PT2100520E

PT2100520E - Melhoria da integridade da barreira intestinal

Info

Publication number: PT2100520E
Application number: PT91583047T
Authority: PT
Inventors: Bernd Stahl; Linette Eustachia Maria Willemsen; Eric Alexander Franciscus Van Tol; Marleen Antoinette Koetsier; Christopher Beermann
Original assignee: Nutricia Nv
Priority date: 2004-06-22
Filing date: 2004-06-22
Publication date: 2013-11-06
Also published as: EP2100520A3; ES2431363T3; WO2005122790A1; RU2007102085A; DE602004006765D1; PT1672987E; PL1815755T3; PL2100520T3; RU2402240C2; CA2570205C; SI1815755T1; EP2100520B1; DE602004006765T2; AU2004320743A1; CN1997290A; ZA200700138B; ES2285484T3; US10499676B2; PT1815755E; DK1815755T3

Description

DESCRIÇÃO

MELHORIA DA INTEGRIDADE DA BARREIRA INTESTINAL CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a um método para melhorar a integridade da barreira intestinal e a uma composição adequada para ser usada neste método.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 epitélio gastrointestinal funciona normalmente como uma barreira selectiva que permite a absorção de nutrientes, electrólitos e água e que previne a exposição a antigénios dietéticos e microbianos, incluindo alergénios alimentares. 0 epitélio gastrointestinal limita a passagem dos antigénios à circulação sistémica que pode ser a causa de reacções inflamatórias, por exemplo, reacções alérgicas. Devido ao aumento da incidência das alergias, particularmente das alergias a alimentos, muitos grupos de investigação procuram curas (preventivas) para estas doenças. 0 Pedido de Patente europeia EP1272058 descreve uma composição que contém oligossacarideos indigeriveis para melhorar as estruturas celulares impermeáveis de forma a reduzir a permeabilidade intestinal e reduzir a reacção alérgica. A composição pode compreender LC-PUFA's (ácidos gordos poliinsaturados de cadeia longa). 0 Pedido de Patente europeia EP 745001 descreve uma combinação de oligossacarideos indigeriveis com os ácidos gordos n-3 e n-6 para o tratamento da colite ulcerosa. 1/32

Usami et al (Clinicai Nutrition 2001, 20(4):351-359) descrevem o efeito do ácido eicosapentaenóico (EPA) na permeabilidade das estruturas celulares impermeáveis nas monocamadas das células intestinais. Estes descobriram que o EPA aumentava a permeabilidade, indicando que o EPA era inadequado para melhorar a integridade da barreira intestinal.

As formulações da técnica anterior não são optimamente adequadas para melhorar a integridade da barreira.

RESUMO DA INVENÇÃO A presente invenção provê uma combinação de ácidos gordos poliinsaturados de cadeia longa seleccionados (LC-PUFA's) e oligossacarideos seleccionados. A presente combinação de LC-PUFA's com oligossacarideos melhora eficazmente a integridade da barreira, melhorando sinergisticamente a permeabilidade intestinal e a produção de mucosa, e é particularmente adequada para melhorar a integridade da barreira nos bebés humanos.

Foi surpreendentemente descoberto que os LC-PUFA's seleccionados reduziam eficazmente a permeabilidade paracelular epitelial. Ao contrário do que Usami et al (Clinicai Nutrition 2001, 20(4):351-359) tinham referido, os inventores da presente invenção descobriram que os ácidos gordos poliinsaturados C18 e C20, particularmente de ácido eicosapentanóico (EPA), ácido docosahexaenóico (DHA) e ácido araquidónico (ARA), são capazes de reduzir eficazmente a permeabilidade das estruturas celulares impermeáveis intestinais. 2/32

Além dos LC-PUFA's, a composição da presente invenção contém oligossacarídeos. Os oligossacarídeos seleccionados melhoram a integridade da barreira mediante a estimulação da produção de mucosa, o que produz uma maior espessura da camada de mucosa. Pensamos que este efeito é provocado pelos efeitos dos diferentes oligossacarideos na produção do ácido gordo de cadeia curta (SCFA). Por conseguinte, quando administrada completamente a um mamifero, a combinação de LC- PUFA e oligossacarideos indigeriveis da presente invenção melhora sinergisticamente a integridade da barreira e/ou reduz sinergisticamente a permeabilidade intestinal mediante a redução simultânea da permeabilidade das estruturas celulares impermeáveis e a estimulação da produção de mucosa.

Noutro aspecto, a composição da presente invenção melhora a qualidade da camada de mucosa intestinal. A camada da mucosa compreende mucinas. As mucinas são glicoproteinas com elevada massa molecular que são sintetizadas e segregadas por células caliciformes. Estas formam uma camada tipo gel sobre a superfície mucosa, melhorando assim a integridade da barreira. A camada da mucosa compreende diferentes tipos de mucinas, por exemplo, mucinas ácidas, neutras e sulfonadas. Pensamos que uma maior heterogeneidade da camada da mucosa melhora a funcionalidade da barreira. A composição da presente invenção compreende preferencialmente, pelo menos, dois oligossacarideos diferentes que influenciam na arquitectura mucosa e influenciam vantajosamente na heterogeneidade das mucinas na camada da mucosa, seja directamente seja modificando a flora intestinal. Pensamos que cada oligossacarideo seleccionado tem um efeito diferente sobre a quantidade e a 3/32 qualidade da mucosa. Além disso, os dois oligossacarideos diferentes também são capazes de estimular a qualidade da mucosa reflectida pelo grau de sulfatação através da sua estimulação sinergistica de produção de SCFA. Os inventores da presente invenção surpreendentemente descobriram que uma mistura de dois oligossacarideos diferentes de acordo com a presente invenção estimula sinergisticamente a produção de acetato. Os inventores da presente invenção descobriram também que a produção da mucosa depende da produção de acetato. A composição da presente invenção é preferencialmente melhorada com a administração dos dois oligossacarideos os de cadeia longa e os de cadeia curta. A existência de diferentes comprimentos de cadeia produz a estimulação da produção da mucosa em partes diferentes do ileo e do cólon. Os oligossacarideos de cadeia curta (normalmente com um grau de polimerização (DP) de 2, 3, 4 ou 5) estimulam a produção de mucina no cólon proximal e/ou no ileo distai, enquanto que os oligossacarideos com comprimentos de cadeia maiores (preferencialmente com um grau de polimerização (DP) superior a 5 até 60) se destinam a estimular a produção de mucinas nas partes mais distais do cólon.

Ainda outras melhorias podem ser obtidas através da administração de, pelo menos, dois oligossacarideos diferentes, ambos sob a forma de oligossacarideos de cadeia curta e de cadeia longa. Todas estas formas preferidas de realizar a invenção contribuem também para melhorar a integridade da barreira em qualquer parte do ileo e/ou do cólon.

Além disso, foi surpreendentemente descoberto que o EPA, o DHA e o ARA eram capazes de reduzir os efeitos nocivos da 4/32

interleucina 4 (IL-4) sobre a permeabilidade intestinal. A IL-4 é uma citoquina segregada em grandes quantidades pelas células T nas mucosas em certos doentes e induz a permeabilidade intestinal. Portanto, a presente invenção provê também um método para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças em que a concentração de IL-4 intestinal é aumentada, como uma alergia, em particular uma dermatite atópica.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a uma composição nutritiva que compreende: a. EPA, DHA e ARA, em que o teor de ácido gordo poliinsaturado de cadeia longa com 20 e 22 átomos de carbono não excede 15% em peso do teor de gorduras totais; e b. pelo menos dois oligossacarideos diferentes, em que os dois oligossacarideos diferentes têm uma homologia em unidades de monose abaixo de 90%.

Esta composição pode ser usada de maneira vantajosa num método para estimular a integridade da barreira intestinal, compreendendo o dito método a administração da dita composição a um mamifero. Ácidos gordos poliinsaturados

Os inventores da presente invenção surpreendentemente descobriram que o ácido eicosapentanoico (EPA, n-3), o ácido docosahexaenoico (DHA, n-3) e o ácido araquidónico (ARA, n-6) reduzem eficazmente a permeabilidade das 5/32 estruturas celulares impermeáveis intestinais. Portanto, a presente composição, que é particularmente adequada para melhorar a integridade da barreira intestinal, compreende EPA, DHA e ARA.

Os inventores da presente invenção descobriram que uma concentração inferior de LC-PUFA era eficaz para a redução da permeabilidade das estruturas celulares impermeáveis (ver os exemplos vs. Usami et al). Assim, o teor de LC-PUFA com 20 e 22 átomos de carbono na composição da presente invenção não excede preferencialmente 15% em peso do teor de gorduras totais, preferencialmente não excede 10% em peso, ainda mais preferencialmente não excede 5% em peso do teor de gorduras totais. Preferencialmente, a composição da presente invenção compreende, pelo menos, 0.1% em peso, preferencialmente, pelo menos, 0.25% em peso, mais preferencialmente, pelo menos, 0.5% em peso, ainda mais preferencialmente, pelo menos, 0.75 % em peso de LC-PUFA com 20 e 22 átomos de carbono do teor de gorduras totais. Pela mesma razão, o teor de EPA não excede preferencialmente 5% em peso de gorduras totais, mais preferencialmente não excede 1% em peso, mas preferencialmente é de, pelo menos, 0.05% em peso, mais preferencialmente de, pelo menos, 0.1% em peso de gorduras totais. O teor de DHA, preferencialmente, não excede 5% em peso, mais preferencialmente não excede 1% em peso, mas é de, pelo menos, 0.1% em peso das gorduras totais. Como foi descoberto que o ARA era particularmente eficaz para a redução da permeabilidade das estruturas celulares impermeáveis, a composição da presente invenção compreende quantidades relativamente altas, preferencialmente de, pelo menos, 0.1% em peso, ainda mais preferencialmente de, pelo menos, 0.25% em peso, da forma mais preferida, pelo menos, 0.5% em peso das gorduras totais. O teor de ARA 6/32 preferencialmente não excede 5% em peso, mais preferencialmente não excede 1% em peso das gorduras totais. Actualmente, ao ARA que contém uma composição entérica, adiciona-se-lhe EPA e DHA de maneira apropriada para equilibrar a acção do ARA, por exemplo, para reduzir a acção pró-inflamatória potencial dos metabólitos de ARA. Metabólitos de ARA em excesso podem causar inflamação. Portanto, a composição da presente invenção compreende preferencialmente ARA, EPA e DHA, em que o rácio em peso de ARA/DHA preferencialmente é superior a 0.25, preferencialmente superior a 0.5, ainda mais preferencialmente superior a 1. O rácio é preferencialmente inferior a 25. O rácio em peso de ARA/EPA está preferencialmente entre 1 e 100, mais preferencialmente entre 5 e 20. A presente composição compreende preferencialmente entre 5 e 75% em peso de ácidos gordos poliinsaturados com base nas gorduras totais, preferencialmente entre 10 e 50% em peso.

Se a presente composição for usada como uma fórmula infantil (por exemplo um método para alimentar um bebé, o dito método compreende a administração da composição da presente invenção a um bebé) , o teor de LC-PUFA, particularmente o LC-PUFA com 20 e 22 átomos de carbono, preferencialmente não excede 3% em peso do teor de gorduras totais tal como é desejável para imitar o leite humano da forma mais parecida possível. Pela mesma razão, o teor de LC-PUFA com ómega-3 não excede preferencialmente 1% em peso do teor de gorduras totais; o teor LC-PUFA com ómega-6 não excede preferencialmente 2% em peso do teor das gorduras totais; o teor de ARA (ómega-6) é preferencialmente inferior a 1% em peso do teor das gorduras totais; e/ou o 7/32 rácio em peso de EPA/DHA é preferencialmente 1 ou inferior, mais preferencialmente inferior a 0.5. O LC-PUFA com 20 e 22 átomos de carbono podem ser providos sob a forma de ácidos gordos livres, de triglicerideos, sob a forma de fosfolípidos ou de uma mistura com um ou mais dos acima citados. A presente composição compreende preferencialmente, pelo menos, um de ARA e DHA sob forma de fosfolipido. A composição nutritiva da presente invenção também provê preferencialmente ácidos gordos ómega-9 (n-9) (preferencialmente ácido oleico, 18:1), para prover uma nutrição suficiente. Preferencialmente, a composição da presente invenção provê, pelo menos, 15% em peso de ácidos gordos n-9 com base no peso dos ácidos gordos totais, mais preferencialmente, pelo menos, 25 % em peso. O teor de ácidos gordos n-9 é preferencialmente inferior a 80% em peso.

Oligossacarideos

Os oligossacarideos adequados de acordo com a invenção são sacarideos que têm um grau de polimerização (DP) de, pelo menos, 2 unidades de monose, que não são digeridos ou são apenas digeridos parcialmente no intestino pela acção dos ácidos ou enzimas digestivas presentes no tracto digestivo superior humano (intestino delgado e estômago), mas que são fermentados pela flora intestinal humana. As unidades de monose referem-se a unidades que têm uma estrutura anelar fechada, preferencialmente hexose, por exemplo as formas piranose ou furanose. 0 grau de polimerização do oligossacarideo é normalmente inferior a 60 unidades de 8/32 monose, preferencialmente inferior a 40, ainda mais preferencialmente inferior a 20. A composição da presente invenção compreende, pelo menos, dois oligossacarideos diferentes, em que os oligossacarideos têm uma homologia em unidades de monose inferior a, aproximadamente, 90%, preferencialmente inferior a 50%, ainda mais preferencialmente inferior a 25%, ainda mais preferencialmente inferior a 5%. O termo "homologia", como usado na presente invenção, é o acumulado da percentagem das mesmas unidades de monose nos diferentes oligossacarideos. Por exemplo, um oligossacarideo 1 (OL1) tem a estrutura fruc-fruct-glu-gal, e compreende assim 50% de fruc, 25% de gal e 25% de glu. O oligossacarideo 2 (OL2) tem a estrutura fruc-fruc-glu, e compreende, portanto, 66% de fruc, 33% de glu. Assim, os diferentes oligossacarideos têm uma homologia de 75% (50% de fruc + 25% de glu).

Numa forma preferida de realização, a presente composição compreende galacto-oligossacarideos e, pelo menos, um seleccionado do grupo constituído por fruto-oligossacarídeos e inulina.

Cada um dos oligossacarideos presentes compreende preferencialmente, pelo menos, 66%, mais preferencialmente, pelo menos, 90% de unidades de monose seleccionadas do grupo constituído por manose, arabinose, frutose, fucose, ramnose, galactose, β-D-galactopiranose, ribose, glicose, xilose, ácido urónico e seus derivados, calculados com base no número total de unidades de monose nelas contidas.

De acordo com outra forma de realização, pelo menos, um dos oligossacarideos da composição da presente invenção é seleccionado do grupo constituído por frutanos, fruto-9/32 oligossacarídeos, galacto-oligossacarídeos de dextrinas indigeríveis (incluindo trans-galacto-oligossacarídeos), xilo-oligossacarideos, arabino-oligossacarídeos, gluco-oligossacarídeos, manano-oligossacarideos, fuco-oligossacarídeos, oligossacarídeos ácidos (ver abaixo, por exemplo, oligossacarídeos de ácido urónico como hidrolisado de pectina) e suas misturas. Preferencialmente, a composição da presente invenção compreende pelo menos um, preferencialmente pelo menos dois, dos oligossacarídeos seleccionados do grupo constituído por fruto-oligossacarídeos ou inulina, galacto-oligossacarídeos e hidrolisado de pectina.

Para uma boa quantidade e qualidade de mucosa, a composição da presente invenção compreende preferencialmente, pelo menos, um oligossacarídeo, que compreende, pelo menos, 66% de galactose ou de frutose sob a forma de unidade de monose. Numa forma preferida de realização, a composição compreende, pelo menos, um oligossacarídeo que compreende, pelo menos, 66% de galactose sob a forma de unidade de monose e, pelo menos, um oligossacarídeo que compreende, pelo menos, 66% de frutose sob a forma de unidade de monose. Numa forma particularmente preferida de realização, a presente composição compreende um galacto-oligossacarídeo e um oligossacarídeo seleccionado do grupo constituído por fruto-oligossacarídeos e inulina. Os fruto-oligossacarídeos estimulam a produção de sulfomucina no cólon distai de ratos associada à flora humana (Kleessen et al, (2003) Brit J Nutr 89:597-606) e os galacto-oligossacarídeos estimulam a produção de mucina ácida (Meslin et al, Brit. J.Nutr (1993), 69:903-912)).

Para melhorar também a espessura da camada de mucosa em toda a zona do cólon, pelo menos 10% em peso dos 10/32 oligossacarídeos da composição da presente invenção têm um DP de 2 a 5 (isto é, de 2, 3, 4 e/ou 5) e pelo menos 5% em peso têm um DP de 10 a 60. Preferencialmente, pelo menos 50% em peso, mais preferencialmente, pelo menos, 75% em peso dos oligossacarídeos têm um DP de 2 a 9 (isto é, de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 e/ou 9), dado que se pensa que estes trabalham em todo o ileo e nas partes proximais e médias do cólon e porque a percentagem em peso dos oligossacarídeos, que devem ser incorporados à composição para se obter o efeito desejado, é reduzida.

Preferencialmente os rácios em peso são: a. (oligossacarídeos com DP de 2 a 5): (oligossacarídeos com DP de 6, 7, 8 e/ou 9) > 1; e b. (oligossacarídeos com DP de 10 a 60): (oligossacarídeos com DP de 6, 7, 8 e/ou 9) > 1 são ambos acima de 1.

Preferencialmente ambos os rácios em peso são superiores a 2, ainda mais preferencialmente superiores a 5.

Para melhorar ainda mais a espessura e a qualidade da camada da mucosa de toda a zona do cólon, preferencialmente cada um de, pelo menos, dois oligossacarídeos diferentes são providos em comprimentos de cadeia diferentes, preferencialmente, pelo menos, 10% em peso de cada oligossacarídeo com base no peso total do oligossacarídeo respectivo tem um DP de 2 a 5 (isto é, de 2, 3, 4 e/ou 5) e, pelo menos, 5% em peso tem um DP entre 10 e 60. Preferencialmente, pelo menos 50% em peso, mais preferencialmente, pelo menos, 75% em peso do oligossacarídeo com base no peso total destes oligossacarídeos têm um DP entre 2 e 10, porque pensamos 11/32 que trabalham em todo o íleo e nas partes proximais e médias do cólon.

Oligossacarideos ácidos

Para melhorar mais a integridade da barreira, a presente composição inclui preferencialmente oligossacarideos ácidos com um DP entre 2 e 60. A expressão "oligossacarídeo ácido" refere-se a oligossacarideos que compreendem, pelo menos, um grupo ácido seleccionado do grupo constituído por ácido N-acetilneuramínico, ácido N-glicolil-neuramínico, ácido carboxílico livre ou esterifiçado, grupo de ácido sulfúrico e grupo de ácido fosfórico. O oligossacarídeo acídico compreende preferencialmente unidades de ácido urónico (isto é, polímero de ácido urónico), mais preferencialmente unidades de ácido galacturónico. 0 oligossacarídeo ácido pode ser um hidrato de carbono homogéneo ou heterogéneo. Alguns exemplos adequados são os hidrolisados de pectina e/ou de alginato. No tracto intestinal, os polímeros de ácido urónico são hidrolisados em monómeros de ácido urónico que estimulam a produção do acetato intestinal que, por seu lado, estimulam a secreção da mucosa intestinal (Barcelo et al., Gut 2000, 46:218-224).

Preferencialmente, o oligossacarídeo ácido tem a estrutura I indicada abaixo, em que a hexose terminal (esquerda) compreende preferencialmente uma ligação dupla. As unidades de hexose além da(s) unidade(s) de hexose final(ais) são preferencialmente unidades de ácido urónico, ainda mais preferencialmente unidades de ácido galacturónico. Os grupos de ácido carboxílico nestas unidades podem ser livres ou (parcialmente) esterifiçados, e preferencialmente, pelo menos, 10% são metilados (ver abaixo). 12/32 R, ο Ο Λ \

O

R R, R, n em que: R é seleccionado preferencialmente do grupo constituído por hidrogénio, grupo hidroxilo ou ácido, preferencialmente hidroxilo; e pelo menos um seleccionado do grupo constituído por R2, R3, R4 e R5 representa ácido N-acetilneuramínico, ácido N-glicolil-neuramínico, ácido carboxílico livre ou esterifiçado, um grupo de ácido sulfúrico e grupo de ácido fosfórico, e o resto de R2, R3, R4 e R5 representa hidroxilo e/ou hidrogénio. Preferencialmente, é seleccionado do grupo constituído por R2, R3, R4 e R5 representa ácido N-acetilneuramínico, ácido N-glicolil-neuramínico, ácido carboxílico livre ou esterifiçado, um grupo de ácido sulfúrico ou grupo de ácido fosfórico, e o resto representa hidroxilo e/ou hidrogénio. Ainda mais preferencialmente um ácido seleccionado do grupo constituído por R2, R3, R4 e R5 representa ácido carboxílico livre ou esterificado e o resto de R2, R3, R4 e R5 representa hidroxilo e/ou hidrogénio; e n é um número inteiro e refere-se a um número de unidades de hexose (ver também Grau de Polimerização, abaixo), que pode ser qualquer unidade de hexose. De maneira adequada, n é um número inteiro entre 1-5000. Preferencialmente, a(s) unidade(s) de hexose é(são) uma unidade de ácido urónico.

Mais preferencialmente Ri, R2 e R3 representam hidroxilo, R4 representa hidrogénio, R5 representa ácido carboxílico, n é 13/32 qualquer número entre 1 e 250, preferencialmente entre 1 e 10 e a unidade de hexose é o ácido galacturónico. A detecção, medição e análise dos oligossacarideos ácidos preferidos, como os usados no método da presente invenção são dados no Pedido de Patente anterior dos Titulares referente a oligossacarideos ácidos, isto é o Pedido de Patente WO 0/160378.

Para melhorar a estimulação da espessura da camada da mucosa em toda a zona do cólon, a composição da presente invenção compreende preferencialmente, pelo menos, 10% em peso de oligossacarideos ácidos com um DP de 2 a 5 (isto é, de 2, 3, 4 e/ou 5) e, pelo menos, 5% em peso de oligossacarideos ácidos com um DP entre 10 e 60, sendo a dita % em peso com base no peso total dos oligossacarideos.

Os oligossacarideos ácidos usados na invenção são preferencialmente preparados a partir de pectina, pectato, alginato, condroitina, ácidos hialurónicos, heparina, heparano, hidratos de carbono bacterianos, sialoglicanos, fucoidano, fuco-oligossacarideos ou carragenina, mais preferencialmente de pectina e/ou alginato.

Teor de oligossacarideo

Quando está na forma liquida pronta a usar, a composição da presente invenção compreende preferencialmente de 0.1 a 100 gramas de oligossacarideos indigeriveis por litro, mais preferencialmente entre 0.5 e 50 gramas por litro, ainda mais preferencialmente entre 1 e 25 gramas por litro. Um teor demasiado alto de oligossacarideos pode causar perturbações devido a uma fermentação excessiva, enquanto que um teor muito baixo pode produzir uma camada de mucosa 14/32 dois insuficiente. 0 rácio em peso de, pelo menos, oligossacarideos diferentes está preferencialmente entre 1 e 10, mais preferencialmente entre 1 e 5. Estes rácios em peso estimulam a produção de mucina de diferentes tipos em pontos diferentes no intestino de maneira óptima. 0 oligossacarideo é incluido preferencialmente na presente composição de acordo com a invenção numa quantidade que excede 0.1% em peso, preferencialmente que excede 0.2% em peso, mais preferencialmente que excede 0.5% em peso e ainda mais preferencialmente que excede 1% em peso com base no peso seco total da composição. A composição da presente tem preferencialmente um teor de oligossacarideos abaixo de 20% em peso, mais preferencialmente abaixo de 10% em peso, ainda mais preferencialmente abaixo de 5% em peso. A adição de nucleotídeos e/ou nucleosideos à presente composição melhora também a função da barreira mucosa, particularmente porque inibe e/ou ou reduz a incidência de translocação bacteriana e reduz a lesão intestinal. Portanto, a presente composição também compreende preferencialmente entre 1 e 500 mg de nucleosideos e/ou nucleotideos por 100 gramas de fórmula seca, ainda mais preferencialmente entre 5 e 100 mg.

Aplicação A composição da presente invenção pode ser usada de maneira vantajosa num método para melhorar a integridade da barreira em mamiferos, particularmente em humanos. A composição da presente invenção também pode ser utilizada vantajosamente num método para o tratamento ou para a prevenção de doenças associadas com a redução da integridade da barreira, compreendendo o dito a 15/32 administração a um mamífero da composição da presente invenção. A composição da presente invenção preferencialmente é administrada por via oral.

Para o doente e para os bebés, a composição da presente invenção preferencialmente é combinada com uma alimentação completa, que inclui proteínas, hidratos de carbono e gorduras. A composição da presente invenção é administrada vantajosamente a bebés entre 0 e 2 anos. A composição pode ser administrada a pacientes que sofrem de uma integridade da barreira danificada e a pacientes saudáveis. A composição da presente invenção é usada vantajosamente num método para suprir as necessidades nutritivas de um bebé prematuro (um bebé nascido antes das 37 semanas de gestação) . A composição da presente invenção também pode ser usada vantajosamente num método para o tratamento e/ou para a prevenção dos danos intestinais mediante a administração ao doente da composição da presente invenção antes ou depois de um tratamento médico que possa ter provocado lesões intestinais. Este tratamento médico pode ser, por exemplo, um tratamento cirúrgico ou médico entérico (por exemplo, com antibióticos, analgésicos, NSAID, agentes quimioterapêuticos etc.). A composição da presente invenção também pode ser usada vantajosamente para tratar ou para prevenir doenças em que a ruptura da barreira intestinal seja a causa do desenvolvimento do curso da doença, por exemplo num método para o tratamento ou para a prevenção de doenças inflamatórias crónicas, em particular a doença inflamatória intestinal (IBD), a síndrome do intestino irritável (IBS), a doença celíaca, a pancreatite, a hepatite, a artrite ou a 16/32 diabetes. Além disso, a invenção pode ser usada num método para prover uma alimentação a pacientes que foram submetidos ou que vão ser submetidos a uma cirurgia abdominal e a pacientes que experimentem disfunções pós-operatórias do intestino e/ou a pacientes desnutridos.

Noutra forma de realização da invenção, a presente composição é administrada vantajosamente a pacientes que sofram da Sindrome de Deficiência Imunológica Adquirida (SIDA) e/ou a pacientes infectados com o Virus de Imunodeficiência Humana (VIH), por exemplo, num método para o tratamento da SIDA e/ou da infecção com VIH. Dito método compreende a administração oral da composição da presente invenção, preferencialmente combinada com nutrientes seleccionados do grupo constituído por hidratos de carbono, proteínas e gorduras.

Além disso, a invenção também pode ser usada para tratar ou prevenir complicações causadas pela redução da integridade da barreira, particularmente num método para o tratamento e/ou para a prevenção da diarreia, em particular a diarreia de bebés. Devido à incidência reduzida da diarreia de bebés, a composição da presente invenção também pode ser usada vantajosamente para reduzir dermatite das fraldas. A administração da composição da presente invenção reduz a passagem de antigénios dietéticos e microbianos, particularmente alergénios alimentares, do lume intestinal para a circulação mucosa ou sistémica, e portanto pode ser usado vantajosamente num método para o tratamento ou para a prevenção de uma alergia e/ou reacção alérgica, particularmente num método para o tratamento ou para a prevenção de uma alergia alimentar, por exemplo, uma reacção alérgica produzida pela ingestão de comida. 17/32

Os inventores da presente invenção descobriram também que os EPA, DHA e/ou ARA eram capazes de reduzir os efeitos da IL-4 sobre a permeabilidade intestinal. Portanto, um aspecto da presente invenção é o de prover um método para o tratamento e/ou para a prevenção de doenças nas quais seja incrementada a concentração intestinal de IL-4 (por exemplo de doenças alérgicas), compreendendo o dito método a administração de LC-PUFA seleccionados preferencialmente do grupo constituído por EPA, DHA e ARA, combinados preferencialmente com os oligossacarideos seleccionados da presente invenção. Assim, a composição da presente invenção também pode ser usada vantajosamente num método para o tratamento da dermatite atópica.

Como a função de barreira dos recém-nascidos não está completamente desenvolvida, a composição da presente invenção pode ser administrada vantajosamente a bebés, isto é, a bebés entre 0 e 6 meses. A composição pode ser administrada ao bebé sob a forma de fórmula infantil sem leite humano ou misturado com leite humano. Assim, a presente invenção também provê uma fórmula alimentar que compreende o leite humano e a presente composição. As composições que incluem leite humano e a presente composição são particularmente adequadas para alimentar bebés prematuros. A composição da presente invenção é provida preferencialmente sob a forma de pó embalado ou de fórmula embalada pronta a usar. Para prevenir a degradação do produto, o tamanho da embalagem da fórmula pronta a usar preferencialmente não excede uma dose, por exemplo preferencialmente não excede 500 ml; e o tamanho da embalagem da composição da presente invenção sob forma de 18/32 pó preferencialmente não excede 250 doses. Os tamanhos de embalagem adequados para o pó são de 2000 gramas ou menos, preferencialmente de 1000 gramas ou menos.

Os produtos embalados providos com rótulos que indiquem explicita ou implicitamente ao consumidor o uso do dito produto de acordo com um ou mais dos objectivos anteriores ou posteriores estão abrangidos pela presente invenção. Estes rótulos podem, por exemplo, fazer referência ao método da presente invenção para a prevenção de reacções alérgicas a alergénios alimentares incluindo indicações tais como "sensibilidade alimentar reduzida", "melhora a tolerabilidade intestinal", "tolerância alimentar melhorada" ou indicações afins. De maneira similar, a referência ao método da presente invenção para tratar e/ou para prevenir uma alergia pode ser realizada incorporando terminologia equivalente a "resistência melhorada" ou "sensibilidade reduzida". Fórmulas

Foi descoberto que a composição da presente invenção pode ser aplicada vantajosamente a alimentos, tais como alimentos para bebés e alimentos clínicos. Estes alimentos compreendem preferencialmente lípidos, proteínas e hidratos de carbono e são administrados preferencialmente sob a forma líquida. A expressão "alimento líquido" como usada na presente invenção inclui alimentos secos (por exemplo, pó) que são acompanhados de instruções relativas à mistura da dita cominação de alimentos secos com um líquido adequado (por exemplo, água). 52 - Portanto, a presente invenção refere-se também a uma composição nutritiva que compreende preferencialmente entre 19/32 5 e 50 en% de lípidos, entre 5 e 50 en% de proteínas, entre 15 e 90 en% de hidratos de carbono e a combinação de oligossacarídeos com LC-PUFA da presente invenção. Preferencialmente, a composição nutritiva da presente invenção contém entre 10 e 30 en% de lípidos, entre 7.5 e 40 en% de proteínas e entre 25 e 75 en% de hidratos de carbono (en% é a abreviatura da percentagem em energia e representa a quantidade relativa em que cada um dos ingredientes contribui para o valor total calórico da preparação).

Preferencialmente, é usada uma combinação de lípidos vegetais e, pelo menos, um óleo seleccionado do grupo constituído por óleo de peixe e óleo vegetal, de algas ou bacteriano e ómega-3.

As proteínas usadas na preparação nutritiva são seleccionadas preferencialmente do grupo de proteínas animais não humanas (como proteínas de leite, proteínas da carne e proteínas de ovo), proteínas vegetais (tais como proteínas de soja, proteínas de trigo, proteínas de arroz e proteínas de ervilhas), aminoácidos livres e suas combinações destas. A fonte de azoto provém do leite de vaca, em particular são preferenciais as proteínas de leite de vaca como a caseína e o soro de leite.

Uma fonte de hidratos de carbono digeríveis pode ser adicionada à fórmula nutritiva. Esta provê preferencialmente de 40% a 80% aproximadamente da energia da composição nutritiva. Qualquer (fonte de) hidratos de carbono adequada pode ser usada, por exemplo sacarose, lactose, glicose, frutose, sólidos de xarope de milho, e maltodextrinas, e suas combinações. 20/32 A composição da presente invenção é usada preferencialmente sob a forma de fórmula infantil e contém preferencialmente de 7.5 a 12.5% em energia de proteinas; de 40 a 55% em energia de hidratos de carbono; e de 35 a 50% em energia de gorduras. Como a presente composição é usada de maneira adequada para reduzir a reacção alérgica num bebé, a proteína da fórmula infantil é seleccionada preferencialmente do grupo constituído por proteínas de leite hidrolisadas (por exemplo caseína hidrolisada ou proteína de soro de leite hidrolisado), uma proteína vegetal e/ou aminoácidos. O uso destas proteínas também reduz as reacções alérgicas do bebé.

As irregularidades intestinais (por exemplo fezes duras, volume de fezes insuficiente, diarreia) são um problema importante em muitos bebés e indivíduos doentes que recebem alimentos líquidos. Foi descoberto que os problemas intestinais podem ser reduzidos com a administração dos oligossacarídeos da presente invenção nos alimentos líquidos com uma osmolalidade entre 50 e 500 mOsm/kg, mais preferencialmente entre 100 e 400 mOsm/kg.

De acordo com o anterior, também é importante que o alimento líquido não tenha uma densidade calórica excessiva mas que continue a prover as calorias suficientes para alimentar o doente. Portanto, os alimentos líquidos preferencialmente têm uma densidade calórica entre 0.1 e 2.5 kcal/ml, ainda mais preferencialmente uma densidade calórica entre 0.5 e 1.5 kcal/ml, e ainda mais preferencialmente entre 0.6 e 0. 8 kcal/ml.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Efeito do LC-PUFA na integridade da barreira 21/32

Foram cultivadas monocamadas (MC) das linhas celulares epiteliais intestinais T84 (American Type Culture Collection, (ATTC) Manassas, USA) em filtros transwell (Corning, Costar BV, The Netherlands) permitindo a recolha de amostras da mucosa e da membrana serosa e a estimulação de células epiteliais intestinais humanas. Depois de duas semanas de confluência, as monocamadas foram incubadas no compartimento luminal com ácidos gordos polinsaturados ARA (ácido araquidónico; ácido 5,8,11,14-eicosatetraenóico), DHA (ácido cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenóico), EPA (ácido eicosapentanóico) ou ácido palmítico de controlo (C 16:0) (Palm) (Sigma, St. Louis, USA). Este procedimento foi escolhido para imitar a via de administração in vivo dos compostos dietéticos. As células foram incubadas com ARA, DHA, EPA, ou ácido palmitico durante 0, 24, 48 e 72 horas em concentrações diferentes (10 μΜ e 100 μΜ) . As experiências foram executadas para avaliar a integridade da barreira basal. A função da barreira epitelial foi determinada medindo a resistência transepitelial (TER, Ω.οιη2) que foi medida por um medidor de volts/ohms epitelial (EVOM; World Precision Instruments, Germany) e permeabilidade para 4kD FITC dextrano (marcador de permeabilidade paracelular, Sigma, USA). A resistência (Permeabilidade epitelial para 4 kDa FITC-dextrano) foi determinada conforme indicado a seguir. Antes dos fluxos de dextrano, o meio foi arrefecido com um meio de cultura sem vermelho de fenol durante uma hora seguido da adição de 5 μΐ (provisão de 100 mg/ml) de 4 kDa FITC-dextrano no compartimento luminal. Depois de 30 minutos de incubação, 100 μΐ de amostra foram recolhidos do compartimento seroso e o sinal fluorescente foi medido num comprimento de onda de excitação de 485 nm e uma emissão de 520 nm (FLUOstar Galaxy®, BMG Labtechnologies, USA) . Os fluxos de FITC-22/32 dextrano foram calculados em pmol FITC-dextrano/cm2/h. As análises estatísticas foram executadas usando a análise ANOVA (SPSS versão 10).

Os resultados do efeito dos ácidos gordos (100 μΜ) sobre a integridade de barreira espontânea depois de 72 horas de incubação são indicados no quadro 1. O quadro 1 mostra que os LC-PUFA's, ARA, EPA e DHA reduzem o fluxo molecular e melhoram a resistência epitelial. Pelo contrário, as experiências de controlo mostram que o ácido palmítico tem os efeitos opostos, isto é, que compromete a integridade da barreira. Estes resultados são indicativos do uso vantajoso de EPA, DHA e ARA, e, em particular, de ARA na composição de acordo com a presente invenção e do seu uso num método de acordo com a presente invenção, por exemplo, num método para melhorar a integridade da barreira. Este resultado também mantém os efeitos sinergéticos da presente combinação de ácidos gordos com oligossacarideos indigeríveis. A figura 1 mostra os efeitos em função do tempo e da dose (ΙΟμΜ e ΙΟΟμΜ) de vários ácidos gordos (ácido palmítico, DHA, GLA e AA) na integridade da barreira basal (TER) . A figura 1 mostra que os LC-PUFA's AA, DHA e GLA, melhoram a integridade da barreira epitelial conforme reflecte a resistência aumentada (TER). Estes resultados são indicativos do uso vantajoso de EPA, DHA, GLA e ARA, em particular de ARA, na composição de acordo com a presente invenção e do seu uso num método de acordo com a presente invenção, isto é, num método para melhorar a integridade da barreira. Estes resultados também mantêm os efeitos sinergéticos da combinação de ácidos gordos com oligossacarideos indigeríveis da presente invenção. 23/32

Quadro 1

Ingrediente (LC-PUFA) Fluxo Resistência (TER) Controlo 79 1090 Ácido palmitico 161 831 DHA 72 1574 ARA 28 1816 EPA 65 1493

Exemplo 2: Efeito dos LC-PUFA na ruptura da barreira mediada por IL-4

As monocamadas (MC) das linhas celulares epiteliais intestinais T84 (ATCC, USA) foram cultivadas em filtros transwell (Corning, Costar BV, The Netherlands) permitindo a recolha de amostras da mucosa e da membrana serosa e a estimulação de células epiteliais intestinais humanas. Duas semanas depois da confluência, as monocamadas foram incubadas na presença de IL-4 (2 ng/ml, compartimento seroso, Sigma, USA) com ou sem ácidos gordos poliinsaturados ARA, DHA, GLA, EPA, ou ácido palmitico de controlo (10 μΜ ou 100 μΜ, compartimento mucoso, Sigma, St. Louis, USA) . As células foram pré-incubadas com ARA, DHA, EPA ou ácido palmitico durante 48 horas antes da incubação com IL-4. A co-incubação de PUFA's e ácido palmitico com IL-4 foi prolongada durante mais 48 horas; enguanto que o meio de cultura e aditivos foram mudados a cada 24 horas. A função da barreira epitelial foi determinada por medição da resistência transepitelial (TER) e da permeabilidade conforme descrito no exemplo 1. A valoração estatística foi realizada conforme descrito no exemplo 1. 24/32

Os resultados do efeito de ARA, DHA, EPA e do ácido palmítico (100 μΜ) sobre a ruptura da barreira mediada por IL-4 são indicados no quadro 2. O quadro 2 mostra que os LC-PUFA's ARA, DHA e EPA inibem o fluxo aumentado produzido pela IL-4. Pelo contrário, o ácido palmítico produz um efeito prejudicial e uma ruptura da barreira reduzida em comparação com o controlo. Estes resultados são indicativos do uso vantajoso de ARA, DHA, e EPA nas formulações de nutrição clinica e infantil para prevenir ou para reduzir a ruptura da barreira mediada por IL-4, por exemplo como ocorre com uma alergia ao leite de vaca ou alimentar. Este resultado também mantém os efeitos sinergéticos da presente combinação de ácidos gordos e oligossacarídeos indigeríveis. A figura 2 provê efeitos protectores em função do tempo e da dose (10 μΜ e 100 μΜ) de vários FA (ácido palmítico, DHA, GLA e AA) sobre a ruptura da barreira mediada por IL-4 (fluxo) . A figura 2 mostra que ARA, DHA e GLA protegem contra a ruptura da barreira mediada por IL-4 como reflecte o fluxo de dextrano 4kD reduzido. Estes resultados são indicativos do uso vantajoso de ARA, DHA e GLA nas formulações de nutrição clinica e infantil para prevenir ou para reduzir a ruptura da barreira mediada por IL-4, por exemplo como ocorre com uma alergia alimentar ou com uma alergia ao leite de vaca. Este resultado também mantém os efeitos sinergéticos da combinação da presente invenção dos ácidos gordos e oligossacarídeos indigeríveis.

Quadro 2

Ingrediente (LC-PUFA) Fluxo IL-4 TER IL-4 Controlo 582 374 Ácido palmítico 777 321 25/32 DHA 271 547 ARA 218 636 EPA 228 539

Exemplo 3: Efeito dos oligossacarídeos na produção de acetato

Os microrganismos de fezes frescas foram obtidos de bebés alimentados com biberões. 0 material fecal fresco de bebés entre 1 a 4 meses de idade foi reunido e disposto num meio conservante durante 2 horas. Como substrato foram usados prebióticos (TOS; mistura de TOS/inulina (HP) num rácio de 9/1 (p/p); inulina; mistura de oligofrutose (OS)/inulina num rácio de 1/1 (p/p) , ou nenhum (branco) . Os trans-galacto-oligossacarideos (TOS) foram obtidos de Vivinal GOS, Borculo Domo Ingredients, Zwolle, The Netherlands e compreendem sob a forma de oligossacarídeos indigeríveis: 33% em peso de dissacarídeos, 39% em peso de trissacarídeos, 18% em peso de tetrassacarídeos, 7% em peso de pentassacarídeos e 3% em peso de hexa-, hepta-, octassaacarídeos. Ingredientes de alimentação activa de inulina (HP) Orafti, Tienen, Belgium, isto é Raftiline HP®, com um DP de 23.

Meios: meio McBain & MacFarlane: água de peptona tamponada 3.0 g/1, extracto de levedura 2.5 g/1, mucina (bordas em escova) 0.8 g/1, triptona 3.0 g/1, L-cisteína-HCl 0.4 g/1, sais de bílis 0.05 g/1, K2HP04.3H20 2.6 g/1, NaHC03 0.2 g/1, NaCl 4. 5 g/1, MgS04.7H20 0.5 g/1, CaC12 0.228 g/1, FeS04.7H20 0.005 g/1. Foram enchidas garrafas Scott de 500 ml com o meio e esterilizadas durante 15 minutos a 121 °C. 26/32

Meio tamponado: K2HP04.3H2) 2.6 g/1, NaHC03 0.2 g/1, NaCl 4.5 g/1, MgS04.7H20, 0.5 g/1, CaC12 0.228 g/1, FeS04.7H20 0.005 g/1. Regulação a pH 6.3 ± 0.1 com K2HP04 ou NaHC03. Garrafas Scott foram enchidas com 500 ml com o meio e esterilizadas durante 15 minutos a 121 °C.

Meio conservante: Peptona tamponada 20.0 g/1, L-cisteina-HC1 0.5 g/1, tioglicolato de sódio 0.5 g/1, comprimido de resazurina 1 por litro, ajusto a pH 6.7 ± 0.1 com 1 M de NaOH ou HC1. Fervido em microondas. As garrafas de soro foram enchidas com 25 ml de meio e esterilizadas durante 15 minutos a 121 °C.

As amostras fecais frescas foram misturadas com um meio conservante e guardadas durante várias horas a 4 °C. A solução de fezes guardada foi centrifugada a 13,000 r.p.m. durante 15 minutos, o sobrenadante foi removido e as fezes misturadas com um meio McBain & MacFarlane num rácio de peso de 1:5. Desta suspensão fecal, 3 ml foram combinados com 85 mg de glicose ou com prebióticos ou sem adição (branco) numa garrafa e misturados cuidadosamente. Uma amostra t=0 foi retirada (0.5 ml) . 2.5 ml da suspensão resultante foram dispostos num tubo de diálise numa garrafa de 60 ml enchida com 60 ml do meio tamponado. A garrafa foi fechada correctamente e incubada a 37 °C. As amostras foram recolhidas do tubo de diálise (0.2 ml) ou do tampão de diálise (1.0 ml) com uma seringa hipodérmica depois de 3, 24 e 48 horas e dispostas imediatamente em gelo para deter a fermentação. A experiência foi realizada usando as amostras seguintes:

1) 85 mg de TOS 2) 85 mg de inulina 27/32 3) 85 mg de TOS/inulina num rácio de 9/1 (p/p) e 4) 85 mg de OS/inulina num rácio de 1/1 (p/p).

Os SCFA (acetato, propionato, butirato) foram quantificados usando um cromatógrafo de gases Varian 3800 (GC) (Varian Inc., Walnut Creek, U.S.A.) equipado com um detector de ionização de chama. 0.5 μΐ da amostra foi injectado a 80 °C na coluna (Stabilwax, 15 x 0.53 mm, espessura de pelicula 1.00 μιη, Restek Co., U.S.A.) usando hélio como gás de suporte (20.7 kPa (3.0 psi)). Depois da injecção da amostra, o forno foi aquecido a 160 °C a uma velocidade de 16 °C/min, seguido de um aquecimento a 220 °C a uma velocidade de 20 °C/min e finalmente mantido a 220 °C durante 1.5 minutos. A temperatura do injector e detector era de 200 °C. O ácido 2-etilbitirico foi usado como

Standard interno. A figura 3 representa o perfil de SCFA absoluto (figura 3A) e relativo (figura 3B) resultante da fermentação dos diferentes oligossacarídeos. A figura 3A mostra que uma mistura de dois oligossacarídeos diferentes (TOS/Inulina) , em que os dois oligossacarídeos diferentes têm uma homologia em unidades de monose inferior a 90 e um comprimento de cadeia diferente, produz uma quantidade de SCFA significativa e sinergisticamente aumentada (particularmente de acetato) por grama de fibra relativamente aos componentes individuais. A figura 3B mostra que a adição de uma combinação de TOS/inulina favorece uma proporção mais elevada do acetato benéfico (B). A produção de acetato in vivo traduz-se na produção de mucosa melhorada pelas células caliciformes e numa medida de espessura da camada de mucosa intestinal (ver exemplo 28/32 4) . Estes resultados são indicativos do uso vantajoso da presente composição.

Exemplo 4: Efeitos dos SCFA sobre a produção de mucosa.

As monocamadas de células T84 epiteliais intestinais (ATCC, USA), foram cultivadas em placas de cultura de tecido de 24 ou 96 poços (Corning B.V.). As T84 foram incubadas com os ácidos gordos de cadeia curta acetato, proprionato e butirato (SCFA, Merck, USA) durante 24 horas numa gama de concentração de 0.025-4.0 mM. Os sobrenadantes e/ou células foram recolhidas e a expressão de MUC-2 (mucina) foi determinada. Uma técnica Dot Blot foi usada para determinar a expressão da MUC-2 nas culturas de células, dado que as mucinas são glicoproteinas extremamente grandes (com mais de 500 kDa), o que as torna dificeis de manusear em técnicas de transferência Western. O método foi confirmado usando soro pré-imune (T84 tingidas negativas), células de controlo negativas CCD-I8C0 (ATCC, USA) e albumina de soro bovino (BSA). Umas amostras de células foram recolhidas em Laemmli (tampão de isolamento de proteínas) e a determinação de proteínas foi executada usando um teste de microproteínas (BioRad, USA) de acordo com o protocolo dos fabricantes. As amostras (0.3-0.7-1.0 μς/2 μΐ) foram espalhadas em membranas de nitrocelulose (Schleicher & Schuell, Germany). As membranas foram bloqueadas em TBST/5% Protivar (Nutricia, The Netherlands) seguido de 1 hora de incubação com um anticorpo anti-MUC-2 (doado amavelmente pelo Dr. Einerhand, Erasmus University, Rotterdam, The Netherlands). Depois da lavagem, os grupos foram incubados com anti-coelho-HRP de cabra (Santacruz Biotechnology, USA) e foi usado ECL para a detecção de substrato (Roche Diagnostics, The Netherlands). A densitometria foi realizada usando o Lumi-Imager (Boehringer Mannheim B.V., 29/32

The Netherlands) e o sinal foi expresso em unidades luminosas (BLU). As BLU foram expressas também relativamente às incubações de controlo (% de BLU) . Para comparar o efeito estimulador dos SCFA na expressão de MUC-2 basal, os niveis de expressão da MUC-2 foram reduzidos. A figura 4 mostra os efeitos diferenciais dos SCFA (acetato, proprionato, butirato) na expressão de MUC-2 nas células epiteliais intestinais (MC T84) e co-culturas de célula epitelial-mesenquimal (CC T84). A figura 2 também mostra que o acetato é mais potente na estimulação da expressão de MUC-2 (produção de mucosa) em comparação com o propionato e com o butirato. Portanto, a combinação da presente invenção de oligossacarideos (que foi demonstrado que aumentou a produção de acetato (ver exemplo 3)) é particularmente útil para estimular a produção de mucosa e pode ser usada vantajosamente num método para estimular a integridade da barreira.

Exemplo 5: Fórmula I de leite infantil

Ingredientes (por litro) , energia 672 kcal; proteínas 15 g; rácio soro de leite: Caseína 60:40; gorduras 36 g; hidratos de carbono 72 g; Vitamina A 750 RE; Carotenóides naturais misturados 400 UI; Vitamina D 10.6 mcg; Vitamina F 7.4 mg; Vitamina K 67.0 mcg; Vitamina B.sub.l (tiamina) 1000 mcg; Vitamina B.sub.2 (riboflavina) 1500 mcg; Vitamina B.sub.6 (piridoxina) 600 mcg; Vitamina B.sub.12 (cianocobalamina) 2.0 mcg; niacina 9.0 mcg; ácido fólico 80 mcg; ácido pantoténico 3000 mcg; biotina 90 mcg; Vitamina C (ácido ascórbico) 90 mg; Colina 100 mg; Inositol 33 mg; Cálcio 460 mg; Fósforo 333 mg; Magnésio 64 mg; Ferro 8.0 mg; Zinco 6.0 mg; Manganês 50 mcg; Cobre 560 mcg; Iodo 100 mcg; Sódio 160 mg; Potássio 650 mg; cloreto 433 mg e Selénio 14 mcg; em que o teor de gorduras provido inclui 3 gramas de óleo de 30/32 peixe e 3 gramas a 40% óleo de ácido araquidónico (DSM Food Specialties, Delft, Netherlands); compreendendo também 4 gramas de trans-galacto-oligossacarideos Elix'or™ (Borculo

Raftiline™

Domo Ingredients, Netherlands) e 4 gramas de (Orafti Active Food Ingredients, Belgium).

Lisboa, 25 de Outubro de 2013 31/32

REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo Titular tem como único objectivo ajudar o leitor e não forma parte do documento de patente europeia. Ainda que na sua elaboração se tenha tido o máximo cuidado, não se podem excluir erros ou omissões e a EPO não assume qualquer responsabilidade a este respeito.

Documentos de Pedidos de Patente citadas na descrição

EP 1272058 A EP 745001 A WO 0160378 A

Literatura citada na descrição que não é Pedido de Patente USAMI et al., Clinicai Nutrition, 2001, vol. 20 (4), 351- 359 KLEESSEN el al. Brit J Nutr, 2003, vol. 89, 597-606 MESLIN et al. Brit J. Nutr, 1993, vol. 69, 903-912 BARCELO et al. Gut, 2000, vol. 46, 218-224 32/32

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composição nutritiva que compreende: EPA, DHA e ARA, em que o teor de ácido gordo poliinsaturado de cadeia longa com 20 e 22 átomos de carbono não excede 15% em peso do teor de gordura total; e pelo menos dois oligossacarideos diferentes (OLl e OL2), que não são ou só são digeridos parcialmente no intestino pela acção dos ácidos ou enzimas digestivas presentes no tracto digestivo superior humano, mas que é fermentável pela flora intestinal humana, em que os dois oligossacarideos diferentes tem uma homologia em unidades de monose inferior a 90%.
2. A composição de acordo com a reivindicação 1, que compreende ainda oligossacarideos ácidos com um DP entre 2 e 60, caracterizada por os oligossacarideos ácidos compreenderem pelo menos um grupo ácido seleccionado do grupo constituído por ácido N-acetilneuraminico, ácido N-glicolil-neuramínico, ácido carboxílico livre ou esterifiçado, grupo de ácido sulfúrico e grupo ácido fosfórico
3. A composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por esta ainda compreender entre 1 e 500 mg de nucleosideos e/ou nucleotideos por 100 gramas da fórmula seca.
4. A composição de acordo com as reivindicações de 1 a 3, caracterizada por esta compreender galacto-oligossacarideos e um frutano seleccionado do grupo constituído por fruto-oligossacarídeos, inulina e misturas destes. 1/5
5. A composição de acordo com as reivindicações de 1 a 4, caracterizada por pelo menos 10% em peso do oligossacarideo ter um grau de polimerização (DP) de 2 a 5 e pelo menos 5% em peso ter um DP de entre 10 e 60.
6. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizada por esta ainda compreender um oligossacarideo ácido, preferencialmente um polímero de ácido urónico com um DP entre 2 e 60.
7. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, que compreende de 7.5 a 12.5% de energia em proteínas; de 40 a 55% de energia em hidratos de carbono; e de 35 a 50% de energia em gordura, caracterizada por a dita proteína compreender um elemento seleccionado do grupo constituído pela proteína do leite hidrolisada, proteína vegetal e/ou aminoácidos.
8. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7, caracterizada por esta composição ter um teor calórico de 0.6 a 0.8 kcal/ml; uma osmolalidade de 50 a 500 mOsm/kg; e uma viscosidade inferior a 50 mPas.
9. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, adequada para alimentar um bebé, caracterizada por: a. o teor dos ácidos gordos poliinsaturados de cadeia longa ser inferior a um 3% em peso do teor total de gordura; b. o ácido gordo poliinsaturado de cadeia longa ómega-3 ser abaixo de 1% em peso do teor total de gordura; 2/5 c. o ácido gordo poliinsaturado de cadeia longa ómega-6 ser abaixo de 2% em peso do teor total de gordura; d. o teor de ARA ser abaixo a 1% em peso do teor total de gordura; y e. o rácio EPA/DHA ser 1 ou inferior.
10. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizada por esta ser usada como medicamento.
11. Uso de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, para o fabrico de uma composição para ser administrada a um bebé de entre 0 e 2 anos de idade.
12. Uso de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, para o fabrico de uma composição para ser usada num método para o tratamento ou prevenção da alergia, compreendendo o dito método a administração da composição a um mamífero de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.
13. Uso de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, para o fabrico de uma composição para ser usada num método para o tratamento ou prevenção da diarreia, compreendendo o dito método a administração da composição a um mamífero de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.
14. Uso de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, para o fabrico de uma composição para ser usada num método para reduzir a dermatite 3/5 produzida pelas fraldas, compreendendo o dito método a administração da composição a um mamifero de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9.
15. Uso de uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9 para o fabrico de uma composição para: a. prover os requisitos nutritivos a um bebé prematuro; b. o tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias crónicas, particularmente doença inflamatória intestinal, doença do intestino irritável, doença celiaca, pancreatite, hepatite, artrite ou diabetes; c. prover a nutrição a pacientes que foram submetidos a cirurgia abdominal e doentes que experimentaram uma disfunção pós-operatória do intestino e/ou doentes desnutridos; d. a administração a pacientes que sofrem da sindrome de imunodeficiência adquirida e/ou pacientes que estão infectados com o virus da imunodeficiência humana; e. tratar ou prevenir complicações resultantes de uma integridade da barreira reduzida, particularmente prevenção da diarreia; f. o tratamento ou prevenção da alergia; g. o tratamento e/ou a prevenção das doenças onde a concentração de IL-4 intestinal está aumentada; ou h. estimular a integridade da barreira intestinal. 4/5 Lisboa, 25 de Outubro de 2013 5/5