PL249588B1 - Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania - Google Patents

Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania

Info

Publication number
PL249588B1
PL249588B1 PL448475A PL44847524A PL249588B1 PL 249588 B1 PL249588 B1 PL 249588B1 PL 448475 A PL448475 A PL 448475A PL 44847524 A PL44847524 A PL 44847524A PL 249588 B1 PL249588 B1 PL 249588B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
ethyl
dihydro
methyl
formula
thiazol
Prior art date
Application number
PL448475A
Other languages
English (en)
Other versions
PL448475A1 (pl
Inventor
Krzysztof Zbigniew Łączkowski
Dominika Kołodziej-Sobczak
Original Assignee
Univ Mikolaja Kopernika W Toruniu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Mikolaja Kopernika W Toruniu filed Critical Univ Mikolaja Kopernika W Toruniu
Priority to PL448475A priority Critical patent/PL249588B1/pl
Publication of PL448475A1 publication Critical patent/PL448475A1/pl
Publication of PL249588B1 publication Critical patent/PL249588B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksy-benzoesanem metylu o wzorze 1. Przedmiotem zgłoszenia jest także pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksy-benzoesanem metylu o wzorze 1 do zastosowania jako składnik leków oraz do zastosowania jako inhibitor białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B. Przedmiotem zgłoszenia jest także sposób otrzymywania 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksy-benzoesanu metylu o wzorze 1, charakteryzujący się tym, że 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu poddaje się reakcji w atmosferze azotu lub argonu z 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2H-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanonem w stosunku 1:1 poddając mieszaniu w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika, a następnie po ochłodzeniu roztworu otrzymany produkt wydziela się w procesie sączenia z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera, a następnie produkt poddaje się oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku od 90:10 do 98:2, korzystnie 95:5.

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest pochodna tiazolu, tj. 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2 H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu, jej zastosowanie jako składnika leków oraz jej zastosowanie jako inhibitora białkowej fosf atazy tyrozynowej 1B (PTP1B), a także sposób jej otrzymywania.
Białkowa fosfataza tyrozynowa 1B (PTP1B, EC 3.1.3.48) jest niereceptorową fosfatazą tyrozynową klasy I, kodowaną przez gen PTPN1. Składa się ona za 435 aminokwasów i posiada masę 49,966 kDa. Nadmierna ekspresja białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B obserwowana jest w wielu jednostkach chorobowych. Są to między innymi choroby metaboliczne, takie jak cukrzyca typu II, w której zwiększona ekspresja PTP1B powoduje zmniejszoną wrażliwość receptorów insulinowych, a także otyłość, w której fosfataza białkowa tyrozynowa 1B wpływa na aktywność leptyny w podwzgórzu. Leptyna odpowiedzialna jest za stabilizację poziomu glukozy oraz odgrywa ważną rolę w kontrolowaniu prawidłowej masy. Ponadto amplifikacja genu PTPN1 uznawana jest jako marker ciężkiego przebiegu nowotworów piersi, żołądka, jelita grubego oraz prostaty. Nadmierna ekspresja PTP1B odgrywa również rolę w progresji innych typów nowotworów, takich jak nowotwór jajnika, trzustki, czy też w przypadku glejaka wielopostaciowego. Wpływa niekorzystnie na ryzyko wystąpienia przerzutów do płuc i mózgu w przypadku nowotworu piersi oraz przerzutów do wątroby, mogącego współtowarzyszyć nowotworowi jelita grubego. Najnowsze doniesienia opowiadają się także za znaczącą rolą białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B odgrywaną w schorzeniach neurodegeneracyjnych, takich jak Choroba Alzheimera, Choroba Parkinsona, stwardnienie zanikowe boczne, czy też stwardnienie rozsiane (Olloquequi J, Cano A, SanchezLópez E, Carrasco M, Verdaguer E, Fortuna A, Folch J, Bulló M, Auladell C, Camins A, Ettcheto M. Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) as a potential therapeutic target for neurological disorders. Biomed Pharmacother. 2022;155:113709. doi:10.1016/j.biopha.2022.113709). Ma to niebagatelne znaczenie z uwagi na fakt, że większość wymienionych chorób neurodegeneracyjnych z uwagi na swój niezwykle złożony przebieg, leczona jest jedynie objawowo.
Znalezienie skutecznego inhibitora białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B stanowi zatem wyjątkowo atrakcyjny cel terapeutyczny, dający nadzieję na skuteczną terapię farmakologiczną schorzeń, które w dalszym ciągu nie posiadają efektywnych schematów terapeutycznych.
W chwili obecnej nie istnieje żaden zarejestrowany inhibitor PTP1B, który byłby dopuszczony do terapii któregokolwiek z wymienionych schorzeń, jako że dotychczas proponowane do tego zastosowania cząsteczki nie przeszły badań klinicznych.
Jednakże możliwe jest porównanie skuteczności w aspekcie inhibicji białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B, jaka charakteryzuje przedmiotowy wynalazek, względem inhibitora referencyjnego o dobrej przepuszczalności przez błony biologiczne, jakim jest (nazwa IUPAC): 3-(3,5-Dibromo-4-hydroxy-benzoyl)-2-ethyl-benzofuran-6-sulfonicacid-(4-(thiazol-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide (numer CAS: 765317-72-4) o udowodnionej aktywności względem PTP1B, wynoszącej IC50 = 4-8 μM.
Do badań klinicznych dopuszczonych było jak dotąd niewiele potencjalnych inhibitorów. Do fazy II badań klinicznych zgłoszony został m.in. inhibitor PTP1B o nazwie Ertiprotafib i o formule C31H27BrO3S. Charakteryzujące go IC50 zawierające się w przedziale od 1,6 do 29 μΜ było zależne od warunków prowadzonej analizy (Erbe DV, Wang S, Zhang YL, et al. Ertiprotafib improves glycemic control and lowers lipids via multiple mechanisms. Mol Pharmacol. 2005;67(1): 69-77. doi:10.1124/mol.104.005553). Wartości te nie spełniały oczekiwań, a ponadto Ertiprotafib okazał się być niedostatecznie selektywny względem białkowej fosfatazy 1B. Podobnie zakończony na etapie II fazy badań klinicznych okazał się być TTP814 - charakteryzujący się selektywnością do PTP1B względem TCPTP, jednak zaprzestano kontynuacji badania w 2015 r. Spółka lonis Pharmaceuticals, Inc. posiadała w gamie swych produktów dwa leki: ISIS 113715 (ClinicalTrials.gov ID: NCT00330330) oraz ISISPTP1BRx (ClinicalTrials.gov ID: NCT01918865), które znalazły się także w II etapie badań klinicznych, jednakże badania te także nie były kontynuowane, a dostateczne dane dotyczące bezpieczeństwa stosowania leków nie zostały dostarczone.
Zastosowanie pochodnych tiazolu, jako selektywnych inhibitorów białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B zostało już przedstawione w pracach naukowych na przykładzie JTT-551, opracowanego przez Japan Tobacco Company, który w badaniach przedklinicznych wykazał się wysoką aktywnością i selektywnością względem PTP1B, jednakże zaprzestano kontynuowania badań z uwagi na wykazywane przez niego działania niepożądane (Qian S, Zhang M, He Y, Wang W, Liu S. Recent advances in the
PL 249588 Β1 development of protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors for Type 2 diabetes. Futurę Med Chem. 2016;8(11): 1239-1258. doi:10.4155/fmc-2016-0064).
Celem wynalazku jest opracowanie 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2/7-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu, który będzie mógł mieć zastosowanie jako składnik leków o aktywności inhibitorów białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B. Związek ten nie były opisany jak dotąd w literaturze ani pod względem jego budowy, ani jako inhibitor białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
Istotą wynalazku jest pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2/7-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1:
Wzór 1
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnej tiazolu będącej 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1 jako składnika leków.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zastosowanie pochodnej tiazolu będącej 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1 jako inhibitora białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
Kolejnym przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksy-benzoesanu metylu o wzorze 1 charakteryzujący się tym, że pochodną 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu (o wzorze sumarycznym C11H13N3O3S i o wzorze 2):
poddaje się reakcji w atmosferze azotu lub argonu z 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2/7-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanonem w stosunku 1:1 poddając mieszaniu znanymi metodami w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika, a następnie po ochłodzeniu roztworu otrzymany produkt wydziela się w procesie sączenia z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera. Produkt poddaje się następnie oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku od 90:10 do 98:2, korzystnie 95:5.
Korzystnie temperatura wrzenia rozpuszczalnika jest między 60°C a 90°C.
Korzystnie rozpuszczalnikiem jest etanol.
Korzystnym jest, gdy mieszanie prowadzi się w czasie od 10 h do 30 h, a najkorzystniej 20 h.
Związek według wynalazku wykazuje silne hamowania aktywności enzymatycznej białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B, a więc może znaleźć zastosowanie do wytwarzania nowych leków, w tym w szczególności leków neurodegeneracyjnych, nowotworowych i metabolicznych.
Przedmiot wynalazku widoczny jest na rysunku, na którym wzór 1 przedstawia pochodną tiazolu, tj. 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu. Wzór 2 przedstawia pochodną 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu (o wzorze sumarycznym C11H13N3O3S). Tabela 1 przedstawia aktywność inhibicyjną dla
PL 249588 Β1
5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 oraz inhibitora referencyjnego, rozcieńczonych w buforze testowym.
Przedmiot wynalazku ilustrują przykłady, które nie ograniczają jego zakresu.
Przykład I
Sposób otrzymywania 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu.
W kolbie kulistej o poj. 100 ml w atmosferze azotu umieszcza się 30 ml bezwodnego alkoholu etylowego oraz 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu o wzorze 2:
Wzór 2 w ilości 1,00 mmol i dodaje się 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2H-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanon w ilości 1,00 mmol. Mieszaninę reakcyjną miesza się przez 20 godzin w temperaturze wrzenia alkoholu etylowego, tj. 78,3°C. Wytrącony osad odsącza się z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera, a produkt oczyszcza poprzez chromatografię kolumnową z wykorzystaniem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 95:5. Chromatografię kolumnową prowadzi się w ten sposób, że produkt rozpuszcza się w niewielkiej ilości dichlorometanu, a następnie wprowadza się na adsorbent będący żelem krzemionkowym o średnicy złoża (230-400 mesh) umieszczony w cylindrycznej kolumnie. Przepływ eluentu jest wymuszony za pomocą pompy ciśnieniowej. Składniki przemieszczając się ku dołowi kolumny ulegają rozdziałowi na poszczególne frakcje, które analizuje się za pomocą chromatografii TLC. Rozpuszczalnik z czystej frakcji się odparowuje za pomocą wyparki obrotowej i uzyskuje się czysty produkt. Otrzymano 0,35 g związku (65,06% wydajności teoretycznej) o temperaturze topnienia przekraczającej 260°C z zauważalnym rozkładem. Właściwą budowę związku oraz jego czystość potwierdzono na podstawie analizy widm 1H i 13C NMR oraz HRMS.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6), 8(ppm): 7.96 (dd, J = 8.8 Hz, 1H), 7.46-7.41 (m, 2H), 7.21 (s, 1H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 11,88-9,40 (bs, 2H, NH, OH).
13C NMR (100 MHz, DMSO-d6), 8(ppm): 14,39; 31,97; 53,07; 71,00 (2C); 103,64; 111,30; 113,67; 118,19; 119,24; 121,18; 122,07; 127,78; 129,78; 133,12; 151,08; 151,45; 152,83; 160,38; 160,71; 169,26; 170,04.
HRMS (m/z) obliczono dla C22H22N3O5S: 440.1280 [M+H]+. Wartość zmierzona 440.1272.
W wyniku zastosowania powyższego sposobu otrzymano pochodną 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1:
Wzór 1
PL 249588 Β1
Przykład II
Otrzymano 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)-etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu sposobem takim jak w przykładzie I, przy czym reakcję przeprowadzono w atmosferze argonu, a jako rozpuszczalnika użyto metanolu. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 10 godzin w temperaturze wrzenia metanolu, tj. 64,7°C.
Otrzymaną pochodną 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1:
stosuje się jako składnik leków do leczenia chorób neurodegeneracyjnych.
Przykład III
Otrzymano 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksy-benzoesan metylu sposobem takim jak w przykładzie I, przy czym jako rozpuszczalnika użyto izopropanolu. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 godzin w temperaturze wrzenia izopropanolu, tj. 82,3°C.
Otrzymaną pochodną 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1:
zastosowano jako inhibitor białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
Przykład IV
W szklanej kolbie kulistej o poj. 100 ml w atmosferze azotu umieszczono 30 ml bezwodnego alkoholu etylowego oraz 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu w ilości 1,00 mmol który poddano reakcji z 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2H-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanonem w ilości 1,00 mmol. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 godzin w temperaturze wrzenia alkoholu etylowego, tj. 78,3°C. Wytrącony osad odsączono się z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera, a produkt oczyszczono poprzez chromatografię kolumnową z wykorzystaniem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 90:10.
W wyniku sposobu otrzymano pochodną 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1:
Wzór 1 którą stosuje się jako składnik leków do leczenia chorób nowotworowych i metabolicznych.
PL 249588 Β1
Przykład V
W szklanej kolbie kulistej w atmosferze argonu umieszczono 30 ml bezwodnego alkoholu etylowego oraz 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu w ilości 1,00 mmol który poddano reakcji z 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2H-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanonem w ilości 1,00 mmol. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 10 godzin w temperaturze wrzenia alkoholu etylowego, tj. 78,3°C. Wytrącony osad odsączono się z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera, a produkt oczyszczono poprzez chromatografię kolumnową z wykorzystaniem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku 98:2.
W wyniku sposobu otrzymano pochodną 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1:
Wzór 1 którą zastosowano jako inhibitor białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
Przykład VI
Oznaczenie zdolności inhibicji białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1.
Ocena potencjalnej aktywności biologicznej opiera się na zdolności fosfatazy (E12020, lnvitrogen™, Thermo Fisher Scientific Inc.) do rozkładu niefluorescencyjnego substratu 6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate (DiFMUP) (D6567, lnvitrogen™, Thermo Fisher Scientific Inc.) specyficznym do oceny aktywności fosfataz. Degradacja substratu przez fosfatazę powoduje uwolnienie fluoroforu, jakim jest 6,8-difluoro-4-methylumbelliferone (DiFMU). Jego stężenie jest wprost proporcjonalne względem aktywności enzymu. Produkt posiada maksimum fluorescencji wykazywane przy długości fali wzbudzenia wynoszącej 358 nm i długości fali emisji wynoszącej 455 nm, stąd analiza fluorescencji przekładającej się na aktywność enzymatyczną prowadzona była w powyższych warunkach za pomocą czytnika mikropłytek (Agilent BioTek Synergy H1 Microplate Reader). Jako inhibitor referencyjny wykorzystano tiazolową pochodną, jaką jest niekompetycyjny, allosteryczny inhibitor 3-(3,5-Dibromo-4-hydroxy-benzoyl)-2-ethyl-benzofuran-6-sulfonicacid-(4-(thiazol-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide (numer CAS: 765317-72-4) (539741, Sigma-Aldrich). Analiza prowadzona była w trzech niezależnych powtórzeniach dla 10 różnych stężeń (100 nM-500 μΜ) dla 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 i 10 różnych stężeń dla inhibitora referencyjnego (100 nM-50 μΜ).
Wyniki analizy dla inhibitora referencyjnego w trzech powtórzeniach znajdują się w Tabeli 1.
Po uzyskaniu wyników świadczących o znaczącej aktywności 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1, analiza została powtórzona tylko dla niego poprzez przeprowadzenie analizy w pięciu niezależnych powtórzeniach dla 10 różnych, niższych stężeń (1 nM-10 μΜ). Procedura przeprowadzania jednej i drugiej analizy była tożsama. Reakcje przeprowadzano w buforze testowym składającym się z 0,5M roztworu octanu sodu (pH 5,0). Początkowo różne stężenia badanego związku (1 nM-10 μΜ) inkubowano z roztworem fosfatazy (10 mU enzymu w łącznej objętości mieszaniny reakcyjnej wynoszącej 50 μΙ) w25°C. W celu rozpoczęcia reakcji dodano 50 μΜ roztworu substratu. Jako próbę kontrolną pozytywną wykorzystano mieszaninę enzymu z substratem bez dodatku inhibitora. Jako próbę kontrolną negatywną wykorzystano mieszaninę reakcyjną z dodatkiem substratu, bez dodatku enzymu i bez inhibitora. Objętość końcowa mieszaniny reakcyjnej wynosiła 100 μΙ. W mierzonej próbce znajdował się 1% dimetylosulfotlenku oraz 1% Ν,Ν-dimetyloformamidu. Wzrost fluorescencji monitorowano przy długości fali wzbudzenia 358 nm i emisji 455 nm na 96-dołkowej płytce przez 30 min. Doświadczenie dla wynalazku wykonano w pięciu powtórzeniach, a wyniki przedstawiono w Tabeli 1.
PL 249588 Β1
Dla prób kontrolnych (pozytywnej i negatywnej) oraz próby badanej, w liniowym zakresie wskazań utworzonego wykresu odczytano odpowiednie wartości względnej fluorescencji (RFU). Na podstawie tych danych obliczono procent inhibicji aktywności fosfatazy przez badany związek według wzoru:
Uprobabaiiana RF ^kcmtrolapozytywna %Inhibicjifosfatazy = ———-----------_ _ --- ----X 100% rir ^kontrołanegatywTia ^kontrolapozytywna gdzie:
RFUpróba badana - względna wartość fluorescencji mieszaniny reakcyjnej z dodatkiem substratu, enzymu i badanego inhibitora
RFUkontrola pozytywna ~ względna wartość fluorescencji mieszaniny reakcyjnej z dodatkiem enzymu i substratu, bez dodatku inhibitora
RFUkontroia negatywna - względna wartość fluorescencji mieszaniny reakcyjnej z dodatkiem substratu, bez dodatku enzymu i bez inhibitora
Stężenie inhibitora powodujące 50% inhibicję reakcji enzymatycznej (IC50) wyznaczono za pomocą regresji nieliniowej (BioTek Gen5 Microplate Reader and Imager Software), wykreślając procent inhibicji w stosunku do badanych stężeń inhibitora. Przedstawione dane są średnimi wartościami uzyskanymi w co najmniej pięciu niezależnych eksperymentach w przypadku 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 i co najmniej trzech niezależnych eksperymentach w przypadku inhibitora referencyjnego.
5-(1-(2-(4-(3,4-Dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 we wszystkich zastosowanych stężeniach istotnie hamuje aktywność fosfataz, w tym białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B, a jego zdolność do inhibicji jest zależna od stężenia. Związek będący przedmiotem wynalazku wykazuje zdolność do inhibicji fosfatazy, w tym białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B porównywalną do aktywności wzorca jakim jest 3-(3,5-dibromo-4-hydroxy-benzoyl)-2-ethyl-benzofuran-6-sulfonicacid-(4-(thiazol-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide.
Udowodnione właściwości 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 uzasadniają jego zastosowanie jako składnika leków o aktywności inhibitorów fosfatazy, w tym również białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
Tabela 1. Aktywność inhibicyjna dla 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1 oraz inhibitora referencyjnego, rozcieńczonych w buforze testowym.
i Nazwa związku i Stężenie [μΜ] | % Inhibicji ICso ΙμΜ] ±SD
i dihydro-211- :> benzo[b] [l,4]djoksepin-7- | '' L 1 , Ξ t -
| ylo)tiazol-2- t y lo)hy drazono)e ty lo)-2-hydroksy- ] benzoesan metylu 1 0 wzorze 1 f:·’ 0,01 1 ' ‘ i · ' ! 14,50% 0.5O8 ±0,154
0,05 | ...1ΠΜ- „nj, _ 16,47%
0,0755 19,21%
Γ“..... 0,1 I 30,73%
I SBS 'Ti: 44,31%
1 J 60,09%
PL 249588 Β1 i Nazwa związku Stężenie |μΜ| % Inhibicji IC50 |μΜ| ±SD
3-(3,5-Dibromo-4hydroxybcnzoyi)-2-clhył- ϊ benzofuran-6sultbnicacid-(4-.. j (lliiazoJ-2- 1 y Isuliainyl)- . !
phcnyl)-ainide
19:93%
3,234:1 0,847
0,5 25.84%
31.96% i 42.89% , 7,5 50,61%
I 10 i 56,72%
I ____________ __________b,.,,..,,,,,....... ,........................... ..........L...™.................

Claims (7)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1:
    Wzór 1
  2. 2. Pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1:
    Wzór 1 do zastosowania jako składnik leków.
    PL 249588 Β1
  3. 3. Pochodna tiazolu będąca 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanem metylu o wzorze 1:
    Wzór 1 do zastosowania jako inhibitor białkowej fosfatazy tyrozynowej 1B.
  4. 4. Sposób otrzymywania 5-(1-(2-(4-(3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]dioksepin-7-ylo)tiazol-2-ylo)hydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesanu metylu o wzorze 1, znamienny tym, że 5-(1-(2-karbamotioylohydrazono)etylo)-2-hydroksybenzoesan metylu poddaje się reakcji w atmosferze azotu lub argonu z 2-bromo-1-(3,4-dihydro-2/7-1,5-benzodioksepin-7-ylo)etanonem w stosunku 1:1 poddając mieszaniu w temperaturze wrzenia rozpuszczalnika, a następnie po ochłodzeniu roztworu otrzymany produkt wydziela się w procesie sączenia z użyciem zestawu do filtracji próżniowej z lejkiem Buchnera, a następnie produkt poddaje się oczyszczaniu w procesie chromatografii kolumnowej z użyciem eluentu dichlorometanu i metanolu w stosunku od 90:10 do 98:2 korzystnie 95:5.
  5. 5. Sposób według zastrz. 4, znamienny tym, że temperatura wrzenia rozpuszczalnika jest między 60°C a 90°C.
  6. 6. Sposób według zastrz. 4 lub 5, znamienny tym, że rozpuszczalnikiem jest etanol.
  7. 7. Sposób według zastrz. 4 lub 5 lub 6, znamienny tym, że mieszanie prowadzi się w czasie od 10 h do 30 h, najkorzystniej 20 h.
PL448475A 2024-05-02 2024-05-02 Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania PL249588B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL448475A PL249588B1 (pl) 2024-05-02 2024-05-02 Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL448475A PL249588B1 (pl) 2024-05-02 2024-05-02 Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL448475A1 PL448475A1 (pl) 2025-11-03
PL249588B1 true PL249588B1 (pl) 2026-05-18

Family

ID=97522440

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL448475A PL249588B1 (pl) 2024-05-02 2024-05-02 Pochodna tiazolu, jej zastosowanie oraz sposób jej otrzymywania

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL249588B1 (pl)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1868604B1 (en) * 2005-01-21 2014-08-13 President and Fellows of Harvard College Regulation of protein synthesis by inhibition of eif4e-eif4g interaction

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1868604B1 (en) * 2005-01-21 2014-08-13 President and Fellows of Harvard College Regulation of protein synthesis by inhibition of eif4e-eif4g interaction

Also Published As

Publication number Publication date
PL448475A1 (pl) 2025-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3212189B1 (en) Substituted chromanes and method of use
Liang et al. Synthesis, in vitro and in vivo antitumor activity of symmetrical bis-Schiff base derivatives of isatin
EP3438094A1 (en) Selective c-kit kinase inhibitor
US8653088B2 (en) Compositions useful as inhibitors of protein kinases
EP3612519B1 (en) Phenyl-2-hydroxy-acetylamino-2-methyl-phenyl compounds
EP2531488B1 (en) Indirubin-3'-oxime derivatives as potent cyclin dependent kinase inhibitors
CA2692922C (en) Azaindole-indole coupled derivatives, preparation methods and uses thereof
EA027533B1 (ru) Конденсированные тетра- или пентациклические дигидродиазепинокарбазолоны в качестве ингибиторов parps
US9629863B2 (en) CDK5 inhibitors and therapeutic uses thereof
KR102286526B1 (ko) 헤테로시클릭-이미다졸계 화합물, 그 약물 조성물 및 그 제조방법과 용도
JP5006047B2 (ja) 新規な縮合ピロロカルバゾール
CN107814792A (zh) 一类喹唑啉衍生物、其组合物及用途
EP2828249B1 (en) Premature-termination-codons readthrough compounds
Mariano et al. Systematic diversification of benzylidene heterocycles yields novel inhibitor scaffolds selective for Dyrk1A, Clk1 and CK2
Ateş-Alagöz et al. A comparative study: evaluation of antioxidant activity of melatonin and some indole derivatives
Jeyapal et al. In-silico design and synthesis of N9-substituted β-Carbolines as PLK-1 inhibitors and their in-vitro/in-vivo tumor suppressing evaluation
Jia et al. Design, synthesis and antitumor activity evaluation of novel indole acrylamide derivatives as IMPDH inhibitors
KR20230005197A (ko) 특정 dyrk1a, clk1 및/또는 clk4에서 단백질 키나제의 억제제로서의 신규한 이미다졸론 유도체
EP4210697A1 (en) Small molecule inhibitors of lemur tyrosine kinase 3
AU2016375851A1 (en) Novel pyrrolo[3,2-c]pyridine-6-amino derivatives
Kreituss et al. Discovery of aziridine-triazole conjugates as selective MMP-2 inhibitors
Ullah et al. Synthesis, in vitro acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase activities and in silico molecular docking study of thiazole-thiourea hybrid derivatives
Wu et al. Design, synthesis, and biological evaluation of death-associated protein kinase 1 PROTACs
US11479536B1 (en) Arylacetamides as AMP-activated protein kinase inhibitors and their use for treatment of breast cancer
JP2024540216A (ja) プロテインキナーゼ、特には、ｄｙｒｋ１ａ、ｃｌｋ１及び／又はｃｌｋ４、の阻害剤としてのイミダゾロン誘導体