3-Hydroksy-2-metylo-2' -O-/3-D-( 4" -O-metyloglukopiranozylo ) dihydrochalkon i sposób wytwarzania 3-hydroksy-2-metylo-2' -O-/3-D-( 4" -O-metyloglukopiranozylo ) dihydrochalkonu Przedmiotem wynalazku jest 3-hydroksy-2-m etylo-2' -O-/3-D-( 4" -O metyloglukopiranozylo )-d ihydrochalkon o wzorze 2 przedstawionym na rysunku. Przedmiotem wynalazku jest równiez sposób wytwarzania 3-hydroksy-2-metylo-2' -O-/3-D-( 4" -O-metyloglukopiranozylo ) dihydrochalkonu. 3-Hydroksy-2-metylo-2' -O-/3-D-( 4"-O-m etyloglukopiranozylo ) dihydrochalkon moze znalezc zastosowanie jako zwiazek przeciwutleniajacy, przeciwdrobnoustrojowy, substancja wzmacniajaca smak i potencjalny slodzik w preparatach farmaceutycznych, produktach spozywczych oraz formulacjach kosmetycznych. Naturalne flawonoidy z jedna lub kilkoma grupami metylowymi wystepuja w roslinach sporadycznie. Z azjatyckiego drzewa Syzygium nervosum (Cleistocalyx operculatus) izolowano C- i O-metylowane chalkony: (E)-4,2' ,4' -trihydroksy-6' -metoksy-3' ,5' -dimetylochalkon, (E)-2' ,4'-dihydroksy-6'-metoksy-3' ,5'-dimetylochalkon, (E)-2' ,4'-dihydroksy- 6' -metoksy-3' -metylochalkon, (E)-2,2' ,4' -trihydroksy-6' -metoksy-3' ,5' - dimetylochalkon. Zwiazki te wykazywaly silna inhibicje wobec enzymów pochodzacych od dwóch szczepów wirusa grypy: H1 N1 oraz H9N2. Blokowaly one dzialanie neuraminidaz, umozliwiajacych wirusom opuszczanie zakazonych komórek poprzez rozklad ich blon PL 438645 A1 2/10komórkowych (Dao T. T. , Tung B. T., Nguyen P. H., Thuong P. T., Yoo S. S., Kim E. H., Kim S. K., Oh W. K. C-methylated flavonoids form Cleistocalyx operculatus and their inhibitory effects on novel influenza A (H1 N1) neuram inidase. Journal of Natura! Products 201 O, 73, 1636-1642). Naturalne dihydrochalkony floretyna i jej glikozyd florydzyna, które wystepuja w skórce i miazszu jablka, wykazuja licznie udokumentowane wlasciwosci prozdrowotne: antyoksydacyjna, przeciwzapalna, przeciwcukrzycowa, przeciwnowotworowa i kardioprotekcyjna (Choi Y. Biochemical basis of anti-cancer-effects of phloretin - a natural dihydrochalcone. Mo/ecu/es 2018, 24,278; Tian L., Cao J., Zhao T., Liu Y, Khan A., Cheng G. The bioavailability, extraction, biosynthesis and distribution of natural dihydrochalcone: phloridzin. International Journal of Mo/ecu/ar Sciences 2021, 22, 962). W badaniach nad dihydrochalkonem naringiny z udzialem transgenicznych myszy jako modeli zwierzecych choroby Alzheimera, zaobserwowano efekt zlagodzenia deficytów poznawczych, co stwarza mozliwosc zastosowania tego zwiazku jako srodka leczniczego (Yang W., Zhou K., Zhou Y., An Y, Hu T., Lu J., Huang S., Pei G. Narindin dihydrochalcone ameliorates cognitive deficits and neuropatholody in APP /PS 1 Transgenic Mice. Frontiers in Aging Neuroscience 2018, 1 O, 169). Dihydrochalkony wykazuja slodki smak i moga znalezc zastosowanie jako prozdrowotne slodziki (Janeczko T., Gladkowski W., Kostrzewa-Suslow E. Microbial transformations of chalcones to produce food sweetener derivatives. Journal of Mo/ecu/ar Catalysis B: Enzymatic 2013, 98, 55-61; Luzny M., Kozlowska E., Kostrzewa-Suslow E., Janeczko T. Highly efective, regiospecific hydrogenation of methoxychalcone by Yarrowia lipolytica enables production of food sweeteners. Catalysts 2020, 1 O, 1135). Najlepiej poznany i zbadany dihydrochalkon pozyskiwany ze skórek owoców cytrusowych dihydrochalkon neohesperydyny (E-959) zostal dopuszczony do stosowania jako slodzik i substancja wzmacniajaca smak, a jego zastosowanie reguluje Rozporzadzenie Komisji Europejskiej nr PL 438645 A1 3/101129/2011 z 11 listopada 2011 r. Wiekszosc flawonoidów, poza katechinami, jest obecna w roslinach w polaczeniu z cukrami, jako /3-glikozydy. Glikozylacja skutkuje: wzrostem rozpuszczalnosci w wodzie i stabilnosci czasteczki flawonoidu oraz przyswajalnosci przyjmowanych z pokarmem zwiazków flawonoidowych. Zasadniczo glukozydy sa jedynymi glikozydami, które moga byc absorbowane w jelicie cienkim. Natomiast flawonoidy niezaabsorbowane w jelicie cienkim oraz zaabsorbowane flawonoidy wydzielone z zólcia ulegaja degradacji wraz z rozerwaniem struktury pierscieniowej przez mikroorganizmy (Hollman, P. C. Absorption, bioavailability, and metabolism of flavonoids. Pharmaceutical Biology, 2004, 42, 7 4-83; Plaza, M.; Pozzo, T.; Liu, J.; Gulshan Ara, K. Z.; Turner, C.; Nordberg Karlsson, E. Substituent effects on in vitro antioxidizing properties, stability, and solubility in flavonoids. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2014, 62, 3321-3333). Hollman i in., wykazali, ze czasteczka glukozy przylaczona w pozycji 3 kwercetyny (3,3',4',5,7-pentahydroksyflawon) zwieksza absorpcje tego zwiazku w jelicie cienkim do 52%, w porównaniu z 24% absorpcja aglikonu kwercetyny i 17% rutynozydu kwercetyny (Hollman, P. C.; Bijsman, M. N. C. P.; van Gameren, Y.; Cnossen, E. P. J.; de Vries, J. H.; Katan, M. B. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flavonoid glycosides in man. Free Radical Research, 1999, 31, 569-573). Znany jest szczep lsaria fumosorosea KCH J2 ujawniony w zgloszeniu patentowym o numerze P.416996. W ostatnich latach, w leczeniu róznych chorób i ich zapobieganiu, coraz wieksze znaczenie zyskuja zwiazki pochodzenia naturalnego oraz ich odpowiedniki uznawane za naturalne, które uzyskano na drodze przeksztalcen mikrobiologicznych. Dlatego istotne jest opracowywanie nowych metod wytwarzania zwiazków aktywnych biologicznie na drodze biotransformacji, uzytecznych dla przemyslu farmaceutycznego, kosmetycznego i spozywczego. PL 438645 A1 4/10W dostepnej literaturze brak jest informacji na temat otrzymywania 3-hydroksy-2-metylo-2' -O-,B-D-( 4" -O-metyloglukopiranozylo ) dihydrochalkonu. Istota wynalazku jest 3-hydroksy-2-m etylo-2' -O-,B-D-( 4" -O- metyloglukopiranozylo )-dihydrochalkon. Istota sposobu polega na tym, ze do podloza odpowiedniego dla grzybów strzepkowych wprowadza sie szczep lsaria fumosorosea KCH J2. Po uplywie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza sie substrat, którym jest 2'-hydroksy-2-metylochalkon, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszajacym sie z woda Transformacje prowadzi sie w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciaglym wstrzasaniu, przez co najmniej 96 godzin. Nastepnie produkt ekstrahuje sie rozpuszczalnikiem organicznym niemieszajacym sie z woda oraz oczyszcza chromatograficznie. 3-hydroksy-2-metylo-2' -O-,B-D-( 4" -O- metyloglukopiranozylo )-dihydrochalkon znajduje sie we frakcji o posredniej polarnosci, w drugim pasmie od linii startu. Korzystnie jest, gdy stosunek masy dodawanego substratu do objetosci hodowli wynosi 0,1 mg:1 cm 3 . Korzystnie takze jest, gdy proces prowadzi sie w temperaturze 25 stopni Celsjusza. Dodatkowo, korzystnie jest, gdy transformacje prowadzi sie przez 9 dni. Korzystnie równiez jest, gdy oczyszczanie prowadzi sie wykorzystujac cienkowarstwowa chromatografie preparatywna w ukladzie eluujacym z chloroformem i metanolem w stosunku objetosciowym 9: 1. Postepujac zgodnie z wynalazkiem, w wyniku dzialania ukladu enzymatycznego zawartego w komórkach szczepu lsaria fumosorosea KCH J2, nastepuje redukcja wiazania podwójnego, hydroksylacja przy C-3 oraz hydroksylacja i przylaczenie 4-metoksy-,B-D-glukozy przy C-2'. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela sie z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem, przez ekstrakcje rozpuszczalnikiem PL 438645 A1 /10organicznym niemieszajacym sie z woda (octan etylu). Zasadnicza zaleta wynalazku jest otrzymanie 3-hydroksy-2-metylo-2' O-,B-D-( 4" -O-metyloglukopiranozylo )-d ihydrochalkonu w tern peraturze pokojowej i przy pH naturalnym dla szczepu oraz wykorzystujac mikroorganizm niebedacy patogenem ludzkim. Wykorzystanie biotransformacji, zamiast syntezy chemicznej, umozliwia, w sposób przyjazny dla srodowiska, uzyskanie zwiazków o wiekszej biodostepnosci i aktywnosci biologicznej, niz uzyte substraty. Wynalazek jest blizej objasniony na przykladzie wykonania. Przyklad. Do kolby stozkowej o pojemnosci 2000 cm 3 , w której znajduje sie 500 cm 3 sterylnej pozywki zawierajacej 1 O g aminobaku i 30 g glukozy, wprowadza sie szczep lsaria fumosorosea KCH J2. Po 72 godzinach jego wzrostu dodaje sie 50 mg 2' -hydroksy-2-metylochalkonu o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm 3 dimetylosulfotlenku. Transformacje prowadzi sie w 25 stopniach Celsjusza przy ciaglym wstrzasaniu przez 9 dni. Nastepnie mieszanine poreakcyjna ekstrahuje sie dwukrotnie octanem etylu, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymany ekstrakt oczyszcza sie chromatograficznie z zastosowaniem jako eluentu mieszaniny chloroformu i metanolu w stosunku objetosciowym 9: 1. Produkt znajduje sie we frakcji o posredniej polarnosci, w drugim pasmie od linii startu. Na tej drodze otrzymuje sie 4,8 mg 3-hydroksy-2-metylo-2'-O-,B-D (4"-O-metyloglukopiranozylo)-dihydrochalkonu (wydajnosc 5,3%). Stopien konwersji substratu wedlug HPLC 99%. Uzyskany produkt charakteryzuje sie nastepujacymi danymi spektralnymi. Opis sygnalów pochodzacych z widma 1 H NMR (601 MHz, Aceton-dB) PL 438645 A1 6/10Sygnaly pochodzace od szkieletu Sygnaly pochodzace od jednostki flawonoidowego cukrowej ó [ppm] J [Hz] H ó [ppm] J [Hz] H 3,34 (m) a 5,04 (d) 7,8 1" 2,95 (t) 7,7 ~ 3,53 (m) 2" 6,68 (d) 8,0 4 3,63 (td) 9,0; 4,3 3" 6,90 (t) 7,8 5 3,20 (m) 4" 6,71 (d) 7,5 6 3,49 (ddd) 9,7; 4,6; 5" 2,0 7,30 (dd) 8,4; 0,5 3' 3,83 (ddd) 7,3; 4,7; 6" 2,2 3,68 (m) 7,47 (ddd) 8,5; 7,3; 1,8 4' 3,55 (s) C4"- OCH3 7,11 (td) 7,6; 0,9 5' 4,65 (d) 4, 1 C2"-OH 7,58 (dd) 7,7; 1,8 6' 4,48 (d) 4,3 C3"-OH 2,19(s) C2-CH3 3, 71 (dd) 9,3; 4,5 C6"-OH 8,08 (s) C3-OH PL 438645 A1 7/10Zastrzezenia patentowe 1. 3-Hydroksy-2-metylo-2' -O-13-D-( 4"-O-metyloglukopiranozylo ) dihydrochalkon o wzorze 2. 2. Sposób wytwarzania 3-hydroksy-2-metylo-2'-O-13-0-(4"-O- metyloglukopiranozylo )-dihydrochalkonu znamienny tym, ze do podloza odpowiedniego dla grzybów strzepkowych wprowadza sie szczep lsaria fumosorosea KCH J2, nastepnie po uplywie co najmniej 72 godzin do hodowli wprowadza sie substrat, którym jest 2'-hydroksy-2- metylochalkon o wzorze 1, rozpuszczony w rozpuszczalniku organicznym mieszajacym sie z woda, transformacje prowadzi sie w temperaturze od 20 do 30 stopni Celsjusza, przy ciaglym wstrzasaniu, co najmniej 96 godzin, po czym produkt ekstrahuje sie rozpuszczalnikiem organicznym niemieszajacym sie z woda i oczyszcza chromatograficznie, przy czym 3-hydroksy-2-metylo- 2' -0-13-0-(4" -O-metyloglukopiranozylo )-dihydrochalkon o wzorze 2 znajduje sie we frakcji o posredniej polarnosci, w drugim pasmie od linii startu. 3. Sposób wedlug zastrz. 2., znamienny tym, ze stosunek masy dodawanego substratu do objetosci hodowli wynosi O, 1 mg: 1 cm 3. 4. Sposób wedlug zastrz. 2., znamienny tym, ze proces prowadzi sie w temperaturze 25 stopni Celsjusza. . Sposób wedlug zastrz. 2., znamienny tym, ze transformacje prowadzi sie przez 9 dni. 6. Sposób wedlug zastrz. 2., znamienny tym, ze oczyszczanie prowadzi sie wykorzystujac cienkowarstwowa chromatografie preparatywna w ukladzie eluujacym chloroform:metanol w stosunku objetosciowym 9:1. PL 438645 A1 8/105' 4' 3' OH 3 wzór1 4 ' lsaria fumosorosea KCH J2 4'~6' 3' H t..:" ... '-' '-.~"V Q Q J 1"i HO 2"oH 3" wzór2 OH 2 4 PL 438645 A1 9/10al. Niepodleglosci 188/192 00-950 Warszawa, skr, poczt, 203 URZAD PATENTOWY RZECZYPOSPOLITEJ POLSKIEJ tel.: (+48) 22 579 OS SS I fax: (+48) 22 579 00 01 e-mail: kontakt@uprp.gov.pl I www,uprp.gov.pl SPRAWOZDANIE O STANIE TECHNIKI DO ZGLOSZENIA NR P.438645 Klasyfikacja zgloszenia: C07H15/203 (2006.01 ), C12Pl 9 / 44 (2006.01 ), C12Rl/645 (2006.01) Poszukiwania prowadzone w klasach: C07H, C12P Bazy komputerowe w których prowadzono poszukiwania: EPODOC, WP!, BAZY DANYCH UPRP, STN: REGISTRY, CAPLUS, REAXYSFILEBib, REAXYSFILESub Kategoria dokumentu A A Dokumenty - z podana identyfikacja Krawczyk-Lebek A, Dymarska M, Janeczko T, Kostrzewa-Suslow E. Entomopathogenic Filamentous Fungi as Biocatalysts in Glycosylation ofMethylflavonoids. Catalysts. 2020; 10(10):1148. https:/ /doi.org/10.3390 /catallO 101148 PL234086 Bl (UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCLAWIU) 2020-01-31 D Dalszy ciag wykazu dokumentów na nastepnej stronie A dokument okrcsl.1.j0cy ogólny st:m techniki, któr? nic jc,st uw;iz:my z.1. posi.:id;ijqcy szczególne zn;iczcnic, F. - dokument st.ctnmvi0cy wczesniejsze zgloszenie luh patent, ale opuhlikow;iny w luh po dacie zgloszenia, Odniesienie do zastrz. 1-6 1-6 L - dokument, który moze poddawac w watpliwosc zastrzegane pierwszenstwo[-wa), lub przytoczony w celu ustalenia daty publikacji innego cytowanego dokumentu lub z mnego szczególnego powodu, O doluuncnl odnoszacy siq do ujawnil.!nia uslrn .. !go prt:L!Z :,,:aslosowanie, vvyslawicnic lub ujawnieni\..! w inny ::.µo::.ób, P dokum1.:nl opublikmv;::my przed d T dokument pózniejszy, opublikowany po dacie zgloszenb lub w dacie pierwszenstwa i niehQd~cy w konflikcie ze zgloszeniem, ale cytow:my \'\' celu zrozumienia z;:is;:i_d lub teorii lez;icych u podstaw wynctl8.zku, X - dokument o szczególnym znaczeniu; zastrzegany wynalazek nie moze hyc uwazany za nm,y luh nie moze byc uwazany za posiadajacy poziom ½ynalazczy, je zel! ten dokument brany Jest pod uwage samodzielnie, Y - dokumenl o :'iZGt:ególnym znaczeniu; zaslrzegany wynalazek nie moze byc uvvazany za µo::.ia polq1.,-1.:ony z julnym lub kilkoma Lego Lyµu dokumenlami, a LalUe µolZ!czenil! bl{dzie oczywi::.Le Jla znawcy, & dokument nalcz~cy do tej samej rodziny palcnlowcj. Sprawozdanie wykonalj-a: Agnieszka Ucinska Ekspert Data: 31.03.2022 Uwagi do zgloszenia Podpis: /podpisano kwalifikowanym podpisem elektronicznym/ Pismo wydane w formie dokumentu elektronicznego Sprawozdanie zostalo wykonane w oparciu o wersje zastrzezen patentowych z 30.07.2021 r. PL 438645 A1 /10 PL3-Hydroxy-2-methyl-2'-O-[3-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone and method for preparing 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-[3-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone] The subject of the invention is 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-[3-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone of formula 2 shown in the drawing. The subject of the invention is also a method for preparing 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-[3-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)dihydrochalcone. 3-Hydroxy-2-methyl-2'-O-/3-D-(4"-O-methylglucopyranosyl) dihydrochalcone can be used as an antioxidant, antimicrobial compound, flavor enhancer and potential sweetener in pharmaceutical preparations, food products and cosmetic formulations. Natural flavonoids with one or more methyl groups occur sporadically in plants. From the Asian tree Syzygium nervosum (Cleistocalyx operculatus), C- and O-methylated chalcones were isolated: (E)-4,2',4'-trihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone, (E)-2',4'-dihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone, (E)-2' ,4'-dihydroxy-6'-methoxy-3'-methylchalcone, (E)-2,2',4'-trihydroxy-6'-methoxy-3',5'-dimethylchalcone. These compounds showed strong inhibition against enzymes derived from two strains of influenza virus: H1 N1 and H9N2. They blocked the action of neuraminidases, which enable viruses to leave infected cells by breaking down their PL 438645 A1 2/10 cell membranes (Dao T. T., Tung B. T., Nguyen P. H., Thuong P. T., Yoo S. S., Kim E. H., Kim S. K., Oh W. K. C-methylated flavonoids form Cleistocalyx operculatus and their inhibitory effects on novel influenza A (H1 N1) neuram inidase. Journal of Nature! Products 201 O, 73, 1636-1642). Natural dihydrochalcones phloretin and its glycoside phloridzin, which are present in apple peel and pulp, have numerous documented health-promoting properties: antioxidant, anti-inflammatory, antidiabetic, anticancer and cardioprotective (Choi Y. Biochemical basis of anti-cancer-effects of phloretin - a natural dihydrochalcone. Mo/ecu/es 2018, 24,278; Tian L., Cao J., Zhao T., Liu Y, Khan A., Cheng G. The bioavailability, extraction, biosynthesis and distribution of natural dihydrochalcone: phloridzin International Journal of Mo/ecu/ar Sciences 2021, 22, 962). In research on Narindin dihydrochalcone ameliorates cognitive deficits and neuropatholody in APP /PS 1 Transgenic Mice. Frontiers in Aging Neuroscience 2018, 1 O, 169). Dihydrochalcones have a sweet taste and can be used as health-promoting sweeteners (Janeczko T., Gladkowski W., Kostrzewa-Suslow E. Microbial transformations of chalcones to produce food sweetener derivatives. Journal of Mo/ecu/ar Catalysis B: Enzymatic 2013, 98, 55-61; Luzny M., Kozłowska E., Kostrzewa-Suslow E., Janeczko T. Highly effective, regiospecific hydrogenation of methoxychalcone by Yarrowia lipolytica enables the production of food sweeteners. Catalysts 2020, 1 O, 1135). The best known and studied dihydrochalcone obtained from citrus fruit peels, neohesperidin dihydrochalcone (E-959), has been approved for use as a sweetener and flavor enhancer, and its use is regulated by European Commission Regulation No. PL 438645 A1 3/101129/2011 of November 11, 2011. Most flavonoids, except catechins, are present in plants in combination with sugars as β-glycosides. Glycosylation results in: increased water solubility and stability flavonoid molecule and the bioavailability of flavonoid compounds ingested with food. Generally, glucosides are the only glycosides that can be absorbed in the small intestine. However, flavonoids not absorbed in the small intestine and absorbed flavonoids secreted in the bile are degraded with the disruption of the ring structure by microorganisms (Hollman, P. C. Absorption, bioavailability, and metabolism of flavonoids. Pharmaceutical Biology, 2004, 42, 7 4-83; Plaza, M.; Pozzo, T.; Liu, J.; Gulshan Ara, K. Z.; Turner, C.; Nordberg Karlsson, E. Substituent effects on in vitro antioxidant properties, stability, and solubility in flavonoids. Journal of Agricultural Food Chemistry, 2014, 62, 3321-3333). Hollman et al., showed that a glucose molecule attached at the 3-position of quercetin (3,3',4',5,7-pentahydroxyflavone) increases the absorption of this compound in the small intestine to 52%, compared to 24% absorption of quercetin aglycone and 17% of quercetin rutinoside (Hollman, P. C.; Bijsman, M. N. C. P.; van Gameren, Y.; Cnossen, E. P. J.; de Vries, M. B. The sugar moiety is a major determinant of the absorption of dietary flavonoid glycosides in man. There is a known strain of lsaria fumosorosea KCH J2 disclosed in the patent application number P.416996. In recent years, compounds of natural origin and their equivalents considered natural, obtained through microbiological transformations, have become increasingly important in the treatment and prevention of various diseases. Therefore, it is important to develop new methods for producing biologically active compounds through biotransformation, useful for the pharmaceutical, cosmetics, and food industries. PL 438645 A1 4/10 There is no information in the available literature on the preparation of 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-,B-D-(4"-O-methylglucopyranosyl) dihydrochalcone. The essence of the invention is 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-,B-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone. The essence of the method is that the strain Isaria fumosorosea KCH J2 is introduced into a medium suitable for filamentous fungi. After at least 72 hours, the substrate, which is 2'-hydroxy-2-methylchalcone, dissolved in an organic solvent miscible with water, is introduced into the culture. The transformation is carried out at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius, with constant shaking, for at least 96 hours. Then the product is extracted with an organic solvent immiscible with water and purified chromatographically. 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-,B-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone )-dihydrochalcone is found in the intermediate polarity fraction, in the second band from the starting line. It is preferred that the mass ratio of added substrate to culture volume is 0.1 mg:1 cm3. It is also preferred that the process is carried out at 25 degrees Celsius. Additionally, it is preferred that the transformation is carried out for 9 days. It is also preferred that purification is carried out using thin-layer preparative chromatography eluting with chloroform and methanol in a 9:1 volume ratio. In accordance with the invention, as a result of the action of the enzymatic system contained in cells of the Isaria fumosorosea KCH J2 strain, reduction of the double bond, hydroxylation at C-3, and hydroxylation and addition of 4-methoxy-,β-D-glucose at C-2' occur. The product obtained in this way is separated from the aqueous culture of the microorganism in a known manner by extraction with an organic solvent immiscible with water (ethyl acetate). The main advantage of the invention is the production of 3-hydroxy-2-methyl-2' O-, B-D-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone at room temperature and at a pH natural for the strain and using a microorganism that is not a human pathogen. The use of biotransformation, instead of chemical synthesis, allows, in an environmentally friendly way, obtaining compounds with greater bioavailability and biological activity than the substrates used. The invention is explained in more detail on an example of its implementation. Example. The Isaria fumosorosea KCH J2 strain is introduced into a 2000 cm3 conical flask containing 500 cm3 of sterile medium containing 10 g of aminobac and 30 g of glucose. After 72 hours of its growth, 50 mg of 2' -hydroxy-2-methylchalcone of formula 1, dissolved in 1 cm3 of dimethyl sulfoxide. The transformation was carried out at 25 degrees Celsius with constant shaking for 9 days. The reaction mixture was then extracted twice with ethyl acetate, dried over anhydrous magnesium sulfate, and the solvent was evaporated. The obtained extract was purified by chromatography using a mixture of chloroform and methanol in a 9:1 volume ratio as eluent. The product was found in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line. This method yielded 4.8 mg of 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-,B-D (4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone (5.3%). The degree of substrate conversion by HPLC was 99%. The obtained product is characterized by the following spectral data. Description of signals from the 1 H NMR spectrum (601 MHz, Acetone-dB) PL 438645 A1 6/10Signals from the skeleton Signals from the flavonoid unit of the sugar ó [ppm] J [Hz] H ó [ppm] J [Hz] H 3.34 (m) a 5.04 (d) 7.8 1" 2.95 (t) 7.7 ~ 3.53 (m) 2" 6.68 (d) 8.0 4 3.63 (td) 9.0; 4.3 3" 6.90 (t) 7.8 5 3.20 (m) 4" 6.71 (d) 7.5 6 3.49 (ddd) 9.7; 4.6; 5" 2.0 7.30 (dd) 8.4; 0.5 3' 3.83 (ddd) 7.3; 4.7; 6" 2.2 3.68 (m) 7.47 (ddd) 8.5; 7.3; 1.8 4' 3.55 (s) C4"- OCH3 7.11 (td) 7.6; 0.9 5' 4.65 (d) 4. 1 C2"-OH 7.58 (dd) 7.7; 1.8 6' 4.48 (d) 4.3 C3"-OH 2.19(s) C2-CH3 3.71 (dd) 9.3; 4.5 C6"-OH 8.08 (s) C3-OH PL 438645 A1 7/10 Patent claims 1. 3-Hydroxy-2-methyl-2'-O-13-D-(4"-O-methylglucopyranosyl) dihydrochalcone of the formula 2. 2. A method for producing 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-13-O-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone characterized in that the strain Isaria fumosorosea KCH J2 is introduced into a medium suitable for filamentous fungi, then after at least 72 hours the culture is introduced with the substrate, which is 2'-hydroxy-2-methylchalcone of formula 1, dissolved in an organic solvent miscible with water, the transformation is carried out at a temperature of 20 to 30 degrees Celsius, with constant shaking, for at least 96 hours, after which the product is extracted with an organic solvent immiscible with water and purified by chromatography, wherein 3-hydroxy-2-methyl-2'-O-13-O-(4"-O-methylglucopyranosyl)-dihydrochalcone of formula 2 is located in the fraction of intermediate polarity, in the second band from the starting line. 3. The method according to claim 2, characterized in that the ratio of the mass of the added substrate to the volume of the culture is 0.1 mg: 1 cm3. 4. The method according to claim 2, characterized in that the process is carried out at a temperature of 25 degrees Celsius. . The method according to claim 2, characterized in that the transformation is carried out for 9 days. 6. The method according to claim 2, characterized in that the purification is carried out using thin-layer preparative chromatography in a system eluting with chloroform: methanol in a volume ratio of 9:1. PL 438645 A1 8/105' 4' 3' OH 3 formula1 4 ' lsaria fumosorosea KCH J2 4'~6' 3' H t..:" ... '-' '-.~"V Q Q J 1"i HO 2"oH 3" formula2 OH 2 4 PL 438645 A1 9/10al. Niepodległosci 188/192 00-950 Warszawa, skr, poczt, 203 PATENT OFFICE OF THE REPUBLIC OF POLAND tel.: (+48) 22 579 OS SS I fax: (+48) 22 579 00 01 e-mail: kontakt@uprp.gov.pl I www,uprp.gov.pl REPORT ON THE STATE OF TECHNOLOGY FOR APPLICATION NO. P.438645 Application classification: C07H15/203 (2006.01), C12Pl 9 / 44 (2006.01), C12Rl/645 (2006.01) Searches conducted in classes: C07H, C12P Computer databases in which the search was conducted: EPODOC, WP!, BAZY DATA UPRP, STN: REGISTRY, CAPLUS, REAXYSFILEBib, REAXYSFILESub Document category A A Documents - with given identification Krawczyk-Lebek A, Dymarska M, Janeczko T, Kostrzewa-Suslow E. Entomopathogenic Filamentous Fungi as Biocatalysts in Glycosylation ofMethylflavonoids. Catalysts. 2020; 10(10):1148. https:/ /doi.org/10.3390 /catallO 101148 PL234086 Bl (UNIWERSYTET PRZYRODNICZY WE WROCŁAWU) 2020-01-31 D The list of documents continues on the next page A document outlining the general standard of the technique that nothing, if any, is held to be of special significance, F. - a document containing an earlier application or patent, but published on or after the filing date, Reference to claims 1-6 1-6 L - a document which may cast doubt on the claimed priority, or cited in order to establish the date of publication of another cited document or for a special reason, O below referring to the disclosure of the same before L!Z:,,:assignment, explanatory or disclosure in another way, P document published before T later document, published after the filing date or on the priority date and not in conflict with the application, but quoted for the purpose of understanding the idea or theory underlying the invention, X - document of particular importance; the claimed invention cannot be considered as inventive or cannot be considered as involving an inventive step if this document is considered on its own, Y - document of general importance; The claimed invention cannot be considered as being incompatible with one or more other documents, and the same document may be incompatible with the patent application. The report was prepared by: Agnieszka Ucinska, Expert, Date: March 31, 2022. Comments on the application. Signature: /signed with a qualified electronic signature/. Letter issued in the form of an electronic document. The report was prepared based on the version of the patent claims of July 30, 2021. PL 438645 A1 /10 PL