PL237937B1 - Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation - Google Patents
Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation Download PDFInfo
- Publication number
- PL237937B1 PL237937B1 PL396319A PL39631911A PL237937B1 PL 237937 B1 PL237937 B1 PL 237937B1 PL 396319 A PL396319 A PL 396319A PL 39631911 A PL39631911 A PL 39631911A PL 237937 B1 PL237937 B1 PL 237937B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- silver nanoparticles
- solution
- anions
- formulation according
- hsv
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 30
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title 1
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 49
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims abstract description 4
- -1 sodium citric acid anions Chemical class 0.000 claims description 27
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 16
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 10
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 claims description 3
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 2
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001559 benzoic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940082500 cetostearyl alcohol Drugs 0.000 claims description 2
- XTEGARKTQYYJKE-UHFFFAOYSA-N chloric acid Chemical class OCl(=O)=O XTEGARKTQYYJKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 claims description 2
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 2
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims description 2
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 2
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 2
- OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N tetratriacontyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCO OULAJFUGPPVRBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 29
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 37
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 14
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 13
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 6
- 208000001688 Herpes Genitalis Diseases 0.000 description 5
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 201000004946 genital herpes Diseases 0.000 description 5
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 4
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XHJZXCYPSJOWPV-UHFFFAOYSA-N sulfanyl ethanesulfonate Chemical compound CCS(=O)(=O)OS XHJZXCYPSJOWPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OQUFOZNPBIIJTN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;sodium Chemical compound [Na].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O OQUFOZNPBIIJTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000003098 Ganglion Cysts Diseases 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000037952 HSV-1 infection Diseases 0.000 description 1
- 208000004898 Herpes Labialis Diseases 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000000996 L-ascorbic acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010067152 Oral herpes Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000005400 Synovial Cyst Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- NHPBNQZEXDUUIO-UHFFFAOYSA-N [Ag+].[Ag+].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O Chemical group [Ag+].[Ag+].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O NHPBNQZEXDUUIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000009933 burial Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 1
- 210000000256 facial nerve Anatomy 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000005128 keratinized epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960002985 medroxyprogesterone acetate Drugs 0.000 description 1
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002082 metal nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N nitric acid;sodium Chemical compound [Na].O[N+]([O-])=O GTTYPHLDORACJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000019832 sodium triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003860 topical agent Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Preparat farmaceutyczny do leczenia zakażenia wirusem herpes simplex, w którym składnik aktywny stanowi zawiesina nanocząstek srebra o wielkości od 1 do 100 nm w wodnym roztworze zawierającym mieszaninę dopuszczalnych farmaceutycznie anionów co najmniej jednej soli kwasu organicznego i/lub anionów co najmniej jednej soli kwasu nieorganicznego, przy czym udział nanocząstek srebra w preparacie wynosi od 0,005 do 5% wag., udział roztworu wynosi od 0,005 do 5% obj., a udział nośnika od 95 do 99,995% obj.. Wynalazek dotyczy także zastosowania preparatu do wytwarzania leku do zapobiegania i leczenia zakażenia wirusem herpes simplex.Pharmaceutical preparation for the treatment of herpes simplex virus infection, in which the active ingredient is a suspension of silver nanoparticles with a size of 1 to 100 nm in an aqueous solution containing a mixture of pharmaceutically acceptable anions of at least one salt of an organic acid and/or anions of at least one salt of an inorganic acid, with wherein the proportion of silver nanoparticles in the preparation is from 0.005 to 5% by weight, the proportion of the solution is from 0.005 to 5% by volume, and the proportion of the carrier is from 95 to 99.995% by volume. The invention also relates to the use of the preparation for the manufacture of a medicament for the prevention and treatment of infection herpes simplex virus.
Description
Przedmiotem wynalazku jest preparat farmaceutyczny zawierający nanocząstki srebra do zastosowania w terapii zakażenia wirusem herpes simplex.The subject of the invention is a pharmaceutical preparation containing silver nanoparticles for use in the treatment of herpes simplex virus infection.
Zakażenie wirusem herpes simplex typu 1 oraz 2 (HSV-1 i HSV-2), czyli tzw. opryszczka zwykła, stanowi jedną z najczęstszych chorób przenoszonych drogą kropelkową, lub poprzez bezpośredni k ontakt. Szacuje się, że zakażeniem HSV-1 dotkniętych jest 80% ludzi na całym świecie, z czego tylko połowa choruje. W przypadku HSV-2, latentne zakażenie wirusowe dotyczy od 10 do 60% populacji ludzi na całym świecie (Halioua B, Malkin JE.(1999) Epidemiology of genital herpes - recent advances. Eur J Dermatol. 9:177-84). Opryszczka wargowa zwykle obejmuje tzw. granicę czerwieni wargowej i jest w 75% wywoływana przez wirus herpes simplex typu 1, natomiast opryszczkę narządów płciowych wywołuje głównie (75%) wirus herpes simplex typu 2. Po zakażeniu pierwotnym wirus pozostaje w stanie latencji w obrębie zwojów nerwu twarzowego (HSV-1) lub zwojów krzyżowych (HSV-2), powodując mniej groźne nawroty opryszczki (Halioua i wsp. 1999, Gupta R, Warren T, Wald A.(2007) Genital herpes. Lancet. 370:2127-37).Infection with herpes simplex types 1 and 2 (HSV-1 and HSV-2), i.e. herpes simplex is one of the most common diseases transmitted by droplets or by direct contact. It is estimated that 80% of people worldwide are affected by HSV-1 infection, of which only half are ill. In the case of HSV-2, latent viral infection affects 10 to 60% of the human population worldwide (Halioua B, Malkin JE. (1999) Epidemiology of genital herpes - recent advances. Eur J Dermatol. 9: 177-84). Cold sores usually include the so-called the border of the labial red and is 75% caused by herpes simplex type 1 virus, while genital herpes is mainly caused (75%) by herpes simplex type 2 virus. After primary infection, the virus remains latent in the facial nerve ganglia (HSV-1) or cruciate ganglion (HSV-2), resulting in less severe herpes recurrences (Halioua et al. 1999, Gupta R, Warren T, Wald A. (2007) Genital herpes. Lancet. 370: 2127-37).
Tym samym, zmiany w obrębie nabłonka wywołane nawrotami opryszczki stanowią jeden z najczęstszych czynników wpływających na integralność oraz funkcjonowanie nabłonka. Nawroty opryszczki typu 1 i 2 zazwyczaj występują w chwilach obniżenia naturalnej odporności organizmu, kilka razy w roku, i prowadzą do pogorszenia jakości życia oraz wpływają na podejmowane procedury lecznicze w innych schorzeniach, przesuwając np. chemioterapię chorób nowotworowych do chwili całkowitego wyleczenia zmian obecnych w błonach śluzowych (Halioua i wsp. 1999).Thus, changes in the epithelium caused by recurrent herpes are one of the most common factors affecting the integrity and functioning of the epithelium. Type 1 and 2 herpes recurrences usually occur when the body's natural immunity is reduced, several times a year, and lead to a deterioration of the quality of life and affect the treatment procedures undertaken in other diseases, shifting, for example, chemotherapy of neoplastic diseases until the changes present in the membranes are completely healed. mucous membranes (Halioua et al. 1999).
Błona śluzowa pochwy człowieka zbudowana jest z wielowarstwowego, płaskiego nabłonka nierogowaciejącego dostarczającego, m.in., mechanicznej ochrony przed mikroorganizmami. Do uszkodzenia integralności błony śluzowej może dochodzić w przebiegu chorób przenoszonych drogą płciową (STD), takich jak opryszczka narządów płciowych, zakażeń bakteryjnych (rzeżączka), albo na skutek uszkodzeń mechanicznych. Zakłócenie integralności błony śluzowej pochwy zwiększa blisko trzykrotnie ryzyko zakażenia HIV oraz innymi chorobami przenoszonymi drogą płciową (Galvin SR, Cohen MS. (2004) The role of sexually transmitted diseases in HIV transmission. Nat Rev Microbiol. 2:33-42.).Human vaginal mucosa is made of multilayered, flat, non-keratinized epithelium providing, among others, mechanical protection against microorganisms. Damage to the integrity of the mucosa can occur in the course of sexually transmitted diseases (STDs) such as genital herpes, bacterial infections (gonorrhea), or as a result of mechanical damage. Disruption of the integrity of the vaginal mucosa increases the risk of infection with HIV and other sexually transmitted diseases almost threefold (Galvin SR, Cohen MS. (2004) The role of sexually transmitted diseases in HIV transmission. Nat Rev Microbiol. 2: 33-42.).
Prace nad szczepionkami przeciwko zakażeniu HSV-1, czy HSV-2 nie wyszły poza obszar doświadczalny. Jedynym znanym sposobem leczenia zakażeń HSV-1/2 jest miejscowe stosowanie środków przeciwwirusowych - w postaci maści lub żeli zawierających analogi nukleotydów, blokujące jeden z enzymów wirusa. W rezultacie, dochodzi do zahamowania dalszej replikacji wirusa w komórkach, w których namnaża się wirus na powierzchni błon śluzowych/skóry. Część zakażonych osób jest odpornych na leczenie analogami nukleotydów. Środki stosowane miejscowo nie chronią również przed wydzielaniem aktywnych cząstek wirusa z wydzielinami błon śluzowych do środowiska, a tym samym nie chronią przed dalszym rozsiewaniem wirusa drogą kontaktów bezpośrednich. Pomimo, że zarówno HSV-1, jak i HSV-2 są wrażliwe na powszechnie stosowane środki odkażające, wirus może przez jakiś czas przetrwać w wydzielinach błon śluzowych, bądź w złuszczonych fragmentach tkanek.Work on vaccines against HSV-1 or HSV-2 infection did not go beyond the experimental area. The only known treatment for HSV-1/2 infections is the topical application of antiviral agents - in the form of ointments or gels containing nucleotide analogues that block one of the viral enzymes. As a result, further viral replication is inhibited in cells where the virus multiplies on the mucosa / skin surface. Some infected people are resistant to treatment with nucleotide analogues. Topical agents also do not protect against the release of active viral particles with mucosal secretions into the environment and therefore do not protect against further viral shedding by direct contact. Although both HSV-1 and HSV-2 are sensitive to commonly used disinfectants, the virus may persist for some time in mucosal secretions or in exfoliated tissue fragments.
Obszar zastosowań nanotechnologii i nanocząsteczek jest obecnie bardzo szeroki i obejm uje dziedziny od inżynierii materiałowej do biomedycyny. Nanocząstki stanowią struktury o rozmiarze 1-100 nm. Spośród nanocząsteczek wykonanych z metali szlachetnych, nanocząstki srebra stanowią obszar największego zainteresowania, ze względu na ich atrakcyjne właściwości fizyko-chemiczne. Srebro, w tym srebro jonowe, wykazuje silną toksyczność w stosunku do szerokiego zakresu mikroorganizmów, zarówno bakterii, jak i wirusów (Rai M, Yadav A, Gade A. (2009). Silver nanoparticles as a new generation of antimicrobials. Biotechnol Adv. 27(l):76-83). Przykładowo, wykazano, że nanocząstki srebra koniugowane z sulfonianem merkaptoetanu (Ag-MES) inaktywują wejście HSV-2 do wnętrza komórek oraz dalsze zakażenie (Baram-Pinto D, Shukla S, Perkas N, Gedanken A, Sarid R. (2009) Inhibition of herpes simplex virus type 1 infection by silver nanoparticles capped with mercaptoethane sulfonate. Bioconjug Chem. 20(8): 1497-502). Nanoczasteczki srebra powlekane poliwinylopirolodonem wiążą się z wirusem HIV-1 i blokują jego wejście do komórek (Lara HH, Ixtepan-Turrent L, Garza-Trevino EN, Rodriguez-Padilla C. (2010) PVP-coated silver nanoparticles block the transmission of cell-free and cellassociated HIV-1 in human cervical culture. JNanobiotechnology. 13:8-15).The field of application of nanotechnology and nanoparticles is currently very wide, ranging from materials science to biomedicine. The nanoparticles are structures with a size of 1-100 nm. Of the noble metal nanoparticles, silver nanoparticles represent the area of greatest interest due to their attractive physico-chemical properties. Silver, including ionic silver, is highly toxic to a wide range of microorganisms, both bacteria and viruses (Rai M, Yadav A, Gade A. (2009). Silver nanoparticles as a new generation of antimicrobials. Biotechnol Adv. 27. (l): 76-83). For example, silver nanoparticles conjugated with mercaptoethane sulfonate (Ag-MES) have been shown to inactivate HSV-2 entry into cells and further infection (Baram-Pinto D, Shukla S, Perkas N, Gedanken A, Sarid R. (2009) Inhibition of herpes simplex virus type 1 infection by silver nanoparticles capped with mercaptoethane sulfonate. Bioconjug Chem. 20 (8): 1497-502). Polyvinylpyrrolodone-coated silver nanoparticles bind to HIV-1 and block its entry into cells (Lara HH, Ixtepan-Turrent L, Garza-Trevino EN, Rodriguez-Padilla C. (2010) PVP-coated silver nanoparticles block the transmission of cell- free and cellassociated HIV-1 in human cervical culture. JNanobiotechnology. 13: 8-15).
W wyniku badań przeprowadzonych przez twórców wynalazku okazało się, że nanocząsteczki srebra w kompozycji według wynalazku powodują zahamowanie wnikania HSV do komórek docelowych.As a result of the research carried out by the inventors, it was found that the silver nanoparticles in the composition according to the invention inhibit the penetration of HSV into the target cells.
PL 237 937 B1PL 237 937 B1
Preparat farmaceutyczny zawierający zawiesinę nanocząstek srebra o wielkości od 1 do 100 nm jako składnik aktywny oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i ewentualnie farmaceutycznie dopuszczalne środki pomocnicze, według wynalazku charakteryzuje się tym, że składnik aktywny stanowi zawiesina nanocząstek srebra otrzymana metodą redukcji azotanu srebra w obecności kwasów organicznych lub soli kwasów organicznych i nieorganicznych, w wodnym roztworze pochodzącym bezpośrednio z redukcji azotanu srebra zawierającym mieszaninę dopuszczalnych farmaceutycznie anionów soli sodowej kwasu cytrynowego i/lub anionów soli sodowej kwasu azotowego, przy czym udział nanocząstek srebra w preparacie wynosi od 0,005 do 5% wag, udział roztworu wynosi od 0,005 do 5% obj., a udział nośnika od 95 do 99,995% obj., do zastosowania do leczenia zakażenia wirusem herpes simplex.A pharmaceutical preparation containing a suspension of silver nanoparticles with a size from 1 to 100 nm as active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier and optionally pharmaceutically acceptable auxiliaries, according to the invention, is characterized in that the active ingredient is a suspension of silver nanoparticles obtained by reducing silver nitrate in the presence of organic acids or salts of organic and inorganic acids, in an aqueous solution derived directly from the reduction of silver nitrate containing a mixture of pharmaceutically acceptable anions of sodium citric acid and / or anions of sodium nitric acid, the proportion of silver nanoparticles in the preparation is from 0.005 to 5% by weight, the proportion of the solution it ranges from 0.005 to 5% v / v and the carrier proportion is from 95 to 99.995% v / v, for use in the treatment of herpes simplex infection.
Roztwór, w którym są zawieszone nanocząstki srebra może dodatkowo zawierać aniony soli kwasów nieorganicznych wybranych z grupy zawierającej kwasy: boranowy, fluoroboranowy, fosforanowy, siarkowy, chlorowy.The solution in which the silver nanoparticles are suspended may additionally contain anions of salts of inorganic acids selected from the group consisting of: boranoic, fluoroboric, phosphate, sulfuric and chloric acids.
Roztwór, w którym są zawieszone nanocząstki srebra może dodatkowo zawierać aniony soli kwasów organicznych wybranych z grupy zawierającej kwasy: askorbinowy, octowy, benzoesowy.The solution in which silver nanoparticles are suspended may additionally contain anions of salts of organic acids selected from the group consisting of: ascorbic, acetic and benzoic acids.
Roztwór może dodatkowo zawierać kwasy organiczne takie jak kwas taninowy i kwas galuksowy. Korzystnie roztwór zawiera sole kwasu organicznego i/lub nieorganicznego w stężeniu 10-2000 ppm oraz dodatkowe kwasy organiczne w stężeniu 10-500 ppm.The solution may additionally contain organic acids such as tannic acid and gallic acid. Preferably the solution contains organic and / or inorganic acid salts in a concentration of 10-2000 ppm and additional organic acids in a concentration of 10-500 ppm.
Korzystnie preparat zawiera nanocząstki srebra o wielkości 10-80 nm. Najkorzystniej ponad 50% nanocząstek ma rozmiar mniejszy niż 50 nm i większy niż 30 nm.Preferably, the formulation contains silver nanoparticles with a size of 10-80 nm. Most preferably more than 50% of the nanoparticles are less than 50 nm and greater than 30 nm in size.
Korzystnie roztwór zawiera aniony cytrynianowe, aniony azotanowe, aniony boranowe, aniony fosforanowe, aniony chlorowe, aniony taninowe, aniony galuksowe.Preferably the solution comprises citrate anions, nitrate anions, borate anions, phosphate anions, chlorine anions, tannic anions, gallux anions.
W roztworze znajdują się także kationy pochodzące z soli kwasów stosowanych jako stabilizatory nanocząstek srebra, takich jak na przykład cytrynian sodu lub borowodorek sodu. Korzystnie są to kationy sodowe. Kationy i aniony są obecne pojedynczo lub w postaci mieszanin, których wzajemne stosunki stężeń są zmienne i zależą od metody otrzymywania zawiesiny nanocząsteczek.Also present in the solution are cations derived from salts of acids used as stabilizers for silver nanoparticles, such as, for example, sodium citrate or sodium borohydride. They are preferably sodium cations. Cations and anions are present individually or in the form of mixtures, the mutual concentration ratios of which vary and depend on the method of obtaining nanoparticle suspension.
W preparacie według wynalazku mogą zostać wykorzystane nanocząstki srebra otrzymane metodą chemiczną, zgodnie z każdą z metod otrzymywania nanocząsteczek srebra metodą redukcji chemicznej, znaną fachowcom, pod warunkiem nietoksyczności nośnika, w którym zawieszone są nanocząstki srebra oraz nietoksyczności zastosowanego reduktora i stabilizatora (Malina D, Sobczak-Kupiec A, Kowalski Z (2010) Nanocząsteczki srebra - przegląd chemicznych metod syntezy. Technical transactions. Chemistry. 10: 183-192). Korzystnie, obecność anionów soli kwasów organicznych i nieorganicznych w roztworze wynika ze sposobu otrzymywania nanocząstek srebra przy użyciu redukcji chemicznej, w której to metodzie źródłem srebra jest sól srebra - azotan srebra, który w obecności odpowiednich reduktorów i stabilizatorów (kwasów organicznych lub soli kwasów organicznych i nieorganicznych) ulega redukcji do metalicznego srebra.In the preparation according to the invention, silver nanoparticles obtained by a chemical method can be used, in accordance with any of the methods for obtaining silver nanoparticles by chemical reduction, known to experts, provided that the carrier in which the silver nanoparticles are suspended is non-toxic and the reducer and stabilizer used are non-toxic (Malina D, Sobczak -Kupiec A, Kowalski Z (2010) Silver nanoparticles - review of chemical synthesis methods. Technical transactions. Chemistry. 10: 183-192). Preferably, the presence of anions of salts of organic and inorganic acids in the solution results from the method of obtaining silver nanoparticles using chemical reduction, in which the source of silver is a silver salt - silver nitrate, which in the presence of appropriate reducing agents and stabilizers (organic acids or salts of organic acids and inorganic) is reduced to metallic silver.
Przykładowo, roztwór zawierający nanocząstki srebra można uzyskać jedną z poniżej wymienionych metod.For example, a solution containing silver nanoparticles can be obtained by one of the methods listed below.
Sposób według publikacji Dadosh 2007 (Dadosh T., Synthesis of uniform silver nanoparticles with a controllable size. Materials letters. 2009, 63, 2236-8) polega na tym, że 80 ml AgNOs najpierw ogrzewano do 60°C, a następnie dodano (energicznie mieszając) do 20 ml roztworu cytrynian trisodowy i kwas cytrynowy, który został wstępnie ogrzany do 60°C. Mieszaninę mieszano przez 20 minut, a następnie ogrzewanie przerwano i roztwór ochłodzono w temperaturze pokojowej, ciągle mieszając.The method according to the publication Dadosh 2007 (Dadosh T., Synthesis of uniform silver nanoparticles with a controllable size. Materials letters. 2009, 63, 2236-8) is that 80 ml of AgNOs are first heated to 60 ° C and then added ( with vigorous stirring) to 20 ml of a solution of trisodium citrate and citric acid that has been pre-heated to 60 ° C. The mixture was stirred for 20 minutes, then heating was discontinued and the solution was cooled to room temperature with continued stirring.
Sposób według publikacji Marcin Banach i wsp. 2013 (Marcin Banach, Jolanta Pulit, Leszek Tymczyna, Anna Chmielowiec-Korzeniowska. Otrzymywanie srebra nanostrukturalnego metodą redukcji chemicznej. Przem. Chem. 2013, 92, 6, 936) polega na tym, że do roztworu wodnego AgNOs (5,0 cm3, 0,001 mol/dm3) dodano wodny roztwór tripolifosforanu sodu (2,5 cm3), a następnie wodny roztwór kwasu cytrynowego (2,5 cm3). Reakcję redukcji prowadzono w temperaturze 50°C w czasie 20 minut.The method according to the publication by Marcin Banach et al. 2013 (Marcin Banach, Jolanta Pulit, Leszek Tymczyna, Anna Chmielowiec-Korzeniowska. Obtaining nanostructured silver by chemical reduction. Przem. Chem. 2013, 92, 6, 936) consists in the solution aqueous AgNOs (5.0 cm 3 , 0.001 mol / dm 3 ) was added an aqueous solution of sodium tripolyphosphate (2.5 cm 3 ) followed by an aqueous citric acid solution (2.5 cm 3 ). The reduction reaction was carried out at 50 ° C for 20 minutes.
Sposób według publikacji Chekin i Ghasemi 2014 (Fereshteh Chekin, Somayeh Ghasemi. Silver nanoparticles prepared in presence of ascorbic acid and gelatin, and their electrocatalytic application. Bull. Mater. Sei., Vol. 2014, 37, 1433-1437) polega na tym, że przygotowano 10 ml 0,001M roztworu wodnego azotanu srebra. Przygotowano roztwór wodny żelatyny; 0,2 g żelatyny w 5 ml wody. Przygotowano 5 ml wodnego roztworu kwasu cytrynowego. Do 50 ml kolby miarowej dodano 10 ml roztworu azotanu srebra oraz przygotowany roztwór żelatyny, a następnie inkubowano mieszaninę wolno podThe method according to the publication of Chekin and Ghasemi 2014 (Fereshteh Chekin, Somayeh Ghasemi. Silver nanoparticles prepared in presence of ascorbic acid and gelatin, and their electrocatalytic application. Bull. Mater. Sei., Vol. 2014, 37, 1433-1437) is based on this that 10 mL of 0.001M silver nitrate aqueous solution was prepared. An aqueous gelatin solution was prepared; 0.2 g of gelatin in 5 ml of water. 5 ml of an aqueous citric acid solution was prepared. 10 ml of silver nitrate solution and the prepared gelatin solution were added to a 50 ml volumetric flask, and then the mixture was incubated slowly under
PL 237 937 B1 nosząc temperaturę łaźni wodnej do 100 - 110°C. Następnie dodano do kolby roztwór kwasu cytrynowego i inkubowano przez kolejne 2 minuty aż do uzyskania brązowego koloru, który wskazuje na powstanie nanocząstek Ag. Wyjęto kolbę z łaźni i ostudzono.Wearing a water bath temperature of 100-110 ° C. The citric acid solution was then added to the flask and incubated for a further 2 minutes until a brown color was obtained, which indicates the formation of Ag nanoparticles. The flask was removed from the bath and cooled down.
Preparat według wynalazku może mieć formę maści, żelu lub roztworu. Standardowe nośniki obejmują zwłaszcza: sól fizjologiczną, monostearynian glicerolu, alkohol cetostearylowy, glikole polietylenowe, stearyniany polioksyetylenowe, trietanoloaminę, alkohol poliwynylowy, poliwynylopyrrolidon, glicerynę, sorbitol, parafinę, wazelinę. Ponadto, zastosowane mogą zostać komercyjnie dostępne podłoża (bazy) w postaci emulsji i hydrożeli.The preparation according to the invention may be in the form of an ointment, gel or solution. Standard carriers include in particular: saline, glycerol monostearate, cetostearyl alcohol, polyethylene glycols, polyoxyethylene stearates, triethanolamine, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, glycerin, sorbitol, paraffin, petroleum jelly. In addition, commercially available emulsion and hydrogel bases can be used.
Preparat według wynalazku podaje się na miejsce zmienione chorobowo przez zakażenie HSV-1 lub HSV-2. Nanocząstki srebra, wiążąc się z powierzchnią wirusa (wirionu), blokują jego wnikanie do komórek docelowych (komórki nabłonkowe i keratynocyty), a tym samym blokują dalsze zakażanie komórek docelowych dla obu wirusów. Obecność anionów soli kwasów organicznych i nieorganicznych zwiększa powinowactwo wiązania wirionów HSV-1 i HSV-2 do nanocząstek srebra, a tym samym ogranicza zakażenie HSV-1 lub HSV-2.The preparation according to the invention is administered to the site affected by HSV-1 or HSV-2 infection. Silver nanoparticles, by binding to the surface of the virus (virion), block its penetration into target cells (epithelial cells and keratinocytes), and thus block further infection of target cells for both viruses. The presence of anions of salts of organic and inorganic acids increases the binding affinity of HSV-1 and HSV-2 virions for silver nanoparticles, and thus reduces infection with HSV-1 or HSV-2.
Leczenie zakażenia HSV-1 i HSV-2 polega na podawaniu miejscowym lub doustnym leków o charakterze analogów nukleotydów, które po wniknięciu do komórek specyficznie hamują powielanie materiału genetycznego wirusa - replikacje wirusowego DNA. Działanie to obejmuje jedynie wnętrze komórek zakażonych HSV-1 lub HSV-2 i nie obejmuje wirusa obecnego we fragmentach złuszczonych tkanek bądź w wydzielinie błon śluzowych. Skuteczne wiązanie wolnego wirusa obecnego poza komórkami z nanocząsteczkami srebra, uniemożliwiające dalsze wnikanie wirusa do komórek, powoduje ograniczenie szerzenia się zakażenia do komórek sąsiednich oraz poza organizm macierzysty. Tym samym, możliwe jest skrócenie okresu trwania zakażenia HSV-1 lub HSV-2 oraz ograniczenie dalszego szerzenia się zakażenia na inne osoby.Treatment of HSV-1 and HSV-2 infection consists in topical or oral administration of nucleotide analogues which, after entering the cells, specifically inhibit the reproduction of the viral genetic material - viral DNA replication. This action affects only the inside of cells infected with HSV-1 or HSV-2 and does not involve the virus present in fragments of exfoliated tissues or in mucosal secretions. Effective binding of free virus present outside the cells to silver nanoparticles, preventing the further penetration of the virus into the cells, limits the spread of the infection to neighboring cells and beyond the mother organism. Thus, it is possible to shorten the duration of HSV-1 or HSV-2 infection and to limit further spread of infection to other people.
Przedmiot wynalazku został bliżej przedstawiony w przykładach.The subject of the invention is presented in the examples.
P r z y k ł a d 1P r z k ł a d 1
Badania nad wpływem nanocząstek srebra na wnikanie HSV-2 do komórek docelowych dla wirusa tj. do komórek keratynocytów z wykorzystaniem roztworu według wynalazku.Studies on the influence of silver nanoparticles on the penetration of HSV-2 into viral target cells, i.e. into keratinocyte cells, using the solution according to the invention.
W badaniu użyto linii komórkowej mysich keratynocytów jako modelu in vitro dla zakażenia HSV2. Hodowle keratynocytów poddawano wstępnej inkubacji (1 h) w obecności 2,5 ppm nanocząstek srebra 25-40 nm oraz 35-55 nm w podłożu hodowlanym, a następnie zakażano HSV-2 w dawce jeden wirus na jedną komórkę. W drugiej procedurze, nanocząstki srebra w stężeniu jak wyżej inkubowano z dawką wirusa jak wyżej przez 1 h, a następnie podawano do hodowli keratynocytów. Źródłem nanocząstek srebra był roztwór według wynalazku. Po upływie 24h mierzono poziom replikacji dla obu wariantów doświadczenia, mierząc miano wirusa i wyrażając go w jednostkach PFU/ml. Miano wirusa określano metodą nanoszenia rozcieńczeń płynu znad zakażonej hodowli na hodowlę komórek nabłonkowych GMK, zgodnie z procedurą znaną fachowcom, a następnie, po upływie 24h zliczano pod mikroskopem odwróconym ilość zmian cytopatycznych w hodowli (PFU) i przeliczano na objętość naniesionego płynu (PFU/ml).The study used the murine keratinocyte cell line as an in vitro model for HSV2 infection. The keratinocyte cultures were preincubated (1 h) in the presence of 2.5 ppm silver nanoparticles 25-40 nm and 35-55 nm in the culture medium, and then infected with HSV-2 at a dose of one virus per cell. In the second procedure, silver nanoparticles at a concentration as above were incubated with the dose of virus as above for 1 h, and then added to the keratinocyte culture. The source of the silver nanoparticles was the solution according to the invention. After 24h, the replication level was measured for both variants of the experiment by measuring the virus titer and expressing it in PFU / ml. The virus titer was determined by applying dilutions of the fluid from the infected culture to the GMK epithelial cell culture according to a procedure known to those skilled in the art, and then, after 24 hours, the number of cytopathic changes in the culture (PFU) was counted under an inverted microscope and converted into the volume of fluid applied (PFU / ml ).
Nanocząstki w zakresie rozmiaru 25-40 nm zawieszone były w roztworze zawierającym aniony cytrynianowe (300 ppm), azotanowe (50 ppm) oraz kationy sodowe (100 ppm) (roztwór 1), natomiast nanocząstki w zakresie rozmiaru 35-55 nm zawieszone były w roztworze zawierającym aniony cytrynianowe (1200 ppm), azotanowe (50 ppm) oraz kationy sodowe (500 ppm) (roztwór 2). Podawana dawka składała się z 2,5 ml składu 1 lub 2 zawieszanego w 1000 ml płynu hodowlanego dla keratynocytów (MEM, 10% surowicy bydlęcej, 100 U/ml penicyliny oraz 100 ng/ml streptomycyny). Wstępna inkubacja hodowli w obecności roztworu 1 lub 2 w hodowli nie powodowała zahamowania zakażenia HSV-2, jednak inkubacja preparatów nanocząstek srebra 25-40 nm (roztwór 1) oraz 35-55 nm (roztwór 2) z HSV-2 niemal całkowicie zahamowała wnikanie wirusa do komórek, a tym samym zakażenie komórek. Na Fig. 1 przedstawiono poziom zakażenia HSV-2 w hodowli mysich keratynocytów 24 h od podania wirusa w obecności 2,5 nl roztworu 1 (25-40 nm) lub roztworu 2 (35-55 nm) w 1000 ml płynu hodowlanego.Nanoparticles in the size range of 25-40 nm were suspended in a solution containing citrate (300 ppm), nitrate (50 ppm) and sodium cations (100 ppm) (solution 1), while nanoparticles in the size range of 35-55 nm were suspended in the solution containing citrate (1200 ppm), nitrate (50 ppm) anions and sodium cations (500 ppm) (solution 2). The administered dose consisted of 2.5 ml of composition 1 or 2 suspended in 1000 ml of keratinocyte culture fluid (MEM, 10% bovine serum, 100 U / ml penicillin and 100 ng / ml streptomycin). Pre-incubation of the culture in the presence of solution 1 or 2 in the culture did not inhibit HSV-2 infection, however, incubation of silver nanoparticle preparations 25-40 nm (solution 1) and 35-55 nm (solution 2) with HSV-2 almost completely inhibited virus entry into cells, thus infecting the cells. Fig. 1 shows the level of HSV-2 infection in a culture of murine keratinocytes 24 h after virus administration in the presence of 2.5 nl of solution 1 (25-40 nm) or solution 2 (35-55 nm) in 1000 ml of culture fluid.
P r z y k ł a d 2P r z k ł a d 2
Badanie działania dopochwowego podania nanocząstek srebra 25-40 nm na zakażenie HSV-2 na modelu mysim z wykorzystaniem roztworu według wynalazku.Study of the effect of vaginal administration of 25-40 nm silver nanoparticles on HSV-2 infection in a mouse model using the solution according to the invention.
W niniejszym eksperymencie zastosowano mysi model herpes genitalis opracowany przez Parr i wsp. (1994, Parr MB, Kepple L, McDermott MR, Drew MD, Bozzola JJ, Parr EL. (1994) Mouse model for studies of mucosal immunity to vaginal infection by herpes simplex virus type 2. Lab Invest. 70:369In this experiment, the mouse herpes genitalis model developed by Parr et al. (1994, Parr MB, Kepple L, McDermott MR, Drew MD, Bozzola JJ, Parr EL. (1994) Mouse model for studies of mucosal immunity to vaginal infection by herpes was used. simplex virus type 2. Lab Invest. 70: 369
PL 237 937 B1PL 237 937 B1
80). 20 samic myszy C57BL podzielono na dwie grupy. Pierwsza grupa (5 myszy) otrzymywała dopochwowo roztwór soli fizjologicznej w objętości 30 μl, druga grupa (5 myszy) otrzymywała dopochwowo preparat nanocząstek srebra zawieszony w soli fizjologicznej w objętości 30 μΙ, trzecia grupa (5 myszy) otrzymywała dopochwowo roztwór soli fizjologicznej z zawiesiną wirusa 104 PFU/mysz w objętości 30 μl, czwarta grupa (5 myszy) otrzymywała dopochwowo preparat nanocząstek srebra zawieszony w soli fizjologicznej wraz z zawiesiną wirusa 104 PFU/mysz w objętości całkowitej 30 μl. Źródłem nanocząstek srebra był roztwór według wynalazku. Nanocząstki w zakresie rozmiaru 25-40 nm zawieszone były w roztworze zawierającym aniony cytrynianowe (300 ppm), azotanowe (50 ppm) oraz kationy sodowe (100 ppm). Podawana dawka składała się z 0,05 ml zawiesiny nanocząsteczek rozcieńczanych w 1 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej, z czego dopochowowo podawano 0,030 ml/mysz (skład 1).80). 20 female C57BL mice were divided into two groups. The first group (5 mice) received saline solution vaginally in the volume of 30 μl, the second group (5 mice) received vaginal silver nanoparticle preparation suspended in physiological saline in the volume of 30 μΙ, the third group (5 mice) received physiological saline solution vaginally with the virus suspension. 104 PFU / mouse in a volume of 30 µl, the fourth group (5 mice) received a vaginal preparation of silver nanoparticles suspended in saline together with a virus suspension of 104 PFU / mouse in a total volume of 30 µl. The source of the silver nanoparticles was the solution according to the invention. Nanoparticles in the size range of 25-40 nm were suspended in a solution containing citrate (300 ppm), nitrate (50 ppm) and sodium cations (100 ppm) anions. The administered dose consisted of 0.05 ml of nanoparticle suspension diluted in 1 ml of sterile physiological saline, of which 0.030 ml / mouse was administered intravaginally (composition 1).
Procedury doświadczalne. Przez zakażeniem HSV-2, samice myszy przygotowywano poprzez podanie 2 mg octanu medroksyprogesteronu na mysz w celu zsynchronizowania fazy cyklu rujowego. Po pięciu dniach, myszom podawano dopochwowo w stanie uśmierzenia (ketamina z ksylazyną, 100 mg/kg m.c. i 10 mg/kg m.c., odpowiednio) 0,030 ml soli fizjologicznej (grupa 1), 0,030 ml preparatu wg wynalazku (grupa 2), 0,030 ml soli fizjologicznej z dodatkiem wirusa HSV-2 (grupa 3) oraz 0,030 ml preparatu wg wynalazku z dodatkiem wirusa HSV-2 (grupa 4). Po upływie 48h myszy uśmiercano, pobierano tkankę pochwy i utrwalano przez umieszczenie w 2% roztworze formaliny w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS) na 4 h. Po tym okresie, tkanki zamrażano w ciekłym azocie i przygotowywano preparaty histologiczne przy użyciu kriostatu. Cienkie skrawki tkanek (7 μm) poddawano barwieniu za pomocą przeciwciała anty-HSV1/2 skoniugowanego z FITC, rozcieńczonego w PBS z dodatkiem 0,01% Tween 20 (1:500). Skrawki tkanek analizowano w mikroskopie konfokalnym Olympus Fluoview FV1000, identyfikując liczbę miejsc zakażonych HSV-2, jako reakcję dodatnią obejmującą nabłonek pochwy. Na Fig. 2 przedstawiono poziom zakażenia dopochwowego u myszy C57BL6 zakażonych HSV-2 w obecności składu 1.Experimental procedures. Prior to HSV-2 infection, female mice were prepared by administering 2 mg of medroxyprogesterone acetate per mouse to synchronize the oestrus cycle phase. After five days, mice were administered vaginally in a sedated state (ketamine with xylazine, 100 mg / kg bw and 10 mg / kg bw, respectively) 0.030 ml of saline (group 1), 0.030 ml of the preparation according to the invention (group 2), 0.030 ml physiological saline with the addition of HSV-2 virus (group 3) and 0.030 ml of the preparation according to the invention with the addition of HSV-2 virus (group 4). After 48h, mice were sacrificed, vaginal tissue was harvested and fixed by placing in 2% formalin in phosphate buffered saline (PBS) for 4h. After this period, tissues were frozen in liquid nitrogen and histological preparations were made using a cryostat. Tissue thin sections (7 µm) were stained with FITC-conjugated anti-HSV1 / 2 antibody diluted in PBS with 0.01% Tween 20 (1: 500). Tissue sections were analyzed on an Olympus Fluoview FV1000 confocal microscope, identifying the number of sites infected with HSV-2 as a positive reaction involving vaginal epithelium. Fig. 2 shows the level of vaginal infection in HSV-2 infected C57BL6 mice in the presence of composition 1.
Zaobserwowano istotny statystycznie spadek poziomu zakażenia HSV-2 tkanki pochwy w obecności preparatu wg wynalazku (skład 1), zawierającego 5 ppm nanocząsteczek srebra o wielkości 24-40 nm oraz aniony cytrynianowe (15 ppm), azotanowe (2,5 ppm) i kationy sodowe (5 ppm) w roztworze soli fizjologicznej.A statistically significant decrease in the level of HSV-2 infection of the vaginal tissue was observed in the presence of the preparation according to the invention (composition 1), containing 5 ppm of silver nanoparticles with a size of 24-40 nm, as well as citrate (15 ppm), nitrate (2.5 ppm) and sodium cations anions (5 ppm) in saline solution.
P r z y k ł a d 3P r z k ł a d 3
Badanie działania dopochwowego podania nanocząstek srebra 35-55 nm na zakażenie HSV-2 na modelu mysim z wykorzystaniem roztworu według wynalazku.Study of the effect of vaginal administration of silver nanoparticles 35-55 nm on HSV-2 infection in a mouse model using the solution according to the invention.
W niniejszym eksperymencie zastosowano protokół opisany w Przykładzie 2, z następującymi zmianami. Nanocząstki w zakresie rozmiaru 35-55 nm zawieszone były w roztworze zawierającym aniony cytrynianowe (1200 ppm), azotanowe (50 ppm) oraz kationy sodowe (500 ppm). Podawana dawka składała się z 0,05 ml zawiesiny nanocząsteczek rozcieńczanych w 1 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej, z czego pochowowo podawano 0,030 ml/mysz (skład 2). Fig. 2 Przedstawia poziom zakażenia dopochwowego u myszy C57BL6 zakażonych HSV-2 w obecności składu 2. Zaobserwowano istotny statystycznie spadek poziomu zakażenia HSV-2 tkanki pochwy w obecności preparatu wg wynalazku (skład 2), zawierającego 5 ppm nanocząsteczek srebra o wielkości 35-55 nm oraz aniony cytrynianowe (60 ppm), azotanowe (2,5 ppm) i kationy sodowe (25 ppm) w roztworze soli fizjologicznej. Spadek poziomu zakażenia był jednak mniejszy niż w przypadku składu nr 1. Na Fig. 3 przedstawiono poziom zakażenia dopochwowego u myszy C57BL6 zakażonych HSV-2 w obecności składu 2.The protocol described in Example 2 was used in this experiment with the following changes. Nanoparticles in the size range of 35-55 nm were suspended in a solution containing citrate (1200 ppm), nitrate (50 ppm) and sodium cations (500 ppm) anions. The administered dose consisted of 0.05 ml of a suspension of nanoparticles diluted in 1 ml of sterile physiological saline, of which 0.030 ml / mouse (composition 2) was administered burial. Fig. 2 shows the level of vaginal infection in C57BL6 mice infected with HSV-2 in the presence of composition 2. A statistically significant decrease in the level of HSV-2 infection of the vaginal tissue was observed in the presence of the preparation according to the invention (composition 2), containing 5 ppm silver nanoparticles with a size of 35-55 nm and citrate (60 ppm), nitrate (2.5 ppm) and sodium cations (25 ppm) anions in physiological saline. However, the decrease in the level of infection was less than for composition No. 1. Fig. 3 shows the level of vaginal infection in HSV-2 infected C57BL6 mice in the presence of composition 2.
P r z y k ł a d 4P r x l a d 4
Badania nad wpływem nanocząstek srebra na poziom zakażenia komórek keratynocytów przez HSV-2 z wykorzystaniem roztworu według wynalazku.Studies on the influence of silver nanoparticles on the level of infection of keratinocyte cells by HSV-2 using the solution according to the invention.
W niniejszym eksperymencie zastosowano protokół opisany w Przykładzie 1, z następując ymi zmianami. Nanocząstki srebra 25-40 nm w stężeniu 2,5 ppm inkubowano w podłożu hodowlanym z przykładu 1 z tą samą dawką wirusa (1 wirus/1 komórkę) przez 1 h, a następnie podawano do hodowli keratynocytów. Źródłem nanocząstek srebra był roztwór według wynalazku. Po upływie 24 h mierzono stopień zakażenia hodowli, określając procent komórek keratynocytów zakażonych HSV-2. Procent keratynocytów zakażonych przez HSV- 2 określano znakując komórki keratynocytów przeciwciałem rozpoznającym antygeny powierzchniowe wirusa HSV-2 wg procedury znanej fachowcom. Następnie, wyznakowaną zawiesinę pojedynczych komórek analizowano metodą cytofluorometrii przepływowej określając odsetek komórek pozytywnych (% komórek zakażonych HSV-2).The protocol described in Example 1 was used in this experiment with the following changes. Silver nanoparticles 25-40 nm at a concentration of 2.5 ppm were incubated in the culture medium of Example 1 with the same dose of virus (1 virus / 1 cell) for 1 h and then fed to keratinocyte cultures. The source of the silver nanoparticles was the solution according to the invention. After 24 h, the degree of infection of the culture was measured by determining the percentage of keratinocyte cells infected with HSV-2. The percentage of HSV-2 infected keratinocytes was determined by labeling keratinocyte cells with an antibody recognizing HSV-2 virus surface antigens according to a procedure known to those skilled in the art. The labeled single cell suspension was then analyzed by flow cytofluorometry to determine the percentage of positive cells (% HSV-2 infected cells).
Nanocząstki w zakresie rozmiaru 25-40 nm zawieszone były w roztworze zawierającym aniony cytrynianowe (300 ppm), azotanowe (50 ppm), kwas taninowy (300 ppm) oraz kationy sodoweNanoparticles in the size range of 25-40 nm were suspended in a solution containing citrate (300 ppm), nitrate (50 ppm), tannic acid (300 ppm) and sodium cations.
PL 237 937 B1 (100 ppm) (roztwór 3). Podawana dawka składała się z 2,5 ml roztworu 3 zawieszanego w 1000 ml płynu hodowlanego dla keratynocytów (MEM, 10% surowicy bydlęcej, 100 U/ml penicyliny oraz 100 pg/ml streptomycyny) (skład 3). Inkubacja preparatów nanocząstek srebra 25-40 nm (skład 3) z HSV-2 znacząco hamowała wnikanie wirusa do komórek, a tym samym zakażenie komórek. Na Fig. 4 przedstawiono poziom zakażenia HSV-2 w hodowli mysich keratynocytów 24h od podania wirusa w obecności 2,5 nl roztworu 3 w 1000 ml płynu hodowlanego.PL 237 937 B1 (100 ppm) (solution 3). The administered dose consisted of 2.5 ml of solution 3 suspended in 1000 ml of keratinocyte culture fluid (MEM, 10% bovine serum, 100 U / ml penicillin and 100 pg / ml streptomycin) (composition 3). Incubation of 25-40 nm silver nanoparticle preparations (composition 3) with HSV-2 significantly inhibited virus infiltration into cells, and thus cell infection. Fig. 4 shows the level of HSV-2 infection in a murine keratinocyte culture 24 hours after virus administration in the presence of 2.5 nl of solution 3 in 1000 ml of culture fluid.
Claims (11)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396319A PL237937B1 (en) | 2011-09-13 | 2011-09-13 | Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL396319A PL237937B1 (en) | 2011-09-13 | 2011-09-13 | Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL396319A1 PL396319A1 (en) | 2013-03-18 |
| PL237937B1 true PL237937B1 (en) | 2021-06-14 |
Family
ID=47846451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL396319A PL237937B1 (en) | 2011-09-13 | 2011-09-13 | Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL237937B1 (en) |
-
2011
- 2011-09-13 PL PL396319A patent/PL237937B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL396319A1 (en) | 2013-03-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2888453B2 (en) | Pharmaceutical composition for treating or preventing Pneumocystis carinii pneumonia | |
| JP2000510836A (en) | Methods and formulations for preventing and / or treating any infection (especially STDs including HIV), inflammation, tumors, or any other mucosal and / or skin disorders | |
| PL215128B1 (en) | Microbicidal pyrimidine or triazine for preventing sexual hiv transmission | |
| MXPA06006650A (en) | Anti-viral pharmaceutical compositions. | |
| ES2253395T3 (en) | USE OF CELLULOSE SULFATE AND OTHER SULFATED POLYSACARIDS TO PREVENT AND TREAT INFECTIONS BY PAPILOMA VIRUSES. | |
| KR20040038908A (en) | Virucidal Compositions | |
| US6407125B1 (en) | Pharmacological agent and method of treatment | |
| JP2002515410A (en) | Broad spectrum disinfecting and spermicidal compositions, devices and methods | |
| Lampis et al. | Enhancement of anti-herpetic activity of glycyrrhizic acid by physiological proteins | |
| PT88266B (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF PARENTERAL PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING DSRNA | |
| CN102743739B (en) | Preparation method for blattodea polypeptide substance, and medical use of blattodea polypeptide substance in anti-herpesvirus | |
| JP5465182B2 (en) | Viral infection drug containing polyalkyleneimine | |
| CA2999514A1 (en) | Viral conjunctivitis treatment using ranpirnase and/or amphinase | |
| US6500808B2 (en) | Anti-viral composition | |
| JP2004505998A (en) | Method of treating a patient infected with herpes virus or Neisseriagonorrhoeae | |
| CA2600935A1 (en) | Use of copper silicate for the control of herpes infections | |
| AU2018207033B2 (en) | Compounds and compositions | |
| PL237937B1 (en) | Pharmaceutical formulation for the treatment of herpes simplex virus infection and application of the formulation | |
| KR101717280B1 (en) | Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs | |
| MD4411C1 (en) | Pharmaceutical including benzyldimethyl(3-[myristoylamino]propyl)-ammonium chloride and its use for the treatment and prevention of infectious and pyoinflammatory diseases of different etiology and localization | |
| US20230190663A1 (en) | Prussian blue nanoparticles functionalization with latency reversing agents and broadly neutralizing antibodies, and applications thereof | |
| ES2774663T3 (en) | Agent to induce endogenous interferon | |
| WO2009091291A1 (en) | N-(6-methyl-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahydro-5h-pyrimidinesulfone)-isonicotinoyl hydrazide silver salt | |
| JP5587215B2 (en) | Combination therapy | |
| CN102895245A (en) | Compound trimethoprim and doxycycline hydrochloride nanoemulsion preparation and preparation method thereof |