Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarza¬ nia nowych pochodnych chlorowcofenylotioaceta- midocefalosporyny, które skutecznie hamuja roz¬ wój mikroorganizmów Staphylococcus, odpornych na dzialanie metycyliny.W licznych publikacjach opisano skutki, jakie powoduje brak skutecznosci dzialania znanych an¬ tybiotyków na rózne szczepy Staphylococcus au¬ reus, odporne na dzialanie metycyliny. Szczepy te nie wystepuja wprawdzie zbyt czesto i prawdopo¬ dobnie pojawiaja sie przewaznie u chorych obloz¬ nie i oslabionych, ale obecnosc ich stwierdzono w kulturach pobranych u chorych cierpiacych na no¬ wotwory, chroniczne schorzenia kosci i/lub sta¬ wów, chroniczne zaburzenia krazenia, zaburzenia swiadomosci i chroniczne schorzenia pluc.Znane sa dwie metody odrózniania in vitro szczepów Staphylococcus aureus odpornych od nie¬ odpornych na dzialania metycyliny.Jedna z nich polega na stosowaniu róznych temperatur hodowli mikroorganizmów, a druga na stosowaniu róznych stezen chlorku sodowego w srodowisku hodowlanym.Z opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 335 136 znane sa pewne kwasy chlo- rowcofenylomerkaptometylocefalosporanowe odpor¬ ne na dzialanie penicyliny i na dzialanie kwasów oraz skuteczne przeciwko bakteriom Gram-dodat- nim i niektórym bakteriom Gram-ujemnym, ale w opisie tym nie ma wzmianki o tym, ze zwiazki te moga byc stosowane do zwalczania mikroorga¬ nizmów Staphylococcus aureus odpornych na dzia¬ lanie metycyliny. Opis ten nie zawiera tez infor¬ macji o identyfikowaniu szczepów Staphylococcus odpornych na dzialanie metycyliny.Nieoczekiwanie stwierdzono, ze wytwarzane spo¬ sobem wedlug wynalazku nowe pochodne chlorow- cofenylotioacetamidocefalosporyny o ogólnym wzo¬ rze 1, w którym X i Y oznaczaja atomy wodoru lub chloru, rozmieszczone tak, ze jezeli tylko jeden z tych podstawników stanowi atom chloru, to znajduje sie on w pozycji 3 pierscienia benzeno¬ wego, a jezeli oba oznaczaja atomy chloru, to znaj¬ duja sie one w pozycjach 3 i 4 lub 3 i 5 albo 2 i 5 tego pierscienia, Z oznacza atom wodoru lub fluoru i gdy oznacza atom fluoru, to znajduje sie w pozycji 3 lub 4 pierscienia benzenowego i sta¬ nowi albo jedyny podstawnik tego pierscienia, albo równoczesnie pierscien ten zawiera równiez jako podstawniki jeden lub dwa atomy chloru, z których jeden znajduje sie w pozycji 3 lub 4 pierscienia, R oznacza, grupe 5-metylo-l,3,4-tiazol- -2-ilotio, l-metylo-5-tetrazolilotio lub grupe me- tylokarbamoiloksylowa, a R' oznacza atom wodoru, grupe dwucykloheksyloaminowa lub farmakologicz¬ nie dopuszczalny kation, sa nie tylko odporne na dzialanie penicyliny i trwale w srodowiskach kwasnych oraz skutecznie dzialaja przeciwko mi¬ kroorganizmom Gram-dodatnim i wielu Gram- -ujemnym, ale równiez sa wysoce skuteczne prze- 941933 94193 4 ciwko róznym mikroorganizmom Staphylococcus aureus odpornym na dzialanie metycyliny.Sposobm wedlug wynalazku zwiazki o ogólnym wzorze 1, w którym wszystkie symbole maja wy¬ zej podane znaczenie, wytwarza sie przez reakcje 5 zwiazku o ogólnym wzorze 2, w którym X, Y, Z i R' maja wyzej podane znaczenie, ze zwiazkiem o ogólnym wzorze HR, w którym R ma wyzej podane znaczenie. Reakcje te prowadzi sie ko¬ rzystnie w srodowisku wodnym, w temperaturze io podwyzszonej, np. w temperaturze okolo 70°C, po czym dodaje sie rozpuszczalnika organicznego, np. octanu etylu i zakwasza. Faze organiczna za¬ geszcza sie i pozostawia do krystalizacji, po czym odsacza wydzielonyprodukt. 15 < Jako* produkt'wyjsciowy w procesie prowadzo- rf/m 'sposobem wedlug wynalazku mozna stoso¬ wac cefalosporyne C, otrzymana na drodze fer¬ mentacyjnej. Cefalosporyne C rozszczepia sie zna¬ nymi sposobami, otrzymujac kwas 7-aminocefalo- 20 sporanowy, który acyluje sie w znany sposób, wprowadzajac do grupy aminowej w pozycji 7 zadany lancuch boczny. Jako srodki acylujace stosuje sie korzystnie chlorki lub bromki acylowe albo mieszane bezwodniki alkilowe, wytworzone 25 in situ. Przyklady procesów acylowania podano ponizej, a poza tym mozna stosowac warunki acy¬ lowania podane w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 335 136.Zwiazki majace boczny lancuch 3-tiometylowy 30 otrzymuje sie przez reakcje cefalosporyny C lub kwasu 7-aminocefalosporanowego albo jego estrów lub pochodnych z chroniona grupa aminowa z tio- lenu. Reakcje te prowadzi sie sposobami analo¬ gicznymi do znanych, np. podanych w opisach 35 patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 3 516 996 i 3 530 123.Grupe aminoadypoilowa mozna odszczepiac z ce¬ falosporyny C i grupe 7-aminowa tiolowanego kwasu lub estru acylowac w wyzej podany spo- 40 sób. Grupy estrowe usuwa sie przez redukcje, hy- drogenolize lub rozszczepianie za pomoca kwasu, w zaleznosci od rodzaju wystepujacej grupy estro- wej i ewentualnie wytwarza sie sole kwasów, które sa latwiej rozpuszczalne. W celu zwieksze- 45 nia zdolnosci produktów do ulegania procesowi absorpcji w organizmach mozna stosowac estry acetoksymetylowe kwasów chlorowcofenylotioace- tamidocefalosporanowych.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalaz- 50 ku wytwarza sie i stosuje korzystnie w postaci soli zawierajacej kation w grupie karboksylowej.Korzystnie stosuje sie sole dopuszczalne farmako- ; logicznie, np. sodowe, potasowe, litowe, amonowe lub amoniowe, np. metyloamoniowe, lub etylo- 55 amoniowe, a takze trudniej rozpuszczalne w wo¬ dzie sole wapniowe, barowe, prokainowe, chinino¬ we, cykloheksylo-dwumetyloaminowe lub dwuben- zyloetylenodwuaminowe. W celu wyosobniania z mieszanin reakcyjnych i badania wytwarzanych 60 zwiazków na zwierzetach niekiedy stosuje sie sole dwucykloheksyloaminowe.Zwiazki wytwarzane sposobem wedlug wynalaz¬ ku stosuje sie korzystnie w postaci wyjalowionych roztworów w wodzie lub izotonicznych roztworach 65 soli albo dekstrozy jako preparaty do wstrzyki¬ wania srodmiginiowego. Dawka dla doroslych wy¬ nosi 0,25—0,5 g co 4—6 godzin. Zwiazki te mozna równiez stosowac doustnie, w nieco wiekszych dawkach, wynoszacych przewaznie 0,5—1,0 g co 4—6 godzin. Preparaty do podawania doustnego maja postac tabletek, kapsulek zelatynowych lub zawiesin, które wytwarza sie znanymi sposobami.Stwierdzono, ze wiekszosc zwiazków wytwarza¬ nych sposobem wedlug wynalazku, badana w nie¬ obecnosci ludzkiej surowicy typowa metoda skos¬ nej plytki, wykazuje skutecznosc przeciwko szcze¬ pom Staphylococcus aureus odpornym na dziala¬ nie metycyliny przy minimalnym stezeniu (MIC) wynoszacym mniej niz 11 mikrogramów/ml. War¬ tosci te ustalono metoda opisana przez Bryson'a i Szybalskiego (Science 116, str. 45—46, 1952), zas wartosci w odniesieniu do szczepów gronkowców odpornych na dzialanie penicyliny ustalono metoda opisana przez Godzeskiego i in. w Antimicrobial Agents and Chemotherapy, maj 1969, str. 547—554.W badaniach stosuje sie typowe plytki Petriego, kwadratowe, wykonane z tworzywa sztucznego. Na jedna z plytek wlewa sie warstwe agaru w ilosci ml, odchyla plytke o 5 mm od poziomu i po¬ zostawia w tej pozycji do stwardnienia agaru. Ta dolna warstwa agaru zawiera antybiotyk, surowice i/lub inny material poddawany badaniu. Jako sro¬ dowisko stosuje sie Difco Penassay Agar zawie¬ rajacy 2% agaru. W celu zbadania „inaktywacji surowicy" stosuje sie z reguly 4 ml surowicy ludzkiej lub konskiej. Surowice mozna dodawac równiez do warstwy górnej, a wiec nie stosujac gradientu, ale próby wykonane z wieloma anty¬ biotykami wykazaly, ze nie ma zasadniczych róz¬ nic pomiedzy wynikami uzyskiwanymi przy sto¬ sowaniu obu typów plytek, totez surowice z re¬ guly dodaje sie tylko do warstwy dolnej.Gdy dolna, skosna warstwa agaru stwardnieje, plytke umieszcza sie poziomo, naklada druga war¬ stwe pozywki w ilosci 10 ml i pozostawia do stwardnienia.Szczepionke odpornych gronkowców przygoto¬ wuje sie rozcienczajac wodna zawiesine 1:50 roz¬ tworem wodnym lub solankowym zawierajacym 0,25% agaru. Przy badaniu mikroorganizmów Gram-ujemnych, brzeczke hodowlana otrzymana w ciagu nocy rozciencza sie w stosunku 1:50 woda zawierajaca 0,25% agaru. Po rozcienczeniu zawie¬ sine wytrzasa sie dokladnie i do prób odmierza pipeta 1 ml zawiesiny zawierajacej podwielokrot- nosc koncowego stezenia agaru wynoszacego 0,05%.Próbka powinna byc naniesiona na plytke w po¬ staci pasma równomiernie i za jednym ruchem, bardzo szybko, co osiaga sie po nabyciu odpowied¬ niej wprawy. Hodowle prowadzi sie w ciagu 24 godzin w temperaturze 35—37°C, po czym odczy¬ tuje wynik mierzac wzrost bakterii jako procent w stosunku do calkowitej dlugosci pasma i nastep¬ nie przelicza w odniesieniu do stezenia antybio¬ tyku na plytce. Jezeli linijke o dlugosci 100 mm zmniejszy sie fotograficznie tak, aby jej dlugosc odpowiadala dokladnie wnetrzu plytki wówczas dlugosc zmierzona w milimetrach jest równa ste¬ zeniu w procentach.5 94 193 6 Ustala sie wyniki srednie z dwóch pomiarów i podane nizej minimalne stezenia hamujace (MIC) sa srednimi z dwóch pasm na plytce i 2—3 ply¬ tek. Na jednej plytce mozna latwo umiescic 8 pasm. Jezeli pasmo nie ma wyraznie zarysowa¬ nego zakonczenia, wówczas mierzy sie srednie ste¬ zenie pomiedzy poczatkiem hamowania wzrostu w pasmie do konca wzrostu. Stezenie badanego antybiotyku w poszczególnych seriach plytek w mikrogramach/ml zmienia sie jak podano w ta¬ blicy I.Tablica I Numer plytki 1 1 i 2 3 i 4 i 6 7 i 8 9 i 10 11 i 12 Stezenie antybiotyku 200 100 50 1 Opisana wyzej metoda badania daje w przy¬ padku penicylin i cefalosporyn zadowalajaca" do¬ kladnosc wyników. W celu oznaczenia aktywnosci badanych zwiazków na gronkowce uodpornione stosuje sie plytki kontrolne, zawierajace penicyli¬ ne i stafcyline lub prostafline albo inne antybio¬ tyki porównawcze. Metoda skosnej plytki wyka¬ zuje róznice pomiedzy antybiotykami nie dajace sie uchwycic przy uzyciu innych metod. Istnienie tych róznic potwierdzaja inne, bardziej szczególo¬ we badania, np. terapia zwierzeca. Wydaje sie, ze metoda skosnej plytki umozliwia lepiej niz inne metody uchwycenie niewielkich róznic w dziala¬ niu antybiotyków, a przy tym wyniki uzyskiwane ta metoda mozna przechowywac w postaci foto¬ grafii. Poza tym mozna stosowac latwo modyfi¬ kacje tej metody do specjalnych celów, np. gra¬ dienty krzyzowe.Ponizej podano 4 przepisy wytwarzania produk¬ tów wyjsciowych stosowanych w procesie prowa¬ dzonym sposobem wedlug wynalazku a nastepnie przyklady stosowania sposobu wedlug wynalazku.Przepis A. Do roztworu 7,1 g (30 milimoli) kwa¬ su 3,4-dwuchlorofenylomerkaptooctowego w 100 ml bezwodnego benzenu dodaje sie 7,5 g (0,5 ml, 60 milimoli) chlorku oksalilu i jedna krople N,N-dwu- metyloformamidu. Roztwór miesza sie w ciagu 3 godzin w temperaturze 25°C, po czym odparowuje benzen w obrotowej wyparce i syropowata pozo¬ stalosc o barwie zóltej ponownie rozpuszcza w benzenie i odparowuje benzen, w celu usuniecia reszty chlorku oksalilu. Pozostalosc o konsystencji syropu rozpuszcza sie w 50 ml acetonu i w ciagu 1 godziny wkrapla do zimnego roztworu (—5°C) 8,5 g kwasu 7-aminocefalosporanowego w 200 ml 50°/o wodnego roztworu acetonu zawierajacego 8,5 g wodoroweglanu sodowego i miesza w ciagu 2 godzin, ogrzewajac powoli do temperatury °C. Nastepnie odparowuje sie aceton w wyparce obrotowej i pozostaly wodny roztwór traktuje 100 ml octanu etylu, zakwasza kwasem solnym do wartosci pH2 i rozdziela warstwy.Warstwe wodna ekstrahuje sie powtórnie 2 por¬ cjami po 50 ml octanu etylu, polaczone wyciagi organiczne suszy nad siarczanem magnezu, prze¬ sacza i odparowuje w wyparce obrotowej. Pozo¬ stalosc o konsj^stencji klarownego syropu o barwie zóltej rozpuszcza sie w 250 ml metanolu i dodaje roztwór 30 milimoli 2-etyloheksanolanu sodowego w 100 ml etanolu. Otrzymany roztwór zageszcza sie i chlodzi, otrzymujac krysztaly soli sodowej kwasu 7-(3,4-dwuchlorofenylotioacetamido)-cefalo- sporanowego o barwie bialej.Widmo produktu w ultrafiolecie wykazuje mak¬ simum przy dlugosci fali 258 milimikronów (2 = 13400) i w widmie w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przepis B. Postepujac w sposób analogiczny do opisanego w przepisie A wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-(2,5-dwuchlorofenylotioacetamido)-cefalo¬ sporanowego. Widmo produktu w ultrafiolecie ma maksimum przy dlugosci fali 253 milimikronów (2 = 12550), a widmo w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przepis C. Postepujac w sposób analogiczny do opisanego w przepisie A wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-(3,5-dwuchlorofenylotioacetamido)-cefalo- sporanowego. Widmo produktu w ultrafiolecie ma maksimum przy dlugosci fali 260 milimikronów (2 = 15600), a widmo w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przepis D. W sposób analogiczny do opisanego w przepisie A wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-(2,4-dwuchloro- 5 -fluorofenylotioacetamido)-cefa- losporanowego. Widmo produktu w ultrafiolecie wykazuje maksimum przy dlugosci fali 257 mili¬ mikronów (2 = 17500), a widmo w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1.Przyklad I. 4,34 g soli sodowej kwasu 7-(3,4- - dwuchlorofenylotioacetamido) - cefalosporanowego rozpuszcza sie w 100 ml wodnego roztworu fosfo¬ ranu sodowego o wartosci pH 7 i do roztworu dodaje 1,16 g l-metylo-5-merkaptotetrazolu, po czym utrzymuje w temperaturze 70°C w ciagu 4 godzin, a nastepnie chlodzi, wytrzasa z octanem etylu, zakwasza kwasem solnym do wartosci pH 2 i rozdziela warstwy. Warstwe organiczna suszy sie nad siarczanem magnezowym, przesacza i od¬ parowuje. Pozostalosc o konsystencji piany roz¬ puszcza sie w etanolu, dodaje dwucykloheksylo- aminy i wykrystalizowuje w postaci soli dwu- cykloheksyloamoniowej. Kwas 7-[2-(3,4-dwuchlo- rofenylotio)-acetamido]-3-(l-metylotetrazol-5-ilotio- metylo)-cefemo-3-karboksylowy-4 wykazuje w wid¬ mie w ultrafiolecie maksimum przy dlugosci fali 260 milimikronów (2 = 11600), a widmo jego w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm"1.Przyklad II. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I 3,8 g soli sodowej kwasu 2,5- dwuchlorofenylotioacetamidocefalosporanowego i 1,1 g 5-metylo-l,3,4-tiadiazolo-2-tiolu rozpuszcza sie w 100 ml wodnego roztworu fosforanu o war¬ tosci pH 7 i w ciagu 4 godzin ogrzewa w tempe¬ raturze 70°C, po czym chlodzi, wytrzasa z octanem 40 45 50 55 607 94193 8 etylu i zakwasza kwasem solnym do wartosci pH 2. Warstwe organiczna oddziela sie, suszy nad siarczanem magnezowym i odparowuje. Pozostalosc o konsystencji gumy rozpuszcza sie w etanolu i pozostawia do krystalizacji, otrzymujac kwas 7-[2-(2,5-dwuchlorofenylotio)-acetamido]- 3 -(5-mety- ló-l,3,4-tiadiazol-2-ilotiometylo)-cefemo-3 -karboksy- lowy-4. Widmo produktu w swietle nadfioletowym wykazuje maksimum przy dlugosci fali 254 mili- mikrony (2 = 15200), a widmo w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1700 cm-1.Przyklad III. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I wytwarza sie kwas 7-(2,5- -dwuchlorofenylomerkaptoacetamido)- 3 -(N-metylo- karbamoiloksymetylo) - cefemo - 3 - karboksylowy -4, którego widmo w swietle nadfioletowym wykazuje maksimum przy dlugosci fali 256 milimikronów Tablica II 1 Badany mikroorganizm 1 S. aureus 3055 (wrazliwy na penicyline G) S. aureus 3074 (odporny na penicyline G) S. facalis X66 P. morganii S. typhosa SA12 H. pneumoniae KL14 E. aerogenes EB17 E. coli EC14 C. freundii CF17 P. aeroginosa X239 S. marcescens SE3 S. typhimurium B. bronchiseptica P. solenaecarum X185 E. amylovora C. tropicalis A17 T\ mentagrophytes A. flavus C. ulmi MIC antybiotyku f-g/ml | 2 1 0,031 0,062 400 128 32 64 128 64 128 128 128 128 »128 128 64 1128 J28 128 128 | 40 45 (2 = 13800), a widmo w podczerwieni wykazuje pasmo przy 1760 cm-1.Przyklad IV. W sposób analogiczny do opi¬ sanego w przykladzie I wytwarza sie sól sodowa kwasu 7-{2-[(3-chloro-4-fluorofenylo)-tio]-acetami- do}-3-{[(5-metylo-l*3,4-tiadiazol- 2 -ilo) -tio]metylo})- -cefemo-3-karboksylowego-4. Widmo produktu w podczerwieni wykazuje pasmo przy dlugosci fali 1760 cm-1, a w swietle nadfioletowym widmo ma maksimum przy dlugosci fali 270 milimikronów (2 = 14200). Produkt ten wykazuje in vitro mini¬ malne stezenia hamujace w mikrogramach na 1 ml agaru w stosunku do mikroorganizmów po¬ dane w tablicy II.Minimalne stezenie hamujace zwiazku wytwo¬ rzonego w sposób opisany w przykladzie IV w stosunku do Streptococcus pyogenes C203 w brzecz¬ ce wynosi 0,008 mikrograma/ml.Srednia dawka skuteczna tego zwiazku (ED5!)) przy stosowaniu podskórnym przeciwko S. pyoge¬ nes wynosi 0,281 mikrograma/ml, podczas gdy war¬ tosc LD50 wynosi 1260.Sól otrzymana w sposób opisany w przykladzie IV badano w celu okreslenia jej minimalnego ste¬ zenia hamujacego w porównaniu z odpowiednimi stezeniami znanych antybiotyków, takich jak me¬ tycylina, cefalotyna i cefalorydyna, w stosunku do niektórych bakterii. Wyniki podano w tablicy 3.Numery kultur bakterii i sposób prowadzenia ba¬ dan oparto na artykule W. E. Wiek i D. A. Preston pt. Weterogeneous Methicillin — Resistand Staphy- lococcus Aureus, opublikowanym w Progress in Antimicrobial and Anticancer Chemotherapy, spra¬ wozdanie z VI International Congress of Chemo¬ therapy, tom 1, Tokyo 1970. W próbach tych szcze¬ pionke rozcienczano do 10* bakterii w jednej pla¬ mie. Jako próby porównawcze stosowano kultury 3055 (wrazliwe na dzialanie benzylopenicyliny i H232 (odporne na dzialanie benzylopenicyliny).Pozostale kultury wymienione w tablicy sa od¬ porne na dzialanie metycyliny i za wyjatkiem kul¬ tury 3136 sa otrzymane klinicznie. Kultura 3136 stanowi mutant po czterokrotnym przeniesieniu laboratoryjnym. W tablicy III podano minimalne stezenie hamujace w mikrogramach/ml.Tablica III Minimalne stezenie hamujace w mikrogramach/ml dla kultur S. aureus Pozywka Agar, soja, trypticase 0,5°/«NaCl fjg.e Antybiotyk metycylina cefalotyna cefalorydyna z przykladu IV metycylina cefalotyna cefalorydyna z przykladu IV Próby kontrolne 3055 1 0,13 0,03 0,03 1 0,25 0,13 0,03 H232 2 2,5 0,06 0,06 1 0,25 0,13 0,06 Badane bakterie 3130 4 0,5 0,5 0,5 16 1 1 0,25 3131 4 0,5 0,5 0,25 32 1 1 0,25 3132 4 0,5 0,25 0,13 8 0,5 0,5 0,13 3133 2 0,5 0,13 0,13 2 0,5 0,25 0,13 3134 8 2 1 1 32 1 1 0,25 3135 4 1 0,5 0,5 32 1 4 0,5 3136 4 0,5 0,13 0,25 64 1 4 0,5 3137 8 2 4 1 64 1 4 1 3138 8 1 1 1 32 2 4 0,5 3139 2 0,5 0,5 0,25 1 0,25 0,13 0,03 966 Seat- tle 4 0,5 0,5 0,25 16 0,25 0,13 0,06 1138501 Havar - mak 8 1 1 0,5 64 1 8 1 S61 4 1 1 0,5 32 1 1 0,59 94 193 PLThe subject of the invention is a method for the preparation of new halophenylthioacetimocephalosporin derivatives which effectively inhibit the growth of Staphylococcus microorganisms resistant to methicillin. Numerous publications describe the effects of the lack of effectiveness of known antibiotics on various strains of Staphylococcus and resistant to methicillin. Although these strains do not occur too often and probably appear mostly in patients with confusion and weakness, their presence was found in cultures collected in patients suffering from tumors, chronic diseases of the bones and / or joints, and chronic circulatory disorders. There are two methods of distinguishing in vitro strains of Staphylococcus aureus resistant from methicillin-resistant strains in vitro, one by using different temperatures to cultivate microorganisms, and the other by using different concentrations of sodium chloride in the culture environment. U.S. Patent No. 3,335,136 discloses certain chlorophenyl mercaptomethylcephalosporanic acids resistant to penicillin and acids and effective against gram-positive bacteria and some gram-negative bacteria, but there is no mention in this specification. about the fact that these compounds can be used to combat microorganisms methicillin-resistant Staphylococcus aureus. This description also does not contain information on the identification of Staphylococcus strains resistant to the action of methicillin. Surprisingly, it has been found that the new chlorinatedthioacetamidocephalosporin derivatives of the general formula 1, in which X and Y represent hydrogen or chlorine, were found according to the invention. so arranged that if only one of these substituents is chlorine, it is in position 3 of the benzene ring, and if both are chlorine, they are in positions 3 and 4 or 3 and 5 or 2 and the ring, Z represents a hydrogen atom or a fluorine atom, and when it is a fluorine atom, it is in the 3- or 4-position of the benzene ring and is either the only substituent of this ring, or at the same time it also contains one or two chlorine atoms as substituents. , one of which is in the 3- or 4-position of the ring, R is a 5-methyl-1,3,4-thiazol--2-ylthio, 1-methyl-5-tetrazolylthio or a methylcarbamoyloxy group and R 'is a hydrogen atom, a dicyclohexylamine group or a pharmacologically acceptable cation, are not only resistant to penicillin and are stable in acid environments, and are effective against gram-positive and many gram-negative microorganisms, but are also effective against microorganisms. highly effective against various methicillin-resistant Staphylococcus aureus microorganisms. According to the invention, compounds of general formula I, in which all symbols have the above-mentioned meanings, are prepared by reacting a compound of general formula II, in which X, Y, Z and R 'are as defined above, with a compound of the general formula HR in which R is as defined above. These reactions are preferably carried out in an aqueous environment at an elevated temperature, for example at a temperature of about 70 ° C., followed by the addition of an organic solvent, for example ethyl acetate, and acidification. The organic phase is concentrated and left to crystallize, and then the separated product is filtered off. The cephalosporin C obtained by fermentation can be used as the starting product of the process according to the invention. Cephalosporin C is cleaved by known methods to give 7-aminocephalosporanic acid, which is acylated in a known manner by introducing a desired side chain to the amino group at position 7. The acylating agents are preferably acyl chlorides or bromides or mixed alkyl anhydrides which are prepared in situ. Examples of acylation processes are given below, and in addition, the acylation conditions described in U.S. Patent No. 3,335,136 may be used. Compounds having a 3-thiomethyl side chain are obtained by reacting cephalosporin C or 7-aminocephalosporanic acid or esters thereof or derivatives with a protected amino group from thiol. These reactions are carried out analogously to those known, for example, those described in US Pat. Nos. 3,516,996 and 3,530,123. The amino adipoyl group can be cleaved from Cephalosporin C and the 7-amino group of the thiolated acid or ester acylated in the above-mentioned method. The ester groups are removed by reduction, hydrogenolysis or acid cleavage, depending on the nature of the ester group present, and optionally acid salts are formed which are more soluble. In order to increase the ability of the products to undergo absorption in organisms, acetoxymethyl esters of halophenylthioacetamide cephalosporanic acids can be used. The compounds according to the invention are prepared and preferably used in the form of a salt containing a cation in the carboxyl group. Preferably, acceptable salts are used. pharmaco-; logically, e.g. sodium, potassium, lithium, ammonium or ammonium, e.g. methylammonium, or ethylammonium, as well as the less water-soluble calcium, barium, procaine, quinine, cyclohexyl dimethylamine or dibenzylethylenediamine salts . Dicyclohexylamine salts are sometimes used to isolate and test the compounds produced on animals from the reaction mixtures. The compounds of the invention are preferably used in the form of canalised solutions in water or isotonic saline solutions or dextrose as injection preparations for intradiginium. The dose for adults is 0.25-0.5 g every 4-6 hours. These compounds can also be administered orally, in slightly larger doses, usually 0.5-1.0 g every 4-6 hours. Preparations for oral administration are in the form of tablets, gelatine capsules or suspensions, which are prepared by known methods. It has been found that most of the compounds of the invention, when tested in the absence of human serum, by the conventional slanted plate method, are effective against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus with minimum concentrations (MIC) of less than 11 micrograms / ml. These values were determined using the method described by Bryson and Szybalski (Science 116, pp. 45-46, 1952), while the values for penicillin-resistant staphylococcal strains were determined using the method described by Godzeski et al. in Antimicrobial Agents and Chemotherapy, May 1969, pp. 547-554. Conventional square Petri dishes made of plastic are used in the tests. A ml layer of agar is poured onto one of the plates, the plate is tilted 5 mm from the horizontal and left in this position until the agar has hardened. This bottom agar layer contains the antibiotic, sera and / or other material under test. Difco Penassay Agar containing 2% agar is used as the medium. For testing "serum inactivation", as a rule, 4 ml of human or horse serum are used. Sera can also be added to the top layer, so without using a gradient, but tests with multiple antibiotics have shown that there are no essential differences between The results obtained with both types of plates, so that the serum from the rule is added only to the bottom layer. When the bottom, oblique agar layer has hardened, the plate is placed horizontally, the second layer of nutrient medium is placed in an amount of 10 ml and allowed to harden. A vaccine of resistant staphylococci is prepared by diluting an aqueous suspension of 1:50 with an aqueous or brine solution containing 0.25% agar. When testing gram-negative microorganisms, the culture broth obtained overnight is diluted 1:50 with water containing 0 , 25% agar. After dilution, shake the suspension thoroughly and pipette 1 ml of the suspension containing an aliquot of the final agar concentration of 0.05%. The sample should be streaked evenly and in one movement, very quickly, which is achieved with practice. Cultures are carried out for 24 hours at 35-37 ° C, the result is read by measuring bacterial growth as a percentage of the total strand length, and then converted to the concentration of the antibiotic on the plate. If the 100 mm ruler is photographed so that its length corresponds exactly to the inside of the plate, then the length measured in millimeters is equal to the concentration in percent.5 94 193 6 The average results of the two measurements are determined and the minimum inhibitory concentration (MIC) given below ) are the average of two bands on a plate and 2-3 plates. You can easily place 8 strands on one plate. If the band does not have a clearly defined end, the mean concentration between the beginning of growth inhibition in the band and the end of growth is measured. The concentration of the antibiotic tested in the individual series of plates in micrograms / ml varies as shown in Table I. Table I Plate number 1 1 and 2 3 and 4 and 6 7 and 8 9 and 10 11 and 12 Antibiotic concentration 200 100 50 1 Described the above test method gives a satisfactory accuracy of the results for penicillins and cephalosporins. To determine the activity of the test compounds on resistant staphylococci, control plates containing penicillin and stafcyline or prostafline or other comparative antibiotics are used. It shows differences between antibiotics that cannot be captured by other methods. The existence of these differences is confirmed by other, more detailed studies, for example, animal therapy. It seems that the slanted plate method is better than other methods to capture small differences in action of antibiotics, and the results obtained with this method can be stored in the form of a photograph. Moreover, it is possible to easily modify this method for special The following are 4 recipes for the production of the starting products used in the process according to the invention, and then examples for the application of the process according to the invention. Recipe A. For a solution of 7.1 g (30 mmoles) of acid 7.5 g (0.5 ml, 60 mmol) of oxalyl chloride and one drop of N, N-dimethylformamide are added to the 3,4-dichlorophenyl mercaptoacetic acid in 100 ml of anhydrous benzene. The solution is stirred for 3 hours at 25 ° C, then the benzene is evaporated on a rotary evaporator and the syrupy yellow residue is redissolved in benzene and the benzene is evaporated to remove residual oxalyl chloride. The syrupy residue is dissolved in 50 ml of acetone and, within 1 hour, 8.5 g of 7-aminocephalosporanic acid in 200 ml of 50% aqueous acetone containing 8.5 g of sodium bicarbonate are added dropwise to a cold solution (-5 ° C) within 1 hour and Stirs for 2 hours while slowly warming to ° C. The acetone is then evaporated in a rotary evaporator and the remaining aqueous solution is treated with 100 ml of ethyl acetate, acidified with hydrochloric acid to pH2 and the layers are separated. The aqueous layer is re-extracted with 2 portions of 50 ml of ethyl acetate, the combined organic extracts are dried over magnesium sulphate. it is filtered and evaporated on a rotary evaporator. The residue, with the consistency of a clear yellow syrup, is dissolved in 250 ml of methanol and a solution of 30 mmol of sodium 2-ethylhexoxide in 100 ml of ethanol is added. The resulting solution is concentrated and cooled to give white crystals of the 7- (3,4-dichlorophenylthioacetamido) -cephalosporanic acid sodium salt. The ultraviolet spectrum of the product shows a maximum at a wavelength of 258 millimicrons (2 = 13,400) and Infrared shows a band at a wavelength of 1760 cm-1. Recipe B. By following the procedure described in recipe A, the sodium salt of 7- (2,5-dichlorophenylthioacetamido) cephalosporan is prepared. The ultraviolet spectrum of the product has a maximum at a wavelength of 253 millimicrons (2 = 12,550), and the infrared spectrum shows a band at a wavelength of 1760 cm-1. Recipe C. Proceeding analogously to recipe A, the sodium salt of 7- acid is produced (3,5-dichlorophenylthioacetamido) cephalosporan. The ultraviolet spectrum of the product has a maximum at a wavelength of 260 millimicrons (2 = 15600) and the infrared spectrum shows a band at a wavelength of 1760 cm-1. Recipe D. The sodium salt of 7- (2) is prepared analogously to recipe A. 2,4-dichloro-5-fluorophenylthioacetamido) cephalosporan. The ultraviolet spectrum of the product shows a maximum at a wavelength of 257 milli microns (2 = 17,500) and the infrared spectrum shows a band at a wavelength of 1760 cm-1. Example I. 4.34 g of sodium salt of 7- (3,4-) - dichlorophenylthioacetamido) - cephalosporan is dissolved in 100 ml of aqueous sodium phosphate solution with a pH value of 7 and 1.16 g of 1-methyl-5-mercaptotetrazole are added to the solution, and then kept at 70 ° C for 4 hours, it is then cooled, shaken with ethyl acetate, acidified with hydrochloric acid to pH 2 and the layers separated. The organic layer is dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated. The foam-like residue is dissolved in ethanol, the dicyclohexylamine is added and the mixture crystallizes as the dicyclohexylammonium salt. 7- [2- (3,4-Dichlorophenylthio) -acetamido] -3- (1-methyltetrazol-5-ylthio-methyl) -cefem-3-carboxylic acid-4 shows a maximum in the ultraviolet spectrum at the length of wave length of 260 millimicrons (2 = 11,600), and its infrared spectrum shows a band at a wavelength of 1760 cm "1. Example II. In a similar manner to that described in Example I, 3.8 g of sodium salt of 2,5-dichlorophenylthioacetamidocephalosporanic acid and 1.1 g of 5-methyl-1,3,4-thiadiazole-2-thiol are dissolved in 100 ml of an aqueous phosphate solution, pH 7, and heated for 4 hours at 70 ° C, then cooled. is shaken with ethyl acetate 40 45 50 55 607 94193 8 and acidified with hydrochloric acid to pH 2. The organic layer is separated, dried over magnesium sulphate and evaporated.The gum-like residue is dissolved in ethanol and allowed to crystallize to give the acid 7- [ 2- (2,5-dichlorophenylthio) -acetamido] - 3 - (5-methyl-l, 3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl) -cefem-3-carboxyl-4. Product spectrum in ultraviolet light it shows a maximum at a wavelength of 254 milli- microns (2 = 15200), and the infrared spectrum shows a band at a wavelength of 1700 cm-1. Example III. In a manner analogous to that described in Example 1, the 7- (2,5-dichlorophenyl mercaptoacetamido) - 3 - (N-methylcarbamoyloxymethyl) - cephem-3 - carboxylic acid -4 acid is produced, whose spectrum in ultraviolet light shows a maximum at wavelength 256 millimicrons Table II 1 Tested microorganism 1 S. aureus 3055 (penicillin G sensitive) S. aureus 3074 (penicillin G resistant) S. facalis X66 P. morganii S. typhosa SA12 H. pneumoniae KL14 E. aerogenes EB17 E coli EC14 C. freundii CF17 P. aeroginosa X239 S. marcescens SE3 S. typhimurium B. bronchiseptica P. solenaecarum X185 E. amylovora C. tropicalis A17 T \ mentagrophytes A. flavus C. ulmi Antibiotic MIC fg / ml | 2 1 0.031 0.062 400 128 32 64 128 64 128 128 128 128 128 128 64 1128 J28 128 128 | 40 (2 = 13,800) and the infrared spectrum shows a band at 1760 cm-1. Example IV. The sodium salt of 7- {2 - [(3-chloro-4-fluorophenyl) -thio] -acetamino} -3 - {[(5-methyl-1 *) is prepared analogously to that described in Example 1. 3,4-thiadiazol-2-yl) -thio] methyl}) - cephem-3-carboxylic-4. The infrared spectrum of the product shows a band at a wavelength of 1760 cm-1, and in ultraviolet light the spectrum has a maximum at a wavelength of 270 millimicrons (2 = 14,200). This product shows in vitro the minimum inhibitory concentration in micrograms per ml of agar against the microorganisms given in Table II. The minimum inhibitory concentration of the compound prepared as described in Example IV against Streptococcus pyogenes C203 in broth is 0.008 micrograms / ml. The mean effective dose of this compound (ED5!) when administered subcutaneously against S. pyogenees is 0.281 micrograms / ml, while the LD50 value is 1260. The salt prepared as described in Example IV was tested in in order to determine its minimum inhibitory concentration as compared to the corresponding concentrations of known antibiotics such as methicillin, cephalotin and cephaloridin against some bacteria. The results are given in Table 3. Bacterial culture numbers and the test method were based on the article by W. E. Age and D. A. Preston entitled Veterogeneous Methicillin - Resistand Staphylococcus Aureus, published in Progress in Antimicrobial and Anticancer Chemotherapy, Report on the VI International Congress of Chemotherapy, Vol. 1, Tokyo 1970. In these trials, the strain was diluted with up to 10% of bacteria in one patch. May. Cultures 3055 (benzylpenicillin and H 2 32 sensitive (benzylpenicillin resistant) were used as comparative trials. The other cultures listed in the table are methicillin resistant and, except for culture 3136, are clinically obtained. Culture 3136 is a mutant after being transferred four times. Table III shows the minimum inhibitory concentration in micrograms / ml. Table III Minimum inhibitory concentration in micrograms / ml for cultures of S. aureus Agar, soybean, trypticase 0.5 ° / «NaCl fjg.e Antibiotic methicillin cephalotin cephaloridine from example IV methicillin cephalotin cephaloridine from example IV Control samples 3055 1 0.13 0.03 0.03 1 0.25 0.13 0.03 H232 2 2.5 0.06 0.06 1 0.25 0.13 0, 06 Test bacteria 3 130 4 0.5 0.5 0.5 16 1 1 0.25 3 131 4 0.5 0.5 0.25 32 1 1 0.25 3 132 4 0.5 0.25 0.13 8 0 , 5 0.5 0.13 3 133 2 0.5 0.13 0.13 2 0.5 0.25 0.13 3 134 8 2 1 1 32 1 1 0.25 3 135 4 1 0.5 0.5 32 1 4 0.5 3 136 4 0.5 0.13 0.25 64 1 4 0.5 3 137 8 2 4 1 64 1 4 1 31 38 8 1 1 1 32 2 4 0.5 3 139 2 0.5 0.5 0.25 1 0.25 0.13 0.03 966 Seat background 4 0.5 0.5 0.25 16 0.25 0.13 0.06 1138501 Havar - poppy 8 1 1 0.5 64 1 8 1 S61 4 1 1 0.5 32 1 1 0.59 94 193 PL