PL225276B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnychInfo
- Publication number
- PL225276B1 PL225276B1 PL404542A PL40454213A PL225276B1 PL 225276 B1 PL225276 B1 PL 225276B1 PL 404542 A PL404542 A PL 404542A PL 40454213 A PL40454213 A PL 40454213A PL 225276 B1 PL225276 B1 PL 225276B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- weight
- sulphate
- agar
- sterilized
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 20
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 20
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 claims description 11
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims description 7
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 7
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- 241001557886 Trichoderma sp. Species 0.000 claims description 6
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000004128 Copper(II) sulphate Substances 0.000 claims description 5
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 2
- SSBRSHIQIANGKS-UHFFFAOYSA-N [amino(hydroxy)methylidene]azanium;hydrogen sulfate Chemical compound NC(N)=O.OS(O)(=O)=O SSBRSHIQIANGKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 9
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 9
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 108010059896 Manganese peroxidase Proteins 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L dipotassium;[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] phosphate Chemical compound [K+].[K+].OC[C@H]1O[C@H](OP([O-])([O-])=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L 0.000 description 3
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 2
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 2
- 241000894120 Trichoderma atroviride Species 0.000 description 2
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 241000221775 Hypocreales Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241001326533 Sordariomycetes Species 0.000 description 1
- 241000223260 Trichoderma harzianum Species 0.000 description 1
- 241000223262 Trichoderma longibrachiatum Species 0.000 description 1
- 241000223261 Trichoderma viride Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 description 1
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 239000010893 paper waste Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000009417 vegetative reproduction Effects 0.000 description 1
- 238000013466 vegetative reproduction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne.
W czasopiśmie Process Biochemistry 45 (2010) 507-513 ujawniono otrzymywanie preparatu enzymatycznego lakazy ze szczepu Trichoderma atroviride w hodowli w podłożu ciekłym zawierającym glukozę, baktopepton oraz makro- i mikroelementy.
Z czasopisma Folia Microbiologica 47 (2002) 423-427 jest znany sposób otrzymywania preparatu lakazy w drodze hodowli wgłębnej szczepu grzyba strzępkowego Trichoderma atroviride i Trichoderma harzianum w podłożu zawierającym glukozę oraz makroelementy.
W czasopiśmie Bulgarian Journal of Agricultural Science 13 (2007) 349-355 opisany został sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego lakazy w hodowli wgłębnej w podłożu ciekłym zawierającym makro- i mikroelementy oraz związki fenolowe szczepów Trichoderma viride i Trichoderma longibrachiatum.
Znany jest także, z czasopisma Applied Microbiology and Biotechnology 38 (1992) 198-202 sposób otrzymywania lakaz z hodowli różnych szczepów Trichoderma sp. na podłożu stałym.
W czasopiśmie Carbonyl Polymers 23 (1994) 161-163 wskazano szczep Trichoderma QM9123 jako producenta celulaz w hodowli na podłożu zawierającym odpady papierowe.
Natomiast w czasopiśmie Enzyme and Microbial Technology 9 (1987) 739-743 opisano hodowle na różnych podłożach grzyba strzępkowego Trichoderma QM9123, w czasie których otrzymano kompleks celulaz.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się szczep pleśni Trichoderma sp. oznaczony symbolem QM9123, należący do klasy Sordariomycetes, rzędu Hypocreales, rodziny Hypocreacea i rodzaju Trichoderma, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 4-35°C, cechujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 30°C obficie rosnąc na agarze brzęczkowym i już po 4 dniach pokrywając się początkowo białą, a następnie aksamitną ciemnozieloną grzybnią. Konidiofory są bardzo rozgałęzione i produkują konidia o średnicy 3-5 pm, zazwyczaj zielone, które służą do rozmnażania wegetatywnego, bardzo często heterokariotyczne, które niezależnie rozwijają się w grzybnię. Produkowane są także formy przetrwalnikowe - chlamydosfory, które pozostają we wnętrzu strzępków.
Po raz pierwszy szczep Trichoderma QM9123 został wyizolowany w Natick Laboratories MA USA poprzez radiację konidiów szczepu QM6a w akceleratorze liniowym; stwierdzono że szczep ten produkuje dwukrotnie więcej celulaz niż szczep macierzysty.
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Trichoderma sp. QM9123, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego glukozę i sole mineralne i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęs zczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że ze szczepu grzyba nitkowatego Trichoderma sp. QM9123 sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wag owych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx 20 części Wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 6-8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 30°C w czasie 5 dni. Następnie zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 17,2-30 części zmielonej słomy pszennej i 1000 części wody destylowanej zawierającej w 1 litrze: glukozy 10-15 g, wodorofosforanu (V) dipotasu 1,0-1,5 g, siarczanu (VI) magnezu 0,24-0,37 g, chlorku wapnia 0,1-0,15 g, siarczanu (VI) żelaza (II) 2,66-4,1 mg, siarczanu (VI) amonu lub mocznika 0,30-0,45 g, siarczanu (VI) cynku 2,8-4,213 mg, chlorku potasu 0,50-0,75 g, siarczanu (VI) miedzi (II) 0,250-0,375 g, siarczanu (VI) manganu (II) 45,0-70,0 mg oraz 1,11-1,73 g gwajakolu i wyjściowym pH 5,6-6,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 min- , przy stopniu wypełnienia kolb 15-25%, w zakresie temperatur 28-32° C w czasie 336-480 godzin. Otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 30°C lub metodą ultrafiltracji w temperaturze 25°C.
PL 225 276 B1
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1.
Szczep Trichoderma sp QM9123 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28°C w, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przyg otowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wy sterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane o składzie: 17,55 g zmielonej słomy pszennej, 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 10,63 g glukozy, 1,07 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,287 g siarczanu (VI) magnezu ,0,107 g chlorku wapnia, 2,66 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,342 g siarczanu (VI) am onu, 3,044 mg siarczanu (VI) cynku, 0,563 g chlorku potasu, 0,338 g siarczanu (VI) miedzi (II), 50,93 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,152 g gwajakolu i wyjściowym pH 5,64, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 200 min- , przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 378 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/1]: lakazy - 900,00, peroksydazy manganozależnej -1,44, peroksydazy ligninowej - 0,49.
P r z y k ł a d 2.
Szczep Trichoderma sp QM9123 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28°C w, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 2 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wyst erylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane o składzie 30,0 g zmielonej słomy pszennej, 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 15 g glukozy, 1,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,366 g siarczanu (VI) magnezu, 0,15 g chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,45 g siarczanu (VI) amonu, 4,213 mg siarczanu 5 (VI) cynku, 0,75 g chlorku potasu, 0,375 g siarczanu (VI) miedzi (II), 67,01 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,728 g gwajakolu i wyjściowym pH 6,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 220 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 25%, w zakresie temperatur 2832°C w czasie 480 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/1]: lakazy - 658,00, peroksydazy manganozależnej - 0,87, peroksydazy ligninowej - 1,21.
P r z y k ł a d 3.
Szczep Trichoderma sp QM9123 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28°C w, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 3 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym, zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane o składzie: 17,9 g zmielonej słomy pszennej, 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 10,54 g glukozy, 1,06 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,281 g siarczanu (VI) magnezu, 0,106 g chlorku wapnia, 2,67 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,336 g siarczanu (VI) amonu, 3,011 mg siarczanu (VI) cynku, 0,554 g chlorku potasu, 0,325 g siarczanu (VI) miedzi (II), 50,04 25 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,16 g gwajakolu i wyjściowym pH
5,64, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 min- , przy stopniu wypełnienia kolb 15 %, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 372 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/1]: lakazy - 650,00, peroksydazy manganozależnej - 0,87, peroksydazy ligninowej - 1,68.
P r z y k ł a d 4.
Szczep Trichoderma sp QM9123 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28° C w, wysterylizowanym w temperaturze 121°- C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx, 20 części wagowych agaru, 2 części wagowe ligniny
PL 225 276 B1 alkalicznej i 8 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodo wlane o składzie: 17,2 g zmielonej słomy pszennej, 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 10,72 g glukozy, 1,08 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,293 g siarczanu (VI) magnezu, 0,108 g chlorku wapnia, 2,65 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,348 g siarczanu (VI) amonu, 3,078 mg siarczanu (VI) cynku, 0,572 g chlorku potasu, 0,350 g siarczanu (VI) miedzi (II), 51,82 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,16 g gwajakolu i wyjściowym pH 5,66, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 200 min- , przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 384 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono piętnastokrotnie metodą ultrafiltracji w systemie Sartorium Vivaflow 200 w filtrach polisulfonowych o przepływie krzyżowym, o masie odcięcia 10000 MCWO, w temperaturze 25°C.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/1]: lakazy - 8530,24, peroksydazy manganozależnej - 4,76, peroksydazy ligninowej - 6,34.
P r z y k ł a d 5.
Szczep Trichoderma sp QM9123 uaktywniano w czasie 5 dni w temperaturze 28°C w, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx, 20 części wagowych agaru, 3 części wagowe ligniny alkalicznej i 6 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane o składzie: 20,0 g zmielonej słomy pszennej, 1000 ml wody destylowanej zawierającej: 10 g glukozy, 1,0 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,244 g siarczanu (VI) magnezu, 0,1 g chlorku wapnia, 2,73 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 0,3 g mocznika, 2,808 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5 g chlorku potasu, 0,25 g siarczanu (VI) miedzi (II), 45 mg siarczanu (VI) manganu (II), 1,11 g gwajakolu i wyjściowym pH
6,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 min- , przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32° C w czasie 336 godzin. Ciecz pohodowlaną, otrzymana w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 30°C przy szybkości obrotowej wyparki 120 min- .
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/1]: lakazy - 7818,95, peroksydazy
Claims (1)
- Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, w drodze hodowli szczepu grzyba nitkowatego Trichoderma sp. QM9123, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego glukozę i sole mineralne i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęs zczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, znamienny tym, że ze szczepu grzyba nitkowatego Trichoderma sp. QM9123 sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5° Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 6-8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 30°C w czasie 5 dni, następnie zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 17,2-30 części zmielonej słomy pszennej i 1000 części wody destylowanej zawierającej w 1 litrze: glukozy 10-15 g, wodorofosforanu (V) dipotasu 1,0-1,5 g, siarczanu (VI) magnezu 0,24-0,37 g, chlorku wapnia 0,1-0,15 g, siarczanu (VI) żelaza (II) 2,66-4,1 mg, siarczanu (VI) amonu lub mocznika 0,30-0,45 g, siarczanu (VI) cynku 2,8-4,2 mg, chlorku potasu 0,50-0,75 g, siarczanu (VI) miedzi (II) 0,250-0,375 g, siarczanu (VI) manganu (II) 45,0-70,0 mg oraz 1,11-1,73 g gwajakolu i wyjściowym pH 5,6-6,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsanąPL 225 276 B1 na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 min , przy stopniu wypełnienia kolb 15-25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 336-480 godzin, a otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 30°C lub metodą ultrafiltracji w temperaturze 25°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404542A PL225276B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404542A PL225276B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL404542A1 PL404542A1 (pl) | 2015-01-05 |
| PL225276B1 true PL225276B1 (pl) | 2017-03-31 |
Family
ID=52126388
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL404542A PL225276B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL225276B1 (pl) |
-
2013
- 2013-07-02 PL PL404542A patent/PL225276B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL404542A1 (pl) | 2015-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102796673B (zh) | 一株阿魏酸酯酶生产菌株及应用该菌株生产阿魏酸酯酶的方法 | |
| CN106190871B (zh) | 一种以秸秆为碳源的复合丝状真菌生物沥浸处理重金属污染土壤的方法 | |
| CN107815478B (zh) | 利用小金色链霉菌bjx007发酵生产春雷霉素的方法 | |
| Noorjahan et al. | Isolation and charecterisation of seaweed endophytic fungi as an efficient phosphate solubiizers | |
| CN110734876B (zh) | 一种巨大芽胞杆菌fjw1生防制剂及其制备方法和应用 | |
| US8460897B1 (en) | Methods of culturing fungi and producing cellulases and chitin | |
| CN109402027B (zh) | 一株具有抑制西瓜专化型尖孢镰刀菌作用的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN103074243B (zh) | 一株伯克霍尔德氏菌qz7及其产生生物表面活性剂的应用 | |
| Pathak et al. | Study of effect of temperature on amylase production by soil mycotic flora of Jabalpur region | |
| CN109536392B (zh) | 杂色曲霉zjb16085及合成r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸的应用 | |
| PL225276B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| JP6218264B2 (ja) | 消化汚泥の分解方法 | |
| CN117535156B (zh) | 一种篮状菌cft-1及其应用 | |
| CN103805527B (zh) | 一种云南链霉菌大理变种及其发酵培养液和应用 | |
| CN117568224A (zh) | 一种耐盐耐碱产酶菌及其应用 | |
| US8093035B2 (en) | Pseudomonas sp. strain and method of producing chitinase, chitosanase and nattokinase using the same | |
| CN105647812A (zh) | 一株裂褶菌菌株及其在普洱茶生产中的应用 | |
| CN109609389B (zh) | 草酸青霉zjb16086及其合成r-2-(4-羟基苯氧基)丙酸的应用 | |
| CN102154245B (zh) | 一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法 | |
| CN101210235B (zh) | 肉色曲霉生产浓缩碱性脂肪酶的方法 | |
| CN114574546A (zh) | 产漆酶高效降解黄曲霉毒素b1菌株的筛选方法 | |
| CN111041050A (zh) | 一种利用食品来源微生物发酵将茶叶中六价铬转化为三价铬的方法 | |
| WO2007010855A1 (ja) | 微生物によるｎ－アセチル－ｄ－グルコサミンの醗酵生産方法 | |
| PL227786B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| Namasivayam et al. | Enhanced production of alpha amylase using vegetables wastes by Aspergilllus niger strain SK 01 marine isola |