PL236769B1 - Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat - Google Patents

Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat Download PDF

Info

Publication number
PL236769B1
PL236769B1 PL426522A PL42652218A PL236769B1 PL 236769 B1 PL236769 B1 PL 236769B1 PL 426522 A PL426522 A PL 426522A PL 42652218 A PL42652218 A PL 42652218A PL 236769 B1 PL236769 B1 PL 236769B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
strain
propanediol
bacterial
pediococcus acidilactici
kkp
Prior art date
Application number
PL426522A
Other languages
English (en)
Other versions
PL426522A1 (pl
Inventor
Krystyna Zielińska
Katarzyna Piasecka-Jóźwiak
Michał ŚWIĄTEK
Michał Świątek
Antoni Miecznikowski
Original Assignee
Inst Biotechnologii Przemyslu Rolno Spozywczego Im Prof Waclawa Dabrowskiego
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Biotechnologii Przemyslu Rolno Spozywczego Im Prof Waclawa Dabrowskiego filed Critical Inst Biotechnologii Przemyslu Rolno Spozywczego Im Prof Waclawa Dabrowskiego
Priority to PL426522A priority Critical patent/PL236769B1/pl
Publication of PL426522A1 publication Critical patent/PL426522A1/pl
Publication of PL236769B1 publication Critical patent/PL236769B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
    • A23K20/10—Organic substances
    • A23K20/174—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/52—Propionic acid; Butyric acids

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina techniki
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p o zdolności syntezy kwasu propionowego z 1,2-propanodiolu. Wynalazek dotyczy także kultury starterowej i preparatu obejmujących nowy szczep.
Stan techniki
Znane szczepy należące do gatunku Pediococcus acidilactici opisane np. w zgłoszeniach patentowych: US 2011/0195152, US 2015/0246082 i CN 104388345 A (2017-grant) wytwarzające bakteriocynę - pediocynę, charakteryzują się wysokim antagonizmem w stosunku do mikroorganizmów patogennych i wirusów. Z tego względu szczepy z tego gatunku bakterii wchodzą często w skład medycznych preparatów probiotycznych, są stosowane jako probiotyczne dodatki do żywności oraz jako kultury starterowe do kiszenia żywności i pasz.
Inokulanty bakteryjne nowej generacji powinny łączyć, synergicznie działające w procesie kiszenia roślin, szczepy bakterii pochodzące z rodzajów i gatunków LAB (bakterii fermentacji mlekowej), które zapewnią bezpieczeństwo mikrobiologiczne kiszonek roślinnych oraz stabilność tlenową w czasie długotrwałego, ponad rocznego przechowywania. Dlatego tak ważne jest poszukiwanie nowych ef ektywnych szczepów LAB, które są zdolne do hamowania rozwoju mikroorganizmów patogennych, a jednocześnie do efektywnej syntezy kwasów: octowego i propionowego, odpowiedzialnych za stabilność tlenową kiszonek.
Preparaty LAB przeznaczone do stymulowania procesu kiszenia pasz i poprawy ich stabilności tlenowej znane z następujących zgłoszeń patentowych: US 2005/0281917 A1, WO 2014105847 A1 i polskiego patentu PL228711 zawierają szczepy bakterii z gatunków: Lactobacillus buchneri i Lactobacillus diolivorans odpowiedzialnych za syntezę i/lub metabolizm 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego.
Celem niniejszego wynalazku było wyizolowanie z kiszonego ziarna kukurydzy, szczepu bakterii fermentacji mlekowej, który bez modyfikacji genetycznych, będzie charakteryzował się zdolnością do metabolizowania 1,2-propanodiolu i efektywnej syntezy kwasu propionowego.
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep bakterii, który został określony jako Pediococcus acidilactici PD2 i został zdeponowany 15 września 2017 w Kolekcji Kultur Drobnoustrojów Przemysłowych Instytutu Biotechnologii Przemysłu Rolno-Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego, pod numerem depozytu KKP 2065 p, przy czym wymieniony szczep ma zdolność metabolizowania 1,2-propanodiolu i wykazuje zdolność syntezy kwasu propionowego, w ilościach efektywnych do zastosowania do przedłużania stabilności tlenowej kiszonek.
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 został wyizolowany z kiszonego ziarna kukurydzy, przechowywanego w warunkach beztlenowych przez 3 lata.
Nieoczekiwanie okazało się, że nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 zdeponowany jako KKP 2065p charakteryzuje się zdolnością do wykorzystywania 1,2-propanodiolu jako źródła węgla do namnażania biomasy bakterii i syntezy metabolitów, w tym kwasu propionowego, a zatem do m etabolizowania 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego, co nie jest cechą oczywistą dla tego gatunku bakterii.
Przedmiotem wynalazku jest również kultura starterowa preparatu bakteryjnego do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych, która obejmuje szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, według wynalazku.
Przedmiotem wynalazku jest również preparat do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych który obejmuje szczep według wynalazku lub kulturę starterową według wynalazku i przynajmniej jeden składnik pomocniczy, przy czym korzystnie składnikiem pomocniczym jest - witamina B12.
Składnikiem pomocniczym w preparacie według wynalazku może być dowolny składnik pomocniczy spośród znanych w dziedzinie i stosowanych w preparatach bakteryjnych. Przykładowe składniki pomocnicze obejmują bufory (np. bufor fosforanowy), pożywkę do hodowli bakteryjnej w tym mikroelementy i witaminy.
Kiszonymi paszami w rozumieniu wynalazku mogą być przykładowo, ale nie wyłącznie: lucerna, koniczyna, ruń łąkowa, rośliny zbożowe w tym kukurydza.
Roślinnymi surowcami odnawialnymi w rozumieniu wynalazku mogą być, przykładowo, ale nie wyłącznie: trawy, ruń łąkowa i całe rośliny kukurydzy.
PL 236 769 B1
W korzystnym przykładzie wykonania preparatu według wynalazku, zawarte bakterie są liofilizowane.
W korzystnym przykładzie wykonania preparatu według wynalazku, preparat o zawartości suchej masy około 94% zawiera w 1 g liczbę bakterii wynoszącą około 2 x 1010 jednostek tworzących kolonie bakterii.
Opis figur
Fig. 1 przedstawia zmiany zawartości 1,2-propanodiolu, 1-propanolu i kwasu propionowego w podłożu w czasie hodowli bakterii szczepu według wynalazku.
Fig. 2 przedstawia wyniki testów dla stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej wykonanych bez i z dodatkiem preparatu według wynalazku.
PRZYKŁADY
P r z y k ł a d 1. Izolacja i charakterystyka nowego szczepu Pediococcus acidilactici
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 został wyizolowany z kiszonego ziarna kukurydzy, przechowywanego w warunkach beztlenowych przez 3 lata. Szczep wyizolowano na drodze wielokrotnej selekcji kolonii rosnących na stałych podłożach MRS, zawierających jako jedyne źródło węgla 1,2 -propanodiol.
Identyfikację genetyczną szczepu wykonano metodą sekwencjonowania fragmentu genu 16S rRNA i porównania uzyskanych wyników z publikowanymi w bazach danych genetycznej identyfikacji bakterii tego gatunku.
Nowy szczep bakterii określono przy 98% zgodności z gatunkiem szczepu testowego jako Pediococcus acidilactici.
Wyniki analizy genetycznej odcinka 16S rRNA, określonego niniejszym wynalazkiem, szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p przedstawia SEQ ID NO: 1. Oznaczenia nukleotydów zgodne z IUPAC, przy czym Y oznacza nukleotyd C lub T, W oznacza A lub T, R oznacza A lub G, K oznacza G lub T.
Nowy szczep został zdeponowany w dniu 19 września 2017 roku w Kolekcji Kultur Przemysłowych Instytutu Biotechnologii Przemysłu Rolno-Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego, Warszawa, Polska pod numerem kolekcyjnym KKP 2065 p.
Szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p charakteryzuje się następującymi cechami morfologicznymi:
- kolonie bakterii rosnące w warunkach beztlenowych na specyficznej dla rodzaju Lactobacillus sp. pożywce MRS zestalonej agarem (wg. de Man, Rogosa i Sharpe), mają kształt owalny, są koloru białego, o wielkości około 0,6 -1,0 μm.
- komórki bakterii nie wytwarzają przetrwalników, są Gram +, mają postać ziarniaków, występują w parach lub tetradach, są charakterystyczne dla rodzaju Pedioccocus sp. Optymalna temperatura wzrostu szczepu wynosi 37°C.
Warunki namnażania biomasy szczepu bakterii według wynalazku.
Po namnożeniu inokulum (stadium probówkowe oraz stadium kolbkowe w trzech etapach) hodowlę bakterii prowadzono w pożywce o składzie (w g/l wody): sacharoza - 20, ekstrakt drożdżowy 10, namok kukurydziany - 5, fosforan dwuamonowy - 0,2, siarczan magnezowy - 0,08, siarczan amonowy - 0,35, siarczan manganowy - 0,01; w fermentorach o pojemności 150 I, w temperaturze 35°C, przy pH regulowanym wodą amoniakalną do wartości 5,8.
Do wydzielania biomasy użyto wirówki o współczynniku rozdziału (współczynniku uwielokrotnienia przyspieszenia ziemskiego) powyżej 13000 x g.
Po przeprowadzeniu hodowli w podanych wyżej warunkach uzyskano 1000 g biomasy bakterii o zawartości 30% s.m.
Otrzymaną po wirowaniu biomasę bakterii, po wymieszaniu z nośnikami liofilizowano według znanego przepisu podanego w patencie PL228552. W skrócie, wodną zawiesinę biomasy bakterii doprowadza się do zawartości suchej masy od 14% do 16% poprzez dodatek soli fizjologicznej, miesza się z glicerolem jako krioprotektantem, dodanym w ilości 20% w stosunku do zawartości suchej masy w biomasie, a następnie dodaje się odtłuszczone, granulowane mleko w proszku w stosunku do biomasy jak 0,75:1, przy czym 0,75 stanowi ilość mleka w stosunku do nierozcieńczonej solą fizjologiczną ilości biomasy. Następnie, całość dokładnie miesza się i zamraża. W końcowym etapie, półprodukt poddaje się procesowi liofilizacji metodą suszenia sublimacyjnego do uzyskania produktu o zawartości suchej
PL 236 769 Β1 masy powyżej 94-98%. Liofilizat bakterii o zawartości suchej masy około 94% zawiera w 1 g liczbę bakterii około 2 χ 1011 jednostek tworzących kolonie.
Liofilizat szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p jest przeznaczony jako komponent kultury starterowej i/lub preparatu bakteryjnego o działaniu przedłużającym stabilność tlenową kiszonych pasz i surowców odnawialnych.
Preparat otrzymywany jest po zmieszaniu liofilizatu bakterii, stanowiącego 10% preparatu, z nośnikiem - sproszkowaną sacharozą z dodatkiem 0,1 % witaminy B12. Preparat, o zawartości suchej masy około 94%, zawiera w 1 g liczbę bakterii około 2 x1010 jednostek tworzących kolonie.
W tabeli 1 przedstawiono wyniki badań modelowych dotyczące wykorzystania glukozy, w czasie hodowli szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w podłożu MRS, do syntezy kwasów organicznych, w tym kwasu propionowego oraz 1,2-propanodiolu. Bakterie hodowano w temperaturze 37°C, w czasie 21 dni.
W czasie hodowli bakterii Pediococcus acidilactici PD2 najwyższa zawartość 1,2-propanodiolu i kwasu propionowego w podłożu wynosiła odpowiednio 2,60 i 0,26 mg w 100 ml podłoża czyli pozostawała na bardzo niskim poziomie. Zawartość kwasu mlekowego i octowego wzrastała do 7 dnia hodowli bakterii do wartości odpowiednio 1,6 i 0,28%, po tym czasie wykazywała tendencje zniżkowe.
Tabela 1
Dynamika syntezy kwasów organicznych i 1,2-propanodiolu oraz przyrostu biomasy bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p, w czasie 21 dniowej hodowli bakterii w podłożu MRS
MRS/ glukoza Dni hodowli bakterii
3 7 10 14 21
Zawartość kwasu mlekowego [L+D]
g/100ml 1,32 1,60 1,58 1,52 1,48
Zawartość kwasu octowego
g/100ml 0,30 0,38 0,36 0,34 0,30
Zawartość kwasu propionowego
mg/100ml 0,22 0,26 0,26 0,22 0,20
Zawartość 1,2-propanodiolu
mg/100ml 0 2,60 2,52 2,28 2,24
Biomasa bakterii
liczba j.t.k. bakterii/ml 2,4 x 1OS 4,2 X 10® 3,8 x 108 8,2 x 107 3,6 x 107
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C, wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.
W tym doświadczeniu wykazano, że wyizolowany szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p hodowany przez 21 dni w podłożu MRS, zawierającym jako jedyne źródło węgla glukozę, nie wykazywał zdolności do syntezy 1,2-propanodiolu.
W tabeli 2 przedstawiono wyniki badań modelowych dotyczących hodowli bakterii szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w modyfikowanym podłożu MRS, w którym 50% ilości glukozy zastąpiono dodatkiem 1,2-propanodiolu w ilości 800,0 mg/100 ml. Stosunek molowy glukozy do 1,2-propanodiolu wynosił jak 1:2. Skład modyfikowanego podłoża MRS uzupełniono dodatkiem kobalaminy w ilości 20 μ/100 ml. Kobalamina jest kofaktorem enzymu diol dehydratazy, który katalizuje reakcje przemiany 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego.
Nieoczekiwanie okazało się, że nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p wykazuje zdolności do efektywnego wykorzystywania 1,2-propanodiolu, wchodzącego w skład podłoża, do namnażania biomasy bakterii, a zatem jest zdolny do jego metabolizowania, co nie jest
PL 236 769 Β1 oczywiste dla tego gatunku bakterii. W celu udokumentowania dynamiki przemiany 1,2-propanodiolu poprzez 1-propanol do kwasu propionowego przez bakterie szczepu Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p w tabeli 2 podano również procent jego ubytku z podłoża w czasie ich hodowli. Bakterie hodowano w temperaturze 37°C, w czasie 21 dni.
Tabela 2
Stopień wykorzystania 1,2-propanodiolu na przyrost biomasy bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065p i syntezę metabolitów
MRS/glukoza i 1,2-propanodiol Dni hodowli bakterii
3 7 10 14 21
Zawartość kwasu mlekowego [L+D]
g/100ml 0,95 1,20 1,30 1,35 1,30
Zawartość kwasu octowego
g/100ml 0,29 0,34 0,40 0,46 0,42
Zawartość 1-propano u
mg/100ml 120,65 180,96 196,27 208,56 156,24
Zawartość kwasu propionowego
mg/100 ml 66,85 224,90 246,41 270,06 312,27
Biomasa bakterii
liczba j.t.k. bakterii/ml 1,2 x 109 6,0 χ 108 2,2x108 1,4 x 108 2,4 x107
Stopień wykorzystania 1,2-propanodiolu dodanego do podłoża
procent 60,2 96,4 97,0 97,8 99,0
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C. Podłoże MRS: glukoza - 1 g/100 ml,1,2-propanodiol - 800 mg/100 ml, witamina B12.20 μ/100 ml. Wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.
Zmiany zawartości 1,2-propanodiolu, 1-propanolu i kwasu propionowego w podłożu w czasie hodowli bakterii szczepu według wynalazku przedstawiono na Fig. 1.
W warunkach hodowli bakterii szczepu według wynalazku do 21 dni hodowli w modyfikowanym podłożu MRS, w którym źródłem węgla była glukoza i 1,2-propanodiol w stosunku molowym jak 1:2, zawartość kwasu mlekowego i octowego wzrastała do 14 dnia hodowli, a następnie powoli spadała. Do 14 dnia hodowli bakterii wzrastała zawartość 1-propanolu, związku pośredniego między 1,2-propanodiolem i kwasem propionowym. Z ilości 800 mg/100 ml 1,2-propanodiolu, dodanego do podłoża, bakterie wykorzystały do produkcji biomasy i syntezy metabolitów, w tym kwasu propionowego 99,0 procent początkowej zawartości tego związku w podłożu. Efektywność syntezy kwasu propionowego była wysoka i w 21 dniu hodowli bakterii jego zawartość wynosiła 312,27 mg /100 ml podłoża, (tabela 2 i Fig. 1).
Przykład 2. Porównanie zdolności wykorzystania 1,2-propanodiolu szczepu według wynalazku do znanego szczepu o takich zdolnościach metabolicznych
W tabeli 3 przedstawiono wyniki efektywności syntezy kwasu propionowego z 1,2-propanodiolu przez dwa szczepy pochodzące z różnych gatunków LAB, a hodowane w tych samych warunkach (czas hodowli 21 dni, temp. 37°C, źródła węgla glukoza i 1,2-propanodiol z dodatkiem witaminy B12):
PL 236 769 Β1
Lactobacillus diolivorans KKP 2057 p - znany szczep pochodzący z gatunku o udokumentowanej zdolności do metabolizowania 1,2-propanodiolu i
Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p. — nowo wyizolowany szczep według wynalazku.
Tabela 3
Porównanie efektywności metabolizmu 1,2-propanodiolu przez Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p i Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p
Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p
Zawartość kwasu propionowego w mg/100 ml podłoża w 21 dniu hodowli
125,40 312,27
Procent wykorzystania 1,2-propanodiolu dodanego do podłoża
85,0 99,0
Czas hodowli 21 dni, temp. 37°C. Podłoże: zmodyfikowany MRS: glukoza - 1 g/100 ml, 1,2-propanodiol - 800 mg/100 ml, witamina B12 - 20 μ/100 ml.
Wyniki są średnimi z trzech doświadczeń.
Opisany w patencie PL228711, znany ze zdolności do metabolizowania 1,2-propanodiolu do kwasu propionowego, szczep bakterii Lactobacillus diolivorans K KKP 2057 p okazał się mniej efektywny, od nowo wyizolowanego szczepu z gatunku Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, w tych samych warunkach hodowli. Zawartość kwasu propionowego w podłożu po upływie 21 dni hodowli szczepu według wynalazku była dwu i półkrotnie wyższa, a wykorzystanie 1,2-propanodiolu z podłoża wynosiło 99 procent.
Przykład 3. Porównanie stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej wykonanych bez preparatu i z dodatkiem preparatu według wynalazku
Wyniki testu stabilności tlenowej kiszonek kontrolnych bez dodatku preparatu i doświadczalnych z dodatkiem preparatu przedstawiono na Fig. 2.
Test stabilności tlenowej kiszonek z runi łąkowej, bez (kontrola) i z dodatkiem preparatu, zawierającego nowy szczep Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, wykonano metodą temperaturową Honiga. Kiszonki wytworzono w belach cylindrycznych, o masie 500 kg każda, owiniętych trzykrotnie folią. Dawka preparatu wynosiła 5 g/t kiszonych roślin. Preparat, otrzymany jak opisano w Przykładzie 1, podawano na rośliny w formie oprysku po zawieszeniu preparatu w wodzie pitnej. Po upływie 3 miesięcy kiszenia pobrano próby z trzech losowo wybranych bel kiszonek kontrolnych i doświadczalnych i wykonano 11 -dniowy test stabilności w temperaturze 20 stopni C. Wzrost temperatury prób kiszonek w czasie doświadczenia, w danym dniu testu, o ponad 3 stopnie C świadczył o braku stabilności tlenowej kiszonki.
Wyniki przedstawione na Fig. 2 są średnimi z trzech próbek pobranych z trzech wybranych bel kiszonek z runi łąkowej wykonanych w rolnym gospodarstwie doświadczalnym.
Kiszonki doświadczalne z dodatkiem preparatu według wynalazku charakteryzowały się przedłużoną stabilnością tlenową do 7 dni, podczas gdy kiszonki kontrolne bez dodatku preparatu były stabilne tylko przez 4 dni, po otwarciu bel kiszonkarskich
PL 236 769 Β1
Lista sekwencji
110> Instytut Biotechnologii Przemyślu Rolno Spożywczego im. prof. Wacława Dąbrowskiego <120> Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, oraz zawierająca go kultura starterowa i preparat <130> PK-5623-AGR <160> 1 <170> Patentln version 3.5 <210 1 <211> 1359 <212> DNA <213> Pediococcus acidilactici <40 0 1 actgtcactt agacggctag ctcctaaaag gttaccccac cggctttggg tgttacaaac60 tctcatggtg tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac gtattcaccg cggcatgctg120 atccgcgatt actagcgatt ccgacttcgt gtaggcgagt tgcagcctac agtccgaact180 gagaatggtt ttaagagatt agctaaacct cgcggtttcg cgactcgttg taccatccat240 tgtagcacgt gtgtagccca ggtcataagg ggcatgatga tttgacgtcg tccccacctt300 cctccggttt gtcaccggca gtctcactag agtgcccaac tgaatgctgg caactagtaa360 taagggttgc gctcgttgcg ggacttaacc caacatctca cgacacgagc tgacgacaac420 catgcaccac ctgtcattct gtccccgaag ggaacgccta atctcttagg ttggcagaag480 atgtcaagac ctggtaaggt tcttcgcgta gcttcgaatt aaaccacatg ctccaccgct540 tgtgcgggcc cccgtcaatt cttttgagtt tcaaccttgc ggtcgtactc cccaggcgga600 ttacttaatg cgttagctgc agcactgaag ggcggaaacc ctccaacact tagtaatcat660 cgtttacggc atggactacc agggtatcta atcctgttcg ctacccatgc tttcgagcct720 cagcgtcagt tacagaccag acagccgcct tcgccactgg tgttcttcca tatatctacg780 catttcaccg ctacacatgg agttccactg tcctcttctg cactcaagtc tcccagtttc840 caatgcactt cttcggttga gccgaaggct ttcacattag acttaaaaga ccgcctgcgc900 tcgctttacg cccaataaat ccggataacg cttgccacct acgtattacc gcggctgctg960 gcacgtagtt agccgtgctt tctggttaaa taccgtcact gggtgaacag ttactctcac1020 ccacgttctt ctttaacaac agagctttac gagccgaaac ccttcttcac tcacgcggcg1080 ttgctccatc agacttgcgt ccattgtgag attccctact gctgcctccg tagagtctgg1140 gccgtgtctc agtcccatgt gcgataccct ctcagtcgct acgcatcatc gctggtgagc1200 gtactcacac tagctatgcg cgcgggtcat cgatgawgcg agcatctttc aagaaacagg1260 cgatttcytg ttwacgatar ccatctgttt caggttatcc cckgatygca gttaccaagt1320 tayacgatcg caattgattc gttagtccat catgcagac1359

Claims (5)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 zdeponowany w Kolekcji Kultur Drobnoustrojów Przemysłowych Instytutu Biotechnologii Przemysłu Rolno-Spożywczego w Warszawie im. prof. Wacława Dąbrowskiego, pod numerem KKP 2065 p, przy czym wymieniony szczep ma zdolność metabolizowania 1,2-propanodiolu i wykazuje zdolność syntezy kwasu propionowego, w ilościach efektywnych do zastosowania do przedłużania stabilności tlenowej kiszonek.
  2. 2. Kultura starterowa preparatu bakteryjnego do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych, znamienna tym, że obejmuje szczep bakterii Pediococcus acidilactici PD2 KKP 2065 p, jak określony w zastrz. 1.
  3. 3. Preparat do przedłużania stabilności tlenowej kiszonych pasz i/lub roślinnych surowców odnawialnych znamienny tym, że obejmuje szczep jak określony w zastrz. 1 lub kulturę starterową jak określoną w zastrz. 2 i przynajmniej jeden składnik pomocniczy, przy czym korzystnie składnikiem pomocniczym jest witamina B12.
  4. 4. Preparat według zastrz. 3, znamienny tym, że zawarte w nim bakterie są liofilizowane.
  5. 5. Preparat według zastrz. 4 znamienny tym, że ma zawartość suchej masy około 94% i zawiera liofilizat bakterii, przy czym w 1 g zawiera liczbę bakterii wynoszącą około 2 x 1010 jednostek tworzących kolonie bakterii.
PL426522A 2018-08-01 2018-08-01 Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat PL236769B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL426522A PL236769B1 (pl) 2018-08-01 2018-08-01 Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL426522A PL236769B1 (pl) 2018-08-01 2018-08-01 Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL426522A1 PL426522A1 (pl) 2020-02-10
PL236769B1 true PL236769B1 (pl) 2021-02-22

Family

ID=69399772

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL426522A PL236769B1 (pl) 2018-08-01 2018-08-01 Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL236769B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL426522A1 (pl) 2020-02-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101461453B (zh) 仔猪用复合微生物饲料添加剂
CN107164274B (zh) 一种乳酸菌复合菌剂及其制备方法和应用
ES2771857T3 (es) Cepas de Lactobacillus de acción rápida y su uso para mejorar la estabilidad aeróbica del ensilado
CN102226162A (zh) 复合微生物饲料添加剂的制备方法及其应用
CN101586111B (zh) 一种活性乳酸乳球菌制品的制备方法
CN102334611A (zh) 米糠基质纳豆芽孢杆菌与酵母菌复合菌剂的固态发酵方法
CN113462620A (zh) 一种饲用复合菌剂的制备方法及其应用
US8697423B2 (en) Strain of Lactobacillus plantarum S, the use of the strain of Lactobacillus plantarum S and the preparation for roughages ensiling
CN102696860A (zh) 基于醋糟和杂粕的一种高效低成本的微生物饲料蛋白
CN101700105A (zh) 奶牛用微生态饲料添加剂及制备方法
RU2688429C1 (ru) Способ получения пробиотической добавки для перепелов
KR100287825B1 (ko) 가축용 복합 미생물 제제
CN110804571B (zh) 一种复合乳酸菌制剂及在制备成饲料添加剂中的应用
Paliy et al. Enhanced cultivation technology for lacto and bifidobacteria
KR101791850B1 (ko) 반추가축용 완전배합사료 및 사일리지 발효 촉진제
CN105802871B (zh) 乳酸菌群及其在秸秆饲料制备中的应用
RU2675934C2 (ru) Комбинированный пробиотический препарат на основе спорообразующих бактерий рода bacillus (варианты) для использования в животноводстве, способ его производства (варианты) и штамм bacillus subtilis (natto), используемый в качестве добавки к препарату
PL236769B1 (pl) Nowy szczep bakterii Pediococcus acidilactici o zdolności metabolizowania 1,2-propanodiolu, zawierająca go kultura starterowa oraz preparat
CN101347179A (zh) 灌木生物饲料专用复合菌剂的制备方法
RU2391859C2 (ru) Способ получения белково-витаминного корма
US9370199B2 (en) Strain of Lactobacillus buchneri A, composition, a multi-component preparation for starch-rich plant preservation, their use and a method for plant preservation
KR20200103230A (ko) 케나프(kenaf)의 신품종 장대(jangdae)를 주원료로 한 초식가축용 사료첨가제인 생균제의 제조방법
CN103621792A (zh) 一种含l-赖氨酸复合益生菌的饲料添加剂及其制备方法
RU2268299C2 (ru) Способ получения бактериального концентрата для силосования кормов
CN112175834B (zh) 植物乳酸菌在枯草芽孢杆菌固体菌剂保存中的应用及延长枯草芽孢杆菌的保存期的方法