PL220112B1 - Zastosowanie kompozycji zawierającej ekstrakt z Butea frondosa - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji zawierającej ekstrakt z Butea frondosa.

Zgłoszenie to jest kontynuacją zgłoszenia, które zastrzega pierwszeństwo do, i korzyści z, będącego w toku zgłoszenia patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki o numerze seryjnym 10/321,706, zgłoszonego 17 grudnia 2002 roku.

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji do miejscowego stosowania, zawierającej składnik aktywny naturalnie lub syntetycznie pozyskiwany z rośliny lub materiału roślinnego. Bardziej szczegółowo, przedmiotem wynalazku je zastosowanie kompozycji do stosowania miejscowego, które poprawiają wygląd skóry, zwłaszcza poprzez rozjaśnianie skór. Najbardziej szczegółowo, biologicznie aktywne ekstrakty poprawiają estetykę wyglądu, zwłaszcza poprzez rozjaśnianie skóry.

Konsumenci nieustannie usiłują poprawiać wygląd. Istnieje zapotrzebowanie na produkty, które skutecznie rozjaśniają i redukują pigmentację skóry. Ogólne zastosowania takich produktów obejmują na przykład, rozjaśnianie przebarwionych miejsc skóry; redukowanie plam starczych; wyrównywanie optymalizowanie przebarwień skóry; poprawianie wyglądu cieni pod oczami; leczenie melazmy, cholazmy, piegów, blizn po oparzeniowych oraz przebarwień pourazowych.

Pigmentacja skóry jest warunkowana poziomem melaniny występującej w naskórku. W naskórku występują trzy różne typ melanin: DHI-melanina, DHICA-melanina i feomelanina. Różne typy melanin różnią się kolorem lub odcieniem. DHI-melanina jest najciemniejsza i ma kolor zbliżony do czarnego. DHIC-melanina ma kolor brązowawy. Feomelanina jest najjaśniejsza ma kolor czerwonawy.

Melanina jest syntetyzowana w wyspecjalizowanych organellach zwanych melanosomami, wewnątrz komórek wytwarzających pigment (melanocytów). Melanocyty reagują na pobudzanie przez czynniki regulujące syntezę melanin.

Wiele substancji stosowano na skórę, w celu jej rozjaśnienia. Takie substancje obejmują: hydrochinon, kwas kojowy, lukrecję i/lub jej pochodne, kwas askorbinowy i/lub jego pochodne, arbutynę, mącznicę lekarską, Glycyrrhiza glabra i jej pochodne, ekstrakt z Chlorella vulgaris, ekstrakt z perlili, (pachnotka) i ekstrakt z owocu kokosa. Ekstrakt z perlili jako środek wybielający jest przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5980904 oraz japońskich publikacji patentowych nr 07025742, 07187989, 10265322, 2001163759 i 2001181173. Ekstrakt z owocu kokosa jako środek, wybielający jest przedmiotem opisu patentowego Japonii nr 2896815B2. Przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5756099 jest wykorzystanie ekstraktu z gąbczastej masy tkanki kokosowej w brązującej kompozycji przeciwsłonecznej.

Składniki aktywne pozyskiwane z roślin lub nasion roślinnych, były używane w kompozycjach do stosowania miejscowego, do niezliczonej ilości celów leczniczych, terapeutycznych i kosmetycznych. Takie składniki aktywne mogą być otrzymywane z różnych części roślin, jak na przykład, nasiona, igły, liście, korzenie, kora, szyszki, łodygi, kłącza, komórki kallusowe, protoplasty, organy i systemy organów oraz merystemy. Takie składniki aktywne występują w kompozycjach w różnych formach. Formy takie obejmują czysty lub pół-czysty składnik, stały lub płynny ekstrakt lub jego pochodne, lub stałą substancję roślinną. Materiał roślinny może występowa w różnych subformach, na przykład w całości, siekany, miażdżony lub kruszony.

Ekstrakt z Azadirachta indica, miodli indyjskiej, tak jak ekstrakty z innych roślin z rodziny Meliaceae (miodlowate) są znane z właściwości owadobójczych. Azadirachtyna, główny składnik aktywny wielu z tych ekstraktów jest liminoidem typu tetranortriterpenoidów stosowanych w handlowych środkach owadobójczych. Tetranortriterpenoidy wykazują skuteczne działanie jako regulatory wzrostu owadów i deterenty pokarmowe. Sposoby wytwarzania koncentratów azadirachtyny z materiału nasiennego miodli indyjskiej są znane w stanie techniki. Przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5698423, Holowach-Keller i inni, jest sposób wytwarzania azadirachtyny przez kultury komórek Azadirachta indica.

Ekstrakty z Glycyrrhiza glabra linn. są pozyskiwane z ziela, które jest byliną rosnącą na obszarach subtropikalnych; i umiarkowanie ciepłych. Glycyrrhiza glabra Iinn., znana powszechnie jako lukrecja była stosowana do słodzenia żywności. Ekstrakt z korzenia zawiera kwas glicyryzynowy i kwas glicyretynowy. Kwas glicyryzynowy jest znany z działania przeciwzapalnego. Wykazano, że ekstrakt z korzenia lukrecji i kwas glicyretynowy mają działanie dezoksykortykosterono-podobne oraz kortykotropino(ACTH)-podobne. Znalazły one zastosowanie jako środki łagodzące oraz łagodne środki wykrztuśne. Badania in vitro wykazały działanie przeciwwirusowe glicyryzyniy: kwasu glicyretynowego (Zobacz: Badam, „In Vitro Studies on the Effect of Glycyrrhizin from Glycyrrhiza gabra linn. on some

PL 220 112 B1

RNA and DNA Viruses”, Ind. J. Pharma., 26, 194-199 (1994)). Ekstrakty z Glycyrrhiza glabra linn.

mogą być sporządzane według sposobów będących przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 6248309, Iyer i inni.

Ekstrakty z Morinda citrifolia są pozyskiwane z morwy indyjskiej. Morinda citrifolia znalazła zastosowanie w kompozycjach redukujących gromadzenie się oksysterolu we krwi oraz normalizujących cholesterol i ciśnienie krwi u ssaków, co jest przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych

Ameryki nr 6387370, Yegorowa. Sposoby ekstrahowania i oczyszczania olejku eterycznego z Morinda citrifolia są przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 6417157, Wadsworth i inni.

Ekstrakty glikolipidu pomidorowego są pozyskiwane z owocu pomidora. Sposoby ekstrahowania i syntetyzowania glikolipidów pomidorowych są przedmiotem opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4745186, Mudd i inni.

Ekstrakty z Butea frondosa, znanej także jako Butea monosperma, są pozyskiwane ze wschodnio indyjskiego drzewa liściastego. Butea frondosa znalazła zastosowanie jako środek ściągający oraz w leczeniu biegunki i czerwonki. Niedawno zostało zbadane zastosowanie Butea frondosa ze względu na jer przeciwzapalne działanie na oczy (Mengi, „Evaluation of Ocular Anti Inflamatory Activity of Butea frondosa 'Ind. J. Pharma. 27, 116-119 (1995)).

Ekstrakty z Naringi crenulata, znanej również jako Limonia crenulata, są pozyskiwane z małego drzewa występującego we wschodnich Indiach.

Stendoloma chusana jest byliną pochodzącą z południowo wschodniej Azji. Ekstrakty z tej rośliny są znane z zastosowania w leczeniu przeziębień, grypy, bronchitu, oparzeń, ran i owrzodzeń skóry („A Barefood Doctor's Manual”, Running Press, Philadelphia, PA, str. 638).

Ekstrakty te, nie były dotąd stosowane jako składniki aktywne kompozycji do rozjaśniania skóry.

Pożądane jest nowe zastosowanie kompozycji zawierającej nowe ekstrakty biologiczne, które dostarczają poprawę estetyki wyglądu skóry, zwłaszcza poprzez dostarczanie efektywnego poziomu rozświetlenia, rozjaśnienia, wybielenia, odbarwienia (określanego tu dalej indywidualnie i wspólnie jako „rozjaśnienie” lub „rozświetlenie”). Ponadto, pożądane jest zastosowanie kompozycji, które prowadzi do efektywnego rozjaśniania skóry i wymaga minimalnych stężeń materiału biologicznego.

WO 02/41855 tylko w opisie wymienia jedną roślinę Butea, która może być stosowana do kompozycji barwiącej, ale nie zamieszczono ani jednego przykładu z wykorzystaniem tej rośliny, ani nie zamieszczono jej w zastrzeżeniach patentowych.

Opis WO 02/36364 ujawnia roślinę Butea ogólnie w opisie; brak jest tutaj przykładu wykonania z zastosowaniem tej rośliny i w zastrzeżeniu 18 ogólnie podano ekstrakt roślinny jako składnik układu do nanoszenia barwnych wzorów na skórę.

Opis FR 2 822 678 ujawnia ekstrakty roślinne stosowano jako barwniki w kompozycji arom atycznej, lecz nie w takim składzie, jak w obecnie zastrzeganym zastosowaniu kompozycji.

CN 1147397 ujawnia zastosowanie Stenoloma chusana, głównym celem tego zgłoszenia było podawanie wewnętrzne leku w leczeniu raka piersi, raka macicy, raka żołądka, raka wątroby i raka jelita.

WO 02/41855, WO 02/036364 i FR 2 822 679 ujawniają skuteczną ilość ekstraktu Butea dla zapewnienia wybielenia skóry. Jednak, po wnikliwej analizie żaden z tych dokumentów nie ujawnia faktu, że ekstrakt Butea ma właściwości wybielające skórę. WO 02/41855 jedynie nadmienia fakt, że Butea monosperma, jako jeden z wielu nierozpuszczalnych w wodzie ekstraktów barwników roślinnych, może być zastosowany jako środek barwiący - a nie jako środek wybielający skórę lub rozjaśniający skórę.

Podobnie, WO 02/036364 jedynie nadmienia, że Butea monosperma, jako jeden z wielu ekstraktów barwników roślinnych ulegających dyspersji w tłuszczach, może być zastosowany jako środek barwiący - a nie jako środek wybielający skórę lub rozjaśniający skórę.

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji zawierającej ekstrakt z Butea frondosa do wytwarzania kosmetyku do rozjaśniania skóry poprzez stosowanie miejscowe na skórę człowieka potrzebującego rozjaśnienia skóry.

Korzystnie ekstrakt występuje w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Korzystnie ekstrakt występuje w ilości od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Korzystnie ekstrakt występuje w ilości 1% wagowego lub mniejszej w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

PL 220 112 B1

Korzystnie kompozycja zawiera co najmniej jeden ekstrakt dodatkowy w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji, wybrany z grupy składającej się z Naringi crenulata, Stenoloma chusana, Azadirachta indica, Glycyrrhiza glabra linn., Morinda citrifolia, glikolipidu pomidorowego lub ich kombinacji.

Korzystnie co najmniej jeden ekstrakt dodatkowy występuje ilości od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Kompozycje, są korzystnie kompozycjami miejscowymi do stosowania na skórę. We wszystkich zastosowaniach kompozycje powodują efekt rozjaśnienia skóry.

Kompozycje stosowane według wynalazku na skórę, poprawiają wygląd skóry.

Kompozycje zawierają jeden lub więcej spośród następujących ekstraktów, jako biologicznie aktywny ekstrakt roślinny lub składnik(i) lub w aktywnej zawartości: Butea frondosa, Naringi crenulata, Stenoloma chusana lub wszelkie ich kombinacje. Nieoczekiwanie stwierdzono, że te aktywne ekstrakty poprawiają estetykę wyglądu skóry, w szczególności poprzez redukowanie pigmentacji i rozjaśnianie skóry. Bardziej szczegółowo, te aktywne ekstrakty niespodziewanie wykazały działanie zmniejszające wytwarzanie melaniny oraz zmniejszające stany hipermelanocytyczne. Obecnie zostało również stwierdzone, że dodatek co najmniej jednego z tych aktywnych ekstraktów, mianowicie Butea frondosa, Naringi crenulata, Stenoloma chusana lub wszelkich ich kombinacji, do co najmniej jednego spośród innych lub dodatkowych ekstraktów, mianowicie Aza-dirachta India, Glycyrriza glabra Iinn., Morinda citrifolia, glikolipid pomidorowy lub wszelkich ich kombinacji, może zmniejszać pigmentację skóry.

Rozjaśnianie skóry, jako określenie stosowane w prezentowanym wynalazku, oznacza osiągnięcie jednej lub więcej z następujących korzyści. Korzyści te obejmują: rozjaśnianie przebarwionej skóry; redukowanie plam starczych; wyrównywanie i optymalizowanie przebarwień skóry; poprawianie wyglądu cieni pod oczami; rozjaśnianie piegów, blizn pooparzeniowych oraz przebarwień pourazowych.

Najbardziej ogólnie, przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji miejscowo na skórę, zawierającej skuteczną ilość jednego lub więcej spośród składników aktywnych prezentowanych w wynalazku, które poprawiają estetykę wyglądu skóry.

Kompozycje do miejscowego stosowania na skórę mają działanie przeciwstarzeniowe. Kompozycje te zawierają skuteczną ilość jednego lub więcej spośród prezentowanych w wynalazku aktywnych składników, które po zastosowaniu na ludzką skórę zapobiegają, łagodzą różne objawy starzenia, na obszarze lub części skóry, gdzie zostały zaaplikowane. Korzystne są kompozycje, które zapobiegają, wstrzymują, redukują i/lub łagodzą objawy starzenia się skóry, będące skutkiem na przykład, starzenia chronologicznego, hormonalnego i/lub fotostarzenia. Objawy te obejmują, ale nie są ograniczone do takich jak: wątłość skóry; utrata kolagenu i/lub elastyny; zaburzenia równowagi estrogenów w skórze; atrofia skóry; widoczność i/lub głębokość bruzd i/lub zmarszczek, łącznie z cienkimi liniami; przebarwienia skóry obejmujące podkrążone oczy; opadanie skóry; zmęczenie i/lub stres skóry, na przykład zmiany skórne powstałe na skutek stresu środowiskowego, jak zanieczyszczenie środowiska i/lub zmiany temperatur; suchość skóry; łuszczenie się skóry; starzenie komórkowe; utrata naturalnego odcienia, elastyczności i/lub blasku skóry; utrata jędrności skóry; uboga budowa skóry; utrata elastyczności i/lub giętkości; cienka skóra.

W najszerszym ujęciu, korzystny jest brak ograniczenia żadną szczegółową charakteryzacją fizjologicznego i/lub chemicznego działania ekstraktów i/lub czynników aktywnych. Jednak przypuszcza się, że aktywny ekstrakt oraz metody zastosowane w prezentowanych kompozycjach, redukują ilość melaniny na przebarwionych obszarach poprzez zmniejszanie wytwarzania ciemnego pigmentu w melanocytach oraz zmieniają syntezę melanin w kierunku wytwarzania jasnego pigmentu poprzez obniżanie pH melanocytów i/lub bezpośrednią chelatację metali zaangażowanych w syntezę lub zmiany barwy melaniny, na przykład miedzi.

Korzystnie zastosowane miejscowo kompozycje wstrzymują, uśmierzają, łagodzą i zapobiegają podrażnieniom i stanom zapalnym skóry, spowodowanym przez pożywienie, dolegliwość lub schorzenie lub wywołanym przez czynniki zewnętrzne, takie jak czynniki środowiskowe, chemiczne, medyczne i kosmetyczne. Podrażnienie skóry, może być zatem skutkiem ekspozycji na wiatr, ciepło lub zimno, zanieczyszczenia środowiska i dym papierosowy. Produkty farmaceutyczne i kosmetyczne mogą zawierać składniki lub kombinacje składników, które powodują widoczne podrażnienie skóry jako efekt uboczny. Skłonność skóry do podrażnień może być indywidualnie różna i często ogranicza użycie wielu produktów lub użycie składników aktywnych, w stężeniach, w których mogłyby dawać więcej korzystnych efektów w większym stopniu, ale powodują podrażnienie skóry jako efekt uboczny. Stany i objawy podrażnienia skóry obejmują, ale nie są ograniczone do takich jak: rumień, łuszczyca,

PL 220 112 B1 obrzęk, przebarwienia, odbarwienia, trądzik, brodawki, plamki, krostki, nierówny odcień skóry, łuszczenie, schodzenie skóry, swędzenie, napięcie skóry, pieczenie, palenie, mrowienie, drętwienie oraz podrażnienia spowodowane wiatrem, temperaturą, dymem, czynnikami chemicznymi, lub wszelkie ich kombinacje.

Produkty dermatologiczne, farmaceutyczne i kosmetyczne zwykle zawierają składnik lub składniki, które powodują podrażnienie skóry. Przykłady czynników aktywnych, które powodują podrażnienie skóry jako efekt uboczny obejmują, ale nie są ograniczone do takich jak: hydroksylowane kwasy i ich pochodne, alfa-hydroksykwasy (to jest, kwas mlekowy, glikolowy, cytrynowy, jabłkowy, winowy, migdałowy, glukonowy, metylomlekowy, fenylomlekowy, atromlekowy, glicerynowy, benzilowy, z-hydroksyheptanowy, z-hydroksyoktanowy oraz wszelkie ich mieszaniny), beta-hydroksykwasy (to jest, salicylowy, 5-n-oktanoilosalicylowy i inne pochodne kwasu salicylowego), retinoidy (kwas retinowy i jego pochodne; retinol i jego estry), antraliny (dioksyantranol), antranoidy, nadtlenki, (np. nadtlenek benzolu), minoxidil, sole litu, antymetabolity, witamina D i jej pochodne, barwniki lub farby do włosów (tj. parafenylenodiamina i jej pochodne, aminofenole), alkoholowe roztwory zapachowe (tj. perfumy, wody toaletowe, wody po goleniu, dezodoranty, składniki antyperspirantów (tj. niektóre sole glinu), depilatory i środki aktywne do trwałej ondulacji, (tj. tiole), czynniki odbarwiające (tj. hydrochinon) i niektóre środki owadobójcze. Jeśli produkty do stosowania miejscowego miałyby ochronę przeciwpodrażnieniową, byłoby możliwe zwiększenie ilości czynnika aktywnego powodującego zwykle podrażnienia (jak np. AHA lub BHA), bez powodowania nieprzyjemnego podrażnienia skóry lub podrażnieniowych efektów ubocznych. Zastosowanie prezentowanych kompozycji, umożliwia polepszenie efektywności produktów kosmetycznych, dermatologicznych lub farmaceutycznych, przez zwiększenie ilości kosmetycznego, dermatologicznego lub farmaceutycznego czynnika aktywnego w porównaniu do stężenia lub ilości, w jakiej jest zazwyczaj stosowany.

Korzystnie kompozycje, które poprawiają wygląd, a w szczególności rozjaśniają skórę, zawierają skuteczną ilość co najmniej jednego z następujących aktywnych ekstraktów: Butea frondosa, Naringi crenulata, Stenoloma chusana lub wszelkich ich kombinacji. Skuteczna ilość oznacza, że jeden lub więcej z aktywnych ekstraktów występuje w ilości od 0,001% wagowych do 20% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Jeden lub więcej z ekstraktów aktywnych występuje korzystnie w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych, a bardziej korzystnie od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Najbardziej korzystnie jeden lub więcej z ekstraktów aktywnych występuje w ilości 1% wagowego lub mniejszej, w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Jak określono powyżej, korzystnie kompozycje rozjaśniające skórę zawierają skuteczną ilość co najmniej jednego aktywnego ekstraktu i jeden lub więcej innych lub dodatkowych ekstraktów: Azadirachta India, Glycyrrhiza glabra linn., Morinda citrifolia, glikolipid pomidorowy lub wszelkich ich kombinacji, które synergistycznie wzmacniają wybielające działanie kompozycji.

Jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Korzystnie, jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Najbardziej korzystnie jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości równej lub mniejszej niż 1% wagowy w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

W połączeniu z jednym lub więcej z dodatkowych ekstraktów, ekstrakty aktywne występują w kompozycjach w ilości od 0,001% wagowych do 10% wagowych, a jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Korzystnie, ekstrakty aktywne występują w ilości od 0,5% wagowych do 10% wagowych, a jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości od 0,05% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Najbardziej korzystnie, jeden lub więcej z ekstraktów aktywnych występuje w ilości równej lub mniejszej niż 1% wagowy i jeden lub więcej z dodatkowych ekstraktów występuje w ilości równej lub mniejszej niż 1% wagowy w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Kompozycje mogą być stosowane z nośnikiem. Nośnik może być modyfikowany, aby być stosownym do specyficznego zastosowania kompozycji, bez zmieniania korzystnego działania rozjaśniającego, osiągniętego przy użyciu jednego lub więcej z aktywnych ekstraktów opisanych powyżej. Nośniki, które mogą być użyte w kompozycjach, obejmują, ale nie są ograniczone do takich jak woda, oleje roślinne, estry jak na przykład następujące: palmitynian oktylu, mirystynian izopropylu i palmitynian izopropylu; etery, na przykład eter dikaprylowy i izosorbid dimetylowy; alkohole, takie jak etanol

PL 220 112 B1 i izopropanol; alkohole tłuszczowe, takie jak alkohol cetylowy, stearylowy i behenylowy; izoparafiny, na przykład izooktan, izododekan, izoheksadekan; oleje silikonowe, na przykład dimetikony i polisiloksany; oleje węglowodorowe, na przykład olej mineralny, wazelina, izoejkozan i poliizobuten; poliliole, na przykład glikol propylenowy, gliceryna, glikol butylenowy, glikol pentylenowy i glikol heksylenowy lub wszelkie ich kombinacje.

Korzystnie nośnik występuje w ilości od 50% wagowych do 99,8% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji. Bardziej korzystnie nośnik występuje w ilości od 80% wagowych do 99,5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Prezentowane kompozycje mogą również zawierać jeden lub więcej składników obejmujących: środki anestetyczne, antyalergeniczne, przeciwgrzybicze, przeciwdrobnoustrojowe, przeciwzapalne, przeciwutleniacze, środki antyseptyczne, czynniki chelatujące, barwniki, środki rozjaśniające, emolienty, emulgatory, eksfolianty, czynniki powłokotwórcze, środki zapachowe, środki utrzymujące wilgoć, środki odstraszające owady, środki poprawiające smarowanie, środki nawilżające, środki farmaceutyczne, czynniki fotostabilizujące, konserwanty, środki chroniące skórę, środki poprawiające penetrację skóry, filtry słoneczne, stabilizatory, środki powierzchniowo czynne, zagęstniki, modyfikatory lepkości, witaminy lub wszelkie ich kombinacje. Korzystnie, składniki te występują w ilości od 0,001% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

Kompozycje mogą również zawierać środki rozjaśniające skórę. Niektóre przykłady takich odpowiednich środków rozjaśniających skórę obejmują, ale nie są ograniczone do jednego lub więcej z następujących: glukozyd askorbylowy, witamina C, retinol i/lub jego pochodne, arbutyna, ekstrakt z mącznicy lekarskiej, ekstrakt z rumex crispus, proteiny mleczne obejmujące hydrolizowane proteiny mleczne, N,N,S-tris(karboksymetylo)cystamina, kwas oleanolowy, oleje z perilli, ekstrakt z łożyska (placenta), saxifragria sarmentosa, kwas jałowcowy, TDPA, ligusticum chiangxiong hort., asmunda japonica thunb, stellaria medica (L.) cyr., sedum sarmentosum bunge, ligusticum lucidum Ait., ilex purpura hassk., emblika, apigenina, palmitol askorbylowy, polifenole carruba, hesperytyna, hydrochinon, polifenol inabata, izoliquirtagenina, kamferol-7-neohesperydoza, L-mimozyna, luteolina, rozpuszczalny w oleju ekstrakt z lukrecji-PT (40), oksy kwasy, izotiocyjanian metylu, kokocyn, sylimaryna, T4CA, tetrahydrokurkumina, unitrienol, kwas urosolowo-oleanolowy, UVA/URSI lub wszelkie ich kombinacje.

Kompozycje mogą być przygotowane w jakiejkolwiek stosownej formie produktu. Takie formy produktów obejmują, ale nie są ograniczone do następujących: spray aerozolowy, krem, dyspersja, emulsja, piana, żel, płyn, lotion, pianka, maść, mgiełka, pomada, puder, spray z pompką, forma stała, roztwór, sztyft i ręczniczki kosmetyczne.

Kompozycje dostarczają produkty, zwłaszcza produkty kosmetyczne, które polepszają rozjaśnianie skóry. Ponadto, prezentowane kompozycje mogą być przygotowane do dostarczania odpowiedniego poziomu składnika aktywnego lub mieszaniny składników tak, aby osiągnąć pożądany efekt kosmetyczny.

Następujące przykłady są przykładami prezentowanego wynalazku.

P r z y k ł a d 1

Badanie poboru melanosomów (Stenolama Chusana i Naringi Crenulata) zostało wykonane jak poniżej. Konfluentne kultury melanocytów B16 wytwarzają umiarkowany poziom melanosomów. Natomiast, aby wywołać zwiększone wytwarzanie melanosomów w tej linii komórkowej, semikonfluentne (60%) kultury komórek B16 poddawano przez 36 godzin działaniu normalnego czynnika wzrostowego, uzupełnionego 10 mM chlorku amonu (stężenie końcowe). Środek był następnie aspirowany, a hipermelanotyczne komórki płukane wodą destylowaną (2 x 2 ml), aby spowodować hipotoniczny stres komórek. Podwielokrotna część (2 ml) hipotonicznego roztworu rozpuszczającego komórki (0,02%

NP-40 w wodzie) została dodana do każdej płytki, po czym płytki były inkubowane w przybliżeniu przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Następnie weryfikowano lizę komórek przy użyciu mikroskopii świetlnej. Materiał komórkowy z trzech płytek z kulturami został umieszczony w 15 ml rurze stożkowej i był odwirowywany (200 x g) przez 5 minut, aby usunąć szczątki komórkowe. Powstały nadsącz zawierający melanosomy został przeniesiony do czystej 15 ml rury stożkowej i był odwirowywany (850 x g) przez 20 min. Ostateczny osad zawierający wyizolowane melanosomy, został powtórnie zawieszony w 1 ml solanki buforowanej fosforanem (PBS) i był przechowywany przed użyciem w temperaturze 4°C.

Traktowanie keratynocytów melanosomami było mierzone jak poniżej. Normalne ludzkie keratynocyty naskórkowe (NHEKs) (dostępne z Clonetic, Inc.) umieszczono w zbiornikach 24 zbiornikowych

PL 220 112 B1 płytek w zagęszczeniu 200000 komórek na zbiornik. W przybliżeniu po 24 godzinach środek wzrostowy został zastąpiony 1 ml właściwego środka wzrostowego (to jest, DMEM/KGM-2) zawierającego preparat melanosomowy, z lub bez dodatkowych warunków traktowania. Komórki były poddawane działaniu różnych stężeń ekstraktu z liścia perlili (w formie płynnej lub sproszkowanej). Następnie komórki ponownie umieszczano w inkubatorze na 1-1,5 godziny. Podczas tych badań, każdy zbiornik zawierający keratynocyty był traktowany mlanosomami wyizolowanymi z pojedynczej płytki komórek B16.

W niektórych eksperymentach 24 zbiornikowe płytki z traktowanymi keratynocytami były odwirowywane przez 15 minut przy 1000 obrotów na minutę, aby ułatwić osadzanie się melanosomów na powierzchni błon keratynocytów. Następnie płytki ponownie umieszczano w inkubatorze na 1,25 godz.

W celu analizy poboru melanosomów, komórki w każdym zbiorniku z keratynocytami były płukane (3 x 1 ml) PBS, usuwane z płytki przy użyciu trypsyny/EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy) i przemywane PBS. W celu analizy poboru melanosomów przez keratynocyty, ekstrahowano internalizowaną melaninę z komórek, zgodnie ze zmodyfikowaną metodą Bessou-Touya, S. i inni. (Chimeric Human Epiderma Reconstructs To Study The Role Of Melanocytes And Keratinocytes In Pigmentation And Photoprotection. J. Invest. Dermatol., 111 : 1103-1108, 1998) i określono ilościowo z zastosowaniem spektrofotometrii przy określeniu absorbancji specyficznej dla melaniny przy 405 nm.

Melanocyty syntetyzują melaninę i magazynują ją w melanosomach. Wizualna manifestacja koloru skóry jest spowodowana występowaniem melaniny/melanosomów w keratynocytach. Melanosomy są pobierane przez keratynocyty, a stopień pochłonięcia, retencji i przetworzenia melanosomów w keratynocytach jest kluczowym czynnikiem warunkującym kolor skóry. Ilość internalizowanej melaniny odzwierciedla stopień pobrania i retencji melaniny/melanosomów przez keratynocyty. Zatem, niska ilość internalizowanej melaniny, szczegółowo ilości internalizowanej melaniny niższe niż w przypadku próby kontrolnej z melaniną wskazują, że pobór melaniny przez keratynocyty został wstrzymany.

Wyniki są następujące. Przy 0,5% objętościowych na objętość Stenolama Chusana wykazała właściwości zmniejszające pobór melanosomów o 44% w porównaniu z dodatnią próbą kontrolną. Przy 0,5% objętościowych na objętość Naringi Crenulata wykazała właściwości zmniejszające pobór melanosomów o 39% w porównaniu z dodatnią próbą kontrolną.

P r z y k ł a d 2

W celu analizy B16 (Naringi Crenulata) składniki aktywne były testowane na monowarstwowej kulturze mysich komórek czerniaka B16. Te komórki istotnie wytwarzają melaninę i są modelowym systemem do kontroli inhibicji syntezy melaniny. Komórki umieszczono na 96 zbiornikowych płytkach ₃ w ilości 5 x 10³ komórek na zbiornik i przyłączono kulturę na 24 godziny. Następnie wymieniono pożywki na świeże, zawierające ekstrakty roślinne. Każdy składnik aktywny był aplikowany do 6 zbiorników komórek B16 na 96 zbiornikowych płytkach, aby umożliwić analizę statystyczną. Komórki były traktowane samą pożywką jako próby ujemne lub testowanym materiałem przez 7 dni. Płytki były odczytywane przy 540 nm w celu wykrycia wytwarzania melaniny. Wzrost absorbancji przy 540 nm odzwierciedla wyższą zawartość melaniny w zbiorniku.

Przy 0,05% wagowych na objętość Naringi Crenulata wykazała właściwości obniżające pigmentacje o 61% w porównaniu z dodatnią próbą kontrolną.

P r z y k ł a d 3 14

Po włączeniu ¹⁴C-Dopa (Butea frondosa) aktywność melanogeniczna była mierzona poprzez 14 pomiar promieniotwórczej melaniny wytwarzanej, gdy ¹⁴C-Dopa jest przekształcany w nierozpuszczalny w kwasach biopolimer melaniny w komórkach czerniaka B16F10. Komórki umieszczono na 24-zbiornikowych płytkach w zagęszczaniu 2 x 10⁴ komórek na zbiornik i przyłączono kultury na godzin. Następnie zamieniono pożywki na świeże zawierające ekstrakty roślinne oraz 0,2 mikro 14 kiura ^Ci) C-Dopa. Komórki były dalej inkubowane przez 24 godz. Po inkubacji, pożywki były usuwane, a komórki płukane PBS, rozpuszczane przez dodanie 0,125 ml 1N NaOH i inkubowane w 37°C przez 30 minut. Następnie były neutralizowane przy użyciu 0,025 ml 5N HCl. Powstałe lizaty komórkowe przeniesiono do cieczowych fiolek scyntylacyjnych i zmieszano z koktajlem scyntylacyjnym.

Następnie oznaczano promieniotwórczość przy użyciu licznika scyntylacyjnego. Z porcji lizatu komórkowego oznaczano zawartość protein przy użyciu metody Lowrego. Wyniki były normalizowane z ilością protein oznaczaną dla każdej próby.

Przy 0,005% wagowych na objętość Butea frondosa wykazała właściwości obniżające prze14 kształcanie ¹⁴C-Dopa o 22% w porównaniu z dodatnią próbą kontrolną.

PL 220 112 B1

P r z y k ł a d 4

Różne naturalne ekstrakty roślinne były oceniane pod względem inhibicji proteiny TNF-alfa podczas badań in vitro jak opisano poniżej.

Protokół dotyczący inhibicji TNF-alfa

Do badania efektywności Stenolama chusana Ching., Naringi Crenulata oraz Butea frondosa Roxb. w inhibicji wytwarzania TNF-alfa, użyto ilościową technikę (ELISA) dostępną handlowo od R&D Systems, immunopróby z enzymami ułożonymi warstwowo, w której monoklonalne przeciwciało, specyficzne dla TNF-alfa było uprzednio nałożone na płytkę microtiter. Unoszące się na powierzchni kultury komórek poddanych działaniu materiałów aktywnych, zostały przeniesione przy użyciu pipety do oddzielnych zbiorników. Unoszące się na powierzchni TNF-alfa było wiązane do płytki przez unieruchomione przeciwciało. Po kilku płukaniach w celu usunięcia uwolnionego przeciwciała, połączone z enzymem poliklonalne przeciwciało specyficzne dla TNF-alfa, zostało dodane do każdego zbiornika. Po wypłukaniu, w celu usunięcia uwolnionego reagentu enzym-przeciwciało, dodano do zbiorników roztwór substratu. Rozwój koloru jest proporcjonalny do ilości TNF-alfa związanej na etapie inicjacyjnym. Wyniki badania przedstawiono w Tabeli 1.

T a b e l a 1. Wyniki badań in vitro

Ekstrakt roślinny	Inhibicja TNF-alfa
Stenolama chusana Ching.	+ + +
Naringi Crenulata	+
Butea frondoza Roxb.	+ + +

Legenda: +, + +, + + + , + + + + Znacząca inhibicja (stopień zmiany określono liczbą znaków plus) (0) Brak zmiany

Badania in vitro wykazały, że kompozycje według wynalazku zawierające ekstrakty z Stenolama chusana Ching., Naringi Crenulata oraz Butea frondosa Roxb. działają korzystnie na skórę poprzez inhibicję wytwarzania proteiny TNF-alfa, przez co umożliwiają redukcję oznak subiektywnego dyskomfortu lub podrażnienia spowodowanego przez produkty kosmetyczne, dermatologiczne i farmaceutyczne, poprawiając w ten sposób wygląd skóry.

P r z y k ł a d 5

Stenolama chusana Ching. i Butea frondosa były oceniane w wielu badaniach z biopsją, w których naturalny ekstrakt roślinny był, jak opisano poniżej, umieszczany w kosmetycznie stosownym ₂ nośniku i aplikowany na wewnętrzną stronę przedramienia uczestników badania w ilości 2 mg/cm². Obszar przedramienia, na który zaaplikowano preparat z ekstraktem, został nakryty semi-okluzywnym plastrem. Procedurę tę powtarzano w ciągu 3 tygodni, przez 5 dni w tygodniu. Na końcu, znieczulano miejsca lidokainą i pobierano 2-milimetrowe biopsje z miejsca traktowanego preparatem i miejsca kontrolnego, nie traktowanego preparatem. Biopsje umieszczano w formalinie, osadzano w parafinie, podzielono i zabarwiano do otrzymania wyników badania.

Dla Stenolama chusana Ching. u 6 z 9 panelistów wystąpił wzrost proliferacji keratynocytów (uwidocznione przy przeciwciele dla KI67) oraz u 5 z 9 panelistów wzrost grubości żywych warstw naskórka.

Dla Butea frondosa u 5 z 8 panelistów wystąpił wzrost proliferacji keratynocytów (uwidocznione przy przeciwciele dla KI67) oraz u 5 z 8 panelistów wzrost grubości żywych warstw naskórka.

Claims (6)

1. Zastosowanie kompozycji zawierającej ekstrakt z Butea frondosa do wytwarzania kosmetyku do rozjaśniania skóry poprzez stosowanie miejscowe na skórę człowieka potrzebującego rozjaśnienia skóry.

2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że ekstrakt występuje w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

3. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że ekstrakt występuje w ilości od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

4. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że ekstrakt występuje w ilości 1% wagowego lub mniejszej w stosunku do całkowitej masy kompozycji.

PL 220 112 B1

5. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że kompozycja zawiera co najmniej jeden ekstrakt dodatkowy w ilości od 0,05% wagowych do 10% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji, wybrany z grupy składającej się z Naryngi crenulata, Stenoloma chusana, Azadirachta indica, Glycyrrhiza gabra linn., Morinda citrifolia, glikolipidu pomidorowego lub ich kombinacji.

6. Zastosowanie według zastrz. 5, znamienne tym, że co najmniej jeden ekstrakt dodatkowy występuje w ilości od 0,5% wagowych do 5% wagowych w stosunku do całkowitej masy kompozycji.