 4
- AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 AWJGUZSYVIVZGP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 4-(methylsulfanyl)phenol Chemical compound CSC1=CC=C(O)C=C1 QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003602 elastase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003679 valine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- DGSLPJDIFKVSIB-UHFFFAOYSA-N (1-azaniumyl-2-methylpropyl)-hydroxyphosphinate Chemical compound CC(C)C(N)P(O)(O)=O DGSLPJDIFKVSIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 2-chlorophenol Chemical group OC1=CC=CC=C1Cl ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyphenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISAVYTVYFVQUDY-UHFFFAOYSA-N 4-tert-Octylphenol Chemical compound CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(O)C=C1 ISAVYTVYFVQUDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QHPQWRBYOIRBIT-UHFFFAOYSA-N 4-tert-butylphenol Chemical compound CC(C)(C)C1=CC=C(O)C=C1 QHPQWRBYOIRBIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N pentanal Chemical compound CCCCC=O HGBOYTHUEUWSSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne diestrowe arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, sposób wytwarzania pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych oraz ich zastosowanie jako inhibitorów ludzkiej neutrofilowej elastazy.The subject of the invention is new 1-aminoalkanophosphonic acid aryl diester derivatives, a process for the preparation of 1-aminoalkanophosphonic acid aryl diester derivatives and their use as human neutrophilic elastase inhibitors.
Z publikacji Oleksyszyn J, Powers JC, Methods in Enzymology, znany jest kwas 1-amino-2-metylopropanofosfonowy, z grupy kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, który jest analogiem waliny. W literaturze naukowej Boduszek B, Brown AD, Powers JC., J. Ezym. Inhib. 1994, 8, 147-158, opisano pochodne fosfonowego analogu waliny, posiadające podstawniki w pierścieniu chlorofenoli, związki te nie są inhibitorami ludzkiej neutrofilowej elastazy.From the publication of Oleksyszyn J, Powers JC, Methods in Enzymology, 1-amino-2-methylpropane phosphonic acid is known from the group of 1-aminoalkanophosphonic acids, which is an analog of valine. In the scientific literature, Boduszek B, Brown AD, Powers JC., J. Ezym. Inhib. 1994, 8, 147-158, phosphono analog valine derivatives having substituents on the chlorophenol ring are described, these compounds are not inhibitors of human neutrophilic elastase.
Nie zostały opisane w literaturze pochodne diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, z podstawnikami według wynalazku, które posiadają właściwości nieodwracalnych i specyficznych inhibitorów ludzkiej neutrofilowej elastazy. Ludzka neutrofilowa elastaza (LNE) jest enzymem proteolitycznym, który w przypadku niekontrolowanej aktywności jest powodem wielu stanów patologicznych. Stany te związane z chorobami płuc, opisano w publikacjach Cardin C. i inn., Curr.Med.Chem., 2008,15,83-808; Abboud RT, Vimaloathan S., Int. J. Tuberc. Lung Dis., 2008,12, 362-367; Kelly E, i inn., Expert Opi.Ther. Targets, 2008,12,145-157, natomiast prowadzące do powikłań reumatologicznych opisano w publikacji Momohara S. i inn., Clin. Rheumatol., 1997, 16, 133-140 zaś skutkujące zapaleniami i arteriosklerozą opisano w Bieth JG. J. Soc. Biol., 2001, 195, 173-179. W ludzkim ciele aktywność enzymatyczna LNE jest inhibitowana nieodwracalnie z szybkością limitowaną dyfuzją przez endogenny białkowy inhibitor, alfa-1-PI, tzn. inhibitor proteinazy, dawniej zwany alfa-1-antytrypsyną. Wiele schorzeń opisanych w cytowanych publikacjach, jest związanych z miejscową niezdolnością organizmu lub niekiedy z genetycznym niedomiarem do utrzymania koncentracji alfa-1-PI na poziomie umożliwiającym kontrolę enzymatycznej aktywności elastazy. Elastaza odgrywa też ważną rolę w przerzutowaniu komórek nowotworowych raka płuc i piersi. W modelach zwierzęcych tych schorzeń inhibitory elastazy mają efekt terapeutyczny, opisany w publikacji Sato T., i inn., Surg. Oncol., 2006, 15, 217-222. W literaturze patentowej i naukowej między innymi Edwards PD., Bernstein PR., Med. Res. Rev., 1994, 14, 127-194; Macdonald SJ., i inn., J. Med. Chem., 2002, 45, 3878-90; Sykes NO., i inn., J. Med. Chem., 2002, 45, 2850-56, opisano cały szereg niskocząsteczkowych inhibitorów LNE. Wszystkie one charakteryzują się “odwracalnością” to znaczy kompleks inhibitor-enzym jest stosunkowo nietrwały i po pewnym czasie wolny, aktywny enzym jest uwalniany przyczyniając się do dalszych zniszczeń matryksy międzykomórkowej. Z kinetyki inhibicji elastazy in vivo, przez odwracalne inhibitory wynika, że takie inhibitory nie są w stanie skorygować istniejącej nierównowagi stechiometrycznej między LNE i alfa-1-PI.No derivatives of aryl diesters of 1-aminoalkanephosphonic acids with the substituents according to the invention have been described in the literature that have the properties of irreversible and specific inhibitors of human neutrophilic elastase. Human neutrophilic elastase (LNE) is a proteolytic enzyme that causes many pathological conditions when it is uncontrolled. These conditions associated with lung disease are described in Cardin C. et al., Curr.Med.Chem., 2008, 15, 83-808; Abboud RT, Vimaloathan S., Int. J. Tuberc. Lung Dis., 2008, 12, 362-367; Kelly E, et al., Expert Opi.Ther. Targets, 2008, 12, 145-157, while those leading to rheumatological complications are described in Momohar S. et al., Clin. Rheumatol., 1997, 16, 133-140 and those resulting in inflammation and arteriosclerosis are described in Bieth JG. J. Soc. Biol., 2001, 195, 173-179. In the human body, LNE enzymatic activity is inhibited irreversibly at a diffusion-limited rate by an endogenous protein inhibitor, alpha-1-PI, i.e. a proteinase inhibitor, formerly called alpha-1-antitrypsin. Many diseases described in the cited publications are associated with the local inability of the organism or sometimes with a genetic deficiency to maintain the concentration of alpha-1-PI at a level that allows the control of the enzymatic activity of elastase. Elastase also plays an important role in the metastasis of neoplastic cells from lung and breast cancer. In animal models of these conditions, elastase inhibitors have a therapeutic effect as described in Sato T., et al., Surg. Oncol., 2006, 15, 217-222. In the patent and scientific literature, among others, Edwards PD., Bernstein PR., Med. Res. Rev., 1994, 14, 127-194; Macdonald SJ., Et al., J. Med. Chem., 2002, 45, 3878-90; Sykes NO., Et al., J. Med. Chem., 2002, 45, 2850-56, a number of low molecular weight LNE inhibitors have been described. They are all "reversible", ie the inhibitor-enzyme complex is relatively unstable and over time, the active enzyme is released slowly, contributing to further damage to the extracellular matrix. It follows from the kinetics of elastase inhibition in vivo by the reversible inhibitors that such inhibitors are unable to correct the existing stoichiometric imbalance between LNE and alpha-1-PI.
Nowe pochodne diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz) lub dipeptyd składający się z proliny i waliny, w którym grupa aminowa waliny jest zablokowana przez grupę t-butyloksykarbonylową (Boc) lub 4-metoksybenozoilową, R oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego waliny, norwaliny, norleucyny lub kwasu 2-aminobutanowego (Abu). X1,X2,X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza wodór lub związek wybrany z grupy obejmującej; merkaptometyl (S-metyl) 1,1,3,3-tetrametylobutyl, karboksymetyl lub tertbutyl. Nowe związki są mieszaninami racemicznymi w przypadku prostych analogów fosfonowych waliny, norwaliny i kwasu 2-aminobutanowego lub mieszaninami diastereoizomerów w przypadku pochodnych tri-peptydowych.New derivatives of aryl diesters of 1-aminoalkanephosphonic acids of general formula I, in which W is a benzyloxycarbonyl group (Cbz) or a dipeptide consisting of proline and valine, in which the amine group of valine is blocked by a t-butyloxycarbonyl (Boc) or 4-methoxybenozoyl group , R is a substituent analogous to the side chain of valine, norvaline, norleucine or 2-aminobutanoic acid (Abu). X1, X2, X4 and X5 are hydrogen and X3 is hydrogen or a compound selected from the group consisting of; mercaptomethyl (S-methyl) 1,1,3,3-tetramethylbutyl, carboxymethyl or tert-butyl. The new compounds are racemic mixtures in the case of simple phosphono analogs of valine, norvaline and 2-aminobutanoic acid or mixtures of diastereomers in the case of tri-peptide derivatives.
Sposób wytwarzania dotyczy pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza grupę benzyloksykarbonylową (Cbz) lub dipeptyd składający się z proliny i waliny, w którym grupa aminowa waliny jest zablokowana przez grupę t-butyloksykarbonylową (Boc) lub 4-metoksybenozoilową, R oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego waliny, norwaliny, norleucyny lub kwasu 2-aminobutanowego (Abu). X1;X2,X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza wodór lub związek wybrany z grupy obejmującej; merkaptometyl (S-metyl) 1,1,3,3-tetrametylobutyl, karboksymetyl lub tertbutyl. Nowe związki są mieszaninami racemicznymi w przypadku prostych analogów fosfonowych waliny i mieszaninami diastereoizomerów w przypadku pochodnych tri-peptydowych.The production method relates to 1-aminoalkanephosphonic acid aryl diester derivatives of the general formula I, in which W is a benzyloxycarbonyl group (Cbz) or a dipeptide consisting of proline and valine, in which the amine group of valine is blocked by a t-butyloxycarbonyl group (Boc) or 4 -methoxybenozoyl, R is a substituent analogous to the side chain of valine, norvaline, norleucine or 2-aminobutanoic acid (Abu). X1, X2, X4 and X5 are hydrogen and X3 is hydrogen or a compound selected from the group consisting of; mercaptomethyl (S-methyl) 1,1,3,3-tetramethylbutyl, carboxymethyl or tert-butyl. The new compounds are racemic mixtures in the case of simple phosphono analogs of valine and mixtures of diastereoisomers in the case of tri-peptide derivatives.
Sposób wytwarzania pochodnych diestrów arylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza Cbz, R oznacza łańcuch boczny waliny, norwaliny i kwasu 2-aminobutylowego, X1,X2,X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza karboksymetyl, polega na tym, że fosforyn triarlowy, otrzymany z fenolu tri-p-karboksymetylowego oraz chlorku fosforu (III)The method of producing aryl diesters of 1-aminoalkanephosphonic acids of the general formula I, in which W is Cbz, R is the side chain of valine, norvaline and 2-aminobutylic acid, X1, X2, X4 and X5 are hydrogen, and X3 is carboxymethyl, consists in the fact that triarl phosphite, obtained from tri-p-carboxymethyl phenol and phosphorus (III) chloride
PL 215 209 B1 w acetonitrylu, poddaje się amidoalkilowaniu przy użyciu karbaminianu, fosforynu tri-p-karboksymetylu, oraz aldehydu, takiego jak aldehyd n-butylowy, aldehyd izobutylowy i aldehyd propylowy w lodowatym kwasie octowym jako rozpuszczalniku.In acetonitrile, is amidoalkylated using a carbamate, tri-p-carboxymethyl phosphite, and an aldehyde such as n-butyl aldehyde, isobutyl aldehyde and propyl aldehyde in glacial acetic acid as solvent.
W odmianie sposobu w celu wytworzenia nowych peptydowych pochodnych estrów o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza dipeptyd składający się z proliny i waliny, w którym grupa aminowa waliny jest zablokowana przez grupę t-butyloksykarbonylową (Boc), R oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego waliny, norwaliny, norleucyny, X1,X2,X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza wodór lub związek wybrany z grupy obejmującej; merkaptometyl (S-metyl) 1,1,3,3-tetrametylobutyl lub tertbutyl polega na tym, że fosforyn triarlowy, poddaje się amidoalkilowaniu przy użyciu karbaminianu, fosforynu tri-p-merkaptometylu, fosforynu tri-p-1,1,3,3-tetrametylobutylu, fosforynu tri-p-tertbutylu lub fosforynu tri-fenylowego oraz aldehydu, takiego jak aldehyd n-butylowy, aldehyd izobutylowy i aldehyd n-pentylowy w lodowatym kwasie octowym jako rozpuszczalniku. A następnie prowadzi się syntezę bromowodorków estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, w której odblokowuje się ochronną grupę benzyloksykarbonylową (Cbz) przy użyciu roztworu kwasu bromowodorowego w kwasie octowym. W kolejnym etapie substrat w postaci bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-aminoalkanofosfonowego poddaje się reakcji z proliną z zablokowaną grupą α-aminową w obecności trójetyloaminy, heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-W,W,W,W-tetrametylouroniowego (HBTU) jako odczynnika sprzęgającego i acetonitrylu jako rozpuszczalnika. W efekcie otrzymuje się fosfonodipeptydy, zawierające w swej strukturze resztę estru difenylowego fosfonowego analogu waliny, norwaliny, norleucyny lub z zablokowaną grupą α-aminową, z których następnie usuwa się grupę blokującą terc-butylową (t-Boc), przy użyciu roztworu kwasu trójfluorooctowego (TFA) i dichlorometanu (CH2CI2), użytych w stosunku objętościowym 1:1. W kolejnym etapie substrat w postaci odblokowanego dipeptydu estru difenylowego kwasu 1-aminoalkanofosfonowego poddaje się reakcji z waliną z zablokowaną grupą α-aminową w obecności trójetyloaminy, heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego (HBTU) jako odczynnika sprzęgającego i acetonitrylu jako rozpuszczalnika.In a variant of the process for the preparation of new peptide ester derivatives of general formula I, in which W is a dipeptide consisting of proline and valine, in which the amino group of valine is blocked by a t-butyloxycarbonyl (Boc) group, R is a substituent analogous to the side chain valine, norvaline, norleucine, X1, X2, X4 and X5 are hydrogen and X3 is hydrogen or a compound selected from the group consisting of; mercaptomethyl (S-methyl) 1,1,3,3-tetramethylbutyl or tertbutyl consists in the fact that triarlphosphite is amidoalkylated with carbamate, tri-p-mercaptomethyl phosphite, tri-p-1,1,3 phosphite, 3-tetramethylbutyl, tri-p-tert-butyl phosphite or tri-phenyl phosphite and an aldehyde such as n-butyl aldehyde, isobutyl aldehyde and n-pentyl aldehyde in glacial acetic acid as solvent. The synthesis of the 1-aminoalkanephosphonic acid diphenyl ester hydrobromides is then carried out in which the protective benzyloxycarbonyl (Cbz) group is deprotected with a solution of hydrobromic acid in acetic acid. In the next step, the substrate, 1-aminoalkanephosphonic acid diphenyl ester hydrobromide, is reacted with α-amino blocked proline in the presence of triethylamine, O-benzotriazol-1-yIo-W, W, W, W-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) as coupling reagent and acetonitrile as solvent. As a result, phosphonodipeptides are obtained, containing in their structure the rest of the diphenyl ester of the phosphono analog of valine, norvaline, norleucine or with a blocked α-amino group, from which the terc-butyl (t-Boc) blocking group is then removed using a solution of trifluoroacetic acid ( TFA) and dichloromethane (CH2Cl2), used in a 1: 1 volume ratio. In the next stage, the substrate in the form of the deprotected diphenyl ester of 1-aminoalkanephosphonic acid is reacted with valine with blocked α-amino group in the presence of triethylamine, O-benzotriazol-1-yIo-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate ( HBTU) as a coupling reagent and acetonitrile as a solvent.
W odmianie sposobu w celu wytworzenia nowych peptydowych pochodnych estrów o wzorze ogólnym 1, w którym W oznacza dipeptyd składający się z proliny i waliny, w którym grupa aminowa waliny jest zablokowana przez grupę 4-metoksybenozoilową, R oznacza podstawnik analogiczny do łańcucha bocznego waliny, X1,X2,X4 i X5 oznaczają wodór, natomiast X3 oznacza związek wybrany z grupy obejmującej; merkaptometyl (S-metyl), 1,1,3,3-tetrametylobutyl lub tertbutyl polega na tym, że fosforyn triarlowy, poddaje się amidoalkilowaniu przy użyciu karbaminianu, fosforynu tri-p-merkaptometylu, fosforynu tri-p-1,1,3,3-tetrametylobutylu, fosforynu tri-p-tertbutylu lub fosforynu tri-fenylowego oraz aldehydu izobutylowego w lodowatym kwasie octowym jako rozpuszczalniku. A następnie prowadzi się syntezę bromowodorków estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych, w której odblokowuje się ochronną grupę benzyloksykarbonylową (Cbz) przy użyciu roztworu kwasu bromowodorowego w kwasie octowym. W kolejnym etapie substrat w postaci bromowodorku estru difenylowego kwasu 1-aminoalkanofosfonowego poddaje się reakcji z proliną z zablokowaną grupą α-aminową w obecności trójetyloaminy, heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego (HBTU) jako odczynnika sprzęgającego i acetonitrylu jako rozpuszczalnika. W efekcie otrzymuje się fosfonodipeptydy, zawierające w swej strukturze resztę estru difenylowego fosfonowego analogu waliny z zablokowaną grupą α-aminową, z których następnie usuwa się grupę blokującą tercbutylową (t-Boc), przy użyciu roztworu kwasu trójfluorooctowego (TFA) i dichlorometanu (CH2Cl2), użytych w stosunku objętościowym 1:1. W kolejnym etapie substrat w postaci odblokowanego dipeptydu estru difenylowego kwasu 1-aminoalkanofosfonowego poddaje się reakcji z waliną z zablokowaną grupą α-aminową w obecności trójetyloaminy, heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-W,W,W,W-tetrametylouroniowego (HBTU) jako odczynnika sprzęgającego i acetonitrylu jako rozpuszczalnika.In a variant of the method for the preparation of new peptide ester derivatives of general formula I, in which W is a dipeptide consisting of proline and valine, in which the valine amino group is blocked by a 4-methoxybenozoyl group, R is a substituent analogous to the valine side chain, X1 , X2, X4 and X5 are hydrogen and X3 is a compound selected from the group consisting of; mercaptomethyl (S-methyl), 1,1,3,3-tetramethylbutyl or tertbutyl is based on the fact that triarl phosphite is amidoalkylated with carbamate, tri-p-mercaptomethyl phosphite, tri-p-1,1,3 phosphite , 3-tetramethylbutyl, tri-p-tert-butyl phosphite or triphenyl phosphite and isobutyl aldehyde in glacial acetic acid as solvent. The synthesis of the 1-aminoalkanephosphonic acid diphenyl ester hydrobromides is then carried out in which the protective benzyloxycarbonyl (Cbz) group is deprotected with a solution of hydrobromic acid in acetic acid. In the next step, the substrate in the form of 1-aminoalkanephosphonic acid diphenyl ester hydrobromide is reacted with proline with blocked α-amino group in the presence of triethylamine, O-benzotriazol-1-yIo-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) ) as a coupling reagent and acetonitrile as a solvent. As a result, phosphonodipeptides are obtained, containing in their structure the rest of the diphenyl ester of the valine analogue with blocked α-amino group, from which the tercbutyl blocking group (t-Boc) is then removed using a solution of trifluoroacetic acid (TFA) and dichloromethane (CH2Cl2) , used at a 1: 1 volume ratio. In the next step, the substrate in the form of the deprotected diphenyl ester of 1-aminoalkanophosphonic acid is reacted with valine with blocked α-amino group in the presence of triethylamine, 0-benzotriazol-1-yIo-W, W, W, W-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) as a coupling reagent and acetonitrile as a solvent.
W efekcie otrzymuje się fosfonotripeptydy, zawierające w swej strukturze resztę estru difenylowego fosfonowego analogu waliny z zablokowaną grupą α-aminową, z których następnie usuwa się grupę blokującą terc-butylową (t-Boc), przy użyciu roztworu kwasu trójfluorooctowego (TFA) i dichlorometanu (CH2Cl2), użytych w stosunku objętościowym 1:1. W kolejnym etapie substrat w postaci odblokowanego tripeptydu estru difenylowego kwasu 1-aminoalkanofosfonowego poddaje się reakcji z kwasem p-metoksybenzoesowym w obecności trójetyloaminy, heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego (HBTU) jako odczynnika sprzęgającego i acetonitrylu jako rozpuszczalnika.As a result, phosphonotripeptides are obtained, containing in their structure the rest of the diphenyl ester of the valine analogue phosphono blocked with the α-amino group, from which the t-butyl blocking group (t-Boc) is then removed using a solution of trifluoroacetic acid (TFA) and dichloromethane ( CH2Cl2), used at a 1: 1 volume ratio. In the next step, the substrate in the form of the deprotected diphenyl ester of 1-aminoalkanephosphonic acid is reacted with p-methoxybenzoic acid in the presence of triethylamine, O-benzotriazol-1-yIo-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU) coupling reagent and acetonitrile as solvent.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
Zastosowanie terapeutyczne związków o wzorze ogólnym 1, w którym podstawniki mają wyżej zdefiniowane znaczenie, do wytwarzania nieodwracalnych inhibitorów LNE w preparatach przeciwzapalnych, w leczeniu arteriosklerozy, powikłań reumatycznych oraz nowych leków antyrakowych, przydatnych w leczeniu raków piersi i płuc. Korzystnie stosuje się tylko jeden, reaktywny izomer optyczny, który reaguje z enzymami, odpowiednio tylko jedną formę optyczną - która opowiada izomerowi L-waliny, norwaliny, norleucyny lub kwasu 2-aminobutanowego (Abu).Therapeutic use of compounds of general formula I, in which the substituents are as defined above, for the preparation of irreversible LNE inhibitors in anti-inflammatory preparations, for the treatment of arteriosclerosis, rheumatic complications and for new anti-cancer drugs useful in the treatment of breast and lung cancer. Preferably only one reactive optical isomer is used which reacts with the enzymes, suitably only one optical form - which corresponds to the L-valine, norvaline, norleucine or 2-aminobutanoic acid (Abu) isomer.
Związki według wynalazku charakteryzują się okresem półrozpadu kompleksu inhibitor-elastaza większym niż trzy dni. Zaletą zastosowania nowych związków jest fakt, że po trzech dniach, kompleks in vivo zostaje wyeliminowany, a aktywność enzymatyczna elastazy zostaje unieszkodliwiona.The compounds of the invention have a half-life of the inhibitor-elastase complex of greater than three days. The advantage of using the new compounds is the fact that after three days, the in vivo complex is eliminated and the enzymatic activity of elastase is rendered harmless.
Przedmiotem wynalazku jest przedstawiony w przykładach wytwarzania estrów difenylowych kwasów 1-aminoalkanofosfonowych z nowymi podstawnikami przy aromatycznych pierścieniach fenylowych.The subject of the invention is presented in the examples of preparation of diphenyl esters of 1-aminoalkanephosphonic acids with new substituents on aromatic phenyl rings.
Przedmiot wynalazku został objaśniony w przykładach realizacji, bez jednoczesnego ograniczania jego zakresu.The subject matter of the invention has been explained in the following examples, without limiting its scope at the same time.
P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1
Sposób wytwarzania estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego, przedstawionego wzorem II.A method for producing N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester, represented by formula II.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-karboksymetylofenylowego.Step 1. Preparation of tri-4-carboxymethylphenyl phosphite.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 4,5 g (29 mmola) 4-karboksymetylofenoIu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 0,87 ml (9,8 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-propylofosfonowego.For this purpose, 4.5 g (29 mmol) of 4-carboxymethylphenol and 20 ml of acetonitrile are added to a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. After dissolution, it is refluxed at 90 ° C for 2 minutes. Then 0.87 ml (9.8 mmol) of phosphorus (III) chloride are added to the reaction mixture. The mixture is heated to reflux for three hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The resulting crude oil product is used directly without purification for the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-propylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-karboksymetylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,51 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i 1,1 ml (10,5 mmola) aldehydu n-butylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 100-150 ml metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Otrzymuje się 1,62 g surowego produktu (29% wagowo) Wzór sumaryczny: C28H30NO9P. Masa cząsteczkowa: 555,517 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,63 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,96(t, 3H, CH3), 1,44-1,99 (m, 4H, CH2, CH2), 3,90 (s, 6H, 2xOCH3), 4,47-4,59 (m, 1H, CHP), 5,09 (q, 2H, ArCH2O), 5,27 (d, 1H, NH), 7,13-7,32 (m, 9H, aromat.), 7,86-8,01 (m, 4H, aromat.).For this purpose, 1.51 g (10 mmol) of benzyl carbamate and 1.1 ml (10.5 mmol) of n-aldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-carboxymethylphenyl phosphite formed directly in stage 1 - equipped with a magnetic stirrer. butyl. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 1.62 g of crude product (29% by weight) are obtained. Summary formula: C28H30NO9P. Molecular weight: 555.517 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 18.63 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0.96 (t, 3H, CH 3), 1,44-1,99 (m, 4H, CH2, CH2), 3.90 (s, 6H , 2xOCH3), 4.47-4.59 (m, 1H, CHP), 5.09 (q, 2H, ArCH2O), 5.27 (d, 1H, NH), 7.13-7.32 (m , 9H, aromatic), 7.86-8.01 (m, 4H, aromatic).
P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2
Sposób wytwarzania estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego, przedstawionego wzorem IIIMethod for the preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester represented by the formula III
Sposób wykonania syntezy fosforynu trój-4-karboksymetylofenylowego jest analogiczny jak w przykładzie 1 (Etap 1). Drugim etapem jest synteza estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego.The method of performing the synthesis of tri-4-carboxymethylphenyl phosphite is analogous to that in Example 1 (Step 1). The second step is the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-karboksymetylofenylowy powstały w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,51 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i 1,1 ml (10,5 mmola) aldehydu tertbutylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 100-150 ml metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 1,73 g surowego produktu (31% wagowo) Wzór sumaryczny: C28H30NO9P. Masa cząsteczkowa: 555,517 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3,For this purpose, 1.51 g (10 mmol) of benzyl carbamate and 1.1 ml (10.5 mmol) of tert-butyl aldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-carboxymethylphenyl phosphite formed in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. The yield is 1.73 g of crude product (31% by weight). Summary formula: C28H30NO9P. Molecular weight: 555.517 g / mol. 31 P NMR spectrum (solution in CDCl3,
PL 215 209 B1 δ [ppm]): 17,99(s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCfe, δ [ppm]): 1,0-1,1 (m, 6H, 2xCH3), 2,29-2,43 (m, H, CH), 3,87 (s, 6H, 2xOCH3), 4,38-4,49 (m, 1H, CHP), 5,07 (q, 2H, ArCH2O), 5,21 (d, 1H, NH), 7,117,31 (m, 9H, aromat.), 7,90-8,0 (m, 4H, aromat.).PL 215 209 B1 δ [ppm]): 17.99 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl 2 solution, δ [ppm]): 1.0-1.1 (m, 6H, 2xCH3), 2.29-2.43 (m, H, CH), 3.87 (s , 6H, 2xOCH3), 4.38-4.49 (m, 1H, CHP), 5.07 (q, 2H, ArCH2O), 5.21 (d, 1H, NH), 7.117.31 (m, 9H , aromatic), 7.90-8.0 (m, 4H, aromatic).
P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3
Sposób wytwarzania estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-propylofosfonowego, przedstawionego wzorem IV. Syntezę fosforynu trój-4-karboksymetylofenylowego prowadzi się jak w przykładzie 1 (Etap 1). Kolejnym etapem jest synteza estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-propylofosfonowegoA method for producing N- (benzyloxycarbonylamino) -propylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester, represented by formula IV. The synthesis of tri-4-carboxymethylphenyl phosphite is carried out as in Example 1 (Step 1). The next step is the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -propylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-karboksymetylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-propylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -propylphosphonic acid di-4-carboxymethylphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-karboksymetylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,51 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i 1,1 ml (10,5 mmola) aldehydu propylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 100-150ml metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 1,73 g surowego produktu (31% wagowo) Wzór sumaryczny: C28H28NO9P. Masa cząsteczkowa: 541,490 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]):18,41 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]):~ 0,97 (t, 3H, CH3), 1,67-1,98 (m, 2H, CH2), 3,77 (s, 6H, 2 xOCH3), 4,30-4,42 (m, 1H, CHP), 4,99 (q, 2H, ArCH2O), 5.41 (d, 1H, NH), 7,04-7,20 (m, 9H, aromat.), 7,80-7,89 (m, 4H, aromat.).For this purpose, 1.51 g (10 mmol) of benzyl carbamate and 1.1 ml (10.5 mmol) of propylaldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-carboxymethylphenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 1.73 g of crude product (31% by weight) is obtained. Summary formula: C28H28NO9P. Molecular weight: 541.490 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 18.41 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): ~ 0.97 (t, 3H, CH 3), 1,67-1,98 (m, 2H, CH2), 3.77 (s, 6H, 2 xOCH3), 4.30-4.42 (m, 1H, CHP), 4.99 (q, 2H, ArCH2O), 5.41 (d, 1H, NH), 7.04-7.20 (m, 9H , aromatic), 7.80-7.89 (m, 4H, aromatic).
P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego, przedstawionego wzorem V.A method for the preparation of a tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester represented by formula V.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-terbutylofenylowego.Stage 1. Preparation of tri-4-terbutylphenyl phosphite.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaję się 16,54 g (0,11 mola) 4-tertbutylofenolu i acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa sie pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 3,3 ml (38 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystano bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izopropylo-metano-fosfonowego.For this purpose, 16.54 g (0.11 mol) of 4-tert-butylphenol and acetonitrile are added to a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. After dissolution, it is refluxed at 90 ° C for 2 minutes. Then 3.3 ml (38 mmol) of phosphorus (III) chloride are added to the reaction mixture. The mixture is heated to reflux for three hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The resulting crude oil product was used directly without purification for the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -isopropyl-methane-phosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-tertbutylofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 5,55 g (37 mmola) karbaminianu benzylu i 3,33 ml (37 mmola) aldehydu tertbutylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w lodowatym kwasie octowym całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza sie w metanolu i umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskano 8,01 g surowego produktu (39% wagowo). Wzór sumaryczny: C32H42O5NP. Masa cząsteczkowa: 551,659 g/molFor this purpose, 5.55 g (37 mmol) of benzyl carbamate and 3.33 ml (37 mmol) of tert-butyl aldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-tert-butylphenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 8.01 g of crude product (39 wt%) was obtained. Summary formula: C32H42O5NP. Molecular weight: 551.659 g / mol
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 3. Preparation of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,00 g estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izopropylometanofosfonowego (3,6 mmola) i dodaje się 5,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w minimalnej ilości metanolu i dodaje się eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza sie w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza sie pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,62 g (90%wagowo) bromowodorku estru di-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego fosfonowego. Wzór sumaryczny: C24H3703NPBr. Masa cząsteczkowa: 498,438 g/mol.2.00 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -isopropylmethane-phosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester (3.6 mmol) (3.6 mmol) are weighed into a round bottom flask and 5.00 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. 1.62 g (90% by weight) of isobutylphosphonic acid di-tert-butylphenyl ester hydrobromide are obtained. Summary formula: C24H3703NPBr. Molecular weight: 498.438 g / mol.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego fosfonowego.Step 4. Synthesis of the dipeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,93 g (1,9 mmol) bromowodorku estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i dodaje sie 0,41 g Boc-Pro-OH (1,9 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (15 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,55 ml trójetyloaminy (4 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,74 g (1,9 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.0.93 g (1.9 mmol) of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester hydrobromide is weighed into a round bottom flask and 0.41 g of Boc-Pro-OH (1.9 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (15 ml). Wait 2 minutes and 0.55 ml of triethylamine (4 mmol) is added. After 10 minutes, 0.74 g (1.9 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 4:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 1,06 g (94% wagowo). Wzór sumaryczny: C34H51O6N2P. Masa cząsteczkowa: 591,851 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and the product is then purified by column chromatography using 4: 1 v / v chloroform / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product weighs 1.06 g (94% by weight). Summary formula: C34H51O6N2P. Molecular weight: 591.851 g / mol.
Etap 5. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 5. Removal of the t-Boc group from the dipeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (5 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej o masie 1,36 g - posłużył jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester dipeptide is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (5 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil, weighing 1.36 g, was used as a starting material to obtain the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
Etap 6. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 6. Reaction of the synthesis of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
*P* P
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-ValP(OC6H5-C4H9)2 (m=1,36 g; n=2,2 mmola) dodaje się 0,49 g (2,25 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~10ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje 0,9 ml (6,5 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,86 g (2,3 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-Val P (OC6H5-C4H9) 2 (m = 1.36 g; n = 2.2 mmol) formed in step V 0.49 g (2.25 mmol) of Boc-Val-OH . The whole is poured over with acetonitrile (~ 10ml). Wait 2 minutes and then add 0.9 ml (6.5 mmol) of triethylamine. After 10 minutes, 0.86 g (2.3 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie robi się płytkę TLC i oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform, chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 1:4, następnie chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 1:8 i na sam koniec octan etylu. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,89 g (57% wagowo). Wzór sumaryczny: C41H64O5N3P. Masa cząsteczkowa: 713,89 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 17,62 (s); 18,00 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,76-1,02 (m, 12H, 4xCH3), 1,18 (s, 18H, 6xCH3), 1,33 (s, 9H, 3xCH3), 1,95 (m, 5H, 3 xCH, 1xCH2), 2,33 (m, 2H, CH2,), 3,62 (m, 2H, CH2), 4,17 (m, 1H, CH), 4,62 (m, 1H, CHP), 5,12 (d, 1H, NH), 5,32 (d, 1H, NH), 6,96-7,26 (m, 8H, aromat.).The acetate layer was poured into a conical flask and magnesium sulfate was added. A TLC plate was then made and the product was purified by column chromatography eluting with chloroform, chloroform / ethyl acetate 1: 4 by volume, then chloroform / ethyl acetate 1: 8 by volume and finally ethyl acetate. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product weighing 0.89 g (57% by weight) is obtained. Summary formula: C41H64O5N3P. Molecular weight: 713.89 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 17.62 (s); 18.00 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,76-1,02 (m, 12H, 4xCH3), 1.18 (s, 18H, 6xCH3), 1.33 (s, 9H, 3xCH3 ), 1.95 (m, 5H, 3xCH, 1xCH2), 2.33 (m, 2H, CH2,), 3.62 (m, 2H, CH2), 4.17 (m, 1H, CH), 4.62 (m, 1H, CHP), 5.12 (d, 1H, NH), 5.32 (d, 1H, NH), 6.96-7.26 (m, 8H, aromat).
P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego, przedstawionego wzorem VIMethod for the preparation of a tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester, represented by formula VI
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego.Step 1. Preparation of tri-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl phosphite.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 16,71 g (81 mmola) 4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenolu i acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 2,4 ml (27 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izopropylo-metano-fosfonowego.For this purpose, 16.71 g (81 mmol) of 4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenol and acetonitrile are added to a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. After dissolution, it is refluxed at 90 ° C for 2 minutes. Then 2.4 ml (27 mmol) of phosphorus (III) chloride are added to the reaction mixture. The mixture is heated to reflux for three hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The resulting oil crude product is used directly without purification for the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -isopropyl-methane-phosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylomerkaptofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 4,1 g (27 mmola) karbaminianu benzylu i 2,5 ml (27,5 mmola) aldehydu tertbutylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w lodowatym kwasie octowym całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 6,13 g surowego produktu (35% wagowo). Masa cząsteczkowa: 663,874 g/mol. Wzór sumaryczny C40H58NO5PFor this purpose, 4.1 g (27 mmol) of benzyl carbamate and 2.5 ml (27.5 mmol) of tertbutylaldehyde are weighed into a round-bottom flask - containing the tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 6.13 g of crude product (35% by weight) are recovered. Molecular weight: 663.874 g / mol. Summary formula C40H58NO5P
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 3. Preparation of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,00 g estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino) izobutylofosfonowego (3,1 mmola) i dodaje się 5,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej. Produkt nie krystalizuje w układzie metanol/eter dietylowy. Do dalszej syntezy użyto surowego produktu. Wzór sumaryczny: C32H53O3NPBr. Masa cząsteczkowa: 610,652 g/mol.2.00 g of N- (benzyloxycarbonylamino) isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester (3.1 mmol) is weighed into a round bottom flask and 5.00 ml of hydrobromic acid solution ( 33%) in acetic acid. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours. Then, volatile components of the reaction mixture are removed on a rotary evaporator. The product does not crystallize in the methanol / diethyl ether system. The crude product was used for further synthesis. Summary formula: C32H53O3NPBr. Molecular weight: 610.652 g / mol.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 4. Synthesis of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester dipeptide derivative.
W kolbie okrągłodennej umieszcza się 3,14 mmol bromowodorku estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego i dodaje się 0,68 g Boc-Pro-OH (3,16 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (15 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 1,3 ml trójetyloaminy (9,4 mmola). Po 10 minutach dodaje się 1,26 g (3,3 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.3.14 mmol of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester hydrobromide are placed in a round bottom flask and 0.68 g of Boc-Pro-OH (3.16 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (15 ml). Wait 2 minutes and 1.3 ml of triethylamine (9.4 mmol) are added. After 10 minutes, 1.26 g (3.3 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate are added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 4:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 1,57 g (69% wagowo). Wzór sumaryczny: C42H67O6N2P. Masa cząsteczkowa: 726,973 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and the product is then purified by column chromatography using 4: 1 v / v chloroform / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product weighs 1.57 g (69% by weight). Summary formula: C42H67O6N2P. Molecular weight: 726.973 g / mol.
Etap 5. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 5. Removal of t-Boc group from isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester dipeptide derivative.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1,57 g (2,16 mmol) pochodnej dipeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej o masie 1,74 g - posłużył jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.1.57 g (2.16 mmol) of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester dipeptide is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml) and then added 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml) is slowly released. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil, weighing 1.74 g, was used as a starting material for the preparation of the tripeptide derivative of di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl isobutylphosphonic acid ester.
Etap 6. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 6. Synthesis of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester tripeptide derivative.
PP.
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-ValP(OC6H5-4-C8H17)2 (m=1,74 g; n=2,1 mmola) dodaje się 0,47 g (2,16 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~15 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,66 ml (4,8 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,86 g (2,3 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-Val P (OC6H5-4-C8H17) 2 (m = 1.74 g; n = 2.1 mmol) formed in step V 0.47 g (2.16 mmol) of Boc-Val -OH. It is poured over with acetonitrile (~ 15 ml). After 2 minutes, 0.66 ml (4.8 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.86 g (2.3 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate are added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie robi się płytkę TLC i oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluentThe acetate layer is poured into a conical flask and magnesium sulfate is added. Then a TLC plate is made and the product is purified by column chromatography using as eluent
PL 215 209 B1 chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,51 g (29% wa31 gowo). Wzór sumaryczny: C47H76O7N3P. Masa cząsteczkowa: 826,104 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 17,50 (s); 17,93 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,61 (s, 18H, 6xCH3), 0,72-0,98 (m, 12H, 4xCH3), 1,22 (s, 12H, 4xCH3), 1,33 (s, 9H, 3xCH3), 1,60 (s, 4H,2xCH2), 1,60-2,33 (m, 6H, 2xCH2, 2xCH), 3,62 (m, 2H, CH2), 4,18 (m, 1H, CH), 4,65 (m, 1H, CHP), 5,2 (dd, 1H, NH), 6,92-7,29 (m, 9H, NH, aromat.).Chloroform. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.51 g (29% by weight). Summary formula: C47H76O7N3P. Molecular weight: 826.104 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 17.50 (s); 17.93 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0.61 (s, 18H, 6xCH3), 0,72-0,98 (m, 12H, 4xCH3), 1.22 (s, 12H, 4xCH3 ), 1.33 (s, 9H, 3xCH3), 1.60 (s, 4H, 2xCH2), 1.60-2.33 (m, 6H, 2xCH2, 2xCH), 3.62 (m, 2H, CH2 ), 4.18 (m, 1H, CH), 4.65 (m, 1H, CHP), 5.2 (dd, 1H, NH), 6.92-7.29 (m, 9H, NH, aroma .).
P r z y k ł a d 6P r z k ł a d 6
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego, przedstawionej wzorem VII.A method for the preparation of a tripeptide derivative of n-pentylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester represented by formula VII.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metylomerkaptofenylowego.Step 1. Preparation of tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 4,4 g (32 mmola) 4-metylomerkaptofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 1 ml (11 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyIoksykarbonyIamino)-izopropylo-metano-fosfonowego.For this purpose, 4.4 g (32 mmol) of 4-methylmercaptophenol and 20 ml of acetonitrile are added to a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. After dissolution, it is refluxed at 90 ° C for 2 minutes. Then 1 ml (11 mmol) of phosphorus (III) chloride is added to the reaction mixture. The mixture is heated to reflux for three hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The resulting crude oil product is used directly without purification for the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -isopropyl-methane-phosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylomerkaptofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,71 g (11 mmola) karbaminianu benzylu i 1,32 ml (12 mmola) aldehydu n-pentylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 100-150 ml metanolu umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza sie pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,09 g surowego produktu (35% wagowo) Masa cząsteczkowa: 545,645 g/mol. Wzór sumaryczny C27H32NO5PS2For this purpose, 1.71 g (11 mmol) of benzyl carbamate and 1.32 ml (12 mmol) of n-pentylaldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product is suction filtered and air dried. 2.09 g of crude product (35% by weight) are recovered. Molecular weight: 545.645 g / mol. Summary formula C27H32NO5PS2
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 3. Preparation of n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,09 g estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego (3,8 mmol) i dodaje się 8,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w minimalnej ilości metanolu i dodaje sie eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,77 g (95% wagowo) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego. Wzór sumaryczny: C19H27O3NPS2Br. Masa cząsteczkowa: 492,424 g/mol.2.09 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester (3.8 mmol) are weighed into a round bottom flask and 8.00 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered off under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. 1.77 g (95% by weight) of n-pentylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester hydrobromide are obtained. Summary formula: C19H27O3NPS2Br. Molecular weight: 492.424 g / mol.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 4. Synthesis of the dipeptide derivative of n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1,00 g (2 mmol) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego i dodaje się 0,48 g Boc-Pro-OH (2,2 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje sie 0,71 ml trójetyloaminy (5,1 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,81 g (2,1 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi się do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.1.00 g (2 mmol) of n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester hydrobromide are weighed into a round bottom flask and 0.48 g of Boc-Pro-OH (2.2 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (10 ml). Wait 2 minutes and then add 0.71 ml of triethylamine (5.1 mmol). After 10 minutes, 0.81 g (2.1 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 1:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt,The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and then the product is purified by column chromatography using 1: 1 v / v hexane / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product,
PL 215 209 B1 lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,70 g (57% wagowo). Wzór sumaryczny: C29H41O6N2PS2. Masa cząsteczkowa: 608,744 g/mol.The volatile solvents are removed on a rotary evaporator. The expected product is obtained with a weight of 0.70 g (57% by weight). Summary formula: C29H41O6N2PS2. Molecular weight: 608.744 g / mol.
Etap 5. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 5. Removal of the t-Boc group from the dipeptide of n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-pentylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej służy jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego.The dipeptide of n-pentylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil serves as a starting substrate to obtain the tripeptide derivative of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid di-4-methoxyphenyl ester.
Etap 6. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metoksyfenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego.Step 6. Synthesis of a tripeptide derivative of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid di-4-methoxyphenyl ester.
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-nLeup(OC6H5-4-SCH3)2 dodaje się 0,20 g (0,9 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~5 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,28 ml (2 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,32 g (0,84 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-nLeu p (OC6H5-4-SCH3) 2 formed in step V, 0.20 g (0.9 mmol) of Boc-Val-OH are added. It is poured over with acetonitrile (~ 5 ml). After 2 minutes, 0.28 ml (2 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.32 g (0.84 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie robi się płytkę TLC i oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,49 g (78% wagowo). Wzór sumaryczny: C34H50O7N3PS2· Masa cząsteczkowa: 707,876 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,87 (s); 19,12 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,76-0,92 (m, 9H, 3xCH3), 1,35 (s, 9H, 3xCH3),The acetate layer was poured into a conical flask and magnesium sulfate was added. A TLC plate is then made and the product is purified by column chromatography using chloroform as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.49 g (78% by weight). Summary formula: C34H50O7N3PS2Molecular weight: 707.876 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 18.87 (s); 19.12 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,76-0,92 (m, 9H, 3xCH3), 1.35 (s, 9H, 3xCH3).
1,45-2,25 (m, 10H, 4xCH2, 2xCH), 2,37 (s, 6H, 2xCH3), 3,4-3,75 (m, 2H, CH2), 4,15-4,25 (m, 1H, CH), 4,55-4,75 (m, 1H, CHP), 5,16 (dd, 1H, NH), 6,98-7,29 (m, 9H, NH, aromat.).1.45-2.25 (m, 10H, 4xCH2, 2xCH), 2.37 (s, 6H, 2xCH3), 3.4-3.75 (m, 2H, CH2), 4.15-4.25 (m, 1H, CH), 4.55-4.75 (m, 1H, CHP), 5.16 (dd, 1H, NH), 6.98-7.29 (m, 9H, NH, aroma. ).
P r z y k ł a d 7P r z k ł a d 7
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego, przedstawionego wzorem VIII.A method for the preparation of a tripeptide derivative of n-butylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester represented by formula VIII.
Sposób wykonania syntezy fosforynu trój-4-metylomerkaptofenylowego jest analogiczny do przykładu VI (Etap 1). Kolejnym etapem jest synteza estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowegoThe method of synthesis of tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite is analogous to Example VI (Step 1). The next step is the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylomerkaptofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,71 g (11 mmola) karbaminianu benzylu i 1,1 ml (12 mmola) aldehydu n-butylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 100-150 ml metanolu umieszcza w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,86 g surowego produktu (49% wagowo) Masa cząsteczkowa: 531,619 g/mol. Wzór sumaryczny: C26H30NO5PS2For this purpose, 1.71 g (11 mmol) of benzyl carbamate and 1.1 ml (12 mmol) of n-butylaldehyde are weighed into a round-bottom flask - containing the tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 2.86 g of crude product (49% by weight) are recovered. Molecular weight: 531.619 g / mol. Summary formula: C26H30NO5PS2
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 3. Preparation of n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,53 g estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego (1 mmol) i dodaje się 4,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w minimalnej ilości metanolu i dodaje się eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje0.53 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester (1 mmol) is weighed into a round bottom flask and 4.00 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered off under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. Receives
PL 215 209 B1 się 0,41 g (86% wagowo) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego. Wzór sumaryczny: C18H25O3NPS2Br. Masa cząsteczkowa: 478,40 g/mol.0.41 g (86% by weight) of n-butylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester hydrobromide was obtained. Summary formula: C18H25O3NPS2Br. Molecular weight: 478.40 g / mol.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 4. Synthesis of the dipeptide derivative of n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,37 g (0,77 mmol) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego i dodaje się 0,19 g Boc-Pro-OH (0,88 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,27 ml trójetyloaminy (1,9 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,31 g (0,82 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-ylo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.0.37 g (0.77 mmol) of n-butylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester hydrobromide is weighed into a round bottom flask and 0.19 g of Boc-Pro-OH (0.88 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (10 ml). After 2 minutes, 0.27 ml of triethylamine (1.9 mmol) was added. After 10 minutes, 0.31 g (0.82 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 1:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,27 g (59% wagowo). Wzór sumaryczny: C28H39O6N2PS2. Masa cząsteczkowa: 594,717 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and then the product is purified by column chromatography using 1: 1 v / v hexane / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product is obtained with a weight of 0.27 g (59% by weight). Summary formula: C28H39O6N2PS2. Molecular weight: 594.717 g / mol.
Etap 5. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 5. Removal of the t-Boc group from the dipeptide of n-butylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (6 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (6 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej służy jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowegoThe dipeptide of n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (6 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (6 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil serves as a starting substrate to obtain the tripeptide derivative of n-butylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester
Etap 6. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 6. Synthesis of the tripeptide derivative of n-butylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-nValP(OC6H5-4-SCH3)2 dodaje się 0,11 g (0,51 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~5 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,107 ml (0,77 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,17 g (0,45 mmola) heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno:To the product TFA * Pro-nVal P (OC6H5-4-SCH3) 2 formed in step V, 0.11 g (0.51 mmol) of Boc-Val-OH is added. It is poured over with acetonitrile (~ 5 ml). After 2 minutes, 0.107 ml (0.77 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.17 g (0.45 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively:
> dwukrotnie siarczanem potasu (5%) > solanką > dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%) > solanką.> twice with potassium sulfate (5%)> brine> twice with sodium bicarbonate (5%)> brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie robi się płytkę TLC i oczyszcza produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,28 g (80% wagowo). Wzór sumaryczny: C33H48O7N3PS2. Masa cząsteczkowa: 693,849 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,87 (s); 19,12 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,76-0,92 (m, 9H, 3xCH3), 1,35 (s, 9H, 3xCH3), 1,45-2,25 (m, 10H, 4xCH2, 2xCH), 2,37 (s, 6H, 2xCH3), 3,4-3,75 (m, 2H, CH2), 4,15-4,25 (m, 1H, CH), 4,55-4,75 (m, 1H, CHP), 5,16 (dd, 1H, NH), 6,98-7,29 (m, 9H, NH, aromat.).The acetate layer is poured into a conical flask and magnesium sulfate is added. Then a TLC plate was made and the product was purified by column chromatography using chloroform as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.28 g (80% by weight). Summary formula: C 33 H 48 O 7 N 3 PS 2 . Molecular weight: 693.849 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl 3 solution, δ [ppm]): 18.87 (s); 19.12 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,76-0,92 (m, 9H, 3xCH3), 1.35 (s, 9H, 3xCH3), 1,45-2,25 (m , 10H, 4xCH2, 2xCH), 2.37 (s, 6H, 2xCH3), 3.4-3.75 (m, 2H, CH2), 4.15-4.25 (m, 1H, CH), 4 , 55-4.75 (m, 1H, CHP), 5.16 (dd, 1H, NH), 6.98-7.29 (m, 9H, NH, aromatic).
P r z y k ł a d 8P r z k ł a d 8
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego, przedstawionego wzorem IX.A method of producing a tripeptide derivative of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester represented by formula IX.
Etap 1. 0trzymywanie estru difenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego.Step 1. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid diphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,6 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i dodaje się 10 mmol fosforynu trifenylowego i 1 ml (11 mmola) aldehydu n-pentanowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowegoFor this purpose 1.6 g (10 mmol) of benzyl carbamate are weighed into a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer and 10 mmol of triphenylphosphite and 1 ml (11 mmol) of n-pentaldehyde are added. After dissolving all ingredients in 10 ml of glacial acetic acid
PL 215 209 B1 całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza się w 100-150 ml metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,65 g surowego produktu (58% wagowo) w postaci białego osadu. Masa cząsteczkowa: 453,472 g/mol. Wzór sumaryczny: C25H28NO5PThe mixture is heated to reflux at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 2.65 g of crude product (58% by weight) are obtained in the form of a white solid. Molecular weight: 453.472 g / mol. Summary formula: C25H28NO5P
Etap 2. Otrzymywanie bromowodorku estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 2. Preparation of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,00 g estru difenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-pentylofosfonowego (4,4 mmola) i dodaje się 8,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza się w minimalnej ilości metanolu i dodaje eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,64 g (93% wagowo) bromowodorku estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego. Wzór sumaryczny: C17 H23O3NPBr. Masa cząsteczkowa: 400,25 g/mol.2.00 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-pentylphosphonic acid diphenyl ester (4.4 mmol) are weighed into a round bottom flask and 8.00 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered off under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. 1.64 g (93% by weight) of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide are obtained. Summary formula: C 17 H23O3NPBr. Molecular weight: 400.25 g / mol.
Etap 3. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 3. Synthesis of the dipeptide derivative of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1,02 g (2,5 mmol) bromowodorku estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego i dodaje się 0,6 g Boc-Pro-OH (2,8 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,885 ml trójetyloaminy (6,4 mmola). Po 10 minutach dodaje się 1,02 g (2,7 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.1.02 g (2.5 mmol) of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide are weighed into a round bottom flask and 0.6 g of Boc-Pro-OH (2.8 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). After 2 minutes, 0.885 ml of triethylamine (6.4 mmol) was added. After 10 minutes, 1.02 g (2.7 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate are added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 1:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 1,02 g (78% wagowo). Wzór sumaryczny: C27H37O6N2P. Masa cząsteczkowa: 516,57 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and then the product is purified by column chromatography using 1: 1 v / v hexane / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product weighs 1.02 g (78% by weight). Summary formula: C27H37O6N2P. Molecular weight: 516.57 g / mol.
Etap 4. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 4. Removal of the t-Boc group from the dipeptide of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego i rozpuszcza ją w dichlorometanie (5 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej o masie 1,44 g - służy jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.The n-pentylphosphonic acid dipeptide dipeptide of n-pentylphosphonic acid is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (5 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting 1.44 g oil serves as a starting substrate for the preparation of the tripeptide derivative of n-pentylphosphonic acid diphenyl ester.
Etap 5. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru difenylowego kwasu n-pentylofosfonowego.Step 5. Reaction of the synthesis of the n-pentylphosphonic acid diphenyl ester tripeptide derivative.
Do powstałego w etapie 4 produktu TFA*Pro-nLeup(OC6H6)2 (m=1,44 g; n=2,7 mmola) dodaje się 0,65 g (3 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,94 ml (6,8 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 1,08 g (2,8 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-nLeu p (OC6H6) 2 (m = 1.44 g; n = 2.7 mmol) obtained in step 4, 0.65 g (3 mmol) of Boc-Val-OH is added. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). After 2 minutes, 0.94 ml (6.8 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 1.08 g (2.8 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate are added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując eluent octan etylu/chloroform w stosunku objętościowym 1:4. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masieThe acetate layer is poured into a conical flask and magnesium sulfate is added. The product is then purified by column chromatography using 1: 4 v / v ethyl acetate / chloroform eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a mass
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
1,48 g (89% wagowo). Wzór sumaryczny: C32H46O7N3P. Masa cząsteczkowa: 615,702 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 18,30 (s); 18,52 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCI3, δ [ppm]): 0,75-0,91 (m, 9H, 3xCH3), 1,1-1,3 (m, 2H, CH2), 1,35 (s, 9H, 3xCH3), 1,5-2,2 (m, 9H, 4xCH2, CH),1.48 g (89% by weight). Summary formula: C32H46O7N3P. Molecular weight: 615.702 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 18.30 (s); 18.52 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,75-0,91 (m, 9H, 3xCH3), 1.1-1.3 (m, 2H, CH2), 1.35 (s , 9H, 3xCH3), 1.5-2.2 (m, 9H, 4xCH2, CH),
3,45-3,7 (m, 2H, 2xCH), 4,1-4,25 (m, 1H, CH), 4,6-4,75 (m, 2H, CH2), 5,19 (dd, 1H, NH), 6,98-7,32 (m, 11H, NH, aromat.).3.45-3.7 (m, 2H, 2xCH), 4.1-4.25 (m, 1H, CH), 4.6-4.75 (m, 2H, CH2), 5.19 (dd , 1H, NH), 6.98-7.32 (m, 11H, NH, aromatic).
P r z y k ł a d 9P r z k ł a d 9
Sposób wytwarzania pochodnej trójpeptydowej estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego, przedstawionego wzorem X.A method of producing a tripeptide derivative of n-butylphosphonic acid diphenyl ester represented by formula X.
Etap 1. Otrzymywanie estru difenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego.Step 1. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid diphenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,6 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i dodaje się 10 mmol fosforynu trifenylowego i 1 ml (11 mmola) aldehydu n-butanowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 100-150 ml metanolu i umieszcza się w temperaturze -20°C w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,45 g surowego produktu (56% wagowo) w postaci białego osadu. Masa cząsteczkowa: 439,445 g/mol. Wzór sumaryczny: C24H26NO5PTo this end, 1.6 g (10 mmol) of benzyl carbamate are weighed into a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer and 10 mmol of triphenylphosphite and 1 ml (11 mmol) of n-butane aldehyde are added. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed at -20 ° C to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 2.45 g of crude product (56% by weight) are obtained in the form of a white solid. Molecular weight: 439.445 g / mol. Summary formula: C24H26NO5P
Etap 2. Otrzymywanie bromowodorku estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 2. Preparation of n-Butylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1,7 g estru difenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-n-butylofosfonowego (3,8 mmola) i dodaje się 10 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza w minimalnej ilości metanolu i dodaje się eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,39 g (93% wagowo) bromowodorku estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego. Wzór sumaryczny: C16H21O3NPBr. Masa cząsteczkowa: 386,223 g/mol.1.7 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -n-butylphosphonic acid diphenyl ester (3.8 mmol) are weighed into a round bottom flask and 10 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered off under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. 1.39 g (93% by weight) of n-butylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide are obtained. Summary formula: C16H21O3NPBr. Molecular weight: 386.223 g / mol.
Etap 3. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 3. Synthesis of the dipeptide derivative of n-butylphosphonic acid diphenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się 1,00 g (2,6 mmol) bromowodorku estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego i dodaje się 0,61 g Boc-Pro-OH (2,8 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,9 ml trójetyloaminy (6,5 mmola). Po 10 minutach dodaje się 1,03 g (2,7 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.1.00 g (2.6 mmol) of n-butylphosphonic acid diphenyl ester hydrobromide are weighed into a round bottom flask and 0.61 g of Boc-Pro-OH (2.8 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). Wait 2 minutes and 0.9 ml of triethylamine (6.5 mmol) is added. After 10 minutes, 1.03 g (2.7 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate are added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza się metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 1:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,82 g (63% wagowo). Wzór sumaryczny: C26H35O6N2P. Masa cząsteczkowa: 502,544 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and then the product is purified by column chromatography using 1: 1 v / v hexane / ethyl acetate as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product weighs 0.82 g (63% by weight). Summary formula: C26H35O6N2P. Molecular weight: 502.544 g / mol.
Etap 4. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 4. Removal of the t-Boc group from the dipeptide of n-butylphosphonic acid diphenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (5 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej o masie 0,92 g - służy jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego.The n-butylphosphonic acid dipeptide dipeptide of n-butylphosphonic acid dipeptide is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (5 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting 0.92 g oil serves as a starting substrate for the preparation of the tripeptide derivative of n-butylphosphonic acid diphenyl ester.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
Etap 5. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru difenylowego kwasu n-butylofosfonowego.Step 5. Reaction of the synthesis of the n-butylphosphonic acid diphenyl ester tripeptide derivative.
PP.
Do powstałego w etapie 4 produktu TFA*Pro-nValP(OC6H6)2 (m=0,92 g; n=1,8 mmola) dodaje się 0,43 g (2 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,62 ml (4,5 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,71 g (1,9 mmola) heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-nVal P (OC6H6) 2 (m = 0.92 g; n = 1.8 mmol) obtained in step 4, 0.43 g (2 mmol) of Boc-Val-OH is added. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). After 2 minutes, 0.62 ml (4.5 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.71 g (1.9 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodano siarczanu magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując eluent octan etylu/chloroform w stosunku objętościowym 1:4. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,85 g (78% wagowo). Wzór sumaryczny: C31H44O7N3P. Masa cząsteczkowa: 601,676 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,35 (s); 18,56 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,75-0,91 (m, 9H, 3xCH3), 1,24-1,32 (m, 2H, CH2), 1,35 (s, 9H, 3xCH3), 1,5-2,2 (m, 7H, 3xCH2, CH),The acetate layer was poured into a conical flask and magnesium sulfate was added. The product is then purified by column chromatography using 1: 4 v / v ethyl acetate / chloroform eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product weighing 0.85 g (78% by weight) is obtained. Summary formula: C31H44O7N3P. Molecular weight: 601.676 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 18.35 (s); 18.56 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,75-0,91 (m, 9H, 3xCH3), 1.24-1.32 (m, 2H, CH2), 1.35 (s , 9H, 3xCH3), 1.5-2.2 (m, 7H, 3xCH2, CH),
3,45-3,7 (m, 2H, 2xCH), 4,15-4,25 (m, 1H, CHP), 4,6-4,75 (m, 2H, CH2), 5,19 (dd, 1H, NH), 7,05-7,32 (m, 11H, NH, aromat.).3.45-3.7 (m, 2H, 2xCH), 4.15-4.25 (m, 1H, CHP), 4.6-4.75 (m, 2H, CH2), 5.19 (dd , 1H, NH), 7.05-7.32 (m, 11H, NH, aromatic).
P r z y k ł a d 10P r z k ł a d 10
Sposób wytwarzania estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu N-(p-metoksy-walino-proliloamino) izobutylofosfonowego, przedstawionego wzorem XIMethod for the preparation of N- (p-methoxy-valine-prolylamino) isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester represented by the formula XI
Sposób wykonania początkowych 6 etapów syntezy jest analogiczny z przykładem 4. Kolejnym etapem jest odblokowanie pochodnej trójpeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.The method of carrying out the initial 6 steps of the synthesis is analogous to example 4. The next step is deprotection of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tertbutylphenyl ester.
Etap 7. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej trójpeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 7. Removal of the t-Boc group from the isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester tripeptide derivative.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,65 g (0,9 mmol) pochodnej tripeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej służy jako substrat wyjściowy do przyłączenia kwasu p-metoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.0.65 g (0.9 mmol) of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml), and then 50% solution of trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml). The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil serves as the starting substrate for the attachment of p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
Etap 8. Przyłączenie kwasu p-metoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-tertbutylofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 8. Linking p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-tert-butylphenyl ester.
Do powstałego w etapie 7 produktu TFA+Val-Pro-ValP(OC6H5-P-C4H9)2 (m=0,66 g; n=0,93 mmola) dodaje się 0,15 g (0,98 mmola) kwasu p-metoksybenzoesowego. Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,28 ml (2 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,36 g (0,95 mmola) heksafluorofosforanu 0-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA + Val-Pro-Val P (OC6H5-P-C4H9) 2 (m = 0.66 g; n = 0.93 mmol) obtained in step 7, 0.15 g (0.98 mmol) of acid p-methoxybenzoic acid. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). After 2 minutes, 0.28 ml (2 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.36 g (0.95 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 3:1, następnie w stosunku 2:1 i na koniec w stosunku 1:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,50 g (72% wagowo). Wzór sumaryczny: C42H58O7N3P. Masa cząsteczkowa: 747,907 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppmj): 17,61 (s); 18,01 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,82-1,06 (m, 12H, 4xCH3), 1,19 (s, 18H, 6xCH3), 1,86-2,34 (m, 5H, CH2, 3xCH), 3,45-3,8 (m, 2H, CH2), 3,75 (s, 3H, CH3), 4,4-4,75 (m, 2H, CHP, CH), 6,8-7,69 (m, 14H, 2xNH, aromat).The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The product is then purified by column chromatography eluting with hexane / ethyl acetate in a ratio of 3: 1 by volume, then in a ratio of 2: 1 and finally in a ratio of 1: 1. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.50 g (72% by weight). Summary formula: C42H58O7N3P. Molecular weight: 747.907 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppmj): 17.61 (s); 18.01 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0,82-1,06 (m, 12H, 4xCH3), 1.19 (s, 18H, 6xCH3), 1,86-2,34 (m , 5H, CH2, 3xCH), 3.45-3.8 (m, 2H, CH2), 3.75 (s, 3H, CH3), 4.4-4.75 (m, 2H, CHP, CH) , 6.8-7.69 (m, 14H, 2xNH, aroma).
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
P r z y k ł a d 11P r x l a d 11
Sposób wytwarzania estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu N-(p-metoksywalino-proliloamino) izobutylofosfonowego przedstawionego wzorem XII.A method for the preparation of N- (p-methoxivalin-prolylamino) isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester represented by formula XII.
Sposób wykonania początkowych 6 etapów syntezy jest analogiczny z przykładem 5. Kolejnym etapem jest odblokowanie pochodnej trójpeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowegoThe method of performing the initial 6 steps of the synthesis is analogous to example 5. The next step is deprotection of the tripeptide derivative of di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl isobutylphosphonic acid ester.
Etap 7. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej trójpeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 7. Removal of t-Boc group from isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester tripeptide derivative.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,8 g (0,97 mmol) pochodnej trójpeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej służy jako substrat wyjściowy do przyłączenia kwasu pmetoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.0.8 g (0.97 mmol) of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester tripeptide derivative is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml) and then added. 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml) is slowly released. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil serves as the starting substrate for the attachment of p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl isobutylphosphonic acid ester.
Etap 8. Przyłączenia kwasu p-metoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-(1,1,3,3-tetrametylobutylo)fenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 8. Attachment of p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4- (1,1,3,3-tetramethylbutyl) phenyl ester.
PP.
Do powstałego w etapie 7 produktu TFA*Val-Pro-ValP(OC6H5-4-C8H17)2 (m=0,73 g; n=0,8 mmola) dodaje się 0,14 g (0,92 mmola) kwasu p-metoksybenzoesowego. Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,3 ml (2,1 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,35 g (0,92 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa sie kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Val-Pro-Val P (OC6H5-4-C8H17) 2 (m = 0.73 g; n = 0.8 mmol) obtained in step 7, 0.14 g (0.92 mmol) of acid p-methoxybenzoic acid. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). After 2 minutes, 0.3 ml (2.1 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.35 g (0.92 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymując oczekiwany produkt o masie 0,50 g (66% wagowo). Wzór sumaryczny: C50H74O7N3P. Masa cząsteczkowa: 860,121 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 17,45 (s); 17,91 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 0,61 (s, 18H, 3xCH3), 0,80-1,22 (m, 12H, 4xCH3), 1,24 (s, 12H, 4xCH3), 1,60 (s, 4H, 2xCH2), 1,7-2,4 (m, H, 2xCH2, 2xCH), 3,45-3,8 (m, 2H, CH2), 3,75 (s, 3H, CH3), 4,45-4,74 (m, 2H, CHP, CH), 6,64-7,71 (m, 14H, 2xNH, aromat.).The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The product is then purified by column chromatography using chloroform as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams to give the expected product weighing 0.50 g (66% by weight). Summary formula: C50H74O7N3P. Molecular weight: 860.121 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 17.45 (s); 17.91 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl3 solution, δ [ppm]): 0.61 (s, 18H, 3xCH3), 0,80-1,22 (m, 12H, 4xCH3), 1.24 (s, 12H, 4xCH3 ), 1.60 (s, 4H, 2xCH2), 1.7-2.4 (m, H, 2xCH2, 2xCH), 3.45-3.8 (m, 2H, CH2), 3.75 (s , 3H, CH3), 4.45-4.74 (m, 2H, CHP, CH), 6.64-7.71 (m, 14H, 2xNH, aromatic).
P r z y k ł a d 12P r z k ł a d 12
Sposób wytwarzania estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(p-metoksy-walinoproliloamino) izobutylofosfonowego, przedstawionego wzorem XIII.Process for the preparation of N- (p-methoxy-valinoprolylamino) isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester represented by formula XIII.
Etap 1. Otrzymywanie fosforynu trój-4-metylomerkaptofenylowego.Step 1. Preparation of tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite.
W tym celu do kolby okrągłodennej wyposażonej w mieszadło magnetyczne dodaje się 4,4 g (32 mmola) 4-metylomerkaptofenolu i 20 ml acetonitrylu. Po rozpuszczeniu całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 2 minuty. Następnie do mieszaniny reakcyjnej dodaje się 1 ml (11 mmola) chlorku fosforu (III). Całość ogrzewa się przez trzy godziny w temperaturze wrzenia. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce obrotowej. Powstały surowy produkt w postaci oleju wykorzystuje się bezpośrednio, bez oczyszczania do reakcji syntezy estru di 4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izopropylometano-fosfonowego.For this purpose, 4.4 g (32 mmol) of 4-methylmercaptophenol and 20 ml of acetonitrile are added to a round bottom flask equipped with a magnetic stirrer. After dissolution, it is refluxed at 90 ° C for 2 minutes. Then 1 ml (11 mmol) of phosphorus (III) chloride is added to the reaction mixture. The mixture is heated to reflux for three hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The resulting crude oil product is used directly without purification for the synthesis of N- (benzyloxycarbonylamino) -isopropylmethane-phosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Etap 2. Otrzymywanie estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego.Step 2. Preparation of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
W tym celu do kolby okrągłodennej - zawierającej fosforyn trój-4-metylomerkaptofenylowy powstały bezpośrednio w etapie 1 - wyposażonej w mieszadło magnetyczne odważa się 1,6 g (10 mmola) karbaminianu benzylu i 1 ml (11 mmola) aldehydu tertbutylowego. Po rozpuszczeniu wszystkich składników w 10 ml lodowatego kwasu octowego całość ogrzewa się pod chłodnicą zwrotną w temperaturze 90°C przez 3 godziny. Następnie pod zmniejszonym ciśnieniem usuwa się lotne składniki mieszaniny na wyparce rotacyjnej a pozostałość rozpuszcza w 100-150 ml metanolu i umieszcza sięFor this purpose, 1.6 g (10 mmol) of benzyl carbamate and 1 ml (11 mmol) of tert-butyl aldehyde are weighed into a round-bottomed flask - containing the tri-4-methyl mercaptophenyl phosphite formed directly in step 1 - and equipped with a magnetic stirrer. After all the ingredients were dissolved in 10 ml of glacial acetic acid, the mixture was refluxed at 90 ° C for 3 hours. The volatile components of the mixture are then removed under reduced pressure on a rotary evaporator, and the residue is dissolved in 100-150 ml of methanol and placed in the
PL 215 209 B1 w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu. Uzyskany produkt odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na powietrzu. Uzyskuje się 2,65 g surowego produktu (50% wagowo) w postaci białego osadu. Masa cząsteczkowa: 531,619 g/mol. Wzór sumaryczny: C26H30NO5PS2At -20 ° C for 24 hours to crystallize the product. The resulting product was filtered off with suction and air dried. 2.65 g of crude product (50% by weight) are obtained in the form of a white solid. Molecular weight: 531.619 g / mol. Summary formula: C26H30NO5PS2
Etap 3. Otrzymywanie bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 3. Preparation of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester hydrobromide.
Do kolby okrągłodennej odważa się 2,00 g estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu N-(benzyloksykarbonylamino)-izobutylofosfonowego (3,7 mmola) i dodaje się 5,00 ml roztworu kwasu bromowodorowego (33%) w kwasie octowym. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej a uzyskany olej rozpuszcza w minimalnej ilości metanolu i dodaje się eteru dietylowego do pierwszego zmętnienia. Kolbę umieszcza się w temperaturze -20°C na 24 godziny w celu krystalizacji produktu, który odsącza się pod zmniejszonym ciśnieniem i suszy na wolnym powietrzu do stałej wagi. Otrzymuje się 1,52 g (86%wagowo) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego. Wzór sumaryczny: C18H25O3NPS2Br. Masa cząsteczkowa: 478,40 g/mol.2.00 g of N- (benzyloxycarbonylamino) -isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester (3.7 mmol) are weighed into a round bottom flask and 5.00 ml of a solution of hydrobromic acid (33%) in acetic acid are added. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator and the resulting oil is dissolved in the minimum amount of methanol and diethyl ether is added to the first turbidity. The flask is placed at -20 ° C for 24 hours to crystallize the product, which is filtered off under reduced pressure and dried in the open air to constant weight. 1.52 g (86% by weight) of isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester hydrobromide are obtained. Summary formula: C18H25O3NPS2Br. Molecular weight: 478.40 g / mol.
Etap 4. Reakcja syntezy pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 4. Synthesis of the dipeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,48 g (1 mmol) bromowodorku estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i dodaje się 0,23 g Boc-Pro-OH (1,06 mmola). Całość zalewa się acetonitrylem (5-10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,28 ml trójetyloaminy (2,04 mmola). Po 10 minutach dodaje się 0,40 g (1,05 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.0.48 g (1 mmol) of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester hydrobromide is weighed into a round bottom flask and 0.23 g of Boc-Pro-OH (1.06 mmol) is added. It is poured over with acetonitrile (5-10 ml). After 2 minutes, 0.28 ml of triethylamine (2.04 mmol) was added. After 10 minutes, 0.40 g (1.05 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 24 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Odparowuje się lotne rozpuszczalniki, a następnie produkt oczyszcza metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent chloroform/octan etylu w stosunku objętościowym 4:1. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Otrzymuje sie oczekiwany produkt o masie 0,56 g (99% wagowo). Wzór sumaryczny: C28H39O6N2PS2. Masa cząsteczkowa: 594,717 g/mol.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The volatile solvents are evaporated off and the product is then purified by column chromatography using chloroform / ethyl acetate in a 4: 1 volume ratio as eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The expected product is obtained with a weight of 0.56 g (99% by weight). Summary formula: C28H39O6N2PS2. Molecular weight: 594.717 g / mol.
Etap 5. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej dipeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 5. Removal of the t-Boc group from the dipeptide of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester.
Do kolby okrągłodennej odważa się pochodną dipeptydową estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (5 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej o masie 0,58 g - służy jako substrat wyjściowy do otrzymania pochodnej tripeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.The dipeptide of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml), then 50% trifluoroacetic acid in dichloromethane (5 ml) is added slowly. The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting 0.58 g oil serves as a starting substrate for the preparation of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Etap 6. Reakcja syntezy pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 6. Reaction of the synthesis of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Do powstałego w etapie V produktu TFA*Pro-ValP(OC6H5-4-SCH3)2 (m=0,58 g; n=0,95 mmola) dodaje się 0,21 g (0,96 mmola) Boc-Val-OH. Całość zalewa się acetonitrylem (~5 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,28 ml (2,02 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,40 g (1,05 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa się kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką, dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Pro-Val P (OC6H5-4-SCH3) 2 (m = 0.58 g; n = 0.95 mmol) obtained in step V, 0.21 g (0.96 mmol) of Boc-Val is added -OH. It is poured over with acetonitrile (~ 5 ml). After 2 minutes, 0.28 ml (2.02 mmol) of triethylamine was added. After 10 minutes, 0.40 g (1.05 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate is added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Warstwę octanową zlewa się do kolby stożkowej i dodaje się siarczanu magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując eluent octan etylu/chloroform w stosunku objętościowym 1:4. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,42 g (63% wagowo). Wzór sumaryczny: C33H48O7N3PS2. Masa cząsteczkowa: 693,849 g/mol.The acetate layer is poured into a conical flask and magnesium sulfate is added. The product is then purified by column chromatography using 1: 4 v / v ethyl acetate / chloroform eluent. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.42 g (63% by weight). Summary formula: C33H48O7N3PS2. Molecular weight: 693.849 g / mol.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
Etap 7. Usunięcie grupy t-Boc z pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 7. Removal of the t-Boc group from the isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester tripeptide derivative.
Do kolby okrągłodennej odważa się 0,8 g (1,1 mmol) pochodnej trójpeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego i rozpuszcza się ją w dichlorometanie (10 ml), a następnie dodaje się powoli 50% roztwór kwasu trójfluoroctowego w dichlorometanie (10 ml). Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 2 godziny, a jej przebieg monitoruje się metodą chromatografii cienkowarstwowej. Następnie lotne składniki mieszaniny poreakcyjnej usuwa się na wyparce obrotowej, uzyskany olej rozpuszcza się w toluenie i ponownie odparowuje. Czynność tą powtarza się trzykrotnie. Powstały olej służy jako substrat wyjściowy do przyłączenia kwasu p-metoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.0.8 g (1.1 mmol) of the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methyl mercaptophenyl ester is weighed into a round bottom flask and dissolved in dichloromethane (10 ml), and then 50% solution of trifluoroacetic acid in dichloromethane (10 ml). The reaction is carried out at room temperature for 2 hours and the progress is monitored by thin layer chromatography. The volatile components of the reaction mixture are then removed on a rotary evaporator, the resulting oil is dissolved in toluene and re-evaporated. This operation is repeated three times. The resulting oil serves as a starting substrate for the attachment of p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Etap 8. Przyłączenia kwasu p-metoksybenzoesowego do pochodnej tripeptydowej estru di-4-metylomerkaptofenylowego kwasu izobutylofosfonowego.Step 8. Connection of p-methoxybenzoic acid to the tripeptide derivative of isobutylphosphonic acid di-4-methylmercaptophenyl ester.
Do powstałego w etapie 7 produktu TFA*Val-Pro-ValP(OC6H5-4-SCH3)2 (m=0,47 g; n=0,68 mmola) dodaje się 0,11 g (0,72 mmola) kwasu p-metoksybenzoesowego. Całość zalewa się acetonitrylem (~10 ml). Odczekuje się 2 minuty i dodaje się 0,31 ml (2 mmola) trójetyloaminy. Po 10 minutach dodaje się 0,27 g (0,71 mmola) heksafluorofosforanu O-benzotriazol-1-yIo-N,N,N',N'-tetrametylouroniowego. Reakcję prowadzi się w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Następnie mieszaninę poreakcyjną zalewa się solanką, przenosi do rozdzielacza i ekstrahuje się trzykrotnie octanem etylu. Warstwę octanową przemywa sie kolejno: dwukrotnie siarczanem potasu (5%), solanką dwukrotnie wodorowęglanem sodu (5%), solanką.To the product TFA * Val-Pro-Val P (OC6H5-4-SCH3) 2 (m = 0.47 g; n = 0.68 mmol) obtained in step 7 0.11 g (0.72 mmol) of acid p-methoxybenzoic acid. It is poured over with acetonitrile (~ 10 ml). Wait 2 minutes and then add 0.31 ml (2 mmol) of triethylamine. After 10 minutes, 0.27 g (0.71 mmol) of O-benzotriazol-1-yl-N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate was added. The reaction is carried out at room temperature for 4 hours. The reaction mixture is then poured over with brine, transferred to a separating funnel and extracted three times with ethyl acetate. The acetate layer is washed successively: twice with potassium sulfate (5%), brine, twice with sodium bicarbonate (5%), brine.
Frakcje octanowe suszy się bezwodnym siarczanem magnezu. Następnie oczyszcza się produkt metodą chromatografii kolumnowej stosując jako eluent heksan/octan etylu w stosunku objętościowym 1:1, następnie 1:2, potem 1:3 i na koniec sam octan etylu. Po zebraniu frakcji zawierających oczekiwany produkt, lotne rozpuszczalniki odparowuje się na wyparce rotacyjnej. Powstały olej rozpuszcza się w dichlorometanie i odparowuje się na wyparce rotacyjnej, aż do spienienia produktu, otrzymuje się oczekiwany produkt o masie 0,3 g (61% wagowo). Wzór sumaryczny: C36H46O7N3PS2.The acetate fractions are dried with anhydrous magnesium sulfate. The product is then purified by column chromatography eluting with hexane / ethyl acetate in a ratio by volume of 1: 1, then 1: 2, then 1: 3 and finally ethyl acetate alone. After collecting the fractions containing the expected product, the volatile solvents are evaporated off on a rotary evaporator. The resulting oil is dissolved in dichloromethane and evaporated on a rotary evaporator until the product foams, the expected product is obtained with a weight of 0.3 g (61% by weight). Summary formula: C36H46O7N3PS2.
Masa cząsteczkowa: 725,894 g/mol. Widmo 31P NMR (roztwór w CDCl3, δ [ppm]): 18,11 (s); 18,50 (s). Widmo 1H NMR (roztwór w CDCh, δ [ppm]): 0,91-1,14 (m, 12H, 4xCH3), 1,75-2,25 (m, 5H, 3xCH, CH2), 2,45 (s, 6H, 2xCH3), 3,5-3,75 (m, 2H, CH2), 3,84 (s, 3H, CH3), 4,0-4,2 (m, H, CH), 4,53 (d, H, NH), 4,68-4,83 (m, 2H, CH2), 6,75-7,80 (m, 13H, NH, aromat.).Molecular weight: 725.894 g / mol. 31 P NMR spectrum (CDCl 3 solution, δ [ppm]): 18.11 (s); 18.50 (s). 1 H NMR spectrum (CDCl? Solution, δ [ppm]): 0,91-1,14 (m, 12H, 4xCH3), 1,75-2,25 (m, 5H, 3xCH, CH2), 2.45 (s, 6H, 2xCH3), 3.5-3.75 (m, 2H, CH2), 3.84 (s, 3H, CH3), 4.0-4.2 (m, H, CH), 4 , 53 (d, H, NH), 4.68-4.83 (m, 2H, CH2), 6.75-7.80 (m, 13H, NH, aromatic).
Aktywność inhibitorowa otrzymanych w przykładach I-XII pochodnych wobec ludzkiej elastazy netrofilowej.Inhibitory activity of the derivatives obtained in Examples 1-12 against human netrophilic elastase.
Aktywność biologiczną estrów difenylowych fosfonowych analogów waliny, norwaliny, norleucyny i kwasu 1-aminopropionowego(Abu), a także ich peptydowych pochodnych przebadano pod kątem zdolności do hamowania proteolitycznej aktywności ludzkiej elastazy neutrofilowej. Wszystkie badania sporządzono na czytniku mikropłytek Molecular Devices Spectramax Gemini XP. Badania rozpoczęto od wyznaczania Km dla substratu w warunkach prowadzonych testów (temperatura 37°C, długość fali ekstynkcji 350 nm i emisji 460 nm, czas pomiaru 10 minut). Pomiaru dokonano przy różnych stężeniach substratu w zakresie od 10 μΜ do 500 μΜ przy stałym stężeniu enzymu 125 ng/ml (~5 nM). Wartość Km wynosiła 125 μΜ w podanych warunkach. Pomiary aktywności inhibitorowej wykonano przy różnych stężeniach inhibitorów w zakresie od 12,5 nM do 2000 nM. W badaniach wykorzystano handlowo dostępny substrat N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC. Końcowe stężenie substratu wynosiło 60 μΜ. Do każdej studzienki odmierzono 100 μΙ enzymu, 50 μl substratu i 50 μl inhibitora. Uzyskane wyniki przedstawiono w tabeli 1. Wartość IC50 jest to stężenie inhibitora potrzebne do zahamowania aktywności enzymu o 50% po 10 minutach.The biological activity of diphenyl phosphono esters of the analogues of valine, norvaline, norleucine and 1-aminopropionic acid (Abu) as well as their peptide derivatives was tested for the ability to inhibit the proteolytic activity of human neutrophilic elastase. All studies were performed on a Molecular Devices Spectramax Gemini XP microplate reader. The research began with determining the Km for the substrate under the test conditions (temperature 37 ° C, extinction wavelength 350 nm and emission 460 nm, measurement time 10 minutes). Measurements were made at various substrate concentrations ranging from 10 μΜ to 500 μΜ at a constant enzyme concentration of 125 ng / ml (~ 5 nM). The Km value was 125 µΜ under the stated conditions. Measurements of inhibitory activity were performed at various concentrations of inhibitors ranging from 12.5 nM to 2000 nM. The commercially available substrate N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC was used in the research. Final substrate concentration was 60 µΜ. 100 µl of enzyme, 50 µl of substrate and 50 µl of inhibitor were dispensed into each well. The results obtained are shown in Table 1. The IC50 value is the inhibitor concentration required to inhibit the enzyme activity by 50% after 10 minutes.
PL 215 209 B1PL 215 209 B1
T a b e l a 1T a b e l a 1
Wyniki badania aktywności inhibitorowej estrów difenylowych analogów waliny, norwaliny, norleucyny i kwasu 1-aminopropionowego (Abu) wobec ludzkiej elastazy neutrofilowejResults of the study of inhibitory activity of diphenyl esters of valine, norvaline, norleucine and 1-aminopropionic acid (Abu) analogues against human neutrophilic elastase
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385906A PL215209B1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385906A PL215209B1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL385906A1 PL385906A1 (en) | 2010-03-01 |
| PL215209B1 true PL215209B1 (en) | 2013-11-29 |
Family
ID=43012814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL385906A PL215209B1 (en) | 2008-08-18 | 2008-08-18 | New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL215209B1 (en) |
-
2008
- 2008-08-18 PL PL385906A patent/PL215209B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL385906A1 (en) | 2010-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5585486A (en) | Peptidic ketones as interleukin-1β-converting enzyme inhibitors | |
| US6492402B1 (en) | Thrombin inhibitors | |
| US5858979A (en) | Inhibitors and substrates of thrombin | |
| RU2075481C1 (en) | Derivatives of boron-containing peptides and pharmaceutical composition exhibiting inhibiting activity to trypsin-like serine proteases | |
| US5288707A (en) | Borolysine peptidomimetics | |
| HK1008146B (en) | Peptidic ketones as interleukin-1beta-converting enzyme inhibitors | |
| Holladay et al. | Synthetic and enzyme inhibition studies of pepstatin analogs containing hydroxyethylene and ketomethylene dipeptide isosteres | |
| EP0511940A2 (en) | Phosphono/biaryl substituted dipeptide derivatives | |
| ES2298837T3 (en) | DERIVATIVES OF PHOSPHINIC ACID, INHIBITORS OF BETA-SECRETASE FOR THE TREATMENT OF ALZHEIMER'S DISEASE. | |
| JPS61189298A (en) | Novel oligopeptidylargininol derivative | |
| AU708929B2 (en) | O-malonyltyrosyl compounds, O-malonyltyrosyl compound- containing peptides, and uses thereof | |
| CA2833082A1 (en) | Selective cysteine protease inhibitors and uses thereof | |
| US12084476B2 (en) | Tailored cyclodepsipeptides as potent non-covalent serine protease inhibitors | |
| Gunatilleke et al. | Tuning the Au (I)-mediated inhibition of cathepsin B through ligand substitutions | |
| US20040142851A1 (en) | Hydrazinopeptoids and their uses for treating cancers | |
| PL215209B1 (en) | New derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids, method of manufacturing of derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids and application of the derivatives of aryl diesters of 1-amino alkanophosphonic acids | |
| Melo et al. | Synthesis and hydrolysis by cathepsin B of fluorogenic substrates with the general structure benzoyl-X-ARG-MCA containing non-natural basic amino acids at position X | |
| CA2070983A1 (en) | Cyclic renin inhibitors | |
| PL227742B1 (en) | Derivatives of 1-aminalkanephosphonic acid diaryl esters, process for the preparation of derivative of 1-aminalkanephosphonic acid diaryl esters and their use | |
| PL218840B1 (en) | Derivatives of diesters of 4-methylthiophenyl 1-amine-2-methyl-propanophosphoric acids, process for the preparation of derivatives of diesters of 4-methylthiophenyl 1-amine-2-methyl-propanophosphoric acids and the use of the derivatives of diesters of 4-methylthiophenyl 1-amine-2-methyl-propanophosphoric acids | |
| US5648338A (en) | Inhibitors and substrates of thrombin | |
| US6482797B1 (en) | N-terminal site selective inhibitors of human angiotensin conversion enzyme (ACE) | |
| PL215832B1 (en) | New aryl diesters of 1-amino-alkan phosphone acids and their peptide derivatives and method of their production and application as chymotrypsin inhibitors | |
| RS50072B (en) | S-NITROSOTHYOLS AS AGENTS FOR TREATMENT OF CIRCULATORY DISORDERS | |
| Haremza et al. | Es Sbai |