PL227786B1 - Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych Download PDFInfo
- Publication number
- PL227786B1 PL227786B1 PL404540A PL40454013A PL227786B1 PL 227786 B1 PL227786 B1 PL 227786B1 PL 404540 A PL404540 A PL 404540A PL 40454013 A PL40454013 A PL 40454013A PL 227786 B1 PL227786 B1 PL 227786B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- weight
- parts
- sulphate
- agar
- sterilized
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 29
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 16
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 claims description 11
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 claims description 11
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 10
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 10
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 10
- 108010059896 Manganese peroxidase Proteins 0.000 claims description 9
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 claims description 9
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 claims description 8
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 claims description 8
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 claims description 7
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 claims description 7
- 239000004128 Copper(II) sulphate Substances 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 6
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241001558165 Alternaria sp. Species 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000361 cobalt sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940044175 cobalt sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- -1 cobalt (VI) sulphate Chemical compound 0.000 description 5
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Chemical class 0.000 description 2
- 241000026165 Alternaria arborescens Species 0.000 description 1
- 241000213004 Alternaria solani Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001326550 Dothideomycetes Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001136502 Pleosporaceae Species 0.000 description 1
- 241000319939 Pleosporales Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L dipotassium;[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] phosphate Chemical compound [K+].[K+].OC[C@H]1O[C@H](OP([O-])([O-])=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000003309 forest litter Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne.
W czasopiśmie International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences 3 (2012) 143-148 ujawniono otrzymywanie preparatu enzymatycznego lakazy z szczepu Alternaria arborescens w hodowli w podłożu ciekłym zawierającym glukozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne.
Z czasopisma Agriculture and Biology Journal of North America 4 (2010) 591-599 znany jest sposób otrzymywania preparatu lakazy w drodze hodowli wgłębnej szczepu grzybów strzępkowych Alternaria alternata i Alternaria solani w podłożu zawierającym glukozę i sole mineralne.
W czasopiśmie Journal of Fermentation Technology 56 (1978) 543-545 opisany został sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego lakazy w hodowli wgłębnej w podłożu ciekłym zawierającym ekstrakt drożdżowy i ekstrakt z herbaty szczepu Alternaria tenuis A-2.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się, wyodrębniony ze środowiska naturalnego - ze ściółki lasu iglastego, szczep pleśni Alternaria sp. oznaczony symbolem AK0911 należący do klasy Dothideomycetes, rzędu Pleosporales, rodziny Pleosporaceae i rodzaju Alternaria, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 2-32°C, cechujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 25°C obficie rosnąc na agarze brzęczkowym i już po 4 dniach pokrywając się aksamitną grzybnią, ciemnoszarą, wełnowatą, wydzielając do podłoża barwnik melaninę. Konidiofory są septowane, w niewielkim stopniu rozgałęzione, z wielokomórkowymi konidiami na bokac i szczycie. Konidia mają kształt elipsoidalny lub cylindryczny o szerokości 8-17 pm i długości 25-56 pm zabarwione na kolor brunatny. Ostatnia komórka wypączkowuje nowe konidium.
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne, w drodze hodowli szczepu grzyba z rodzaju Alternaria, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego glukozę i sole mineralne i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Alternaria sp. AK0911, z którego sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu lub 20 części wagowych agaru i 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej, bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 28-32°C w czasie 3-6 dni. Następnie, zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne zawierające w 1000 ml wody destylowanej glukozy 5-15 g, wodorofosforami (V) dipotasu 0,5-1,5 g, siarczanu (VI) magnezu 0,122-0,367 g, chlorku wapnia 0,034-0,15 g, siarczanu (VI) żelaza (II) 0,91-4,1 mg, azotanu (V) sodu 1,5-5 g, siarczanu (VI) cynku 1,4-4,21 mg, chlorku potasu 0,25-0,75 g, siarczanu (VI) miedzi (II) 2,5-5 mg, siarczanu (VI) manganu (II) 20,1 -60,31 mg, siarczanu (VI) kobaltu 3,06-5,0 mg, molibdenianu (VI) amonu 2,35-7,06 mg i wyjściowym pH 4,5-5,23, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10-30%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 84-252 godzin. Otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 30°C lub metodą ultrafiltracji w temperaturze 25°C.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 8,23 g glukozy, 0,87 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 0,096 g chlorku wapnia, 2,28 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 5 g azotanu (V) sodu, 3,03 mg siarczanu (VI) cynku, 0,47 g chlorku
PL 227 786 B1 potasu, 3,82 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 39,96 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,13 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,89 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,11, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 191 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 966,67, peroksydaz ligninowych - 5,46, peroksydaz manganozależnych - 2,27.
P r z y k ł a d 2
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx, 20 części wagowych agaru i 0,6 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89 % roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 7,87 g glukozy, 0,84 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 95,88 mg chlorku wapnia, 2,19 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,73 g azotanu (V) sodu, 3,07 mg siarczanu (VI) cynku, 0,46 g chlorku potasu, 3,94 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 21,83 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,21 mg siarczanu (VI) kobaltu, 6,12 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,13, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 200 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 196 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 1458,33, peroksydaz ligninowych - 1,71, peroksydaz manganozależnych - 1,11.
P r z y k ł a d 3
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121 °C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 0,8 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 6,45 g glukozy, 0,74 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 93,13 mg chlorku wapnia, 1,83 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,55 g azotanu (V) sodu, 3,25 mg siarczanu (VI) cynku, 0,44 g chlorku potasu, 4,44 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 21,72 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,51 mg siarcza- nu(VI) kobaltu, 7,06 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,23, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną prz y szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 214 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 2391,67, peroksydaz ligninowych - 15,71, peroksydazy manganozależnych - 0,76.
P r z y k ł a d 4
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru, 0,6 części wagowych gwajakolu i 2 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,367 g siarczanu (VI) magnezu, 50 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5 g azotanu (V) sodu, 4,21 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 2,35 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 84 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 166,67, peroksydaz ligninowych - 11,61, peroksydaz manganozależnych - 11,36.
PL 227 786 B1
P r z y k ł a d 5
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru, 0,8 części wagowych gwajakolu i 3 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 1,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,367 g siarczanu (VI) magnezu, 150 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 4,5 g azotanu (V) sodu, 4,21 mg siarczanu (VI) cynku, 0,75 g chlorku potasu, 4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 60,31 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 2,35 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,00, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsną przy szybkości obrotowej 220 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 30%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 252 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 550,0 , peroksydaz ligninowych - 9,9, peroksydaz manganozależnych - 0,76.
P r z y k ł a d 6
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 5 g glukozy, 0,9 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 244,67 mg siarczanu (VI) magnezu, 97,25 mg chlorku wapnia, 2,37 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,87 g azotanu (V) sodu, 2,98 mg siarczanu (VI) cynku, 0,476 g chlorku potasu, 3,69 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 40 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,06 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,65 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,08, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32° C w czasie 186 godzin.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 816,67, peroksydaz ligninowych - 3,07, peroksydaz manganozależnych - 1,52.
P r z y k ł a d 7
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 3 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono uprzednio wysterylizowane, w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 10 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,122 g siarczanu (VI) magnezu, 0,034 g chlorku wapnia, 0,91 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,5 g azotanu (V) sodu, 1,404 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 2,5 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,104 mg siarczanu (VI) manganu (II), 5 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono 10-krotnie metodą ultrafiltracji w systemie Sartorium Vivaflow 50 w filtrach polisulfonowych o przepływie krzyżowym o masie odcięcia 5000 MCWO w temperaturze 25°C. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 3010,5, peroksydaz ligninowych -131,14.
P r z y k ł a d 8
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 2 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody
PL 227 786 B1 destylowanej zawierającej 11 g glukozy, 1 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,244 g siarczanu (VI) magnezu, 0,1 g chlorku wapnia, 2,73 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 3 g azotanu (V) sodu, 2,808 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5 g chlorku potasu, 5 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 40,207 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,52 mg siarczanu (VI) kobaltu, 3,69 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5 stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono 10-krotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 30°C przy szybkości obrotowej wyparki 120 minut-1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 4916,67, peroksydaz ligninowych - 295,56.
Claims (1)
1. Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne, w drodze hodowli szczepu grzyba z rodzaju Alternaria, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego glukozę i sole mineralne i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, znamienny tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Alternaria sp. AK0911, z którego sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu lub 20 części wagowych agaru i 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej, bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 28-32°C w czasie 3-6 dni, następnie zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekle podłoże produkcyjne zawierające w 1000 ml wody destylowanej glukozy 5-15 g, wodorofosforanu (V) dipotasu 0,5-1,5 g, siarczanu (VI) magnezu 0,122-0,367 g, chlorku wapnia 0,034-0,15 g, siarczanu (VI) żelaza (II) 0,91-4,1 mg, azotanu (V) sodu 1,5-5 g, siarczanu (VI) cynku 1,4- 4,21 mg, chlorku potasu 0,25-0,75 g, siarczanu (VI) miedzi (II) 2,5-5 mg, siarczanu (VI) manganu (II) 20,1-60,31 mg, siarczanu (VI) kobaltu 3,06-5,0 mg, molibdenianu (VI) amonu 2,35-7,06 mg i wyjściowym pH 4,5-5,23, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 min-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10-30%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 84-252 godzin, a otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 30°C lub metodą ultrafiltracji w temperaturze 25°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL404540A1 PL404540A1 (pl) | 2015-01-05 |
| PL227786B1 true PL227786B1 (pl) | 2018-01-31 |
Family
ID=52126386
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (pl) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL227786B1 (pl) |
-
2013
- 2013-07-02 PL PL404540A patent/PL227786B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL404540A1 (pl) | 2015-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102154407B (zh) | 北冬虫夏草多糖两阶段发酵合成工艺 | |
| AU2019413143A1 (en) | Strain producing ergothioneine and screening method thereof | |
| CN106801017A (zh) | 一种高产耐热蛋白酶及虫草素的蛹虫草菌株筛选及诱变方法 | |
| US9284535B2 (en) | Method for producing laccase by means of liquid fermentation of Lentinus edodes | |
| CN104031109B (zh) | 一种微生物发酵纯化茶皂素的方法 | |
| CN112568064B (zh) | 一种黑木耳菌种jh40及其应用 | |
| CN111394255B (zh) | 一种埋藏曲霉及其应用 | |
| CN101861794A (zh) | 一种北冬虫夏草液体菌种的生产方法 | |
| CN101586101A (zh) | 氯化锂诱变赤灵芝原生质体选育高产胞外多糖菌株的制备方法 | |
| CN106755182B (zh) | 一种促进灵芝液体发酵产胞外多糖的方法 | |
| CN107760610B (zh) | 一株长孢被孢霉及其应用 | |
| CN112544342B (zh) | 一种高效中华鹅膏菌专用培养基及其制备方法与应用 | |
| CN117887590B (zh) | 一种南华松茸促生菌及其应用 | |
| CN120519298A (zh) | 提高植物对盐碱地耐受性的组合物及其应用 | |
| PL227786B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| CN101861796B (zh) | 一种利用有色稻米发酵废糟培养豹斑毒鹅膏的方法 | |
| Yudiarti et al. | A novel filamentous fungus Acremonium charticola isolated from gathot (an Indonesian fermented dried cassava) | |
| KR102018118B1 (ko) | 민물 김(Prasioloa japonica) 단세포 실내 배양방법 | |
| CN112980698B (zh) | 微生物发酵碳源及其制备方法 | |
| CN103805542B (zh) | 一种用于粘细菌菌体规模制备的液体发酵方法 | |
| CN102154245B (zh) | 一种海洋草酸青霉菌产壳聚糖酶的方法 | |
| PL227785B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| EP2950657B1 (en) | Novel chitin/ demineralised dehydrated chitinaceous / crustacean exoskeleton -based formulation containing microbes that generate chitinase/ protease enzymes | |
| CN108624527B (zh) | 一种防治姜青枯病的银杏源促生制剂 | |
| CN113322192A (zh) | 一种黄精内生真菌抑制大肠杆菌剂及其制备方法和应用 |