PL245238B1 - Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) - Google Patents
Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) Download PDFInfo
- Publication number
- PL245238B1 PL245238B1 PL441396A PL44139622A PL245238B1 PL 245238 B1 PL245238 B1 PL 245238B1 PL 441396 A PL441396 A PL 441396A PL 44139622 A PL44139622 A PL 44139622A PL 245238 B1 PL245238 B1 PL 245238B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- centaurea
- castriferrei
- waisb
- plant
- extracts
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 48
- 241000132570 Centaurea Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 240000004385 Centaurea cyanus Species 0.000 title claims abstract description 9
- 201000002037 lung adenoma Diseases 0.000 title claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 26
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000899 pressurised-fluid extraction Methods 0.000 claims description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 235000005940 Centaurea cyanus Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 abstract description 23
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 abstract description 23
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 abstract description 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- WLZPAFGVOWCVMG-FPYGCLRLSA-N N6-cis-p-Coumaroylserotonin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C(=O)NCCC1=CNC2=CC=C(O)C=C12 WLZPAFGVOWCVMG-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000755778 Centaurea babylonica Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000132557 Centaurea diluta Species 0.000 description 2
- 241000752190 Centaurea solstitialis Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000208838 Asteraceae Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241001652678 Centaurea kilaea Species 0.000 description 1
- 241000060189 Centaurea scoparia Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 102000019259 Succinate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010012901 Succinate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000767 anti-ulcer Effects 0.000 description 1
- 230000000026 anti-ulcerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000017807 phytochemicals Nutrition 0.000 description 1
- 229930000223 plant secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 229930009674 sesquiterpene lactone Natural products 0.000 description 1
- 150000002107 sesquiterpene lactone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Przedmiotem zgłoszenia jest ekstrakt z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) do zastosowania w leczeniu raka płuc. Przedmiotem zgłoszenia jest także sposób otrzymywania ekstraktu z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) do zastosowania w leczeniu raka płuc, gdzie rozdrobniony materiał roślinny przesiewa się przez zespół sit i prowadzi się proces ekstrakcji, stosując jako rozpuszczalniki wodę destylowaną oraz mieszaninę metanol-woda korzystnie w proporcji 7:3 v/v, przy czym proces ekstrakcji powtarza się co najmniej dwukrotnie.
Description
Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbas & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuca oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbas & Waisb).
Centaurea castriferrei Borbas & Waisb. (chaber kastrifereryjski) to jedna z najmniej poznanych roślin rodzaju Centaurea L. Pochodzi z regionu Vas (Węgry) i jest wysoce endemicznym gatunkiem. Dotychczas nie zbadano ani składu jakościowego/ilościowego, ani nie opisano żadnych właściwości biologicznych ekstraktów z tej rośliny. W literaturze brak jest informacji dotyczącej stosowania tego surowca lub przetworów z tego surowca w leczeniu przeciwnowotworowym.
Centaurea L. (Asteraceae) to duży rodzaj, obejmujący kilkaset przedstawicieli, pochodzący ze strefy basenu Morza Śródziemnego (Turcja, Grecja). Rośliny tego rodzaju rozpowszechnione są niemal na całym świecie i wykorzystywane w medycynie ludowej do leczenia bardzo wielu schorzeń jak: dysfunkcje układu pokarmowego, moczowego, sercowo-naczyniowego (np. odwracanie procesów miażdżycowych, leczenie hemoroidów), układu oddechowego (leczenie przeziębień, astmy). Badania fitochemiczne oraz biologiczne, prowadzone nad gatunkami z rodzaju Centaurea L. potwierdzają takie działanie terapeutyczne, a także wskazują na możliwość działania przeciwwrzodowego, cytostatycznego, a także co ważne, możliwość działania przeciwnowotworowego [Gurbuz et al. 2007, Alper et al. 2019, Ahmed et al. 2014].
Właściwości przeciwnowotworowe rośliny z rodzaju Centaurea L. w stosunku do pojedynczych linii komórkowych raka płuca zostały wykazane w odniesieniu do dwóch gatunków tej rośliny Centaurea kilaea oraz Centaurea babylonica (L.) L. [Sen i wsp. 2015, Sen i wsp. 2017, Ceyhan Guvensen i wsp. 2019]. W odniesieniu do tej samej linii komórkowej raka płuca Ceyhan Guvensen i wsp. wykazali aktywność przeciwnowotworową ekstraktów z gatunku Centaurea babylonica (L.) L. różniących się między sobą rodzajem ekstrahentu (metanol, etanol, chloroform, aceton, heksan, octan etylu, woda) [Ceyhan Guvensen i wsp. 2019]. Cytotoksyczne działanie na linię komórkową raka płuca A549 wykazane również zostało w przypadku ekstraktu chloroformowego z gatunku Centaurea diluta Ait. subsp. algeriensis (Coss. & Dur.) Maire [Zater i wsp. 2016]. Mitsis i wsp. wykazali przeciwnowotworowe działanie N-(p-coumaroyl) serotonin wyodrębionego z ekstraktu Centaurea vlachorum na linię raka płuca H1299 [Mitsis i wsp. 2018]. Jednak brak jest doniesień literaturowych na temat działania przeciwnowotworowego gatunku Centaurea castriferrei Borbas & Waisb. w kierunku raka płuca.
Wynalazek rozwiązuje problem otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku Centaurea castriferrei Borbas & Waisb o aktywności przeciwnowotworowej wobec komórek raka płuc oraz ich zastosowanie w leczeniu raka płuc.
Nieoczekiwanie w wyniku badań okazało się, że ekstrakty wodne lub metanolowo-wodne (7 : 3 v/v) otrzymane na drodze ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami (UAE, ang. Ultrasound Assisted Extraction) lub przyspieszonej ekstrakcji rozpuszczalnikiem (ASE, ang. Accelerated Solvent Extraction) z nadziemnych części rośliny Centaurea castriferrei Borbas & Waisb wykazują wysoką aktywność przeciwnowotworową w stosunku do komórek raka płuca (Fig. 1), przy jednocześnie nieznacznej toksyczności w stosunku do komórek prawidłowych (Fig. 1).
Istotą wynalazku jest ekstrakt wodny lub metanolowo-wodny z nadziemnych części rośliny z gatunku Centaurea castriferrei Borbas & Waisb o aktywności przeciwnowotworowej w leczeniu raka płuc.
Istotą wynalazku jest także sposób otrzymywania ekstraktu z nadziemnych części roślin z gatunku Centaurea castriferrei Borbas & Waisb, który charakteryzuje się tym, że rozdrobniony materiał roślinny przesiewa się przez zespół sit i prowadzi się proces ekstrakcji, stosując jako rozpuszczalniki: wodę destylowaną lub mieszaninę metanol-woda korzystnie w proporcji 7 : 3 v/v, przy czym składniki stosuje się w proporcji odpowiednio substancja roślinna : rozpuszczalnik 1 : 6-10 a proces ekstrakcji powtarza się co najmniej dwukrotnie.
Korzystnie, gdy ekstrakcję prowadzi się przy udziale fal ultradźwiękowych o częstotliwości 50 Hz w czasie 20-40 minut, korzystnie 30 minut, w temperaturze 60°C-70°C, korzystnie 65°C powtarzając proces trzykrotnie, a otrzymane ekstrakty łączy się i przesącza oraz odparowuje do otrzymania postaci suchego proszku.
Korzystnie, gdy ekstrakcję prowadzi się z wykorzystaniem techniki ASE, stosując ciśnienie 100 bar, temperaturę ekstrakcji od 60 do 75°C korzystnie 65°C, czas stacjonarny (State time) - 5 minut, objętość przepływowa (Flush volume) - 60%, stosując trzy cykle, a otrzymane ekstrakty łączy się i przesącza oraz odparowuje do otrzymania postaci suchego proszku.
Istotą wynalazku jest także zastosowanie ekstraktów wodnych lub metanolowo-wodnych (7 : 3 v/v) otrzymanych na drodze ekstrakcji ASE i UAE z nadziemnych części rośliny Centaurea castriferrei Borbas & Waisb w leczeniu gruczolaka płuc.
Sposób według wynalazku dostarcza ekstraktu z nadziemnych części roślin z gatunku Centaurea castriferrei Borbas & Waisb, który cechuje się wysoką aktywnością przeciwnowotworową wobec raka płuc.
Ekstrakt otrzymany sposobem według wynalazku może mieć zastosowanie do wytwarzania preparatów przeciwnowotworowych.
Wynalazek przedstawiono w poniższych przykładach wykonania.
Przykład 1
W badaniach wykorzystano kwitnące ziele Centaurea castriferrei Borbas & Waisb. Zebrany materiał roślinny wysuszono w suszarkach z wymuszonym obiegiem powietrza w temperaturze nie przekraczającej 30°C. Po wysuszeniu części nadziemne pozbawiono zdrewniałych części łodyg, pozostawiając do badań szczytowe łodygi, liście oraz kwiaty. Następnie materiał został rozdrobniony, zmielony, a następnie przesiany przez sita (wielkość oczek 1 mm = 1000 μm).
Proces ekstrakcji materiału roślinnego prowadzono niezależnie na lub oraz przyspieszoną ekstrakcję rozpuszczalnikiem (ASE). W obu przypadkach zastosowano 2 rodzaje rozpuszczalników: wodę destylowaną oraz mieszaninę metanol-woda (7 : 3 v/v).
W celu przeprowadzenia ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami (UAE), odważono dokładnie po 20 g sproszkowanego ziela Centaurea castriferrei Borbas & Waisb, umieszczono w kolbie okrągłodennej o poj. 250 ml zalewając porcją (120 ml) ekstrahenta odpowiednio dwa rodzaje: mieszanina metanol-woda (7 : 3 v/v) oraz woda destylowana. Kolby podłączono do chłodnicy zwrotnej i umieszczano w łaźni wodnej pilnując, by kolba zanurzona była w wodzie do poziomu, jaki stanowi materiał roślinny oraz ekstrahent. Ekstrakcje prowadzono przez 30 minut. W temperaturze 65°C, z siłą ultradźwięków 50 Hz, powtarzając proces 3-krotnie. Po połączeniu ekstraktów przesączono je przez sączek bibułowy. Otrzymany ekstrakt metanolowo-wodny (7 : 3 v/v) oddestylowano do sucha i ponownie rozpuszczono w tym ekstrahencie przenosząc do kolby miarowej o pojemności 100 ml. Ekstrakt wodny zagęszczono i przeniesiono do kolby miarowej o pojemności 100 ml. 25 ml ekstraktów, odpowiadające zawartości 5 g materiału wyjściowego odparowano do sucha, roztarto w moździerzu na jednolity proszek, zamknięto w szczelnym opakowaniu i przeznaczono do dalszych badań.
Druga z technik ekstrakcyjnych, wykorzystana w badaniach to przyspieszona ekstrakcja rozpuszczalnikiem (ASE), wspomagana ciśnieniem 100 bar. Odważone substancje roślinne (1 g materiału roślinnego) przenoszono do celek ekstrakcyjnych Dionex (Sunnyvale, CA, USA) o objętości 10 ml, aparatu ASE 100 i prowadzono proces ekstrakcji w następujących warunkach: temperatura ekstrakcji - 65°C, czas stacjonarny (State time) - 5 minut, objętość przepływowa (Flush volume) - 60% (przepływ 6 ml roztworu), czas oczyszczenia (Purge time) - 60 sekund, ilość cykli - 3. Proces ekstrakcji materiału z każdym rozpuszczalnikiem powtórzono 5-krotnie, a po zagęszczeniu z wykorzystaniem wyparki próżniowej, ekstrakty przeniesiono do kolby o pojemności 25 ml, uzyskując takie same wyjściowe stężenia, jak w przypadku pierwszego rodzaju ekstrakcji, przeznaczając je, po odparowaniu rozpuszczalnika, dokładnym roztarciu w moździerzu i przeniesieniu do szczelnego opakowania do dalszych badań.
Przykład 2
W badaniach in vitro oceniono aktywność przeciwnowotworową ekstraktów Centaurea castriferrei Borbas & Waisb na komórkach ludzkiego raka płuca (linia NCI-H1563). Hodowla komórkowa prowadzona była w butelkach hodowlanych o pojemności 75 cm3 z wykorzystaniem medium hodowlanego RPMI-1640 wzbogaconego 10% inaktywowaną termicznie płodową surowicą bydlęcą (FBS, ang. Fetal Bovine Serum) i antybiotykami (penicyliną, streptomycyną). Hodowla komórkowa prowadzona była w inkubatorze CO2 w temperaturze 37°C oraz atmosferze zawierającej 5% CO2. Po uzyskaniu właściwej konfluencji komórki linii NCI-H1563 wysiewano na płytki 96-dołkowe w stężeniu 1 x 105 komórek/ml. Ekstrakty do analizy cytotoksyczności (Tab. 1) przygotowano poprzez rozpuszczenie 50 mg suchego ekstraktu w 1 ml DMSO. Badane ekstrakty dodawano do hodowli komórkowej po osiągnięciu 70%-80% konfluencji w szerokim zakresie stężeń (15,625 μg/ml; 31,25 μg/ml; 62,5 μg/ml; 125 μg/ml). Maksymalne stężenie zastosowanych ekstraktów wynosiło 125 μg/ml.
PL 245238 Β1
Tabela 1
Skróty ekstraktów stosowanych w badaniach.
| - Badany gatunek | Ekstrakcja za pomocą rozpuszczalnika wspomagana ultradźwiękami (UAE) | Przyspieszona ekstrakcja rozpuszczalnikiem (ASE) | ||
| metanol - woda ; 7:3 v/v | woda | metanol - woda 7:3 p/v | ‘ woda | |
| C. castriferrei Borbas & Waisb. | CASMUA | CASWUA | CASMAS | CASWAS |
Po 48 godzinach inkubacji komórek linii raka płuca NCI-H1563 z badanymi ekstraktami oceniono ich aktywność przeciwnowotworową poprzez analizę ich morfologii w mikroskopie kontrastowo-fazowym z odwróconą optyką Nikon Eclipse Ti. Uwzględniono zmiany morfologiczne komórek tj. obecność obklejonych i martwych komórek, obkurczenie komórek, zahamowanie wzrostu kolonii i proliferacji. Obserwację porównywano z kontrolą, którą stanowiły komórki raka płuca hodowane w medium bez dodatku ekstraktów (Fig. 3). Następnie na podstawie testu MTT określano żywotność komórek poprzez pomiar aktywności metabolicznej badanych komórek raka płuca linii NCI-H1563.
Test MTT jest oparty na zdolności enzymu - mitochondrialnej dehydrogenazy bursztynianowej do przekształcania pomarańczowej, rozpuszczalnej w wodzie soli tetrazolowej [bromek 3-(4,5-dimetylotiazol-2-yl)-2,5-difenylotetrazoliowy] do nierozpuszczalnego formazanu będącego ciemnoniebieskim produktem powyższej reakcji. Po rozpuszczeniu kryształów formazanu w DMSO, powstaje barwny roztwór, którego intensywność zabarwienia mierzona jest spektrofotometrycznie w zakresie długości fal 490-570 nm. Ilość barwnego zredukowanego MTT jest proporcjonalna do liczby aktywnych metabolicznie (żywych) komórek w populacji. Test MTT jest obecnie najczęściej stosowany do oceny działania cytotoksycznego i zalecany jako referencyjny przez międzynarodowe organizacje normotwórcze. Z otrzymanych w teście odczytów absorbancji wyliczono % żywotność komórek w obecności badanego związku, przyjmując absorbancję roztworu komórek kontrolnych za 100%.
Wyniki uzyskane w teście MTT analizowano statystycznie w aplikacji STATISTICA v. 13.0 (StaftSoft, Kraków) przy użyciu średnich i standardowych wartości odchylenia. Statystyczną istotność różnic między grupą kontrolną a grupami badanymi oceniono za pomocą testu t-Studenta. Różnice dla p<0,05 przyjęto za istotne statystycznie. Analizę wykonano dla 3 powtórzeń biologicznych i 3 technicznych (n=9) (Fig. 2).
Wyniki:
Po 48 godzinnej ekspozycji komórek raka płuca linii NCI-H1563 na działanie ekstraktów wodnych oraz metanolowo-wodnych (7:3 v/v) otrzymanych na drodze ekstrakcji ASE i UAE z nadziemnych części rośliny Centaurea castriferrei Borbas & Waisb nieoczekiwanie zaobserwowano istotny statystycznie spadek żywotności komórek NCI-H1563 w porównaniu do komórek grupy kontrolnej w odniesieniu do każdego zastosowanego ekstraktu (Fig. 2). Nasilenie zmian było wprost proporcjonalne do użytego stężenia ekstraktu. Wartości IC50 dla wszystkich badanych ekstraktów dla linii NCI-H1563 podano w tabeli 2.
Tabela 2
Wartości IC50 dla badanych ekstraktów dla linii raka płuca NHI-H1563
| Linia komórkowa | ASE . | ' UAE | |
| CASMAS | CASWAS | CASMUA | CASWUA |
| ICC (pg/ml) | • ' ICMug/ml) | ||
| NHI-H1563 | 102,0549 | 109,9817 | 117,7894 | 121,9475 |
Wraz ze wzrostem stężenia badanej substancji nasilały się także zmiany w morfologii komórek raka płuca (Fig. 3). Przy stężeniu odpowiadającym wartości IC50 komórki zaczynały się kurczyć i stopniowo zmieniać swój prawidłowy wrzecionowaty kształt w bardziej zwinięty i kulisty. W podłożu hodowlanym obserwowano odklejone, martwe komórki.
PL 245238 Β1
Kolejnym etapem badań in vitro była ocena aktywności ekstraktów na komórki prawidłowe - ludzkie fibroblasty linii BJ. Badanie przeprowadzono w sposób analogiczny jak w przypadku komórek raka płuca NCI-H1563. Po osiągnięciu właściwego stanu konfluencji komórki wysiewano na płytki 96-dołkowe w ilości 1 χ 105 komórek/ml i hodowano do uzyskania pojedynczej, adherentnej warstwy komórek w każdym dołku. Następnie do poszczególnych dołków z komórkami dodawano pożywkę hodowlaną z wybranymi na podstawie wcześniejszych badań na raku płuca stężeniami ekstraktów (15,625 pg/ml; 31,25 pg/ml; 62,5 pg/ml; 125 pg/ml).
Po 48 godzinach inkubacji oceniono wpływ badanych ekstraktów na komórki fibroblastów poprzez analizę morfologii komórek w mikroskopie kontrastowo-fazowym z odwróconą optyką Nikon Eclipse Ti oraz wyniki testu MTT. Wyniki porównywano z kontrolą, którą stanowiły komórki fibroblastów hodowane w identycznych warunkach, ale bez dodatku ekstraktów (Fig. 4).
Uzyskane za pomocą testu MTT wyniki wskazują na brak znaczącego działania toksycznego ekstraktów w stosunku do prawidłowych komórek ludzkich fibroblastów.
Ekstrakty w stężeniach 15,625, 31,25, 62,5, 125 pg/ml nie powodowały widocznych zmian morfologii komórek fibroblastów w porównaniu z kontrolą.
Tabela 3
Ocena morfologii komórek raka płuc wykonana na podstawie zdjęć z mikroskopu kontrastowo-fazowego po inkubacji komórek z badanymi ekstraktami w stężeniu równym ICso.
+++ > 50%, ++ >25%, + 10%
| CASMAS | CASWAS | C ASM U A | CASWUA | ||
| TEST MTT | ICso (pg/ml) | 102,0549 | 109,9817 | 117,7894 | 121,9475 |
| MORFOLOGIA PRZY STĘŻENIU IC50 | Martwe komórki | ++ | ++ | +++ | +++ |
| Zmieniony kształt komórek | +++ | +++ | +++ | +++ | |
| Zahamowany wzrost | +++ | +++ | +++ | +++ |
Literatura:
Gurbiiz I, Yesilada E. Evaluation of the anti-ulcerogenic effect of sesquiterpene lactones from Centaurea solstitialis L. ssp. solstitialis by using various in vivo and biochemical techniques. J Ethnopharmacol. 2007 Jun 13; 112(2): 284-91. doi: 10.1016/j.jep.2007.03.009. Epub2007 Mar 12. PMID: 17418988.
Alper M, Giineę H. The Anticancer and Anti-inflammatory Effects of Centaurea solstitialis Extract on Humań Cancer Celi Lines. Turk J Pharm Sci. 2019 Sep; 16(3): 273-281. doi: 10.4274/tjps.galenos.2018.27146. Epub 2019 Jul 10. PMID: 32454725; PMCID: PMC7227956.
Ahmed SA, Kamei EM. Cytotoxic activities of flavonoids from Centaurea scoparia. ScientificWorldJournal. 2014; 2014:274207. doi: 10.1155/2014/274207. Epub 2014 Jun 11. PMID: 25114960; PMCID: PMC4075006.
Ceyhan Giivensen N, Keskin D, Giineę H, Kęsik Oktay M, Yildinm H. Antimicrobial property and antiproliferative activity of Centaurea babylonica (L.) L. on human carcinomas and cervical cancer celi lines. Ann Agric Environ Med. 2019 Jun 17; 26(2): 290-297. doi: 10.26444/aaem/108563. Epub 2019 Apr18. PMID: 31232061.
Mitsis M, Markopoulos G, Alexiou GA, Vartholomatos E, Lazari D, Hodaj E, Nastos D, Lianos G, Zagorianakou P, Galani V, Kyritsis AP. Antiproliferative and cytotoxic action of N-(p-coumaroyl) serotonin in lung cancer cells. J BUON. 2018 Nov-Dec; 23(6): 1693-1698. PMID: 30610796.
Zater H, Huet J, Fontaine V, Benayache S, Stevigny C, Duez P, Benayache F. Chemical constituents, cytotoxic, antifungal and antimicrobial properties of Centaurea diluta Ait. subsp. algeriensis (Coss. & Dur.) Maire. Asian Pac J Trop Med. 2016 Jun; 9(6): 554-61. doi: 10.1016/j.apjtm.2016.04.016. Epub 2016 Apr23. PMID: 27262066.
Claims (4)
1. Ekstrakt z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbas & Waisb) otrzymany przy udziale wody destylowanej lub mieszaniny metanolowo-wodnej a do zastosowania w leczeniu gruczolaka płuc.
2. Sposób otrzymywania ekstraktu z nadziemnych części roślin z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbas & Waisb) znamienny tym, że rozdrobniony materiał roślinny przesiewa się przez sita i prowadzi się proces ekstrakcji przy użyciu jako rozpuszczalnika wody destylowanej lub mieszaniny metanol-woda korzystnie w proporcji 7 : 3 v/v, przy czym składniki stosuje się w proporcji odpowiednio substancja roślinna : rozpuszczalnik 1 : 6-10, ponadto proces ekstrakcji powtarza się co najmniej dwukrotnie.
3. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakcję prowadzi się przy udziale fal ultradźwiękowych o częstotliwości 50 Hz w czasie 20-40 minut, korzystnie 30 minut, w temperaturze 60°C-70°C, korzystnie 65°C powtarzając proces trzykrotnie, a otrzymane ekstrakty łączy się i przesącza oraz odparowuje do otrzymania postaci suchego proszku.
4. Sposób, według zastrz. 1, znamienny tym, że ekstrakcję prowadzi się z wykorzystaniem techniki (ASE, ang. Accelerated Solvent Extraction) - przyspieszona ekstrakcja rozpuszczalnikiem, stosując ciśnienie 100 bar, temperaturę ekstrakcji od 60 do 75°C, korzystnie 65°C, czas stacjonarny (State time) - 5 minut, objętość przepływowa (Flush volume) - 60%, stosując trzy cykle, a otrzymane ekstrakty łączy się i przesącza oraz odparowuje do otrzymania postaci suchego proszku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL441396A PL245238B1 (pl) | 2022-06-07 | 2022-06-07 | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL441396A PL245238B1 (pl) | 2022-06-07 | 2022-06-07 | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL441396A1 PL441396A1 (pl) | 2023-12-11 |
| PL245238B1 true PL245238B1 (pl) | 2024-06-03 |
Family
ID=89123580
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL441396A PL245238B1 (pl) | 2022-06-07 | 2022-06-07 | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL245238B1 (pl) |
-
2022
- 2022-06-07 PL PL441396A patent/PL245238B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL441396A1 (pl) | 2023-12-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Poojary et al. | Extraction, characterization and biological studies of phytochemicals from Mammea suriga | |
| Siriwatanametanon et al. | Traditionally used Thai medicinal plants: in vitro anti-inflammatory, anticancer and antioxidant activities | |
| Fazal et al. | Physicochemical, phytochemical evaluation and DPPH-scavenging antioxidant potential in medicinal plants used for herbal formulation in Pakistan | |
| Egharevba et al. | Preliminary phytochemical and proximate analysis of the leaves of Piliostigma thonningii (Schumach.) Milne-Redhead | |
| Noori et al. | Determination of secondary metabolites including curcumin in Rheum ribes L. and surveying of its antioxidant and anticancer activity | |
| Ogidi et al. | Determination of Phytoconstituents and Antimicrobial activities of aqueous and methanol extracts of neem (Azadirachta indica) leaves | |
| Singh et al. | In vitro antioxidant activity of Calotropis gigantea hydroalcohlic leaves extract | |
| Kashif et al. | In vitro comparative cytotoxic effect of Nimbolide: A limonoid from Azadirachta indica (Neem tree) on cancer cell lines and normal cell lines through MTT assay. | |
| Sudeep et al. | Evaluation of In Vitro Cytotoxic Effects of Three Medicinal Plants on Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC). | |
| Ningsih et al. | In vitro cytotoxicity of ethanolic extract of the leaf of Calotropis gigantea from Ie Jue Geothermal Area, Aceh-Indonesia, and its mouthwash formulation against dental pulp cells | |
| Boo et al. | Evaluation of physiological functionalities and anti-inflammatory activity on in vitro cultured adventitious root of Platycodon grandiflorum | |
| PL245238B1 (pl) | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu gruczolaka płuc oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) | |
| Mamadalieva et al. | Ethnobotanical uses and cytotoxic activities of native plants from the Lamiaceae family in Uzbekistan | |
| PL245239B1 (pl) | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) Centaurea castriferrei Borbás & Waisb w leczeniu raka prostaty oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) | |
| CN119925236A (zh) | 一种具有抗炎、抑菌、舒缓及皮肤屏障修护功效的啤酒花提取物及其制备工艺 | |
| PL247763B1 (pl) | Zastosowanie ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) w leczeniu glejaka oraz sposób otrzymywania ekstraktów z nadziemnych części rośliny z gatunku chaber kastrifereryjski (Centaurea castriferrei Borbás & Waisb) | |
| Engin et al. | Cytotoxicity of Usnea longissima Ach. extracts and its secondary metabolite, usnic acid on different cells | |
| Sadau et al. | In-vitro lipoxygenase inhibitory activity and total flavonoid of Strychnos spinosa leaf extracts and fractions | |
| Owolabi et al. | Growth Inhibitory and Cytotoxicity Effects of Aqueous Extract of Musanga cecropioides R. Br. Ex Tedlie (Urticaceae) Stem Bark | |
| Vasanth et al. | Screening of Phytochemical Analysis and In vitro Bioactive of Polyherbal Formulation | |
| Kamonlakorn et al. | Quantitative phytochemicals determination of the extracts from the flowers of alstonia scholaris and their anti-lipoxygenase activities | |
| Choudhari et al. | In Vitro Evaluation of Berberis aristata for Cytotoxic Activity | |
| Amarante et al. | Antioxidant, cytotoxic, antiproliferative and acetylcholinesterase inhibition properties of the extract from Amburana cearensis | |
| Sowmya et al. | Anti-Cancerous effect of PEF treated Aloe barbadensis miller extract on MCF–7 Breast cancer cell lines | |
| RU2257910C1 (ru) | Растительные экстракты, обладающие геропротекторной активностью и средство на их основе |