PL231158B1 - Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących - Google Patents
Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulującychInfo
- Publication number
- PL231158B1 PL231158B1 PL410063A PL41006314A PL231158B1 PL 231158 B1 PL231158 B1 PL 231158B1 PL 410063 A PL410063 A PL 410063A PL 41006314 A PL41006314 A PL 41006314A PL 231158 B1 PL231158 B1 PL 231158B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- glycero
- phosphatidylcholine
- phosphatidylethanolamine
- vaccine
- derivatives
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 38
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 29
- 229920001731 Polyprenol Polymers 0.000 title claims abstract description 20
- 229930186185 Polyprenol Natural products 0.000 title claims abstract description 20
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 5
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 title claims description 14
- 150000003096 polyprenols Chemical class 0.000 title claims description 12
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims abstract description 20
- -1 cationic polyprenol Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 38
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 38
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 38
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- ISXSJGHXHUZXNF-LXZPIJOJSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate;hydrochloride Chemical compound Cl.C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 ISXSJGHXHUZXNF-LXZPIJOJSA-N 0.000 claims description 15
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Chemical class NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 12
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 12
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 12
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims description 10
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical group CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 claims description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 9
- 229920001550 polyprenyl Polymers 0.000 claims description 9
- 125000001185 polyprenyl group Polymers 0.000 claims description 9
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- QFMZQPDHXULLKC-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(diphenylphosphino)ethane Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(C=1C=CC=CC=1)CCP(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QFMZQPDHXULLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 1,2-di-[(9Z,12Z)-octadecadienoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 0.000 claims description 6
- WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTBFLCSPLLEDEM-JIDRGYQWSA-N 0.000 claims description 6
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 claims description 6
- ZLGYVWRJIZPQMM-HHHXNRCGSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-di(dodecanoyloxy)propyl] phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCC ZLGYVWRJIZPQMM-HHHXNRCGSA-N 0.000 claims description 6
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 6
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 claims description 6
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 6
- KYLYEZUDQSQIRP-UHFFFAOYSA-N D,L-(alpha-Glyceryl)-2-(dimethylammonium)-aethylphosphat Natural products CN(C)CCOP(O)(=O)OCC(O)CO KYLYEZUDQSQIRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 125000005313 fatty acid group Chemical class 0.000 claims 6
- ISXSJGHXHUZXNF-UHFFFAOYSA-N 2-[[10,13-dimethyl-17-(6-methylheptan-2-yl)-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxycarbonylamino]ethyl-dimethylazanium;chloride Chemical compound Cl.C1C=C2CC(OC(=O)NCCN(C)C)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 ISXSJGHXHUZXNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 claims 1
- BDMCAOBQLHJGBE-UHFFFAOYSA-N C60-polyprenol Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=CCCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CCC(=C/CO)C)C)C)C)C)C)C)C)C)C)C)C BDMCAOBQLHJGBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 32
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 17
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 15
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 15
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 229960002887 deanol Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012972 dimethylethanolamine Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- KHWUKFBQNNLWIV-KPNWGBFJSA-N (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimethyl-17-[(2R)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol hydrochloride Chemical compound Cl.C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 KHWUKFBQNNLWIV-KPNWGBFJSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000287826 Gallus Species 0.000 description 1
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6018—Lipids, e.g. in lipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Przedmiotem wynalazku jest szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących. Ujawnione rozwiązanie dotyczy zastosowania nośników opartych na kationowych pochodnych poliprenoli jako nośników szczepionek DNA.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych rozwiązanie dotyczy zastosowania nośników opartych na kationowych pochodnych poliprenoli stosowanych jako nośniki szczepionek DNA, łatwych do transportu i przechowywania.
Jednym z najważniejszych osiągnięć medycyny w zapobieganiu chorób było odkrycie i rozpoczęcie stosowania szczepionek. Miało to miejsce ponad 200 lat temu i wywarło ogromny wpływ na poziom profilaktyki wielu schorzeń na całym świecie. W ciągu wielu lat rozwoju technik produkowania i aplikacji nowych typów szczepionek ich znaczenie nie maleje, a wręcz przeciwnie - staje się coraz istotniejszym elementem dbałości o zdrowie społeczeństw i jednostek. Niejednokrotnie daje również nadzieję, na znalezienie drogi eliminacji chorób uważanych obecnie za nieuleczalne. Jednymi z najistotniejszych preparatów dających szereg możliwości i perspektywę nowych zastosowań są szczepionki DNA, których powstanie i stosowanie umożliwił intensywny rozwój narzędzi do dostarczania kwasów nukleinowych do komórek. Obiecujący potencjał szczepionek DNA w profilaktyce i leczeniu wielu chorób, stymuluje poszukiwania wydajnych i bezpiecznych przenośników materiału genetycznego, które mogłyby być stosowane in vivo. Nośniki takie muszą jednak spełniać dodatkowe kryteria - oprócz tych niezbędnych w efektywnym wprowadzaniu genów do komórek. Ponieważ same antygeny wprowadzane do organizmu są często niewystarczająco immunogenne do uzyskania zadowalającego poziomu odpowiedzi immunologicznej, nośniki oprócz wprowadzania DNA powinny gwarantować możliwość równoczesnego wprowadzania substancji immunomodulujących lub same działać jako adiuwanty w celu zwiększenia odpowiedzi na antygen.
Jednymi z często wykorzystywanych do wprowadzania szczepionek DNA są odczynniki używane w lipofekcji - metodzie przenoszenia kwasów nukleinowych opartej na zastosowaniu lipidów kationowych, które mogą spontanicznie oddziaływać z ujemnie naładowanymi kwasami nukleinowymi tworząc lipopleksy (kompleksy lipidy-kwasy nukleinowe). Niespecyficzne oddziaływanie z powierzchnią błony komórkowej stymuluje pobieranie lipopleksów przez komórki na drodze endocytozy, a dodatek innych lipidów (lipidów pomocniczych/ko-lipidów), np. DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina) czy DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}] zmienia właściwości lipopleksów ułatwiając uwolnienie kwasów nukleinowych z endosomów.
Duży potencjał lipidów kationowych jako nośników szczepionek DNA, ale również adiuwantów jest powodem intensywnych badań prowadzonych w celu opracowania wydajnych i bezpiecznych narzędzi lipidowych (Korsholm 2012, Christensen 2007). Wiele prób potwierdza działanie adiuwantów lipidowych (Carroll 2014, Firouzmand 2013) jednakże dotychczas nie udało się opracować idealnego składnika lipidowego do zastosowania w szczepionkach. Może to wynikać z faktu ogromnej różnorodności szczepionek i sposobów ich podawania, jednostek chorobowych, reakcji organizmu oraz rozmaitych skutków ubocznych. Poszukiwania idealnych nośników i adiuwantów komplikuje dodatkowo różnorodność mechanizmów biorących udział w procesie skutecznej immunizacji, która skutkuje wysoką złożonością wzajemnych relacji pomiędzy składnikami szczepionek a bezpieczeństwem ich działania i wydajnością.
Pomimo, że w stanie techniki istnieją kationowe pochodne poliprenoli o aktywności lipofekcyjnej (Madeja et al. 2007, patent PL211824), nie były one jednak dotychczas stosowane ani jako nośniki szczepionek DNA ani adiuwanty. Istniejące rozwiązanie przedstawione w opisie patentowym PL 211824 nie wskazuje na możliwość zastosowania poliprenoli w warunkach surowiczych (w obecności surowicy), co oznacza, że dotychczas nie było w stanie techniki żadnej zachęty dla specjalisty w dziedzinie do immunizacji in vivo (fig. 1 - stan techniki). Ponadto opisany sposób przygotowania mieszaniny nie zapewnia stabilności przez dłuższy czas, a także nie jest wygodny do zastosowania w szczepionkach. Jest to poważna wada rozwiązań będących w stanie techniki, gdyż szczepionki wymagają stabilności przez dłuższy czas i powinny być wygodne do przechowywana i transportu oraz proste w użyciu.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowych nośników lipidowych, do wprowadzania szczepionek DNA do organizmów eukariotycznych, o działaniu adiuwantów, nie posiadających powyższych ograniczeń. Bardziej szczegółowo celem wynalazku jest zastosowanie kompozycji zawierających nośniki kwasów nukleinowych złożonych z kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o różnej długości łańcucha poliprenylowego (6-15 reszt izoprenowych) o wzorze (I) i lipidów pomocniczych.
PL231 158 Β1
Realizacja tak określonego celu i rozwiązanie opisanych w stanie techniki problemów związanych z opracowaniem wynalazku umożliwiającego zastosowanie nośników opartych na kationowych pochodnych poliprenoli realizując zapotrzebowanie w dziedzinie wprowadzania szczepionek DNA, łatwych do transportu i przechowywania, zostało osiągnięte w niniejszym wynalazku. Nieoczekiwanie, zmiana składu i przygotowania kompozycji zawierających kationowe pochodne poliprenoli doprowadziła do ich skutecznego i wygodnego zastosowania do wydajnej immunizacji, umożliwiając uzyskanie szczepionek stabilnych przez dłuższy okres, co znacznie ułatwiło ich wygodne wykorzystanie bez konieczności każdorazowego sporządzania bezpośrednio przed użyciem.
Przedmiotem wynalazku jest szczepionka, charakteryzująca się tym, że zawiera kwas nukleinowy stanowiący substancję aktywną oraz nośniki kwasów nukleinowych złożone z kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)
H,
H—pCHj C = CH CH2-f- N-CH3
CHj (1), i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.
Korzystnie, gdy kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
Korzystnie, gdy szczepionka zawiera lipidy pomocnicze, korzystnie stosowane w lipofekcji.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są spośród grupy DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), cholesterolu, DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-Ν,Ν-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina).
Korzystnie, gdy szczepionka według wynalazku stanowi szczepionkę przeciwko wirusowi grypy.
Korzystnie, gdy szczepionka służy do immunizacji zwierząt, korzystnie ptaków i/lub ssaków.
Korzystnie, gdy szczepionka służy do immunizacji człowieka.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, charakteryzująca się tym, że zawiera kwas nukleinowy stanowiący substancję aktywną oraz nośniki kwasów nukleinowych złożone z kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I) <fH»
N—CH, | 9 i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.
Korzystnie, gdy kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
PL231 158 Β1
Korzystnie, gdy kompozycja zawiera lipidy pomocnicze.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze stanowią lipidy stosowane w lipofekcji.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są spośród DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), pochodnych cholesterolu, DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-N,N-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina).
Korzystnie, gdy kompozycja stanowi nośnik substancji aktywnych biologicznie, kwasów nukleinowych do komórek eukariotycznych in vivo.
Korzystnie, gdy kompozycja stanowi szczepionkę.
Korzystnie, gdy kompozycja stanowi szczepionkę przeciwko wirusowi grypy.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie o ładunku ujemnym do komórek eukariotycznych in vivo charakteryzujący się tym, że zawiera kationowe pochodne poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)
CHj-C=CH
(IK i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.
Korzystnie, gdy kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze, korzystnie stanowią lipidy stosowane w lipofekcji.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.
Korzystnie, gdy lipidy pomocnicze wybrane są spośród grupy DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), cholesterolu, DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-Ν,Ν-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina).
Korzystnie, gdy nośnik ma zastosowanie w szczepionkach przeciwko wirusowi grypy.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kompozycji określonej zastrzeżeniami 9 do 17 do wytwarzania szczepionki DNA.
Korzystnie, gdy kompozycja jest stosowana do wytwarzania szczepionki przeciwko wirusowi grypy.
PL231 158 Β1
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)
CHS-C = CHi?» :Ha-r TCH=
CH, i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, do wytwarzania substancji immunomodulujących.
Korzystnie, gdy kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
Przedmiot wynalazku jest uwidoczniony na rysunku, gdzie:
Na figurze 1 przedstawiono wykres A (stan techniki) przedstawiający wydajność lipofekcji komórek DU145 z użyciem PTAI+DOPE w warunkach bezsurowiczych i w obecności surowicy przy zastosowaniu medium DMEM F12 HAM. Stężenia lipopleksów (podane na dołek płytki 24-dołkowej): PTAI-7+DOPE - 2,5 pg/dołek, PTAI-8+DOPE - 3 μg/dołek, PTAI-11+DOPE - 4 μg/dołek, PTAI-15+DOPE 5 μg/dołek. Wartości podano jako średnie ± SD. Lipof. 2000 - Lipofectamine 2000 Reagent - odczynnik stosowany jako kontrola pozytywna. (Monika Rak, rozprawa doktorska „Zastosowanie kationowych pochodnych poliizoprenoidów jako nośników kwasów nukleinowych w lipofekcji”, UJ, 2014).
Na figurze 2 przedstawiono porównanie odpowiedzi immunologicznej (poziom anty-HA IgY) kurcząt immunizowanych preparatem DNA (plazmid K3, 125 μg) zmieszanym z komercyjnym nośnikiem Lipofectin® (K3+L) lub kationowymi pochodnymi poliprenoli (K3+PTAI-mix i K3+PTAI-11DC). Negatywną kontrolą immunizacji była grupa kurcząt (Vect) szczepionych mieszaniną pustego wektora z Lipofectinem (2 kury) lub PTAI (3 kury). Poziom specyficznych przeciwciał anty-HA IgY był badany testem ELISA w surowicach krwi (rozcieńczenie 1:200) pobranych w 21,28 i 35 dobie życia (21d, 28d, 35d). Uzyskane wyniki dla poszczególnych/indywidualnych kurcząt są przedstawione na panelu A, natomiast miana HI uzyskane z testu zahamowania hemaglutynacji (HI) dla surowic pobranych od poszczególnych kurczaków W 35 dobie życia przedstawiono na panelu B. Wyniki potwierdzają wydajne działanie (lepsze niż dla Lipofectin) użytych mieszanin poliprenoli, zwłaszcza PTAI-11DC.
Na figurze 3 przedstawiono poziom odpowiedzi immunologicznej (anty-HA IgY) w surowicach (rozcieńczenie 1:200) kurczaków immunizowanych różnymi mieszaninami DNA z nośnikami przygotowanymi według schematu A. Surowice pobrane w 21, 28 i 35 dobie życia badano testem ELISA. Zamieszczone wyniki wskazują na wysoką efektywność działania zastosowanych nośników PTAI.
Schemat A. Skład stosowanej w eksperymencie szczepionki zawierającej mieszaninę kompozycji PTAI (PTAI-11+DOPE+DC-cholesterol) z DNA.
Vect-pusty wektor pCI bez sekwencji kodującej HA (negatywna kontrola)
| Numer grupy | Skład | PTAI-11:DNA (w/w) |
| PI | PTAI+125 pgDNA(K3) | 0,8:1 |
| P2 | PTAI+62 pg DNA (K3) | 1,6:1 |
| P3 | PTAI+62 pg DNA (K3) | 0,8:1 |
| LI | Lipofectin (20pl)+125 pg DNA (K3) | Nie dotyczy |
| L2 | Lipofectin (10pl)+62 pg DNA (K3) | Nie dotyczy |
| Vect | Lipofectin (20pl)+125 pg DNA (pCI) | Nie dotyczy |
Na figurze 4A przedstawiono wartości miana surowic pobranych od kur w 35 dobie życia oznaczone testem ELISA (anty-HA IgY) z użyciem dwukrotnych seryjnych rozcieńczeń oznaczanych surowic. Czerwoną poziomą linią zaznaczono najwyższe miano surowic w kurach kontrolnych. Na fig. 4B
PL 231 158 B1 przestawiono miana HI badanych surowic. Wyniki wskazują na wysoką efektywność testowanych nośników (P1, P2, P3).
Na figurze 5 przedstawiono poziom indukowanej odpowiedzi immunologicznej (anty-HA IgG) u myszy szczepionych preparatami DNA (plazmid K3, 10 μg) zmieszanymi z Lipofectinem (K3+L) lub kationowymi pochodnymi poliprenoli (K3+PTAI). Wyniki uzyskane dla indywidualnych osobników, jak i średnie dla całych grup pokazano odpowiednio na panelu A i B. Wskazują one na wyższą efektywność działania PTAI w porównaniu z Lipofectinem - wyższy poziom specyficznych przeciwciał. Negatywną kontrolą immunizacji była grupa myszy(Vect+L) szczepionych mieszaniną pustego wektora z Lipofectinem.
Schemat A zawiera szczegółowy skład używanych preparatów DNA do immunizacji kurczaków w eksperymencie opisanym w przykładzie nr 2.
W celu lepszego zrozumienia wynalazku poniżej przedstawiono przykładowe rozwiązania według wynalazku.
Przykłady
P r z y k ł a d 1. Przygotowanie i zastosowanie wybranych kompozycji do immunizacji kurcząt przeciwko wirusowi grypy oraz porównanie ich efektywności z dostępnym komercyjnie odczynnikiem.
PTAI-6,7,8 i PTAI-11 oraz lipidy pomocnicze - DOPE, DC-cholesterol, rozpuszczono w 99,8% etanolu, w stężeniach odpowiednio - 20; 10; 25; 33 mg/ml. Następnie zmieszano ze sobą w odpowiednich proporcjach w celu uzyskania następujących stosunków molowych w mieszaninach:
PTAI-6,7,8+DOPE - 1,5:1
PTAl-11 +DOPE+DC-cholesterol -1:1:1
Po czym zmieszano z medium do hodowli komórek DMEM F-12 HAM bez dodatku surowicy i antybiotyków i intensywnie mieszane przez 3 minuty - stężenie etanolu w tak przygotowanych kompozycjach wynosiło:
PTAI-6,7,8+DOPE - 11,4%
PTAI-11+DOPE+DC-cholesterol - 20,7%
Gotowe kompozycje były przechowywane w 4°C i użyte do immunizacji w ciągu 5 dni od przygotowania.
Preparaty do immunizacji były przygotowane przez zmieszanie PTAI z DNA (plazmid K3 zawierający sekwencję kodującą H5 HA z wirusa grypy H5N1; zgłoszenie patentowe PL-396415, zgłoszone rozszerzenie na USA - Nr PCT/PL2012/000095; SEQ ID No. 1), tak aby stosunek wagowy wynosił 0,9:1 dla PTAI-6,7,8:DNA oraz 0,8:1 dla PTAI-11 :DNA. DNA kodujący antygen grypy został użyty w przykładzie jedynie przykładowo. Rozwiązanie dotyczy dowolnej innej szczepionki DNA.
Następnie mieszaniny PTAI/DNA inkubowano przez 30 min w temperaturze pokojowej i podawano 7-dniowym kurczętom typu mięsnego w postaci iniekcji domięśniowych zawierających 125 μg DNA. Po dwóch tygodniach (21 doba życia) podawano dawkę przypominającą. Kontrolę pozytywną stanowiły kurczaki szczepione preparatami DNA, w których PTAI zastąpiono komercyjnie dostępnym odczynnikiem Lipofectin® (Invitrogen, Life Technologies). Próbki krwi pobierano trzykrotnie w 21, 28 i 35 dobie życia, czyli odpowiednio w dniu podania dawki przypominającej oraz jeden i dwa tygodnie później. Skuteczność immunizacji oceniano testem ELISA. Płytki (96-dołkowe) opłaszczano rekombinowanym antygenem homologicznym H5 HA w ilości 300 ng/dołek. Do detekcji IgY używano kozich przeciwciał anti-chicken IgY (Fc-specific) sprzężonych z HRP.
Na figurze 2 przedstawiono wyniki, które wskazują na wysoką skuteczność zastosowanych kompozycji PTAI w immunizacji kurcząt przeciwko wirusowi grypy szczepionką DNA (przedmiot patentu P396415). Wyniki uzyskane dla PTAI-6,7,8+DOPE oznaczono jako PTAI-mix, natomiast dla PTAI-11 +DOPE+DC-cholesterol oznaczono jako PTAI-11DC. W panelu A przedstawiono wyniki testu ELISA uzyskane dla surowic (rozcieńczonych 200 razy) pobranych od indywidualnych kurczaków w 21, 28 i 35 dobie życia, natomiast wyniki testu HI w surowicach pobranych w 35 dobie życia zamieszczono w panelu B.
P r z y k ł a d 2. Zastosowanie mieszaniny PTAI-11 +DOPE+DC-cholesterol z różnymi ilościami DNA do szczepień kurczaków przeciwko wirusowi grypy.
Kompozycję PTAI (PTAI-11+DOPE+DC-cholesterol) przygotowaną tak jak opisano w przykładzie 1 mieszano ze 125 μg lub 62,5 μg plazmidowego DNA. W ten sposób uzyskano 3 mieszaniny z dwoma różnymi dawkami DNA: (1) P1 (125 μg DNA na dawkę szczepionki), w której proporcja wagowa PTAI-11 :DNA wynosi 0,8:1, (2) P2, (62,5 μg DNA na dawkę szczepionki), w której proporcja wagowa PTAI-11 :DNA wynosi 1,6:1 oraz (3) P3 (62,5 μg DNA na dawkę szczepionki), w której proporcja
PL 231 158 B1 wagowa PTAI-11 :DNA wynosi 0,8:1. Przygotowane dawki szczepionki inkubowano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Jednocześnie przygotowywano porcje szczepionki zawierające zamiast PTAI komercyjny odczynnik do transfekcji Lipofectin (mieszaniny L1 i L2). Negatywną kontrolą immunizacji była grupa kurcząt (Vect) szczepionych mieszaniną pustego wektora z Lipofectinem. Skład mieszanin stosowanych w szczepieniach podano w Schemacie A.
Kury typu nioski szczepiono domięśniowo dwukrotnie w 7 i 21 dobie życia. Podział na grupy zgodnie z zastosowanym preparatem do szczepień podano na schemacie A. Próbki krwi pobierano z żyły skrzydłowej w 21,28 i 35 dobie życia. Odpowiedź immunologiczną badano testem ELISA. Wyniki testu potwierdziły wysoką efektywność zastosowanego PTAI jako nośnika szczepionki DNA. Na fig. 3 pokazano wyniki ELISA wskazujące na wysoki poziom przeciwciał anty-HA w surowicach (rozcieńczenie 200 razy) immunizowanych zwierząt. 96-dołkową płytkę opłaszczano 300 ng rekombinowanego antygenu HA oczyszczonego z systemu baculowirusa. IgY wykrywano przeciwciałami kozimi anti-chicken IgY (Fc specific) sprzężonych z HRP.
Figura 4A przedstawia miana przeciwciał anty-H5 HA w dwukrotnych seryjnych rozcieńczeniach surowic pobranych w 35 dobie życia. Figura 4B przedstawia wyniki testu HI dla tych samych surowic. Miano przeciwciał anty-HA określano jako odwrotność najwyższego rozcieńczenia surowicy przy którym uzyskano wynik wyższy od oszacowanej wartości: tło+3xSD (3-krotna wartość odchylenia standardowego). Wyniki przedstawiono w skali logarytmicznej. W przypadku gdy większe niż standardowo stosowane 200-krotne rozcieńczenia nie były konieczne (odczyt <1 przy rozcieńczeniu 200-krotnym), miano było oszacowane przez pomnożenie wartości OD odczytanej w teście ELISA przez 200 czyli odwrotność rozcieńczenia surowicy użytej do testu ELISA.
P r z y k ł a d 3. Zastosowanie mieszaniny PTAI-10-14+DOPE+DC-cholesterol z DNA jako szczepionki do immunizacji myszy przeciwko wirusowi grypy.
Mieszaninę kompozycji PTAI [PTAI-10-14 (10, 11, 12, 13, 14)+DOPE+DC-cholesterol] z plazmidowym DNA (10 pg), w której proporcja wagowa PTAI:DNA wynosi 0,8:1, przygotowano jak opisano w przykładzie 1. Samice myszy BALB/c immunizowano domięśniowo dwukrotnie w 35 i 49 dobie życia mieszaniną K3 z kompozycją PTAI (K3+PTAI) lub K3 z Lipofectinem (K3+L). Jako kontrolę negatywną stosowano mieszaninę zawierającą DNA kontrolne (wektor bez insertu kodującego HA) z Lipofectinem (Vect+L). Krew pobierano w 49, 56 i 63 dobie życia. Obecność specyficznych przeciwciał anty-HA wykazano testami ELISA. Płytkę do testów opłaszczano 300 ng rekombinowanego antygenu HA H5. Do detekcji IgG stosowano przeciwciała kozie anti-mouse IgG sprzężone z AP. Figura 5 przedstawia poziom przeciwciał IgG anty-HA w surowicach rozcieńczonych 1:100. Wyniki uzyskane dla surowic pochodzących z pojedynczych myszy umieszczono w panelu A, wyliczone średnie dla odpowiednich immunizowanych grup przedstawiono w panelu B.
LITERATURA
Carroll TD, Matzinger SR, Barry PA, McChesney MB, Fairman J, Miller CJ, Efficacy of influenza vaccination of elderly rhesus macaques is dramatically improved by addition of a cationic lipid/DNA adjuvant, J Infect Dis. 2014; 209(1): 24-33.
Chojnacki T, Ciepichał E, Jankowski W, Kula-Świeżewska E, Chmielewski M, Masnyk M, Łysek, Madeja Z, Rak M, Trimetyloaminowe pochodne poli-cis i poli-trans liniowych oligomerów izoprenowych, sposób ich wytwarzania oraz ich zastosowanie. PL 211824 B1.
Christensen D, Korsholm KS, Rosenkrands I, Lindenstr0m T, Andersen P, Agger EM, Cationic liposomes as vaccine adjuvants, Expert Rev Vaccines. 2007; 6(5): 785-96.
Firouzmand H, Badiee A, Khamesipour A, Heravi Shargh V, Alavizadeh SH, Abbasi A, Jaafari MR, Induction of protection against leishmaniasis in susceptible BALB/c mice using simple DOTAP cationic nanoliposomes containing soluble Leishmania antigen (SLA), Acta Trop. 2013; 128(3): 528-35.
Korsholm KS, Andersen PL, Christensen D, Cationic liposomal vaccine adjuvants in animal challenge models: overview and current clinical status, Expert Rev Vaccines. 2012; 11(5): 561-77.
Madeja Z, Rak M, Wybieralska E, Różański I, Masnyk M, Chmielewski M, Lysek R, Chojnacki T, Jankowski W, Ciepichal E, Swiezewska E, Tekle M, Dallner G, New cationic polyprenyl derivative proposed as a lipofecting agent, Acta Biochim Pol. 2007 54(4): 873-6.
Stachyra A, Góra-Sochacka A, Sawicka R, Florys K, Sączyńska V, Olszewska M, Pikuła A, Śmietanka K, Minta Z, Szewczyk B, Zagórski W, Sirko A. 2014. Highly immunogenic prime-boost DNA vaccination protects chickens against challenge with homologous and heterologous H5N1 virus. - Trials Vaccinol. 3: 40-46; http://dx.doi.org/10.1016/j.trivac.2014.02.002
PL231 158 Β1
Lista sekwencji
Sekwencja ID No 1
Sekwencja nukleotydowa (K3) kodująca hemaglutyninę H5 z wirusa H5N1 A/swan/Poland/305-135 V08/2006, zmodyfikowana w celu uzyskania optymalnej ekspresji w komórkach kury (Gallus galluś). Oprócz zmiany kodonów na optymalne usunięto sekwencję kodującą 6 aminokwasów (RRRKKR) pomiędzy podjednostką HA1 i HA2 - miejsce rozpoznawane przez proteazy komórkowe.
ATGGAAAAGATTGTGCTGCTGTTTGCTATCGTGTCCCTGGTGAAAAGCGACCA
GATTTGTATCGGGTATCATGCCAATAACTCAACCGAACAGGTGGATACTATTA
TGGAGAAAAACGTGACTGTGACCCACGCCCAGGACATCCTGGAGAAGACCCA
TAACGGCAAACTGTGCGATCTGGACGGAGTGAAGCCCCTGATCCTGCGCGATT
GCAGCGTGGCTGGCTGGCTGCTGGGAAACCCTATGTGCGACGAGTTCCTGAAT
GTGCCAGAATGGTCCTACATCGTGGAGAAAATTAACCCAGCAAATGATCTGTG
CTACCCCGGCAACTTCAATGACTATGAGGAACTGAAGCACCTGCTGTCTAGGA
TCAACCATTTCGAAAAGATCCAGATCATCCCTAAGAGCTCCTGGAGCGATCAC
GAGGCTTCTTCAGGCGTGAGTAGCGCATGTCCATACCAGGGACGCTCCTCTTTC
TTTCGGAACGTGGTGTGGCTGATTAAGAAAGACAATGCTTACCCAACTATCAA
ACGCAGCTATAACAATACCAACCAGGAAGATCTGCTGGTGCTGTGGGGAATCC
ACCATCCCAACGACGCCGCTGAGCAGACACGGCTGTACCAGAATCCTACCACA
TATATTAGTGTGGGGACAAGCACTCTGAACCAGAGACTGGTGCCCAAGATCGC
AACAAGGAGCAAAGTGAATGGCCAGTCCGGAAGAATGGAGTTCTTTTGGACTA
TCCTGAAGCCAAACGATGCCATTAATTTCGAATCTAACGGCAACTTCATCGCA
CCCGAGAACGCCTACAAGATTGTGAAGAAAGGAGACTCCACTATCATGAAATC
TGAGCTGGAATATGGGAACTGCAATACCAAGTGTCAGACACCTATCGGTGCAA
TTAACTCAAGTATGCCCTTTCACAATATCCATCCTCTGACCATTGGGGAGTGCC
CCAAGTACGTGAAAAGTAACCGCCTGGTGCTGGCCACAGGTCTGCGGAATAGC
CCTCAGGGGGAAGGTCTGTTCGGGGCTATCGCAGGTTTTATTGAGGGCGGATG
GCAGGGAATGGTGGATGGGTGGTACGGTTATCACCATTCAAACGAACAGGGC
AGTGGATACGCAGCCGATAAGGAGTCAACACAGAAAGCCATTGACGGAGTGA
CTAACAAGGTGAACTCCATCATTAACAAAATGAACACCCAGTTCGAGGCTGTG
GGGAGAGAGTTCAACAATCTGGAGAGAAGGATCGAAAACCTGAATAAGAAAA
TGGAAGATGGCTTCCTGGACGTGTGGACTTACAACGCTGAGCTGCTGGTGCTG
ATGGAGAATGAAAGGACCCTGGATTTTCACGACAGCAACGTGAAGAATCTGTA
TGATAAAGTGAGACTGCAGCTGAGGGACAACGCAAAGGAACTGGGGAATGGT
TGTTTCGAGTTTTACCATAGATGCGATAACGAGTGTATGGAATCCGTGAGGAA
TGGCACATACGACTATCCACAGTATTCTGAGGAAGCCCGCCTGAAGCGGGAGG
AAATTTCTGGGGTGAAACTGGAGTCAATCGGTACCTACCAGATCCTGTCTATCT
ACTCAACAGTGGCTAGCTCCCTGGCCCTGGCTATCATGGTGGCTGGCCTGAGC
CTGTGGATGTGCTCTAACGGTAGCCTGCAGTGTAGGATCTGTATTTGA
PL231 158 Β1
Claims (27)
- Zastrzeżenia patentoweSzczepionka, znamienna tym, że zawiera kwas nukleinowy stanowiący substancję aktywną oraz nośniki kwasów nukleinowych złożone z kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I) (Ο2.3.4.5.
- 2.
- 3.
- 4.
- 5.
- 6.
- 7.
- 8.
- 9.6.7.8. 9.ι że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera lipidy pomocnicze, korzystnie stosowane w lipofekcji.Szczepionka według zastrz. 3, znamienna tym, że lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.Szczepionka według zastrz. 4, znamienna tym, że lipidy pomocnicze wybrane są spośród grupy DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), cholesterolu, DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-N,N-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1 -palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina). Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że stanowi szczepionkę przeciwko wirusowi grypy.Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że służy do immunizacji zwierząt, korzystnie ptaków i/lub ssaków.Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że służy do immunizacji człowieka. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera kwas nukleinowy stanowiący substancję aktywną oraz nośniki kwasów nukleinowych złożone z kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)
- 10.
- 11.10.11.i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a-zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.Kompozycja według zastrz. 8, znamienna tym, że kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.Kompozycja według zastrz. 8, znamienna tym, że zawiera lipidy pomocnicze.PL231 158 Β1
- 12. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że lipidy pomocnicze stanowią lipidy stosowane w lipofekcji.
- 13. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.
- 14. Kompozycja według zastrz. 13, znamienna tym, że lipidy pomocnicze wybrane są spośród DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), pochodnych cholesterolu, DC-cholesterolu [chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-N,N-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1 -palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina).
- 15. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że stanowi nośnik substancji aktywnych biologicznie, kwasów nukleinowych do komórek eukariotycznych in vivo.
- 16. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że stanowi szczepionkę.
- 17. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że stanowi szczepionkę przeciwko wirusowi grypy.
- 18. Nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie o ładunku ujemnym do komórek eukariotycznych in vivo, znamienny tym, że zawiera kationowe pochodne poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)H— CH, = CHN-CH, i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, a zawartość lipidów pomocniczych stanowi co najmniej 5% (w/w) mieszaniny.
- 19. Nośnik według zastrz. 16, znamienny tym, że kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
- 20. Nośnik według zastrz. 18, znamienny tym, że lipidy pomocnicze, korzystnie stanowią lipidy stosowane w lipofekcji.
- 21. Nośnik według zastrz. 18, znamienny tym, że lipidy pomocnicze wybrane są z grupy pochodnych cholesterolu, pochodnych fosfatydylocholiny z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloetanoloaminy z dołączonymi resztami wyższych kwasów tłuszczowych, pochodnych fosfatydyloseryny.
- 22. Nośnik według zastrz. 18, znamienny tym, że lipidy pomocnicze wybrane są spośród grupy DOPE (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), cholesterolu, DC-cholesterolu[chlorowodorek {33-[N-(N',N'-dimetyloaminoetan)-karbamoilo]cholesterolu}], DOPC: (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPC (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DMPE (1,2-dimirystylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPC (1,2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), DPPC (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), fosfatydylocholina, fosfatydyloetanoloamina, DPPE (1,2-dipalmitylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DLPE (2-dilaurylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DOPS (1,2-dioleilo-sn-glicero-3-fosfatydyloseryna), POPC (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), PDME (fosfatydylo-N,N-dimetyloetanoloamina), DSPE (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydyloetanoloamina), DSPC (1,2-distearylo-sn-glicero-3-fosfatydylocholina), POPE (1-palmitylo-2-oleilo-sn-glicero-3-fosfatydyletanoloamina) lub PMME (fosfatydylo-monometyloetanoloamina).PL231 158 Β1
- 23. Nośnik według zastrz. 18, znamienny tym, że ma zastosowanie w szczepionkach przeciwko wirusowi grypy.
- 24. Zastosowanie kompozycji określonej zastrz. 9 do 17 do wytwarzania szczepionki DNA.
- 25. Zastosowanie według zastrz. 24 do wytwarzania szczepionki przeciwko wirusowi grypy.
- 26. Zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI o długości łańcucha poliprenylowego n, gdzie n określa liczbę od 6 do 12 reszt izoprenowych, zgodnie ze wzorem (I)H- CH2 C = CHN-GH, i że zawartość PTAI stanowi co najmniej 20% (w/w) mieszaniny, do wytwarzania substancji immunomodulujących.
- 27. Zastosowanie według zastrz. 26, w którym kwas nukleinowy koduje antygen, antygeny lub fragmenty antygenów wirusa grypy lub inny antygen.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL410063A PL231158B1 (pl) | 2014-08-28 | 2014-11-04 | Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących |
| PCT/PL2015/000093 WO2016032348A1 (en) | 2014-08-28 | 2015-06-12 | Use of cationic derivatives of polyprenols ptai in production of immunomodulating substances |
| EP15739689.6A EP3185893B1 (en) | 2014-08-28 | 2015-06-12 | Use of cationic derivatives of polyprenols ptai in production of immunomodulating substances |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PLP-409298 | 2014-08-28 | ||
| PL40929814 | 2014-08-28 | ||
| PL410063A PL231158B1 (pl) | 2014-08-28 | 2014-11-04 | Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL410063A1 PL410063A1 (pl) | 2016-02-29 |
| PL231158B1 true PL231158B1 (pl) | 2019-01-31 |
Family
ID=55361206
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL410063A PL231158B1 (pl) | 2014-08-28 | 2014-11-04 | Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących |
| PL410078A PL230096B1 (pl) | 2014-08-28 | 2014-11-06 | System nośników kwasów nukleinowych, sposób przygotowania systemu oraz ich zastosowanie |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL410078A PL230096B1 (pl) | 2014-08-28 | 2014-11-06 | System nośników kwasów nukleinowych, sposób przygotowania systemu oraz ich zastosowanie |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3185893B1 (pl) |
| PL (2) | PL231158B1 (pl) |
| WO (1) | WO2016032348A1 (pl) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10229872A1 (de) * | 2002-07-03 | 2004-01-29 | Curevac Gmbh | Immunstimulation durch chemisch modifizierte RNA |
| PL211824B1 (pl) | 2007-05-17 | 2012-06-29 | Inst Biochemii I Biofizyki Pan | Trimetyloaminowe pochodne poli-cis i poli-trans liniowych oligomerów izoprenowych, sposób ich wytwarzania oraz ich zastosowanie |
-
2014
- 2014-11-04 PL PL410063A patent/PL231158B1/pl unknown
- 2014-11-06 PL PL410078A patent/PL230096B1/pl unknown
-
2015
- 2015-06-12 WO PCT/PL2015/000093 patent/WO2016032348A1/en not_active Ceased
- 2015-06-12 EP EP15739689.6A patent/EP3185893B1/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3185893B1 (en) | 2023-07-05 |
| PL410063A1 (pl) | 2016-02-29 |
| PL410078A1 (pl) | 2016-02-29 |
| PL230096B1 (pl) | 2018-09-28 |
| WO2016032348A1 (en) | 2016-03-03 |
| EP3185893A1 (en) | 2017-07-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11771653B2 (en) | Lipid nanoparticles for delivering mRNA vaccines | |
| AU2023200515B2 (en) | PEGylated liposomes and methods of use | |
| US6780421B1 (en) | Adjuvant for a vaccine composition | |
| US20230310571A1 (en) | Human metapneumovirus vaccines | |
| US7604803B2 (en) | Method to enhance an immune response of nucleic acid vaccination | |
| JP2023550600A (ja) | ｍＲＮＡワクチンを送達するための脂質ナノ粒子 | |
| US20240148897A1 (en) | Composition for in vivo delivery of rna and preperation method therefor | |
| EA015271B1 (ru) | Противогриппозные вакцины, содержащие гемагглютинин и белки матрикса | |
| CA2156525A1 (en) | Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a | |
| TW201427686A (zh) | 改良之疫苗組成物及使用方法 | |
| PT2271360E (pt) | Vacina | |
| US20240366747A1 (en) | Universal vaccine for influenza virus based on tetrameric m2 protein incorporated into nanodiscs | |
| Stachyra et al. | Effective usage of cationic derivatives of polyprenols as carriers of DNA vaccines against influenza virus | |
| JPH08506592A (ja) | ３−ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ含有のインフルエンザワクチン組成物 | |
| PL231158B1 (pl) | Szczepionka, kompozycja farmaceutyczna, nośnik kwasów nukleinowych oraz innych substancji aktywnych biologicznie, zastosowanie kompozycji do wytwarzania szczepionki oraz zastosowanie kationowych pochodnych poliprenoli PTAI do wytwarzania substancji immunomodulujących | |
| CN117580568A (zh) | 多价流感疫苗 | |
| Goetz | Ionic Liquid Adjuvants for Infectious Disease Vaccines | |
| HK40096671A (zh) | 用於递送mrna疫苗的脂质纳米颗粒 |