PL235423B1 - Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 - Google Patents
Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 Download PDFInfo
- Publication number
- PL235423B1 PL235423B1 PL424871A PL42487118A PL235423B1 PL 235423 B1 PL235423 B1 PL 235423B1 PL 424871 A PL424871 A PL 424871A PL 42487118 A PL42487118 A PL 42487118A PL 235423 B1 PL235423 B1 PL 235423B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- hsv
- virus
- block
- poly
- use according
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 13
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 title claims description 8
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 title claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 29
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 25
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- UZNHKBFIBYXPDV-UHFFFAOYSA-N trimethyl-[3-(2-methylprop-2-enoylamino)propyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(=C)C(=O)NCCC[N+](C)(C)C UZNHKBFIBYXPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 6
- -1 serum Substances 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000903 Herpes simplex encephalitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037018 Herpes simplex virus encephalitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005100 Herpetic Keratitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010073938 Ophthalmic herpes simplex Diseases 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 238000010410 dusting Methods 0.000 claims description 2
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 claims description 2
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010884 herpes simplex virus keratitis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 34
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 8
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 6
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 6
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- VFXXTYGQYWRHJP-UHFFFAOYSA-N 4,4'-azobis(4-cyanopentanoic acid) Chemical compound OC(=O)CCC(C)(C#N)N=NC(C)(CCC(O)=O)C#N VFXXTYGQYWRHJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012986 chain transfer agent Substances 0.000 description 4
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 4
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 4
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000011990 functional testing Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037952 HSV-1 infection Diseases 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- YOQLRQUGJROXRV-UHFFFAOYSA-N benzenecarbodithioic acid;4-cyanopentanoic acid Chemical compound N#CC(C)CCC(O)=O.SC(=S)C1=CC=CC=C1 YOQLRQUGJROXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 2-chloro-n-[[(2r,3s,5r)-3-hydroxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl]acetamide Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CNC(=O)CCl)[C@@H](O)C1 SNBCLPGEMZEWLU-QXFUBDJGSA-N 0.000 description 1
- MPNXSZJPSVBLHP-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-phenylpyridine-3-carboxamide Chemical compound ClC1=NC=CC=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 MPNXSZJPSVBLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000000942 confocal micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229940008099 dimethicone Drugs 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/74—Synthetic polymeric materials
- A61K31/785—Polymers containing nitrogen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polyethers (AREA)
Description
Opis wynalazku
Wynalazek dotyczy zastosowania kopolimerów blokowych do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1.
Ludzkie herpeswirusy są jedną z najczęstszych przyczyn zakażeń u ludzi. Jednym z najczęściej występujących gatunków tej rodziny jest ludzki herpeswirus typu 1 (HSV-1; herpes simplex 1), nazywany również wirusem opryszczki typu 1. Już pojedynczy kontakt z tym patogenem prowadzi do rozwoju zakażenia, które w postaci utajonej utrzymuje się przez całe życie. Szacuje się, że nosicielami wirusa jest nawet 80% światowej populacji ludzkiej, natomiast u około 40% występują objawy chorobowe. Reaktywacja wirusa przy osłabieniu układu immunologicznego prowadzi do powstawania charakterystycznych owrzodzeń w miejscu pierwotnego zakażenia (głównie na wargach i na błonach śluzowych jamy ustnej), jednak w części przypadków zakażenie to może spowodować infekcję gałki ocznej lub mózgu.
W stanie techniki znane jest zastosowanie pewnych polimerów do leczenia opryszczki wywoływanej przez HSV-1.
Na przykład opisany w międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO18015485A1 wynalazek dotyczy związków wirusobójczych, kompozycji wirusobójczych zawierających je i ich zastosowań w leczeniu zakażeń wirusowych, sterylizacji j dezynfekcji. Związki te są sulfonylalkilocyklodekstrynami podstawionymi poli(glikolem etylenowym). Związki według wynalazku mają zastosowanie do leczenia zakażeń wirusowych wywoływanych m.in. przez wirus opryszczki.
Z kolei polskie zgłoszenie P.416749 dokonane przez Twórców niniejszego wynalazku ujawnia zastosowanie kationowo modyfikowanego, za pomocą czwartorzędowych grup amoniowych, dekstranu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1.
Opisany w zgłoszeniu międzynarodowym WO15082172A1 wynalazek dotyczy zastosowania polidimetylosiloksanu, określanego również jako dimetikon, do miejscowego leczenia infekcji wirusowych, takich jak infekcje wywoływane przez wirus opryszczki (HSV) typu 1 i typu 2. Powyższe zastosowanie polidimetylosiloksanu jest szczególnie odpowiednie do leczenia opryszczki twarzowej lub opryszczki narządów płciowych. Powyższy wynalazek dotyczy ponadto preparatów do stosowania miejscowego i zestawów części zawierających polidimetylosiloksan w połączeniu z miedzią do leczenia opryszczki twarzowej lub opryszczki narządów płciowych.
Znane są również polimery na bazie poli(glikolu etylenowego) (PEG) albo na bazie polimerów zawierających grupy polikationowe, które znalazły zastosowanie do hamowania replikacji wirusów.
W zgłoszeniu amerykańskim US2009074721A ujawniono kompozycję farmaceutyczną zawierającą związki i/lub kompozycje użyteczne do hamowania replikacji wirusa. Kompozycje zawierają kombinację poli(glikolu etylenowego), np. PEG-400 oraz substancji aktywnej będącej pochodną steroli.
Dokument US2002025919A ujawnia związek przeciwwirusowy zawierający liniowy polimer niewęglowodanowy mający wiele łańcuchów bocznych, przy czym co najmniej jeden z łańcuchów bocznych jest podstawiony ugrupowaniem anionowym lub kationowym.
Nie są natomiast znane zastosowania polimerów blokowych na barie PEG zawierających blok polikationowy do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1. Dlatego też celem niniejszego wynalazku jest zapewnienie nowego zastosowania polimerów blokowych, na bazie PEG i zawierających blok polikationowy do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1, którego działanie polega na hamowaniu replikacji wirusa HSV-1 - za co odpowiada blok polikationowy, przy jednoczesnym zapewnieniu jego niskiej cytotoksyczności - za co odpowiada blok PEG.
Oznaczenia PEGx-PMAPTACy (PEG - poli(glikol etylenowy), PMAPTAC - poli(chlorek (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowy) stosowane w opisie określają polimer blokowy zgodnie z wynalazkiem składający się z bloku PEG o stopniu polimeryzacji x i bloku PMAPTAC o stopniu polimeryzacji y.
Określenie „leczenie” stosowane w niniejszym opisie oznacza, lecz nieograniczająco, wszelkie czynności prowadzące do polepszenia stanu pacjenta, przywrócenia zdrowia, usuwania skutków aktywności wirusa HSV-1. Z kolei określenie „profilaktyka” stosowane w niniejszym opisie oznacza, ale nieograniczająco, zapobieganie pojawienia się skutku działania wirusa HSV-1.
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie kopolimerów blokowych o łańcuchach złożonych z bloku poli(glikolu etylenowego) (PEG) i bloku poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1.
PL 235 423 B1
Korzystnie leczenie i profilaktyka chorób wywoływanych przez wirusa opryszczki HSV-1 polega na hamowaniu replikacji wirusa HSV-1. Bardziej korzystnie chorobami wywołanymi przez wirus HSV-1 są opryszczka, opryszczkowe zapalenie spojówki, opryszczkowe zapalenie rogówki i opryszczkowe zapalenie mózgu.
Zastosowanie korzystnie charakteryzuje się tym, że kopolimerem blokowym poli(glikolu etylenowego) (PEG) i poli(chlorku (3-(metakryloiloammo)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) - PEGx-PMAPTAy, - jest kopolimer, w którym stopień polimeryzacji x bloku PEG wynosi 45-47, natomiast stopień polimeryzacji bloku y PMAPTAC jest w zakresie 22-102. Korzystniej kopolimerem blokowym poli(glikolu etylenowego) (PEG) i poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) jest PEG47-PMAPTAC53, PEG47-PMAPTAC74, PEG45-PMAPTAC51 lub PEG45-PMAPTAC58.
Korzystnie zastosowanie charakteryzuje się tym, że preparat podaje się miejscowo. Korzystniej preparat podaje się na skórę, usta, błonę śluzową nosa, okolic płciowych lub do oka. Korzystnie zastosowanie charakteryzuje się tym, że preparat jest w postaci wybranej z grupy obejmującej roztwór, żel, sztyft, szminkę, pomadkę, krem, serum, puder, zasypkę, proszek, maść, krople do oczu lub plaster.
Korzystnie zastosowanie charakteryzuje się tym, że stężenie kopolimeru blokowego PEG-PMAPTAC w preparacie wynosi od 10 do 500 gg/ml.
Zastosowanie kopolimerów blokowych o łańcuchach złożonych z bloku poli(glikolu etylenowego) (PEG) i bloku poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1 pozwala na uzyskanie wysokiej efektywności leczenia przy równoczesnej bardzo małej toksyczności stosowanych środków. Ponadto możliwe jest zastosowanie wskazanych w opisie kationowych kopolimerów blokowych w leczeniu zakażeń wywoływanych przez szczepy lekooporne na dotychczas stosowane w praktyce medycznej substancje aktywne. Polimery stosowane według niniejszego wynalazku, otrzymane techniką RAFT, są bardzo dobrze zdefiniowane (mają dobrze kontrolowaną masę cząsteczkową i jej dyspersję) w przeciwieństwie do innych polimerów, zwłaszcza otrzymanych metodą konwencjonalnej polimeryzacji rodnikowej, i polimerów naturalnych. Istnieje zatem możliwość dobrania przez znawcę dziedziny - lekarza - polimeru PEGx-PMAPTACy o odpowiednich stopniach polimeryzacji, tak aby miał on odpowiedni stosunek efektywności działania do toksyczności do zastosowania do leczenia w odniesieniu do konkretnego pacjenta, tzn. konkretnego przypadku choroby opryszczkowej, i do konkretnej drogi podania.
Polimery PEG-PMAPTAC stosowane w wynalazku zostały otrzymane sposobem kontrolowanej polimeryzacji rodnikowej (CRP) typu RAFT, czyli polimeryzacji rodnikowej z addycyjno-fragmentacyjnym przeniesieniem łańcucha, opisanym w publikacji „Synthesis of Oppositely Charged Block Copolymers of Poly(ethylene glycol) via Reversible Addition-Fragmentation Chain Transfer Radical Polymerization and Characterization of Their Polyion Complex Micelles in Water”, Shin-ichi Yusa, Yuuichi Yokoyama, and Yotaro Morishima, Macromolecules 2009, 42, 376-383, której treść jest włączona doniniejszego opisu patentowego przez odniesienie. Wymieniony powyżej sposób polega na reakcji poli(glikolu etylenowego) funkcjonalizowanego na jednym końcu grupą metoksylową z ditiobenzoesanem kwasu 4-cyjanopentanowego (4-cyanopentanoic acid dithiobenzoate (CPD)), pełniącego funkcję czynnika przeniesienia łańcucha (CTA). Do tak otrzymanego PEG-CTA został następnie dołączony blok PMAPTAC w reakcji polimeryzacji inicjowanej kwasem 4,4'-azobis(4-cyjanopentanowym) (4,4'-azobis(4-cyanopentanoic acid) (V-501). Polimer został oczyszczony poprzez dwukrotne strącenie metanolem w obecności nadmiaru acetonu.
Stopnie polimeryzacji otrzymanych polimerów PEGx-PMAPTACy zostały wyznaczone za pomocą chromatografii żelowej (gel permeation chromatography, GPC) i spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (1H-NMR).
Twórcy wynalazku ustalili w ramach opracowywania niniejszego wynalazku, że kopolimer do zastosowania według niniejszego wynalazku, aby działać hamująco na wirusa HSV-1, musi mieć odpowiednią kombinację długości poszczególnych bloków, zatem nie wszystkie polimery PEG-PMAPTAC wykazują analogiczną skuteczność działania. Nie chcąc wiązać się z żadną teorią, wydaje się, że długość bloku PEG musi mieć pewną minimalną wartość, by skutecznie obniżał toksyczność bloku PMAPTAC, natomiast długość bloku PMAPTAC musi być odpowiednio duża, by skutecznie oddziaływał z komórką/wirusem, natomiast nie może być zbyt duża, by polimer nie był toksyczny (polikationy są zwykle toksyczne, a ich toksyczność rośnie z masą cząsteczkową).
Polimery zastosowane według wynalazku wykazują bardzo silną zdolność hamowania replikacji wirusa HSV-1, przy jednoczesnej bardzo niskiej cytotoksyczności nawet przy wysokich stężeniach
PL 235 423 B1 (1 mg/ml). Przy stężeniu polimerów 500 μg/ml zaobserwowano redukcję miana wirusa o około 6 rzędów wielkości (99,9999%). Wartości IC90 (90% inhibitory concentration; stężenie leku (preparatu), które hamuje replikację wirusa w 90%) wyliczone dla polimerów PEG47-PMAPTAC53 i PEG46-PMAPTAC73 wynoszą odpowiednio 4,12 μg/ml oraz 34,66 μg/ml. Przeprowadzone testy funkcjonalne wykazały, że polimer oddziałuje na komórki, tworząc warstwę ochronną ograniczającą zdolność wirusa do adsorpcji, a w efekcie do zakażenia.
Przedmiot wynalazku został zilustrowany za pomocą poniższych figur, uzupełniających informacje zawarte w przykładach wykonania:
Fig. 1. ilustruje wykres przedstawiający cytotoksyczność polimerów blokowych. Żywotność komórek została przedstawiona jako % wartości próbki kontrolnej, nie traktowanej polimerami.
Fig. 2. ilustruje wykresy przedstawiające przeciwwirusową aktywność kopolimerów blokowych. Ilość DNA wirusowego w pożywce została wyznaczona metodą real-time PCR (A), natomiast liczbę funkcjonalnych cząstek wirusa wyznaczono metodą testu łysinkowego (B).
Fig. 3. ilustruje wykres przedstawiający mechanizm aktywności kopolimerów blokowych. Seria testów funkcjonalnych polegających na dodawaniu inhibitora na różnych etapach infekcji wirusowej, pozwala określić, na jakim etapie następuje hamowanie. Aktywność przeciwwirusową przedstawiono, jako logarytmiczny spadek liczby kopii DNA wirusowego w mililitrze pożywki.
Fig. 4. ilustruje obrazy uzyskane za pomocą mikroskopii konfokalnej przedstawiające hamowanie infekcji H5V-1 przez kopolimery blokowe. Obrazy przedstawiają projekcje maksymalne.
P r z y k ł a d y w y k o n a n i a
Sposób otrzymania polimeru blokowego PEG47-PMAPTAC53 użytego do zastosowania według patentu przedstawia się następująco. Chlorek (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowy (MAPTAC, 5,53 g, 25,0 mmol), inicjator (kwas 4,4'-azobis(4-cyjanopentanowy), V-501,69,2 mg, 0,247 mmol) i makroczynnik przeniesienia łańcucha (PEG47-CTA, 1,13 g, 0,501 mmol) zostały rozpuszczone, w 41 mL wody. Mieszaninę odgazowano przepuszczając przez nią argon przez 30 minut. Polimeryzację prowadzono w 70°C przez 5 godzin. Mieszaninę poreakcyjną dializowano względem czystej wody przez 2 dni. PEG47-PMAPTAC53 wyizolowano poprzez liofilizację uzyskując 5,58 g substancji (wydajność 83,8%).
W zakresie rutynowej wiedzy znawcy jest ustalenie sposobu otrzymania pozostałych polimerów objętych niniejszym opisem.
P r z y k ł a d 1. Wpływ kopolimerów blokowych na żywotność komórek
Cytotoksyczność kopolimerów blokowych sprawdzono z wykorzystaniem testu XTT. Analiza została przeprowadzona na linii komórkowej Vero E6 (komórki nabłonka nerki Cercopithecus aethiops, ATCC CRL-1586), która jest permisywna dla wirusa HSV-1. Test ten opiera się na badaniu aktywności enzymów mitochondrialnych, poprzez określenie ich zdolności do redukcji substratu do barwnego produktu. Żywotność komórek wyznaczono przez pomiar absorbancji przy 450 nm w stosunku do kontroli, którą stanowiły komórki hodowane w pożywce bez dodatku polimerów. Komórki hodowano przez 2 dni w pożywce OMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) suplementowanej 3% inaktywowanej termicznie płodowej surowicy cielęcej (FBS) oraz penicyliną i streptomycyną, z dodatkiem badanego, polimeru.
Przedstawione na Fig. 1. wyniki obrazują niską cytotoksyczność badanych polimerów nawet w wysokich stężeniach (500 μg/ml). CC50 obydwu związków wynosi powyżej 2000 μg/ml.
P r z y k ł a d 2. Wpływ kopolimerów blokowych na replikację wirusa opryszczki typu 1 (HSV-1)
Po ustaleniu stężeń związków, które nie miały toksycznego wpływu na komórki zbadano ich wpływ na replikację wirusa HSV-1. Komórki preinkubowano z polimerami o odpowiednich stężeniach przez 30 min, a następnie, nadal w obecności tych polimerów, zakażano wirusem HSV-1, szczep 17+ o TCID50 (tissue culture infective dose, dawka zakażająca 50% hodowli tkankowej) = 400 na mililitr. Po 2 godzinach usuwano niezwiązane cząstki wirusa przez 3-krotne przemycie roztworem PBS i inkubowano, również w obecności polimerów, przez kolejne 2 dni. Po tym czasie z pożywki komórkowej izolowano DNA wirusowe i wykorzystywano je jako matrycę w reakcji ilościowej real-time, PCR (sekwencje starterów: forward 5'-CAT CAC CGA CCC GGA GAG GGA C-3', reverse 5'-GGG CCA GGC GCT TGT TGG TGT A-3', sonda 5'-FAM CCG CCG AAC TGA GCA GAC ACC CGC GC BHQ1-3'), Zdolność polimerów do hamowania replikacji HSV-1 wyznaczono jako logarytmiczny spadek liczby kopii DNA wirusowego w mililitrze pożywki (Fig. 2.). Dodatkowo, ilość funkcjonalnych cząstek wirusa w pożywce wyznaczono za pomocą standardowego testu łysinkowego. Ilość cząstek wirusa w pożywce przedstawiono jako liczbę jednostek tworzących łysinkę (PFU, ang. plaque-forming unit).
Testowane kopolimery blokowe wykazują działanie przeciwwirusowe i hamują namnażanie się wirusa HSV-1. Wyliczone wartości IC90 wyznaczone metodą real-time PCR wynosiły odpowiednio
PL 235 423 B1
4,115 gg/ml dla PEG47-PMAPTAC53 oraz 34,66 gg/ml dla PEG46-PMAPTAC73, natomiast wyznaczone metodą testu łysinkowego odpowiednio 1,4 gg/ml dla PEG47-PMAPTAC53 oraz 1,685 gg/ml dla PEG46PMAPTAC73. Wartości indeksu selektywności wyznaczone metodą real-time PCR wynoszą odpowiednio >121,5 dla PEG47-PMAPTAC53 oraz >14,43 dla PEG46-PMAPTAC73, natomiast wyznaczone metodą testu łysinkowego >357,14 dla PEG47-PMAPTAC53 oraz >296,74 dla PEG46-PMAPTAC73.
P r z y k ł a d 3. Mechanizm aktywności przeciwwirusowej kopolimerów blokowych
Mechanizm aktywności przeciwwirusowej kopolimerów blokowych zbadano przy pomocy serii testów funkcjonalnych opierających się na zastosowaniu inhibitora na różnych etapach infekcji wirusowej:
• Test I (test inaktywacji) - czy polimer oddziałuje bezpośrednio z wirusem, czyniąc go niezdolnym do zakażenia komórek?
• Test II (test interakcji) - czy polimer oddziałuje bezpośrednio z komórką, czyniąc ją odporną na zakażenie wirusem?
• Test III (test adsorpcji) - czy polimer zakłóca interakcję wirusa z jego czynnikiem adhezyjnym na powierzchni komórki, uniemożliwiając przyłączanie się wirusa do komórki?
• Test IV(test składania, pakowania i uwalniania) - czy polimer zakłóca późne etapy infekcji wirusowej (np. składanie, pakowanie, uwalnianie) uniemożliwiając powstanie zakaźnych wirionów potomnych?
Ustalono, że hamowanie infekcji HSV-1 przez kopolimery blokowe zachodzi na etapie adsorpcji wirusa do komórki oraz poprzez oddziaływanie polimeru z komórką. Z wykresu stanowiącego Fig. 3. można odczytać znaczny spadek liczby kopii DNA wirusowego widoczny w teście składania, pakowania i uwalniania, który prawdopodobnie jest konsekwencją zahamowania infekcji na wcześniejszym jej etapie, nie można jednak wykluczyć dodatkowego działania inhibitorów na późnych etapach infekcji.
P r z y k ł a d 4. Obrazowanie wpływu kopolimerów blokowych na infekcję HSV-1 za pomocą mikroskopii konfokalnej (Fig. 4.)
W celu zobrazowania wpływu kopolimerów blokowych na infekcję wirusową komórki preinkubowano z polimerami, a następnie zakażono HSV-1. Po godzinie komórki utrwalono i wyznakowano na obecność DNA chromosomowego (DAPI), f-aktyny (falloidyna skoniugowana z barwnikiem fluorescencyjnym Alexa 633) oraz wirusa (przeciwciała specyficzne wobec białka wirusowego kapsydu VP5).
Na Fig. 4. wyraźnie widoczne jest zmniejszenie ilości wirusa obecnego w komórkach traktowanych kopolimerami blokowymi.
Claims (9)
1. Zastosowanie kopolimerów blokowych o łańcuchach złożonych z bloku poli(glikolu etylenowego) (PEG) bloku poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HSV-1.
2. Zastosowanie według zastrzeżenia 1, znamienne tym, że leczenie i profilaktyka chorób wywoływanych przez wirusa opryszczki HSV-1 polega na hamowaniu replikacji wirusa HSV-1.
3. Zastosowanie według zastrzeżenia 1, znamienne tym, że chorobami wywołanymi przez wirus HSV-1 są opryszczka, opryszczkowe zapalenie spojówki, opryszczkowe zapalenie rogówki i opryszczkowe zapalenie mózgu.
4. Zastosowanie według zastrzeżenia 1, znamienne tym, że kopolimerem blokowym poli(glikolu etylenowego) (PEG) i poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) - PEGx-PMAPTACy, - jest kopolimer, w którym stopień polimeryzacji x bloku PEG wynosi 45-47, natomiast stopień polimeryzacji y bloku PMAPTAC jest w zakresie 22-102.
5. Zastosowanie według zastrzeżenia 4, znamienne tym, że kopolimerem blokowym poli(glikolu etylenowego) (PEG) i poli(chlorku (3-(metakryloiloamino)propylo)trimetyloamoniowego) (PMAPTAC) jest PEG47-PMAPTAC53, PEG47-PMAPTAC74, PEG45-PMAPTAC51 lub PEG45PMAPTAC58.
6. Zastosowanie według dowolnego z powyższych zastrzeżeń, znamienne tym, że preparat podaje się miejscowo.
7. Zastosowanie według zastrzeżenia 6, znamienne tym, że preparat podaje się na skórę, usta, błonę śluzową nosa, okolic płciowych lub do oka.
PL 235 423 Β1
8. Zastosowanie według dowolnego z powyższych zastrzeżeń, znamienne tym, że preparat jest w postaci wybranej z grupy obejmującej roztwór, żel, sztyft, szminkę, pomadkę, krem, serum, puder, zasypkę, proszek, maść, krople do oczu lub plaster.
9. Zastosowanie według dowolnego z powyższych zastrzeżeń, znamienne tym, że stężenie kopolimeru blokowego PEG-PMAPTAC w preparacie wynosi od 10 do 500 μg/ml.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424871A PL235423B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 |
| PCT/PL2019/050015 WO2019177475A1 (en) | 2018-03-13 | 2019-03-13 | The use of copolymers for the preparation of a formulation for the treatment and prophylaxis of diseases caused by the hsv-1 virus |
| DE112019001290.8T DE112019001290T5 (de) | 2018-03-13 | 2019-03-13 | Verwendung von Copolymeren für die Herstellung einer Formulierung für die Behandlung und Prophylaxe von Krankheiten, die durch das HSV-1 Virus verursacht werden |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL424871A PL235423B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL424871A1 PL424871A1 (pl) | 2019-09-23 |
| PL235423B1 true PL235423B1 (pl) | 2020-07-27 |
Family
ID=67906855
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL424871A PL235423B1 (pl) | 2018-03-13 | 2018-03-13 | Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE112019001290T5 (pl) |
| PL (1) | PL235423B1 (pl) |
| WO (1) | WO2019177475A1 (pl) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL249275B1 (pl) * | 2022-07-17 | 2026-03-16 | Uniwersytet Jagielloński | Polimer kationowy o właściwościach przeciwgrzybicznych |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015082172A1 (en) * | 2013-12-03 | 2015-06-11 | Zzip Ag | Polydimethylsiloxane for the treatment of viral infections |
| PL229768B1 (pl) * | 2015-06-10 | 2018-08-31 | Univ Jagiellonski | Zastosowanie polimeru blokowego zawierającego blok poli- (chlorku 3-metakryloilaminopropylotrimetyloamoniowego) (PMAPTAC) do neutralizacji heparyny |
| PL235490B1 (pl) * | 2016-04-04 | 2020-08-24 | Univ Jagiellonski | Kationowa pochodna dekstranu do zastosowania w hamowaniu replikacji wirusa HSV-1 |
-
2018
- 2018-03-13 PL PL424871A patent/PL235423B1/pl unknown
-
2019
- 2019-03-13 DE DE112019001290.8T patent/DE112019001290T5/de active Pending
- 2019-03-13 WO PCT/PL2019/050015 patent/WO2019177475A1/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE112019001290T5 (de) | 2021-03-11 |
| PL424871A1 (pl) | 2019-09-23 |
| WO2019177475A1 (en) | 2019-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7113871B2 (ja) | 高血圧症及び高カリウム血症を治療するためのカリウム結合剤 | |
| Huleihel et al. | Antiviral effect of red microalgal polysaccharides on Herpes simplex and Varicella zoster viruses | |
| De Oliveira et al. | Inhibition of herpes simplex virus type 1 with the modified green tea polyphenol palmitoyl-epigallocatechin gallate | |
| Gong et al. | Evidence of dual sites of action of dendrimers: SPL-2999 inhibits both virus entry and late stages of herpes simplex virus replication | |
| KR102150184B1 (ko) | 가교결합된 양이온교환 폴리머, 조성물 및 고칼륨혈증 치료 용도 | |
| JPH06505481A (ja) | ウィルス感染症の処置のためのアリール大員環組成物 | |
| JP7525853B2 (ja) | グリオブラストーマを治療するためのジカウイルス株 | |
| Li et al. | Synergistic therapy of chemotherapeutic drugs and MTH1 inhibitors using a pH-sensitive polymeric delivery system for oral squamous cell carcinoma | |
| Maitani et al. | Polyethylenimine combined with liposomes and with decreased numbers of primary amine residues strongly enhanced therapeutic antiviral efficiency against herpes simplex virus type 2 in a mouse model | |
| Duncan | Differential effect of Tamm-Horsfall protein on adherence of Escherichia coli to transitional epithelial cells | |
| BRPI0208411B1 (pt) | composto, composição farmacêutica tópica para tratamento profilático ou terapêutico de doenças sexualmente transmitidas em um paciente humano, e, uso de um composto | |
| ES2552012T3 (es) | Compuestos para prevenir o tratar infecciones víricas y procedimientos de uso de los mismos | |
| Obłoza et al. | Curcumin-poly (sodium 4-styrenesulfonate) conjugates as potent Zika virus entry inhibitors | |
| PL235423B1 (pl) | Zastosowanie kopolimerów do wytwarzania preparatu do leczenia i profilaktyki chorób wywoływanych przez wirusa HS V-1 | |
| Pachota et al. | Highly effective and safe polymeric inhibitors of herpes simplex virus in vitro and in vivo | |
| Stiles et al. | Effects of λ-carrageenan on in vitro replication of feline herpesvirus and on experimentally induced herpetic conjunctivitis in cats | |
| US10813957B2 (en) | Engineered oncolytic viruses containing hyper-binding sites to sequester and suppress activity of oncogenic transcription factors as a novel treatment for human cancer | |
| EP4166146B1 (en) | Pamps-paau copolymers for use in the treatment or prophylaxis of infection caused by the zika virus | |
| CN112022867B (zh) | 老鹳草素在制备抗新型冠状病毒药中的应用 | |
| WO2017205901A1 (en) | Hydrophilic polymer conjugate with multiple antiviral agents for treating a viral infection | |
| WO2018067165A1 (en) | Engineered oncolytic viruses containing hyper-binding sites to sequester and suppress activity of oncogenic transcription factors as a novel treatment for human cancer | |
| EP3235511B1 (en) | Sulphonamide compounds for use in the treatment of hhv-8-associated diseases | |
| Kyluik et al. | Polymer-mediated broad spectrum antiviral prophylaxis: Utility in high risk environments | |
| US12076414B2 (en) | Methods and compositions inhibiting enveloped viruses using high molecular weight hydrophobically modified alkali swellable emulsion polymers | |
| WO2017175132A1 (en) | The use of cationic derivative of dextran for inhibition of herpes simplex viruses |