PL236031B1 - Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna - Google Patents
Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna Download PDFInfo
- Publication number
- PL236031B1 PL236031B1 PL414051A PL41405115A PL236031B1 PL 236031 B1 PL236031 B1 PL 236031B1 PL 414051 A PL414051 A PL 414051A PL 41405115 A PL41405115 A PL 41405115A PL 236031 B1 PL236031 B1 PL 236031B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- nitrophenyl
- triazole
- dihydro
- pyridin
- formula
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- PTPAXJFIZJJTNL-UHFFFAOYSA-N [N+](=O)([O-])C1=CC=C(C=C1)C1=NNC(N1C1=NC=CC=C1)=S Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(C=C1)C1=NNC(N1C1=NC=CC=C1)=S PTPAXJFIZJJTNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- HBJNCQBNGAMJJZ-UHFFFAOYSA-N 1-(4-nitrophenyl)-3-(pyridine-2-carbonylamino)thiourea Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1NC(=S)NNC(=O)C1=CC=CC=N1 HBJNCQBNGAMJJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 10
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 7
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 11
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 11
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 9
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 8
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 8
- IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(diethylamino)-3-(diethyliminiumyl)-3h-xanthen-9-yl]-5-sulfobenzene-1-sulfonate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1S([O-])(=O)=O IOOMXAQUNPWDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N DMSO Substances CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 240000006909 Tilia x europaea Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 208000030304 gastrointestinal bleeding Diseases 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 description 1
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 201000002313 intestinal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest nowy 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) oraz sposób jego otrzymywania, który polega na reakcji cyklizacji 4-(4-nitrofenylo)-1-(pirydyn-2-ylo)karbonylotio-semikarbazydu (wzór 2) w roztworze 2% wodorotlenku sodu. Mieszaninę ogrzewa się we wrzeniu przez około 2 godziny, a osad uzyskuje przez wytracenie za pomocą 3M roztworu HCl. Otrzymany 4-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) krystalizuje się, korzystnie z metanolu. Będąca również przedmiotem zgłoszenia kompozycja farmaceutyczna zawiera jako substancję aktywną związek 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion.
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) oraz kompozycja farmaceutyczna zawierająca go do zastosowania w leczeniu raka piersi, płuc i wątroby.
Choroby nowotworowe są jednym z głównych problemów zdrowotnych w Stana ch Zjednoczonych i wielu innych częściach świata „Word Health Organization The Global Burden of Disease: 2004 Update. Geneva: World Health Organization; 2008”. Szacuje się, że są one drugim, po chorobach serca, powodem zgonów i przewiduje się, że w ciągu najbliższych lat staną się główną przyczyną śmierci pacjentów. Według diagnoz Narodowego Centrum Statystyk Zdrowotnych w USA (National Center for Health Statistics) w roku 2015 pojawi się aż 1,658,370 nowych przypadków zachorowań na raka, w czym 589,430 przypadków będzie prowadziło do zgonu. Liczba jednostek zachorowalności, a także rodzaj nowotworów w dużej mierze zależy od regionu świata, płci, wieku czy stanu zdrowia pacjenta „Siegel, R. L.; Miller, K. D.; Jemal, A. CA: A Cancer Journal for Clinicians (2015), 65, 5-29”. Nie mniej jednak wiadomo, że rak piersi jest najczęściej diagnozowanym nowotworem kobiet i główną przyczyną zgonów, stanowiąc 23% całkowitej liczby przypadków zachorowalności i 14% zgonów. Rak płuc natomiast jest głównym typem nowotworów występujących u mężczyzn. Stanowi on 17% nowych zachorowań i u 23% przypadków prowadzi do zgonu. Ponadto wśród 10-ciu najczęściej występujących typów nowotworów podaje się również raka jelita, nerki, wątroby oraz białaczkę „Jemal, A.; Bray, F.; Center, M. M.; Ferlay, J.; Ward, E.; Forman, D. CA: A Cancer Journal for Clinicians (2011), 61, 69-90”, „Wojciechowska, U.; Didkowska, J. NOWOTWORY Journal of Oncology (2013), 63, 197-216”.
Pomimo wielu dostępnych na rynku cytostatyków, wciąż brakuje leku skutecznego wobec komórek nowotworowych i bezpiecznego dla komórek prawidłowych.
Jednym z najlepiej poznanych cytostatyków jest Cisplatyna (cis-diaminodichloroplatyna II). Od ponad 40-lat jest używana w leczeniu wielu typów nowotworów, m.in. pęcherza, piersi, głowy, szyi, płuc, jajnika i jąder „Tsimberidou, A.M.; Braiteh,F.; Stewart, D.J.; Kurzrock, R. Journal of Clinical Oncology (2009) 27,6243-6250”. Mechanizm działania przeciwnowotworowego Cisplatyny polega na zdolności do wiązania się z zasadami purynowymi w DNA, co powoduje jego uszkodzenia i w konsekwencji prowadzi do apoptozy komórek nowotworowych. Jednak ze względu na liczne niepożądane efekty uboczne, takie jak ciężkie zaburzenia czynności nerek, reakcje alergiczne, zmniejszenie odporności na infekcje, zaburzenia żołądkowojelitowe, krwawienia czy utrata słuchu, szczególnie u młodych pacjentów, jej zastosowanie jest ograniczone „Dasari, S.; Tchounwou, P.B. European Journal of Pharmacology (2014), 740, 364-378”.
Dlatego też, istnieje uzasadniona potrzeba poszukiwania nowych związków o aktywności przeciwnowotworowej, które będą wykazywały większą selektywność działania w kierunku komórek nowotworowych niż prawidłowych.
Wynalazek rozwiązuje zagadnienie sposobu otrzymywania związku o wzorze 1, mogącego znaleźć zastosowanie w leczeniu pacjentów chorych na raka piersi, płuc i wątroby.
Będący przedmiotem wynalazku sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) polega na tym, że związek o wzorze 1 otrzymuje się w reakcji cyklizacji 4-(4-nitrofenylo)-1-(pirydyn-2-ylo)karbonylotiosemikarbazydu (wzór 2) w roztworze 2% wodorotlenku sodu. Mieszaninę ogrzewa się we wrzeniu przez około 2 godziny a osad uzyskuje się przez wytrącenie za pomocą 3M roztworu HCI. Otrzymany 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) krystalizuje się z metanolu.
Otrzymany sposobem według wynalazku związek 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion (wzór 1) może znaleźć zastosowanie do wytwarzania leków przeznaczonych do leczenia pacjentów chorych na raka piersi, płuc i wątroby.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca jako substancję aktywną związek o wzorze 1 do zastosowania w leczeniu raka piersi, płuc i wątroby.
P r z y k ł a d 1: Otrzymywanie 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu (wzór 1).
Do 3,17 g (0,01 mola) 4-(4-nitrofenylo)-1-(pirydyn-2-ylo)karbonylotiosemikarbazydu (wzór 2) dodano 20 ml 2% roztworu wodorotlenku sodu i ogrzewano przez 2 godziny. Następnie do ochłodzonego roztworu dodano 3M kwas solny do odczynu kwaśnego. Otrzymany osad odsączono i po wysuszeniu krystalizowano z metanolu.
PL236 031 Β1
Temperatura topnienia: 202-204°C
Wzór sumaryczny: C13H9N5O2S
Masa molowa: 299,307
Wydajność: 2,05 g (60%)
Widma 1H NMR (d6-DMSO, ppm, TMS): 10,02 (s, 1H) 7,09-7,11 (m, 1H), 6,78-6,81 (m, 2H) 3,89 (s, 3H) 3,72-3,82 (m, 8H), 2,86-2,98 (m, 3H).
Widma 13C NMR (d6-DMSO ppm TMS): 161,68, 158,44, 141,79, 130,18, 128,31, 115,56, 110,79, 59,34, 55,26, 52,98, 50,09, 49,36, 48,56, 46,72, 38,41,37,86, 37,50, 24,79, 23,97, 22,21, 20,98
Przykład 2: Wpływ nowego związku 3-(4-nitrofenyfo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu na proliferację komórek nowotworowych i prawidłowych.
Określenie stopnia proliferacji in vitro komórek raka piersi (MCF-7), płuc (A549) wątroby (HepG2) oraz komórek prawidłowych fibroblastów (BJ) w teście SRB po 96-godzinnej inkubacji z badanymi związkami oraz wzorcem (Cisplatyną)
Wyznaczenie wartości indeksów terapeutycznych dla 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu oraz wzorca (Cisplatyny).
W badaniach wykorzystano trzy linie nowotworowe (raka piersi MCF-7, raka płuc A549, raka wątroby HepG2) oraz jedną prawidłową (fibroblastów ludzkich BJ) pochodzące z Amerykańskiej Kolekcji Kultur Komórkowych (ATCC). Komórki były hodowane według zaleceń ATCC, tj. linia BJ, HepG2 oraz MCF-7 rosły w podłożu EMEM z dodatkiem 10% surowicy bydlęcej oraz antybiotyków (streptomycyna, penicylina). W przypadku linii MCF-7 podłoże było dodatkowo suplementowane 0,01 mg/ml rekombinowanej insuliny ludzkiej. Linia raka płuc (A549) była hodowana w podłożu F-12K z dodatkiem 10% surowicy bydlęcej oraz antybiotyków (streptomycyna, penicylina). Wszystkie linie komórkowe rosły w atmosferze 5% CO2 i temperaturze 37°( Do pasażu komórek używano 0,25% roztworu trypsyny w EDTA. W celu zbadania wpływu badanych związków na proliferację komórek nowotworowych i prawidłowych, zawiesinę komórek linii A549 BJ, HepG2 oraz MCF-7 w podłożu proliferacyjnym doprowadzano do gęstości 3x104 kom./ml (dla A549), 6x104 kom./ml (dla BJ), 1x105 kom./ml (dla HepG2) oraz 2,5x105 kom./ml (dla MCF-7) i rozlewano po 100 μΙ do dołków w płytce 96-dołkowej. Po 24-godzinnej inkubacji w temperaturze 37°C delikatnie ściągano płyn hodowlany i dodawano do kolejnych rzędów po 100 μΙ/dołek odpowiedniego dla danej linii płynu utrzymującego (2% FBS) z dodatkiem określonych stężeń badanych związków oraz wzorca. Po 24 godz. inkubacji w atmosferze 5% CO2 i temp. 37°C oznaczano żywotność komórek, w teście z sulforodaminą B (SRB). Test ten pozwala w bardzo czuły sposób na określenie liczby żywych komórek. Zasada testu opiera się na elektrostatycznym wiązaniu SRB do białek komórkowych w odpowiednim pH. Następnie pochłonięty przez komórki barwnik zostaje rozpuszczony, a intensywność barwy mierzona jest spektrofotometrycznie. Intensywność barwy jest zatem wprostproporcjonalna do ilości żywych, proliferujących komórek.
Wyniki badań aktywności przeciwnowotworowej zamieszczono w Tabeli Nr 1
| IT (rak piersi) (ICM BJ | IT (rak płuc) (IC50 BJ | JT (rak wątroby) (ICso BJ | |
| ICm MCF-7) | IC50 A549) | IC50 HepG2) | |
| 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5dihydro-1 H-1,2,4-triazolo-5-tion | 2,05 | 0.57 | 1.14 |
| Cisplatyną | 0,25 | 0,5 | 0,42 |
Po 96-godzinnej inkubacji komórek A549, BJ, HepG2 oraz MCF-7 z badaną substancją 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionem) oraz wzorcem Cisplatyną w teście SRB, wyznaczono wartości stężenia hamującego proliferację komórek w 50% (IC50). Na tej podstawie wyznaczono wartości indeksu terapeutycznego (IT), który jest miarą potencjalnego bezpieczeństwa stosowania leku. W przypadku wszystkich badanych linii nowotworowych, oba badane związki wykazały większą aktywność hamującą proliferację komórek nowotworowych niż prawidłowych. Dlatego też, wyznaczone wartości IT były wyższe dla nowego związku niż dla Cisplatyny. Zatem związek 3-(4
PL 236 031 B1
-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion wykazuje silne działanie hamujące proliferację komórek nowotworowych piersi, płuc i wątroby, a ponadto charakteryzuje się wyższym współczynnikiem bezpieczeństwa terapeutycznego in vitro niż popularnie stosowany cytostatyk Cisplatyna.
P r z y k ł a d 3: Wpływ nowego związku 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu na aktywność proapoptototyczną komórek nowotworowych.
Określenie potencjału proapoptotycznego badanych związków w komórkach A549, hepG2 oraz MCF-7 wykorzystując barwienie oranżem akrydyny (OA) i bromkiem etydyny (BE).
W przeprowadzonych badaniach użyto trzy limę komórkowe (raka piersi, płuc i wątroby), które były hodowane jak opisano powyżej (Przykład 2). Komórki następnie inkubowano z badanymi związkami w stężeniu 1 μg/ml przez 98 godzin w atmosferze 5% CO2 oraz temperaturze 37°C. Po tym czasie, komórki zostały wybarwione roztworem oranżu akrydyny i bromku etydyny w celu określenia potencjału proapoptotycznego badanych związków. Barwienie to umożliwia wyodrębnienie populacji komórek żywych, wczesnoapoptotycznych, późnoapoptotycznych oraz nekrotycznych.
Po 96-godzinnej inkubacji komórek A549, HepG2 oraz MCF-7 z 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionem w stężeniu równym 1 μg/ml, zaobserwowano niewielką liczbę komórek żywych. Większość obserwowanych komórek w populacji była wczesno i późnoapoptotyczna. Obserwowano również pojedyncze komórki nekrotyczne. Wyniki te świadczą o wysokim potencjale proapoptotycznym badanych związków w stosunku do komórek raka piersi, płuc i wątroby Zatem można przypuszczać, że mechanizm działania przeciwnowotworowego nowych związków polega na indukcji procesu apoptozy w komórkach A549, HepG2 oraz MCF-7.
Claims (2)
1. Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu (wzór 1), znamiennym tym, że 4-(4-nitrofenylo)-1-(pirydyn-2-ylo)karbonylotiosemikarbazyd (wzór 2) cyklizuje w środowisku 2% roztworu wodorotlenku sodu do 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tionu (wzór 1), reakcję prowadzi się we wrzeniu przez około 2 godziny, po zakończeniu reakcji dodaje się 3 M HCI do odczynu kwaśnego a otrzymany osad sączy się i oczyszcza przez krystalizację z rozpuszczalnika organicznego, korzystnie z metanolu.
2. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca jako substancję aktywną związek 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5-dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion, o wzorze 1, do zastosowania w leczeniu raka piersi, płuc i wątroby.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414051A PL236031B1 (pl) | 2015-09-17 | 2015-09-17 | Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL414051A PL236031B1 (pl) | 2015-09-17 | 2015-09-17 | Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL414051A1 PL414051A1 (pl) | 2017-03-27 |
| PL236031B1 true PL236031B1 (pl) | 2020-11-30 |
Family
ID=58360210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL414051A PL236031B1 (pl) | 2015-09-17 | 2015-09-17 | Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL236031B1 (pl) |
-
2015
- 2015-09-17 PL PL414051A patent/PL236031B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL414051A1 (pl) | 2017-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US12234226B2 (en) | Compounds as nuclear transport modulators and uses thereof | |
| US10968214B2 (en) | KRas G12C inhibitors | |
| JP7628305B2 (ja) | 腫瘍転移を阻害するためのｇ１２ｃ変異体ｋｒａｓタンパク質の阻害剤としての２－（２－アクリロイル－２，６－ジアザスピロ［３．４］オクタン－６－イル）－６－（１ｈ－インダゾール－４－イル）－ベンゾニトリル誘導体および関連化合物 | |
| ES2826443T3 (es) | Inhibidores de proteínas mutantes KRAS G12C | |
| JP2021176857A (ja) | Ｒｓｋ阻害剤として有用なカルボキサミド誘導体 | |
| ES2856880T3 (es) | Inhibidores tricíclicos condensados de KRAS y métodos de uso de los mismos | |
| CN110372669B (zh) | 一种基于crbn配体诱导egfr降解的化合物及其制备方法、药物组合物和应用 | |
| US20180230168A1 (en) | Ataxia Telengiectasia And Rad3-Related (ATR) Protein Kinase Inhibitors | |
| CA3188077A1 (en) | Egfr inhibitor, preparation method therefor and application thereof | |
| NO20160646A1 (en) | Inhibitors of kras g12c | |
| WO2017058915A1 (en) | Inhibitors of kras g12c mutant proteins | |
| CA3005089A1 (en) | 2-substituted quinazoline compounds comprising a substituted heterocyclic group and methods of use thereof | |
| EP3325447A1 (en) | Substituted quinazoline compounds and their use as inhibitors of g12c mutant kras, hras and/or nras proteins | |
| EA018083B1 (ru) | Производные пиримидина, применимые в качестве ингибиторов pi3 киназы, и способы их применения | |
| BRPI0808714A2 (pt) | Uso de compostos, tais como 4-amino-5-fluoro-3-[6-(4-metil piperazinil-1)- 1h-benzimidazolil-2] quinolinona-(1h)-2 e tautômeros, sais, e misturas dos mesmos no preparo de medicamentos para o tratamento do melanoma | |
| AU2020205331B2 (en) | Anti-cancer compounds | |
| Kitano et al. | Vitamin K3 analogs induce selective tumor cytotoxicity in neuroblastoma | |
| Wei et al. | Synthesis and biological evaluation of indazole derivatives as anti-cancer agents | |
| US20240197729A1 (en) | ALK-5 Inhibitors and Uses Thereof | |
| CN116199636A (zh) | 靶向肿瘤免疫激酶的2,4-二取代嘧啶衍生物、制备方法及其应用 | |
| EP3012248A1 (en) | Substance having tyrosine kinase inhibitory activity and preparation method and use thereof | |
| EP4192467A1 (en) | Synthesis of novel imipridone derivatives and their evaluation for their anticancer activity | |
| PL236031B1 (pl) | Sposób otrzymywania 3-(4-nitrofenylo)-4-(pirydyn-2-ylo)-4,5- dihydro-1H-1,2,4-triazolo-5-tion i kompozycja farmaceutyczna | |
| TWI725041B (zh) | 用於治療神經母細胞瘤及/或軟組織肉瘤之chk1/2抑制劑 | |
| KR102693170B1 (ko) | 사이클린 의존성 키나아제 억제용 조성물 및 이의 의학적 용도 |