PT1781296E

PT1781296E - Derivados de quinazolina e seu uso no tratamento da trombocitemia

Info

Publication number: PT1781296E
Application number: PT05784871T
Authority: PT
Inventors: Richard Franklin
Original assignee: Shire Holdings Ag
Priority date: 2004-08-04
Filing date: 2005-08-04
Publication date: 2010-06-15
Also published as: DE602005019890D1; ATE460166T1; EP1781296A2; JP2008509162A; WO2006017822A2; CA2574822A1; EA015251B1; CA2574822C; PL1781296T3; AU2005271274A1; ES2343360T3; KR20070038546A; US20100093772A1; DK1781296T3; WO2006017822A3; HRP20100324T1; CY1110341T1; NO20071019L; SI1781296T1; KR100932328B1

Description

1

DESCRIÇÃO

"DERIVADOS DE QUINAZOLINA E SEU USO NO TRATAMENTO DA TROMBOCI TEMIA"

ÂMBITO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a compostos que são úteis no tratamento da trombocitemia. A presente invenção refere-se também a compostos que são úteis na redução da contagem plaquetária.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A trombocitemia é um transtorno crónico associado a uma produção aumentada ou anormal de plaquetas sanguineas. Uma vez que as plaquetas estão envolvidas na coagulação do sangue, a sua produção anómala pode provocar a formação inapropriada de coágulos sanguíneos ou hemorragias, com o consequente aumento do risco para o paciente de hemorragias gastrointestinais, ataque cardíaco e acidente vascular cerebral. 0 anagrelide é um inibidor de fosfodiesterase, derivado de quinazolina, utilizado no tratamento da trombocitemia essencial e vários outros transtornos mieloproliferativos. A anagrelide foi aprovada e lançada em 1997 para o tratamento da trombocitemia essencial nos EUA e Canadá. Em Dezembro de 1998, a FDE Norte-americana aprovou uma expandiu o rótulo da anagrelide, especificamente para o tratamento de doentes com trombocitemia secundária a transtornos mieloproliferativos, incluindo policitemia vera (PV) e leucemia mielógena crónica (CML). 2

Um composto englobado na utilização da presente invenção é 3-hidroxianagrelide. Trata-se de um metabolito de anagrelide (ver, por exemplo pedido de patente norte-americana série n° 10/762 566, publicada com o n° Pub E.U.A. 20040209307) . Vários metabolitos de anagrelide têm sido estudados na literatura: Erusalimsky et al. (2002) is the platelet lowering activity of anagrelide mediated by its major metabolite 2-amino-5, 6-dichloro-3,4-dihydroquinazoline (RL603)? Exp Hematol. 30:625-7; Lane et al. (2001). O metabolito de anagrelide induz trombocitopenia em ratinhos inibindo a maturação megacariócitos sem induzir a agregação de plaquetas. Exp Hematol. 29:1417-241; e Gaver et al. (1981) Disposition of anagrelide, an inhibitor of platelet aggregation. Clin Pharmacol Ther. 29:381-6.

Entre os objectivos da presente invenção conta-se a apresentação de compostos relacionados com anagrelide que podem ser utilizados no tratamento da trombocitemia.

RESUMO DA INVENÇÃO

Numa concretização, a presente invenção proporciona um composto que é

(I!) 3

(III) respectiva forma de equilíbrio, respectivo sal farmaceuticamente aceitável ou um sal farmaceuticamente aceitável de uma respectiva forma de equilíbrio. em que R1 é H, alquiloCi_6, alceniloC2-6, alciniloC2-6, alcoxiCi_6 ou ariloC6-io;

R3 é OH, halogénio, SH, 0-alquiloCi_6 ou NH2 e X e Y são independentemente H ou halogénio, em que o composto é pelo menos 80 % puro, tal como determinado por métodos analíticos padrão e em que o composto não é 4

OH Cl

Dos compostos anteriores os preferidos incluem os substituintes X e Y nas posições 5 e 6 do anel benzilo.

Os compostos das fórmulas (I) a (III) são úteis no tratamento da trombocitemia e na redução plaquetária, Os compostos das fórmulas (I) a (III) podem ser utilizados em combinação com pelo menos um outro agente terapêutico. A presente invenção fornece ainda uma formulação farmacêutica que compreende um composto de qualquer fórmula de (I) a (III) com um veiculo ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Noutra concretização é apresentado um composto das fórmulas (I) a (III) ou o composto

C! OH para utilização no tratamento de trombocitemia.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A figura 1 é um gráfico de resposta à dose que compara os efeitos de anagrelide e composto n° 1 na maturação de megacariócitos (MK) induzida por TPO, tal como se descreve mais pormenorizadamente no exemplo 3 mais adiante. A figura 2 é um gráfico comparativo da inibição selectiva da megacariocitopoiese por anagrelide e composto 5 η° 1, tal como se descreve mais pormenorizadamente no exemplo 3 mais adiante.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Numa concretização da presente invenção, os compostos da presente invenção incluem aqueles em que se encontram as seguintes concretizações, seja independentemente ou combinados.

Numa concretização, a presente invenção proporciona um composto da fórmula

Η H

Y R1 (III) respectiva forma de farmaceuticamente aceitável equilíbrio, ou um sal respectivo sal farmaceuticamente aceitável de uma respectiva forma de equilíbrio, 6 em que R1 é H, alquiloCi-6, alceniloC2_6, alciniloC2_6, alcoxiCi_6 ou ariloC6-io; R2 é

O II

ou oh

OH R3 é OH, halogénio, SH, O-alquiloCi-6 ou NH2 e X e Y são independentemente H ou halogénio, em que o composto é pelo menos 80 % puro, tal como determinado por métodos analíticos padrão e em que o composto não é

As concretizações preferidas incluem os substituintes X e Y nas posições 5 e 6 do anel benzilo.

Numa concretização, R1 é H ou alquiloCi-6; Noutra concretização, R1 é H ou CH3. Noutra concretização, R1 é H.

Numa concretização, R3 é OH ou O-alquil-Ci-6 · Noutra concretização, R3 é OH ou OCH3. Noutra concretização, R3 é OH.

Numa concretização, X é H ou halogénio. Noutra concretização, X é H. Noutra concretização, X é Cl. Noutra 7 concretização, Y é H ou Cl. Noutra concretização, Y é H. Noutra concretização, Y é Cl.

Numa concretização, a trombocitemia tratada está associada a transtornos mieloproliferativos do sangue.

Numa concretização, a trombocitemia está associada a trombocitemia essencial (ET), leucemia mielógena crónica (CML), policitemia vera (PV), metaplasia mielóide agnogénica (AMM) ou anemia falciforme (SCA).

Noutra concretização, a trombocitemia é provocada por ET, CML, PV, AMM ou SCA.

Noutra concretização os compostos das fórmulas (I) a (III) podem ser utilizados para reduzir a contagem plaquetária num sujeito.

Os compostos de acordo com ou utilizados na presente invenção incluem

COMPOSTO n°l, que é hidrato de N-(5,6-dicloro-3,4-di-hidroquinazolin-2 — i1)-2-oxoacetamida; 8

COMPOSTO n°2 , que é N-(5,6-dicloro-3,4-di-hidroquinazolin-2-il)-2 oxoacetamida;

COMPOSTO n°3, que é 6,7-dicloro-3-hidroxi-l,5-di-hidro-imidazo[2,1 b]quinazolin-2-ona;

H

COMPOSTO n°4, que é 6,7-dicloro-3-hidroxi-l,5-di-hidro-imidazo[2,1 b]quinazolin-2-ona; e 9

COMPOSTO n°5, que é 6,7-dicloro-l-hidroxi-3,5-di-hidro-imidazo[1,2-b]quinazolin-2-ona;

De acordo com a presente invenção, os compostos encontram-se sob forma substancialmente pura.

Tal como utilizado no presente pedido de patente, o termo "forma substancialmente pura" significa que os compostos são pelo menos 80 % puros, de preferência 85% puros, mais preferencialmente pelo menos 90% puros, ainda mais preferencialmente pelo menos 99% puro como determinado pelos métodos analíticos padrão.

Sem desejar ficar limitado por qualquer teoria (não é necessária uma compreensão do mecanismo para por em prática a presente invenção e a presente invenção não se limita a qualquer mecanismo específico) os autores da presente invenção acreditam que os compostos da presente invenção são formas equilibrantes.

As formas equilibrantes dos compostos da presente invenção são os seguintes: 10

Tal como presentemente utilizado, o termo "forma de equilíbrio" inclui tautómeros dos compostos das fórmula (I) a (III) .

As formas equilibrantes dos compostos da presente invenção podem ainda ser representadas da seguinte forma:

Cl 11

Todas estas formas equilibrantes estão incluídas no âmbito da presente invenção.

Alguém com formação ordinária na técnica terá noção que os compostos das fórmulas (I) a (III) podem existir enquanto tautómeros ou isómeros ópticos. Todos os isómeros e tautómeros equilibrantes destes compostos estão incluídos no âmbito da presente invenção. 0 isómero ou enantiómero óptico único pode ser obtido por métodos bem conhecidos na técnica, tal como HPLC quiral, resolução enzimática e auxiliar quiral ou pode ser sintetizado por estereosselectividade.

Tal como presentemente utilizado, "hidroximimético" descreve grupos funcionais químicos relacionados com o grupo hidroxilo (-0H). Estes são grupos funcionais que podem agir como dador e aceitador de uma ligação de hidrogénio. Exemplos não limitativos de grupos hidroximiméticos incluem -NH2 e -SH. São também apresentados sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da presente invenção. O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" dos compostos das fórmulas gerais (I) a (III) designa os derivados de ácidos e bases farmaceuticamente aceitáveis, inorgânicos e orgânicos. Exemplos de ácidos adequados incluem o ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico salicílico, p-toluenossulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanossulfónico, fórmico, benzóico, malónico, naftaleno-2-sulfónico e benzenossulfónico. Outros ácidos, tal como o ácido oxálico, embora não sejam 12 farmaceuticamente aceitáveis em si podem ser úteis como intermediários para a obtenção dos compostos da invenção e respectivos sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis.

Os sais derivados de bases apropriadas incluem de sais de metal alcalino (por exemplo sódio), metal alcalino-terroso (por exemplo magnésio) , amónio e NR4+ (em que R é alquilo).

Tal como utilizado no presente pedido de patente, o termo "alquilo" representa uma fracção hidrocarboneto não substituída ou substituída (por um halogénio, nitro, CONH2, COOH, O-alquiloCi-6, 0-alceniloC2-6, 0-alciniloC2-6, hidroxilo, amino ou COOQ, em que Q é alquiloCi-6, alceniloC2-6, alciniloC2-6) de cadeia linear, de cadeia ramificada ou cíclica (por exemplo isopropilo, etilo, flúor-hexilo ou ciclopropilo). 0 termo alquilo pretende também incluir alquilos em que um ou mais átomos de hidrogénio são substituídos por um halogénio, mais preferencialmente o halogénio é flúor (por exemplo, -CF3 ou -CH2CF3) .

Tal como presentemente utilizado, os termos "alcenilo" e "alquinilo" representam um alquilo (tal como anteriormente definido) contendo pelo menos um grupo insaturado (por exemplo alilo) .

Quando está presente um átomo de enxofre, o átomo de enxofre pode encontrar-se a diferentes níveis de oxidação, S, SO ou S02. Todos estes níveis de oxidação estão incluídos no âmbito da presente invenção.

Halogénio significa flúor, cloro, bromo e iodo. 13 "Tratar" ou "tratamento" de um estado, transtorno ou condição inclui: (1) prevenção ou atraso do aparecimento de sintomas clínicos do estado, transtorno ou condição em desenvolvimento num mamífero que pode ser afectado por ou ter predisposição para esse estado, transtorno ou condição mas não sofreu ou apresentou ainda sintomas clínicos ou subclínicos do estado, transtorno ou condição. (2) inibição do estado transtorno ou condição, isto é paragem, redução ou atraso do desenvolvimento da doença ou recaída desta (no caso de um tratamento de manutenção) ou pelo menos um respectivo sintoma clínico ou subclínico ou (3) alívio da doença, isto é causar regressão do estado, transtorno ou condição ou pelo menos um dos respectivos sintomas clínicos ou subclínicos.

Uma "quantidade com eficácia terapêutica" significa a quantidade de um composto que, quando administrado a um sujeito para o tratamento de um estado, transtorno ou condição é suficiente para efectuar este tratamento. A "quantidade com eficácia terapêutica" irá variar conforme o composto, a doença e a sua gravidade e a idade, peso, condição física e capacidade de resposta do sujeito em tratamento.

Um sujeito necessitado é um indivíduo, por exemplo um ser humano ou outro mamífero, que iria beneficiar com a administração ou os compostos da presente invenção. A vantagem para um indivíduo em tratamento ou é estatisticamente significativa ou pelo menos perceptível para o doente ou para o médico. 14

Será evidente que a quantidade de um composto da invenção necessária para utilização no tratamento irá variar não só com o composto específico seleccionado mas também com a via de administração, natureza da condição que requer tratamento e a idade e condição do doente e dependerá em último caso da avaliação do médico assistente ou veterinário. Em geral, porém, uma dose adequada oscilará entre cerca de 0,001 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal por dia, de preferência desde cerca de 0,001 a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dia, mais pref erencialmente desde cerca de 0,001 a cerca desejavelmente 0,5 mg/kg de peso corporal por dia ou mais desejavelmente desde cerca de 0,001 a cerca de 0,1 mg/kg de peso corporal por dia. Noutras concretizações, os limites podem ir desde 0,1 a 750 mg/kg de peso corporal por dia, desde 0,5 a 60 mg/kg/dia e desde 1 a 20 mg/kg/dia. A dose desejada pode ser convenientemente apresentada numa dose única ou em doses divididas administradas a intervalos apropriados, por exemplo em duas, três, quatro ou mais doses por dia. Se os compostos são administrados por via transdérmica ou em forma de libertação prolongada, os compostos podem ser doseados uma vez por dia ou menos. O composto é convenientemente administrado em formas de dosagem unitárias, por exemplo contendo 0,1 a 50 mg, convenientemente 0,1 a 5 mg ou mais convenientemente 0,1a 5 mg de ingrediente activo por forma de dosagem unitária. Ainda noutra concretização, o composto pode ser convenientemente administrado em formas de dosagem unitárias, por exemplo contendo 10 a 1.500 mg, preferivelmente 20 a 1.000 mg ou mais preferencialmente 50 15 a 700 mg de ingrediente activo por forma de dosagem unitária.

Idealmente o ingrediente activo deve ser administrado para atingir as concentrações pico do composto activo no plasma de desde 0,01 a cerca de 5 μΜ, desde cerca de 0,01 a cerca de 1 μΜ, desde cerca de 1 a cerca de 75 μΜ, desde cerca de 2 a 50 μΜ ou desde cerca de 3 a cerca de 30 μΜ. Este objectivo pode ser atingido, por exemplo, por injecção intravenosa de uma solução de 0,1 a 5 % do ingrediente activo, opcionalmente em soro fisiológico ou administração oral sob a forma de bolus contendo cerca de 0,1 a cerca de 5 mg ou cerca de 1 a cerca de 500 mg do ingrediente activo. Os níveis desejáveis no sangue podem ser mantidos por meio de perfusão contínua para proporcionar cerca de 0,0001 a cerca de 1,0 mg/kg/hora ou cerca de 0,0001 a cerca de 0,5 mg/kg/hora ou por meio de perfusões intermitentes contendo cerca de 0,001 a cerca de 0,1 mg/kg do ingrediente activo. Noutra concretização, os níveis desejáveis no sangue podem ser mantidos por meio de perfusão contínua para proporcionar cerca de 0,01 a cerca de 5,0 mg/kg/hora ou por meio de perfusões intermitentes contendo cerca de 0,4 a cerca de 15 mg/kg do ingrediente activo.

Embora seja possível, para utilização em terapia, que um composto da invenção possa ser administrado sob a forma do produto químico puro, é preferível apresentar o ingrediente activo numa formulação farmacêutica. A invenção apresenta ainda uma formulação farmacêutica compreendendo um composto das fórmulas (I) a (III) ou respectiva forma de equilíbrio em conjunto com um ou vários veículos farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente outros ingredientes terapêuticos e/ou profiláticos. 0(s) 16 veículo (s) deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com outros ingredientes da formulação e não ser prejudicial para seu receptor.

As formulações farmacêuticas incluem aquelas adequadas para administração oral, rectal, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), transdérmica, vaginal ou parentérica (incluindo intramuscular, subcutânea e intravenosa) ou numa forma adequada para administração por inalação ou intubação. Quando apropriado, as formulações podem ser convenientemente apresentadas em unidades de dosagem discretas e preparadas por meio de qualquer um dos métodos bem conhecidos na técnica farmacêutica. Todos os métodos incluem a fase de associação do composto activo com os veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos e depois, se necessário, moldagem do produto com a formulação desejada.

As formulações farmacêuticas adequadas para administração oral podem ser convenientemente apresentadas como unidades discretas tais como cápsulas, saquetas ou comprimidos (contendo cada uma quantidade pré-determinada do ingrediente activo) , sob a forma de um pó ou granulado ou sob a forma de uma solução, suspensão ou emulsão. 0 ingrediente activo pode também ser apresentado como um bolus, um electuário ou pasta. Comprimidos e cápsulas para administração oral podem conter excipientes convencionais, tal como agentes aglutinantes, cargas, lubrificantes, desintegrantes ou humectantes. Os comprimidos podem ser revestidos por meio de métodos bem conhecidos da técnica. As preparações líquidas para administração por via oral podem assumir a forma de, por exemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires ou 17 podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veiculo adequado antes da utilização. Estas preparações liquidas podem conter aditivos convencionais, tal como agentes de suspensão, agentes emulsionantes, veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis) ou conservantes.

Os compostos da invenção podem ainda ser formulados para administração parentérica (por exemplo por injecção, por exemplo injecção de bolus ou perfusão contínua) e podem ser apresentados numa forma de unidose em ampolas, seringas pré-cheias, perfusão de pequenos volumes ou em contentores de doses múltiplas com adição de um conservante. As composições podem assumir a forma de suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e podem conter agentes de formulação tais como agentes de suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes. Em alternativa, o ingrediente activo pode encontrar-se sob a forma de pó obtido por isolamento asséptico de sólido estéril ou por liofilização a partir de solução para reconstituição com um veículo adequado, por exemplo água isenta de pirogénios, estéril, antes da utilização.

Para administração tópica na epiderme, os compostos da invenção podem ser formulados como pomadas, cremes ou loções ou como penso transdérmico. Estes pensos transdérmicos podem conter intensificadores da penetração, tal como linalol, carvacrol, timol, citral, mentol ou t-anetol. Pomadas e cremes podem, por exemplo, ser formulados com uma base aquosa ou oleosa, com a adição de espessantes e/ou gelificantes adequados. As loções podem ser formuladas com uma base aquosa ou oleosa e conterão em geral um ou 18 vários emulsionantes, estabilizantes, dispersantes, agentes de suspensão, espessantes ou corantes.

As formulações adequadas para a administração tópica por via oral incluem losangos que compreendem o ingrediente activo numa base aromatizada, normalmente sacarose e goma de acácia ou de tragacanta; pastilhas que compreendem o ingrediente activo numa base inerte tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e goma de acácia; e elixires bucais que compreendem o ingrediente activo num veiculo liquido adequado.

As formulações farmacêuticas adequadas para administração rectal, em que o veiculo é um sólido são mais preferivelmente apresentadas como supositórios unidose. Os veículos adequados incluem manteiga de cacau e outros materiais vulgarmente utilizados na técnica e os supositórios podem ser adequadamente preparados por meio da mistura do componente activo com o(s) veículo(s) amolecido(s) ou derretido (s), seguidos do arrefecimento e moldagem em moldes.

As formulações adequadas para a administração vaginal podem ser apresentadas sob a forma de pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações para aerossol contendo além do ingrediente activo os veículos que são conhecidos na técnica como sendo adequados.

Para administração por via intranasal os compostos da invenção podem ser utilizados sob a forma de pulverizador líquido ou pó dispersável ou sob a forma de gotas. As gotas podem ser formuladas com uma base aquosa ou não-aquosa, incluindo também um ou mais dispersantes, solubilizantes ou agentes de suspensão. Os aerossóis líquidos são 19 convenientemente administrados a partir de embalagens pressurizadas.

Para administração por inalação, os compostos da presente invenção são adequadamente administrados a partir de um insuflador, nebulizador ou embalagem pressurizada ou outros meios convenientes de administração de um aerossol. As embalagens pressurizadas podem incluir um propulsor adequado, tal como diclorodifluorometano, triclorodifluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono ou outro gás adequado. No caso de um aerossol pressurizado, a unidade de dosagem pode ser determinada por uma válvula para libertar uma quantidade exacta.

Em alternativa, para administração por inalação ou insuflação, os compostos da invenção podem ser apresentados sob a forma de uma composição de pó seco, por exemplo um pó misto ou o composto e uma base de pó adequada tal como lactose ou amido. A composição em pó pode ser apresentada em forma de dosagem unitária em, por exemplo cápsulas ou cartuchos ou, por exemplo, embalagens de gelatina ou blisters a partir das quais o pó pode ser administrado com ajuda de um inalador ou insuflador.

Quando desejado, as formulações descritas podem ser adaptadas para proporcionar uma libertação sustentada do ingrediente activo.

Noutra concretização, é apresentada uma combinação útil para o tratamento de trombocitemia compreendendo pelo menos um composto das fórmulas (I) a (III) e pelo menos um outro agente terapêutico seleccionado de entre anagrelide, hidroxiureia, P32, busulfano, aspirina, clopidogrel, interferão a, ticlopidina e dipiradamole. 20

Noutra concretização, é apresentada uma combinação útil para o tratamento de trombocitemia compreendendo pelo menos um composto das fórmulas (I) a (III) e pelo menos um outro agente terapêutico seleccionado de entre anagrelide, hidroxiureia, busulfano e interferão a.

As combinações referidas anteriormente podem ser adequadamente apresentadas para utilização sob a forma de uma formulação farmacêutica e, assim, as formulações farmacêuticas compreendendo uma combinação como anteriormente definida, em conjunto com um veiculo farmaceuticamente aceitável compreendem uma outra concretização da invenção.

Os componentes individuais destas combinações podem ser administrados seja sequencialmente, seja simultaneamente em formulações farmacêuticas separadas ou combinadas.

Quando um composto das fórmulas (I) a (III), ou respectiva forma de equilíbrio, é utilizada em combinação com um segundo agente terapêutico, a dose de cada composto tanto pode ser a mesma como diferente daquela que é utilizada quando o composto é empregue isoladamente. Alguém com formação ordinária na técnica terá imediatamente noção das doses apropriadas. A proporção entre os compostos da presente invenção e o segundo agente terapêutico será imediatamente apreciada por alguém com formação ordinária na técnica. Por exemplo, pode-se empregar 1:5000 a cerca de 1:500, cerca de 1:500 a cerca de 1:100, cerca de 1:1 a cerca de 1:50, cerca de 1:1 a cerca de 1:30, cerca de 1:1 a cerca de 1:20, cerca de 1:1 a cerca de 1:15, cerca de 1:1 a cerca de 1:10, cerca de 1:1 a cerca de 1:5 ou cerca de 1:1 a cerca de 1:3 de compostos 21 da invenção:segundo agente terapêutico. Se for adicionado mais um agente terapêutico as proporções serão ajustadas em conformidade.

Os exemplos seguintes são apresentados para ilustrar a várias concretizações da presente invenção mas não devem ser encarados como limitadores do âmbito.

Exemplo 1

Preparação do Composto η2 1 da presente invenção

Foi sintetizado o Composto n° 1 N-(5,6-dicloro-3,4-di-hidroquinazolin-2-il)-2-oxoacetamida (1) com um m/z de 271. 0 composto n° 1 pode também existir sob a forma do seu hidrato (2).

OH

Preparação do Composto η2 1

Esta abordagem ao aldeído pretendido (1) envolveu a reacção de 2-amino-5,6-dicloro-3,4-di-hidroquinazolina (A) com hidrato de ácido glioxílico (B) usando uma abordagem de acoplagem tipo diciclo-hexilcarbodiimida (DCC). 22 A acoplagem de (A) e do ácido glioxílico (B) foi conduzida usando diciclo-hexilcarbodiimida (DCC), dimetilaminopiridina (DMAP) em diclorometano (DCM). 0 produto (A) pode ser obtido por métodos conhecidos na técnica (ver, por exemplo, patente EUA 6 194 420, publicada em 27 de Fevereiro de 2001) . Foi adicionada uma pequena quantidade de dimetilformamida (DMF) para ajudar a solubilidade do produto (A) . Quando estes reagentes foram misturados no solvente de diclorometano, formou-se um precipitado. Este precipitado foi filtrado e o solvente evaporado. Esta mistura de reacção em bruto foi analisada por LC-MC, apresentando 90 % de material de partida e 7% de material com uma massa de 271.

Esta reacção for realizada numa balança de 150 mg. O precipitado formado (170 mg) nesta reacção foi recolhido e analisado em conjunto com o conteúdo do filtrado. Através de análise LC-MS o precipitado continha dois componentes principais, o produto (A) (25 % por área de pico) e o material com uma massa de 271 (66 % por área de pico) ; no entanto, a análise NMR do mesmo material indicou que o componente principal era, de facto, diciclo-hexilureia (DCU), a forma reactiva do agente de acoplamento DCC. A tentativa de purificação deste material por HPLC resultou na remoção da DCU (conforme determinado por análise NMR) , mas produziu uma mistura de (A) (18 % por área de pico) e o material de massa 271 (73 % por área de pico) . No entanto, foi observado no espectro NMR apenas um pico aromático contendo produto. A purificação com êxito do Composto n° 1 foi conseguida usando cromatografia de fase inversa. A eluição do gradiente partindo de água para metanol produziu três 23 fracções distintas: Em primeiro lugar (A), em segundo o material de massa 271, e finalmente o DCU (conforme determinado por análise NMR e HPLC).

Conforme apresentado anteriormente, o Composto n° 1 é uma forma de equilíbrio do Composto n° 3 e do Composto n° 4. Por conseguinte, conforme mencionado anteriormente, sob as condições destes exemplos, crê-se que os compostos estão a interconverter e que o Composto n° 3 e o Composto n° 4 (ambos conhecidos como 3-hidroxianagrelide) estão também presentes. EXEMPLO 2 Síntese alternativa do Composto na 1 ETAPA 1

Esquema 1: Material de partida (RL603)

0 RL603 pode ser acilado fidedignamente num rendimento de modesto a bom usando 2,2 equivalentes de hidreto de sódio e 1,1 equivalentes de 2,3-isopropilideno glicerato etilo para produzir o produto B (Esquema 1) . 0 anião de 24 RL603 foi formado por aquecimento com o hidreto de sódio em THF a 50 °C durante 30 min sob uma atmosfera inerte. A mistura foi então arrefecida até à temperatura ambiente, foi adicionado o éster, e a reacção foi agitada durante 3 dias. É preferível a rápida purificação e utilização dos produtos de modo a evitar a formação de impurezas oxidadas fluorescentes. A purificação foi conseguida através de extracção aquosa normal e cromatografia em sílica (eluição com 40 - 50 % de acetato de etilo / 60 - 50 % de petróleo).

Esquema 2: Síntese de 2,3-isopropilideno glicerato etilo

O

Foi preparado o 2,3-isopropilideno glicerato etilo. O 1,2:5,6-Di-isopropilideno-manitol foi tratado com periodato de sódio ou periodato de tetrabutilamonio seguido de permanganato de potássio para render isopropilideno glicerato de potássio bruto, o qual pode ser purificado por recristalização a partir de etanol. Este foi tratado preferencialmente com iodoetano ou sulfato de dietilo (o uso do último torna mais difícil recuperar o produto) em DMF para formar o éster etílico (Esquema 2) . O éster foi então destilado se necessário. 25 ETAPA 2

Esquema 3: Hidrólise do composto B para o composto C

H

OH ffi

NH O I Cl Ύν·

OH O tratamento do derivado B RL603 acetal acilado com 0,1 M de HC1 numa mistura de 50:50 de água:THF de um dia para o outro resultou numa mistura aproximadamente igual de RL603 e o diol (C) desejado (Esquema 3). O uso de 5:3 água:ácido trifluoroacético durante uma hora de modo muito cuidadoso e selectivo fornece o diol (C) desejado, não requerendo purificação com excepção da remoção dos solventes. ETAPA 3

Conversão do Composto (C) para o Composto n° 1 e HPLC A conversão do diol (C) para o Composto n° 1 foi obtida usando periodato de sódio em metanol aquoso ou acetona. O diol era pouco solúvel. A hidrólise de volta a RL603 e foi notada a formação do que parece ser um isómero do Composto n° 1 (parece que este composto iso n° 1 é derivado do modo alternativo de fecho do anel do aldeído intermediário formado a partir de clivagem com periodato do diol (C). A isomerização do Composto n° 1 e do composto iso n° 1 (um tautómero do Composto n° 5) é apresentada abaixo: 26 Cl

I Οhon^ I \

composto iso nçl

Cl

Exemplo 3

Avaliação do Composto na 1 em culturas de diferenciação de megacariócitos derivados de células CD34+ de sangue de cordão umbilical.

Materiais e métodos

Produtos químicos. 0 Composto n° 1 foi mantido à temperatura ambiente. As soluções mãe (10 mM) foram realizadas em DMSO ou PSB pH 5,0 conforme indicado. As soluções mãe foram diluídas em meio de cultura imediatamente antes de adicionar às suspensões de células.

Cultura de células e análise de diferenciação megacariocítica.

Cultura de células e regimes farmacológicos. Foram adquiridas células CD34+ de sangue de cordão umbilical de Biowhittacker USA ou foram isoladas de fresco por selecção imunomagnética usando procedimentos laboratoriais padrão. Foram semeadas células em placas de cultura tecidular de 24 poços a uma densidade de 0,15 x 106 células/ml e cultivadas durante 12-14 dias em meio de Iscove modificado de Dulbecco contendo 40 ng/ml de TPO (conforme descrito em Mathur A, 27

Hong Y, Martin JF, Erusalimsky JD (2001) . A diferenciação megacariocitica é acompanhada por uma redução no potencial migratório das células. Br J Haematol 112:459) com anagrelide. Composto n° 1 ou veiculo (DMSO).

Contagem de células. A densidade celular foi determinada usando um Analisador de Partículas Sysmex CDA-500.

Análise de diferenciação megacariocitica. A expressão CD61 (um marcador de diferenciação megacariocitica) foi quantificado por citometria de fluxo usando um anticorpo anti-GPIIIa. O diâmetro da célula foi determinado usando um Analisador de Partículas Sysmex CDA-500.

Resultados

Avaliação do Composto n° 1 para maturação megacariocitica induzida de TPO de progenitores hematopoiéticos CD34

Os efeitos de anagrelide e do Composto n° 1 na maturação megacariocitica de células CD34+ desenvolvidas com trombopoietina (TPO) em meio contendo plasma foram avaliados registando a percentagem de células positivas para GPIIIa na cultura. A anagrelide e o Composto n° 1 causaram i inibição significativa deste processo em concentrações tão baixas como 30 nM (28 % e 20 % de inibição, P = 0,004 e 0,005 para anagrelide e o Composto n° 1 vs. controlo, respectivamente).

Uma comparação próxima entre o anagrelide e o Composto n° 1 no que respeita à sua actividade contra maturação de megacariócitos (Figura 1) não apresentou nenhuma diferença significativa entre os dois compostos quando o efeito de 28 dose foi considerado (P = 0,38 por ANOVA para Composto n° 1 vs. anagrelide) . De facto, os dois compostos eram equipotentes, tendo um IC50 ~ 110-130 nM e um efeito máximo a 1 μΜ. Os resultados na Figura 1 são expressos relativamente a uma amostra não tratada passada em paralelo. Os valores representam a média ± erro padrão (SE) de 2-4 experiências independentes conforme indicado. Cada experiência foi realizada com células derivadas de um dador diferente.

Efeitos gerais do Composto n° 1 em megacariocitopoiese in vitro O Quadro 1 mostra que o anagrelide e o Composto n° 1 tinham efeitos inibidores substanciais e semelhantes sobre um número de parâmetros de diferenciação megacariocitica, incluindo a densidade celular final, a proporção de células positivas GPIIIa, o nível relativo de expressão deste antigénio, e o tamanho da célula (o último é uma função tanto da maturação citoplasmática como do conteúdo de ADN.

Para avaliar se as actividades inibidoras do anagrelide e do Composto n° 1 nestas culturas foram selectivas para as linhagens megacariocíticas, os efeitos destes compostos foram avaliados no desenvolvimento de células não megacariocíticas. Em culturas de controlo de 12 dias estas células (CD61-) representam 20-30 % da população total. Conforme descrito na Figura 2, em forte contraste com a redução no número final de células expressando características megacariocíticas, nem o anagrelide nem o Composto n° 1 inibiram o desenvolvimento de células não megacariocíticas. 29

Quadro 1: Os efeitos de anagrelide e do Composto n°l no crescimento megacariocitico e nos parâmetros de diferenciação.

Medicament o Expansão celular % do controlo Expressão de GPIIIa Tamanho celular relativo % do controlo Células positivas para GPIIIa % do controlo Fluorescên cia média % do controlo Anagrelide (n=4) 48, 0 ± 4,0** 41, 9 ± 6, 6** 51,3 ± 11,9* 80,4 ± 4,5* Composto n° 1 (n=4) 45, 8 ± 3,9** 34,5 ± 4,4** 54,4 ± 14,7** 78,7 ± 5,3**

As células CD34+ foram cultivadas durante 12 dias em meio contendo plasma suplementado com TPO na presença ou ausência dos compostos indicados (1,0 μΜ) conforme descrito em Materiais e Métodos. Os resultados da Figura 2 são expressados relativamente às amostras não tratadas. Os valores representam a média ± SE do número indicado de experiências independentes realizadas com células derivadas de dadores diferentes. * P < 0,05; ** p < 0,01 vs. controlo.

Exemplo 4 Síntese 6, 7-dicloro-3-hidroxi-l,5-di-hidro-imidazo[2,1-b]quinazolina-2-ona (composto na 3) 30

Reagentes e condições:

Passo (i): KMnCg, KOH, água, temperatura ambiente (ta), 4 h, filtrar e evaporar, e então DMF, iodeto de etilo, ta, de um dia para o outro, aquoso processamento, 56 % rendimento global.

Passo (ii): 2-amino-5,6-dicloro-3,4-di- hidroquinazolina,

NH

Cl

NaH, THF, 50 °C, 30 min e então ta, 48 h, processamento aquoso e cromatografia em coluna, rendimento de 50 %.

Passo (iii) : CF3CO2H, água, ta, 1 h, evaporar, de rendimento. liofilizar e triturar com éter, 100 31

Passo (iv): NalCU, tampão de pH 5,1, acetona, 10 °C, 20 min, evaporar, liofilizar e cromatografia em coluna, 31 % de rendimento.

Purificação

Isolamento cromatográfico do produto (resolução a partir do composto isomérico n° 5 (6,7-dicloro-l-hidroxi- 3, 5-di-hidroimidazo[1,2-a]quinazolin-2-ona foi realizado em sílica de fase normal numa coluna de vidro sob pressão de ar comprimido, eluindo com um gradiente de 0-10 % de metanol/100 - 90 % de acetato de etilo. As fracções foram analisadas por TLC (cromatografia em camada fina) eluindo com THF (tetra-hidrofurano) contendo algumas gotas de amónia concentrada.

Dados analíticos:

NMR XH NMR (300 MHz, DMSO-D6) : 7. .47 (1H, d, J= 8.7 Hz) , 6.96 (1H, d, J= 8.7 Hz), 6.91 (1H, d, J= 8 .7 Hz), 5.01 (1H, d, J- 6.7 Hz), 4 .58 + 4.47 (2H, AB System, J= 14.6 Hz). i3C NMR (75 MHz, DMSO-D6) : 130.00, 129.49, 125 .32, 120.41, 113.05, 81.29, 41.89 (Amostra fraca, alguns sinais não foram resolvidos.)

Espectroscopia por infravermelhos IR (neat): 1643, 1563, 1471 cm-1.

Espectroscopia de massa (El) : 271 (M+, 100 %) , 214 (86 %), 199 (34 %) . %) , 199 (35 %).

Determinação do peso molecular

Hi-Res. MS: Cale. 270,991532. Encontrado: 270,992371 32 32 Ponto de P.f: 170 fusão °C (dec . ) - : Con formato: Espanol (Espana, ; internacional) v.............................................. 33

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista das referências citadas pelo requerente serve apenas para conveniência do leitor. Não faz parte do documento da patente europeia. Apesar da compilação cuidadosa das referências, os erros ou as omissões não podem ser excluidos e o IEP rejeita toda a responsabilidade a este respeito.

Documentos de patente citados na descrição: US 762566 A [0004] US 20040209307 A[0004] US 6194420 B [0068]

Literatura, não relacionada com patentes, citada na descrição:

Erusalimsky et al. is the platelet lowering activity of anagrelide mediated by its major metabolite 2-amino-5,6-dichloro-3,4-dihydroquinazoline (RL603)?. Exp Hematol., 2002, vol. 30, 625-7 [0005]

Lane et al. Anagrelide metabolite induces thrombo-cytopenia in mice by inhibiting megakaryocyte maturation without inducing platelet aggregation. Exp Hematol., 2001, vol. 29, 1417-241 [0005]

Gaver et al. Disposition of anagrelide, an inhibitor of platelet aggregation. Clin Pharmacol Ther., 1981, vol. 29, 381-6 [0005]

Mathur A ; Hong Y ; Martin JF ; Erusalimsky JD. Megakaryocytic differentiation is accompanied by a 34 reduction in cell migratory potential. Br J Haematol, 2001, vol. 112, 459 [0080]

Lisboa 74/06/2010

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto da fórmula J x- Y'

R1 R1 R1 ! I) UI) (III) respectiva forma de equilíbrio, um sal farmaceuticamente aceitável do composto ou da respectiva forma de equilíbrio, em que R1 é H, alquilo Ci-6, alcenilo C2-6, alcinilo C2-6, alcoxi Ci-6 ou arilo C6-10;

C—OH R3 é OH, halogénio, SH, O-alquilo Ci-6 ou NH2 e X e Y são independentemente H ou halogénio, em que o composto é pelo menos 80 % puro, tal como determinado por métodos analíticos padrão e em que o composto não é

2

2. Composto da reivindicação 1, em que o composto é pelo menos 85 % puro, de preferência pelo menos 90 % puro, mais preferencialmente pelo menos 95 % puro, ainda mais preferencialmente pelo menos 99 % puro, conforme determinado pelos métodos analíticos padrão.

3. Composto da reivindicação 1 ou 2, em que o composto tem a fórmula

4. Composto da reivindicação 3, em que R2 é O

5. Composto da reivindicação 3, em que R1 é H ou alquilo Cl-6 ·

6. Composto da reivindicação 3, em que R1 é H.

7. Composto da reivindicação 3, em que X é H ou halogéneo.

8. Composto da reivindicação 3, em que Y é H ou Cl.

9. Composto da reivindicação 3, em que X é Cl. 3

10. Composto da reivindicação 3, em que Y é Cl.

11. Composto da reivindicação 1 ou 2, em que o composto tem a fórmula r\

ou ΟΓ v

«γΝ NH

12. Composto da reivindicação 1 ou reivindicação 2 ou o composto VV\ H /“'O cr '"-f OH para utilização no tratamento de trombocitemia.

13. Composto da reivindicação 12, em que a utilização inclui tratamento da trombocitemia associada a trombocitemia essencial (ET), leucemia mielógena crónica (CML), policitemia vera (PV), metaplasia mielóide agnogénica (AMM) ou anemia falciforme (SCA).

14. Composto tal como definido na reivindicação 11 ou o composto >0 4 Η

OH Cl para utilização no tratamento de trombocitemia.

15. Composto da reivindicação 14, em que a utilização inclui tratamento da trombocitemia associada a trombocitemia essencial (ET), leucemia mielógena crónica (CML), policitemia vera (PV), metaplasia mielóide agnogénica (AMM) ou anemia falciforme (SCA).

16. Composição compreendendo pelo menos um composto tal como definido na reivindicação 1 ou o composto

e pelo menos um agente terapêutico seleccionado de entre anagrelide, hidroxiureia, P32, busulfano, aspirina clopidogrel, interferão a, ticlopidina e dipiridamol. Lisboa, 7-8-/06/2010 1/2 Figura 1