PL227786B1 - Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes - Google Patents
Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes Download PDFInfo
- Publication number
- PL227786B1 PL227786B1 PL404540A PL40454013A PL227786B1 PL 227786 B1 PL227786 B1 PL 227786B1 PL 404540 A PL404540 A PL 404540A PL 40454013 A PL40454013 A PL 40454013A PL 227786 B1 PL227786 B1 PL 227786B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- weight
- parts
- sulphate
- agar
- sterilized
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 29
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 29
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 18
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 16
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 241000223600 Alternaria Species 0.000 claims description 11
- 108010054320 Lignin peroxidase Proteins 0.000 claims description 11
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 11
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 10
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 10
- 235000009529 zinc sulphate Nutrition 0.000 claims description 10
- 108010059896 Manganese peroxidase Proteins 0.000 claims description 9
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 claims description 9
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 9
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 claims description 8
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 claims description 8
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 claims description 7
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 claims description 7
- 239000004128 Copper(II) sulphate Substances 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 6
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241001558165 Alternaria sp. Species 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 2
- 229910000361 cobalt sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940044175 cobalt sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 18
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 9
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- -1 cobalt (VI) sulphate Chemical compound 0.000 description 5
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000223602 Alternaria alternata Species 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Chemical class 0.000 description 2
- 241000026165 Alternaria arborescens Species 0.000 description 1
- 241000213004 Alternaria solani Species 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001326550 Dothideomycetes Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001136502 Pleosporaceae Species 0.000 description 1
- 241000319939 Pleosporales Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L dipotassium;[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] phosphate Chemical compound [K+].[K+].OC[C@H]1O[C@H](OP([O-])([O-])=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O KCIDZIIHRGYJAE-YGFYJFDDSA-L 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000003309 forest litter Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N molybdate Chemical compound [O-][Mo]([O-])(=O)=O MEFBJEMVZONFCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033116 oxidation-reduction process Effects 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne.The subject of the invention is a method of obtaining a preparation of oxidation reduction enzymes containing laccases, lignin peroxidases and manganese-dependent peroxidases.
W czasopiśmie International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences 3 (2012) 143-148 ujawniono otrzymywanie preparatu enzymatycznego lakazy z szczepu Alternaria arborescens w hodowli w podłożu ciekłym zawierającym glukozę, ekstrakt drożdżowy i sole mineralne.The International Journal of Plant, Animal and Environmental Sciences 3 (2012) 143-148 discloses the preparation of an enzyme preparation of laccase from the strain Alternaria arborescens in culture in a liquid medium containing glucose, yeast extract and mineral salts.
Z czasopisma Agriculture and Biology Journal of North America 4 (2010) 591-599 znany jest sposób otrzymywania preparatu lakazy w drodze hodowli wgłębnej szczepu grzybów strzępkowych Alternaria alternata i Alternaria solani w podłożu zawierającym glukozę i sole mineralne.From the journal Agriculture and Biology Journal of North America 4 (2010) 591-599 there is known a method of obtaining a laccase preparation by submerged cultivation of a strain of filamentous fungi Alternaria alternata and Alternaria solani in a medium containing glucose and mineral salts.
W czasopiśmie Journal of Fermentation Technology 56 (1978) 543-545 opisany został sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego lakazy w hodowli wgłębnej w podłożu ciekłym zawierającym ekstrakt drożdżowy i ekstrakt z herbaty szczepu Alternaria tenuis A-2.The Journal of Fermentation Technology 56 (1978) 543-545 describes the preparation of laccase enzyme preparation in submerged culture in a liquid medium containing yeast extract and tea extract of the Alternaria tenuis A-2 strain.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się, wyodrębniony ze środowiska naturalnego - ze ściółki lasu iglastego, szczep pleśni Alternaria sp. oznaczony symbolem AK0911 należący do klasy Dothideomycetes, rzędu Pleosporales, rodziny Pleosporaceae i rodzaju Alternaria, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 2-32°C, cechujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 25°C obficie rosnąc na agarze brzęczkowym i już po 4 dniach pokrywając się aksamitną grzybnią, ciemnoszarą, wełnowatą, wydzielając do podłoża barwnik melaninę. Konidiofory są septowane, w niewielkim stopniu rozgałęzione, z wielokomórkowymi konidiami na bokac i szczycie. Konidia mają kształt elipsoidalny lub cylindryczny o szerokości 8-17 pm i długości 25-56 pm zabarwione na kolor brunatny. Ostatnia komórka wypączkowuje nowe konidium.The collection of the Institute of Technical Biochemistry of the Lodz University of Technology includes, isolated from the natural environment - from coniferous forest litter, the Alternaria sp. Mold strain marked with the symbol AK0911 belonging to the class Dothideomycetes, order Pleosporales, family Pleosporaceae and genus Alternaria, showing the ability to grow at a temperature of 2-32 ° C, characterized by a particularly rapid growth at 25 ° C, it grows abundantly on buzzer agar and after 4 days it becomes covered with velvety, dark gray, woolly mycelium, releasing the melanin dye into the substrate. Conidiophores are septated, slightly branched, with multicellular conidia at the side and apex. Conidia are ellipsoidal or cylindrical in shape, 8-17 µm wide and 25-56 µm long, brown in color. The last cell is producing a new conidium.
Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych, zawierającego lakazy, peroksydazy ligninowe i peroksydazy manganozależne, w drodze hodowli szczepu grzyba z rodzaju Alternaria, polegający na hodowli materiału posiewowego na wysterylizowanym podłożu zawierającym brzeczkę słodową, zaszczepieniu tym materiałem wysterylizowanego ciekłego podłoża produkcyjnego zawierającego glukozę i sole mineralne i prowadzeniu hodowli produkcyjnej wgłębnej w warunkach sterylnych, a po jej zakończeniu wyodrębnieniu i zagęszczeniu otrzymanej cieczy pohodowlanej, według wynalazku charakteryzuje się tym, że stosuje się szczep grzyba nitkowatego Alternaria sp. AK0911, z którego sporządza się materiał posiewowy na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłożu stałym zawierającym na 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx 20 części wagowych agaru lub 20 części wagowych agaru i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu lub 20 części wagowych agaru i 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej, bądź 20 części wagowych agaru, 2-3 części wagowych ligniny alkalicznej i 0,6-0,8 części wagowych gwajakolu, w temperaturze 28-32°C w czasie 3-6 dni. Następnie, zmywa się skos agarowy 0,89% roztworem chlorku sodowego i tak przygotowanym materiałem posiewowym szczepi się, wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, ciekłe podłoże produkcyjne zawierające w 1000 ml wody destylowanej glukozy 5-15 g, wodorofosforami (V) dipotasu 0,5-1,5 g, siarczanu (VI) magnezu 0,122-0,367 g, chlorku wapnia 0,034-0,15 g, siarczanu (VI) żelaza (II) 0,91-4,1 mg, azotanu (V) sodu 1,5-5 g, siarczanu (VI) cynku 1,4-4,21 mg, chlorku potasu 0,25-0,75 g, siarczanu (VI) miedzi (II) 2,5-5 mg, siarczanu (VI) manganu (II) 20,1 -60,31 mg, siarczanu (VI) kobaltu 3,06-5,0 mg, molibdenianu (VI) amonu 2,35-7,06 mg i wyjściowym pH 4,5-5,23, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzi hodowlę wstrząsaną na wytrząsarce przy szybkości obrotowej 150-220 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10-30%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 84-252 godzin. Otrzymaną ciecz pohodowlaną oddziela się poprzez sączenie pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymany przesącz zagęszcza się pod próżnią w temperaturze 30°C lub metodą ultrafiltracji w temperaturze 25°C.The method of obtaining the preparation of redox enzymes, containing laccases, lignin peroxidases and manganese-dependent peroxidases, by culturing a fungus strain of the genus Alternaria, consisting in growing the seed material on a sterilized medium containing malt wort, inoculating with this material a sterilized liquid production medium containing mineral and glucose and salts submerged production culture under sterile conditions, and after its completion, isolation and concentration of the obtained post-culture liquid, according to the invention, is characterized by the use of a strain of filamentous fungus Alternaria sp. AK0911, from which the seed material is prepared, sterilized at 121 ° C at for 20 minutes, a solid medium containing per 1000 parts by weight of 8.5 ° B malt wort x 20 parts by weight of agar or 20 parts by weight of agar and 0.6-0.8 parts by weight of guaiacol or 20 parts by weight of agar and 2-3 parts by weight of lignins or 20 parts by weight of agar, 2-3 parts by weight of alkaline lignin and 0.6-0.8 parts by weight of guaiacol at 28-32 ° C for 3-6 days. Then, the agar slope is washed with 0.89% sodium chloride solution and the seed material prepared in this way is inoculated, sterilized at 121 ° C for 20 minutes, with the liquid production medium containing 5-15 g glucose in 1000 ml of distilled water, hydrogenphosphorus (V ) dipotassium 0.5-1.5 g, magnesium sulfate 0.122-0.367 g, calcium chloride 0.034-0.15 g, iron (II) sulfate 0.91-4.1 mg, nitrate (V ) sodium 1.5-5 g, zinc sulphate 1.4-4.21 mg, potassium chloride 0.25-0.75 g, copper (II) sulphate 2.5-5 mg, sulphate (VI) manganese (II) 20.1-60.31 mg, cobalt sulfate (VI) 3.06-5.0 mg, ammonium molybdate (VI) 2.35-7.06 mg and starting pH 4.5- 5.23, using 1 ml of seed per 100 ml of medium and cultivating the shaking culture on a shaker at a rotation speed of 150-220 minutes -1 , with a flask filling degree of 10-30%, in the temperature range 28-32 ° C for 84- 252 hours. The obtained culture liquid is separated by filtration under reduced pressure, the obtained filtrate is concentrated under vacuum at 30 ° C or by ultrafiltration at 25 ° C.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.The process according to the invention is illustrated by the following examples.
P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 8,23 g glukozy, 0,87 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 0,096 g chlorku wapnia, 2,28 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 5 g azotanu (V) sodu, 3,03 mg siarczanu (VI) cynku, 0,47 g chlorkuThe Alternaria sp AK0911 strain was activated for 6 days at 28 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of 8.5 ° Bx malt wort and 20 parts by weight of agar. the spore suspension of this strain by washing the agar slope with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes, in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 8.23 g of glucose, 0.87 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.245 g of magnesium sulphate. , 0.096 g of calcium chloride, 2.28 mg of iron (II) sulphate, 5 g of sodium nitrate, 3.03 mg of zinc sulphate, 0.47 g of chloride
PL 227 786 B1 potasu, 3,82 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 39,96 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,13 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,89 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,11, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 191 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3.PL 227 786 B1 of potassium, 3.82 mg of copper (II) sulphate, 39.96 mg of manganese (II) sulphate, 3.13 mg of cobalt (VI) sulphate, 5.89 mg of molybdate (VI) ammonium and a starting pH of 5.11 using 1 ml of seed per 100 ml of medium, and the shake culture was carried out at 180 minutes -1 rotation, 10% full flask, temperature range 28-32 ° C for 191 hours. The culture liquid obtained as a result of the culture was filtered under reduced pressure through a Schott funnel with a G3 fritted glass.
Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 966,67, peroksydaz ligninowych - 5,46, peroksydaz manganozależnych - 2,27.The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 966.67, lignin peroxidases - 5.46, manganese-dependent peroxidases - 2.27.
P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5 °Bx, 20 części wagowych agaru i 0,6 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89 % roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 7,87 g glukozy, 0,84 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 95,88 mg chlorku wapnia, 2,19 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,73 g azotanu (V) sodu, 3,07 mg siarczanu (VI) cynku, 0,46 g chlorku potasu, 3,94 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 21,83 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,21 mg siarczanu (VI) kobaltu, 6,12 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,13, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 200 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 196 godzin.The Alternaria sp AK0911 strain was activated for 3 days at 32 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of malt wort at a concentration of 8.5 ° Bx, 20 parts by weight of agar and 0.6 parts by weight of guaiacol, then a spore suspension of this strain was prepared by washing the agar slope with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 7.87 g of glucose, 0.84 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.245 g of magnesium sulphate, 95 , 88 mg of calcium chloride, 2.19 mg of iron (II) sulphate, 2.73 g of sodium nitrate, 3.07 mg of zinc sulphate, 0.46 g of potassium chloride, 3.94 mg copper (II) sulphate, 21.83 mg manganese (II) sulphate, 3.21 mg cobalt sulphate (VI), 6.12 mg ammonium molybdate and a starting pH of 5.13, using 1 ml of seed per 100 ml of medium and the shake culture was carried out at a rotational speed of 200 minutes -1 , with a flask filling degree of 20%, in the temperature range 28-32 ° C for 196 hours.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 1458,33, peroksydaz ligninowych - 1,71, peroksydaz manganozależnych - 1,11.The further procedure was as in Example 1. The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 1458.33, lignin peroxidases - 1.71, manganese-dependent peroxidases - 1.11.
P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121 °C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 0,8 części wagowych gwajakolu, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 6,45 g glukozy, 0,74 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,245 g siarczanu (VI) magnezu, 93,13 mg chlorku wapnia, 1,83 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,55 g azotanu (V) sodu, 3,25 mg siarczanu (VI) cynku, 0,44 g chlorku potasu, 4,44 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 21,72 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,51 mg siarcza- nu(VI) kobaltu, 7,06 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,23, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną prz y szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 10%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 214 godzin.The Alternaria sp AK0911 strain was activated for 6 days at 28 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of malt wort at a concentration of 8.5 ° Bx, 20 parts by weight of agar and 0.8 parts by weight of guaiacol, then a spore suspension of this strain was prepared by washing the agar slope with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was inoculated previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 6.45 g of glucose, 0.74 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.245 g of magnesium sulphate, 93.13 mg of calcium chloride, 1.83 mg of iron (II) sulphate, 2.55 g of sodium nitrate, 3.25 mg of zinc sulphate, 0.44 g of potassium chloride, 4.44 mg of copper (II) sulphate (VI), 21.72 mg of manganese (II) sulphate, 3.51 mg of cobalt (VI) sulphate, 7.06 mg of ammonium molybdate (VI) and starting pH 5.23 with 1 ml of seed per 100 ml of medium and the shake culture was performed at a rotation speed of 180 minutes -1 , with a flask full of 10%, in the temperature range 28-32 ° C for 214 hours.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 2391,67, peroksydaz ligninowych - 15,71, peroksydazy manganozależnych - 0,76.The further procedure was as in Example 1. The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 2391.67, lignin peroxidases - 15.71, manganese-dependent peroxidases - 0.76.
P r z y k ł a d 4P r z k ł a d 4
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru, 0,6 części wagowych gwajakolu i 2 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,367 g siarczanu (VI) magnezu, 50 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 1,5 g azotanu (V) sodu, 4,21 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,1 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 2,35 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,0, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 25%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 84 godzin.The Alternaria sp AK 0911 strain was activated during 3 days at 32 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of malt wort at a concentration of 8.5 ° Bx, 20 parts by weight of agar, 0, 6 parts by weight of guaiacol and 2 parts by weight of alkaline lignin, then the spores of this strain were suspended by washing the agar slant with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was inoculated previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 15 g of glucose, 0.5 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.367 g of magnesium sulphate, 50 mg calcium chloride, 4.1 mg of iron (II) sulphate, 1.5 g of sodium nitrate, 4.21 mg of zinc sulphate, 0.25 g of potassium chloride, 4.79 mg of sulphate (VI) ) copper (II), 20.1 mg manganese (II) sulphate, 4.14 mg cobalt sulphate (VI), 2.35 mg ammonium molybdate and a starting pH of 5.0, using 1 ml of seed per 100 ml medium and the culture was shaken at 150 minutes -1 rotational speed, 25% full flask, temperature range 28-32 ° C for 84 hours.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 166,67, peroksydaz ligninowych - 11,61, peroksydaz manganozależnych - 11,36.The further procedure was as in example 1. The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 166.67, lignin peroxidases - 11.61, manganese-dependent peroxidases - 11.36.
PL 227 786 B1PL 227 786 B1
P r z y k ł a d 5P r z k ł a d 5
Szczep Alternaria sp AK0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru, 0,8 części wagowych gwajakolu i 3 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 15 g glukozy, 1,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,367 g siarczanu (VI) magnezu, 150 mg chlorku wapnia, 4,1 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 4,5 g azotanu (V) sodu, 4,21 mg siarczanu (VI) cynku, 0,75 g chlorku potasu, 4,79 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 60,31 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,14 mg siarczanu (VI) kobaltu, 2,35 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,00, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsną przy szybkości obrotowej 220 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 30%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 252 godzin.The Alternaria sp AK0911 strain was activated for 6 days at 28 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of malt wort at a concentration of 8.5 ° Bx, 20 parts by weight of agar, 0.8 parts by weight of guaiacol and 3 parts by weight of alkaline lignin, then the spores of this strain were suspended by washing the agar slant with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was inoculated previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 15 g of glucose, 1.5 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.367 g of magnesium sulphate, 150 mg calcium chloride, 4.1 mg of iron (II) sulphate, 4.5 g of sodium nitrate, 4.21 mg of zinc sulphate, 0.75 g of potassium chloride, 4.79 mg of sulphate (VI) ) copper (II), 60.31 mg of manganese (II) sulphate, 4.14 mg of cobalt sulphate (VI), 2.35 mg of ammonium molybdate and a starting pH of 5.00, using 1 ml of seed per 100 ml of medium and shaken culture was carried out at a rotation speed of 220 minutes -1 , a flask filling degree of 30%, temperature range 28-32 ° C for 252 hours.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 550,0 , peroksydaz ligninowych - 9,9, peroksydaz manganozależnych - 0,76.The further procedure was as in Example 1. The enzyme preparation was obtained with activities [nkat / l]: laccase - 550.0, lignin peroxidases - 9.9, manganese-dependent peroxidases - 0.76.
P r z y k ł a d 6P r z k ł a d 6
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx i 20 części wagowych agaru, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 5 g glukozy, 0,9 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 244,67 mg siarczanu (VI) magnezu, 97,25 mg chlorku wapnia, 2,37 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,87 g azotanu (V) sodu, 2,98 mg siarczanu (VI) cynku, 0,476 g chlorku potasu, 3,69 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 40 mg siarczanu (VI) manganu (II), 3,06 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5,65 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 5,08, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 150 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32° C w czasie 186 godzin.The Alternaria sp AK 0911 strain was activated during 3 days at 32 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of malt wort at a concentration of 8.5 ° Bx and 20 parts by weight of agar, and then a spore suspension of this strain was prepared by washing the agar slope with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was inoculated previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 5 g of glucose, 0.9 g of dipotassium hydrogen phosphate, 244.67 mg of magnesium sulphate, 97.25 mg of calcium chloride, 2.37 mg of iron (II) sulphate, 2.87 g of sodium nitrate, 2.98 mg of zinc sulphate, 0.476 g of potassium chloride, 3.69 mg of sulphate (VI) copper (II), 40 mg of manganese (II) sulfate, 3.06 mg of cobalt (VI) sulfate, 5.65 mg of ammonium molybdate and a starting pH of 5.08, using 1 ml of seed per 100 ml medium and the culture was shaken at 150 minutes -1 rotational speed, 20% full flask, temperature range 28-32 ° C for 186 hours.
Dalej postępowano jak w przykładzie 1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 816,67, peroksydaz ligninowych - 3,07, peroksydaz manganozależnych - 1,52.The further procedure was as in Example 1. The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 816.67, lignin peroxidases - 3.07, manganese-dependent peroxidases - 1.52.
P r z y k ł a d 7P r z k ł a d 7
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 6 dni w temperaturze 28°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 3 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono uprzednio wysterylizowane, w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wody destylowanej zawierającej 10 g glukozy, 0,5 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,122 g siarczanu (VI) magnezu, 0,034 g chlorku wapnia, 0,91 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 2,5 g azotanu (V) sodu, 1,404 mg siarczanu (VI) cynku, 0,25 g chlorku potasu, 2,5 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 20,104 mg siarczanu (VI) manganu (II), 5 mg siarczanu (VI) kobaltu, 5 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5, stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono 10-krotnie metodą ultrafiltracji w systemie Sartorium Vivaflow 50 w filtrach polisulfonowych o przepływie krzyżowym o masie odcięcia 5000 MCWO w temperaturze 25°C. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 3010,5, peroksydaz ligninowych -131,14.The Alternaria sp AK 0911 strain was activated for 6 days at 28 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes containing 1000 parts by weight of 8.5 ° Bx malt wort, 20 parts by weight of agar and 3 parts of agar. by weight of alkaline lignin, then a spore suspension of this strain was prepared by washing the agar slant with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was previously sterilized, at the temperature of 121 ° C for 20 minutes, in the culture medium in the form of 1000 ml of distilled water containing 10 g of glucose, 0.5 g of dipotassium hydrogen phosphate, 0.122 g of magnesium sulphate, 0.034 g of calcium chloride, 0.91 mg of iron (II) sulphate, 2.5 g of sodium nitrate, 1.404 mg of zinc sulphate, 0.25 g of potassium chloride, 2.5 mg of sulphate (VI) copper (II), 20,104 mg of manganese (II) sulfate, 5 mg of cobalt (VI) sulfate, 5 mg of ammonium molybdate, and a starting pH of 4.5, using 1 ml of seed per 100 ml of medium and culturing shaken at a rotation speed of 180 minutes -1 , with a flask filling degree of 20%, in the temperature range 28-32 ° C for 120 hours. The culture liquid obtained as a result of the culture was filtered under reduced pressure through a G3 Sintered Schott funnel and concentrated 10 times by ultrafiltration in a Sartorium Vivaflow 50 system in cross-flow polysulfone filters with a cut-off mass of 5000 MCWO at 25 ° C. The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 3010.5, lignin peroxidases -131.14.
P r z y k ł a d 8P r z k ł a d 8
Szczep Alternaria sp AK 0911 uaktywniano w czasie 3 dni w temperaturze 32°C na, wysterylizowanym w temperaturze 121°C w czasie 20 minut podłożu stałym zawierającym 1000 części wagowych brzeczki słodowej o stężeniu 8,5°Bx, 20 części wagowych agaru i 2 części wagowe ligniny alkalicznej, po czym sporządzono zawiesinę zarodników tego szczepu zmywając skos agarowy 50 ml 0,89% roztworu NaCl. Tak przygotowanym materiałem posiewowym zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane w temperaturze 121°C w czasie 20 minut, podłoże hodowlane w postaci 1000 ml wodyThe Alternaria sp AK 0911 strain was activated for 3 days at 32 ° C on a solid medium sterilized at 121 ° C for 20 minutes, containing 1000 parts by weight of 8.5 ° Bx malt wort, 20 parts by weight of agar and 2 parts of agar. by weight of alkaline lignin, then a spore suspension of this strain was prepared by washing the agar slant with 50 ml of 0.89% NaCl solution. The seed material prepared in this way was previously sterilized at 121 ° C for 20 minutes, in the culture medium in the form of 1000 ml of water.
PL 227 786 B1 destylowanej zawierającej 11 g glukozy, 1 g wodorofosforanu (V) dipotasu, 0,244 g siarczanu (VI) magnezu, 0,1 g chlorku wapnia, 2,73 mg siarczanu (VI) żelaza (II), 3 g azotanu (V) sodu, 2,808 mg siarczanu (VI) cynku, 0,5 g chlorku potasu, 5 mg siarczanu (VI) miedzi (II), 40,207 mg siarczanu (VI) manganu (II), 4,52 mg siarczanu (VI) kobaltu, 3,69 mg molibdenianu (VI) amonu i wyjściowym pH 4,5 stosując 1 ml materiału posiewowego na 100 ml podłoża i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej 180 minut-1, przy stopniu wypełnienia kolb 20%, w zakresie temperatur 28-32°C w czasie 120 godzin. Ciecz pohodowlaną otrzymaną w wyniku hodowli przesączono pod zmniejszonym ciśnieniem przez lejek Schotta ze spiekiem szklanym G3 i zagęszczono 10-krotnie w obrotowej wyparce próżniowej w temperaturze 30°C przy szybkości obrotowej wyparki 120 minut-1. Uzyskano preparat enzymatyczny o aktywnościach [nkat/l]: lakaz - 4916,67, peroksydaz ligninowych - 295,56.PL 227 786 B1 distilled containing 11 g glucose, 1 g dipotassium hydrogen phosphate, 0.244 g magnesium sulphate, 0.1 g calcium chloride, 2.73 mg iron (II) sulphate, 3 g nitrate ( V) sodium, 2.808 mg of zinc sulphate, 0.5 g of potassium chloride, 5 mg of copper (II) sulphate, 40.207 mg of manganese (II) sulphate (VI), 4.52 mg of cobalt (VI) sulphate , 3.69 mg of ammonium molybdate at a starting pH of 4.5 using 1 ml of seed per 100 ml of medium and shaking culture was carried out at a rotation speed of 180 minutes -1 , with a flask filling degree of 20%, temperature range 28-32 ° C during 120 hours. The cultivation liquid was filtered under reduced pressure through a G3 Sintered Schott funnel and concentrated 10 times in a rotary vacuum evaporator at a temperature of 30 ° C with a rotary evaporator speed of 120 minutes -1 . The enzyme preparation was obtained with the following activities [nkat / l]: laccase - 4916.67, lignin peroxidases - 295.56.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (en) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (en) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL404540A1 PL404540A1 (en) | 2015-01-05 |
| PL227786B1 true PL227786B1 (en) | 2018-01-31 |
Family
ID=52126386
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL404540A PL227786B1 (en) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL227786B1 (en) |
-
2013
- 2013-07-02 PL PL404540A patent/PL227786B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL404540A1 (en) | 2015-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102154407B (en) | Two-stage fermentation synthesis process of polysaccharide from Cordyceps militaris | |
| CN109439553A (en) | Produce the bacterial strain and its screening technique of erythrothioneine | |
| CN106801017A (en) | The cordyceps militaris link bacterial strain screening of a kind of high yield thermophilic protease and cordycepin and method of mutagenesis | |
| US9284535B2 (en) | Method for producing laccase by means of liquid fermentation of Lentinus edodes | |
| CN112568064B (en) | Black fungus strain JH40 and application thereof | |
| CN101861794A (en) | Method for producing liquid strain of cordyceps militaris | |
| CN101586101A (en) | Preparation method of Lithium Chloride-induced protoplasts of Ganoderma lucidum for breeding high-yield exopolysaccharide strains | |
| CN107760610B (en) | Mortierella elongata and application thereof | |
| CN117887590B (en) | Nanhua tricholoma matsutake growth promoting bacterium and application thereof | |
| PL227786B1 (en) | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes | |
| CN116121080B (en) | Aspergillus aculeatus and application thereof in tannase and gallic acid production | |
| CN119530018A (en) | A strain of Penicillium oxalicum TWSF1 and its application | |
| CN101861796B (en) | Method for culturing amanita pantherina by using waste distillage after fermentation of coloured rice | |
| KR102018118B1 (en) | Indoor cultivation method of Prasiola japonica single cell | |
| CN112980698B (en) | Microbial fermentation carbon source and preparation method thereof | |
| CN103805542B (en) | A kind of liquid fermentation method prepared for slime bacteria thalline scale | |
| CN114854599A (en) | A strain of Trichoderma harzianum and its application | |
| PL227785B1 (en) | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes | |
| EP2950657B1 (en) | Novel chitin/ demineralised dehydrated chitinaceous / crustacean exoskeleton -based formulation containing microbes that generate chitinase/ protease enzymes | |
| CN113322192A (en) | Polygonatum sibiricum endophytic fungi escherichia coli inhibiting agent and preparation method and application thereof | |
| CN112725194A (en) | Fungus Flavodon sp.x10 for high yield of cellulase and application thereof | |
| CN106348884A (en) | Production method of bacillus megaterium and humic acid containing liquid water-soluble fertilizer | |
| JP2998815B2 (en) | Seed for artificial cultivation of hatake shimeji and method of artificial cultivation | |
| KR102692927B1 (en) | Composition for preparing of protoplasts from Undaria pinnatifida sporophyte | |
| PL225276B1 (en) | Method of obtaining oxidoreductive enzyme preparation |