PL220399B1

PL220399B1 - Composition and formulation containing rosmarinic acid and thioproline, the use of this composition and a method for protecting the skin from the outside originating aging

Info

Publication number: PL220399B1
Application number: PL402105A
Authority: PL
Inventors: Irena Szołomicka-Orfinger; Katarzyna Rogiewicz; Renata Dębowska; Monika Pasikowska
Original assignee: Lab Kosmetyczne Dr Irena Eris Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością
Priority date: 2012-12-17
Filing date: 2012-12-17
Publication date: 2015-10-30
Also published as: PL402105A1

Description

Opis wynalazkuDescription of the invention

Przedmiotem wynalazku jest kompozycja i preparat zawierające tioprolinę i kwas rozmarynowy, zastosowanie tej kompozycji oraz sposób ochrony skóry przed procesem starzenia zewnątrzpochodnego.The subject of the invention is a composition and preparation containing thioproline and rosmarinic acid, the use of this composition and a method of protecting the skin against the extrinsic aging process.

Starzenie się skóry spowodowane jest działaniem czynników zewnątrzpochodnych (środowiskowych) i wewnątrzpochodnych, np. genetycznych. Wpływ uszkadzających czynników środowiska wyraża się przede wszystkim starzeniem przedwczesnym skóry, najbardziej widocznym w miejscach eksponowanych na przewlekłe działanie promieniowania ultrafioletowego - na skórze twarzy i rąk. Szacuje się, że 80% wszystkich zmian obserwowanych podczas procesu starzenia w skórze niechronionej jest indukowanych promieniowaniem ultrafioletowym.The aging of the skin is caused by the action of extrinsic (environmental) and intrinsic factors, e.g. genetic. The influence of damaging environmental factors is mainly expressed in premature skin aging, most visible in places exposed to chronic ultraviolet radiation - on the skin of the face and hands. It is estimated that 80% of all changes observed during the aging process in unprotected skin are induced by ultraviolet radiation.

Zmiany charakterystyczne dla procesu starzenia zewnątrzpochodnego w skórze wywołane są bezpośrednim działaniem promieni UVA i UVB oraz ich działaniem pośrednim związanym z wywołaniem reakcji zapalnej w komórkach skóry.The changes characteristic of the extrinsic aging process in the skin are caused by the direct action of UVA and UVB rays and their indirect action related to the triggering of an inflammatory reaction in skin cells.

Promienie UVA nie powodują zaczerwienienia skóry, ale odgrywają rolę w powstawaniu słonecznych zmian degeneracyjnych tkanki łącznej, niszczą kolagen, sprzyjają powstawaniu dermatoz i nowotworów skóry. Mogą też, podobnie jak promienie podczerwone, doprowadzać do uszkodzenia naczyń włosowatych i zaburzeń ukrwienia skóry.UVA rays do not cause reddening of the skin, but play a role in the formation of solar degenerative changes in connective tissue, destroy collagen, and promote the formation of dermatoses and skin cancer. They can also, like infrared rays, damage the capillaries and disturb the blood supply to the skin.

Promienie UVB są odpowiedzialne za rumień słoneczny, poparzenia skóry oraz odgrywają decydującą rolę w powstawaniu zmian przednowotworowych i nowotworów skóry (działanie mutagenne). Około 10% promieniowania UVB przenika do skóry właściwej, uszkadzając włókna podporowe. Promienie UVB stymulują w naskórku wydzielanie interleukin czy TNFa pośredniczących w powstawaniu reakcji zapalnej. W skórze właściwej dochodzi do zwiększonej syntezy i wzrostu aktywności metaloproteinaz rozkładających włókna kolagenowe, co doprowadza do zmniejszenia gęstości i utraty właściwości tkanki podporowej skóry.UVB rays are responsible for solar erythema, skin burns and play a decisive role in the formation of precancerous lesions and skin cancer (mutagenic effect). About 10% of UVB radiation penetrates into the dermis, damaging the supporting fibers. UVB rays stimulate the secretion of interleukins or TNFa in the epidermis, which mediate the inflammatory reaction. In the dermis, there is an increased synthesis and an increase in the activity of metalloproteinases that break down collagen fibers, which reduces the density and loses the properties of the skin's supporting tissue.

Zarówno bezpośrednie działanie promieniowania ultrafioletowego, jak i generowane przez niewolne rodniki uszkadzają elementy bariery naskórkowej. Degradacji ulegają składniki cementu międzykomórkowego warstwy rogowej (nienasycone lipidy) oraz zmniejsza się aktywność gruczołów łojowych. W przypadku cer suchych powoduje to pogorszenie bilansu wodnego skóry.Both the direct action of ultraviolet radiation and those generated by non-free radicals damage the elements of the epidermal barrier. The components of the intercellular cement of the stratum corneum (unsaturated lipids) are degraded and the activity of the sebaceous glands decreases. In the case of dry skin, it causes a deterioration of the water balance of the skin.

Oksydacyjne uszkodzenia DNAOxidative DNA damage

Materiał genetyczny wszystkich organizmów narażony jest na działanie czynników mających zdolność modyfikacji chemicznej struktury DNA. Należą do nich przede wszystkim promieniowanie ultrafioletowe, substancje chemiczne i wolne rodniki.The genetic material of all organisms is exposed to factors that can modify the chemical structure of DNA. These include, first of all, ultraviolet radiation, chemicals and free radicals.

Głównymi uszkodzeniami DNA pojawiającymi w wyniku działania promieniowania ultrafioletowego są uszkodzenia oksydacyjne oraz tzw. fotouszkodzenia, czyli powstawanie dimerów pirymidynowych (dimery tymidynowe i dimery tyminy z cytozyną) oraz fotoproduktów 6-4 (wiązanie pomiędzy węgłem 6 pierścienia pirymidyny w 5' nici DNA i węgłem 4 pirymidyny w 3' nici DNA). Pary sąsiadujących w łańcuchu DNA pirymidyn, powiązane wiązaniami kowalencyjnymi, zatrzymują w procesie replikacji włączanie nukleotydów przez polimerazę DNA III do nowo tworzonej nici kwasu nukleinowego, co powoduje fragmentację DNA i efekt letalny (Wójtkowiak D. i wsp.; Efekty oddziaływania promieniowania elektromagnetycznego - rola kosmetyków. Część I. Polish Journal of Cosmetology, 1999, 1: 10-33; Gajewski W.: Mutageneza, reperacja i rekombinacja DNA. Genetyka Molekularna, Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa, 2000, 248-279).The main damage to DNA resulting from the action of ultraviolet radiation is oxidative damage and the so-called photodamage, i.e. the formation of pyrimidine dimers (thymidine dimers and thymine dimers with cytosine) and photoproducts 6-4 (bonding between the 6th node of the pyrimidine ring in the 5 'DNA strand and the 4' pyrimidine node in the 3 'DNA strand). Pairs of adjacent pyrimidines in the DNA chain, linked by covalent bonds, stop the incorporation of nucleotides by DNA polymerase III into the newly formed nucleic acid strand in the replication process, which causes DNA fragmentation and a lethal effect (Wójtkowiak D. et al. Effects of electromagnetic radiation - the role of cosmetics) Part I. Polish Journal of Cosmetology, 1999, 1: 10-33; Gajewski W .: Mutagenesis, repair and recombination of DNA. Molecular Genetics, Polish Scientific Publishers PWN, Warsaw, 2000, 248-279).

Uszkodzenia oksydacyjne polegają na reakcji aktywnych form tlenu z resztami cukrowymi lub zasadami nukleinowymi. W wyniku tego procesu powstają 5-hydroksymetylouracyl (addukt) oraz utlenione formy pirymidyn i puryn (glikol tyminy, 8-oksoguanina jako uszkodzenie o charakterze mutagennym). Oddziaływania aktywnych form tlenu z resztami cukrowymi mogą powodować powstawanie wiązań między nićmi DNA i w efekcie końcowym doprowadzać do ich pęknięcia. Dla komórki jest to letalne (Gros L. i wsp.: Enzymology of the repair of free radicals-induced DNA damage. Oncogene, 2002, 21: 8905-8925).Oxidative damage is the reaction of active oxygen species with sugar residues or nucleic bases. As a result of this process, 5-hydroxymethyluracil (adduct) and oxidized forms of pyrimidines and purines (thymine glycol, 8-oxoguanine as mutagenic damage) are formed. Interactions of active oxygen species with sugar residues can cause the formation of bonds between DNA strands and ultimately lead to their breakage. It is lethal for the cell (Gros L. et al: Enzymology of the repair of free radicals-induced DNA damage. Oncogene, 2002, 21: 8905-8925).

Niezależnie od źródła czynnika uszkadzającego, wszystkie uszkodzenia DNA zmieniają strukturę chromosomów i zaburzają procesy replikacji DNA (Widłak P.: Struktura chromatyny a powstawanie i naprawa uszkodzeń DNA. Kosmos, 2002, 1(254): 5-12).Regardless of the source of the damaging factor, all DNA damage changes the structure of chromosomes and disrupts the processes of DNA replication (Widłak P .: The structure of chromatin and the formation and repair of DNA damage. Kosmos, 2002, 1 (254): 5-12).

Wpływ wolnych rodników na procesy starzenia się skóryThe influence of free radicals on skin aging processes

Poza bezpośrednim i pośrednim działaniem promieni UV bardzo duży wpływ na procesy starzenia się skóry mają wolne rodniki, zarówno uwalniane w atmosferze, jak i powstające wewnątrzIn addition to the direct and indirect action of UV rays, free radicals, both released in the atmosphere and generated inside, have a significant impact on the skin aging processes.

PL 220 399 B1 organizmu. Cząstki te działają zazwyczaj jako bardzo agresywne utleniacze, niszczące różne struktury skóry i naskórka. Wraz z wiekiem maleje sprawność własnych systemów antyutleniających organizmu (np. enzymów katalazy i dysmutazy ponadtlenkowej SOD) i skóra traci zdolność do samoregeneracji uszkodzeń (Ichihashi M. i wsp.: UV-induced skin damage. Toxicology, 2003, 189: 21-39). Do endogennych czynników wpływających na powstanie stresu oksydacyjnego należy m.in. proces glikacji, czyli, nieenzymatycznego przyłączania się wolnych reszt cukrowych glukozy i fruktozy do białek. Proces glikacji zmienia strukturę i właściwości białek. Konsekwencją tego procesu jest powstanie struktur o nazwie AGEs (Advanced Glycation Endproducts), które zakłócają wiele procesów metabolicznych. Jednym z nich jest obniżenie aktywności SOD, powodując zaburzenia w usuwaniu wolnych rodników (Liu JP i wsp.: The In Vitro Protective Effects of Curcumin and Demethoxycurcumin in Curcuma longa Extract on Advanced Glycation End Products-Induced Mesangial Cell Apoptosis and Oxidative Stress. Planta Med. 2012 Aug 24. [Epub ahead of print]).The organism. These particles usually act as very aggressive oxidants, destroying various structures of the skin and epidermis. With age, the efficiency of the body's own antioxidant systems (e.g. the enzymes catalase and SOD superoxide dismutase) decreases and the skin loses its ability to self-regenerate damage (Ichihashi M. et al. UV-induced skin damage. Toxicology, 2003, 189: 21-39) . Endogenous factors influencing the formation of oxidative stress include, inter alia, glycation process, i.e. non-enzymatic attachment of free sugar and fructose sugar residues to proteins. The glycation process changes the structure and properties of proteins. The consequence of this process is the formation of structures called AGEs (Advanced Glycation Endproducts), which interfere with many metabolic processes. One of them is the reduction of SOD activity, causing disturbances in the removal of free radicals (Liu JP et al .: The In Vitro Protective Effects of Curcumin and Demethoxycurcumin in Curcuma longa Extract on Advanced Glycation End Products-Induced Mesangial Cell Apoptosis and Oxidative Stress. Planta Med. 2012 Aug 24. [Epub ahead of print]).

Największym egzogennym źródłem aktywnych form tlenu, czyli wolnych rodników jest dym tytoniowy i spaliny. Wywołany w komórkach stres oksydacyjny prowadzi do: uszkodzeń błon biologicznych (peroksydacja lipidów) i związany z tym rozpad komórek naskórka, a w konsekwencji przyspieszenie elastozy skóry, uszkodzeń DNA, hamowania rozwoju/ różnicowania keratynocytów, indukcji procesów nowotworzenia oraz przyspieszenia apoptozy komórek skóry, a tym samym starzenia się skóry.The greatest exogenous source of active oxygen species, i.e. free radicals, is tobacco smoke and exhaust fumes. The oxidative stress induced in cells leads to: damage to biological membranes (lipid peroxidation) and the associated breakdown of epidermal cells, and consequently acceleration of skin elastosis, DNA damage, inhibition of keratinocyte development / differentiation, induction of neoplastic processes and acceleration of skin cell apoptosis, and thus skin aging.

Efektem stresu oksydacyjnego jest:The effect of oxidative stress is:

a. zaburzenie prawidłowego funkcjonowania układu immunologicznego skóry,a.disruption of the proper functioning of the skin's immune system,

b. zmiany w aktywności istotnych dla prawidłowego funkcjonowania komórki enzymów, receptorów błonowych i białek transportowych (kanały jonowe),b. changes in the activity of enzymes, membrane receptors and transport proteins (ion channels) essential for the proper functioning of the cell,

c. degradacja kolagenu poprzez aktywację MMP-1, stanowiącego główny budulec zdrowej skóry, które niszczone i niezdolne do regeneracji prowadzą do starzenia się skóry, przy jednoczesnej nadmiernej produkcji włókien elastycznych - włókna kolagenowe i elastyczne ulegają zbijaniu się,c. collagen degradation through the activation of MMP-1, which is the main building block of healthy skin, which, when damaged and unable to regenerate, leads to skin aging, with the simultaneous excessive production of elastic fibers - collagen and elastic fibers clump together,

d. skurcz naczyń krwionośnych w skórze, zmniejszenie transportu tlenu i substancji odżywczych, zaburzenia mikrokrążenia,d. contraction of blood vessels in the skin, reduction of oxygen and nutrient transport, microcirculation disorders,

e. spowolnienie procesu gojenia się ran,e. slowing down the wound healing process,

f. zwiększenie częstości występowania łuszczycy, co sprzyja wystąpieniu pierwszych zmian lub zaostrza objawy istniejącej choroby,f. increasing the incidence of psoriasis, which promotes the appearance of the first lesions or exacerbates the symptoms of an existing disease,

g. nasilenie objawów trądziku,g. aggravation of acne symptoms,

h. przyspieszenie wypadania włosów.h. accelerating hair loss.

W konsekwencji pojawia się zwiększona utrata wody (TEWL), suchość skóry, podatność na podrażnienia i wrażliwość na czynniki środowiskowe (ciepło, zimno, słońce, substancje chemiczne), przyspieszone tworzenie się zmarszczek (liczne, głębokie i wyraźnie zaznaczone), upośledzenie zdolności regeneracyjnych, zmniejszenie syntezy kolagenu i postępująca elastoza skóry.As a consequence, there is increased water loss (TEWL), dry skin, susceptibility to irritation and sensitivity to environmental factors (heat, cold, sun, chemicals), accelerated formation of wrinkles (numerous, deep and clearly marked), impairment of regenerative abilities, reduction of collagen synthesis and progressive skin elastosis.

Opisane zaburzenia powodują że osoby poddane stresowi oksydacyjnemu wyglądają na starsze niż są w rzeczywistości. Badania dowiodły, iż palenie średnio 20 papierosów dziennie przyspiesza fizjologiczny proces starzenia się skóry o 10 lat (Rosińska A. i wsp. Dermatologia dla kosmetologów. red. A. Kaszuba, Wyd. Naukowe UM w Poznaniu, 2008: 234-238).The described disorders make people under oxidative stress look older than they really are. Studies have shown that smoking an average of 20 cigarettes a day accelerates the physiological aging process of the skin by 10 years (Rosińska A. et al. Dermatology for cosmetologists. Ed. A. Kaszuba, Scientific Publication of the Medical University of Poznań, 2008: 234-238).

Wpływ wolnych rodników na rozwój cery naczyniowej i trądziku różowategoThe influence of free radicals on the development of vascular skin and rosacea

Przyczyny powstawania cery naczyniowej nie są do końca poznane. Uważa się, że w skórze właściwej niektórych okolic twarzy, a także szyi i dekoltu, dochodzi do zaburzeń krążenia, które mogą być spowodowane m.in. nadmierną ekspozycją skóry na działanie czynników środowiskowych, które wpływają na czynność naczyń krwionośnych skóry np. promieniowanie cieplne i UV oraz wolne rodniki.The causes of vascular complexion are not fully understood. It is believed that in the dermis of some areas of the face, as well as the neck and décolleté, there are circulatory disorders, which may be caused excessive exposure of the skin to environmental factors that affect the activity of the skin's blood vessels, e.g. heat and UV radiation as well as free radicals.

W większości przypadków wiele czynników nakłada się na siebie i u jednej osoby można wykryć kilka różnych przyczyn wystąpienia cery naczyniowej.In most cases, many factors overlap and in one person several different causes of vascular complexion can be detected.

Najnowsze doniesienia Yamasaki i Gallo sugerują że u podstaw wszystkich mechanizmów biorących udział w patogenezie trądziku różowatego leżą zaburzenia odpowiedzi immunologicznej. Szeroko opisywane czynniki zewnętrzne, pełniące rolę mechanizmów spustowych, indukują zaburzenia immunologiczne, prowadzące do powstawania objawów klinicznych choroby. Autorzy ci wśród mechanizmów patogenetycznych w trądziku różowatym za najistotniejsze uznali m.in. działanie reaktywnych form tlenu (ROS) i działanie promieniowania UV (Górkiewicz-Petkow A. Trądzik różowaty - etiopatogeneza i leczenie. Przegl. Dermatol 2007, 94(3); 373-383, Yamasaki K i wsp. The molecular pathology of rosacea. J Dermatol Sci 2009, Geria AN i wsp. Rosacea: a review. Kosmetische Medizin 2008,6: 303-308).Recent reports by Yamasaki and Gallo suggest that impaired immune responses lie at the root of all mechanisms involved in the pathogenesis of rosacea. The widely described external factors that act as trigger mechanisms induce immunological disorders, leading to the emergence of clinical symptoms of the disease. These authors considered the most important pathogenetic mechanisms in rosacea, i.a. action of reactive oxygen species (ROS) and action of UV radiation (Górkiewicz-Petkow A. Rosacea - etiopathogenesis and treatment. Przegl. Dermatol 2007, 94 (3); 373-383, Yamasaki K et al. The molecular pathology of rosacea. J Dermatol Sci 2009, Geria AN et al. Rosacea: a review. Kosmetische Medizin 2008.6: 303-308).

PL 220 399 B1PL 220 399 B1

Tioprolina (tymonacyk), czyli kwas tiazolidyno-4-karboksylowy jest metabolizowana do cysteiny, która wchodzi w skład białek włosów, naskórka, paznokci (białko keratyna) i glutationu. Glutation umożliwia detoksykację. Jest także źródłem licznych istotnych w funkcjonowaniu organizmu metabolitów.Thioproline (thymonacic acid), i.e. thiazolidine-4-carboxylic acid, is metabolized into cysteine, which is part of the proteins of hair, epidermis, nails (keratin protein) and glutathione. Glutathione enables detoxification. It is also a source of numerous metabolites important for the functioning of the organism.

Tioprolina pełni liczne funkcje w organizmie, między innymi działa lipotropowo: przeciwmiażdżycowo, obniża stężenie lipidów we krwi, chroni wątrobę, nerki i serce przed stłuszczeniem; działa żółciopędnie, rozkurczowo; ma działanie ochronnie na miąższ wątroby, chroniąc przed szkodliwymi czynnikami wirusowymi, bakteryjnymi, metalami ciężkimi, węglowodorami i lekami; poprawia strukturę i pobudza wzrost oraz regenerację naskórka, włosów i paznokci, ma ponadto właściwości przeciwtrądzikowe i przeciwłuszczycowe; a także, wraz z N-acetylocysteiną stanowią antyoksydanty, które znalazły zastosowanie w suplementacji anti-aging - Miguel J. Menopause: A review on the role of oxygen stress and favorable effects of dietary antioxidants. (2006) Arch Gerontol Geriatr; Guayerbas N. Thiolic antioxidant supplementation of the diet reverses age-related behavioural dysfunction in prematurely ageing mice. (2005) Pharmacol Biochem Behav 80: 45-51. W organizmie jest metabolizowana do cysteiny.Thioproline has many functions in the body, including lipotropic: antiatherosclerotic, lowers blood lipids, protects the liver, kidneys and heart against steatosis; works cholagogue, diastolic; has a protective effect on the liver parenchyma, protecting against harmful viral and bacterial agents, heavy metals, hydrocarbons and drugs; improves the structure and stimulates the growth and regeneration of the epidermis, hair and nails, it also has anti-acne and anti-psoriatic properties; and, together with N-acetylcysteine, they are antioxidants that have been used in anti-aging supplementation - Miguel J. Menopause: A review on the role of oxygen stress and favorable effects of dietary antioxidants. (2006) Arch Gerontol Geriatr; Guayerbas N. Thiolic antioxidant supplementation of the diet reverses age-related behavioral dysfunction in prematurely aging mice. (2005) Pharmacol Biochem Behav 80: 45-51. In the body, it is metabolized to cysteine.

W US 5047409 opisano sole tioproliny z 3-tlenkiem 6-piperydyno-2,4-diaminopirymidyny oraz ich miejscowe stosowanie, a także ich kosmetyczne i medyczne zastosowanie do leczenia utraty włosów lub stanów patologicznych takich jak między innymi łysienie, zapalenie skóry.US 5,047,409 describes the salts of thioproline with 6-piperidine-2,4-diaminopyrimidine 3-oxide and their topical application, as well as their cosmetic and medical use for the treatment of hair loss or pathological conditions such as alopecia, dermatitis, among others.

W US 6150405 ujawniono zastosowanie związków sulfhydrylowych, w tym tioproliny, do leczenia utraty włosów.US 6,150,405 discloses the use of sulfhydryl compounds including thioproline in the treatment of hair loss.

US 20040028787 wymieniono tioprolinę do aromatyzowania żywności i napojów, a także do stosowania w kosmetyce.US 20040028787 mentions thioproline for flavoring food and drink as well as for use in cosmetics.

Kwas rozmarynowy jest estrem kwasu kawowego i kwasu alfa-hydroksydihydrokawowego. Występuje powszechnie u gatunków z rodziny ogórecznikowatych (Boraginaceae) oraz u jasnotowatych (Lamiaceae) głównie w rozmarynie lekarskim. Posiada on szereg interesujących właściwości m.in. przeciwwirusowych, przeciwbakteryjnych, przeciwzapalnych oraz przeciw-utleniających (M. Sάnchez-Campillo, i wsp.: Rosmarinic acid, a photo-protective agent against UV and other ionizing radiations. Food Chem Toxicol. 2009 Feb;47(2): 386-92).Rosmarinic acid is an ester of caffeic acid and alpha-hydroxydihydroxy acid. It is common in species of the borage family (Boraginaceae) and in the Lamiaceae, mainly in rosemary. It has a number of interesting properties, incl. antiviral, antibacterial, anti-inflammatory and anti-oxidative (M. Sάnchez-Campillo, et al: Rosmarinic acid, a photo-protective agent against UV and other ionizing radiations. Food Chem Toxicol. 2009 Feb; 47 (2): 386-92 ).

Ester ten, dzięki swoim właściwościom przeciw-utleniającym, jest w stanie ograniczyć uszkodzenia związane z brakiem witaminy E, obniżyć produkcję prozapalnych lizofosfatydylocholin i przeciwdziałać utlenieniu LDL („zły” cholesterol). Kwas rozmarynowy działa egzogennie i endogennie jako czynnik foto-ochronny. W pierwszym przypadku działa jako zmiatacz wolnych rodników, a w drugim jako czynnik indukujący endogenne mechanizmy obronne, poprzez regulowanie aktywności tyrozynazy i stymulowanie produkcji melaniny.This ester, thanks to its antioxidant properties, is able to limit the damage associated with the lack of vitamin E, reduce the production of pro-inflammatory lysophosphatidylcholine and counteract the oxidation of LDL ("bad" cholesterol). Rosmarinic acid acts exogenously and endogenously as a photo-protective agent. In the first case, it acts as a free radical scavenger, and in the second, as a factor inducing endogenous defense mechanisms by regulating the activity of tyrosinase and stimulating the production of melanin.

Kwas rozmarynowy, dzięki swoim właściwościom przeciw-utleniającym oraz modulacji działania enzymów szlaku melanogenezy, może być interesującym narzędziem do walki ze skutkami nadmiernego promieniowania (Lee J. i wsp.: Rosmarinic acid induces melanogenesis through protein kinase A activation signaling. Biochem Pharmacol. 2007 Oct 1;74(7): 960-8).Rosmarinic acid, thanks to its antioxidant properties and modulation of the activity of enzymes of the melanogenesis pathway, can be an interesting tool to combat the effects of excessive radiation (Lee J. et al. Rosmarinic acid induces melanogenesis through protein kinase A activation signaling. Biochem Pharmacol. 2007 Oct 1; 74 (7): 960-8).

W przeprowadzonych testach związek ten obniżał w różnym stopniu aktywność: cyklooksygenazy 1 i 2, lipooksygenazy, hialuronidazy, b-heksozaminidazy, dekarboksylazy ornitynowej, reduktazy aldozowej, a-amylazy, karboksypeptydazy A, cyklazy adenylowej oraz dejodynazy jodotyroniny. Nie posiada jednak zdolności modyfikowania metabolizmu ksenobiotyków i nie zmienia aktywności enzymów obu faz detoksykacji. Cechuje go natomiast aktywność immunomodulująca. Pobudza produkcję prostaglandyny E2 oraz obniża syntezę leukotrienów B4 w ludzkich leukocytach różnokształtnojądrowych. Na układ dopełniacza, pełniącego istotną rolę w odczynie zapalnym, działa hamująco. Obserwowany pod jego wpływem efekt antytrombinowy powstaje przypuszczalnie w drodze zapobiegania agregacji płytek krwi lub ewentualnego pobudzania procesu fibrynolizy (Psotova J. i wsp.: Biological activities of Prunella vulgaris extract. Phytother Res. 2003 Nov;17(9): 1082-7; Murata T i wsp.: Hyaluronidase Inhibitory Rosmarinic Acid Derivatives from Meehania Urticifolia. Chem. Pharm. Bull. 59(1) 88-95 (2011); Aufmkolk M. i wsp.: The active principles of plant extracts with antithyrotropic activity: oxidation products of derivatives of 3,4-dihydroxycinnamic acid. Endocrinology. 1985 May; 116(5): 1677-86; Kusano G. i wsp.: Studies on inhibitory activities of fukiic acid esters on germination, alpha-amylase and carboxypeptidase A. Biol Pharm Bull. 1998 Sep;21(9): 997-9; Zhang JJ i wsp.: Rosmarinic acid inhibits proliferation and induces apoptosis of hepatic stellate cells. Biol Pharm Bull. 2011 Mar;34(3): 343-8).In the tests performed, this compound reduced the activity of: cyclooxygenase 1 and 2, lipoxygenase, hyaluronidase, b-hexosaminidase, ornithine decarboxylase, aldose reductase, a-amylase, carboxypeptidase A, adenyl cyclase and iodothyronine deiodinase to various degrees. However, it does not have the ability to modify the metabolism of xenobiotics and does not change the activity of the enzymes of both detoxification phases. However, it is characterized by immunomodulatory activity. It stimulates the production of prostaglandin E2 and lowers the synthesis of leukotriene B4 in human polynuclear leukocytes. It has an inhibitory effect on the complement system, which plays an important role in the inflammatory reaction. The antithrombin effect observed under its influence is presumably due to the prevention of platelet aggregation or the possible stimulation of the fibrinolysis process (Psotova J. et al. Biological activities of Prunella vulgaris extract. Phytother Res. 2003 Nov; 17 (9): 1082-7; Murata T et al .: Hyaluronidase Inhibitory Rosmarinic Acid Derivatives from Meehania Urticifolia. Chem. Pharm. Bull. 59 (1) 88-95 (2011); Aufmkolk M. et al .: The active principles of plant extracts with antithyrotropic activity: oxidation products of derivatives of 3,4-dihydroxycinnamic acid. Endocrinology. 1985 May; 116 (5): 1677-86; Kusano G. et al .: Studies on inhibitory activities of fukiic acid esters on germination, alpha-amylase and carboxypeptidase A. Biol Pharm Bull. 1998 Sep; 21 (9): 997-9; Zhang JJ et al: Rosmarinic acid inhibits proliferation and induces apoptosis of hepatic stellate cells. Biol Pharm Bull. 2011 Mar; 34 (3): 343-8).

PL 220 399 B1PL 220 399 B1

Jakkolwiek znanych jest szereg preparatów przeznaczonych do profilaktyki i leczenia starzenia się skóry, to nadal istnieje potrzeba opracowania skutecznych środków do ochrony skóry przed procesem starzenia zewnątrzpochodnego.Although a number of preparations for the prevention and treatment of skin aging are known, there is still a need to develop effective agents for the protection of the skin against the extrinsic aging process.

Spółka Laboratorium Kosmetyczne Dr Irena Eris Sp. z o.o. od lat zajmuje się nie tylko wytwarzaniem kosmetyków do stosowania zarówno przez salony kosmetyczne jak i do stosowania osobistego, ale także prowadzi sieć salonów kosmetycznych oraz salonów SPA, w których oferuje szeroką gamę zabiegów z użyciem tych kosmetyków.The company Laboratorium Kosmetyczne Dr Irena Eris Sp. z o.o. For years, it has been dealing not only with the production of cosmetics for use both by beauty salons and for personal use, but also runs a network of beauty salons and SPA salons, where it offers a wide range of treatments with the use of these cosmetics.

US 6492429 dotyczy kompozycji do leczenia choroby zwyrodnieniowej stawów, która składa się z apocyniny (inhibitora oksydazy NADPH), inhibitora indukowalnej syntazy tlenku azotu (iNOS) oraz substancji wzmacniającej działanie tej kompozycji. W opisie US 6492429 jako inhibitor iNOS wymieniono m.in. kwas rozmarynowy (akapit łączący 3. i 4. szpaltę). Jako substancję wzmacniającą działanie kompozycji wymieniono m.in. tioprolinę (4. szpalta, dolna część). W zastrzeżeniach jednak o tioprolinie się już nie wspomina, a jako jedyną substancję wzmacniającą wskazuje się kwasy bosweliowe (pochodzące np. z kadzidłowca, Boswellia, zwłaszcza Boswellia serrata). W US 6492429 nie ujawniono przy tym jakiejkolwiek konkretnej kompozycji, która zawierałaby jednocześnie kwas rozmarynowy i tioprolinę.US 6492429 relates to a composition for the treatment of osteoarthritis which consists of apocinin (an inhibitor of NADPH oxidase), an inducible nitric oxide synthase (iNOS) inhibitor, and an enhancer of the composition. In US 6492429, the iNOS inhibitor mentions, inter alia, rosmarinic acid (joining paragraph 3 and 4). As the substance enhancing the action of the composition, inter alia thioproline (4th column, lower part). In the claims, however, thioproline is no longer mentioned, and boswellic acids (e.g. derived from incense, Boswellia, especially Boswellia serrata) are indicated as the only enhancer. US 6492429 does not disclose any particular composition that would contain both rosmarinic acid and thioproline.

Wynalazek dotyczy kompozycji zawierającej tioprolinę i kwas rozmarynowy w synergicznie skutecznej ilości.The invention relates to a composition comprising thioproline and rosmarinic acid in a synergistically effective amount.

Kompozycję stanowi antyoksydacyjne połączenie tych związków, które spowalnia procesy starzenia zewnątrzpochodnego, uwarunkowanego działaniem czynników zewnętrznych (zanieczyszczenia) oraz jego najbardziej znanej formy - fotostarzenia, związanego z nadmierną ekspozycją na promieniowanie UV. Kompozycja ta znajduje zastosowanie w pielęgnacji skóry starzejącej się, suchej, odwodnionej, przesuszonej, wrażliwej, skóry naczyniowej i z trądzikiem różowatym, skóry poddanej działaniu promieniowania słonecznego i promieniowania stosowanego np. w solariach.The composition is an antioxidant combination of these compounds that slows down the processes of extrinsic aging, conditioned by the action of external factors (pollution) and its best known form - photoaging, associated with excessive exposure to UV radiation. This composition is used in the care of aging, dry, dehydrated, dry, sensitive skin, vascular skin and skin with rosacea, skin exposed to solar radiation and radiation used, for example, in tanning salons.

Środek kosmetyczny według wynalazku wykazuje liczne zalety na tle znanych ze stanu techniki preparatów.The cosmetic composition according to the invention has numerous advantages over the preparations known from the state of the art.

Z uwagi na synergiczne działanie składników możliwe jest użycie w preparacie mniejszej ilości tioproliny i kwasu rozmarynowego, a więc zmniejszenie prawdopodobieństwa wystąpienia nietolerancji, takich jak reakcja podrażnienia czy alergia.Due to the synergistic effect of the ingredients, it is possible to use less thioproline and rosmarinic acid in the preparation, thus reducing the likelihood of intolerance, such as irritation or allergy.

Kompozycję tioproliny i kwasu rozmarynowego można podawać w połączeniu z kosmetycznie dopuszczalnymi nośnikami lub rozcieńczalnikami w wielu różnych postaciach dawkowanych do stosowania miejscowo. Można je łączyć z wieloma różnymi kosmetycznie dopuszczalnymi, chemicznie obojętnymi nośnikami, w postać kremu, balsamu, lotionu, żelu, emulsji O/W i W/O, żeli myjących, itp., zgodnie ze standardową praktyką kosmetyczną.The thioproline and rosmarinic acid composition can be administered in conjunction with cosmetically acceptable carriers or diluents in a wide variety of topical dosage forms. They can be combined with a wide variety of cosmetically acceptable, chemically inert carriers, in the form of a cream, lotion, lotion, gel, O / W and W / O emulsions, cleansing gels, etc. in accordance with standard cosmetic practice.

Kremy i żele można np. formułować z wodnym lub oleistym podłożem, z dodatkiem odpowiednich środków zagęszczających i/lub żelujących i/lub rozpuszczalników. Takie podłoża mogą zawierać np. wodę i/lub olej, taki jak ciekła parafina lub dowolny olej roślinny, albo rozpuszczalnik, taki jak glikol polietylenowy. Do środków zagęszczających i środków żelujących, które można stosować w zależności od charakteru podłoża, należą miękka parafina, stearynian glinu, alkohol cetostearylowy, glikole polietylenowe, tłuszcz z wełny, wosk pszczeli, karboksypolimetylen i pochodne celulozy i/lub monostearynian glicerylu i/lub niejonowe środki emulgujące.Creams and gels may, for example, be formulated with an aqueous or oily base with the addition of suitable thickening and / or gelling agents and / or solvents. Such bases may contain, for example, water and / or an oil, such as liquid paraffin or any vegetable oil, or a solvent such as polyethylene glycol. Thickening agents and gelling agents which may be used depending on the nature of the base include soft paraffin, aluminum stearate, cetostearyl alcohol, polyethylene glycols, wool grease, beeswax, carboxypolymethylene and cellulose derivatives and / or glyceryl monostearate and / or non-ionic agents. emulsifying.

Emulsje O/W i W/O zawierają fazę wodną, fazę tłuszczową i środek powierzchniowo czynny lub mieszaninę środków powierzchniowo czynnych (emulgatorów), które umożliwiają powstanie emulsji. Stosunek ilościowy zależy od wymaganej konsystencji, od właściwości składników fazy tłuszczowej i właściwości emulgatora. Można je formułować poprzez połączenie fazy wodnej z fazą olejową z odpowiednimi emulgatorami. Faza wodna może zawierać ekstrakty roślinne wodne lub/i alkoholowe, faza olejowa - oleje roślinne naturalne (oleinowy, linolowy, linolenowy), parafinowe (wazelinowe, białe, mineralne, płynne parafiny), masła, oleje syntetyczne.O / W and W / O emulsions contain an aqueous phase, a fat phase, and a surfactant or mixture of surfactants (emulsifiers) which allows the emulsion to be formed. The quantity ratio depends on the required consistency, the properties of the fat phase ingredients and the properties of the emulsifier. They can be formulated by combining the water phase with the oil phase with suitable emulsifiers. The water phase may contain water and / or alcohol plant extracts, the oil phase - natural vegetable oils (olein, linoleic, linolenic), paraffinic (vaseline, white, mineral, liquid paraffins), butters, synthetic oils.

Lotiony można formułować z użyciem wodnego lub olejowego podłoża np. etanolu lub alkoholu oleilowego.Lotions may be formulated with an aqueous or oily base, e.g. ethanol or oleyl alcohol.

W razie potrzeby środki kosmetyczne według wynalazku można buforować przez dodanie odpowiednich środków buforujących.If desired, the cosmetic compositions of the invention may be buffered by adding suitable buffering agents.

Zazwyczaj preparaty zawierają również jeden lub większą liczbę środków emulgujących, stabilizatorów, środków dyspergujących, środków zagęszczających, środków barwiących, substancji zapachowych, środków konserwujących środków nawilżających itp.Typically, the formulations also contain one or more emulsifying agents, stabilizers, dispersing agents, thickening agents, colorants, fragrances, preservatives, wetting agents, etc.

PL 220 399 B1PL 220 399 B1

Nośniki odpowiednie do stosowania zgodnie z wynalazkiem obejmują stałe rozcieńczalniki lub wypełniacze, ośrodki wodne i różne nietoksyczne rozpuszczalniki organiczne i nieorganiczne.Suitable carriers for use in the invention include solid diluents or fillers, aqueous media, and various non-toxic organic and inorganic solvents.

Poniżej przedstawiono przykładowe ramowe receptury środków kosmetycznych oraz preparatów według wynalazku.The following are exemplary frame formulations of the cosmetic agents and formulations according to the invention.

Receptura ramowa kremów, balsamów, logionów, żeli i pianekFrame formulation of creams, lotions, logions, gels and foams

Składniki Ingredients Maksymalne stężenie Maximum concentration Oleje (roślinne i mineralne np. parafina ciekła), woski i alkohole tłuszczowe, lanolina i jej związki Oils (vegetable and mineral, e.g. liquid paraffin), waxes and fatty alcohols, lanolin and its compounds 95 95 Składniki nawilżające (np. gliceryna, glikol propylenowy, PEG) Moisturizing ingredients (e.g. glycerin, propylene glycol, PEG) 25 25 Składniki emulgujące (np. stearynian glicerylu, stearynian cynku) Emulsifying ingredients (e.g. glyceryl stearate, zinc stearate) 25 25 Silikony (np. dimetikon, cyklometikon) Silicones (e.g. dimethicone, cyclomethicone) 20 twenty Anionowe/amfoteryczne/niejonowe związki powierzchniowo czynne (np. sól sodowa oksyetylenowanego siarczanu krylowego) Anionic / amphoteric / non-ionic surfactants (e.g. sodium ethoxylated krill sulfate) 20 twenty Składniki zagęszczające (np. karbomer, eter celulozy, guma ksantanowa) Thickening ingredients (e.g. carbomer, cellulose ether, xanthan gum) 12 12 Emolienty (np. mirystynian izopropylu, alkohole tłuszczowe) Emollients (e.g. isopropyl myristate, fatty alcohols) 10 10 Składniki dodatkowe (np. witaminy, antyoksydanty, ekstrakty roślinne) Additional ingredients (e.g. vitamins, antioxidants, plant extracts) 10 10 Kationowe związki powierzchniowo czynne (>/= C12) i polimery (np. chlorek distearylodometyloamoniowy, polyquaterium-7) Cationic surfactants (> / = C12) and polymers (e.g. distearyl dimethyl ammonium chloride, polyquaterium-7) 5 5 Kompozycja zapachowa Scent composition 5 5 Stabilizatory (np. siarczan magnezu) Stabilizers (e.g. magnesium sulphate) 3 3 Konserwanty Preservatives 2 2 Barwniki Dyes 1 1 Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,09 0.09 Tioprolina Thioproline 3 3 Woda Water do 100 up to 100

Poniżej przedstawiono przykłady ilustrujące przedmiot wynalazku. W tabelach podano składy preparatów według wynalazku zawierających kompozycję według wynalazku.The following are examples that illustrate the subject matter of the invention. The tables show the compositions of the formulations according to the invention containing the compositions according to the invention.

PrzykładyExamples

P r z y k ł a d 1 - Krem tłustyExample 1 - Fatty cream

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1 1 2 2 3 3 1. 1. Ester hydroksydodecylowy kwasu palmitynowego (Emolient) Palmitic acid hydroxydodecyl ester (Emollient) 10,00 10.00 2. 2. Zmodyfikowany polieter-polisiloksan oraz poligliceryna; poli(kwas 12-hydroksystearynowy) (Emulgator) Modified polyether-polysiloxane and polyglycerin; poly (12-hydroxystearic acid) (Emulsifier) 3,00 3.00 3. 3. Cyklometykon (Silikon) Cyclomethicone (Silicone) 6,50 6.50 4. 4. 2-tert-butylo-4-metoksyfenol; 3-tert-butylo-4-metoksyfenol (Przeciwutleniacz) 2-tert-butyl-4-methoxyphenol; 3-tert-butyl-4-methoxyphenol (Antioxidant) 0,02 0.02 5. 5. Gliceryna Glycerine 5,00 5.00 6. 6. Siarczan magnezu Magnesium sulfate 1,00 1.00

PL 220 399 B1 ciąg dalszyTo be continued

1 1 2 2 3 3 7. 7. Olej winogronowy Grape seed oil 2,00 2.00 8. 8. Stearynian cynku Zinc stearate 2,00 2.00 9. 9. Wosk pszczeli Bee wax 0,50 0.50 10. 10. Chlorek 3-chloroallilometenaminy (środek konserwujący) 3-Chloroallylmethenamine chloride (preservative) 1,15 1.15 11. 11. Octan tokoferolu Tocopherol acetate 1,00 1.00 12. 12. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,02 0.02 13. 13. Tioprolina Thioproline 0,001 0.001 14. 14. Woda Water do 100 up to 100

P r z y k ł a d 2 - pianka do mycia twarzyP r z k ł a d 2 - face cleansing foam

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1. 1. PEG-7 Glyceryl Cocoate (Emolient) PEG-7 Glyceryl Cocoate (Emolient) 3,50 3.50 2. 2. D-pantenol D-panthenol 1,50 1.50 3. 3. Polimer hydroksyetylocelulozy (Zagęstnik) Hydroxyethyl cellulose polymer (Thickener) 0,40 0.40 4. 4. Gliceryna Glycerine 5,00 5.00 5. 5. Allantoina Allantoin 0,10 0.10 6. 6. Disodium ricinoleamino MEA-sulfosuccinate (środek powierzchniowo czynny) Disodium ricinoleamino MEA-sulfosuccinate (surfactant) 10,00 10.00 7. 7. Naturalna betaina, monohydrat (Substancja nawilżająca) Natural Betaine, Monohydrate (Moisturizing) 4,00 4.00 8. 8. Chlorek 3-chloroallilometenaminy (środek konserwujący) 3-Chloroallylmethenamine chloride (preservative) 0,12 0.12 9. 9. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,02 0.02 10. 10. Tioprolina Thioproline 0,0001 0.0001 11. 11. Woda Water do 100 up to 100

P r z y k ł a d 3 - żel pod prysznicExample 3 - shower gel

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1. 1. Barwniki Dyes 0,002 0.002 2. 2. Benzofenon-4 (Filtr UV) Benzophenone-4 (UV Filter) 0,50 0.50 3. 3. Gliceryna Glycerine 3,00 3.00 4. 4. Salicylan sodowy Sodium salicylate 0,50 0.50 5. 5. Sól sodowa siarczanu oksyetylenowanego alkoholu laurylowego (środek powierzchniowo czynny) Sodium salt of lauryl alcohol ethoxylate sulfate (surfactant) 27,00 27.00 6. 6. Sól salt 0,80 0.80 7. 7. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,03 0.03 8. 8. Tioprolina Thioproline 0,0001 0.0001 9. 9. Woda Water do 100 up to 100

PL 220 399 B1PL 220 399 B1

P r z y k ł a d 4 - Mleczko do demakijażuExample 4 - Make-up remover milk

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1. 1. Alkohol cetearylowy (alkohol tłuszczowy) Cetearyl alcohol (fatty alcohol) 0,90 0.90 2. 2. Ceteareth-20 (Emulgator) Ceteareth-20 (Emulsifier) 2,20 2.20 3. 3. Allantoina Allantoin 0,10 0.10 4. 4. Polimer usieciowany akrylan/C10-30 alkiloakrylan (Składnik zagęszczający) Cross-linked polymer acrylate / C10-30 alkyl acrylate (Thickening ingredient) 0,18 0.18 5. 5. PEG8; Tokoferol; palmitynian askorbylu; kwas askorbinowy (oraz) kwas cytrynowy (Przeciwutleniacze) PEG8; Tocopherol; Ascorbyl Palmitate; ascorbic acid (and) citric acid (Antioxidants) 0,05 0.05 6. 6. Wersenian dwusodowy Disodium edetate 0,05 0.05 7. 7. Gliceryna Glycerine 2,00 2.00 8. 8. Trójetanoloamina (Regulator pH) Triethanolamine (pH regulator) 0,18 0.18 9. 9. Olej wazelinowy Vaseline oil 18,00 18.00 10. 10. p-hydroksybenzoesan metylu (środek konserwujący) methyl p-hydroxybenzoate (preservative) 0,90 0.90 11. 11. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,02 0.02 12. 12. Tioprolina Thioproline 0,0001 0.0001 13. 13. Woda Water do 100 up to 100

P r z y k ł a d 5 - Balsam do ciałaP r z k ł a d 5 - Body lotion

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1. 1. Alkohol cetearylowy (alkohol tłuszczowy) Cetearyl alcohol (fatty alcohol) 1,20 1.20 2. 2. Ceteareth-20 (Emulgator) Ceteareth-20 (Emulsifier) 2,50 2.50 3. 3. Allantoina Allantoin 0,05 0.05 4. 4. Polimer usieciowany akrylan/C10-30 alkiloakrylan (Składnik zagęszczający) Cross-linked polymer acrylate / C10-30 alkyl acrylate (Thickening ingredient) 0,27 0.27 5. 5. Olej wazelinowy Vaseline oil 1,00 1.00 6. 6. Wersenian dwusodowy Disodium edetate 0,05 0.05 7. 7. Gliceryna Glycerine 2,00 2.00 8. 8. Dimetikon (Silikon) Dimethicone (Silicone) 1,00 1.00 9. 9. Olej wazelinowy Vaseline oil 17,00 17.00 10. 10. p-hydroksybenzoesan metylu (środek konserwujący) methyl p-hydroxybenzoate (preservative) 0,90 0.90 11. 11. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,04 0.04 12. 12. Tioprolina Thioproline 0,001 0.001 13. 13. Woda Water do 100 up to 100

P r z y k ł a d 6 - Krem nawilżającyExample 6 - Moisturizing cream

Lp. No. Nazwa składnika Ingredient name Zawartość [% wag.] Content [wt.%] 1 1 2 2 3 3 1. 1. Alkohol cetearylowy (alkohol tłuszczowy) Cetearyl alcohol (fatty alcohol) 4,00 4.00 2. 2. Ceteareth-20 (Emulgator) Ceteareth-20 (Emulsifier) 2,00 2.00 3. 3. Olej parafinowy Paraffin oil 3,00 3.00

PL 220 399 B1 ciąg dalszyTo be continued

1 1 2 2 3 3 4. 4. Wersenian dwusodowy Disodium edetate 0,02 0.02 5. 5. PEG8; Tokoferol; palmitynian askorbylu; kwas askorbinowy (oraz) kwas cytrynowy (Przeciwutleniacze) PEG8; Tocopherol; Ascorbyl Palmitate; ascorbic acid (and) citric acid (Antioxidants) 0,10 0.10 6. 6. Gliceryna Glycerine 2,00 2.00 7. 7. Polimer usieciowany akrylan/C10-30 alkiloakrylan (Składnik zagęszczający) Cross-linked polymer acrylate / C10-30 alkyl acrylate (Thickening ingredient) 0,12 0.12 8. 8. Palmitynian izopropylu Isopropyl palmitate 3,40 3.40 9. 9. Allantoina Allantoin 0,10 0.10 10. 10. Trójetanoloamina (Regulator pH) Triethanolamine (pH regulator) 0,12 0.12 11. 11. Masło roślinne Vegetable oil 1,80 1.80 12. 12. Olej sojowy Soybean oil 2,50 2.50 13. 13. Olej parafinowy Paraffin oil 1,20 1.20 14. 14. p-hydroksybenzoesan metylu (środek konserwujący) methyl p-hydroxybenzoate (preservative) 0,70 0.70 15. 15. Wazelina Petrolatum 3,50 3.50 16. 16. Dimetikon (Silikon) Dimethicone (Silicone) 1,00 1.00 17. 17. Kwas rozmarynowy zamknięty (30% czystej substancji) Closed rosemary acid (30% pure substance) 0,09 0.09 18. 18. Tioprolina Thioproline 0,0001 0.0001 19. 19. Woda Water do 100 up to 100

Próby biologiczneBiological tests

I. Test na zdolność zmiatania rodnika DPPH (właściwości przeciwutleniających) metodą elektronowego rezonansu paramagnetycznego EPR.I. Test for DPPH radical scavenging (antioxidant properties) by electronic paramagnetic resonance EPR.

1.1. Opis próby1.1. Description of the test

Rodnik 1,1-difenylo-2-pikrylohydrazylowy DPPH okazał się bardzo dobrym testerem właściwości antyutleniających, zwłaszcza polifenoli. DPPH w wyniku reakcji ze związkami zawierającymi wiązania C-H, N-H, O-H, S-H występuje jako akceptor wodoru i przekształca się w difenylopikrylohydrazynę. Do tej pory ukazało się wiele prac opisujących zastosowanie tego rodnika, w tym np. Ratz-Lyko A. i in. „Methods for evaluation of cosmetics antioxidant capacity” „Skin Research and technology” 2011, publ. 9 października 2011, Kusznierewicz B. i in. „Metody oznaczania in vitro właściwości przeciwutleniających próbek żywności” Cz. II Bromat. Chem. Toksykol 2006, 36: 261-270 Vertuani S. i in., oraz „Determination of antioxidant efficacy of cosmetic formulations by non-invasive measurements” Skin Res. Technol. 2003, 9: 245-253.The 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical DPPH turned out to be a very good tester of antioxidant properties, especially of polyphenols. DPPH reacts with compounds containing C-H, N-H, O-H, S-H bonds as a hydrogen acceptor and transforms into diphenylpicrylhydrazine. So far, many papers describing the use of this radical have been published, including, for example, Ratz-Lyko A. et al. "Methods for evaluation of cosmetics antioxidant capacity" "Skin Research and technology" 2011, published on October 9, 2011, Kusznierewicz B. et al. "Methods for determining in vitro antioxidant properties of food samples" Part. II Bromat. Chem. Toksykol 2006, 36: 261-270 Vertuani S. et al., And "Determination of antioxidant efficacy of cosmetic formulations by non-invasive measurements" Skin Res. Technol. 2003, 9: 245-253.

1.2. Wykonanie pomiarów - Technika pomiaru EPR1.2. Performing measurements - EPR measurement technique

Pomiary wykonano na spektrometrze Magnettech Miniscope MS200, promieniowanie o częstości 9.3 GHz (pasmo X), cyfrowy sygnał z detektora mikrofal poddawany jest obróbce komputerowej.Measurements were made on a Magnettech Miniscope MS200 spectrometer, radiation with a frequency of 9.3 GHz (X-band), the digital signal from the microwave detector is processed by computer.

Parametry pomiaru:Measurement parameters:

czas pomiaru 20 s Bo = 333,34 mT AB = 7,5 mT temp. pokojowa 22°Cmeasurement time 20 s Bo = 333.34 mT AB = 7.5 mT room temperature 22 ° C

1.3. Preparatyka1.3. Preparation

Do wyznaczenia pojemności antyoksydacyjnej TE przygotowano roztwory TioP (tioprolina w postaci odczynnika chemicznego (Merck)) i KR (kwas rozmarynowy w postaci surowca kosmetycznego (Basf)), o stężeniu 0,60 mg/ml w mieszaninie aceton-woda 1:1 (v/v). Przygotowane roztwory zmieszano z acetonowym roztworem rodnika DPPH (stężenie 0,45 mg/ml) w stosunku objętościowym 1:4. Próbki szczelnie zamknięto i pozostawiono na 1 h, mieszając co 15 min. Następnie wykonano pomiary EPR. Dla każdego preparatu procedurę powtórzono trzykrotnie. W celu określenia potencjalnego efektu synergicznego wykonano analogiczny eksperyment dla równoobjętościowej mieszaniny roztworów TioP i KR (0,5:0,5:4). Obliczono pojemność antyoksydacyjną badanych preparatów w przeliczeniu naTo determine the antioxidant capacity of TE, solutions of TioP (thioproline in the form of a chemical reagent (Merck)) and KR (rosmarinic acid in the form of a cosmetic raw material (Basf)) were prepared at a concentration of 0.60 mg / ml in a 1: 1 acetone-water mixture (v / v). The prepared solutions were mixed with an acetone solution of DPPH radical (concentration 0.45 mg / ml) in a 1: 4 volume ratio. The samples were tightly closed and left for 1 hour, stirring every 15 minutes. Then, EPR measurements were taken. For each formulation, the procedure was repeated three times. In order to determine the potential synergistic effect, an analogous experiment was performed for an equivolume mixture of TioP and KR solutions (0.5: 0.5: 4). The antioxidant capacity of the tested preparations was calculated in terms of

PL 220 399 B1 gram preparatu jako równoważniki wzorcowego antyoksydantu - Troloksu (mmol Troloksu na 1 g substancji lub 1 g mieszaniny; TE) i wyznaczono wartość średnią dla każdego preparatu. Większa wartość oznacza większą zdolność zmiatania rodnika.Grams of the preparation were obtained as equivalents of the reference antioxidant Trolox (mmol of Trolox per 1 g of substance or 1 g of mixture; TE) and the mean value for each preparation was determined. The greater the value, the greater the radical scavenging capacity.

I.4. WynikiI.4. Results

Próbka A sample Pojemność antyoksydacyjna Antioxidant capacity (mg/ml) (mg / ml) (TE)/g produktu (TE) / g of product TioP TioP 0,69 0.69 KR KR 3,36 3.36 TioP-KR TioP-KR 2,83 2.83

I.4.1. Metoda KullaI.4.1. Cull's method

Do oceny wyników pod względem występowania synergii zastosowano równanie Kulla, opracowane i opublikowane w roku 1961 przez F.C. Kulla i in. z Research Department CIBA Pharmaceutical Products (New Jersey). Zastosowanie równania Kulla do oceny synergii dwóch lub większej liczby surowców kosmetycznych w kompleksie patrz David C. Steinberg, Measuring Synergy, C&T 2000, tom 115, nr 11; Dębowska R. i in.. Synergistic effect of three active cosmetic ingredients on human skin cell cultures. 14-th EADV Conference, Londyn 2005.Cull's equation, developed and published in 1961 by F.C. Kulla et al. from Research Department CIBA Pharmaceutical Products (New Jersey). For the use of the Cull equation to evaluate the synergy of two or more cosmetic raw materials in a complex see David C. Steinberg, Measuring Synergy, C&T 2000, vol. 115, no. 11; Dębowska R. et al .. Synergistic effect of three active cosmetic ingredients on human skin cell cultures. 14th EADV Conference, London 2005.

Równanie Kulla:Cull's equation:

^wa ' TEą+b TE_a ^WB ' TEą+b TE~b gdzie: ^w a 'TEą + b TE _a ^W B' TEą + b TE ~ b where:

w_A oznacza ułamek wagowy substancji TioP wB oznacza ułamek wagowy substancji KRw _A is the weight fraction of the substance TioP wB is the weight fraction of the substance KR

TE_a oznacza pojemność antyoksydacyjną substancji TioP przy ułamku wagowym tej substancji TEB oznacza pojemność antyoksydacyjną substancji KR przy ułamku wagowym tej substancji TEA+B oznacza pojemność antyoksydacyjną mieszaniny substancji TioP i KRTE _a is the antioxidant capacity of the substance TioP at the weight fraction of this substance TEB is the antioxidant capacity of the substance KR at the weight fraction of this substance TEA + B is the antioxidant capacity of the mixture of TioP and KR substances

Wartość X większa od 1 wskazuje na działanie synergistyczne, a mniejsza od 1 wskazuje na działanie antagonistyczne. W przypadku badanych substancji wynosi ona: 2,47.An X value greater than 1 indicates a synergistic effect and less than 1 indicates an antagonistic effect. In the case of the tested substances, it amounts to: 2.47.

I.4.2. Metoda HidalgoI.4.2. Hidalgo method

Niezależnie, od oceny wyników pod względem występowania synergii zastosowano także równanie Hidalgo,Regardless of the assessment of the results in terms of synergy, the Hidalgo equation was also used,

ES% = ' TE_a+b - (TE_a + TEg) TE_a + TEgES% = 'TE _{a + b} - (TE _a + TEg) TE _a + TEg

100 opracowane dla oceny właściwości antyoksydacyjnych substancji i opublikowane w roku 2010 przez Hidalgo M. i in. w Food Chemistry 121 (2010) 691-696.100 developed to evaluate the antioxidant properties of substances and published in 2010 by Hidalgo M. et al. in Food Chemistry 121 (2010) 691-696.

Mieszanina roztworów wykazuje silny efekt synergiczny wynoszący +39,75%, zgodnie z równaniem Hidalgo.The solution mixture shows a strong synergistic effect of + 39.75%, according to the Hidalgo equation.

II. Badanie proliferacji keratynocytówII. Study of keratinocyte proliferation

Komórki hodowano przez 24 godz. w standardowym podłożu RPMI z antybiotykami i glutaminą, ₂ uzupełnionym 10% surowicą FCS. Następnie naświetlano komórki UVB=0,030 J/m², t=60 sek., i stymulowano badanymi substancjami w różnych stężeniach przez 24 godz. Żywotność komórek oceniono spektrofotometrycznie, testem MTT (testem redukcji pobranej przez komórki soli tetrazolowej MTT).Cells were grown for 24 h. in standard RPMI medium with antibiotics and glutamine, ₂ supplemented with 10% FCS serum. Then cells were irradiated with UVB = 0.030 J / m ² , t = 60 sec., And stimulated with the test substances at various concentrations for 24 hours. Cell viability was assessed spectrophotometrically by the MTT assay (MTT Tetrazole Salt Reduction Assay).

11.1. Test MTT11.1. MTT test

Test MTT jest testem kolorymetrycznym służącym do ilościowej oceny proliferacji komórek w odpowiedzi na różnorodne czynniki oraz potencjonalnego efektu cytotoksycznego i cytostatycznego tychże czynników. Jest on metodą powszechnie stosowaną np. przy ocenie cytotoksyczności substancji aktywnych o potencjalnym zastosowaniu w kosmetyce.The MTT test is a colorimetric test for the quantification of cell proliferation in response to a variety of factors and the potential cytotoxic and cytostatic effects of these factors. It is a commonly used method, for example, when assessing the cytotoxicity of active substances with potential application in cosmetics.

11.2. Zasada oznaczenia11.2. The principle of marking

MTT jest solą diazolową pobieraną przez komórki i redukowaną przez obecną w mitochondriach dehydrogenazę bursztynianową - jeden z enzymów łańcucha oddechowego aktywny tylko w żywych komórkach. MTT ulega redukcji do nierozpuszczalnego w wodzie formazanu, który gromadziMTT is a diazole salt taken up by cells and reduced by succinate dehydrogenase present in mitochondria - one of the respiratory chain enzymes active only in living cells. The MTT is reduced to water-insoluble formazan which it accumulates

PL 220 399 B1 się we wnętrzu komórek. Do pomiarów usuwano pożywkę znad komórek i dodawano roztwór MTT (100 μΐ/studzienkę) sporządzony w płynie hodowlanym DMEM w stężeniu 0,5 mg/ml. Następnie komórki umieszczano na 2 godziny w 37°C, 5% CO₂. Po tym czasie usuwano roztwór MTT znad komórek i dodawano do studzienki po 100 μl izopropanolu zakwaszonego 5 mM HCl w celu upłynnienia błon komórkowych oraz kryształków formazanu. Intensywność pojawiającego się fioletowego zabarwienia jest wprost proporcjonalna do ilości wytworzonego formazanu, która koreluje z ilością metabolicznie aktywnych komórek w hodowli. Pomiaru ilości formazanu dokonuje się spektrofotometrycznie w czytniku do mikropłytek przy długości fali świetlnej 595 nm względem ślepej próby (izopropanol zakwaszony 5 mM HCl). Test MTT z ww. surowcami wykonano trzykrotnie (po 3 powtórzenia każdej kombinacji).Inside the cells. For measurements, the medium above the cells was removed and a solution of MTT (100 µΐ / well) prepared in DMEM culture fluid at a concentration of 0.5 mg / ml was added. The cells were then placed for 2 hours at 37 ° C, 5% CO ₂ . After this time, the MTT solution was removed from the cells and 100 µl of isopropanol acidified with 5 mM HCl was added to the well to liquefy cell membranes and formazan crystals. The intensity of the purple color that appears is directly proportional to the amount of formazan produced, which correlates with the amount of metabolically active cells in the culture. The quantity of formazan is measured spectrophotometrically in a microplate reader at 595 nm against a blank (isopropanol acidified with 5 mM HCl). MTT test from the above-mentioned raw materials were made three times (3 repetitions of each combination).

III. Wyniki badań biologicznychIII. Results of biological research

III.1. Badanie przeżywalności komórek naskórka po napromieniowaniu UVB dla połączenia kwas rozmarynowy (KR) i tioprolina (TioP)III.1. Study of the viability of epidermal cells after UVB irradiation for the combination of rosmarinic acid (KR) and thioproline (TioP)

Żywotność komórek oceniono spektrofotometrycznie, testem MTT. Zarówno pojedynczo stosowane substancje, jak i w połączeniu wykazują korzystny efekt na keratynocyty - komórki wykazywały wyższy stopień przeżywalności po naświetlaniu UVB, a następnie po potraktowaniu testowanymi substancjami przez 24 godz., niż komórki kontrolne naświetlone w tych samych warunkach i nie poddane działaniu substancji po naświetleniu.Cell viability was assessed spectrophotometrically by MTT assay. Both the substances used individually and in combination show a favorable effect on keratinocytes - the cells showed a higher degree of survival after UVB irradiation and then after treatment with the test substances for 24 hours, than control cells irradiated under the same conditions and untreated after irradiation.

₂₂

Żywotność komórek jest wyższa o 1% w komórkach naświetlonych UVB (UVB = 0,030 J/m², t = 60 sek.), a następnie poddanych działaniu tioproliny w stężeniu 0,00001 mg/ml przez 24 godz., niż komórek kontrolnych naświetlonych UVB i nie potraktowanych substancją po naświetleniu.Cell viability is higher by 1% in the UVB-exposed cells (UVB = 0.030 J / m ^2, t = 60 sec.) And then treated tioproliny at a concentration of 0.00001 mg / ml for 24 hrs., Than control cells exposed UVB and untreated with the substance after irradiation.

₂₂

Żywotność komórek jest wyższa o 7,2% w komórkach naświetlonych UVB (UVB = 0,030 J/m , t = 60 sek.), a następnie poddanych działaniu kwasu rozmarynowego w stężeniu 0,01 mg/ml przez 24 godz., niż komórek kontrolnych naświetlonych UVB i nie potraktowanych substancją po naświetleniu.Cell viability is 7.2% higher in cells irradiated with UVB (UVB = 0.030 J / m, t = 60 sec.) And then treated with rosmarinic acid at a concentration of 0.01 mg / ml for 24 h, than in control cells exposed to UVB and untreated with substance after irradiation.

Wykazano, że kompozycja tioproliny i kwasu rozmarynowego wykazuje efekt synergiczny - przeżywalność keratynocytów po naświetlaniu w warunkach jw., a następnie poddanych działaniu kompozycji tioproliny i kwasu rozmarynowego (w stężeniu odpowiednio 0,00001 i 0,01 mg/ml) jest wyższa o 20% niż komórek kontrolnych (naświetlanych i nie poddanych działaniu substancji) oraz komórek naświetlanych i poddanych działaniu substancji stosowanych pojedynczo. Wykonano cztery niezależne eksperymenty, w których uzyskano efekt synergii.It was shown that the composition of thioproline and rosmarinic acid shows a synergistic effect - the survival of keratinocytes after irradiation under the above-mentioned conditions, and then treated with the composition of thioproline and rosmarinic acid (at a concentration of 0.00001 and 0.01 mg / ml, respectively) is higher by 20% than control (irradiated and untreated) cells and irradiated and treated cells singly. Four independent experiments were performed in which the synergy effect was obtained.

Efekt synergii równy 1,1305 wyliczono przy zastosowaniu równania Kulla.The synergy effect of 1.1305 was calculated using the Cull equation.

Keratynocyty, linia KB Keratinocytes, KB line Żywotność komórek (test MTT), wartość OD (opitcal density) przy długości fali 595 nm Cell viability (MTT test), OD (opitcal density) value at 595 nm % zwiększenia przeżywalności w stosunku do kontroli % increase in survival compared to control Komórki kontrolne naświetlone UVB 0,030 J/m², t=60 sek.Control cells exposed UVB 0.030 J / m ^2, t = 60 sec. 0,195 0.195 100% 100% Komórki poddane działaniu kwasu rozmarynowego 0,01 mg/ml po naświetlaniu UVB, przez 24 godz. Cells treated with rosmarinic acid 0.01 mg / ml after UVB irradiation for 24 hours. 0,207 0.207 107,2% 107.2% Komórki poddane działaniu tioproliny 0,00001 mg/ml po naświetlaniu UVB, przez 24 godz. Cells treated with thioproline 0.00001 mg / ml after UVB irradiation for 24 hours. 0,197 0.197 101% 101% Komórki poddane działaniu połączenia tioproliny i kwasu rozmarynowego (o stężeniach odpowiednio 0,00001 i 0,01 mg/ml) po naświetlaniu UVB, przez 24 godz. Cells treated with a combination of thioproline and rosmarinic acid (concentrations of 0.00001 and 0.01 mg / ml, respectively) after UVB irradiation for 24 hours. 0,234 0.234 120% 120%

III.2. Badania in vitroIII.2. In vitro research

W warunkach in vitro przebadano, na linii komórkowej naskórka KB, po naświetlaniu UVB, zarówno pojedyncze substancje, jak i ich połączenia w różnych stężeniach.In vitro, both individual substances and their combinations in various concentrations were tested on the KB epidermal cell line after UVB irradiation.

Najskuteczniejsze połączenie wykazujące efekt synergii, uzyskano dla połączenia TioP i KR o stężeniach odpowiednio 0,00001 i 0,01 mg/ml. Niemniej jednak połączenie TioP i KR o stężeniach odpowiednio 0,0001 i 0,1 mg/ml również wykazuje efekt synergii, który wynosi 1,0015 oraz w doświadczeniu gdzie występowało połączenie TioP i KR o stężeniach odpowiednio 0,000001 i 0,001 mg/ml wykazano efekt synergii wynoszący 1,1273.The most effective combination showing the synergy effect was obtained for the combination of TioP and KR with concentrations of 0.00001 and 0.01 mg / ml, respectively. Nevertheless, the combination of TioP and KR with concentrations of 0.0001 and 0.1 mg / ml, respectively, also showed a synergistic effect, which was 1.0015, and in the experiment where there was a combination of TioP and KR with concentrations of 0.000001 and 0.001 mg / ml, respectively, it was shown a synergy effect of 1.1273.

W poniższej tabeli podano ocenę zdolności proliferacyjnych komórek naskórka poddanych działaniu substancji.The table below shows the assessment of the proliferative capacity of the treated epidermal cells.

PL 220 399 B1PL 220 399 B1

Substancje aktywne i stężenie (w mg/ml) Active substances and concentration (in mg / ml) MTT (% przeżywalności w stosunku do kontroli) MTT (% survival in relation to the control) Synergia wyliczona metodą Kulla Synergy calculated by Cull's method Kontrola Control 100% 100% tioprolina thioproline 0,0001 0.0001 99,5% 99.5% tioprolina thioproline 0,00001 0.00001 101,0% 101.0% tioprolina thioproline 0,000001 0.000001 97,9% 97.9% kwas rozmarynowy rosmarinic acid 0,1 0.1 107,2% 107.2% kwas rozmarynowy rosmarinic acid 0,01 0.01 106,2% 106.2% kwas rozmarynowy rosmarinic acid 0,001 0.001 105,3% 105.3% tioprolina i kw. rozmarynowy thioproline and rosemary quartz 0,0001 i 0,1 0.0001 and 0.1 107,2% 107.2% 1,0015 1.0015 tioprolina i kw. rozmarynowy thioproline and rosemary quartz 0,00001 i 0,01 0.00001 and 0.01 120,0% 120.0% 1,1305 1.1305 tioprolina i kw. rozmarynowy thioproline and rosemary quartz 0,000001 i 0,001 0.000001 and 0.001 105,5% 105.5% 1,1273 1.1273

Najskuteczniejsze połączenie substancji uzyskano w mieszaninie związków w proporcji 0,001:1 (TioP:KR).The most effective combination of substances was obtained in a mixture of compounds in the proportion of 0.001: 1 (TioP: KR).

IV. Wniosek ogólny:IV. Overall conclusion:

Zarówno pojedynczo stosowane substancje, jak i w połączeniu wykazują pozytywny efekt na komórki - komórki wykazują wyższy stopień przeżywalności po potraktowaniu substancjami niż komórki kontrolne w tych samych warunkach i nie poddane działaniu substancji.Both the substances used individually and in combination have a positive effect on the cells - cells show a higher survival rate after treatment with substances than control cells under the same conditions and untreated.

Claims

Patent claims

A composition comprising thioproline and rosmarinic acid in a synergistically effective amount in a ratio of 0.00001: 1 to 1: 0.00001.

2. A composition according to claim 1 The composition of claim 1, characterized in that it comprises thioproline and rosmarinic acid in a ratio of from 0.0001: 1 to 1: 0.0001, more preferably from 0.01: 1 to 1: 0.01, in particular from 0.1: 1 to 1 : 0.1, especially 0.001: 1.

3. A composition according to p. The composition of claim 1, characterized in that it contains thioproline in an amount of 0.0001 and rosmarinic acid in an amount of 0.1, preferably thioproline in an amount of 0.000001 and rosmarinic acid in an amount of 0.001, most preferably thioproline in an amount of 0.00001 and rosmarinic acid in an amount of 0, 01 mg / ml.

4. A preparation containing the active ingredient and cosmetically acceptable excipients, carriers and additives, characterized in that the active ingredient is thioproline and rosarinic acid in a synergistically effective amount in a proportion of 0.00001: 1 to 1: 0.00001.

5. A formulation according to claim 1 The process according to claim 3, characterized in that it comprises thioproline and rosmarinic acid in a ratio of 0.00001: 1 to 1: 0.00001, more preferably 0.01: 1 to 1: 0.01, in particular 0.1: 1 to 1 : 0.1, especially 0.001: 1.

6. A formulation according to any one of claims 1 to 6 The formulation according to claim 4 or 5, characterized in that it contains thioproline in an amount of 0.00001% to 3% by weight, based on the total formulation, and rosmarinic acid in an amount of 0.02% to 0.09% by weight, based on the total formulation.

7. A formulation according to any one of claims 1 to 7 4-6, characterized in that it is in the form of a cream, lotion, lotion, aerosol, gel, fluid, concealer, O / W and W / O emulsion, tonic, washing gels, shampoos, foams, as well as milks, jellies, pastes , ointments, patches and transdermal patches.

8. A formulation according to any one of claims 1-8 4-7, characterized in that it is a cosmetic preparation.

9. The cosmetic use of a composition as defined in claim 1 1 to slow down, counteract, prevent extrinsic aging.

Use according to claim 1 9 to protect the skin against UV radiation, chemicals, free radicals and environmental factors.

11. The use according to claim 1 9 for skin care after exposure to UVA and / or UVB radiation.

PL 220 399 B1

12. Use according to p. 9 to protect the skin of heavy smokers and / or passive smokers.

13. Use according to claim 1 9 to protect the skin against free radicals generated in cells and / or released in the atmosphere.

14. Use according to claim 1 9 to protect the skin of people with vascular complexion and / or rosacea.

15. A method of cosmetically slowing, counteracting, preventing the extrinsic aging process of the skin, characterized in that the skin is treated with an effective amount of a composition as defined in claim 1. 1 and / or a formulation as defined in claim 1 and / or 4.

16. The method according to p. The method of claim 15, wherein the skin is treated before, during and / or after exposure to UV radiation, treatment with chemicals, environmental factors and / or free radicals.