PT510913E - Composicoes farmaceuticas a base de calcitonina - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS À BASE DE CALCITONINA" A presente invenção relaciona-se com composições farmacêuticas compreendendo calcitonina. A calcitonina é uma hormona polipéptida de 32 aminoácidos segregada pelas células parafoliculares da glândula tiróide nos mamíferos e pela glândula ultimobraquial dos pássaros e peixes. É um potente fármaco para o tratamento da doença de Paget, alguns aspectos da hipercalcemia, e para a osteoporose pós-menopausal. Calcitoninas de diferentes origens, principalmente do salmão, do porco, da enguia e de seres humanos são actualmente usadas terapeuticamente. A calcitonina humana, embora considerada menos potente e por isso necessária em concentrações ou doses mais elevadas do que a calcitonina de salmão, tem a vantagem de não gerar anticorpos neutralizadores depois de administrações prolongadas como acontece com a calcitonina de salmão (Grauber et al. 1990, J. Bone Min. Res. 5, 387 - 391, Levy et al. 1988, J. Clin. Endocrinol. Metab. 67, 541 - 545 e as referências aí contidas).

Em soluções salinas fisiológicas ou tamponizantes, a calcitonina humana não é estável, precipita-se e forma geles que consistem em fíbrilhas de calcitonina. Uma vez que a calcitonina fibrilhada não se re-dissolve em soluções fisiologicamente compatíveis, as fíbrilhas de calclitonina per se não foram levadas em consideração para uso terapêutico. Devido ao fenómeno de formação de fibrilhas, que foi considerado indesejável, têm sido adoptados vários passos com a finalidade de evitar o problema. Em particular, a forma de dosagem injectável de calcitonina humana é feita apenas como e quando necessária misturando o pó de hCT e a solução aquosa imediatamente antes da injecção. Este procedimento não é necessário para a calcitonina de salmão que é fornecida em solução estável.

Descobrimos agora, surpreendentemente, que as fibrilhas de calcitonina per se são biologicamente activas e dão uma resposta de dose de tempo mais prolongado do que a calcitonina em solução.

De acordo com isto a presente invenção fornece calcitonina fibrilhada para uso no tratamento de doenças causadas pela deficiência de cálcio. A calcitonina é de preferência calcitonina humana ("human calcitonin", hCT) que pode ser sintética ou pode ser produzida por tecnologia de recombinante de DNA, pode ser calcitonina de salmão, de enguia ou de porcino. O termo "calcitonina humana" é usado num sentido lato no contexto desta descrição e destina-se a compreender não apenas a calcitonina humana natural como descrito em Helv. Chim. Acta, Vol 53, loc. cit., que também pode ser obtida sinteticamente, mas também derivados e análogos desta farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo aquelas nas quais um ou mais dos grupos aminoácidos que ocorrem nos compostos naturais são substituídos ou o grupo de terminal N- ou C- tenha sido modificado estruturalmente. A calcitonina humana pode existir na forma livre ou na forma de um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. Tais sais são conhecidos e a sua actividade e compatibilidade são comparáveis às das formas livres. Sais de adição de ácido adequados típicos são os hidrocloretos ou acetatos. A calcitonina pode ser fíbrilhda pela adição de água ou de uma solução aquosa ao pó de calcitonina e depois agitando até se dissolver. Soluções aquosas adequadas incluem soluções diluídas de NaCl, por exemplo NaCl a 0,9 %; ácidos fracos, por exemplo ácido acético a de 0,001 % a 0,5%; e tamponizantes, por exemplo tamponizante salino de fosfato a um pH de 7,4 ou outros tamponizantes biologicamente compatíveis. A solução pode então ser incubada a uma temperatura de 2° - 50° C, de preferência à temperatura ambiente, para a reacção de fíbrilhação ser completada, isto é, quando não há mais alterações na turvação das amostras. O tempo de incubação depende do meio aquoso, da temperatura e da concentração de calcitonina. A concentração de calcitonina pode ser de 1 a 200 mg/ ml, de preferência de 5 a 100 mg/ ml. Soluções de concentração mais elevada fibrilham mais rapidamente e a fíbrilhação ocorre mais rapidamente a temperaturas mais altas. Foi descoberto que, para que o processo de fíbrilhação esteja completo, é necessário um período de incubação de 1 hora para uma solução de hCT em água de 200 mg/ ml. A calcitonina fíbrilhada pode ser usada na forma de gel. Nesta forma esta age como um depósito e pode ser administrada por via intra-muscular, intra-nasal, sub-cutânea, ou oral, por exemplo intra-colónica. Os geles fibrilhados podem ser espremidos através de agulhas de injecção. Neste caso é preferido colocar a solução de calcitonina numa seringa, esterilizá-la e depois deixá-la fibrilhar dentro da seringa, após o que está pronta para o uso. A solução é de preferência colocada dentro da seringa a uma baixa temperatura a fim de atrasar a fíbrilhação. Uma vez dentro da seringa a temperatura pode ser aumentada. -4-

Se assim for desejado as fibrilhas de calcitonina podem ser fragmentadas ou partidas através de qualquer método adequado tal como num misturador ou homogeneizador ou de preferência por tratamento com ultra-sons (sonicação). A análise microscópica de electrões de uma suspensão de fibrilhas de hCT sonicadas mostra que esta consiste em pequenos bastões de cerca de 15 nm de diâmetro e 26 a 130 nm de comprimento. A fim de fragmentar ou partir as fibrilhas, é acrescentado mais um volume de solução aquosa às fibrilhas e a massa resultante é submetida, de preferência, a sonicação usando, por exemplo, um sonicador de ponta até que as fibrilhas estejam completamente partidas e não ocorra mais nenhuma alteração na turvação da amostra com mais sonicação. Durante a sonicação, a temperatura é de preferência mantida abaixo dos 37° C. São preferidas condições de temperatura constantes, por exemplo envolvendo a amostra com gelo. A sonicação é também de preferência levada a cabo sob uma atmosfera de gás inerte tal como nitrogénio ou árgon. A solução aquosa adicionada ao gel pode ser uma como a que é usada para formar a solução original. A fragmentação é levada a cabo de preferência dentro de 24 horas a partir do fim da incubação. O produto resultante é uma dispersão de fibrilhas fragmentadas na água ou solução aquosa e esta dispersão forma um outro aspecto da presente invenção.

Quando é usada como um gel, a concentração de calcitonina pode ser de 1 a 200 mg/ ml, de preferência de 5 a 100 mg/ ml. Quando é usada como -5- uma dispersão de fíbrilhas fragmentadas, a concentração de calcitonina pode ser de até 50 mg/ ml.

As variações preferidas para suspensões de fíbrilhas de hCT fragmentadas são de 3 a 10 mg/ ml para soluções nasais ou orais e de 0,5 a 3 mg/ ml para soluções injectáveis.

As composições da invenção têm um efeito hipocalcémico prolongado de modo a que, na terapia de calcitonina, o número de injecções necessárias ou doses a serem tomadas possam ser reduzidos, em comparação com as que são necessárias quando são usadas soluções de calcitonina convencionais.

As composições da invenção também podem conter agentes dilatadores que fazem aumentar a viscosidade e/ ou açúcares e/ ou outros aditivos farmaceuticamente aceitáveis. Como agentes dilatadores que fazem aumentar a viscosidade podem ser usados derivados de celulose hidrofílicos parcialmente eterificados, poliacrilatos hidrofílicos, polimetacrilatos, polietileno glicóis, álcoois polivinílicos ou misturas destes. Compostos adequados incluem metil celulose, hidroxipropilmetilcelulose, polietileno glicol, dextrano, que podem ter um peso molecular de 20.000 a 80.000, mas de preferência cerca de 40.000, açúcares tais como sacarose, fructose, glicose, lactose, manitol e trealose, etanol, albumina de soro, lisozima e conservantes tais como cloreto de benzalcónio, cloreto de benzetónio e diacetato de clorhexidina. A quantidade de aditivos usada pode variar e pode depender do uso que se lhe pretende dar. Por exemplo para soluções nasais ou orais, pode ser usado de 0,5 a 10 % em peso de aditivo. No caso de soluções injectáveis, açúcares, polietileno glicóis ou dextrano seriam usados como o aditivo, geralmente nas quantidades de 0,5 a 10 % em peso. A invenção é ilustrada nos seguintes exemplos. EXEMPLO 1 São adicionados 200 μΐ de ácido acético a 0,001 % / água a 20 mg de pó de hCT e a solubilização é realizada usando um misturador de vórtex durante 1-2 min. A solução resultante é deixada a fibrilhar durante 1 hora. Sobre o gel duro e turvo de fibrilhas de hCT são adicionados 4 ml de ácido acético a 0,001 %; depois a ultra-sonicação é realizada durante 2 minutos. Micrográficos de electrões de fibrilhas de hCT sonicadas manchadas negativamente mostram a presença de bastões como na Figura la. As fibrilhas de hCT originais são mostradas na Figura lb. Os bastões de fibrilhas de hCT sonicadas tinham, em média, 15 nm de diâmetro e de 26 - 130 nm de comprimento. EXEMPLO 2

Seguindo o procedimento do Exemplo 1, são formados geles a partir de uma solução de 20 mg de hCt em 100 μΐ de ácido acético a 01 %. São então adicionados 10 ml de água e a sonicação é realizada como descrito no Exemplo 1 com resultados semelhantes. EXEMPLO 3 O produto do Exemplo 2 é diluído com uma solução de NaCl aquoso a 0,9 % para dar uma solução tendo uma concentração de hCT de 5 gg/ ml. Este é injectado por via intra-venosa num rato hipocalcémico modelo e comparado com uma injecção semelhante de uma solução de hCT feita da maneira convencional dissolvendo pó de hCT. A dosagem em cada caso é de -7- 5μg/ kg d peso corporal. Os resultados são mostrados na Fig. 2. A solução do Exemplo 2 é biologicamente activa e tem uma resposta de dose de tempo mais prolongado do que a solução convencional. EXEMPLO 4 São formados geles fíbrilhados de hCT colocando soluções aquosas de hCT: (50 mg/ ml de hCT em ácido acético a 0,1 % ou em NaCl a 0,9 %) em seringas e deixando o hCT fibrilhar nas seringas de um dia para o outro. A injecção sub-cutânea (s.c.) intra-nasal (i.n.) intra-rectal (i.r.) intra-íleo (i.i.) ou intra-colónica (i.c.) de gel fibrilhado de hCT pode ser feita facilmente uma vez que os geles fíbrilhados de hCT endurecidos podem ser espremidos através de agulhas de injecção. As Figuras 3a e 3b mostram que no rato hipocalcémico modelo a injecção de gel fibrilhado de hCT por via s.c., i.n., i.r., i.i. e i.c tem um efeito biológico forte e prolongado. Fibrilhas formadas em NaCl a 0,9 % foram usadas para procedimentos experimentais por via s.c. e i.n. e fibrilhas formadas em ácido acético a 0,1 % foram usadas para os procedimentos experimentais por via i.r., i.i. e i.c.

Nos procedimentos experimentais in vivo dos Exemplos 3 e 4 é usado o seguinte rato hipocalcémico modelo: - Ratos Fêmeas Wistar de peso r corporal de 80 - 100 g são alimentados com uma dieta normal. E administrado hCT como mencionado aos animais anestesiados com Hypnorm depois pentabarbitona de sódio por via i.m. São colhidas amostras de sangue (250 μΐ) de uma artéria carótida canulada em cada tempo. A alteração no nível de cálcio depois da administração de formulações de hCT é medida por um método colorimétrico usando um equipamento de medição Ca (Sigma Chem. Co.). São -8- usados de três a cinco animais para cada tempo.

Lisboa, 3 de Outubro de 2000

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JORGE CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA

Claims (11)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Calcitonina fibrilhada para uso no tratamento de doenças causadas pela deficiência de cálcio.
2. 2. Calcitonina fibrilhada como reivindicado na reivindicação 1 que é calcitonina humana, de salmão, enguia ou porcina.
3. 3. Calcitonina fibrilhada como reivindicado na reivindicação 2 que é calcitonina humana.
4. 4. Calcitonina fibrilhada como reivindicado na reivindicação 1, 2 ou 3, que compreende calcitonina e água e opcionalmente NaCl, uma ácido fraco ou um tamponizante.
5. 5. Calcitonina fibrilhada como reivindicado em qualquer das reivindicações anteriores que também compreende um agente gelificante aumen-tador de viscosidade e/ ou um açúcar e/ ou outro aditivo farmaceuticamente aceitável.
6. 6. Calcitonina fibrilhada como reivindicado em qualquer das reivindicações anteriores, na qual a concentração de calcitonina é de 1 a 200 mg/ml.
7. 7. Calcitonina fibrilhada como reivindicado na reivindicação 6, na qual a concentração de calcitonina é de 5 a 100 mg/ ml.
8. 8. Um fragmento de fibrilha de calcitonina passível de ser -2- obtido fragmentando ou partindo as fibrilhas de calcitonina num misturador ou homogeneizador ou por sonicação.
9. 9. Um fragmento de fibrilha de calcitonina como reivindicado na reivindicação 8 no qual o fragmento é na forma de um bastão tendo um diâmetro médio de cerca de 15 nm e um comprimento de 26 a 130 nm.
10. 10. Um fragmento de fibrilha de calcitonina como reivindicado na reivindicação 8 ou 9 no qual a concentração de calcitonina é de até 50 mg/ ml.
11. 11. Uma dispersão de um fragmento de fibrilha de calcitonina em água, opcionalmente contendo um ou mais outros compostos como dado na reivindicação 4 ou 5. Lisboa, 3 de Outubro de 2000

    JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA