PT1276505E - Misturas de copolímeros tribloco de poliésterpolientilenoglicol - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

MISTURAS DE COPOLÍMEROS TRIBLOCO DE POLIÉSTERPOLIETILENOGLICOL A presente invenção refere-se a misturas solúveis aquosas de dois ou mais tipos de copolimeros bloco biodegradáveis e à sua utilização na administração de fármacos parentérica, ocular, transdérmica, vaginal, bocal, transmucosal, pulmonar, transuretral, rectal, nasal, oral, ou auricular. Mais particularmente, esta invenção refere-se a composições possuindo propriedades de gelificação térmica reversa melhoradas, compreendendo dois ou mais copolimeros tribloco biodegradáveis, consistindo em blocos de poliéster e polietilenoglicol(PEG) biodegradáveis.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO E SUMÁRIO DA ARTE ANTERIOR

Muitas macromoléculas biologicamente bioactivas, tais como péptidos/proteinas e DNA, que são eficazes para terapia génica e para uma variedade de aplicações terapêuticas, ficaram comercialmente disponíveis através de avanços na tecnologia do DNA recombinante e outras. Todavia, estas moléculas estão limitadas à administração parentérica, devido à sua susceptibilidade a degradação no tracto gastrointestinal. 0 tratamento de doenças ou indicações crónicas pode requerer múltiplas injecções por dia ao longo de muitos dias, ou meses. A submissão do doente ao tratamento é normalmente fraca. Por isso, seria desejável desenvolver um sistema para a distribuição de

Proc. 4283 agentes bioactivos ou fármacos, em particular fármacos polipeptídicos ou proteicos, a uma taxa controlada ao longo de um periodo de tempo sustentado sem os problemas acima mencionados. Este sistema iria auxiliar a optimizar a eficiência terapêutica, minimizar os efeitos colaterais e, desse modo, melhorar o cumprimento do tratamento por parte do doente.

Foram investigados dispositivos poliméricos carregados com fármaco e formas de dosagem para tratamento terapêutico a longo termo de diferentes doenças , Devido a requisitos de c umprimi restr itc 3S, tais como biocomp >atibi 1rdade via de degradaçi So claramente defi nida, isitos de cumprimento obrigatório oossuindo uma produtos de degradaçê ío, existe: m presentemer ite poucos materiais poliméricos sintéticos ou naturais que podem ser util .izados para a distr ibuição cont rolada de fármacos, incluindo fármacos peptídicos e proteicos parte do Pedido u 'S N. ° Sé ri e U9/16 4 /- r- 0 0 0 de Outubro de 1998 qu ] a.s ^ f por sua vez, é uma parte da Patente l JS N. ° 6004573 que foi de Outubro de 19 '—j / e emitida em 21 de

No Pedido US co-pendente N. ° Série 09/396589 submetido em 15 de Setembro de 1999, que e uma continuação-em submetido em 1 suometiaa em bezembro de 1 999, é revezado um sis rema oe geiificciçao térmica reversa biodegradável compreendendo copoiímeros bloco do tipo ABA ou ΒΆΒ, possuindo um peso molecular médio entre c< erca de 20G0 çj 4 990 c< 51. a 83% em peso de um bloco de compreendendo um. poliéster biodegra e ce trca de 17 a 2

Proc. 4283 49% ern peso de um bloco de polímero B hidrof ílíco consistindo em poiietilenoglicol (PEG), É surpreendente que um copolímero de bloco com uma proporção tão grande de componente hidrofobo seja solúvel em água abaixo de temperaturas ambiente normais, tais como temperaturas tão baixas quanto 5°C.

0 sistema de gelificação térmica reversa referenciado no parágrafo anterior provoca toxicidade mínima e irritação mecânica mínima no tecido circundante devido a biocompatibí iidade dos materiais e à. flexibilidade do gel. Adícionalmente, estes copolimeros de bioco são biodegradados ern unidades não tóxicas. A 1ibertação gei if icaça.o gelificação concepção e do fármaco, força do gel, temperatura de e taxa de degradação de cada sistema de reversa podem ser controlados através de preparação apropriadas dos vários blocos de copolímero, riom.ead.amen te, através de modificações da percentagem em. peso de biocos A e blocos 3, das percentagens em mole das unidades de lactato e glioolato que constituem os blocos A, e o peso molecular e polidispersão dos copolimeros tribloco ABA ou BA3. A libertação do fármaco também é controlável através do ajuste da concentração do copolímero de bioco no líquido de distribuição de fármaco. Seria desejável proporcionar um sistema, de gelificação reversa biodegradável possuindo uma temperatura de gelificação dentro de um intervalo desejado, de modo a que o sistema permanecesse como um líquido a uma temperatura ambiente, mas se tornasse um gel â temperatura corporal do indivíduo ao qual. o fármaco é distribuído. Um sistema de gelificação térmica, reversa 3

Proc. 4283

Proc. 4283 ssa s tem.pe.rat uras riu gel. •j -p ; r'' : içâo pode ser j d. d O > f o rmu1 a d 0 0 G I. spensc ^ r-\ r\ a 3.3 impera tu ras ·- r r eduzindo Gtd 3 3 0 mc ido s: ignif í ca' tí V emente os f abrico e manuse : ams :nto . Adie iona lIit- ente, p ode ..tad a cX Cj 0.]. .1. X. X. C ( ação a· cídental dura nte cX aplicaç ã.o, gel if icaçao na s e r i n uja durar; -p ;u i. i r: j e cça.o, C orno .do a cima, a tempem a tu ra de ge: Lif í cac jão de um G .O aeli f ice acáo tél nica rev ersc pode ser smioienee, sistema modificada alterando o comprimento da cadeia, a percentagem em mole de gricorido/lactido (G/L) do bloco de polímero A, o peso molecular do bloco de polímero B, a. proporção em peso dos polímeros de bloco A e bloco B, e através de vários aditivos. Todavia, as modificações acima também alteram a qualificação do gel, assim como a. temperatura de gelificação. Adicionalmente, alguns aditivos podem não ser compatíveis com o fármaco a ser distribuído. Por isso, é desejável proporcionar um sistema de gelificação reversa com temperaturas de ge j-.1 f .1. c a ç a o a.jusua.vers sem. aluer.ar a.s suas qs.sirda.des· de gel desejáveis significativamente.

Exemplos de encon trados ru u. S 60045 7 3 e US - A - b 1. Secti on Ch, Wr 3ek GB, G iass A9 6. NA ÍTAK.I CHEMIC AT, KK)

arranjos da arte anterior podem ser Patentes US N05 US-A-5702717, US-A-.7949, e adicionalmente em DATABASE WPI 199071, Derwent Publications, London, 1990-129058 XP002327313 e JP 02 078692A

Foi descoberto ou mais copolímeros (PEG) proporcionam que misturas ou combinações de dois tribloco poiiéster/polietilenogiicoi propriedades de gelificação térmica 4

Proc. 4283 reversa melhoradas, tais como uma temperatura de gelificaça.o óptima, força do gel, taxa de degradação, e ainda mantêm as qualidades d« 2 g pi ] desejáv 'pi η C‘ ·— fVO O _L O i i cl -L sX 10 11 0 f UiUc l combinação de do i s ou mai copolímeros tribloc :o de poliés' ter/p oi iet ilenogl ico diferentes aumenta. a. flexibilidade da. est ri: mura., Tai sistemas de distribuição de fármaco possuem propriedades, tais como libertação de fármaco modulada e erosão da matriz modulada. Estas misturas ou combinações de copolímeros tribioco poliésteripolietrlenoglicol são muito úteis na prática da distribuição de fármaco porque permitem a optimízação para adaptação a um fármaco individual ou ás necessidades do doente. Por isso, a presente invenção proporciona um melhoramento significativo na arte.

GBJECTIYOS E SUMÁRIO DA IHVENÇAQ É um objectivo da presente invenção proporcionar sistemas de distribuição de fármaco que são biodegradáveis, exibem comportamento de gelífic :ação térmica reversa . melhorado, e proporcionar α ca] racterist ricas de libertação d e fármaco melhorado.

Outro objectivo desta invenção é proporcionar um sistema de distribuição de fármaco para a administração parentérica de fármacos hidrofílicos ou hidrófobos, fármacos peptidicos ou proteicos, hormonas, genes, oligonucleótidos ou agentes anti-cancro. 5

Proc. 4283

Outro objectivo desta invenção é proporcionar uni método para a administração parentérica. de íármacos numa matriz polimérica biodegradável, que resulta na formação de um depósito de gel no corpo, a partir do qual os fármiacos são libertados a uma taxa controlada.

Estes e outros objectivos são alcançados proporcionando uma composição de copollmero biodegradável possuindo propriedades de gelif reação térmica, reversa, melhoradas, como apresentado nas reivindicações anexas.

Preferencialmente, o poliéster biodegradável é sintetizado a partir do grupo consistindo em D,L-lactido, D-lactido, L-lactido, ácido D,L-láctico, glieolido, ácido glicólico, s“caproiactona, ácido s-hu.droxi bexonóico, γ-butírolactona, ácido γ-hibroxibutírico, δ-valerolactona, ácido 5-hidroxivalérico, ácidos hídroxibutiricos, ácido málico e copolímeros destes. Mais preferencialmente, o poliéster bi odegradáve1 é sintetizado a partir de monómeros seleccionados a partir do grupo consistindo em D,L-lactido, D-lactido, L-lactido, ácido D,L-láctico, ácido Ό-iáctieo, ácido L-láctíco, glieolido, á.cido glicólico, ε-caprolactona, ácido ε-hidroxi bexanóico e copoiimeros destes. Ainda mais preferível, o poliéster biodegradável é sintetizado a partir de monómeros seleccronados a. partir do grupo consistindo em D,L-lactido, D-lactido, L-lactido, ácido D, L-láctico, ácido D-láctico, ácido L-láctico, glieolido, ácido glicólico e copoiimeros destes. Para efeitos de ilustração, os copoiimeros de bloco A são geralmente unidades de iactído ou iactido-co-giicoiido. Todavia, salvo referência em 6

Proc. 4283 contrário, os termos "lactido", "lactato", ou incluirão todos os derivados de ácido láctico "glicolido", "glic ^olato", ou "G" incluirão toc los os derivados de ácido qlicolico e

No bioco A. de poliéster hidrófobo de ambos os Componentes 1 e II, a proporção molar do conteúdo em lactato em relação ao conteúdo em glicolato (proporção L:G) está entre cerca de 3:1 e cerca de 1:0, preferencialmente entre cerca de 1:1 e cerca de 1:0, O polietilenoglicol (PEG) é algumas vezes também referido como poli(óxido de etileno) (PEO) ou poli(oxietileno). Os termos podem ser utilizados indistintamente para os objectivos desta invenção. O peso mo lecular médio de PEG no Componente 1 e s t á no intervalo de 900 a 2000, preferencialmente 100 0 a : 1450. G peso mo lecular médio de PEG no Componente II está no intervalo de 60 0 a 2000, t sreferencialmente 900 a 1150 . 0 Componente 1 possui uma temperatura de geiific :açâo inferior ao

Componente II. A mi st mais tipos de copolimeros tribloco de poliéster políet ilenogricor ABA ou BAB pode ser realiz; ada misturando dois ou mais copolimeros tribloco si ntetízados indiv: .1. Ci U ci I. T:.1Θ U f_. Θ f o u. sintetirando d.ois ou mais copolimeros tribloco num tubo de reacção. A mistura de copolimeros resultante dos dois processos acima pode pc ou diferente suír as mesmas propriedades de No último método, ambos o o poiimero 7

Proc. 4283 possuem blocos de poliéster A cora a mesma proporção lactido/glzcolrdo, peso molecular e polidispersão.

Serão óbvios objectivos e vantagens desta invenção a partir da descrição detalhada seguinte das várias formas de realização e dos exemplos.

Os objectivos, cara.cterist.icas e vantagens da invenção, acima referidos e outros, tornar-se-ão óbvios a. partir da descrição detalhada que se segue, em ligação aos desenhos que a acompanham, nos quais: FIGURA 1 Correspondendo ao Exemplo 3, Ilustra a temperatura de gelíficaçâo de uma solução (23% p/p) contendo uma mistura de Componentes I e II como uma função da percentagem em peso de Componente II na mistura, FIGURA 2 Correspondendo ao Exemplo 5, ilustra a temperatura de gel if reação de uma mistura, de um copolímero quase insolúvel em água (Componente I), e um copolímero de baixo peso molecular solúvel em água (Componente II) a concentrações variáveis. FIGURA 3 Correspondendo ao Exemplo 6, ilustra a. dissolução de zinco-insuiína de um gel composto de misturas de copoiímeros trrbioco do Componente I e copolítrteros tribloco do Componente II em proporções V cL 1Γ .1. 3. V 0.1. 3 *

Proc. 4283 FIGURA 4 Correspondendo ao Exemplo 7, ilustra a. erosão (37°C) de geles preparados mistarando dois copolímeros tribloco com várias proporções em peso de Componente I e Componente II. riwejpxíTpSri •nr? xrry&M&cí rst? <Uuΰyi4v I. i/Jii £ viwílí&w1 íJSLt

PREFERIDAS DA INVENÇÃO

Esta invenção proporciona um sistema de qelificação reversa possuindo propriedades de gelificação térmica reversa melhoradas, que compreendem misturas de vários componentes de copolímero tribloco poliéster/polietilenoglicol biodegradável. Os componentes de copolímero tribloco individuais podem ser sintetizados separadamente e depois misturados, ou serem sintetizados por polimerização de dois ou mais polímeros de polietilenoglicol possuindo diferentes pesos moleculares num. tubo de reacção.

Como aqui utilizados, os termos seguintes terão os significados atribuídos: "Parentérico" irá significar intramuscular, intraperitoneal, intra-abdominal, subcutâneo, e, tanto quanto for exequível, intravenoso e intra-arterial. "Temperatura de gelificação" significa a temperatura à qual o copolímero de bioco biodegradável é submetido a gelificação térmica reversa, i. e. a temperatura abaixo da qual o copolímero de bloco é solúvel em água e acima, da qual o copo.lime.ro de bloco é submetido a. transição de 9

Proc. 4283 fase para aumentar a. viscosidade para formar um gel semi-sólido. Esta temperatura é também conhecida como a temperatura de solução critica mais baixa (LCST).

Os termos "temperatura de gelificação" e "temperatura de gelrfreação térmica reversa", "temperatura gel/sol" ou afins, serão utilizados indistintamente quando se referem à temperatura de gelificação, "Solução de polímero", "solução aquosa", e afins, quando utilizados em referência a um copolímero de bloco biodegradável contido nessa solução, significará uma solução à. base de água possuindo essas misturas ou. combinações de copolímero de bloco nela dissolvidas a uma concentração funcional, e mantida a uma temperatura abaixo da temperatura de gelificação das misturas de copolímero de bloco * "Gelificação térmica reversa" é o fenómeno pelo qual a solucao cie um copolímero de bloco aumenta espontaneamente em viscosidade, e em mu itos casos se transforma num gel semi-sólido, à medida que a temperatura da solução é aumentada acima da temperatura de gelificação do copolímero. Para o objectivo da invenção, o termo "gel" inclui tanto o estado seml-sólido como o estado de alta viscosidade que existe acima da temperatura de gelificação. Quando arrefecido abaixo da temperatura de gelificação, o gel reverte espontaneamente para reformar solução de viscosidade mais baixa. Estes ciclos entre a solução e o gel podem ser repetidos 10

Proc. 4283 indefinidamente porque a transição sol/gel não envolve qualquer alteração na composição química do sistema de polímero. Todas as interacções para criar o gel são de natureza fisica e não envolvem a formação ou quebra de ligações covalentes. "Líquido de distribuição de fármaco" ou "líquido de distribuição de fármaco possuindo propriedades de gelificação térmica reversa" significará uma solução de polimero que contém um fármaco e que é adequada para administração a um animal de sangue quente e forma, um depósito de fármaco gelificado quando a temperatura é elevada até, ou acima da temperatura de gelificação do copolimero de bloco, "Depósito" significa um sistema liquido de distribuição de fármaco que forma um gel após a temperatura ter sido aumentada para, ou acima da temperatura de gelificação após administração a um animal de sangue quente. "Gel/' significa a fase semi-sólida que ocorre espontaneamente à medida que a temperatura da "solução de polimero" ou "liquido de distribuição de fármaco" é aumentada para, ou acima da temperatura de gelificação da mistura de copolimero de bloco. "Composição de polímero aquosa" significa quer um liquido de distribuição de fármaco ou um gel compreendido pela fase aquosa, possuindo nela contida de uma forma uniforme, um fármaco e a mistura de copolímeros de bloco 11

Proc. 4283 biodegradáveis. A temperaturas abaixo da temperatura de gelificaçã.o, a mistura de copolímeros de bioco pod.e ser solúvel na fase aquosa e a composição será uma solução. A temperaturas da temperatura de gelificação ou acima, a mistura de copolímeros de bloco irá solidificar para formar um gel com a fase aquosa, e a composição será um gel ou semi-sólido. "Biodegradável" significa, que os componentes de copolímero de bioco podem quebrar quimicamente ou degradar-se no corpo para formar componentes não tóxicos. A taxa de degradação pode ser a mesma ou ser diferente da taxa de libertação do fármaco. "Fármaco" significará qualquer composto ou substância orgânico ou inorgânico possuindo bíoactividade e adaptado ou utilizado para objectivos terapêuticos. Proteínas, hormonas, agentes antí-eancro, oligonucieótidos, DNA, RNA e terapias génicas estão incluidos na definição mais lata de "fármaco". "Péptido", "polipéptido", "oligopéptído" e "proteína" serão utilizados indistintamente quando se referem a f ármaco s de péptido ou proteina e não deve estar limitado a qualquer peso molecular, sequência ou comprimento peptídíco, campo de bíoactividade ou utilização terapêutica particulares, salvo referido especificamente, "Poli(lactido-co-glicolido)" ou "PLG" significará um copolímero derivado da copoiimerização de condensação de 12

Proc. 4283 ácido láctico e ácido glicólico, ou, pela polinierização de abertura do anel de precursores d.e ácido a-hidroxílico, tais como lactido ou glicolido. Os termos "lactido", "lactato", "glicolido" e "glicolato" são utilizados índistirvtamente, como acima referido * "Polilactido" ou "PLA" significará um polímero derivado da condensação de ácido láctico ou pela poiimerização de abertura do anel de lactido. Os termos "lactido" e "lactato" são utilizados indistintamente. "Poliésteres bi odegradáve is" refere-se a quaisquer poliésteres biodegradáveis, que são sintetizados preferencialmente a partir de monómeros se.lecc.ionad.os a. partir do grupo consistindo em D,L-lactido, D-lactido, L-lactido), ácido D,L-láctico, ácido D-Iáctico, ácido L-láctico, glicolido, ácido glicólico, ε-caprolactona, ácido ε-hidroxi hesanóíco, γ-butirolactona, ácido γ-hidroxibutirico, δ-valerolactona, ácido δ-hidroxivalérico, ácidos hidroxibutiricos, ácido málico, e copoiimeros destes. "Gel térmico reverso" ou "sistema de gelificação térmica reversa" refere-se a todos os copoiimeros tribloco biodegradáveis de poliéster PEG possuindo propriedades de gelificação térmica, reversa. Foi revelada e referenciada acima uma descrição pormenorizada, de sistemas de gelificação reversa, "Mistura em gel" ou "mistura de copoiimeros tribloco" refere-se a um sistema de gelificação reversa 13

Proc. 4283 compreendendo dois ou mais componentes de copolímero BAB de polrésterpolietrlenoglicol, A mistura pode ser preparada quer através da simples O t'1 f' AB A. o i -C cL pode s ;ra de do: ..oco sintet ;se de dois tubc :> de s: j Q CÇ Q s acima .ntese. λ presente invenção StuIaS de dois OU liéster PEG irão ore r. a.::.s como gel, e ar l v e í da c; tipos G0 s istema. s de copol.í mero 7^ mis tura preparada pelos dois o a ;surr cL S mesmas prop. riedade s de s de ge Ί r' -L. f u díferm untes • 3.0 base ia-se na. de tí C O d 0.0 o a d Θ que mais copolímero s t ribioco de jpc 3rcio: rar uma mi s tura copoli .mero qe 1 1 C.ri C) Γ0νΡ rdOrl me]hora d a s, d.0 gel i. .λ. λ. C 3. ção fie xíve." I, forc: a do as qua lida Ο'θ o G tf gei desej áv '0 3 O ·_ -l- 0

Adicronaimente, tais sistemas de distribuição de fármaco têm a capacidade de modo a modular a liberta.ção do fármaco, e a erosão da matriz. Assim, a combinação de dois ou mais copoiímeros trrbloco individuais aumenta substancialmente a flexibilidade da estrutura do sistema de distribuição de fármaco para se adaptar às necessidades individuais.

Numa forme i de reaiizaça .o preferida, com- o ilustrado na Tabela 1, os copolímeri as tnoioco rnol .viduais d. o Componente I desta invenç ão compreendem copoi í. meros trrbloco de i im poliéster e políetilenogi i c o1 (PEG) biodegradável j possuindo um peso molecular s nédio entre cerca de 2 50 0 Daltons e C 0 r C α G0 8 :J U ; 0 Daltons, preferencialmente 3000 . or! s a o o u U Da .lu e consiste 14

Proc. 4283

Proc. 4283 radán 4Θ 1 Θ i; í.m bloco (Ίθ O O X' C” .· £ p, 0 m pe * s o CÍ0 f J í 3 « p- f '-· 2 f 6 < Os cc )por ime: :os i um ' Q 0 :SO m Xj J_ ecuiar méc lio e r c a de —7 -p 0 0 Dal .tor i S f 3. 60 0 0 Da Itori; O· / 0 biod eg iradá V Θ i 0 um sor çâ : 0 en 3 } oe: 3 0 de 0 , 31 1 a >4 e 2 f --1 0 po ]. ime ro cte polietrlenoglicol (PEG) numa p 3,0, e preferencialmente entre tribioco do Componente II possu de cerca de 800 Daltons a preferencialmente 1500 Dalto consistem num poliéster poiietilenoglicol (PEG) numa proporçâc 2,6, pref erencialrnente entre 0,54 e bloco A biodegradável, hidrófobo pode ser compreendido por um poliéster S -U rd :.et i sa.d.o a parti r de monóme ros O ! ec cr o nados do gr upo co Π S -L 3 L inde ) em G ί L-lactido, D- 1 cLC ti cio f L “ 1 a c' tido, á ci .do D, L-lác tr co, ácido D- 1 3C ti c o, cá Ο -Ϊ. G ϋ L-lác t.i o O , C jl ico] ί ido / iriCK 0 O qIicólico, s- r·' ap ro lac o o n a , a c .r ci o c -h idr! : x ' h .exor iórco, Y” b ut ir ola ctona, ácido y~ hid: roxibi jtír ico, ò " valerolacto Π cl f á cr cio Ò “ -hidrox ivaléz :±( 3 0 , á eidos hi: droxií J \x ·. alricos, ác ido m ái í c O f e copo] . imero. s dr íste s. 15

Proc. 4283

TABELA

Componente I: intervalo Intervalo preferido PM do bloco de polímero B 900 a 2000 Daltons 1000 a 1450 Dar tons Proporção em peso de broco A/bloco B 1,3 a 3,0 1,8 a 2,6 Proporção em mole de L:G no bloco A Õ t ± cl J- « U 1:1 a 1:0 PM do copolimero tribloco 2500 a S000 Daltons 3000 a 6500 Daltons Componente 11 Intervalo Interva1 o preferido PM do bloco de polímero B 600 a 2000 Daltons 900 a 1450 Daltons Proporção em peso de bioco A/bloco B 0, 3 7 a 2, 6 0,54 a 2,6 Proporção em mole de L:G no bloco A 3:1 a 1:0 1-i Çí) O PM do copolimero tribloco 800 a 7200 Daltons 1500 a 6000 Daltons

Os componentes de copolimero tribloco da presente invenção podem ser sintetizados por polímerízação de abertura do anel ou através de polimerização de condensação de acordo com os esquemas de reacção revelados nas Patentes U.S. 5702717 e 6006573, aqui 16

Proc. 4283

Proc. 4283 incorporada s como r eferênela na su ! a total idad. p Por exemplo, 0 S b.l. OCOS de PEG podem ser acopla dos 8 0 poliéster ] oiodegradá vel através de -L Í Q~ 3. Ç O GS Θ S ter ou uretano e similares. Os processos d .e polimerizí içâo de 0 Ο Π Cí θ I ]. S ri Ç d. 0 e polimer '3 do anel po dem c 0 r; utidm.zados, assim como o acoplamento d.0 um bloco '0 hidrofilico monofuncional a CiuâiCi u. β Γ UlllS. das extremídac ies de um bloco A difunciona 1 hidrófobo n ã presença de agentes ti o acoplamen Γ.. O s t; 3 3 como isocianatos. Além dl S S O , d S reacções d.0 acopl amento podem seguir a activação de grupos funcionais com agentes activantes tais como carbonil diimidazole, anidrido succinico, N hidroxi suceinimida e p-nitrofenil cloroformato e afins. 0 bloco B bidrofílico B da presente invenção é seleccionado a partir de pesos moleculares apropriados de PEG. O PEG foi seleccionado como o bloco hidrofilico, solúvel em água devido às suas proprredades únicas de biocompatibiiidade, não toxicidade, hidrofilicidade, solubilização, e rápida eliminação do corpo de um doente.

Os nr ocos o e ρ o r i e s L e 3. h 3. d .1 o 1. o b o s a o ^ e 3. e c c 3. o 3. i a o. o ^ devido ás suas propriedades de biodegradabilidade, biocompatibilidade, e solubilização. A degradação in vitro e in vivo destes blocos de poliéster hidrófobo, biodegradável é bem conhecida e os produtos de degradação naturalmente que são liminados pelo corpo do são compostos que ocorrem rapidamente metaboiízados e/ou doente. 17

Proc. 4283

Surpreerulentemente, através da combinação ou mistura, de dois ou ma is copolímeros tribloco de poliéster PEG, quer como copolímeros sintetizados individualmente ou sintetizados em conjunto num tubo de reacção, a mistura de copo.lime.ro tribloco resultante mantém, uma. combinação de propriedades desejáveis de solubilidade em água e geiifícação térmica reversa. É inesperado que, seleccionando componentes de copolimero tribloco adequados possuindo diferentes temperaturas de geiifícação e depois misturando-as em proporções apropriadas, as misturas de copolimero tribloco resultantes possuem uma temperatura de geiifícação reversa que varia entre 0 e variável de um dia a dez qualidades de gel desejáveis, propriedades de geiifícação e componente de copolimero, a 50 °C, duração de erosão semanas, e ainda, mantém Para além de optimizar as qualidades de gel de cada mistura de dois ou mais componentes copolimero tribloco biodegradáveis oferece flexibilidade significaiivamente aumentada na concepção de sistemas de distribuição de fármaco como necessário para adaptação às necessidades individuais. A. concentração à. qual os copolímeros de bloco são solúveis a temperaturas abaixo da temperatura de geiifícação pode ser considerada como a concentração funcional. Falando de um modo geral, podem ser utilizadas concentrações totais de copolimero de bloco tão baixas quanto 3% e até cerca de 50% em peso e ainda ser funcional. Todavia, são preferidas concentrações no intervalo de cerca de 5 a. 40% e são as mais preferidas concentrações no intervalo de cerca de 10 a 30% em. peso. 18

Proc. 4283

De πιο d o a obter uma transição de fase gel viável com o copolímero, é necessária uma certa concentração mínima, e. g. 3% em peso. Nos intervalos de concentração funcionai mais baixos, a transição de fase pode resultar na formação de um gel fraco. A. concentrações mais elevadas, forma-se uma rede de gel mais forte,

Uma mistura de copolimero tribloco carregado com fármaco possuindo propriedades de qelificação reversa melhoradas pode ser preparada do mesmo modo que são preparados os sistemas de distribuição de fármaco de copolimero tribloco individuais previamente referenciados. Uma solução aquosa da mistura de copolimero tribloco da. presente invenção, a uma. temperatura abaixo da temperatura de gelificação, forma um líquido de distribuição de fármaco em que o fármaco pode ser dissolvido quer parcialmente ou completamente. Quando o fármaco é dissolvido parcialmente, ou quando o fármaco é essencialmente insolúvel, o fármaco existe num estado coloidal, tal como uma suspensão ou emulsão. Este liquido de distribuição de fármaco é então administrado pare n t encarnente, t ορ i c ame n t e, t r a n s de r m i c ame n t e, transmucosamente, inalado, ou inserido numa cavidade, tal como por administração ocular, vaginal, transuretral, rectal, nasal, oral, bucal, pulmonar ou auricular, após o que será. submetido a gelíficação térmica reversível, urna vez, que a temperatura do corpo estará acima da. temperatura de gelificação.

Devido à bíocompatíbilídade, à bicdegradabi.1 idade e à flexibilidade dos copolimeros tribloco da presente 19

Proc. 4283 invenção, esta mistura dos componentes de eopolímero tribloco provocarão tox8.cid.ade mínima e ir8:ítação mecânica nos tecidos circundantes. A libertação de fármaco, força do gel, temperatura de gelificaçao e taxei de degradação pode ser controlada através da concepção apropriada e selecção dos vários componentes de copolimero, nomeadamente, através da selecção apropriada de componentes de copolimero individual e proporções de componentes de eopoI.im.ero indi.vidua.is para preparar a. mistura, A mistu.ra apresentará propriedades de gelificação e qualidades de gel dos componentes do copolimero individuais modificadas e/ou em combinações. Particularmente, misturas de vários tipos de componentes de copolimero tribloco nas proporções apropriadas proporcionam uma larga variedade de temperaturas de gelificaçao reversa, tais como desde 0°C a 50°C. Com a disponibilidade de uma temperatura de gelificação próxima da temperatura ambiente, mas abaixo da temperatura corporal, proporcionada pela. mistura de copolimero da. presente invenção, o processo de manuseamento é simplificado e o custo é reduzido. Também diminui o risco de gelificação prematura durante a aplicação, i. e. gelificação na seringa. Mais significativamente, ao contrário de outros meios de modificar a temperatura de gelificaçao, as misturas de copolimero desta invenção mantêm as qualidades de gel desejáveis dos componentes de copolimero indi vi.duau.s e no entanto proporcionam maior flexibilidade na concepção de um sistema de distribuição de fármaco mais especifico para se adaptar às necessidades individuais. A libertação de fármaco é 20

Proc. 4283

Proc. 4283 faria ém cor 1 Ϊ' '}" n i á v e 1 atrav mi st' ur a no 1 iqi a ide d de dis ÍJ ma f orma de dosager; uma : mi stur e de do: i. s ou rru cont< em qn e t. 1 lá.rrr íaco di suspen SâO ou emu 1 S â O , < doen te Devido â s propi reve r s cf O m i s turas f orm ui ação gel .i. f í ‘ oa ent.âO d.epô s .i. j- o de f árr naco à f orm' ul 23; Γ' p Cl UA '_2 auir ient a até i únic a limi - V, 3- C cl o s obre qu n a í ’o.i :rnu 1.8 içao dr li .ui cf de ca.rg, a de f áu :maco podí dois ou mais componentes de eopolimero que íissolvído, ou f ármaco como uma. é administrada ao corpo de um aç; ão té rm ica bl oco, Θ sta L ."u 3. τη rir· a.r um s eopolimero de espontaneamente ; medida que a temperatura da temperatura de geiifreação, A nto fármaco pode ser carregado funcionalidade, nomeadamente, a ser aumentaaa aue que as propriedades de gelificação térmica das misturas de eopolimero sejam adversamente afectadas até um grau inaceitável, ou até que as propriedades da .formulação sejam, adversamente afectadas até um grau que torne a administração da formulação inaceitavelmente dificil. Faiando de um modo geral, antecipa-se que na maior parte d.os casos, o fármaco constituirá entre cerca de 0, 0001 a. 30% em. peso da formulação sendo referidos intervalos entre cerca de 0,0001 a 20%. Estes intervalos de carga de fármaco não sãc • limitantes paira a invenção. Desde que a runciona .i. i d.ade S e "j cl ITl.ci f 1 Γ, .1. d cl. f cl. s caraas de fármaco fora destes i Π t.0.u'V 3.1. os também podem . cair dentro do âmbito da. rm

Uma vantagem distinta para as composições do sujeito desta invenção está na capacidade das misturas de 21

Proc. 4283 copolimero tribloco para. aumentarem a solubilidade de muitas substâncias fárrnacos. A combinação do(s} bioco (s) hidrófobo poliéster e bloco(s) hidrofilico PEG dos componentes de copolimero da mistura tornam o componente de copolimero de bloco activo na. superfície na natureza. A este respeito, funciona muito como um sabão ou tensioactivo possuindo ambas as propriedades hidrofllica e hidrófoba. Isto é particularmente vantajoso para a solubllizaçao de fárrnacos hidrófobos ou fracamente solúveis em água, tais como ciclosporina e paclitaxel. 0 que é surpreendente é o grau de solub.ili zação de fármaco da maioria, se não todos, os fárrnacos uma vez que o conteúdo principal do copolimero de bloco é o conteúdo de bloco de poliéster hidrófobo. Todavia, como já foi discutido, mesmo embora o(s) bloco(s) de polímero hidrófobo sejam o conteúdo principal, o copolimero de bloco é solúvel em água e verificou-se que existe um aumento adicional na. solubilidade do fármaco quando combinado numa fase aquosa do copolimero de bloco.

Outra vantagem da composição da presente invenção está na capa.cida.d.e da mistura de copolimero tribloco para. aumentar a estabilidade química de muitas substâncias fármaco. Vários mecanismos para a degradação de fárrnacos, que conduzem a uma degradação química do fármaco, são retardados quando o fármaco está na presença da mistura de copolimero de bloco. For exemplo, paclita.xel e ciclosporina A são substancialmente estabilizados na composição de polímero aquoso da presente invenção em relação a certas soluções aquosas desses mesmos fárrnacos na presença de co-solventes orgânicos. Este efeito de 22

Proc. 4283 estabilização em paelítaxel e ciclosporina A. não é senão ilustrativa do efeito que seria alcançado com muitas outras substâncias fármaco.

Sm certas situações, o polímero carregado com fármaco pode ser administrado no estado gel em vez de como uma solução. A gelificação pode ser o resultado de aumentar a temperatura de uma solução de polímero cheia de fármaco até acima da temperatura de gelificação do polímero antes da administração, ou pode ser provocada pelo aumento da concentração do polímero na. solução até acima da concentração de saturação à temperatura de administração, ou pode ser provocado por aditivos à solução de polímero que pode provocar a gelificação da. solução, Em qualquer dos casos, o gel assim formado pode ser administrado parentericamente, topicamente, transdermícamente, transmucosal-mente, inalado ou inserido numa cavidade, tal como por administração ocular, vaginal, bucal, transuretral, rectal, nasal, oral, pulmonar ou auricular.

Esta invenção é aplicável a agentes bioactivos e fármacos de todos os tipos, incluindo oligonucieótidos, hormonas, agentes anti-cancro. Oferece um modo pouco comum eficaz para distribuir polipéptidos e proteínas. Muitos fármacos de péptido e proteína lábeis são acessíveis a formulação para os copolimeros de bloco da. invenção e podem beneficiar do processo de gelificação térmica reversa aqui descrito. Embora não especifícamente limitados aos seguintes, exemplos de polipéptidos e proteínas farmaceuticamente úteis podem ser seleccionados 23

Proc. 4283 a partir do grupo consistindo e;n eri tropoietina, ozitocma, vasopressina, hormona adrenocorticotrópica, factor do crescimento de epiderme, factor de crescimento derivado das plaquetas (PDGF), prolactina, luiiberina, hormona de libertação da hormona luteinizante (LHRH), agonistas de LHRH, antagonistas de LHRH, hormona do crescimento (humana, porcina, bovina, etc.), factor de libertação da hormona do crescimento, insulina, somatostatina, glucagão, interleu.cína-2 (11,-2), interferão-a, 3 ou γ, gastrina, tetragastrina, pentagastrina, urogastrona, secretina, calcitonina, encefaiinas, endorfinas, angiotensinas, hormona de libertação da tirotropina (TRH), factor de necrose tumoral (TNF), factor de crescimento do nervo (MGR), factor de estimulação de colónia de granulócitos (G-CSF), factor de estimulação de colónia de macrófagos granulócrtos ÍGM-CSF), factor de estimulação de colónia de macrófagos (M-CSF), heparinasa, proteína morfogénica do osso (BMP), hANP, péptido do tipo glucagão (GLP-1), interleucina-li (IL-11), renina, braoicinina, bacitracinas, poiimíxinas, coiistinas, tirocidina, gramicidinas, ciclosporinas e análogos sintéticos, modificações e fragmentos farmacologicamente activos destes, enzimas, citocinas, anticorpos e vacinas. A. única limitação para o fármaco de polipéptido ou proteína que pode ser utilizado é uma de funcionalidade. Em alguns casos, a funcionalidade ou estabilidade física de poiipéptidos e proteínas também podem ser aumentadas pela adição de vários aditivos a soluções aquosas ou suspensões do fármaco de polipéptido ou proteína. Também 24

Proc. 4283 podem ser utilizados aditivos, tais como poiióis (incluindo açúcares), aminoácidos, tensioactivos, polímeros, outras proteínas e certos sais. Estes aditivos podem ser rapidamente incorporados nas misturas de copo1ímero tribloco, que serão então submetidas ao processo de gelificação térmica reversa da presente invenção.

Desenvolvimentos na engenharia de proteína podem proporcionar a possibilidade de aumentar a estabilidade d.os péptidos ou proteínas. Embora. essas proteínas construídas ou modificadas resultantes possam ser encaradas como novas entidades para agentes de regulação, essas rnodifioa.ções não alteram a sua adequabi.1 idade para. utrlização na presente invenção. Um dos exemplos típicos de modificação é a PEGuíiação, em que a estabilidade dos fármacos de polipéptido pode ser melhorada signi f icativarnente através da conjugação covalente de polímeros solúveis em água, tais como polietiienoglicol, com o polipéptido. Outro exemplo é a modificação da sequência de aminoácidos através da adição, defeção ou substituição de um ou ma.is resíduos de amirioácidos, nas localizações terminal e/ou interna, Qualquer desses polípéptrdos ou proteínas modificados com a sua estabilidade ou eficiência melhoradas está dentro do âmbito da presente invenção.

Adicionalmente aos fármacos à base de péptido ou proteína, podem ser utilizados outros fármacos de todas as categorias terapêutica, e medicamente úteis. Estes fármacos são descritos nas referências da literatura bem 25

Proc. 4283

Proc. 4283 conhecidas, tais como o "Merck j dudex", o "PhyS ícians Desk Reference", 0 "The Phar: macoioqical Basis of Therapeutic O !f 0 0 » fii fornecida uma breve listagem de agentes especificas apena s para efeitos de ilustração. e não será considerada corno limitaste: agentes ant.i~ca.ncro, tais como mitomicina, bleorn.icina, BCNU, carboplatina, doxorrubicina, daunorrubicina, metotrexato, paclitaxel, taxotere, actinomicína D e camptotecina; antipsicoticos, tais corno oianzapina e ziprasidona; antibacterianos, tais como cefoxitina; anteimí míticos, ta.is como ivermect ima; ant.ivi.ra..isf tais como aciclovir; imunossappressores, tais como ciclosporina A (agente do tipo polipéptido cíclico), esteróides, e prostaglandinas, requintes são exemplos que ilustram o preferrdas da invenção, mas pre realr t o rmas de sndem ser apenas representativos.

EXEMPLOS 1 0 prc ; C 0 S S 0 síntes e utilizad o nes L 0 exemple .· 0 rev ei a.d.o. de um mo d o g 0 r a j . / r : a iV‘ d. t. tu i 1 te US 60 i 04 57 3. Foi pes a. d o p o 1 í (e t. i ienoglicoi) (PEG-100Í ); 29 , 4 grama) 0 tra ns f eridc d r r a ir a um frasco de fundo re dondo de 3 Q a ς cf a. los de 2 b 0 mL. r\ r ra SCO foi ligado a uma rinha vácuo ( '1 ·-> tor 1 } e in '|pr T :so : num canho de Ο .ή θϋ , Á água i e s .r. d u. a i foi removida aumentando a temperatura do banho para 26

Proc. 4283 durante 3 horas. 0 frasco foi retirado e deixado arrefecer até cerca de 8G°C. 0 D,L-lactido (55,65 grama) e glicolido (14,95 grama) foram pesados e adicionados ao frasco. 0 espaço da cabeça do frasco foi substituído por

azot 0 s eco e aquec ido (13 U V. j até que o lacti .0.0 Θ gl ic ol id o e s t. i vesser n fundi . do s. A poli; me r 1 z a ç ã. o foi inrc iada pe la a« Zi _L 'v- ci. 0 de r\ r·. g de octoato estanoso, q o t a a g; -ta, du ranta " um pe: £ lodo de 1 2empo de um minu' , A mistura de reacção foi aquecida a 155°C por ma.is oito horas. Os monómeros foram removidos por vácuo (1-2 torr) durante cerca de 2 horas e o resíduo foi dissolvido em água fria (4°C). Os oligómeros e monómeros solúveis em água foram removidos por precipitação do polímero d.esejado em água quente (80°C). A água foi removida por liofilizaçao. 0 peso molecular do copoiímero tribloco resultante foi determinado por cromatografia de permeaçâo em gel e foi de 4030 Dartons. Uma solução aquosa a 23% em eso do polímero foi solúvel em água fria e gelificou a 3,10 quando a temperatura aumentou.

Este exemplo foi realizado seguindo o procedimento descrito no Exemplo 1 mas utilizando 37,74 grama de oo li (etílenogl: .col) (PEG 1450) , 49 / -- arama de D, L-lactido Θ 13,1.8 grama de glicolido na. sír te se. 0 peso molecular do copoiímero tribloco resultant foi determi nado por cr omatografia ie permeaçâo em gel 0 foi de 4610 Daltons. Urr a solução aq aosa a 23% em peso "1 O polímero si ncen zado T o i solúvel em a o i j. a i" a u a 0 cf 0. j. 0 1.1. c ou 3. *! d.- / O C* * 27

Proc. 4283 um métí pa: croGuzi] exemplo ili ml st ura s de OOP olimero tribl (Ίθ ge 11 1 icao; lo t ;érmica. revers de duas solu ç 5 6; s de copolime8 pr epara aas . Os copolimeros mé todo descr: i to no Exemplo 1 / /-·» \ ·- ompon θ n t. e II) foram dú.sso) preparados pelo aos em agua para rorm 1 m o ,· ·./ 4-- fora .ção fora soluções a 23% em peso. Estas duas soluçc misturadas e as temperaturas de geixfic; medidas. Como ilustrado na Fig. 1, a temperatura de gelíficação da mistura dos copolimeros tribloco do

Componente I e do Componente II aumenta desde cerca de 13°C (100% do Componente I) quando o conteúdo do

Componente II na mistura aumenta, até 42°C quando o conteúdo do copolímero tribloco do Componente II atinge o s 1U 0 ' v

Este exemplo ilustra um método de preparar uma mistura de copolimeros tribloco, possuindo propriedades de gelificação térmica, por sintese em simultâneo de dois componentes de copolímero tribloco diferentes num vaso de reacção.

Foram pesado s PEG 145G (22/7 4 gr •ama ) e • PEG ; ío 0 0 (9 ,11 grama) e transferidos para um f ra SCO il0 f un do Re don do de 3 boca s de 2 5 0 mL. 0 ir; :i. S C 0 foi 1 i Cf α O O a u ma 11 nha de vácuo (1 ~2 torr) e i merso num ban ho CÍ0 ò.. [0O, 0, 28

Proc. 4283

Proc. 4283 da aumentado a t .ernperatur. a do 3 horas. Depois, o frasco for :cer até cerca de eo°c. 0 D, L- glicolido (14,1 grama) f (oram f. 8 8 C O * ϋ Θ S P cX c; o da cabec a do lactido (53,73 grama) oe s a cio s θ a u.j. c i. o n d cl o s frasco foi substituído por azoto seco e aquecido (130°C) até que o lactido e glicolido estivessem fundados. A polimerização foi iniciada pela adição de 0,02 g de octoato estanoso (gota a gota, durante urn minuto. A mistura de reacção foi aquecida a 155°C por ma is oito horas, Os monómeros foram removidos por vácuo (1-2 torr) durante cerca de 2 horas e o resíduo foi dissolvido em água fria (i°C) . Os oligómeros e monómeros solúveis em água foram removidos por precipitação do polímero (80°C). A água foi reri iecuiar do cop olímero . A. água f< liofilização. O peso molecular do copolímero tribloco resultante foi determinado por cromatografia de permeação em gel e foi de 4910 Daltons, A temperatura de ge j-.i f .1. c a ç a o d.a soruçao d.e polímero t a 23'o em pes>o) j_.or de 22,1«C.

Este exemplo ilustra uma mistura de uma solução de copolímero tribloco (23% em peso em água) possuindo uma viscosidade extremamente elevada e uma solução de copolímero tribloco (23% em peso em água) possuindo uma. baixa viscosidade. lJm polímero tribloco do Componente 1 foi preparado de acordo com o Exemplo 2 excepto que foi utilizado 29

Proc. 4283 PE G1450 como 0 Ί io do polir ne r ' o B , a razão e ijp XC0 õt O do bl oco c io poi .. ímero A para. o O J loco do poiimerc ' B f o.i de 2, 6:1, cl 1 . Cl zi cL O molar lact id( r:/gr icor ido (L/G ) no b 10 co do poli uns 5ΓΟ A foi de 3:1. 1 UIIlÓ :l soluçãí s aquosa . a 2 8 0 em pe q c, 0 c :St 0 C opo.1 ímero triblo c Q do Comp' oriente 1 era mui CO vi scosa / com υ.ΓΠο consi stênci .8. parecida com a 0 0 p"! 0 J. , Do me s mo rmu -O f foi preparado um copoli -mero tí zibloe ;:o do Co mponent e I I de acordo com O Exemplo 2 excep to qu e f ut ilrza r] rã PE G90 0 como broco 0 o polímero B, s i raz ao em ΌΘ o. r\ p; 4 V 31 O C '0 d.O rm i i tc\ A P ara o bi . o c o cl o pol.im .ero ÍU) fo i de o, 8 :1 , e a razão mole ; -£ lactido/ gl icolid o (I, / /~> \ Ό ) no bloco do poi _ímero A foi de Ó : I. Uma solução aquo s a do co po rim .e r vi tribi: oco do C om ponente II po ssuia u ma vi scos i da 06 b a. .r x a. e não for mor um gel ent re 0-100 em qu alque V cl 3. S o ncentraçõe£ Foram preparadas c i. n C 0 mi stura s de C OpC' - límeros trib] .ocos de Compon entes I Θ Co mpone nt es 11 co; n um conteúdc ; total ( íe poiíin :ixa do em 23% ÇL :m peso. A percent ãg< srn em “ o cl ui O copol . ime ro -p y- i.biOC d O ( iompor [ente II na mi .stura de C O p O.J. .1 ΓΓ1.ΘΟ Θ 816 va entre 10 a 30%. Os perfis de viscosidade e temperaturas de geiificaçâo das misturas de copolímeros tribloco do Componente I e do Componente II são apresentados na Figo 2, Na Fig. 2, várias concentrações do copolímero tribloco do Componente II na mistura são representadas peros seguintes simbolos: 10% (Δ) f 15% (*'), 20% (Φ) f 25% (A), 30% (B) e 100% (□) * A linha a cheio representa a viscosidade com que as soluções de misturas de copolímero entram na fase de gel à temperatura de geiificaçâo indicada. 30

Proc. 4283

Proc. 4283 Es tes dado s s nos t rv rm que nir stu ra ndo uma sol ução de copo i í rr ie.ro t ri O.! ..OC: a de 1 saixa vi 3 C O S .1 . G 3 :.d.e e uma so l.ução de O 0 p 0 -1 . rir e r o tr ib -L 0 C >o de elevad iã VÍ 3 G O 3 3 G 3- O- G; cl mistr ira resul .ta .nte po: 3S' ui uma viscosidade suficíentement :e ba: í X cl para pz issar r; '1 v.... i l.m θ ri t e através ri p ma. agulha hip< odérm: de c 3 '· ibre 3. X- > r - w ; 0 p ossair ainda urna tempera t.u ra ίΐθ gelificação térmica reversa entre 26 e 32°C ie farmaco .ibert;

Este exemplo ilustra, o perfil de libertação de fármaco das soluções de mistura de copolímero tribloco da presente invenção utilizando insulina de zinco como modelo de uma proteína fármaco.

Um cop* olímer o tribloe :o do Component e I prep. 3 r a do no Exemp lo I f OÍ dí í ;sol vide p; n tampâc ) HE PE; S 10 mM (PH —j ! 4) para formar c uma soluçi iO 3. 20%. Do .nesino mo do, for prepa rada u ma so.’ lução d r lomp 0 D. ΘΓ: te 1 (20%) er n t am pão HEPES 10 m; d (pH 7, 4) ] po r di; 3 sol: Li 3’- G G ie um co pol irnero tribl oco dc ) Comp ionents :i p χ epar :ado c omo descrito no Exernp lo 1 e xceptc ; que f C, S u t i .1 .ízado P H1 í'' 1450 cor mo bl oco do pc ri irnero e / a. razão Cl· m per 30 d θ A O . loco do pol irnero A/blo co do polímero B f oi >: 1 0 cl ΙΓ cl z ã o mo -t d _L lacti do / gire colido (L/G) c llu bb oco do po 1irnero A f c 2 i de 4:1. solur ~ õ e s; ri d: rm 3' tví;í ra de eop rne tribl oco em tampa O HEPES Ί 0 mM (pH 7,4, rontendo 5 0 mM CÍ0 EDTA) foram t arribe prep ar d' las por mis tu ra do co pol irnero tribl OCO ( -q --N C'' .m-lu omponen te J_ / 'copc riirm tre 2 tribl O C 0 do Componente 11 em prop o y ç oes em. per Ç 0 de 1:1 e 1 * a 31

Proc. 4283 respect.i vamente - A concent r a.ção final de copolímero nestas soluções foi de 20% em peso. A insulina de zinco (7,5 mg) foi ressuspendida em 1,8 m.L de tampão HEPES. Míquotas (20-y.L) da suspensão foram adicionadas a frascos de modo que cada frasco tenha. 950 pg da insulina de zinco. A cada frasco foram ainda adicionados Í00 uL de uma das soluçõe 3 de copolin pé r o tribloco prepare idas como des ;crí to acima. Os conteúdos dos frascos foram .i ..nt.er isamente mi stu y' Aí f”\ r-'. o ... x., v-. vd O / 0 colocados num. forno (37°C) p ara causar 3. Cf Θ J. if icaçã. 3.3.1 t0S Cí0 S Θ .11' adicionado 1 mt de meio de dissolução pré-aquecido (37°C) (ta mpão E ÍEPES 1G mM (pi i 7,4 ) contendo 50 mM [ (j.0 SQT :\ \ n; , Os y Ύ- q n n >. foram. colocí ido s nu rn forno a 37Ά.. Θ o m; 3 .L. G cte d.i S soluça .o for subst rti 4 í d o pe riodicamente. A i nsul I. Π 3 η o mei 0 0iTi lissoi ução f oi anal J- .3 ada por HPLC. w S resii iltac íos são apr; asentô idos c ?m 3 GO m os seguin tes sí .mbol . '.o it rep resent .ando várias 0 ps s de copolímero tri O A. O C ’ O * 10 0 0 '5 0 /*·) Comp ’ aen .te I ( Á) f 10 0% do Com ponente : r - ' Λ ' l \ v I , mis tu ra 1:3 ; p/ P dc : Comp onente 1 e Compc rente II (g) , e rrds tu r a. 1:1 p. ;P d o Com ponente . [ e Com ponente ; Est e.s ra r sul t ,3 íos .nostra rn que a. taxa d e liberte ação da. ins ui i n a CÍ0 Z .1 .nc· pode ser rnodu] . σ G 3. p σ Γ a. se ada. ptar âs nec: 0 3 sra 3X10 3 i ndi . V. iduais por mis- tura de duas dif erentes soi uç ões de c :ορ·. ímero triblocc n que proporeis >nam um ava nç o s ignif deat .1 \ ro na técnica.

Exemplo 7 Modulação da erosão dos sistemas de gelificação térmica reversa de copolímero tribloco por mistura de duas soluções de copolímero. 32

Proc. 4283 O copolímero tribloco do Componente I preparado no Exemplo 1 e copolímero tribloco do Componente II preparado no Exemplo 2 foram dissolvidos individualmente em água para formar soluções a 23% em peso. A solução de copolímero tribloco do Componente II tinha uma temperatura de gel de 42,3°C e deste modo, não era observável nenhum gel a 37°C. Foram preparadas três misturas da solução de copolímero tribloco do Componente I preparado acima e solução de copolímero tribloco do Componente II em proporções de 3:1,1:1 e 1:3 respectivamente. Foram colocadas alíquotas de 3 mL destas três misturas de soluções em 20 mL de frascos de cintilação. Depois do gel estar formado (37°C, 1 minuto), foi adicionado a cada frasco 5 mL de água (37°C). Periodicamente, a camada de água foi recolhida e substituída. A água foi removida por liofilização e a quantidade de polímero com erosão foi medida gravimetricamente. Os resultados apresentados na Fig. 4, com os seguintes símbolos representando várias razões em peso dos Componente I e Componente II nas misturas: 1:0 (□) , 3:1 () , 1:1 (♦) , e 1:3 (A). Os resultados mostram claramente que a duração da fase gel pode ser modulada por mistura de duas soluções de polímero de diferentes temperaturas de gelificação.

Lisboa, 4 de Janeiro de 2007 33

Claims (12)

1. Proc. 4283 Proc. 4283 1. Sistema propriedades polimérico biodegradável possuindo de gelificação térmica reversa compreendendo uma mistura de pelo menos um copolimero tribloco do Componente I e um cop< ; Iimero tribloco do Comporá II, compreendendo os referidos copolimeros tribloco blocos de polimero A de poliéster biodegradáveis e blocos de polímero B de políetilenoqd.icol, em que bloco do polímero B do referido copolimero tribloco do Cc ;mponent.e I po ssui um peso molec· uiar médio i de 900 a 2000 E )altons e bl Ο θ'1 O do C'1 o iimero B do referido o opolimero tribl .oco do Comp on ente II possui um peso molecu lar m;édío de 6 C : 0 a 2000 Dalt ons, Θ em que o referido cc aporimero tribl .oco Component ’.β J. Ό O ssui um pes o molecular médio en tre 2 5 00 i a. 8000 D ai tons o referido copolimero tribloco do Comporá snte II po ssui um peso molec; alar médio ç antre 300- -7200 Dalt ons copo li mero tr ibloco, caracterizado por uma so ]. U Ç c :.o aquo; aa ri n re ferido copo Iimero trib.' loco do C ompone nt.e I possu ο Ύ' uma. mperatura de geiíficaç âo inferi . O i ci da : solução aq O O S ci do referido cí rpoiimero tribloco dc > Compc v η θ n te II. •:í * Sistema polimérico bi odegradáve1 de acordo )m a Re ivindicação 1 em que k /loco do políme ro 1 1 de pol ié ster bi odegradável é sintet izado £l part ir de nion ómeros S Θ leccionados a partir do cjrup o con sist .indo em D, L - J. CÍ C-* t U. G O / >.J -1. Ci Ctido, L—.1.3 íCtido, ácido E '; - Láctico, 3. eido D- láctico, ác ido L-Iácti .co, glicc crido, ácido glic ól ico, £ “ caprolacton; af ácido ε-hidi :oxi he xanóico, γ bu tirolactona, , acioo y-n idroxibut .í i ico, δ- valerola ct td ri ç; 1 Proc. 4283 Proc. 4283 ico, ácidos hidroxibut 3 destes. i r .r c o s, a. c a. d o ico biodegradável de acordo com a que os copol uneros tribloco do Componente II são se leccionados a ist.indo em copolímeros do trpo ABA e ácido δ-hídroxivalér málico, e copolimero;
2. 3. Sistema polimér Reivindicação 1 em. Componente I e do partir do grupo cons BAB e misturas deste;
3. 4, Sistema Re ivmdicaçã.o Componente I polimérico bi odegradáve1 de acordo com a 3 em que os copolimeros tribloco do e do Componente II são, cada um, do tipo ba:
4. 5, Sistema polimérico bi odegradáve1 de acordo com a Reivindicação 3 em que o copolímero tribloco do Componente I e do Componente II são, cada um, do tipo ABA *
5. 6. Sistema Reivindicação polimérico biodegradável de acordo com a 3 em que o copolímero tribloco do Componente I é do trpo ABA e o copol. ímero tribi oco do Componente II é do tipo BAB, 7. Sistema polirr térico biodegradável de a cordo com a Reivi.nd.í ca.ção f em que o copol irr icro tribio n (', ri n Componente I Cl· r-\ r-‘t tipo BA.o e o copol imero tribi OCO dO Componente II é do tipo ABA, 8, Sistema polirr lérico bíodeg· radavei de a cordo com a Re iv ind.i ca.ção λ1 θτπ. que bloco do pol imern D A é um pol . iéster 2 Proc. 4283 biodegradável sintetizado a partir de raonóraeros seleccionados a. partir do grupo consistindo em D,L-lactido, D-iactido, L-lactido, ácido D,L-láctico, ácido D-láctico, ácido L-láctico, glicolido, ácido glicolido, s-caproiactona, ácido t~h.id.roxi hexanóico, e copolimeros destes.
6. 9. Sistema polimérico biodegradável de acordo com a Reivindicação 8 em que bloco do polímero A é poli (D,L-lactido-co-glicolido) (PLG) sintetizado a partir de monómeros seleccionados a partir de grupo consistindo em D, L-lactido, D-Iactido, L-lactido, ácido D,L-láctico, ácido D-láctico, ácido L-láctico, glicolido, ácido glicólico, e copolirneros destes.
7. 10. Sistema polimérico biodegradável de acordo com a Reivindicação 9 em que bloco do polímero A de cada um dos copolirneros trrbloco do Componente I e do Componente II possui uma razão molar de iactido para gicolido num intervalo entre 3:1 e 1:0.
8. 11. Sistema polimérico biodegradável de acordo com a. Rezvi.nd.icação 10 em que bloco do polímero A de cada copolímero tríbloco do Componente I e do Componente II possui uma razão molar de Iactido para glicolido num intervalo entre 1:1 e 1:0.
9. 12. Sistema polimérico biodegradável de acordo com a Reivindicação 9 em que o copolímero tribloco do Componente I possui uma razão de peso de polímero em bloco A/polimero em bloco B entre 1,3 a 3, 0 e o 3 Proc. 4283 Proc. 4283 possui uma razão de do polímero B entre copolimero tribloco do Componente I peso de bloco do polímero Λ/bloco 0,37 e 2,6.
10. 13. Composição stribaiça 3.0 de fármaco polimérica biodegradável geiifícação aquosa tendo aquosa possuindo propried térmica reversa constituída por uniformemente nela contido: j.ma de rase (a) ma quantidade eficaz de um fármaco; e (b) um sistema, poirmérrco biodegradável de acordo com uma das reivindicações 1-12.
11. 14. Composição de distribuição de f árxnaco polímér ica biodegradável aquosa • de acordo com a. R eivindic ação 3 em que o conteúdo do s í s t e ma p o 1 i mé r i c: o biodegradável cia referida composição está entre cerca de 3 e 50% em pes O * Composição de egradável aquosa o conteúdo em bio que distribuição de fármaco polimérica. de acordo com a Reivindicação 13, em fármaco da referida composição está em. peso. entre 0,0001
12. 16. Composição de distribuição de fármaco polimérica biodegradável aquosa de acordo com a Reivindicação 13, em que o referido fármaco é um polipéptido ou proteína, gene, hormona, agente anti-cancro ou anti-proliferação de células. Lisboa, 4 de Janeiro de 2007 4