PL215087B1 - Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym - Google Patents
Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałymInfo
- Publication number
- PL215087B1 PL215087B1 PL391954A PL39195410A PL215087B1 PL 215087 B1 PL215087 B1 PL 215087B1 PL 391954 A PL391954 A PL 391954A PL 39195410 A PL39195410 A PL 39195410A PL 215087 B1 PL215087 B1 PL 215087B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- medium
- weight
- average particle
- particle diameter
- Prior art date
Links
- 239000007787 solid Substances 0.000 title claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 32
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims description 25
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims description 25
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims description 25
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 title claims description 12
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 title claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 30
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 27
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 239000013587 production medium Substances 0.000 claims description 13
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 12
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 12
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 10
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 5
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 5
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 4
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000003068 static effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000002361 compost Substances 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 2
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims 2
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 description 1
- 241001480490 Mucoraceae Species 0.000 description 1
- 241000235388 Mucorales Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 108010089807 chitosanase Proteins 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym, przeznaczonej do hydrolizy lub syntezy estrów oraz ich pochodnych
Znane sposoby otrzymywania lipaz z grzyba Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu płynnym, opisane między innymi w opisie patentowym PL nr 150604 oraz w czasopismach: Biotechnologia 1993, tom 20, 59-67, Biotechnologia 1995, tom 29, 82-91, Enzyme Microbial Technology, 1991, tom 13, 589-593, Journal Molecular Catalysis B; Enzymatic, 2002, tom 19-29, 261-268, Progres in Biotechnology, 2000, tom 17, 221-227 oraz w Zeszytach Naukowych Politechniki Łódzkiej 2001, tom 884, 1-175, Zeszytach Naukowych Politechniki Łódzkiej, 698, Chemia Spożywcza i Biotechnologia 2005, tom 69, 39-58.
Znany jest także, z czasopism Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2006, 39, 141-148 oraz Biotechnology Progres, 2003, tom 19, 312-319, sposób otrzymywania lipazy rozpuszczalnej z grzyba Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym i wymywania otrzymanego enzymu wodą z nierozłożonych składników podłoża.
W kolekcji Instytutu Biochemii Technicznej Politechniki Łódzkiej znajduje się wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor racemosus oznaczony symbolem MSA52 należący do klasy Zygomycetes (Sprzężniaków), rzędu Mucorales, rodziny Mucoraceae i rodzaju Mucor, wykazujący zdolność wzrostu w temperaturze 4-35°C, cechujący się szczególnie szybkim wzrostem w temperaturze 30°C. Rosnąc obficie na agarze brzęczkowym już po 2-3 dniach pokrywa jego powierzchnię gęstą masą puszystej grzybni o barwie kremowej szarzejącej podczas jej starzenia się, zbudowanej z nieseptowanych, wielojądrowych strzępek wytwarzających liczne, podlegające zjawisku fototropizmu sporangiofory z osadzonymi na końcach sporangiami, których ściana podczas dojrzewania rozpuszcza się uwalniając kuliste sporangiospory (zarodniki o średnicy 20-200 nm) zdolne, w sprzyjających dla wzrostu warunkach, do natychmiastowego kiełkowania. Szczep ten nadto jest prototrofem, szybko i obficie rozwija się na pożywkach zawierających nieorganiczne źródła azotu, w tym jony amonowe zawarte w NH4Cl, (NH4)2SO4, (NH4)3PO4 i/lub azotanowe w NaNO3 lub organiczne źródło azotu w wielu formach, w tym także mocznik lub namok kukurydziany. Jako źródło węgla wykorzystuje monosacharydy tj. heksozy i pentozy, a najlepiej glukozę, fruktozę i arabinozę, disacharydy tj. sacharozę, maltozę lecz nie laktozę oraz skrobię, a także wyższe kwasy tłuszczowe i triglicerydy.
W warunkach ograniczenia tlenu podlega zjawisku dimorfizmu rosnąc w formie drożdżoidalnej. Nadto szczep ten jest zaliczany do organizmów olejodajnych (oleogineous), gdyż w jego mycelium przy wysokim stosunku źródła węgla do azotu w pożywce są gromadzone lipidy zapasowe w postaci ciał lipidowych, których ilość, w sprzyjających warunkach, w pożywce płynnej, sięga nawet 80% zawartości suchej masy grzybni, a w ich skład wchodzą przede wszystkim wolne i związane w postaci triacylogliceroli wyższe kwasy tłuszczowe, nienasycone jak linolowy, oleinowy, gamma-linolenowy i palmitooleinowy oraz nasycone jak palmitynowy, stearynowy, mirystynowy i kaprylowy, a proporcje składników lipidowych mogą być różne i zależą od warunków wzrostu szczepu. Lipidy te charakteryzują się znaczną zawartością karotenoidów, w tym niewielką ilością beta-karotenu. Odtłuszczona rozpuszczalnikami organicznymi grzybnia tych pleśni zawiera liczne białka enzymatyczne, w tym lipazy, chitozanazy i chitynazy, a nie zawiera aktywnych enzymów proteolitycznych.
Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym, według wynalazku polega na tym, że szczep pleśni Mucor racemosus MSA52 inkubuje się na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11 %o, następnie hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą 0,01-0,5% wodnego roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, szczepi się wysterylizowane pod3 łoże produkcyjne, o wyjściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm3 zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzi hodowlę statyczną w temperaturze 29-31 °C w czasie 2-5 dni mieszając podłoże 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczając przez złoże powietrze z szybkością 15-100 1/minutę. Stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 9-14 części wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 1,80-3,60 mm, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy
PL 215 087 B1 upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczeniu na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m, substancji organicznej minimum 40% s.m., i 50-150 części wody wodociągowej lub podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 50-150 części wody wodociągowej. Po zakończeniu hodowli z uzyskanej mieszaniny grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża sporządza się stały preparat lipazy. W tym celu mieszaninę grzybni oraz niewykorzystanych, stałych składników podłoża ekstrahuje się 2-5-krotnie acetonem stosując 1-5 ml acetonu na 1 g wyjściowego podłoża, ekstrakty sączy się na przegrodzie ceramicznej i suszy na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 24 godziny lub mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża suszy się na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 48 godzin. Otrzymany stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Sposób według wynalazku otrzymywania immobilizowanych lipaz Mucor circinelloides, na podłożu zawierającym 25-40% składników stałych, jest około 4-krotnie tańszy od tradycyjnych metod wgłębnych, wykorzystujących podłoże hodowlane w postaci cieczy, a preparaty enzymów otrzymane sposobem według wynalazku charakteryzują się aktywnością katalityczną w reakcji hydrolizy tłuszczów w zakresie 2,8-5,3 gmol/g x s.
Sposób według wynalazku ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d I.
Szczep pleśni Mucor racemosus MSA52 przeszczepiano na podłoże stałe, wysterylizowane w czasie 20 minut w temperaturze 121 °C, zawierające 0,01 części wagowych oleju rzepakowego, 30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8%0 i hodowano w temperaturze 30°C, w czasie 3 dni. 5,2 ml zawiesiny zarodników (sporangiospor) zmytych z tego podłoża, uzyskanej w wyniku 2-krotnego zmycia jednego skosu 4 ml 0,01% roztworu detergentu o nazwie handlowej Triton® X-100 w wodzie destylowanej, szczepiono wysterylizowane przez 20 minut w temperaturze 121 °C podłoże produkcyjne o wyjściowym pH 4,85, zawierające 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 11,92 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,55 mm, 8,24 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 115 części wagowych wody wodociągowej, umieszczone w kolbie stożkowej o objętości 1000 ml i prowadzono hodowlę statyczną w temperaturze 30°C w czasie 3 dni mieszając stałe podłoże hodowlane co 24 godziny. Do uzyskanej po hodowli mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża wprowadzano 300 ml acetonu i intensywnie mieszając prowadzono ekstrakcję składników rozpuszczalnych, po czym ekstrakt sączono na przegrodzie ceramicznej. Ekstrakcję powtarzano 3-krotnie. Otrzymany stały preparat enzymatyczny suszono w temperaturze 21 °C przez 24 godziny, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Otrzymano 24,5 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 5,33 gmol/g x s.
P r z y k ł a d II.
Hodowlę szczepu pleśni Mucor racemosus MSA52 prowadzono jak w przykładzie I. Uzyskaną po hodowli mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża suszono w temperaturze 20°C w czasie 48 godzin, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach. Otrzymano 31,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 2,50 gmol/g x s.
P r z y k ł a d III.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 15,05 części wagowych wytłoków jabłkowych, 8,24 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 115,00 części wagowych wody wodociągowej.
Otrzymano 27,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 5,35 gmol/g x s.
P r z y k ł a d IV.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 15,05 części wagowych wytłoków jabłkowych, 8,24 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 115,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie II.
PL 215 087 B1
Otrzymano 31,5 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 3,10 μmol/g x s.
P r z y k ł a d V.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 12,90 części wagowych otrąb pszennych, 8,24 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 115,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 20,8 części wagowych stałego preparatu lipazy o masie i aktywności lipolitycznej 3,81 μmol/g x s.
P r z y k ł a d VI.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie w częściach wagowych: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 11,92 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,55 mm, 8,23 części wagowych wytłoków sojowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 115,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 23,5 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 3,52 umol/g x s.
P r z y k ł a d VII.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 11,92 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,55 mm, 8,24 części wagowych wytłoków słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,69 mm i 115,00 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I.
Otrzymano 24,5 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 4,02 umol/g x s.
P r z y k ł a d VIII.
Proces otrzymywania preparatu lipazy prowadzono jak w przykładzie I na podłożu produkcyjnym o składzie: 12,09 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm,
11.20 części wagowych kompostu, 8,24 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 50,50 części wagowych wody wodociągowej. Proces suszenia preparatu prowadzono jak w przykładzie I. Otrzymano 25,2 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 2,34 umol/g x s.
P r z y k ł a d IX.
Wyodrębniony ze środowiska naturalnego szczep pleśni Mucor racemosus MSA52 przeszczepiano na podłoże stałe, wysterylizowane przez 20 minut w temperaturze 121°C, o składzie: 0,01 części wagowych oleju rzepakowego, 30 części wagowych agaru i 1000 części wagowych brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8%0 i hodowano w temperaturze 30°C w czasie 3 dni. 25 ml zawiesiny zarodników (sporangiospor), uzyskanej z 3 skosów tego podłoża w wyniku 2-krotnego zmycia każdego skosu 4 ml 0,01% roztworu detergentu o nazwie handlowej Triton® X-100 w wodzie destylowanej, szczepiono umieszczone w fermentorze SSF o objętości 5 I, wysterylizowane przez 30 minut w temperaturze 121°C, podłoże produkcyjne o składzie: 60,45 części wagowych śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 2,51 mm, 59,60 części wagowych wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 2,55 mm,
41.20 części wagowych wytłoków rzepakowych o średniej średnicy drobin 0,60 mm i 575 części wagowych wody wodociągowej i prowadzono hodowlę statyczną w temperaturze 30°C przez 4 dni, przepuszczając przez fermentor powietrze z szybkością 20 1/minutę i mieszając podłoże hodowlane co 4 godziny przez 1 minutę. Do uzyskanej po hodowli mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża wprowadzano 11 acetonu i intensywnie mieszając prowadzono ekstrakcję składników rozpuszczalnych acetonem, po czym ekstrakty sączono na przegrodzie ceramicznej. Ekstrakcję powtarzano 3-krotnie. Otrzymany stały preparat enzymatyczny dodatkowo suszono w temperaturze pokojowej przez 24 godziny w celu odparowania resztek acetonu, mielono w młynie udarowym i przechowywano w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Otrzymano 147,0 części wagowych stałego preparatu lipazy o aktywności lipolitycznej 5,67 umol/g x s.
PL 215 087 B1
Claims (5)
1. Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym, znamienny tym, że szczep pleśni Mucor racemosus MSA52 inkubuje się na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,01-0,0001 części tłuszczu prostego roślinnego lub zwierzęcego, 20-30 części agaru i 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 7-11 %o, następnie hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników, zmytych z tego podłoża za pomocą 0,01-0,5% wodnego roztworu detergentu z rodziny detergentów typu Triton X, szczepi się wysterylizowane podłoże produkcyjne o wyjściowym pH 4,6-5,0 używając 3-7 cm zawiesiny zarodników na 100 g podłoża hodowlanego i prowadzi hodowlę statyczną w temperaturze 29-31 °C w czasie 2-5 dni mieszając podłoże 1-8 razy na 24 godziny i przepuszczając przez złoże powietrze z szybkością 15-100 1/minutę i po zakończeniu hodowli z powstałej mieszaniny grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża sporządza się stały preparat lipazy.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 9-14 części wysłodków buraczanych o średniej średnicy drobin 1,80-3,60 mm, otrąb pszennych lub kompostu otrzymanego z odpadowej biomasy upraw jednorocznych oraz materiału strukturalnego roślin energetycznych, o zawartości azotu całkowitego minimum 0,5% m/m, potasu w przeliczeniu na tlenek potasu K2O minimum 0,3% m/m i substancji organicznej minimum 40% s.m., i 50-150 części wody wodociągowej.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się podłoże produkcyjne o składzie w częściach wagowych: 10-15 części śruty kukurydzianej o średniej średnicy drobin 1,90-3,50 mm, 6-12 części wytłoków rzepakowych, sojowych lub słonecznikowych o średniej średnicy drobin 0,50-1,20 mm, 12-18 części wytłoków jabłkowych i 50-150 części wody wodociągowej.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża, powstałą po hodowli, ekstrahuje się 2-5-krotnie acetonem stosując 1-5 ml acetonu na 1 g wyjściowego podłoża, ekstrakty sączy się na przegrodzie ceramicznej i suszy na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 24 godziny, a powstały stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że mieszaninę grzybni oraz nie wykorzystanych, stałych składników podłoża, uzyskaną po hodowli, suszy się na powietrzu w temperaturze 19-25°C przez 48 godzin, a powstały stały preparat rozdrabnia się w młynie udarowym i przechowuje w temperaturze pokojowej w zamkniętych naczyniach.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL391954A PL215087B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL391954A PL215087B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL391954A1 PL391954A1 (pl) | 2012-01-30 |
| PL215087B1 true PL215087B1 (pl) | 2013-10-31 |
Family
ID=45510286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL391954A PL215087B1 (pl) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL215087B1 (pl) |
-
2010
- 2010-07-26 PL PL391954A patent/PL215087B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL391954A1 (pl) | 2012-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12385003B2 (en) | Filamentous fungal biomats, methods of their production and methods of their use | |
| Hou et al. | Integrated bioethanol and protein production from brown seaweed Laminaria digitata | |
| US20090211150A1 (en) | Method for producing biodiesel using high-cell-density cultivation of microalga Chlorella protothecoides in bioreactor | |
| Adinarayana et al. | Optimization of process parameters for production of lipase in solid-state fermentation by newly isolated Aspergillus species | |
| CN101955888B (zh) | 高产油脂皮状丝孢酵母b3及其ems和紫外线复合诱变选育方法 | |
| Singh et al. | Immobilized lipase from Schizophyllum commune ISTL04 for the production of fatty acids methyl esters from cyanobacterial oil | |
| Amin et al. | Effect of physicochemical parameters on lipase production by Penicillium fellutanum using canola seed oil cake as substrate | |
| Rashid et al. | Mannanase production by Aspergillus niger USM F4 via solid substrate fermentation in a shallow tray using palm kernel cake as a substrate | |
| Zeng et al. | Waste cooking oil: New efficient carbon source for natamycin production by Streptomyces gilvosporeus Z8 | |
| Gutarra et al. | Lipase production and Penicillium simplicissimum morphology in solid‐state and submerged fermentations | |
| Parashar et al. | Production of Microbial Enzyme Triacylglycerol Acyl Hydrolases by Aspergillus Sydowii Jpg01 in Submerged Fermentation Using Agro-residues | |
| PL215087B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor racemosus w drodze hodowli na podłożu stałym | |
| KR101743232B1 (ko) | 염류 스트레스를 이용하여 지질함량을 증가시킨 미세조류 및 그의 제조방법 | |
| Nalini et al. | Current progress in the solid-state fermentation and utilization of agroindustrial residues for the production of biologically active secondary metabolites | |
| PL215088B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu immobilizowanej wewnątrzkomórkowej lipazy Mucor circinelloides w drodze hodowli na podłożu stałym | |
| Mojsov | Application of solid-state fermentation for cellulase enzyme production using Trichoderma viride | |
| US20160002679A1 (en) | Method of increasing lipid accumulation in metschnikowia pulcherrima cells | |
| Namasivayam et al. | Evaluation of organic waste liquor media for the production of alpha amylase using Aspergillus niger | |
| PL228104B1 (pl) | Sposób wytwarzania mieszaniny 2 -metylobutylowych estrów wyzszych kwasów tłuszczowych | |
| RU2626528C2 (ru) | Иммобилизованный биокатализатор для получения фумаровой кислоты | |
| KR101625074B1 (ko) | 산화 스트레스를 이용하여 지질함량을 증가시킨 미세조류 및 그의 제조방법 | |
| BR102014013453A2 (pt) | método para a produção de lipase de aspergillus niger utilizando resíduos do processameto de polpas de mangaba como substrato | |
| Sikdar et al. | Isolation Characterization and Screening of fungal Lipase from oil contaminated Soil: An approach of best from Waste | |
| Gropoșilă-Constantinescu et al. | Production of microbial lipids by Yarrowia lipolytica | |
| PL217686B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides |