PL228104B1 - Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych - Google Patents

Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych

Info

Publication number
PL228104B1
PL228104B1 PL408917A PL40891714A PL228104B1 PL 228104 B1 PL228104 B1 PL 228104B1 PL 408917 A PL408917 A PL 408917A PL 40891714 A PL40891714 A PL 40891714A PL 228104 B1 PL228104 B1 PL 228104B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
mycelium
parts
weight
mold
petroleum ether
Prior art date
Application number
PL408917A
Other languages
English (en)
Other versions
PL408917A1 (pl
Inventor
Mirosława Szczęsna-Antczak
-Antczak Mirosława Szczesna
Tadeusz Antczak
Jakub Szeląg
Jakub Szelag
Stanisław Bielecki
Original Assignee
Politechnika Łodzka
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Politechnika Łodzka filed Critical Politechnika Łodzka
Priority to PL408917A priority Critical patent/PL228104B1/pl
Publication of PL408917A1 publication Critical patent/PL408917A1/pl
Publication of PL228104B1 publication Critical patent/PL228104B1/pl

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Sposób wytwarzania mieszaniny 2-metylobutylowych estrów wyższych kwasów tłuszczowych, na drodze alkoholizy oleju słonecznikowego 2-metylobutan-1-olem, ewentualnie w środowisku eteru naftowego w obecności biokatalizatora w postaci odwodnionej i odlipidowanej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides, którą otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides wyodrębnionego ze środowiska naturalnego, w drodze poddania go aktywacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym zawierającym tłuszcz prosty roślinny lub zwierzęcy, agar i brzeczkę piwowarską, następnie zmycia zarodników z tego podłoża i zaszczepienia tymi zarodnikami wysterylizowanego podłoża produkcyjnego, prowadzenia hodowli wstrząsanej, ewentualnie w obecności pianki poliuretanowej o całkowicie otwartej strukturze komórkowej, oddzielenia otrzymanego preparatu grzybni lub pianki z zaadsorbowaną grzybnią od cieczy pohodowlanej, z których piankę z zaadsorbowaną grzybnią przemywa się wodą destylowaną i suszy, zaś grzybnię wolną, przemytą wodą destylowaną, kilkakrotnie przemywa się acetonem i suszy, charakteryzuje się tym, że jako biokatalizator stosuje się grzybnię selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, którą otrzymuje się w drodze hodowli na podłożu produkcyjnym zawierającym olej rzepakowy, namok kukurydziany, wodę wodociągową oraz ewentualnie pianki poliuretanowe. Proces alkoholizy prowadzi się w reaktorze periodycznym w obecności wolnej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, ewentualnie w środowisku eteru naftowego użytego w nadmiarze, korzystnie w obecności wody i po zakończeniu reakcji z mieszaniny reakcyjnej oddziela się części stałe grzybni, lub proces alkoholizy prowadzi się w reaktorze kolumnowym wypełnionym grzybnią selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45 immobilizowaną w piance poliuretanowej, przez którą najpierw przepuszcza się eter naftowy, a następnie, z recyrkulacją, medium reakcyjne zawierające olej, alkohol, eter naftowy i korzystnie wodę.

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania mieszaniny 2-metylobutylowych estrów wyższych kwasów tłuszczowych na drodze alkoholizy katalizowanej lipazą Mucor circinelloides.
W czasopiśmie Biotechnology and Bioprocess Engineering, 2011, t. 16, 337-342, opisano sposób prowadzenia katalizowanej esterazą Aeropyrum pernix transestryfikacji 2-metylo-1-butanolu z maślanem winylu (vinyl butyrate) w środowisku cieczy jonowych o ustalonej aktywności wody, aw 0,51.
W czasopiśmie Enzyme and Microbial Technology, 2004, vol. 35, 355-363 opisano sposób prowadzenia reakcji butanolu z kwasem oleinowym w środowisku rozpuszczalnika organicznego oraz przy jego braku.
W czasopiśmie Bioresource Technology 2010, t. 101, 7344-7349 opisano sposób otrzymywania estrów w mieszaninie n-butanolu i oleju rzepakowego (w proporcji molowej 3:1) zawierającej 8000 ppm wody w reakcji katalizowanej przez lipazę Pseudomonas cepacia immobilizowaną na włóknach poliakrylonitrylowych.
Z czasopisma Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2002, t. 19-20, 261-268 znane jest wykorzystanie lipazy Mucor circinelloides immobilizowanej w PVA, do syntezy estrów wyższych kwasów tłuszczowych.
Z opisów patentowych PL 206174 i 206173 jest znany sposób wytwarzania estrów metylowych i etylowych wyższych kwasów tłuszczowych, polegający na transestryfikacji oleju roślinnego i metanolu lub etanolu katalizowanej immobilizowaną lipazą Mucor circinelloides w środowisku substratów lub w środowisku rozpuszczalnika organicznego.
W opisach zgłoszeń patentowych P.404593 i P.404594 ujawniono sposób wytwarzania estrów kwasów tłuszczowych i alkoholi, z frakcji tłuszczów kanałowych lub z frakcji technicznych kwasów tłuszczowych, stanowiących odpad w procesie rafinacji oleju rzepakowego, oraz z 2-metylo-1-butanolu w reakcji syntezy i alkoholizy katalizowanej grzybnią selektanta pleśni Mucor circinelloides w środowisku eteru naftowego.
Z opisu patentowego PL 215088 B1 jest znany, znajdujący się w kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej, szczep pleśni Mucor circinelloides oznaczony symbolem TZA45 należący do klasy Zygomycetes (Sprzężniaków), rzędu Mucorales, rodziny Mucoraceae i rodzaju Mucor, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 4-35°C, charakteryzujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 30°C. Obficie rośnie na agarze brzęczkowym już po 2-3 dniach pokrywając jego powierzchnię gęstą masą puszystej grzybni o barwie żółtej szarzejącej podczas jej starzenia się, zbudowanej z nieseptowanych, wielojądrowych strzępek wytwarzających liczne, podlegające zjawisku fototropizmu sporangiofory z osadzonymi na końcach sporangiami, których ściana podczas dojrzewania rozpuszcza się uwalniając kuliste sporangiospory (zarodniki, o średnicy 20-200 pm) zdolne w sprzyjających dla wzrostu warunkach do natychmiastowego kiełkowania. Szczep ten jest prototrofem, szybko i obficie rozwija się na pożywkach zawierających nieorganiczne źródła azotu, w tym jony amonowe zawarte w NH4CI, (NH4)2SO4, (NH4)3PO4 i/lub azotanowe w NaNO3, lub organiczne źródło azotu w wielu formach, w tym także mocznik czy namok kukurydziany. Jako źródło węgla wykorzystuje monosacharydy, w tym najlepiej glukozę, przy czym gdy stężenie tej heksozy w pożywce przekracza 10% wagowych, pleśnie te rosnąc w formie drożdżoidalnej, co jest przejawem ich dimorfizmu, przetwarzają ją w etanol, a także różne oligosacharydy, słabiej laktozę i rafinozę oraz skrobię i triacyloglicerole, a także wyższe kwasy tłuszczowe. Szczep jest zaliczany do organizmów olejodajnych (oleogineous), gdyż w jego mycelium mogą być gromadzone lipidy zapasowe w postaci ciał lipidowych (lipid bodies), których ilość, w sprzyjających warunkach, w pożywkach płynnych sięga nawet ponad 80% zawartości suchej masy grzybni, a w ich skład wchodzą przede wszystkim wolne i związane w postaci triacylogliceroli wyższe kwasy tłuszczowe, nienasycone, jak linolowy, oleinowy i gamma-linolenowy oraz nasycone, jak palmitynowy, stearynowy, mirystynowy i kaprylowy, których proporcje mogą być różne i zależą od warunków wzrostu szczepu. Lipidy te charakteryzują się znaczną zawartością karotenoidów (w tym dużą zawartością beta-karotenu, przekraczającą niekiedy 100 mg w 100 g lipidów). Odtłuszczona grzybnia tych pleśni zawiera liczne białka enzymatyczne, w tym lipazy, chitozanazy i chitynazy, a nie zawiera aktywnych enzymów katalizujących hydrolityczny rozkład białek.
Z opisu patentowego PL 215088 B1 jest także znany sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides TZA45, który polega na tym, że szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 inkubuje się na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego,
PL 228 104 B1
20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11 °%o, następnie hoduje się w temperaturze 29-31°C w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą 0,01-0,5% wodnego roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, szczepi się wysterylizowane podłoże produkcyjne o wyjściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzi hodowlę statyczną w temperaturze 29-31°C w czasie 2-5 dni mieszając podłoże 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczając przez złoże powietrze z szybkością 15-100 l/minutę i po zakończeniu hodowli z powstałej mieszaniny grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża sporządza się stały preparat lipazy. Stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 9-14 części wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 1,80-3,60 mm, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczniku na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m, substancji organicznej minimum 40% s.m., i 40-100 części wody wodociągowej lub podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 40-100 części wody wodociągowej. Mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża, powstałą po hodowli, ekstrahuje się 2-5-krotnie acetonem stosując 1 -5 ml acetonu na 1 g wyjściowego podłoża, ekstrakty sączy się na przegrodzie ceramicznej i suszy na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 24 godziny, a powstały stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym.
W opisie patentowego PL 217360 ujawniono sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli selektanta pleśni Mucor circinelloides M58/IBPUH 120, w której hodowlę produkcyjną prowadzi się w fermentorze przy użyciu mieszadła, do którego przymocowuje się porowaty nośnik w postaci płatów pianki poliuretanowej i w wyniku hodowli otrzymuje się biomasę Mucor circinelloides M58/IBPUH 120 zaadsorbowaną w porach tej pianki. Stosuje się płaty pianki poliuretanowej na bazie poliolu poliestrowego, o całkowicie otwartej strukturze komórkowej, charakteryzującej się gęstością 26-30 kg/m3, wytrzymałością na rozciąganie 125 kPa, średnicą porów 3,40-4,20 mm o wymiarach 250x120x10 mm.
Sposób wytwarzania mieszaniny 2-metylobutylowych estrów wyższych kwasów tłuszczowych, na drodze alkoholizy oleju słonecznikowego 2-metylobutan-1-olem, ewentualnie w środowisku eteru naftowego, w obecności biokatalizatora w postaci odwodnionej i odlipidowanej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides, którą otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides wyodrębnionego ze środowiska naturalnego, w drodze poddania go aktywacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Blg, o początkowym pH 5,8, w temperaturze 29-31°C w czasie 3-5 dni, następnie zmycia zarodników z tego podłoża i zaszczepienia tymi zarodnikami wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o wyjściowym pH 4,6-5,0 przy użyciu 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego, prowadzenia hodowli wstrząsanej w temperaturze 29-31°C w czasie 2-5 dni, ewentualnie w obecności pianki poliuretanowej o całkowicie otwartej strukturze komórkowej, oddzielenia otrzymanego preparatu grzybni lub pianki z zaadsorbowaną grzybnią od cieczy pohodowlanej, z których piankę z zaadsorbowaną grzybnią przemywa się wodą destylowaną i suszy w temperaturze 22°C, zaś grzybnię wolną, przemytą wodą destylowaną, kilkakrotnie przemywa się acetonem o temperaturze 4°C i suszy w temperaturze 22°C, według wynalazku charakteryzuje się tym, że jako biokatalizator stosuje się grzybnię selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, którą otrzymuje się w drodze hodowli na podłożu produkcyjnym zawierającym w częściach wagowych: 27 części oleju rzepakowego, 59 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej oraz ewentualnie 27 części pianek poliuretanowych o średnicy porów 2,3-3,3 mm, gęstości 23-27 kg/m3 i wymiarach 1x1x1 cm. Proces alkoholizy prowadzi się w reaktorze periodycznym przy stosunku molowym oleju do alkoholu 1:5, w obecności wolnej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, użytej w ilości 10% wagowych w stosunku do masy substratów, ewentualnie w środowisku eteru naftowego użytego w nadmiarze równym 0,44 w stosunku do masy substratów, korzystnie w obecności wody użytej w ilości 0,4-1,5% w stosunku do masy substratów i ewentualnie rozpuszczalnika, w temperaturze 40°C w czasie 6-52 godziny i po zakończeniu reakcji z mieszaniny reakcyjnej oddziela się części stałe grzybni, którą używa się co najmniej 5 razy w reakcjach alkoholizy. Proces
PL 228 104 B1 alkoholizy prowadzi się w reaktorze kolumnowym wypełnionym grzybnią selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45 immobilizowaną w piance poliuretanowej, użytą w ilości 30% wagowych do stosunku do masy medium reakcyjnego, przez którą najpierw przepuszcza się eter naftowy w ilości 3,9 razy większej od masy pianki z zaadsorbowana grzybnią, a następnie, z recyrkulacją, medium reakcyjne zawierające 46 części wagowych oleju, 23 części wagowe alkoholu, 30 części wagowych eteru naftowego i korzystnie wodę w ilości 0,4-1,5% wagowych w stosunku do całkowitej masy medium reakcyjnego, w temperaturze 30-35°C z szybkością 8 cm3/minutę w czasie 24-52 godziny, przy czym immobilizowaną grzybnię wypełniającą reaktor wykorzystuje się co najmniej 49 razy w reakcjach alkoholizy.
Dodatek wody do środowiska reakcji stabilizuje poziom katalitycznej aktywności lipazy Mucor circinelloides TZA45, co wydłuża czas jej stosowania. Jako produkt reakcji alkoholizy otrzymuje się mieszaninę zawierającą: estry wyższych kwasów tłuszczowych i 2-metylobutan-1-olu, monoacyloglicerole (MAG), diacyloglicerole (DAG), triacyloglicerole (TAG). W celu wydzielenia z tej mieszaniny estrów wyższych kwasów tłuszczowych i 2-metylobutan-1-olu mieszaninę tę, po oddzieleniu biokatalizatora poddaje się próżniowej destylacji.
Sposób według wynalazku bliżej ilustrują podane niżej przykłady, z powołaniem się na rysunek, na którym wykres 1 ilustruje skład mieszaniny stanowiącej produkt alkoholizy otrzymany w przykładzie II, wykres 2 - skład mieszaniny stanowiącej produkt alkoholizy otrzymany w przykładzie III, wykresy 3 i 4 - składy mieszanin stanowiących produkty alkoholizy otrzymane w przykładzie V. Na wykresach oznaczają: MAG - monoacyloglicerole, DAG - diacyloglicerole, TAG - triacyloglicerole, WKT - wolne kwasy tłuszczowe, Estry - estry 2-metylobutan-1-olu i wyższych kwasów tłuszczowych.
Przykład I
Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 poddano aktywacji na sterylnym podłożu stałym zawierającym w częściach wagowych: 30 części agaru, 0,01 części oleinianu 2-metylobutan-1-olu i 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Blg, o pH początkowym 5,8, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 20 minut i w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie w częściach wagowych: 27 części oleju rzepakowego, 59 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej oraz 27 części pianek poliuretanowych o średnicy porów 2,3-3,3 mm, gęstości 23-27 kg/m3 i wymiarach 1x1x1 cm, o wyjściowym pH 4,7 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej wstrząsarki 180 minutę-1, stopniu napełnienia kolb 20%, w temperaturze 30°C w ciągu 3 dni. Otrzymany biokatalizator Mucor circinelloides TZA45, immobilizowany w piance odfiltrowano na lejku Schotta 3G i zalewano kolejno 3 porcjami po 0,2 l wody demineralizowanej, mieszano 2 minuty, sączono na lejku Schotta 3G i suszono w temperaturze 22°C w czasie 48 godzin.
Reaktor kolumnowy z płaszczem grzejnym, o objętości 594 cm3 wypełniono 167 g s.s. otrzymanej uprzednio, osadzonej na piankach grzybni Mucor circinelloides TZA45, o aktywności, mierzonej w reakcji hydrolizy emulsji oleju oliwkowego, równej 546 U, po czym przez reaktor przepuszczono, z szybkością 0,4 cm3/minutę, 1000 cm3 eteru naftowego. Po usunięciu w ten sposób lipidów z biomasy, przez reaktor przepuszczono z prędkością 8 cm3/minutę, w czasie 48 godzin, w temperaturze 30-35°C, medium reakcyjne o całkowitej objętości 850 cm3 i składzie w częściach wagowych: 46 części oleju słonecznikowego, 23 części 2-metylobutan-1-olu, 30 części eteru naftowego. Proces syntezy estrów powtórzono 4-krotnie przy wykorzystaniu medium reakcyjnego o powyższym składzie, otrzymując za każdym razem produkt w postaci mieszaniny zawierającej w procentach wagowych, średnio 78,7% estrów 2-metylobutanolu oraz 8,9% monoacylogliceroli, 7,5% diacylogliceroli, 1,9% wolnych kwasów tłuszczowych, 3% triacylogliceroli.
Przykład II
Reaktor kolumnowy z płaszczem grzejnym, o objętości 168 cm3 wypełniono 64 g s.s. biokatalizatora otrzymanego jak w przykładzie I, po czym przez reaktor przepuszczano z szybkością 0,4 cm3/minutę, 1000 cm3 eteru naftowego. Po usunięciu lipidów z biomasy jak w przykładzie I, przez reaktor przepuszczano z recyrkulacją, z prędkością 8 cm3/minutę w czasie 48 godzin w temperaturze 30-35°C, medium reakcyjne o objętości 300 cm3, zawierające 2 części wagowe oleju słonecznikowego, 1 część wagową 2-metylobutan-1-olu oraz wodę w ilości 0,8% wagowych masy medium reakcyjnego. Proces syntezy estrów powtórzono 4-krotnie przy wykorzystaniu medium reakcyjnego o powyższym składzie, w wyniku czego otrzymano produkty w postaci mieszanin, których skład podano na wykresie 1 (numery procesów 1-4). Następnie przez ten sam reaktor przepuszczano z recyrkulacją, z prędkością 8 cm3/minutę w czasie 48 godzin w temperaturze 30-35°C, medium reakcyjne o objętości
PL 228 104 B1
300 cm3 o składzie w częściach wagowych: 712 części oleju słonecznikowego, 356 części 2-metylobutan-1-olu i 3 części wody. Proces ten, przy wykorzystaniu kolejnych porcji mieszaniny substratów o wyżej opisanym składzie, powtórzono 45-krotnie przez okres pięciu miesięcy - na wykresie 1 przedstawiono składy mieszanin otrzymanych w kolejnych procesach alkoholizy (numery procesów 5-49).
Przykład III
Reaktor kolumnowy z płaszczem grzejnym, o objętości 168 cm3 wypełniono 64 g s.s. biomasy przygotowanej jak w przykładzie I, po czym przez reaktor przepuszczano z szybkością 0,4 cm3/minutę 1000 cm3 eteru naftowego. Po odseparowaniu w ten sposób lipidów od grzybni wykonano cztery 48-godzinne reakcje alkoholizy, w których przez reaktor przepuszczano z recyrkulacją, z prędkością 8 cm3/minutę kolejne 4 porcje mieszaniny substratów o objętości 300 cm3 o składzie w częściach wagowych: 730 części oleju słonecznikowego, 365 części 2-metylobutan-1-olu, 8 części wody, w wyniku czego otrzymano produkty w postaci mieszanin, których skład podano na wykresie 2 (numery procesów 1-4).
Następnie przez ten sam reaktor przepuszczano z recyrkulacją, z prędkością 8 cm3/minutę w czasie 48 godzin mieszaninę substratów o objętości 300 cm3 o składzie w częściach wagowych: 712 części oleju słonecznikowego, 356 części 2-metylobutan-1-olu, 3 części wody. Proces alkoholizy przy wykorzystaniu kolejnych porcji tej mieszaniny substratów o wyżej opisanym składzie powtórzono 30-krotnie przez okres 3 miesięcy. Skład mieszanin otrzymanych w kolejnych procesach alkoholizy przedstawiono na wykresie 2 (numery procesów 5-34).
Przykład IV
Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor circinelloides TZA45 poddano aktywacji na sterylnym podłożu stałym zawierającym 30 części wagowych agaru, 0,01 części wagowych oleinianu 2-metylobutan-1-olu i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Blg, o pH początkowym 5,8, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, po czym otrzymane w wyniku inkubacji zarodki pleśni przeszczepiono na, uprzednio wysterylizowane w czasie 20 minut w temperaturze 121°C, podłoże hodowlane o składzie w częściach wagowych: 27 części oleju rzepakowego, 59 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej i wyjściowym pH 4,7 i prowadzono hodowlę wstrząsaną przy szybkości obrotowej wstrząsarki 180 minut-1, stopniu napełnienia kolb 20%, w temperaturze 30°C w ciągu 3 dni. Otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę Mucor circinelloides TZA45, odfiltrowano na lejku Schotta o porowatości 3G i zalewano kolejno 3 porcjami wody demineralizowanej o objętości równej objętości podłoża hodowlanego w kolbie, mieszano 2 minuty, sączono na lejku Schotta 3G, wprowadzano do reaktora wypełnionego acetonem w ilości 1 dm3 acetonu na biomasę otrzymaną z 1 dm3 podłoża i mieszano przez 20 minut z prędkością 300 minutę-1, następnie oddzielono biomasę od roztworu na lejku Schotta o porowatości 3G, czynność tą powtórzono 3-krotnie, otrzymany biokatalizator suszono w temperaturze 22°C w czasie 48 godzin i mielono w młynie udarowym.
Do reaktora periodycznego z mieszadłem, o objętości 2 dm3 wprowadzano 45 g s.s. biomasy Mucor circinelloides TZA45 oraz medium reakcyjne o objętości 850 cm3 o składzie w częściach wagowych: 46 części oleju słonecznikowego, 23 części 2-metylobutan-1-olu, 30 części eteru naftowego i mieszano w temperaturze 35°C przez okres 52 godzin. Katalizator enzymatyczny zastosowano 4-krotnie w procesie reakcji alkoholizy.
Otrzymano produkt w postaci mieszaniny zawierającej w procentach wagowych, średnio: 86,6% estrów 2-metylobutanolu, 3,2% wagowych monoacylogliceroli, 3,3% diacylogliceroli, 3,0% wolnych kwasów tłuszczowych, 0,4% triacylogliceroli.
Przykład V
Dwa identyczne reaktory kolumnowe z płaszczem grzejnym, o objętości po 203 cm3 wypełniono po 70 g s.s. biokatalizatora otrzymanego jak w przykładzie I, po czym przez każdy reaktor przepuszczano z szybkością 0,4 cm3/minutę 1000 cm3 eteru naftowego.
Po usunięciu w ten sposób lipidów z biomasy, przez każdy reaktor przepuszczano z recyrkulacją, z prędkością 8 cm3/minutę medium reakcyjne o objętości 300 cm3, o składzie w częściach wagowych: reaktor I - 46 części oleju słonecznikowego, 23 części 2-metylobutan-1-olu, 30 części eteru naftowego, reaktor II - 126 części oleju słonecznikowego, 63 części 2-metylobutan-1-olu, 82 części eteru naftowego i 3 części wody, w temperaturze 35°C przez okres 24 godzin.
Otrzymano produkty o ilościowym składzie przedstawionym odpowiednio na wykresie 3 (reaktor I) i wykresie 4 (reaktor II).
PL228 104B1
Przykład VI
Do 2-óch reaktorów z mieszadłem, o objętości 250 cm3 wprowadzono po 5 g s.s. biomasy Mucor circinelloides TZA45 przygotowanej tak jak w przykładzie IV i po 100 cm3 reagentów o składzie w częściach wagowych:
reaktor I -2 części oleju słonecznikowego, 1 część 2-metylobutan-1-olu, reaktor II - 144 części oleju słonecznikowego, 72 części 2-metylobutan-1-olu oraz 1 część wagową wody.
Reakcje prowadzono w temperaturze 33°C, przy obrotach mieszadła 120 minutę1, kolejno przez 6 godzin, 24 godziny i 48 godzin.
Otrzymano produkty o ilościowym składzie przedstawionym w poniższej tablicy, w której MAG, DAG, TAG, WKT i Estry mają znaczenie takie jak na wykresach 1-4.
Czas [h] 6 24 48
Brak dodatku wody, reaktor I
MAG 2,9 5,9 6,8
DAG 17,2 19,8 16,4
WKT 5,0 6,2 6,7
TAG 51,6 23,3 8,2
Estry 21,3 43,2 59,6
Z dodatkiem wody, reaktor II
MAG 3,2 7,8 7,8
DAG 18,6 18,6 12,4
WKT 9,3 8,9 7,9
TAG 41,4 10,2 2,4
Estry 25,9 52,7 67,6.
Zastrzeżenia patentowe

Claims (3)

1. Sposób wytwarzania mieszaniny 2-metylobutylowych estrów wyższych kwasów tłuszczowych, na drodze alkoholizy oleju słonecznikowego 2-metylobutan-1-olem, ewentualnie w środowisku eteru naftowego, w obecności biokatalizatora w postaci odwodnionej i odlipidowanej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides, którą otrzymuje się ze szczepu pleśni Mucor circinelloides wyodrębnionego ze środowiska naturalnego, w drodze poddania go aktywacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Blg, o początkowym pH 5,8, w temperaturze 29-31 °C w czasie 3-5 dni, następnie zmycia zarodników z tego podłoża i zaszczepienia tymi zarodnikami wysterylizowanego podłoża produkcyjnego o wyjściowym pH 4,6-5,0 przy użyciu 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego, prowadzenia hodowli wstrząsanej w temperaturze 29-31 °C w czasie 2-5 dni, ewentualnie w obecności pianki poliuretanowej o całkowicie otwartej strukturze komórkowej, oddzielenia otrzymanego preparatu grzybni lub pianki z zaadsorbowaną grzybnią od cieczy pohodowlanej, z których piankę z zaadsorbowaną grzybnią przemywa się wodą destylowaną i suszy w temperaturze 22°C, zaś grzybnię wolną, przemytą wodą destylowaną, kilkakrotnie przemywa się acetonem o temperaturze 4°C i suszy w temperaturze 22°C, znamienny tym, że jako biokatalizator stosuje się grzybnię selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, którą otrzymuje się w drodze hodowli na podłożu produkcyjnym zawierającym w częściach wagowych: 27 części oleju rzepakowego, 59 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody wodociągowej oraz ewentualnie 27 części pianek poliuretanowych, przy czym proces alkoholizy
PL 228 104 B1 oleju słonecznikowego 2-metylobutan-1-olem prowadzi się w reaktorze periodycznym przy stosunku molowym oleju do alkoholu 1:5, w obecności wolnej grzybni selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45, użytej w ilości 10% wagowych w stosunku do masy substratów, ewentualnie w środowisku eteru naftowego użytego w nadmiarze równym 0,44 w stosunku do masy substratów, korzystnie w obecności wody użytej w ilości 0,4-1,5% wagowych w stosunku do masy substratów i ewentualnie rozpuszczalnika, w temperaturze 40°C w czasie 6-52 godziny i po zakończeniu reakcji z mieszaniny reakcyjnej oddziela się części stałe grzybni, lub proces alkoholizy prowadzi się w reaktorze kolumnowym wypełnionym grzybnią selektanta pleśni Mucor circinelloides TZA45 immobilizowaną w piance poliuretanowej, użytą w ilości 30% wagowych do stosunku do masy medium reakcyjnego, przez którą najpierw przepuszcza się eter naftowy w ilości 3,9 razy większej od masy pianki z zaadsorbowaną grzybnią, a następnie, z recyrkulacją, medium reakcyjne zawierające 46 części wagowych oleju, 23 części wagowe alkoholu, 30 części wagowych eteru naftowego i korzystnie wodę w ilości 0,4-1,5% wagowych w stosunku do całkowitej masy medium reakcyjnego, w temperaturze 30-35°C z szybkością 8 cm3/minutę w czasie 24-52 godziny.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się pianki poliuretanowe o średnicy porów 2,3-3,3 mm, gęstości 23-27 kg/m3 i wymiarach 1x1x1 cm.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że grzybnię oddzieloną z mieszaniny po reakcji alkoholizy w reaktorze periodycznym używa się co najmniej 5 razy w reakcjach alkoholizy, zaś immobilizowaną grzybnię wypełniającą reaktor kolumnowy wykorzystuje się co najmniej 49 razy w reakcjach alkoholizy.
PL408917A 2014-07-18 2014-07-18 Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych PL228104B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL408917A PL228104B1 (pl) 2014-07-18 2014-07-18 Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL408917A PL228104B1 (pl) 2014-07-18 2014-07-18 Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL408917A1 PL408917A1 (pl) 2016-02-01
PL228104B1 true PL228104B1 (pl) 2018-02-28

Family

ID=55178378

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL408917A PL228104B1 (pl) 2014-07-18 2014-07-18 Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL228104B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL408917A1 (pl) 2016-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ramos-Sánchez et al. Fungal lipase production by solid-state fermentation
US20090211150A1 (en) Method for producing biodiesel using high-cell-density cultivation of microalga Chlorella protothecoides in bioreactor
Kabbashi et al. Hydrolysis of Jatropha curcas oil for biodiesel synthesis using immobilized Candida cylindracea lipase
DE19931847A1 (de) Immobilisierte Lipase
KR101220498B1 (ko) 유기산을 원료로 하여 미생물의 체내산물을 생산하는 방법
Singh et al. Immobilized lipase from Schizophyllum commune ISTL04 for the production of fatty acids methyl esters from cyanobacterial oil
Ogawa et al. Filamentous fungal pellets as versatile platforms for cell immobilization: developments to date and future perspectives
CN112955559A (zh) 采用固体载体上的梭菌生产醇的方法
CN101955888A (zh) 高产油脂皮状丝孢酵母突变株b3及其ems和紫外线复合诱变选育方法
EP3569714A1 (en) Process for producing a rhamnolipid produced by pseudomonas or enterobacter using andiroba or murumuru seed waste
Rashid et al. Mannanase production by Aspergillus niger USM F4 via solid substrate fermentation in a shallow tray using palm kernel cake as a substrate
Todeschini et al. Synthesis of butyl esters via ultrasound-assisted transesterification of macaúba (Acrocomia aculeata) acid oil using a biomass-derived fermented solid as biocatalyst
Intasit et al. Enhanced biovalorization of palm biomass wastes as biodiesel feedstocks through integrated solid-state and submerged fermentations by fungal co-cultures
Ondul et al. Biocatalytic production of biodiesel from vegetable oils
PL228104B1 (pl) Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych
Rubio‐Ribeaux et al. Biosurfactant Production by Solid‐state Fermentation in Biorefineries
Luna-García et al. Production of unicellular biomass as a food ingredient from agro-industrial waste
EP2179047B1 (de) Lipophile Zubereitungen
Haryati et al. Extracellular lipase from Pseudomonas aeruginosa SB-37: production by solid state fermentation, immobilization, and characterization
Yang et al. Development of oil-producing microbiota and its application in fermenting distiller's grains to obtain microbial oil and ruminant feed
US20230340548A1 (en) Method for fatty acid alkyl ester synthesis and their extraction from oleaginous microbes
PL215087B1 (pl) Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym
CN121801981A (zh) 一种降血脂、降尿酸、降血糖的甘油二酯油及其制备方法、应用
ASWATHI ISOLATION OF LIPASE PRODUCTION FROM ASPERGILLUS NIGER BY USING COCONUT OIL CAKE
Avendaño-Morales et al. Lipid production by Penicillium decumbens from the direct conversion of seaweed bagasse