PT100357B

PT100357B - Compostos lactama macrociclicos, seu processo de preparacao e intermediarios, e composicoes que os contem

Info

Publication number: PT100357B
Application number: PT100357A
Authority: PT
Inventors: Richard J Pariza; Leslie A Freiberg; Carla Edwards; Hugh N Nellans
Original assignee: Abbott Lab
Priority date: 1991-04-09
Filing date: 1992-04-08
Publication date: 1999-06-30
Also published as: JPH06509326A; ATE139697T1; ES2091471T3; PT100357A; US5538961A; EP0579770B1; IL101504A0; AU663089B2; CA2103913A1; EP0579770A1; DK0579770T3; IE73236B1; GR3020853T3; KR100222014B1; IL101504A; IE921045A1; EP0579770A4; DE69211845D1; AU1910392A; DE69211845T2

Description

Compostos lactama macrocíclicos, seu processo de preparação e intermediários, e composições que os contêm

RESUMO

O presente invento refere-se a compostos lactama de fórmula (I)

e aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que A é seleccionado de entre

invento também se refere a processos de síntese e a intermediários úteis na preparação dos compostos do invento, bem como a composições contendo os compostos e à sua utilização na estimulação do movimento contráctil do aparelho gastrintestinal.

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•rtj		-2-
		MEMÓRIA DESCRITIVA

Este pedido é uma continuação em parte do Pedido de Patente dos E.U.A., co-pendente, com o N^a . de Série 07/682 836, depositado em 9 de Abril de 1991.

ÂMBITO TÉCNICO presente invento refere-se a novos derivados lactama macrocíclicos de eritromicinas A, B, C e D e a composições farmacêuticas contendo estes compostos, bem como à sua utilização no tratamento de desordens gastrintestinais e na facilitação da colocação de instrumentação de diagnóstico e de terapia no intestino delgado proximal. O invento refere-se ainda a processos para a preparação destes compostos e dos intermediários sintéticos empregues nesses processos.

ANTECEDENTES DO INVENTO

A função primordial do tracto alimentar ou gastrintestinal (GI) é proporcionar ao organismo uma quantidade equilibrada de água, electrólitos e nutrientes. Para que isto seja alcançado, os alimentos devem-se mover ao longo do tracto GI a uma velocidade apropriada para que tenham lugar a digestão, a absorção e a secreção. Os alimentos são normalmente transportados ao longo do tracto GI de forma bem coordenada, por movimentos propulsores que são mediados por um conjunto de contracções do músculo liso, conhecidos por complexos migratórios mioeléctricos, num processo vulgarmente referido como peristalse.

A existência de defeitos no padrão normal de motilidade pode conduzir ao desenvolvimento de desordens crónicas, dolorosas e debilitantes. Por exemplo, um esfincter esofágico inferior incompetente ou fraco, pode resultar no refluxo frequente de alimentos ingeridos, desde o estômago para o esófago o que pode conduzir à esofagite. Os agentes procinéticos (também denominados agentes promotores de motilidade) são úteis no tratamento da esofagite de refluxo, uma vez que (a) aumentam a pressão do esfincter esofágico inferior, inibindo assim o refluxo; (b) aumentam a força da peristalse esofágica para facilitar a remoção de

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alimentos do esófago para o estômago; e (c) aumentam o esvazia mento gástrico, diminuindo portanto a massa disponível para re fluxo.

Existe, no entanto, a necessidade de encontrar agentes procinéticos melhorados para o tratamento desta desordem. As drogas colinérgicas usadas presentemente, como betanecol e agentes bloqueadores do receptor da dopamina, como a metoclopramida, podem exibir sérias desvantagens. O betanecol, por exemplo, deve ser evitado por pacientes idosos, ao passo que a metoclopramida possui um índice terapêutico muito estreito, provoca efeitos secundários pronunciados no sistema nervoso central (SNC) e há conhecimento de que estimula a libertação da prolactina.

Os pacientes que sofrem de outras desordens relacionadas com a motilidade GI, tais como esvaziamento gástrico retardado, gastroparese diabética, anorexia, estase da vesícula biliar, íleo adinamico induzido cirurgicamente e obstipação crónica (inércia colónica), podem também beneficiar com o tratamento com agentes procinéticos. Adicionalmente, os agentes procinéticos podem auxiliar na colocação de instrumentação de diagnóstico e de terapia, tais como inserção de tubos internos de alimentação no intestino delgado proximal.

Outra desordem da motilidade GI, menos comum mas muito dolorosa e disruptiva, é a pseudo-obstrução intestinal crónica. Os pacientes gravemente afectados por este problema não podem tolerar alimentação por via oral e requerem uma nutrição totalmente parentérica. A metoclopramida e a betanecolina são também usadas no tratamento desta desordens, mas, frequentemente com resultados pouco satisfatórios. Os agentes procinéticos poderiam não só ser úteis no alívio da angústia associada a esta desordem, como também, em casos graves, poderiam ser usados para facilitar o tratamento por descompressão do tracto GI superior, por aspiração tubal nasogástrica. A motilidade gástrica aumentada em consequência do uso de um agente procinético, mostrou facilitar a colocação dos tubos necessários no intestino.

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-4Os agentes procinéticos lactona macrocíclica (macrolido) são conhecidos. Por exemplo, J. S. Gidda et al., no Pedido de Patente Europeia N². 0349100, publicado em 3 Janeiro 1990, descreve macrolidos de 12 membros, para uso como promotores da motilidade gastrintestinal. S. Omura e Z. Itoh, na Patente dos EUA N^a. 4677097, depositada em 30 de Junho de 1987, o Pedido de Patente Europeia N^s. 215355, publicado em 25 de Março de 1987 e o Pedido de Patente Europeia N^s. 213617, publicado em 11 de Março de 1987, descrevem derivados das eritromicinas A, B, C e D que são úteis como estimulantes dos movimentos contrácteis do tracto digestivo. No entanto, os compostos destas referências são distintos dos do presente invento, no qual se descrevem novos derivados lactama das eritromicinas que possuem um grau inesperado de actividade procinética.

SUMÁRIO DO INVENTO

De acordo com um aspecto do presente invento, proporcionam-se agentes procinéticos lactama macrocíclica de fórmula (I):

e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que a linha ponteado é uma ligação opcional. Na fórmula (I), A é seleccionado de entre

em que uma linha ondulada representa uma ligação possuindo qual73 834

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-5quer uma das orientações estereoquímicas possíveis.

R¹ e R² na fórmula (I) podem ser seleccionados, independentemente um do outro, de entre hidrogénio, alquilo inferior, alquilo inferior substituído com halogénio, alquilo inferior substituído com ciano, alquilo inferior substituído com hidroxilo, alcenilo inferior, alcinilo inferior, cicloalquilo inferior (cicloalquil inferior)metilo e benzilo;

R³ na fórmula (I), pode estar ausente ou pode ser seleccionado de entre alquilo inferior, alcenilo inferior, alcinilo inferior e benzilo e está acompanhado por um contra-ião farmaceuticamente aceitável, de modo a formar um sal de amónio quaternário.

R⁴, nas fórmulas (I) e (III) pode ser hidrogénio ou, tomado em conjunto com R^, pode formar uma ponte de éter.

R⁵ na fórmula (I) pode ser -OH ou -OR-^-θ, em que R^-θ é seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo inferior, alcanoílo inferior e -S(O)₂CH3 ou, tomado em conjunto com R^ e com os carbonos aos quais estão ligados, pode formar um carbonato cíclico.

R⁶ na fórmula (I) pode ser hidrogénio, -OH, ou -0R¹¹, em que R¹¹ é seleccionado de entre o grupo constituído por alquilo inferior, alcanoílo inferior e -S(O)₂CH₃; ou, tomado em conjunto com R⁴, pode formar uma ponte de éter; ou, tomado em conjunto com r5 e com os carbonos aos quais estão ligados, pode formar um carbonato cíclico.

R⁷ na fórmula (I) pode ser hidrogénio ou metilo.

R⁸ na fórmula (I) pode ser hidrogénio ou alquilo inferior.

R^ na fórmula (I) pode ser hidrogénio ou hidroxilo.

De acordo com outro aspecto do presente invento, são pro73 834

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porcionados processos de síntese para a preparação dos compostos do invento, bem como novos intermediários de fórmula (V) e (VI)

úteis para esses processos, em que é -OH ou hidrogénio, R? é hidrogénio ou metilo, R⁸ é hidrogénio ou alquilo inferior e R⁹ é hidrogénio ou hidroxilo. Os compostos lactama do invento podem ser preparados directamente a partir destes intermediários, por indução do fecho do anel do amino-álcool de fórmula (V), ou por uma abertura do epóxido e ciclização espontânea do epóxido de fórmula (VI). Em alternativa, o intermediário epóxido pode ser primeiramente convertido a um azido-álcool e seguidamente reduzido ao amino-álcool anterior, antes da indução do fecho do anel.

Segundo um outro aspecto do presente invento, são proporcionadas composições farmacêuticas para estimulação dos movimentos contrácteis do tracto gastrintestinal, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto do invento e um veículo farmaceuticamente aceitável.

Ainda segundo um outro aspecto do presente invento, é proporcionado um método de tratamento de desordens caracterizadas por uma motilidade gastrintestinal diminuída, tal como refluxo esofágico, gastroporese diabética, gastroparese pediátrica, ileum paralítico pós-operatório, pseudo-obstrução intestinal, estase da vesícula biliar, anorexia, gastrite, émese e obstipação crónica, compreendendo a administração a um ser humano, ou a um mamífero inferior, necessitado desse tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto do

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invento. Segundo um aspecto relacionado, o presente invento proporciona um método de facilitação da colocação de instrumentação de diagnóstico e de terapia, tal como tubagem entérica de alimentação, no intestino delgado proximal, compreendendo a administração a um ser humano ou a um mamífero inferior, necessitado desse tratamento, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto do invento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO presente invento compreende novos compostos de fórmula (I), e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são agentes procinéticos gastrintestinais, Os compostos do presente invento não exibiram actividade anti-bacteriana em ensaios experimentais in vitro. Estes compostos são derivados lactama sintéticos das eritromicinas A a D; consequentemente, os substituintes r6 e r7 das fórmulas do presente invento, são determinados

inicialmente, como	ilustrado abaixo,	pela eritromicina
particular usada como	material de partida:
Eritromicina	R⁶ resultante	R⁷ resultante
A	-OH	metilo
B	hidrogénio	metilo
c	-OH	hidrogénio
D	hidrogénio	hidrogénio
No entanto, as	lactamas podem ser	ainda derivatizadas,

usando metodologia de síntese bem conhecida, para obter compostos de acordo com o invento possuindo também outros substituintes R⁶.

Uma classe de compostos do presente invento, formada quando A da fórmula (I) é um grupo da fórmula (II), pode ser representada pela fórmula:

(segue fórmula Ia)

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R³

Outra classe de compostos grupo de fórmula (III) em que do

R⁴ invento, formada quando é hidrogénio, pode ser

A é um repre-

>

em que, como sempre nesta descrição, uma linha ondulada representa uma ligação possuindo qualquer uma das orientações estereoquímicas possíveis.

Uma subclasse correspondente de compostos do invento, ocorre quando R⁴ de fórmula (III), em conjunto com R® forma uma ligação éter; estes compostos podem ser representados pela fórmula (segue fórmula Ic)

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4970.PG.01 /6

«...

R³

Ainda outra classe de compostos do presente invento, formafórmula (IV), pode ser representada da quando A é um pela fórmula:

grupo de

Os compostos representativos do presente invento incluem:

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-^ÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina A·*> lactama);

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(di-metilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina B— lactama);

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-Dídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di73 834

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-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (metilamino)-j3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metil(2-propenil)amino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

Brometo [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-

3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetil(2-propenil)amónio)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-eno-7-ona;

13-0, 14-O-carbonato de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*, 11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-11-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-ρ-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-eno-7-ona;

[lR-(1R*2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*,14S*)]-9-[(2,6-Didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadecan-7-ona;

[IR-(IR*,2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*,14S*)]-9-[(2,6-Didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-( dimetil amino ) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15,16-dioxatriciclo[10.2.1.l¹>⁴]pentadecan-7-ona;

[3R-(3R*,4S*,5S*,6R*,7R*,9S*,11R*,12R*,13R*,14R*)]-4-[(2,6-Didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-14-etil-7,12,13-tri-hidroxi-3,5,7,9,11,13-hexametil-6-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-azaciclotetradecano-2,10-diona (eritromicina A-lactama);

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[2R-(2R*,3R*,4R*

5R*,8R*,9S*,10S*

11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdeSOXÍ-

3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di

-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-jS-D-xilo-hexopiranosil] oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-eno-7-ona (enol-éter de eritromicina C

-lactama);

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-Didesoxi-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,

10.12.14- hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-Ό-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.ljpentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina D-lactama);

10.12.14- hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-β-Ό-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec

-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,4,6-TrÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-Trídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-Trídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil73 834

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-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(n-butilmetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(n-propilmetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxi-3-C-meti1-3-O-meti1-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-eti1-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-propilmetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona; e [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxí-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-butilmetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxí]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

bem como os sais farmaceuticamente aceitáveis.

Compostos preferidos do presente invento incluem:

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(di-metilamino)-jS-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina A-lactama);

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-liexopiranosil)oxi]-5-etil-3-liidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino ) -j8-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina B-lactama);

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-Didesoxi73 834

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-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1] pentadec-14-eno-7-ona;

brometo de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,1OS*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-Didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmeti lamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15oxabiciclo-[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetil(2-propenil)amónio)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo-[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona brometo;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-)8-D-xilo-hexopiranosil] oxi ]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1] pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-TrÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-

- (dimetilamino) -jS-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-TrÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-

- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona; e [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-DídesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-butilmetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona bem como os sais farmaceuticamente aceitáveis.

Os termos seguintes são usados como definido abaixo em toda a descrição e nas reivindicações apensas.

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O termo carboxilato, tal como usado nesta descrição refere-se ao anião de um ácido carboxílico orgânico, tal como os ácidos acético, succínico, cítrico, láctico, maleico, fumárico, palmítico, eólico, pamóico, músico, D-glutâmico, d-canfórico, glutárico, glicólico, ftálico, tartárico, fórmico, láurico, esteárico, salicílico, metanossulfónico, benzenossulfónico, sórbico, pícrico, benzóico, cinâmico e semelhantes.

termo alquilo inferior substituído com ciano, tal como usado nesta descrição, refere-se a um grupo alquilo inferior, como definido abaixo, que possui um átomo de hidrogénio substituído com um substituinte ciano, como por exemplo cianometilo ou cianoetilo.

O termo halogéneo refere-se a cloro (Cl), bromo (Br), fluoro (F) e iodo (I).

termo alquilo inferior substituído com halogéneo refere-se a um grupo alquilo inferior, como definido abaixo, que possui um, dois ou três substituintes halogéneo, como por exemplo, fluoroetilo, difluoroetilo, clorometilo, trifluoroetilo e semelhantes.

O termo alquilo inferior substituído com hidroxilo refere-se a um grupo alquilo inferior, como definido abaixo, que tem um átomo de hidrogénio substituído por um substituinte hidroxilo, como por exemplo hidroximetilo ou hidroxietilo.

termo alcanoílo inferior refere-se a um substituinte de fórmula R¹⁰C(0)- em que R¹⁰ é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, como definido abaixo.

termo alcenilo inferior refere-se a grupos hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, contendo de dois a seis átomos de carbono e possuindo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono. Exemplos de grupos alcenilo inferior incluem vinilo, alilo, 2- ou 3-butenilo, 2-, 3- ou 4-pentenilo e as suas

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formas isoméricas. A(s) dupla(s) ligação pode ter configuração cis ou trans.

termo alquilo inferior refere-se a grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada, compreendendo um a seis átomos de carbono, incluindo, mas não estando limitado a metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, neopentilo e semelhantes.

O termo alcinilo inferior refere-se a grupos hidrocarboneto contendo de dois a seis átomos de carbono, e possuindo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono. Exemplos de grupos alcinilo inferior incluem etinilo, propargilo e butinilo.

termo cicloalquilo inferior refere-se a hidrocarbonetos cíclicos possuindo três a seis átomos de carbono no anel.

termo esvaziamento gástrico retardado tal como usado nesta descrição refere-se a uma evacuação lenta do conteúdo gástrico para o intestino delgado, não provocada pela obstrução mecânica da saída gástrica. Os pacientes que sofrem de uma disfunção motora gástrica severa podem ficar incapacitados por náusea intratável, vómitos e estase gástrica. Isto pode conduzir à incapacidade de crescimento num paciente jovem ou a uma perda de peso significativa e mal-nutrição em adultos (cf. Medicine for the Practicing Physician Second Edition ed. J. Willis Hurst, Butterworth Publishers, Boston, 1988, páginas 1364-66).

termo gastroparese refere-se a paralisia do estômago.

termo pseudo-obstrução intestinal refere-se a uma condição caracterizada por obstipação, cólicas e vómitos, mas sem evidência de obstrução orgânica aparente na laparotomia (cirurgia abdominal).

termo ileo paralítico ou adinâmico refere-se a obstrução dos intestinos devido a inibição da motilidade do intestino.

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O termo esofagia de refluxo”, refere-se à inflamação do esófago em consequência do fluxo de retorno, frequente ou crónico do conteúdo do estômago para o esófago.

termo sais farmaceuticamente aceitáveis refere-se aos sais de adição de ácido dos compostos de fórmula (I) que são, no âmbito do julgamento médico, adequados para uso em contacto com os tecidos de seres humanos e de animais inferiores, sem provocar toxicidade, irritação, resposta alérgica e sintomas semelhantes indevidos, com uma razão benefício/risco razoável, e que são eficazes para o uso pretendido.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na arte. Por exemplo, S. M. Berge et al., descrevem sais farmacêuticos em detalhe em J. Pharmaceutical Sciences, 1977, vol. 66, páginas 1-19. Exemplos de sais de adição de ácido, não tóxicos, farmaceuticamente aceitáveis são sais de um grupo amino formados com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido perclórico ou com ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido oxálico, ácido maleico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido succínico ou ácido malónico ou usando outros métodos utilizados na arte, tais como permuta iónica. Outros sais farmaceuticamente aceitáveis incluem nitrato, bissulfato, borato, formato, butirato, valerato, 3-fenilpropionato, canforato, adipato, benzoato, oleato palmitato, estearato, laurato, lactato, fumarato, ascorbato, aspartato, nicotinato, p-toluenossulfonato, canforsulfonato, metanossulfonato, 2-hidroxietanossulfonato, gluconato, gluco-heptonato, 1actobionato, glicerofosfato, pectinato, laurilsulfato, alginato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanossulfonato, hemissulfato, heptonato, hexanoato, 2-naftalenossulfonato, pamoato, perssulfato, pivalato, propionato, undecanoato e semelhantes e podem ser preparados de acordo com métodos convencionais. Os sais de metais alcalinos ou alcalino-terrosos representativos, incluem os sais de sódio, cálcio, potássio, magnésio e semelhantes. Os contra-iões farmaceuticamente aceitáveis para os compostos sal de amónio quaternário, formados quando R^ está presente, incluem halogeneto, hidróxido, carboxilato, sulfato, fosfato, nitrato, (alquil inferior)sulfonato e

73 834 4970.PG.01	-17-	CL ~ ..... - f . / - -
arilsulfonato.
Tal como é usado nesta farmaceuticamente aceitável	descrição, refere-se	o termo transportador a uma carga, diluente,

material encapsulante ou auxiliar da formulação de qualquer tipo, não tóxico, em estado sólido inerte, semi-sólido ou líquido. Alguns exemplos de materiais que podem servir como transportadores farmaceuticamente aceitáveis são os açúcares como a lactose, glucose e sacarose; amidos tais como amido de milho e amido de batata; celulose e seus derivados tais como carboximetilcelulose de sódio, etilcelulose e acetato de celulose; tragacanto em pó, malte, gelatina, talco, excipientes, como manteiga de cacau e ceras para supositório; óleos como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de açafroa, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, como propilenoglicol/ polióis como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; ésteres como oleato de etilo e laurato de etilo; ágar; agentes tampão como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico, água isenta de pirogénios; solução salina isotónica; solução de Ringer; álcool etílico e soluções tampão de fosfato bem como outras substâncias compatíveis, não tóxicas, usadas em formulações farmacêuticas. Os agentes molhantes, emulsionantes e lubrificantes tais como laurilsulfato de sódio e estearato de magnésio, bem como os agentes corantes, agentes de libertação, agentes de revestimento, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e anti-oxidantes, podem também estar presentes na composição, de acordo com o julgamento do formulador.

termo quantidade terapeuticamente eficaz de um composto do invento, refere-se a uma quantidade suficiente do composto, para tratar uma desordem gastrintestinal, com uma razão benefício/riso razoável, aplicável a qualquer tratamento médico. Deverá entender-se, no entanto, que a utilização diária total dos compostos e das composições do presente invento, será decidida pelo médico assistente, no âmbito do julgamento médico avisado. 0 nível específico de dose terapeuticamente eficaz para qualquer paciente particular, dependerá de uma diversidade de

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factores incluindo a desordem a tratar e a gravidade da desordem; da actividade do composto específico empregue; da composição específica empregue; da idade, peso corporal, estado geral de saúde, sexo e dieta do paciente; do tempo de administração, via de administração e taxa de excreção do composto específico empregue; da duração do tratamento; das drogas usadas em combinação ou coincidentes com o composto específico empregue; e de factores semelhantes, bem conhecidos na arte da medicina.

A dose diária total dos compostos do presente invento, administrada a um ser humano ou a outro mamífero, em doses únicas ou repartidas, pode ser em quantidades, por exemplo, de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg de peso corporal ou, mais frequentemente, de cerca de 0,1 a cerca de 15 mg/kg de peso corporal. As composições de dose única podem conter estas quantidades ou submúltiplos destas, de forma a perfazer a dose diária. Em geral, os regimes de tratamento de acordo com o presente invento, compreendem a administração a um paciente necessitado desse tratamento, de cerca de 10 mg a cerca de 1000 mg do(s) composto(s) do presente invento por dia, em doses múltiplas ou numa dose única.

As formas de dosagem líquidas para administração oral, podem incluir emulsões, micro-emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis, contendo diluentes inertes usados vulgarmente na arte, tais como água. Essas composições podem também compreender adjuvantes tais como agentes molhantes, emulsionantes ou agentes de suspensão e agentes adoçantes, aromatizantes ou perfumantes.

As preparações injectáveis, como por exemplo suspensões aquosas ou oleaginosas estéreis, injectáveis, podem ser formuladas de acordo com o praticado na arte, usando agentes de dispersão ou molhantes e de suspensão adequados. A preparação injactável estéril pode também ser uma solução, suspensão ou emulsão estéril injectável, num diluente ou solvente não tóxico, parentericamente aceitável, como por exemplo, em solução em 1,373 834

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-butanodiol. De entre os veículos e solventes que podem ser empregues, destaca-se a água, a solução de Ringer, U.S.P. e solução isotónica de cloreto de sódio. Adicionalmente, empregam-se com frequência óleos fixos estéreis, como solvente ou meio de suspensão. Para este fim, pode empregar-se qualquer óleo fixo suave, incluindo mono- e di-glicéridos sintéticos. Adicionalmente, pode, usar-se ácidos gordos tais como ácido oleico, na preparação de composições injectáveis.

A formulação injectável pode ser esterilizada, por exemplo por filtração através de um filtro que retenha bactérias ou por incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis, que podem ser dissolvidas ou dispersas em água estéril, ou noutro meio estéril injectável, no momento de utilização.

Para prolongar o efeito de uma droga, é frequentemente desejável retardar a absorção de uma droga administrada por injecção subcutânea ou intramuscular. A forma mais comum de obter este fim é injectar uma suspensão de material cristalino ou amorfo com baixa solubilidade em água. A taxa de absorção da droga torna-se dependente da velocidade de dissolução da droga que é, por sua vez, dependente do estado físico da droga, como por exemplo, do tamanho dos seus cristais e da sua forma cristalina. Outra forma de retardar a absorção de uma droga, consiste em administrar a droga na forma de solução ou suspensão em óleo. As formas injectáveis de depósito podem também ser preparadas, formando matrizes de microcápsulas de drogas e polímeros biodegradáveis, como polilactido-poliglicólido. Dependendo da razão droga/polímero e da composição do polímero, a taxa de libertação da droga pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli-ortoésteres e polianidridos. Os injectáveis em depósito podem também ser preparados, aprisionando a droga em lipossomas ou microemulsões compatíveis com os tecidos corporais.

As formas de dosagem sólidas para administração oral podem incluir cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, pílulas esféricas e

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grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto activo pode ser misturado com pelo menos um diluente inerte como sacarose, lactose ou amido. Estas formas de dosagem podem também compreender, como é prática corrente, substâncias adicionais que não diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes de comprimidos e outros auxiliares tais como estearato de magnésio e celulose microcristalina. No caso das cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem podem também compreender agentes tampão. Os comprimidos e pílulas podem ser preparados, adicionalmente, com revestimentos entéricos e outros revestimentos controladores de libertação.

Podem também empregar-se composições sólidas do mesmo tipo, como enchimentos em cápsulas de gelatina macia e dura, usando excipientes como lactose ou açúcar do leite, bem como polietilenoglicóis de massa molecular elevada e semelhantes.

Os compostos activos podem também ser combinados em forma micro-encapsulada, com um ou mais excipientes, como referido acima. As formas de dosagem sólidas de comprimidos, drageias, cápsulas, pílulas e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e envólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecidos na arte de formulação farmacêutica. Podem também conter opcionalmente agentes opacificantes e podem também possuir uma composição tal que libertem o(s) ingrediente(s) activo(s) apenas, ou preferivelmente, numa certa parte do tracto intestinal, opcionalmente de forma retardada. Exemplos de composições para embutir que podem ser usadas, incluem substâncias poliméricas e ceras.

Os compostos do presente invento podem ser sintetizados, pelos esquemas reaccionais I a VII, apresentados abaixo, em que A e R^-R⁹ correspondem aos grupos definidos relativamente à fórmula (I). No entanto, deverá notar-se que antes do fecho do anel e formação de uma lactama, R⁶, nos esquemas que se seguem, se limita a hidrogénio e -OH. Além disso deve observar-se que certos esquemas, tal como o Esquema IA são úteis apenas quando R⁶ é -OH.

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Esquema I

A eritromicina A ou C é tratada com reagente adequado para efectuar a acetilação do grupo 2'-hidroxilo, tal como anidrido acético ou cloreto de acetilo, na presença de uma base adequada, tal como trietilamina, piridina ou DMAP. O composto 2'-0-acetil resultante é convertido num composto com o anel contraído, de fórmula 3, por tratamento com um ácido não aquoso adequado, tal como ácido acético glacial, seguido de tratamento com uma base adequada, preferivelmente num solvente polar, como por exemplo, tratamento com carbonato de potássio em DMF ou acetato de amónio em metanol. Em alternativa, os compostos de Fórmula 1 são convertidos directamente nos compostos de Fórmula 3, pelo processo descrito no esquema IA, abaixo.

composto de Fórmula 3 é, por sua vez, convertido no epóxido de Fórmula 4, por tratamento com bis[a,a-bis(trifluorometil)benzeno-metanolato]difenil-enxofre (sulfurano de Martin). Em alternativa, o grupo hidroxilo no carbono número 13, é activado por tratamento com um reagente adequado como por exemplo, cloreto de metanossulfonilo e o éster activado é deslocado para formar um epóxido, por tratamento com uma base adequada, como por exemplo hidróxido de sódio ou potássio ou metóxido ou t-butóxido de sódio ou potássio, ou carbonato de sódio ou potássio. 0 anel epóxido do composto de Fórmula 4 é então aberto para formar um azido-álcool de Fórmula 5, por tratamento com um derivado nucleofílico de ácido hidrozóico, tal como azida de sódio ou azida de potássio. 0 azido-álcool é, por sua vez, convertido num amino-álcool de Fórmula 10, por tratamento com um agente redutor adequado, como por exemplo por hidrogenação na presença de um catalisador tal como níquel Raney, paládio em carbono ou óxido de platina, tratamento com zinco em ácido acético ou tratamento com hidreto-aluminato de lítio. O amino-álcool é ciclizado para formar uma lactama de Fórmula IA, por tratamento com uma base adequada num solvente adequado tal como hidróxido de amónio em metanol ou l,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU) em tolueno.

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4970.PG.01

Esquema IA

De acordo com o esquema IA, que é o esquema preferido para a síntese de compostos de Fórmula 11, os compostos de Fórmula 1 são feitos reagir num processo dividido em duas etapas, com vista à sua conversão em compostos de Fórmula 3. 0 composto de Fórmula 1 é primeiramente tratado com um ácido orgânico forte, como por exemplo ácido acético, ácido dicloroacético, ácido difluoroacético, ácido tricloroacético ou ácido glicólico, num solvente orgânico polar como metanol, DMF ou acetonitrilo. 0 produto de reacção intermédio não é isolado, mas tratado directamente com uma base adequada tal como acetato de amónio ou carbonato de potássio, num solvente orgânico adequado como metanol, DMF ou acetonitrilo, para formar um composto de Fórmula 3. Os reagentes preferidos são o ácido dicloroacético em acetonitrilo, seguido de carbonato de potássio numa mistura aquosa de acetonitrilo e metanol. Os compostos de Fórmula 3 são então convertidos em epóxidos de Fórmula 4, pelos métodos descritos acima no esquema reaccional 1. Estes epóxidos são subsequentemente tratados com uma amina, como por exemplo amoníaco ou metilamina e preferivelmente num solvente polar, para originar os compostos de Fórmula 11. Mais preferivelmente, os compostos de Fórmula 4 são tratados com uma solução metanólica da amina apropriada.

Esquema II

A 2⁷-O-acetileritromicina (A, B, C ou D) é tratada com um reagente adequado para proteger o grupo hidroxilo-4, tal como cloreto de benziloxicarbonilo, na presença de uma base adequada, como dimetilaminopiridina. A reacção é efectuada num solvente inerte como cloreto de metileno e, preferivelmente a uma temperatura baixa, mais preferivelmente a -25°C, para originar um derivado 2'-0-acetil-4^,,-0-benziloxicarbonileritromicina. Este composto é tratado, opcionalmente, com metanol para remover o grupo acetilo e é tratado sequencialmente com um ácido não aquoso adequado, como ácido acético glacial e com uma base adequada, como carbonato de potássio em DMF ou acetato de amónio em metanol, para originar um composto de Fórmula 6. 0 composto de Fórmula 6

834 4970.PG.01 é tratado, opcionalmente com um reagente adequado para processar a reacetilação do grupo hidroxilo-2^z e é tratado com um agente oxidante adequado, como N-clorossuccinimida/sulfureto de dimetilo/trietilamina ou per-rutenato de tetrapropilamónio/N-metilmorfolina N-óxido, para originar uma cetona de Fórmula 7. Se o grupo acetilo estiver presente, é removido com metanol e o grupo protector do grupo hidroxilo 4” é removido (preferivelmente por hidrogenólise se o grupo protector for CBZ), para originar um composto de Fórmula 8.

A cetona de Fórmula 8 é convertida numa oxima de Fórmula 9, por tratamento com hidroxilamina na presença de uma base aquedada como trietilamina. A oxima de Fórmula 9 é reduzida sob condições adequadas, como por exemplo 405 kPa (4 atm) de hidrogénio sobre um catalisador como níquel Raney, para originar uma mistura de estereoisómeros dos compostos amina de Fórmula 10 (em que a ligação amino é representada por uma linha ondulada, significativa de ambas as orientações estereoquímicas). Um isómero do composto amina é ciclizado a uma lactama de Fórmula 11 por tratamento com uma base apropriada num solvente adequado, como por exemplo hidróxido de amónio com metanol ou DBU em tolueno.

Esquema III

De acordo com o esquema reaccional III, uma eritromicina lactama de Fórmula 11, é tratada com iodo e luz na presença de uma base adequada, como acetato de sódio, para originar um derivado N-desmetilo de Fórmula 12. Um composto de Fórmula 12 é, por sua vez, tratado com um agente alquilante adequado, como brometo de alilo, para originar um composto de Fórmula 13. Em alternativa, um composto de Fórmula 12 é tratado com um aldeído apropriado para originar uma imina que é reduzida (preferivelmente in situ) por hidrogenação na presença de um catalisador adequado como, por exemplo paládio em carbono, para originar um composto de Fórmula 13. Os compostos de Fórmula 13 são tratados com iodo e luz, na presença de uma base adequada, por exemplo acetato de sódio, para originar o derivado N-desmetilo de Fórmula 14. Um composto de Fórmula 14 é, por sua vez tratado com um reagente

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4970.PG.01

alquilante adequado, como brometo de alilo, para originar um composto de Fórmula 15. Em alternativa, um composto de Fórmula 14 é tratado com um aldeído apropriado, como por exemplo acetaldeído, para originar uma imina que é reduzida (preferivelmente in situ), por hidrogenação na presença de um catalisador adequado, como por exemplo paládio em carbono, para originar um composto de Fórmula 15.

Outros reagentes de alquilação que podem ser usados na preparação de compostos de Fórmula 13 e Fórmula 15 são os halogenetos de alquilo inferior, como brometo de etilo, halogenetos de alquilo inferior substituídos com halogéneo, halogenetos de alquilo inferior substituídos com ciano, halogenetos de alquilo inferior substituídos com hidroxilo, outros halogenetos de alcenilo inferior, como cloreto de metilalilo, halogenetos de alcenilo inferior, como brometo de propargilo, halogenetos de cicloalquilo inferior, halogenetos de ciclo(alquil inferiorJmetilo, como halogenetos de ciclopropilmetilo e halogenetos de benzilo).

Esquema IV

De acordo com o esquema reaccional IV, um derivado eritromicina lactama de Fórmula 11 ou 15, é tratado com um halogeneto de alquilo inferior, como iodeto de metilo ou brometo de etilo, um halogeneto de alcenilo inferior como brometo de alilo, um halogeneto de alcinilo inferior como brometo de propargilo ou um haleto de benzilo, como brometo de benzilo, para originar um derivado sal quaternário de Fórmula 16.

Esquema V

De acordo com o esquema reaccional V, uma eritromicina, A ou C, lactama de Fórmula 11 ou 15 (em que R⁵ e R⁶ são ambos OH), é tratada com um derivado de ácido carbónico adequado, como carbonato de etileno, carbonildiimidazol ou tiocarbonil-diimidazol, para originar um derivado carbonato de Fórmula 17. Os métodos de preparação dos derivados alcanoílo inferior e -S(O)2CH3 (compostos de fórmula (I) em que R⁵ ou R⁶ são alcanoílo inferior e -S(O)2CH₃), são bem conhecidos na arte e encontram-se descritos,

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4970.PG.01 por exemplo, por S. Omura e Z. Itoh no Pedido de Patente Europeia N^a. 213 617, publicada em 3 de Novembro de 1987. Em alternativa, a reacção de uma lactama de fórmula 11 ou 15, apropriadamente protegida, com uma base, por exemplo, hidreto de sódio e com um agente de alquilação, como iodeto de metilo, origina derivados alquilo em que R⁵ ou R⁶ podem ser um grupo alquilo inferior.

Esquema VI

De acordo com o esquema reaccionai VI, uma eritromicina lactama de Fórmula 11 é reduzida por hidrogenação catalítica usando um catalizador apropriado como óxido de platina na presença de um ácido adequado como ácido difluoroacético, num solvente adequado, preferivelmente ácido acético, para originar os compostos de Fórmula 18.

Esquema VII

De acordo com o esquema reaccionai VII, uma eritromicina lactama de Fórmula 11 (em que R^ é OH) é tratada com ácido aquoso para originar uma mistura de compostos que inclui os compostos de Fórmula 19 e 20. Os compostos de Fórmula 19 e 20 (em que as linhas onduladas indicam que se formam ambos os estereoisómeros), formam-se também in vivo, quando os compostos de Fórmula 11 são expostos às condições ácidas do estômago.

Esquema VIII

De acordo com o Esquema VIII, o composto epóxido com o anel contraído, de Fórmula 4, é tratado com um reagente adequado para acetilação do grupo hidroxilo-2', tal como anidrido acético ou cloreto de acetilo, na presença de uma base adequada tal como trietilamina, piridina ou DMAP. O composto de Fórmula 21 é convertido no composto 4'’-desoxi por tratamento com 1,1'-tiocarbonildiimidazol (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin), na presença de uma base adequada tal como trietilamina, piridina ou DMAP. 0 composto de Fórmula 21 é, por sua vez, tratado com um agente redutor selectivo, como por exemplo hidreto de tri-n-butilestanho e AIBN (2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo), Alfa catalog Chemicals), numa atmosfera inerte, para originar o composto

834

4970.PG.01

4”-desoxi de Fórmula 23. Este composto é então tratado com uma amina apropriada, tal como amoníaco ou metilamina e, preferivelmente, num solvente polar, para originar as 4”-desoxi-lactamas desejadas (compostos 24 e 25). Estes compostos podem, opcionalmente, ser ainda modificados pelas reacções descritas nos Esquemas III-VII anteriores, substituindo os compostos de Fórmula 11 por compostos de Fórmula 24 ou 25.

(Seguem Esquemas) /ã

834 -y · . ..

4970.PG.01 · ^Z

ESQUEMA I

834

4970.PG.01 £

-28ESQUEMA IA

CHgOR⁷

834

4970.PG.01

-29ESQUEMA II

10'

834

4970.PG.01 —30—

ESQUEMA III

j 1 ou 15

•j ·| ou 15

834

4970.PG.01

—32—

ESQUEMA VI

o

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-33ESQUEM& VIII

A descrição do presente invento pode ser melhor entendida com referência aos exemplos que se seguem, que são apresentados apenas para ilustração do invento e que não pretendem limitá-lo de qualquer forma.

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Exemplo 1 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dÍdesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Passo 1; 2^,-0-acetileritromicina A

Dissolveu-se eritromicina A (50,0 g, 68,1 mmol) (disponível comercialmente em Abbott Laboratories), em 600 ml de cloreto de metileno (CH₂C12) à temperatura ambiente. Adicionou-se trietilamina (20 ml) e 10 ml (10,82 g, 106 mmol) de anidrido acético, a esta solução. A mistura reaccional foi aquecida ao refluxo e destilaram-se 100 ml de CH₂C1₂ da mistura reaccional, para remover quaisquer vestígios de água. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante mais cinco horas. Após seis horas, quando a reacção se encontrava já completa, de acordo com uma análise em CCF, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e transferida para uma ampola de decantação. A solução de CH₂C1₂ foi lavada com 300 ml de solução de hidróxido de amónio/bicarbonato de sódio contendo 2,9% de amoníaco e 1,8% de bicarbonato de sódio, seca sobre sulfato de sódio anidro e filtrada. 0 CH₂C1₂ foi removido usando um evaporador rotativo, com uma temperatura de banho de água de 30-40°C. O resíduo foi cristalizado em 200 ml de acetonitrilo (CH₃CN), dissolvendo-o primeiro em CH₃CN quente e deixando a solução em repouso durante a noite à temperatura ambiente, e arrefecendo-a depois a -25°C, mantendo esta temperatura durante 24 horas. 0 produto foi isolado como cristais brancos que foram lavados com CH₃CN frio (-25°C) e secos numa estufa de vácuo a 50 °C, durante aproximadamente 64 horas. A 2'-O-acetileritromicina A foi obtida com um rendimento de 33% (43,91 g).

Passo 2: 2'-O-Acetil-8,9-didesidro-9-desoxo-6-desoxi-6,9-epoxieritromicina A

Dissolveu-se 2'-O-acetileritromicina A (20 g, 25,8 mmol) do Passo 1, em 115 ml de ácido acético glacial. A solução resultan-

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4970.PG.01 te foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. 0 ácido acético foi removido in vacuo. A remoção completa do ácido acético foi conseguida por destilação azeotrópica com tolueno. 0 resíduo foi dissolvido em 200 ml de acetato de etilo e foi lavado com uma mistura de 100 ml de solução aquosa a 5% de bicarbonato de sódio e 10 ml de solução aquosa concentrada de hidroxido de amónio. A fase aquosa foi extractada com 3 x 100 ml de acetato de etilo. As fases de acetato de etilo combinadas, foram lavadas com 200 ml de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. 0 resíduo (19,67 g) foi cristalizado em acetato de etilo para originar 13,54 g (rendimento 69%) do composto em título: DCI-NH3 MS M/Z: 758 (M+H)⁺.

Passo 3:[2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-dÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se 2 *-O-acetil-8,9-didesidro-9-desoxo-6-desoxi-6,9-epoxieritromicina A (5,75 g, 7,6 mmol) do Passo 1, em 35 ml de Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) anidra. Dividiu-se finamente carbonato de potássio sólido anidro e adicionou-se à solução resultante. A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 dias. A mistura reaccional foi diluída com gelo-água (100 ml) e foi extractada com acetato de etilo (1 x 150 ml e 3 x 50 ml). As fases de acetato de etilo combinadas foram lavadas com 100 ml de salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo. 0 resíduo (7,03 g) foi cromatografado sobre 150 g de sílica gel eluida com tolueno:metanol (10:1). 0 resíduo foi dissolvido em metanol e a solução foi deixada em repouso durante a noite à temperatura ambiente para clivar o grupo acetilo. A solução foi concentrada in vacuo para originar 1,56 g (rendimento 29%) do composto em título; IV (0,15% em cci₄) 3600, 3550 e 1720 cm^-1.

Passo 4: [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,673 834

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-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/?-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R* ]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9”[[3,4,6-tridesoxi-3 - (dimetilamino) -j3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -4,13-dioxabiciclo[8.2.l]tridec-12-en-5-ona (0,5 g, 0,7 mmol) do Passo 3 em 1 ml de cloreto de metileno seco e a solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução agitada de 0,94 g (1,4 mmol) de bis[a,a-bis(trifluorometil)benzeno-metanolato]-difenil-enxofre (sulfurano de Martin; disponível comercialmente em Aldrich Chemical Company) em 1 ml de cloreto de metileno seco. A mistura reaccional foi agitada durante 45 minutos e seguidamente vertida numa ampola de decantação contendo 30 ml de acetato de etilo. Adicionou-se solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% (30 ml) até o pH da solução ser neutro. A fase de acetato de etilo foi separada e a mistura aquosa foi extractada com 3 x 10 ml de acetato de etilo. As fases acetato de etilo combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo para originar um óleo amarelo. 0 resíduo foi cromatografado sobre cerca de 50 g de sílica gel, eluida sequencialmente com 2 1 de tolueno/acetona (5:1), 2,125 ml de tolueno/metanol (10:1) e 1500 ml de tolueno/ /metanol (5:2), para originar 0,5 g do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 698 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3555 e 1725 cm^-1.

Passo 5: [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-azido-l-hidroxi-l-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil -α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-jS-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo-[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (14,19 g, 20,3 mmol) do Passo 4, em 350 ml de 2-metoxietanol. A esta solução adicionou-se, com

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4970.PG.01 agitação, uma solução de 10,6 g (0,163 mmol) de azida de sódio e 0,853 g (0,16 mmol) de cloreto de amónio em 141 ml de água. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante 5 dias. A mistura reaccional foi transferida para uma ampola de decantação e adicionaram-se 200 ml de bicarbonato de sódio aquoso a 5%. A mistura foi extractada com 200 ml de cloreto de metileno, seguido de 2 x 100 ml de cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo para originar um óleo amarelo. 0 óleo foi cromatografado sobre aproximadamente 500 g de sílica gel eluída com clorofórmio/metanol/amoníaco (10:1:0,0125) para originar 8,5 g (rendimento 57%) do composto em título como um vidro amarelo; DCI NH₃ MS M/Z: 741 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3590, 3548, 3470, 2110 e 1735 cm^-1.

Passo 6: [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-amino-1-hidroxi-l-metilbutil)-7-((2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-azido-l-hidroxi-1-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (1 g, 1,35 mmol) do Passo 5, 4,5 g de níquel Raney e 100 ml de metanol foram combinados sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado concentrado sob pressão reduzida, a um vidro verde claro. 0 vidro (1,08 g) foi dissolvido em 100 ml de cloreto de metileno e lavado com 100 ml de bicarbonato de sódio aquoso a 5%. A fase aquosa foi extractada com 3 x 50 ml de cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo para originar 880 mg (rendimento 91%) do composto em título; DCI NH₃MS M/Z:715 (M+H)⁺;IV (0,15% em CCI₄, 3595, 3548, 3470 e 1725 cm^-·*·. Análise calculada para ^C37^H66^N2°11^:c'⁶²'¹⁶' H,9,31;

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-38- ~

N,3,92. Encontrado: C,62,19;H, 9,21; N,3,52.

Passo 7: [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(di-metilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona

O composto [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3(2-Amino-l-hidroxi-l-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (0,819, 1,1 mmol) foi dissolvido em 88 ml de metanol. Adicionou-se hidróxido de amónio (8,5 ml) e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. O solvente foi removido in vacuo. Adicionou-se cloreto de metileno ao resíduo e evaporou-se duas vezes, para remover a água residual, originando 770 mg (rendimento 95%) do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 715 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3560, 3442, 3358, 1703 e 1660 cm^-1.

Exemplo 1 A

Preparação alternativa de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dldesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona passo 1: [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.l]tridec-12-en-5-ona (produto do Passo 3 do Exemplo 1)

Dissolveu-se eritromicina A (100 g, 136,25 mmol) em 1 1 de metanol e adicionaram-se 62,5 ml (1090 mmol, 8 equivalentes) de ácido acético glacial. A mistura reaccional foi aquecida em refluxo e mantida em refluxo durante 4,25 horas. A mistura reac-

cional foi então arrefecida num banho de gelo e à mistura arrefecida adicionou-se, gota a gota durante um período de 15 minutos, 73,5 ml (1090 mmol, 8 equivalentes) de hidróxido de amónio concentrado. A mistura reaccional foi levada ao refluxo e

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4970.PG.01

mantida em refluxo durante 24 horas. Após ser mantida a 25°C durante a noite, a mistura reaccional foi concentrada a uma massa sólida, sob pressão reduzida, usando um banho de água a 55°C. 0 resíduo foi retomado numa mistura de 500 ml de acetato de etilo, 400 ml de água e 100 ml de hidróxido de amónio concentrado. Após agitação da mistura durante aproximadamente 20 min, a fase acetato de etilo foi separada e a fase aquosa foi extractada com 250 ml de acetato de etilo. A solução de acetato de etilo combinada, foi lavada com 2 x 350 ml de salmoura e 2 x 350 ml de água, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada até à secura. 0 resíduo foi seco a 25°C (133,3 Pa (1 mmHg)) durante 18 horas, para originar 93,1 g de produto bruto. 0 produto bruto foi dissolvido em 300 ml de acetonitrilo e deixado cristalizar (4 horas à temperatura ambiente e aproximadamente 65 horas a -25°C). Os cristais foram secos a 65°C (sobre P₂0₅) ^numa estufa de vácuo, para originar 54,2 g do composto em título, p.f. 125-130°C.

Passo 2: [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (0,5 g, 0,7 mmol) do Passo 1 foi dissolvido em 1 ml de cloreto de metileno seco e a solução resultante foi adicionada gota a gota a uma solução agitada de 0,94 g (1,4 mmol) de bis[a,a-bis(trifluorometil)benzeno-metanolato]-difenilenxofre (sulfurano de Martin; disponível comercialmente em Aldrich Chemical Company) em 1 ml de cloreto de metileno. A mistura reaccional foi agitada durante 45 minutos

73 834

4970.PG.01 e seguidamente vertida numa ampola de decantação contendo 30 ml de acetato de etilo. Adicionou-se solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% (30 ml), até o pH da solução ser neutro. A fase acetato de etilo foi separada e a mistura aquosa foi extractada com 3 x 10 ml de acetato de etilo. As fases de acetato de etilo combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo, a um óleo amarelo. 0 resíduo foi cromatografado em cerca de 50 g de sílica gel, eluída sequencialmente com 2 1 de tolueno/acetona (5:1), 2,125 ml de tolueno/metanol (10:1) e 1500 ml de tolueno/metanol (5:2), para originar 0,5 g do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 698 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3555 e 1725 cm¹.

Passo 3: [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*) ] -9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/?-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona composto [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi] -3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (2,00 g, 2,87 mmol) do Passo 2 foi dissolvido em 16 ml de metanol, num tubo reaccional de vidro, de paredes resistentes. À solução resultante adicionaram-se 4,0 ml de hidróxido de amónio concentrado (59,2 mmol de amoníaco, 20,6 equivalentes). 0 tubo foi selado com uma rolha de rosca munida de um anel tórico de

A mistura foi então aquecida a 90-92°C num banho de óleo. 0 progresso da reacção foi seguido por HPLC usando uma coluna de HPLC R-ODS-7 de fase inversa YMC, eluída a 1,00 ml/minuto com metanol aquoso a 60% contendo 10 g/1 de acetato de amónio tri-hidratado, 25 ml/1 de ácido acético glacial e 50 ml/1 de tetra-hidrofurano. Após 6 dias, a mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e seguidamente diluída com 250 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8%. 0 pH da solução foi levado a 10 pela adição de 10 ml de hidróxido de amónio concentrado e a solução básica foi extractada com porções de 3 x 50 ml de clorofórmio.

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4970.PG.01 •9

Os extractos clorofórmicos combinados foram lavados com 50 ml de uma solução 1:1 de bicarbonato de sódio aquoso a 8% e salmoura, secos sobre sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo num banho de água a 45°C. O resíduo foi seco a 25°C sobre vácuo durante 3 horas, para originar 2,277 g de produto bruto. Equilibrou-se uma coluna de sílica gel (100 g), que tinha sido lavada com 1 1 de metanol a 40% em acetonitrilo contendo 2% de hidróxido de amónio concentrado e com 1 1 de hidróxido de amónio concentrado, a 0,1% em acetonitrilo, com 0,5 1 do eluente, e acetonitrilo a 10% em clorofórmio contendo 3% de metanol e 0,3% de hidróxido de amónio concentrado. 0 produto bruto foi então cromatografado, eluíndo a 2,5 ml/minuto. As fracções contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas in vacuo num banho de água a 45°C. 0 resíduo foi dissolvido em 50 ml de metanol e a solução resultante foi filtrada e concentrada in vacuo para originar, após secagem in vacuo a 25°C, durante 3 dias, 1,752 g (rendimento 85,4%) do composto em título. Cristalizou-se uma amostra em acetonitrilo a -25°C, originando-se cristais em forma de agulha, p.f. 152-156°C, após secagem a 133,3 Pa (1 Torr)/100°C; [a]²³ _D = -39,2° (c 1,00; MeOH).

Exemplo 2 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dldesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil~3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Passo 1: 2'-Acetil-4-0-benziloxicarbonileritromicina A

Dissolveu-se 2'-O-acetileritromicina A (30 g, 38,6 mmol), produto do Passo 1 do Exemplo 1, em 150 ml de cloreto de metileno. Adicionou-se dimetilaminopiridina (18,3 g, 149,8 mmol) e a solução foi arrefecida a -40°C num banho acetonitrilo/gelo seco. Adicionou-se cloreto de benziloxicarbonilo (16,8 ml, 110 mmol) e a solução foi agitada a -40°C até se dar a formação de um gel. Após ser mantida a -25°C durante 3 dias, a mistura reaccional foi vertida numa ampola de decantação e foi lavada com tampão fosfato (pH 5,0). A fase orgânica foi lavada com solução aquosa

834 _ΖΊ 'V

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-42;·ζ·de bicarbonato de sódio a 5%. A fase aquosa de bicarbonato de sódio foi extractada com cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas num vidro branco sujo. O vidro foi recristalizado em acetonitrilo para originar 21,39 g (rendimento 61%) do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 910.

Passo 2; 2'-Acetil-4'’-0-benziloxicarbonil-8,9-didesidro-9-desoxo-6-desoxi-6,9-epoxieritromicina A

O composto 2^,-Acetil-4^,,-0-benziloxicarbonileritromicina A (21,29 g, 23,37 mmol), do Passo Γ, foi dissolvido em 115 ml de ácido acético glacial e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. O ácido acético foi removido azeotropicamente in vacuo usando tolueno. 0 resíduo foi dissolvido em 500 ml de acetato de etilo e a solução de acetato de etilo foi lavada com uma mistura de 300 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e 10 ml de hidróxido de amónio. A fase aquosa foi extractada com 100 ml de acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo, para originar 19,39 g (rendimento 93%) do composto em título como um vidro branco, DCI NH₃ MS M/Z: 892.

Passo 3 : [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[(2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] · oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-c-metil-3-0-metil-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,

6,8,10,12-pentametil-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Seguindo os procedimentos descritos no Passo 3 do Exemplo 1 e purificando o produto por cromatografia sobre sílica gel, eluíndo com tolueno/acetona (5:1) seguido por tolueno/acetona (10:3), trataram-se 5,3 g (5,95 mmol) do produto do Passo 2 acima, com carbonato de potássio em DMF, para originar 1,46 g (rendimento 28%) do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 892; IV (5% em CDC1₃) 3595, 3560 e 1740 cm^-1.

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4970.PG.01 /

-43- «íS<< ......

Passo 4: [2R-[2R*,3R*(IS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[(2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosiljoxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi] -3- (l-hidroxi-l-metil-2-oxobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se N-clorossuccinimida (0,57 g, 4,27 mmol) em 5,05 ml de tolueno e a solução resultante foi arrefecida a -10°C. Adicionou-se sulfureto de dimetilo (0,41 ml, 5,58 mmol) e a solução foi agitada a -10°C durante 20 minutos. Adicionou-se uma solução de [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3 *-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-O-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)—2, 6,8,10,12-pentametil-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona· (o,5 g, 0,56 mmol) do Passo 3, em 1,28 ml de tolueno e a mistura reaccional foi agitada a -40°C durante 3,5 horas. A reacção foi então terminada pela adição de trietilamina e a mistura reaccional foi transferida para uma ampola de decantação e adicionou-se solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5%. A fase aquosa foi extractada com 4 x 50 ml de tolueno e uma vez com 50 ml de cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo, para originar 0,455 g (rendimento 91%) do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 890; IV (5% em CDC1₃) 3540 e 1740 cm^-1.

Passo 5; [2R-[2R*,3R*(IS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1-hidroxi-l-metil-2-oxobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-² (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(IS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[(2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -jB-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(l-hidroxi-l-metil-2-oxobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (3,57 g, 4,02 mmol), do Passo 4, foi dissolvido em

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4970.PG.01

200 ml de metanol. A esta solução adicionaram-se 3,57 g de paládio a 10% em carbono. A mistura reaccional foi fortemente agitada à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio durante 24 horas. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo (2,5 g) foi dissolvido em 200 ml de cloreto de metileno. A solução de cloreto de metileno foi lavada com 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5%. A solução aquosa de lavagem foi extractada com 3 x 50 ml de cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo para originar 2,01 g (rendimento 70%) do composto em título; FAB MS M/Z: 714 (M+H)⁺.

Passo 6: [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-dídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1-hidroxi-l-metil-2-oximidobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3 - (dimetilamino) -jB-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(lS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(l-hidroxi-l-metil-2-oxobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,

4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil] oxi ]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (0,5 g, 0,7 mmol), do Passo 5, foi dissolvido em 10 ml de álcool etílico. A esta solução adicionaram-se 0,39 g (6,05 mmol) de hidrocloreto de hidroxilamina e 0,6 ml (4,23 mmol) de trietilamina. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante 34 horas. A mistura reaccional foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente e seguidamente foi vertida numa ampola de decantação, juntamente com 200 ml de cloreto de metileno e lavada com 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5%. A fase aquosa foi extractada com 2 x 50 ml de cloreto de metileno, lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. 0 resíduo (200 mg de um total de 410 mg) foi cromatografado em 50 g de sílica gel eluída com clorofórmio/metano1/amoníaco aquoso (10:1:0,015), para originar 77,8 mg do composto em título; FAB MS M/Z: 729 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3595 em CC1₄) 3595 e 1733 cm^-1.

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4970.PG.01

-45Passo 7: [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-meti1-3-o-meti1-α-L-ribo-hexopiranos i1)oxi]-5-eti1-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-jB-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Agitou-se uma mistura de 100 mg (0,137 mmol) de [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(l-hidroxi-l-metil-2-oximidobutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j9-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo- [8.2.1]tridec-12-en-5-ona, 0,56 g de níquel Raney e 10 ml de amoníaco aquoso em 90 ml de metanol, à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio, durante 24 horas. 0 catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo originando uma espuma. A espuma foi dissolvida em 50 ml de cloreto de metileno e lavada com 30 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5%. A fase aquosa foi extractada com 3 x 25 ml de cloreto de metileno. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo, para originar 99,8 mg do composto em título; LSIMS/NBA, DMF M/Z: 715 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3560, 3440, 3355, 1703 e 1660 cm'¹.

Exemplo 3 [2R- (2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*) ]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dime tilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Passo 1: 2'-O-Acetileritromicina B

Seguindo os procedimentos descritos no Passo 1 do Exemplo 1, substituindo a eritromicina A por eritromicina B, preparou-se o composto em título.

Passo 2; 2^/-0-acetil-4-0-benziloxicarbonileritromicina B

Dissolveu-se uma mistura de 30,60 g (40,264 mmol) de 2'-0-acetileritromicina B e 15,00 g (122,78 mmol) de

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4970.PG.01 dimetilaminopiridina (DMAP),

em 75 ml de cloreto de metileno. A solução resultante foi arrefecida a -25 °C num banho de gelo seco/CCl₄. Adicionou-se cloroformato de benzilo (11,5 ml, 56,41 mmol) e a mistura foi armazenada a -25°C durante a noite. A análise em CCF indicou que a reacção estava incompleta, pelo que se adicionou DMAP (7,5 g) e cloroformato de benzilo (6 ml) e a mistura foi agitada a -25°C durante 6 horas. A mistura reaccional foi então diluída com 400 ml de acetato de etilo e foi lavada sequencialmente com 2 x 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%, 100 ml de salmoura, 3 x 100 ml de solução àquosa de di-hidrogenofosfato de potássio a 10%/salmoura (4:1), 100 ml de salmoura e 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%. A solução de acetato de etilo foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo a um vidro semi-sólido. 0 resíduo (45,14 g) foi triturado com 300 ml de heptano para originar 33,44 g (rendimento 93%) do composto em título.

Passo 3: [2R-[2R*,3S*(IS*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(2-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9- [[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se 2' -0-acetil-4^,,-0-benziloxicarbonileritromicina B (10,11 g, 11,307 mmol) em 250 ml de metanol e a solução foi deixada a 25°C durante 3 dias. Adicionou-se ácido acético glacial (5,43 ml, 94,92 mmol) e a mistura resultante foi aquecida, à temperatura de refluxo, durante 48 horas. A mistura reaccional foi então arrefecida até à temperatura ambiente e adicionaram-se 6,41 ml (94,92 mmol) de hidróxido de amónio concentrado. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante 9 dias. A mistura reaccional foi concentrada a 25 ml e seguidamente diluída com 300 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%. A mistura aquosa foi extractada com 1 x 100 ml de clorofórmio, seguido de 2 x 50 ml de clorofórmio. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%, secos sobre sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. Adicionou-se acetonitrilo ao

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4970.PG.01 resíduo para remover azeotropicamente o clorofórmio e água residuais e efectuou-se a evaporação sob pressão reduzida, para originar 8,91 g do composto em título que foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação.

Passo 4; [2R-[2R*,3S*(IS*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j3-D-xilo-hexopiranosil] oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-o-metil-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(2-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,

10,12-pentametil-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3S*(IS*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(2-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.l]tridec-12-en-5-ona (8,84 g, 10,599 mmol), do Passo 3, foi dissolvido em 175 ml de cloreto de metileno. Adicionou-se anidrido acético (3,5 ml) e trietilamina (9 ml) e a mistura reaccionai foi deixada em repouso à temperatura ambiente, durante 2,5 dias. A mistura reaccionai foi concentrada in vacuo e o resíduo foi dissolvido em 200 ml de acetato· de etilo. A solução de acetato de etilo foi lavada com 4 x 50 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%. Adicionou-se cloreto de sódio sólido (20 ml) a cada uma das segunda, terceira e quarta lavagens, para melhorar a separação de fases. A solução de acetato de etilo foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada in vacuo, para originar 9,12 g do composto em título como um vidro branco; IV (0,15% em CC1₄): 3530, 1748 e 1718 cm¹.

Passo 5: [2R-[2R*,3R*(IR),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[(2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-3-(1-metil-2-oxobutil)-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Uma mistura de 5,197 g (5,932 mmol) de [2R-[2R*,3S*(IS*, 2R*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil] -oxi] -7- [ (4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]73 834

4970.PG.01

-3-(2-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-4,13-dioxabi ciclo [8.2.1 ]tridec-12-en-5-ona do Passo 4, 4,20 g (35,85 mmol) de N-metilmorfolina-N-óxido e 2,5 g de peneiros moleculares 4 Ã, em 26 ml de cloreto de metileno, foi agitada a 20 °C durante 1 hora. A mistura reaccional foi então arrefecida a -15^eC num banho gelo/acetona e, após 15 minutos, adicionaram-se 30,9 mg (0,379 mmol) de per-rutenato de tetrapropilamónio. Após ser agitada durante vários minutos a -15°C, a mistura reaccional foi deixada em repouso a -15°C durante 20 horas. A mistura reac cional foi então filtrada para uma mistura agitada de 11 g de bissulfito de sódio em 100 ml de água, usando 200 ml de acetato de etilo para lavar o bolo de filtração. O filtrado foi diluído com 100 ml de água e após agitação vigorosa durante 1 hora, foi filtrado. A fase aquosa foi separada e rejeitada. A fase orgânica foi lavada com 2 x 100 ml de uma mistura 50/50 de salmoura e solução aquosa de bicarbonato de sódio a 4%. A solução de acetato de etilo foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. para originar 4,65 g (rendimento 90%), do composto em título como um vidro branco.

Passo 6: [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-3-(l-metil-2-oxobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-9-[[(2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-3-(1-metil-2-oxobutil)-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (4,65 g, 5,3 mmol) do Passo 5, foi dissolvido em 100 ml de metanol e mantido a 25°C, durante 4 dias. Removeu-se uma pequena quantidade de precipitado, por filtração e o solvente foi removido in vacuo. 0 resíduo seco (4,39 g) foi cromatografado em 200 g de sílica gel, que tinha sido previamente condicionada, e foi eluído com acetato de etilo/heptano/hidróxido de amónio (69,8:30:0,2), para originar 1,57 g (rendimento 35%) do composto em título, sob a forma de uma espuma branca.

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4970.PG.01

-49Passo 7: [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-ai-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,

12-pentameti1-3-(l-metil-2-oxobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-p-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo- [8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(IR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(4-0-benziloxicarbonil-2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-3-(l-metil-2-oxobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (1,52 g,

1,83 mmol) foi dissolvido em 100 ml de metanol. À solução resultante adicionaram-se 75 mg de paládio a 10% em carbono. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio, durante 1 hora. A análise por CCF em placas de sílica gel, eluídas com clorofórmio/metanol/hidróxido de amónio concentrado (9,5:0,5:0,2), indicou que a reacção estava completa. 0 catalisador foi removido por filtração e o bolo de filtração foi lavado com 100 ml de metanol. 0 filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para originar 1,267 g (rendimento 99%) do composto em título.

Passo 8: [2R-[2R*,3S*(IS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-dídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10, 12-pentametil-3-(l-metil-2-oximidobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -4,13-dioxabiciclo- [8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3R*(lR*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi] -2,6,8,10,12-pentametil-3-(l-metil-2-oxobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (1,211 g, 1,735 mmol), do Passo 7, foi dissolvido em 82 ml de álcool etílico absoluto. A esta solução adicionaram-se 601 mg (8,65 mmol) de hidrocloreto de hidroxilamina, seguido de 725 μΐ (5,18 mmol) de trietilamina. A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo e seguida por HPLC analítica numa coluna AQ-303 de fase inversa YMC, eluída a 1 ml/min com água/acetonitrilo/metanol (5:4,5:0,5) contendo 6,5 g/1 de acetato de amónio. Após 18 horas, a mistura

f // f//7 / .

834 ' '

4970.PG.01 —50— reaccional foi concentrada a alguns ml. Adicionou-se acetato de etilo (150 ml) e 33 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8%. A fase orgânica foi lavada com 2 x 33 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8%, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo foi utilizado no passo seguinte sem purificação.

Passo 9: Mistura diastereomérica de [ 2R- [ 2R* , 3S* (IS* , 2R* ) , 6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-amino-l-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9- [[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona e [2R-[2R*,3S*(IS*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-amino-l-metÍlbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -jS-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -4,13-dioxabiciclo [8.2.1]tridec-12-en-5-ona composto [2R-[2R*,3S*(lS*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-3-(l-metil-2-oximidobutil)-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (997 mg), do Passo 8, foi dissolvido em hidróxido de amónio a 10% em 100 ml de metanol. A esta solução adicionaram-se 2,5 g de níquel Raney e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio, durante 18 goras. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. 0 resíduo seco (895 mg) foi dissolvido em 120 ml de acetato de etilo e a solução de acetato de etilo foi lavada com 3x33 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8% e 30 ml de salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo, para originar 799 mg da mistura em título como um vidro branco. 0 produto foi utilizado no passo seguinte sem purificação.

Passo 10: [2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil -3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-373 834

4970.PG.01

- (dimetilamino) -β-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

A mistura diastereomérica de [ 2R- [ 2R* , 3.S* (IS* , 2R* ) , 6R* , 7S*,8S*,9R*,10R*]]-3- (2-amino-l-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-O-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9ⁱ- [[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -jS-D-xilo-hexopiranosiljoxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona e [2R-[2R*,3S*(IS*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-3-(2-amino-l-metilbutil)-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (345,1 mg) foi dissolvido em 9,0 ml de metanol. A esta solução adicionaram-se 1,0 ml de hidróxido de amónio concentrado e a solução resultante foi aquecida a 45°C num frasco com rolha de rosca, durante 9 dias. A solução foi concentrada in vacuo para originar 338,6 mg de um vidro. 0 vidro (300 mg) foi dissolvido em 2,0 ml de metanol e purificado por cromatografia HPLC preparativa. A coluna de HPLC, uma coluna D-ODS-7 (20 x 250 cm) C8 de fase inversa, foi eluída a 14 ml/min. 0 eluente foi preparado por diluição de 36 g de acetato de amónio com 2,1 1 de água e 1 1 de acetonitrilo. A solução metanólica foi filtrada através de um filtro de nylon de 45 μ e injectada na coluna em 5 porções (4 x 400 μΐ e 1 x 200 μΐ). 0 primeiro pico a eluir da coluna (fracção A; RT = 18,6 min), foi recolhido num frasco contendo 150 ml de hidróxido de amónio aquoso IN. 0 segundo pico a eluir da coluna (fracção B) foi recolhido aos 22,8 min. Cada fracção foi concentrada separadamente in vacuo a 45°C para remover o acetonitrilo. Adicionou-se solução aquosa de carbonato de sódio a 10% (25 ml) à mistura aquosa resultante, a qual foi extractada com 5 x 20 ml de clorofórmio. Os extractos clorofórmicos combinados foram lavados com uma mistura de 15 ml de salmoura e 2 ml de hidróxido de amónio concentrado, secos sobre sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. Adicionou-se acetonitrilo ao resíduo para remover azeotropicamente o clorofórmio e a água residuais e procedeu-se à evaporação sob pressão reduzida para originar 65,4 mg (rendimento 19%) da Fracção A (composto em título) e 105 mg (rendimento 31%) da Fracção B diastereómero 2S*-2-amino. Fracção A: FAB MS

834

4970.PG.01 —52—

M/Z: 699 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) ção B: FAB MS M/Z: 699 (M+H) ⁺ ; IV 1720 cm^-1.

3565, 3480, 1650 cmk Frac(0,15% ern CC1₄) 3558, 3470,

Exemplo 4 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

O composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona (2 g, 2,8 mmol), produto do Exemplo 1, foi dissolvido em 40 ml de metanol. A esta solução, à temperatura ambiente, adicionou-se 1,9 g (14 mmol) de acetato de sódio, seguido de 390 mg (1,54 mmol) de iodo e a solução resultante foi exposta à luz durante 45 minutos. A cor do iodo deixou de ser visível. Adicionou-se uma segunda porção de iodo (390 mg, 1,54 mmol) e a solução foi novamente exposta à luz durante 1,5 horas. A mistura reaccional foi então vertida numa ampola de decantação contendo 50 ml de cloreto de metileno e lavada com uma mistura de aproximadamente 21 ml de salmoura e 50 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5%, contendo 100 mg de tiossulfato de sódio. As fases aquosas foram extractadas com 5 x 25 ml de cloreto de metileno. As fases orqânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo. 0 resíduo (1,82 g) foi cromatografado em 150 g de sílica gel eluída com clorofórmio/metanol/amoníaco (100:3:0,3), para originar 865 mg (rendimento 44%) do composto em título; FAB MS M/Z: 701 (M+H)⁺; IV (0,15% em cci₄) 3560, 3438, 3353 e 1660 -1 cm -*·.

Noutra experiência, o solvente usado foi acetato de etilo, em vez de cloreto de metileno e o produto foi cristalizado em acetonitrilo em vez de ser purificado por cromatografia. p.f.

834

4970.PG.01

—29,0° (c=l,00, MeOH, 28°C).

IV (CC1₄) 963,

-53170-175°C.

1665, 1700 [“Jd “ cm^-1.

Anal. Calc. para ^C36^H64^N2°11^{: C}’ 61,69; H,

9,20; N, 4,00; verificado: C, 61,39; H, 9,02; N, 3,95.

Exemplo 5 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1]pentadec-14-en-7-ona

O composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (metilamino) -jS-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (53 mg, 0,076 mmol), produto do Exemplo 4, foi dissolvido em 3 ml de metanol. A esta solução adicionaram-se 25 mg de paládio a 10% em carbono e 50 μΐ (0,82 mmol) de acetaldeído. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio durante 18 horas. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado in vacuo. 0 resíduo foi lavado com 50 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e a mistura aquosa foi extractada com 3 x 7 ml de cloreto de metileno. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura e concentrados in vacuo. O resíduo (43,3 mg) foi combinado com material adicional de uma reacção idêntica (total = 200 mg) e cromatografia numa coluna de sílica gel 1 X 40 cm, eluída com tolueno/metanol (20:1) para originar 98,6 mg de sólido. 0 sólido foi dissolvido em 4 ml de acetonitrilo e filtrado. O filtrado foi concentrado in vacuo para originar 62,8 mg do composto em título; FAB MS M/Z: 729 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3560, 3440, 3355 e 1660 cm^-’·'·.

Exemplo 6 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dídesoxí-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metil (2-propenil)amino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-

834

4970.PG.01

-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R* ₁12R*) ] -9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (metilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (60,9 mg, 0,087 mmol), produto do Exemplo 4, foi dissolvido em 1,5 ml de acetonitrilo. A esta solução adicionaram-se 25 μΐ (0,289 mmol) de brometo de alilo frio e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante aproximadamente 8 horas. A mistura reaccional foi diluída com 50 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e foi extractada com 3 x 15 ml de cloreto de metileno. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio anidro, filtradas e concentradas in vacuo a um sólido vítreo. 0 vidro (54,8 mg) foi purificado por cromatografia em sílica gel eluída com tolueno/metanol (20:1) para originar 19,6 mg (rendimento 31%) do composto em título; FAB MS M/Z: 741 (M+H)⁺.

Exemplo 7

Brometo de [2R-(2Ê*,3B*,4K*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetil (2-propenil) amónio) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (200 mg, 0,28 mmol), produto do Exemplo 1, foi dissolvido em 3 ml de acetonitrilo. A esta solução adicionaram-se 80 μΐ (0,924 mmol) de brometo de alilo e a mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional foi concentrada in vacuo. O resíduo foi triturado com acetato de etilo. A fase sólida foi seca in vacuo para originar 160 mg (rendimento 68%) do composto em título; FAB MS M/Z: 755 (M⁺-Br); IV (KBr) 1703, 1650 cm¹.

834

4970.PG.01

k.

Exemplo 8

13-0,14-0-carbonato de [2E-(2R*,3R*,4K*_/5E*,8Ê*,9S*,10S*,llg*, 12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -p-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (177 mg, 0,248 mmol), produto do Exemplo 1, foi dissolvido em 2 ml de tolueno/THF (1:1). A esta solução adicionaram-se 0,37 g (2,68 mmol) de carbonato de potássio, seguido de 0,78 g (8,86 mmol) de carbonato de etileno (disponível comercialmente em Aldrich Chemical Company). A mistura reaccional foi aquecida à temperatura de refluxo durante 3 horas, arrefecida até à temperatura ambiente, diluída com 50 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e extractada com 3 x 25 ml de tolueno. A fase orgânica foi lavada com 50 ml de salmoura e concentrada in vacuo a um óleo que solidificou em repouso à temperatura ambiente, o resíduo foi cromatografado em sílica gel eluída com clorofórmio/acetonitrilo/metanol/amoníaco (10:2,5:0,25:0,03), para originar 66,7 mg (rendimento 19%) do composto em título; DCI NH₃ MS M/Z: 741 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3560, 3440, 3358, 1805 e 1678 cm^-1.

Exemplo 9 [IR- (IR*,2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*,14S*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadecan-7-ona composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9 S *,10S*,1IR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil) -oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona (210,7 mg, 0,295

834

4970.PG.01

mmol), produto do exemplo 1, foi dissolvido em 20 ml de ácido acético glacial. À solução resultante adicionaram-se 40 μΐ (2,157 equivalentes) de ácido difluoroacético (DFA) e 210 mg de óxido de platina. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente sob 405 kPa (4 atm) de hidrogénio durante 4 horas. Adicionou-se acetato de amónio (160 mg) e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos. 0 catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com 50 ml de clorofórmio. Adicionou-se uma mistura de 50 ml de salmoura e 10 ml de hidróxido de amónio con centrado. A camada clorofórmica foi separada e a camada aquosa foi extractada com 30 ml de clorofórmio. As camadas clorofórmicas combinadas foram lavadas com uma mistura de 40 ml de salmoura e 5 ml de hidróxido de amónio concentrado. A solução clorofórmica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. 0 resíduo foi evaporado em acetonitrilo para remover todo o clorofórmio e seco sob vácuo para originar 230,4 mg de um vidro branco. 0 composto em título foi separado dos outros componentes do produto bruto por HPLC preparativa numa coluna YMC D-ODS-7 (20 x 250 mm) de fase inversa, eluida a 10 ml/min com metanol a 40% em água contendo 10 g/1 de hidrocloreto de trietilamina, 0,1 ml/1 de ácido acético glacial e 30 ml/1 de etilenoglicol. 0 produto bruto (vidro branco) foi dissolvido em 2,0 ml de metanol e a solução foi filtrada através de um filtro de nylon de 0,4 μ. A solução de metanol foi injectada na coluna de HPLC em 6 porções, totalizando 1,755 ml. O pico recolhido aos 14,7 min foi combinado após cada passagem e concentrado a menos de metade do volume recolhido, usando um evaporador rotativo e um banho de água aquecido a 45 °C. 0 concentrado foi diluído com um volume igual de salmoura e basifiçado (pH 10) com 20 ml de solução aquosa de carbonato de sódio a 10%. 0 produto foi extraído com 4 x 25 ml de clorofórmio. Os extractos combinados foram lavados com 30 ml de água, secos sobre sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados até à secura sob pressão reduzida. Após secagem sob vácuo, o resíduo foi dissolvido em 2 ml de acetonitrilo e tratado com 50 mg de bicarbonato de sódio. Após ser agitada durante 15 min, a mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado até à secura sob uma corrente de azoto.

834

4970.PG.01 composto em título (30,3 mg) foi obtido após secagem em vácuo;

FAB MS M/Z: 717 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC1₄) 3560, 3470, 3440,

3345 e 1660 cm^-1.

-57Exemplo 10

Reacção de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-jS-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona com Ácido Acético Aquoso

A [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R* )]-9- [(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j6-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona (515 mg, 0,72 mmol), produto do exemplo 1, em suspensão em 20 ml de água, adicionaram-se 20 ml de ácido acético glacial. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante aproximadamente 4 horas e seguidamente vertida em 300 ml de água. A solução foi basifiçada (pH 8-9) por adição de solução de bicarbonato de sódio a 5% e hidróxido de amónio com agitação suave. A solução aquosa foi vertida numa ampola de decantação contendo cloreto de metileno e a fase de cloreto de metileno foi separada. A fase aquosa foi extractada com 3 x 100 ml de cloreto de metileno. Os extractos de cloreto de metileno combinados foram concentrados sob pressão reduzida para originar 300 mg dos produtos de degradação do ácido. Um destes produtos foi identificado como o composto anidro correspondente, [1R-(1R*,2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,1OS*,11R*, 12R*,14S*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15,16-dioxatriciclo[10.2.1.I¹>⁴]pentadecan-7-ona. Uma amostra do produto anidro bruto (540 mg) foi cromatografada em sílica gel (aproximadamente 100 g) equilibrada com clorofórmio/ /acetonitrilo/metanol/amoníaco (10:3:0,4:0,03) e eluida com clorofórmio/acetobitrilo/metanol/amoníaco (10:3:0,6:0,006) para originar 100 mg do composto anidro. FAB MS M/Z: 715 (M+H)⁺; IV

834

4970.PG.01 (0,15% em CC1₄) 3460, 3435, 3330 e 1645 cm^-1; ¹³C RMN (DMSO-d6)

C9 a 114,3 ppm. [a]23_D = -ii_z8° (c 1,00; MeOH). Cristalizou-se uma amostra em acetonitrilo, p.f. 178-182°C.

Exemplo 11

Reacção de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j8-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona com ácido clorídrico aquoso composto [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3 - (dimetilamino) -0-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona (874 mg, 1,22 mmol), produto do exemplo 1, foi dissolvido em acetonitrilo e a solução foi concentrada a uma espuma sob pressão reduzida. Adicionou-se água (50 ml) à espuma raspando as paredes do frasco. Preparou-se uma solução de 2 ml de ácido clorídrico aquoso IN em 100 ml de água e adicionaram-se 39,33 ml desta solução, em porções, ao enol-éter de eritromicina A-lactama aquoso. Após se completar a adição o pH da solução resultante era 3. Como a amostra se dissolveu, foi necessário ajustar o pH por adição de ácido clorídrico aquoso IN, para manter o pH a aproximadamente 2,5. Após agitação da mistura reaccional durante 90 minutos, a reacção foi terminada vertendo a solução ácida numa ampola de decantação, com 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 5% e 3 ml de hidróxido de amónio concentrado. A fase aquosa foi extractada com 3 x 50 ml de cloreto de metileno. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Misturou-se sílica gel (aproximadamente 100 g) com acetonitrilo/amoníaco (10:0,5), de modo a formar uma lama, e verteu-se a mistura numa coluna. A coluna foi equilibrada com 2 1 de clorofórmio/acetonitrilo/metanol/amoníaco (10:3:0,5;0,05). 0 resíduo foi carregado na coluna e esta foi eluída com clorofórmio/acetonitrilo/metanol/amoníaco (10:0,3:0,5: :0,05),

4F -

-5973 834

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para originar 160 mg de [3R-(3£*,4â*,5S*,6R*,7£*,9â*, 11R*,12R*,13R*,14R*)]-4- (2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-14-etil-7, 12,13-tri-hidroxi-3,5,7,9,11, 13-hexametil-6- [[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]aza-ciclotetradecano-2,10-diona (eritromicina A lactama”). FAB MS M/Z: 733 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC14) 3560, 3430, 1675 e 1655 cm^-1; ¹³C RMN (DMSO-d6) C9 a 217,2 e 107,6 (mistura de cetona e 9,12-hemiacetal). [a]²³D = -52,9° (c 1,00;

MeOH).

Exemplo 12 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dldesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Preparou-se uma solução de metilamina a 15% em metanol, por adição de 15 ml de metilamina líquida a 85 ml de metanol arrefecido a 0°C num banho de gelo. Dissolveu-se o composto [2R[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-DÍdesoxí-3-C-metil-3-O-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo- [8.2.1]tridec-12-en-5-ona (441,6 mg, 0,6327 mmol), do Passo 4 do Exemplo 1, em 10 ml da solução de metilamina num tubo de reacção de paredes resistentes, de 20 ml. 0 tubo de reacção foi selado com uma rolha de rosca de teflon e anel tórico e seguidamente, o tubo foi aquecido a 100°C num banho de óleo durante 5 dias. Retiraram-se amostras da mistura reaccional, que foram analisadas usando o sistema de HPLC descrito no Passo 3 do Exemplo IA. De acordo com a análise por HPLC, o material epóxido de partida foi consumido. O material de reacção, bruto, foi diluído com 100 ml de solução aquosa de bicarbonato de sódio a 8% e extractado com 3 x 25 ml de clorofórmio. O extracto clorofórmico foi lavado com 50 ml de uma solução 1:1 de bicarbonato de sódio aquoso a 8% e salmoura. A solução clorofórmica foi seca sobre sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi dissolvido em 30 ml de acetonitrilo e o solvente foi removido in

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vacuo, para originar um resíduo amarelo escuro. 0 resíduo (430 mg) foi cromatografado em 50 g de sílica gel que tinha sido equilibrada com clorofórmico/acetonitrilo/metanol/hidróxido de amónio (87,8:10:2:0,2 v/v/v/v), eluindo a 2,1 ml/min com o mesmo solvente usado para equilibrar a coluna, seguido de, após se recolherem sessenta e cinco fracções de 15 ml, clorofórmio/acetonitrilo/metanol/hidróxido de amónio (83,6:10:6:0,4 v/v/v/v), para originar 275,2 mg (rendimento 60%) do composto em título; DCI/NH₃ MS M/Z: 729 (M+H)⁺; IV (0,15% em CC14) 3560, 3510, 3460, 1700 e 1625 cm^-1. [a]D 22°C = -58,7° (C 1,00; MeOH).

Exemplo 13

Preparação alternativa de [2R-[2R*,3R*(IR*,2R*),6R*,7S*,8S*,9R*, 10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-di-hidroxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9- [[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -)3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Suspendeu-se eritromicina A (30,01 g, 40,89 mmol) em 200 ml de acetonitrilo. À suspensão agitada, adicionaram-se 10,541 g (81,751 mmol) de ácido dicloroacético em 100 ml de acetonitrilo, durante um período de 20 minutos; a eritromicina dissolveu-se após a adição de cerca de metade do volume. A mistura reaccional foi agitada durante 2,5 horas a 23°C, originando o enol-éter. À solução contendo o intermediário enol-éter, adicionou-se durante um período de 30 minutos, uma solução de 16,951 g (122,65 mmol) de carbonato de potássio dissolvido em 300 ml de metanol:água 1:1 (v/v). A mistura foi então submetida a refluxo durante 1,5 horas, arrefecida até à temperatura ambiente e concentrada in vacuo, para originar um resíduo branco. 0 resíduo foi dissolvido numa mistura de 200 ml de clorofórmio, 200 ml de solução de bicarbonato de sódio a 8% e 100 ml de salmoura saturada. A fase orgânica foi então separada, a fase aquosa foi extractada com clorofórmio e as fases orgânicas foram combinadas. Esta solução foi lavada com uma mistura de solução de bicarbonato de sódio e salmoura saturada, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada até à secura. 0 resíduo foi dissolvido em 100 ml de acetonitrilo e evaporado in vacuo, para originar 28,67 g de

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-61produto bruto como uma espuma.

ar’·

O material foi cristalizado em acetonitrílo para originar 18,717 g do produto em título.

Efectuou-se uma segunda extracção e o rendimento total encontra do para a reacção foi de 69%.

Exemplo 14 [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,4,6-trídesoxÍ-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-1-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Passo 1: [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/J-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Uma amostra de 3,001 g (4,300 mmol) de [2R-[2R*,3R*(IR*, 2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-α-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,

10,12-pentametil-9-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona (produto do Exemplo IA, passo 2 acima), foi dissolvido em 40 ml de cloreto de metileno e adicionaram-se 1,2 ml de trietilamina e 0,81 ml de anidrido acético. Deixou-se a reacção prosseguir durante 24 horas, após o que o solvente foi removido sob vácuo e o resíduo foi dissolvido em 100 ml de acetato de etilo. A solução de acetato de etilo foi lavada com soluções de NaHCO₃ a 8%, NaH₂PO₄ a 5%, H₂0 e NaHCO₃ a 8%, seguidamente seca sobre sulfato de sódio, filtrada e levada à secura. A secagem exaustiva originou 3,175 g do produto em título. Este material foi utilizado no passo seguinte sem qualquer purificação.

Passo 2: [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-4-0-imidazoliltiocarbonil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-O-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-Ό-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-

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-en-5-ona

Dissolveu-se uma amostra de 3,109 g do produto do Passo 1 anterior, 2,064 g (16,894 mmol) de DMAP e 2,260 g (12,681 mmol) de 1,1'-tiocarbonildiimidazol (Aldrich), em 40 ml de cloreto de metileno e deixou-se a reacção prosseguir a 25°c durante 18 horas. À mistura reaccional, adicionaram-se então 1,15 ml de NH4OH concentrado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 45 minutos. Seguidamente, adicionaram-se 100 ml de tampão acetato 0,5 M, seguidos de 2 ml de ácido acético para ajustar o pH a 6,0 e a mistura foi agitada durante 2 horas. Adicionou-se mais solvente e a fase orgânica foi separada. Após uma primeira lavagem com tampão acetato (pH 4,7) e seguidamente com NaHC0₃ a 8%, a solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e levada até à secura para originar 3,357 g do composto em título.

Passo 3 : [2R-[2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*]]-7-(2,4,6-tridesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-0-acetil-3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo[8.2.1]tridec-12-en-5-ona

Dissolveu-se uma mistura de 3,319 g (3,905 mmol) do produto do passo 2 anterior e 0,128 g (0,779 mmol) de AIBN (2,2'-azobis(2-metilpropionitrilo), em 60 ml de tolueno seco. A esta solução adicionaram-se 2,2 ml (6,98 mmol) de hidreto de tri-n-butilestanho e a mistura foi desgaseifiçada e mantida sob N₂ antes de ser aquecida num banho de óleo a 100°C durante 1 hora. A mistura foi concentrada a um xarope e seguidamente dissolvida em 100 ml de CHC1₃. Esta solução foi lavada com tampão acetato (pH 4,7), seguidamente com NaHC0₃ aquoso a 8%, seca sobre Na2SO₄, filtrada e levada até à secura para originar 5,653 g de um resíduo. 0 resíduo foi dissolvido em 200 ml de acetonitrilo e lavado 3 vezes com porções de 50 ml de hexano. A camada de acetonitrilo foi concentrada até à secura para originar 2,69 g do produto em título.

Exemplo 15 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-trideso73 834

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xi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Colocou-se uma amostra de 508 mg do produto do Exemplo 14 num tubo de pressão de 20 ml. A amostra foi dissolvido em 10 ml de NH₃ a 15% em metanol e o tubo foi inundado com N₂, selado e aquecido a 100°C num banho de óleo durante 4 dias, o conteúdo do tubo foi levado até à secura e o produto bruto foi purificado por cromatografia preparativa em sílica gel, eluíndo com NH4OH:metanol:acetonitrilo:CHC1₃, 0,2:2:10:100. 0 solvente foi removido das fracções que continham o produto, para originar 228 mg do composto em título como um vidro. MS M/Z 699 (M+H). IV (CC1₄): 3520b, 3440sh, 3355sh, 1700w, 1662s. [a]_D = -33,6° (c=0,50, MeOH, 24^eC). Anal. Cale, para C₃₇H₆₆N₂O₁₀: C, 63,58; H, 9,52; N, 4,01; Encontrado: C, 63,15; H, 9,48; N, 3,98.

Exemplo 16 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,6-trídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona

Colocou-se uma amostra de 607,2 mg do produto do Exemplo 14 num tubo de pressão de 20 ml e adicionaram-se 10 ml de metilamina a 15% em metanol. 0 tubo foi inundado com N₂, selado e aquecido a 100°C num banho de óleo durante 4 dias, o tubo foi aberto e o solvente foi removido para originar 634 mg de produto bruto. Este material foi purificado por cromatografia em sílica-gel, eluíndo com NH₄OH:metanol:acetonitrilo:CHC1₃0,2:2:10:100. 0 solvente foi removido das fracções contendo produto, para originar 302,4 mg do composto em título como um vidro. [a]_D = -55,0° (c=l,00, MeOH, 29°C). IV (CC1₄): 3510b, 3460b, 1700w, 1622s cm^-1. Anal. Cale, para ^38^Η68^Ν2°10^: C, 64,02; H, 9,61; N, 3,93; Determinado: C, 64,02; H, 9,67; N, 3,92.

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-64Exemplo 17 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dÍdesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(n-butilmetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona

A um balão de paredes resistentes (Parr Instrument Co.), adicionaram-se 311 mg do produto do Exemplo 4, 30 ml de metanol, 120 mg de Pd/C a 10% e 0,30 ml de butiraldeído. 0 balão foi carregado com 405 kPa (4 atm) de hidrogénio e agitado durante 16 horas. 0 catalisador foi removido por filtração e o solvente foi removido sob vácuo. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo e levado até à secura duas vezes, para originar 340 mg de produto bruto. O produto bruto foi purificado por HPLC de fase inversa, eluíndo com acetonitrilo:água 40:60, contendo 10 g/1 de acetato de amónio. As fracções de eluente foram concentradas a metade do seu volume e basificadas pela adição de NaOH IN em pequenas porções. 0 produto foi extraído com clorofórmio que foi lavado com NaHCO₃ aquoso a 8%, seco sobre sulfato de sódio, filtrado e concentrado. 0 resíduo foi dissolvido em acetonitrilo que foi então removido sob vácuo, para originar 170,6 mg do produto em título como um vidro. MS M/Z 757 (M+H). [a]_D = -32,9° (c=l,00, metanol, 28°C). IV (CC1₄): 3560, 3520, 3440, 1702, 1660 cm^-1. Anal. Cale, para C₄₀H₇₂N₂0₁₁: C, 63,46; H, 9,59; N, 3,70; Determinado C, 62,95; H, 9,48; N, 3,63.

Exemplo 18 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(n-propilmetilamino)-jS-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona

Por um processo semelhante ao descrito no Exemplo 17, fizeram-se reagir 382 mg do produto do Exemplo 4 com propionaldeído, em vez de butiraldeído, para originar 196,2 mg do composto em título como um vidro branco. MS M/Z 743 (M+H). [a]_D = -32,8° (c=l,00, metanol, 28°C). Anal. Cale, para C₃₉H₇qN₂O₁₁: C, 63,05; H, 9,50; N, 3,79; Determinado: C, 63,05; H, 9,50; N, 3,79.

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Exemplo 19 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dídesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-propilmetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona

Num tubo de pressão de 20 ml colocaram-se 200 mg do produto do Exemplo 4, 0,5 ml de diisopropiletilamina, 1,0 ml de 2-iodopropano e 2,0 ml de acetonitrilo. 0 tubo foi inundado com N₂, selado e aquecido a 70°C num banho de óleo. Para o processamento, combinaram-se os produtos de duas destas experiências. Os solventes foram removidos e o resíduo foi dissolvido numa mistura de 30 ml de acetato de etilo, 20 ml de NaHC0₃ aquoso a 8% e 100 mg de tiossulfato de sódio. A fase orgânica foi lavada, seca e filtrada para originar 354 mg de produto bruto. O produto bruto foi purificado por HPLC, por um processo semelhante ao descrito no Exemplo 19, para originar 196,2 mg do composto em título como um vidro branco. MS M/Z 781 (M+H). [a]_D = -32,8° (c=l,00 metanol, 27°C). Anal. Calc. para C3gH₇₀N₂O_ld: C, 63,05; H, 9,50; N, 3,79; Determinado: C, 62,54; H, 9,50; N, 3,77.

Exemplo 20 [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-dldesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-butilmetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-eno-7-ona

Por um processo semelhante ao descrito no Exemplo 19, fizeram-se reagir 400 mg do produto do Exemplo 4 com 2-iodobutano, em vez de 2-iodopropano, para originar, após purificação por HPLC, duas amostras (isómeros N-(S.)-2-butil e N-(R)-2-butil). 21a. (isómero S): 134 mg; MS M/Z 757 (M+H). [a]_D = -30,2° (c=0,5, metanol, 27°C). IV 3560, 3440, 3350, 1700, 1658 cm¹. 21b. (isómero R): 112,5 mg; MS M/Z 757 (M+H). [a]_D = -36,4° (c=0,5, metanol, 27°C). IV 3560, 3440, 3350, 1700, 1659 cm¹.

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Exemplo 21

Análise In Vitro da Actividade Procinética Gástrica

Os compostos do presente invento foram testados in vitro. quanto à sua capacidade para induzir contracção de tiras de músculo liso isoladas do intestino delgado de coelhos, usando o processo seguinte.

Os coelhos foram sacrificados e removeram-se rapidamente 15 cm de duodeno que foram colocados numa solução de Ringer modificada (cloreto de sódio 120 mM, bicarbonato de sódio 25 mM, cloreto de potássio 4,7 mM, cloreto de cálcio 1,25 mM, sulfato de magnésio 1,20 mM e glucose 5,6 mM), arrefecida em gelo. A camada longitudinal do músculo foi separada do músculo circular por dissecação brusca e cortada em tiras de 10 x 20 mm. As tiras duplamente dobradas foram suspensas verticalmente entre dois ganchos em 10 ml de banho de tecidos, com uma pré-carga mecânica de 1 g. O gancho superior foi ligado a um transductor de força isotónico e o seu deslocamento foi registado num polígrafo Grass. Os banhos de tecido continham solução de Ringer modificada a 37°C e foram continuamente gaseificados com 95% oxigénio/5% dióxido de carbono para manter o pH a 7,5.

Após um período de estabilização de pelo menos 60 minutos efectuou-se o teste de contractibilidade de uma série dose-resposta, adicionando concentrações finais crescentes de metacolina (10“⁷ Μ, 10^-6 M e 10^-5 M) em volumes de 100 μΐ. As soluções de banho foram substituídas pelo menos três vezes entre as doses.

Após se completar a série dose-resposta com metacolina, iniciou-se, pelo mesmo processo usado para a série dose-resposta com metacolina, uma curva dose-resposta com o composto em teste, com pelo menos cinco concentrações de composto teste compreendidas no intervalo de 10“¹⁰ M a 10”⁴ M. Os tecidos foram lavados repetidamente entre doses e os estudos foram completados registando a resposta contráctil à metacolina 10~⁵ M, para assegurar a integridade da preparação de músculo. As respostas contrácteis τχβίί»»

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4970.PG.01

foram expressas como percentagem da contracção máxima. A concentração de compostos teste que produz metade da contracção máxima (valor ED₅₀) e o logaritmo negativo do valor ED₅₀ (pED₅₀), foram estimados a partir das curvas dose-resposta. Os valores pED₅₀são apresentados na Tabela 1, em comparação com a eritromicina A que é um agente procinético gastrintestinal conhecido. A partir destes dados é evidente que os compostos do presente invento são agentes procinéticos potentes.

Tabela 1

Análise In Vitro da Contracção do Músculo Duodenal Liso de Coelho

Exemplo Número	pEDcn (-locr M)	Potência Relativa
1	7,10	18,0
3	7,50	45,0
4	6,50	5,0
5	7,10	18,0
7	6,60	5,6
8	6,30	3,0
9	6,25	2,5
10	6,10	1,8
12	7,22	23,4
15	8,27	263
16	8,50	447
17	5,67	0,66
18	6,00	1,41
19	7,63	60,3
20 (S)	8,40	355
20 (R)	9,27	2630
eritromicina A	5,85	1,0

Exemplo 22

Actividade Procinética Gastrintestinal: Análise In Vivo em cães

Anestesiados

Os compostos do presente invento foram testados in vivo / /

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4970.PG.01 quanto à sua capacidade para induzir motilidade gastrintestinal usando o processo seguinte: anestesiaram-se cadelas de raça bigle adultas, privadas de alimento durante 16-20 horas e pesando entre 7,0 e 12,0 kg, com 30 mg/kg de pentobarbital de sódio, administrado intravenosamente. A anestesia foi mantida durante a experiência por infusão intravenosa contínua de 5 mg/kg de Nembutal em solução salina a 0,9%. Após entubação tragueal, os animais passaram a respirar mecanicamente, com uma bomba respiratória de pressão positiva Harvard. A temperatura rectal foi mantida a 37°C por meio de uma placa de aquecimento animal. Inseriu-se um catéter de polietileno na artéria femural direita, para registar a pressão sanguínea e o ritmo cardíaco, usando um transductor de pressão Steatham P23. Introduziram-se também catéteres de polietileno na veia femural direita, para infusão do anestésio e na veia femural esquerda, para administração de droga e tiragem de amostras de sangue. O abdómen foi aberto com uma incisão na linha central, imediatamente abaixo da protuberância xifoide e prolongando-ser 2 cm abaixo do umbigo.

Usaram-se cinco transductores de medição de tensão, para seguir a actividade contráctil da camada muscular circular do estômago ou intestino. Cada um foi calibrado para originar uma deflecção de 60% da escala, ao suportar um peso de 100 g entre duas superfícies planas. No entanto, devido a variabilidade na resposta do transductor, verificou-se que o sinal de saída, quando aplicado à camada muscular circuilar, variava, apesar do primeiro passo de calibração. Assim, efectuaram-se subsequentemente ajustamentos finais de sensibilidade com transductores suturados no local, para originar deflecções comparáveis às dos transductores emparelhados. Suturaram-se dois transductores à superfície serosal do antro do estômago. 0 primeiro encontrava-se aproximadamente a 5 cm do piloro e o segundo a 1 cm do primeiro. Suturaram-se também dois transductores ao duodeno; encontravam-se a cerca de 12 cm de distância do piloro e a cerca de 1 cm um do outro. Suturou-se apenas um transductor ao jejuno, aproximadamente a 10 cm do ligamento de Treitz e este não foi calibrado com um par. Usaram-se dois transductores, quer no estômago quer no duodeno, para minimizar a variabilidade.

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—69—

Após a aplicação dos transductores, a ferida abdominal foi fechada e deixaram-se estabilizar os padrões de motilidade gastrintestinal, durante 45 a 90 minutos, antes da administração de drogas.

A motilidade e a pressão sanguínea, foram registadas num oscilógrafo Grass Modelo 7. Os registos foram analisados manualmente por um sistema de classificação que incluía a magnitude e a duração das contracções musculares. 0 sistema manual de classificação consistia na medição da altura do impulso, contando as ondas contrácteis registadas em relação a cinco amplitudes seleccionadas (7, 17, 34, 68, 136, >136 g). Usou-se uma guia transparente para facilitar a classificação. Atribuíu-se uma classificação mínima, de altura de impulso a todas as contracções entre estes níveis (uma classificação de 0,5 a todas as contracções entre 7 e 17 g, uma classificação de 1,0 às contracções entre 17 e 34 g, uma classificação de 2,0 às contracções entre 34 e 68 g, uma classificação de 4,0 às contracções entre 63 e 136 g e uma classificação de 8,0 às contracções superiores a 136 g). As classificações foram computadas durante o período de 60 minutos após a administração da droga. Computaram-se as classificações médias dos dois transductores do estômago e do duodeno. As drogas foram administradas durante 2 ou 3 períodos, consistindo cada período em 90 minutos. No período 1, o composto em teste foi administrado tipicamente e as respostas de motilidade foram registadas durante 60 minutos. No período 2 administrou-se então lactobionato de eritromicina A para estabelecer um controlo interno para cada animal estudado. Em cada experiência, todos os compostos foram administrados na mesma dose, usualmente 4,0 mg/kg.

Efectuaram-se várias experiências apenas com lactobionato de eritromicina A. A eritromicina foi administrada em ambos os períodos e os resultados foram analisados pelo processo padrão. Devido à taquifilase dependente da dose, a resposta de motilidade induzida pela eritromicina no período 1, resultou numa resposta reduzida à eritromicina no período 2. Os compostos

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teste devem, idealmente, ser investigados, por administração prévia e subsequente, relativamente à dosagem de eritromicina, para minimizar os desvios taquifiláticos. Para uma análise inicial, no entanto, o protocolo padrão era, no entanto, composto teste (período 1) seguido de eritromicina (período 2).

A expressão final dos resultados era uma proporção entre a classificação de motilidade para o composto teste (período 1) e lactobionato de eritromicina A (período 2). Para o estômago, duodeno e jejuno a classificação de motilidade em resposta ao composto teste foi dividida pela classificação de motilidade para a eritromicina. Destas três razões, calculou-se uma média aritmética para o índice global de motilidade, no qual as contribuições de cada uma das três áreas de tecidos, foram consideradas com igual peso. O composto do Exemplo 1, quando testado in vivo como descrito acima, exibiu um índice de motilidade de 19,9 em comparação com a eritromicina A, à qual foi atribuído um índice de motilidade de 1, demonstrando que os compostos do presente invento exibem uma actividade procinética gastrintestinal potente in vivo.

Claims

REIVINDICACÕES

1 - Composto caracterizado por ter a fórmula ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que a linha ponteada é uma ligação opcional;

A é seleccionado de entre o grupo que consiste em:

R¹ e R² são seleccionados, independentemente um do outro, de entre o grupo que consiste em hidrogénio, alquilo inferior, alquilo inferior substituído com halogéneo, alquilo inferior substituído com ciano, alquilo inferior substituído com hidroxi, alcenilo inferior, alcinilo inferior, cicloalquilo inferior, (cicloalquil inferior)metilo e benzilo;

R³ está ausente ou é seleccionado de entre o grupo que consiste em alquilo inferior, alcenilo inferior, alcinilo inferior e benzilo e está acompanhado por um contra-ião farmaceuticamente aceitável de modo a formar um sal de amónio quaternário;

R⁴ é hidrogénio ou, tomado em conjunto com R®, forma uma ponte de éter;

R⁵ é seleccionado de entre o grupo que consiste em -OH e -0R⁹ em que R⁹ é seleccionado de entre alquilo inferior, alcanoílo inferior e -S(O)₂CH₃ ou, tomado em conjunto com R⁶ e

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4970.PG.01 —72— com os carbonos aos quais estão ligados, forma um carbonato cíclico;

é seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio, -OH e -0R¹⁰ em que R¹⁰ é seleccionado de entre alquilo inferior, alcanoílo inferior e -S(O)₂CH₃; ou, tomado em conjunto com R⁴, forma uma ponte de éter; ou, tomado em conjunto com R⁵ e com os carbonos ao qual estão ligados, forma um carbonato cíclico;

R⁷ é seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio e metilo; R⁸ é seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio e alquilo inferior ; e é seleccionado de entre o grupo que consiste em

hidrogénio e hidróxi.
2 - Composto de acordo com a reivindicação

1, caracterizado por A ser
3 - Composto de acordo com a reivindicação

1, caracterizado por A ser
4 - Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R⁵ e R⁶, em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão ligados, formarem um carbonato cíclico.
5 - Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por R⁴ e R⁶ tomados em conjunto formarem uma ligação éter.
6 - Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto ser seleccionado de entre o grupo que consiste em [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,llR*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-

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-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -j3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1] pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina Alactama);

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino ) -j3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1] pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo- [10.2.1] pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(metil(2-propenil)amino)-ρ-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

brometo de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9 S *,10S*,1IR*, 12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,

6-tridesoxi-3-(dimetil(2-propenil)amónio)-0-D~xilo-hexopiranosil]-oxi]-6-aza-15-oxabiciclo-[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

13-O,14-0-carbonato de [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*, 10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll- [[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-j3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo-[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[IR-(IR*,2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*,14S*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-β-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadecan-7-ona;

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4970.PG.01

-74[IR-(IR*,2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*,14S*)]-9-[ (2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3 - (dimetilamino) -/S-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15,16-dioxatriciclo[10.2.1.I¹'⁴]pentadecan-7-ona;

[3R-(3R*,4S*,5S*,6R*,7R*,9R*,11R*,12R*,13R*,14R* ) ] -4-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-14-etil-7,12,13-tri-hidroxi-3,5,7,9,11,13-hexametil-6-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino) -j8-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] azaciclo-tetradecano-2,10-diona (eritromicina A-lactama);

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-meti1-α-L-ribo-hexopiranosi1)oxi]-5-eti1-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino )-ρ-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2. l]pentadec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina C-lactama);

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-/J-D-xilo-hexopiranosil]oxi] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2. 1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]penta-dec-14-en-7-ona (enol-éter de eritromicina D-lactama);

[2R-(2R*,3S*,4S*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(etilmetilamino)-jS-D-xilo-hexopiranosil] oxi-6-aza-15-oxabiciclo [10.2.l]penta-dec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(dimetilamino ) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi-6-aza-15-oxabiciclo [10.2.1] pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*(IR*,2S*),6R*,7S*,8S*,9R*,10R*)]-7-[(2,4,6-tridesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-3-(1,2-epoxi-l-metilbutil)-2,6,8,10,12-pentametil-9-[[2-O-acetil-3,4,6-

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4970.PG.01 tridesoxi-3-(dimetilamino)-0-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-4,13-dioxabiciclo-[8.2.1]tridec-12-en-5-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,4,

6-tridesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo-[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,1IR*,12R*)]-9-[(2,4,

6-tridesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,6,8,10,12,14-heptametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3 -(dimetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil] oxi] -6-aza-15-oxabiciclo-[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3- (n-butilmetilamino) -/3-D-xilo-hexopiranosil ] oxi ] -6-aza-15-oxabiciclo[10.2.l]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(n-propilmetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil] oxi ]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

[2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-propilmetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil] oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona; e [2R-(2R*,3R*,4R*,5R*,8R*,9S*,10S*,11R*,12R*)]-9-[(2,6-didesoxi-3-C-metil-3-0-metil-a-L-ribo-hexopiranosil)oxi]-5-etil-3,4-di-hidroxi-2,4,8,10,12,14-hexametil-ll-[[3,4,6-tridesoxi-3-(i-butilmetilamino)-/3-D-xilo-hexopiranosil]oxi]-6-aza-15-oxabiciclo[10.2.1]pentadec-14-en-7-ona;

e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
7 - Intermediário útil na preparação de um composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ter uma fórmula seleccionada de entre o grupo que consiste em (segue fórmula)

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4970.PG.01 que consiste em em que R⁶ é seleccionado de entre o grupo hidrogénio e -OH;

seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio e metilo; R⁸ é seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio e alquilo inferior; e R⁹ é seleccionado de entre o grupo que consiste em hidrogénio e

hidroxi.
8 - Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 1, em que A é um grupo de fórmula caracterizado por compreender o passo de tratamento de um amino

-álcool de fórmula com uma base adequada, sob condições suficientes para induzirem a ciclização numa lactama.

73 834

4970.PG.01
9 - Processo para a preparação de um composto de acordo com a reivindicação 1 em que A é um grupo de fórmula CH₃ e R⁶ é -0H_z caracterizado por compreender o passo de se tratar um epóxido de fórmula com uma amina sob condições suficientes para induzirem a abertura do epóxido e a ciclização espontânea numa lactama.
10 - Composição farmacêutica caracterizada por compreender uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com a reivindicação 1 e um transportador farmaceuticamente aceitável.
11 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso no melhoramento da motilidade gastrintestinal de seres humanos e de outros mamíferos.
12 - Composto de acordo com a reivindicação 1 para uso facilitação da colocação de instrumentação de diagnóstico ou de terapia na porção proximal do intestino delgado de um ser humano ou de outro mamífero.