PT87867B - Processo para a preparacao de inibidores de resina, a base de polipeptideos contendo derivados fluorados de ciclostatina - Google Patents

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PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE INIBIDORES DERENINA A BASE DE POLIPEPTIDEOS CONTENDO DERIVADOS FLUORADOS DE CICLOSTATINA (s)

I /

CONH em que X é 0 ou NH; R₁ ê alquilo -Cg, imidazol-4-ilmetilo ou meti11iometi1 o; Y é CHOH ou C = 0; e ê CF^CONHCH^, CF^, cf₂-ch fc h₂ch(ch₃)₂/co₂c₂h₅.

processo de preparação consiste, em se formar uma ligação amida, C(O)N, mediante acoplamento com desidratação, por exemplo entre os compostos seguintes:

co₂h

-3Este pedido é uma continuação em parte do pedido copendente N⁹ de Série 068 989, de 1 de Julho de 1987.

A enzima renina proteolítica, que tem um peso molecular de cerca de 40 000, ê produzida e segre gada no sangue pelo rim. Conhece-se como sendo activo in vivo na aderência de g1icoproteina angiotensinogene de ocorrência natural no plasma, no caso de angiotensinogene humano na ligação entre os resíduos aminoácidos leucina (10^s) e valina (11⁹) no extremo N-terminal do angiotensinogene;

Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-Val1 2 3 4 5 6 7 8 91011

11e-His-Ser-Glu12 13 14 15 decapeptideo N-terminal de circulação (angiotensina I) formado pela accão anterior de aderência da renina é subsequentemente partido pelo corpo num octapeptideo conhecido como angiotensina II. A angiotensina II é conhecida como sendo uma substância compressora potente, i.e., uma substância que é capaz de induzir um aumento significante na pressão sanguínea e acredita-se que actua originando a contracção dos vasos sar^ guineos e a libertação da hormona aldosterona retentora do sódio da glândula adrenal. Assim, o sistema renina-angiotensinogene tem sido implicado como factor causador em certas formas de hipertensão e falhas congestivas do coração.

Um meio de aliviar os efeitos adversos do funcionamento do sistema renina-angiotensinogene é a administração de uma substância capaz de inibição da acção de aderência-angiotensinogene da renina. E conhecido um número de tais substâncias, incluindo anticorpos antiremina, leps_ tatina e compostos fosfolipidos de ocorrência natural. A aplj_ cação da Patente Europeia N⁹ 45 665 (publicada em 2 de Feve- 4reiro de 1982) divulga uma série de derivados polipeptideos inibidores inibidores da renina de fórmula

X-Y-Pro-Phe-His-A-B-Z-W na qual X pode ser hidrogénio ou um grupo amino protector, Y pode estar ausente, B é um resíduo amino ácido lipofilico, Z ê um resíduo amino ácido aromático, W pode ser hidroxil e A pode ser, inter alia, p f 8

-NH-CH-CH-CH₀-CH — C ι

OH

2 sendo cada um de R e R numa cadeia ramificada lipofilica ou aromática. De acordo com as definições apresentadas nesta apl£ cação publicada da patente, não está comtemplado que quer A ou Z possam ser estatina ou que B possa ser lisina

A aplicação da Patente Europeia Ns 77028A (publicada em 20 de Abril de 1983) divulga uma série de compostos polipeptideos inibidores da renina tendo um resíduo derivado de estamina não terminal ou de estanina. Incluidos dentro desta série estão os compostos tendo uma sequê£ cia feni 1 a 1amina-histidina.

A aplicação da Patente Europeia 132304A também divulga o uso de polipeptideos contendo statina como agentes antihipertensivos inibidores da renina, e a Aplicação da Patente Europeia 114993A divulga polipeptideos contendo ciclostatina, úteis como antihipertensivos inibidores de renina.

Certos polipeptideos contendo fluo ro fluorocetonas relacionados com estanina são assinalados como sendo inibidores de pepsina (Gelb, et al., Biochemistry, 24, 1814 (1985).

A aplicação PCT W087/02675 reivindica uma série de polipeptideos contendo 2,2-dif luorociclostatina.

Observou-se agora que certos polipeptideos contendo fluor são úteis como agentes inibidores de renina e têm aplicação no tratamento de hipertensão e falha cardiaca congestiva.

Esta série de novos compostos consiste de po1ipeptideos de fórmula:

e um seu sal farmacêuticamente aceitável, em que X é 0 ou NH; R₁ é alquil de um a seis átomos de carbono, imidazo1-4-ilmetil ou metiltiometi1; Y é

CH

ÕH or

II

O

-6e R₂ ê CF₂C0NHCH₃, CF₃ ou CF₂ÇHC0₂C₂H₅

CH₂CH(CH₃)₂.

Um grupo preferido de compostos são aqueles em que X ê 0 e R₁ é alquil de um a seis átomos de carbono.

Especialmente preferidos dentro deste grupo de compostos está o composto onde R₁ é n-butil, \ X \ /

Y é CH e R₂ é CF₂C0NHCH₃, onde R₁ é n-butil, Y ê C e R₂ é

OH .0

CF₂C0NHCH₃, onde R₁ é £-butil, Y é C e R₂ é CF₃, onde R₁ ê n-butil, Y é C e R₂ é CF₃, onde R₁ é n-butil, Y é^CH e R₂ é ¹¹ Σ ⁰ OH

CF₃ e onde R₁ é r^-buti 1, Y é C=0 e R₂ é CF₂CHC0₂C₂H₅ ch₂ch(ch₃)₂.

Um segundo grupo preferido de compostos são aqueles em que X é NH e R^ é alquil de um a seis átomos de carbono. Especialmente preferido dentro deste grupo de compostos é o composto onde R^ ê rç-butil , Y é^CH^e R₂ é

OH

CF₂C0NHCH₃, onde R₁ é n-butil, Y é\^Xe R₂ é CF₂C0NHCH₃.

presente invento também inclui um método para o tratamento de hipertensão num mamífero o qual' compreende a administração ao referido mamífero de uma quantidade antihipertensiva efectiva dos compostos do presente invento e uma composição farmacêutica compreendendo os compos.

tos do presente invento e um suporte.

presente invento pretende também incluir inibidores renina de fórmula

CONH _^R3

CONH

R onde Z é B-(C)_m-(A) onde B ê (C₁ -C₄ )alcoxi, (C,j-C₄) alquilamino, di-(C₁-C₄) alquilamino, hidroxi (C₂~C₄) alquilamino, alcoxi (C₂-C₄) alquilamino, (C^cp alquil, morfolino, tiomor folino, tiomorfolino sulfóxido, tiomorfolino sulfona, piperazino, 4-(C₁ -C₄ )alcanoi lpiperazino, 4-(C.j-C₄) a 1coxicarboni1 piperazino, 4-ÍC^-C^) a 1 qui1piperazino, (C₁-C₄) alcoxi C0CH₂N(CHg)- ou éster de N-pro1ina(C₁-C₄)a 1qui1; C é C = 0; A é NH ou 0; e rn e p são cada 0 ou 1;

M é fenil, p-metoxifeni1, benzil ou naftil;

R-j é (C₁ -C₄ )alqui 1 , (C₁-C₄)alqui11ioalqui 1 , (C₂-C₄)alcoxialquil, imidazol-4-iImeti1;

^R4 é 2_“P^ropil, ciclohexil ou fenil;

Y é C = 0, C(H)-^<OR' ou C(H)iiiii I OR¹ onde R¹ é hidrogénio; e

R₅ é CF₂C0NH(C₁-C₄)alqui1, CF₃ ou

CF

2\

CH cor₆ onde Ry é i-propil ou i-butil e Rg é alcoxi de um a seis átomos de carbono, (C^-C₄)alquilamino ou di(C₁-C₄)a 1qui1amino;

-8com a condição de que quando m ê 0, p é 0.

Como préviamente indicado, apreser^ ta invento diz respeito a sais farmacêuticamente aceitáveis dos compostos biológicamente activos. Tais sais são aqueles que são não tóxicos nas dosagens administradas. Uma vez que os compostos do invento podem conter ambos os grupos básicos e acidicos, ambos os sais ácidos de adição são possíveis. Os sais ácidos de adição farmacêuticamente aceitáveis incluem os sais e.g., cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bisulfato, fosfato, fosfato ácido, acetato, lactato, maleato, mesilato, fumarato, citrato, citrato ácido, tartarato bitartarato, succinato, gluconato e sacarato. Sais alcalinos de adição farmacêuticamente aceitáveis incluem e.g., os sais de sódio, potᣠsio, cálcio e magnésio. Os métodos convencionais de formação de ácidos de adição e sais alcalinos de adição podem ser empregados.

No interesse da brevidade, o nome abreviado vulgarmente aceitável dos aminoácidos individuais foi empregado onde possível. Por exemplo, o amino ácido fenij_ alamina é abreviado como Phe e histidina- como His. 0 grupo amino protector t-butoxicarboni1 é abreviado como Boc e N-t-butoxicarboni1 na imidazol de histidina como imBoc.

A ciclostatina modificada contendo fluor na estrutura é de fórmula

-NH

CII

-9onde Y é como préviamente definido, e são designados 2,2-dif1uoro-C-sta. As cetonas correspondentes onde Y é C=0 são designadas 2,2-difluoro-C-statona.

Todos os amino ácidos naturais contidos nas estruturas dos compostos presentemente reivindicados são da configuração L, a configuração ocorrendo natura]_ mente, a menos que de outro modo notado.

Os compostos deste invento exibem actividade antihipertensiav in vivo em mamíferos, incluindo seres humanos. Pelo menos uma porção substancial desta activj_ dade resulta da sua capacidade para inibir a aderência da angiotensinogene pela renina. Embora não desejemos ser limita dos pela seguinte teoria do mecanismo, é provável que o mecanismo da actividade inibidora da renina dos compostos do in vento seja a sua ligação selectiva (quando comparada com an giotensinogene) à renina. Os compostos do invento exibem a actividade inibidora da enzima que é selectiva para a renina como contra outras enzimas benéficas tal como catepsina D. Devido aos seus baixos pesos moleculares elas exibem caracte risticas de solubilidade favoráveis em meio aquoso, tornando assim possível a administração oral, e podem ser sintetiza das a um custo comercialmente realístico. Os compostos do presente invento são também úteis contra falhas cardíacas con gest i vas.

Os compostos do invento podem ser preparados por métodos familiares aos especialistas da arte.

A sub-unidade básica da sintese química preferida é a acilação do grupo alfa-amino não protegido de um residuo amino ácido com um amino ácido tendo uma função carboxílico activada (para fins de acilação) e um grupo de protecçâo apropriado ligado ao seu próprio azoto alfa para formar uma ligação peptideo entre os dois resíduos amino ácidos, seguidos pela remoção do referido grupo de protecçâo. Esta sub-unidade de

-10sintese de acop 1 amento-desacop 1 amento é efectuada repetidamen^ te para aumentar o polipetideo, partindo do extremo C-termi nal da estrutura molecular e levando ao extremo N-terminal como aqui descrito. Os amino ãcidos utilizados para sinteti zar os compostos do presente invento são comerciaImente dispo niveis (como ãcidos livres, sais ou esteres, etc.) em ambas as formas alfa-amino protegidas e alfa-amino não protegidas.

A sintese do intermediário que fojq ma o esqueleto de 2,2-difluorociclohexi1statina é descrita na Publicação Internacional PCT No.WO 87/02675.

As amidas ou ésteres, quando subme tidos a ácido clorídrico em dioxano, perdem o grupo t-butoxicarbonil de protecção da metade amino. A acilação dos ésteres amino ou amidos resultantes é efectuada usando 1-hidroxibenzo triazol e uma carbodiimida. A remoção do grupo de bloqueio em imidazol com ácido acético-água origina o produto final.

Os polipeptídeos contendo cetona, do presente invento são preparados por oxidação dos correspon^ dentes hidroxi polipeptídeos (R) ou (S) usando dimeti lsulfóxj_ do e cloreto de oxalil.

A actividade dos compostos do presente invento como inibidores da actividade angiotensiogene de aderência da renina pode ser determinada por estudo (1) da sua capacidade para inibir a actividade angiotensinogene de aderência da renina in vitro e (2) a sua capacidade para antagonizar a resposta in vivo da compressão induzida da renina exógena.

Os compostos do presente invento podem ser administrados como agentes antihipertensivos quer pelas vias de administração oral ou patenteral, sendo preferida a primeira por razões de conveniência e conforto do doente. Em geral, estes compostos antihipertensivos são normal-11mente administrados oralmente em dosagens que variam de cerca de 0,5 mg a cerca de 50 mg por kg de peso de corpo por dia e 0,1 mg a cerca de 5 mg por kg de peso do corpo por dia quando administrados parenteralmente; as variações ocorrerão necessáriamente dependendo das condições do indivíduo a ser tratado e do composto particular a ser administrado tipicamente, o tratamento começa com uma dose diária baixa e aumenta sómen te através do médico se necessário. Deve notar-se que estes compostos podem ser administrados em combinação com suportes farmacêuticos aceitáveis por qualquer das vias préviamente indicadas, e que tal administração pode ser efectuada em ambas as dosagens simples e múltiplas.

Os novos compostos do invento podem ser administrados oralmente numa grande variedade de formas de dosagem diferente, i.e., eles podem ser formulados com vários suportes inertes farmacêuticamente aceitáveis na forma de pastilhas, cápsulas, rebuçados, trociscos, confeitos duros, pós, sprays, suspensões aquosas, elixires, xaropes, e análogos. Tais suportes incluem diluentes ou agentes de enchimento, meios aquosos estéreis e vários solventes orgânicos não tóxicos, etc. Além disso, tais formulações farmacêuticas orais podem ser apropriadamente adoçadas e/ou aromatizadas por meio de vários agentes do tipo vulgarmente empregado para tais fins. Em geral, os compostos deste invento estão presentes em formas de dosagem oral a níveis de concentração que vão de cerca de 0,5% a cerca de 90% em peso da composição total, uma quantidades que são suficientes para fornecer as dosagens unitárias desejadas.

Para fins de administração oral, pastilhas contendo vários excipientes tal como citrato de sódio, carbonato de cálcio e fosfato de cálcio podem ser empre-, gados juntamente com vários desintegrantes tal como amido e preferivelmente amido de batata ou tapioca, ácido alginico e certos silicatos complexos, juntamente com agentes ligantes tal como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e acácia.

-12Adicionalmente, agentes lubrifican tes talcomo estearato de magnésio, lauril sulfato de sódio e talco são muitas vezes muito úteis para formação de pastilhas. Composições sólidas de um tipo análogo podem também ser empre gadas como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina moles e duras; os materiais preferidos para este fim incluirão também lactose ou açúcar do leite bem como polietileno glicóis de alto peso molecular. Quando desejamos suspensões aquosas e/ou elixires de administração oral, o seu ingrediente activo essencial pode combinar-se com vários agentes de enchimento ou aromatização, materiais para tingir ou corantes e, se o desejarmos, agentes emulsionantes e/ou de suspensão bem como, juntamente com diluentes tal como água, etanol, propileno glj. col, glicerina e vários suas combinações análogas.

Os exemplos seguintes ilustram o invento mas não devam ser entendidos como limitando-o.

Genérico. TLC foi efectuada sobre pratos TLC 254 ou sílica Merck EM, eluindo com: Sistema A, 18/2/1 clorofórmio/etanol/ácido acético HPLC foi realizada isocráticamente num sistema de gradiente Beckman usando duas bombas modelo 100, misturador de solvente, e detector de com primento de onda fixo de 214 nM a 1,5 ml/min com várias composições de acetonitrilo: pH 2,1 KH₂P0^ 0,1M- tampão de ácido fosfórico (proporções especificadas a seguir) numa coluna C-8 Zorbax 25 cm χ 4,6 mm.

EXEMPLO 1

Morfolinocarbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-C-Sta N-meti lamida (X=0, R^n-^Hg, Y = CH OH e r₂=cf₂conhch₃)

Cloreto de 2,2-difluoro-(R)-3-hidroxi-(S)-4-amino-5-ciclohexi1-N-meti1valeramida (2,2 -difluq ro-C-Sta N-metilamida), 252 mg , foi dissolvido em 2,5 ml de diciorometano, arrefecido num banho de gelo e tratado sequer^ cialmente com trietilamina (151 ml, 1,3 aquiv), 328 mg de mor folinocarbonil-L-fenilalanil-L-norleucina(Mor-Phe-Nle), hidra^ to de 1-hidroxibenzotriazol (HBT, 193 mg, 1,0 equiv) e diciclohexilcarbodiimida (DCC, 173 mg, 1,0 equiv) e a mistura foi agitada durante a noite em cujo tempo a temperatura subiu para 15-20^QC. A mistura foi filtrada os sólidos filtrados foram lavados com diciorometano e concentrados e o resíduo foi dissoj_ vido em acetato de etil. Após ter sido agitado durante alguns minutos e a suspensão foi filtrada, e o filtrado foi lavado com solução de hidróxido de sódio 1N (2 χ ca. 5 ml), água saj_ gada, seco sobre sulfato de magnésio e concentrado originando uma espuma incolor a qual foi cromatografada sobre 30 g de silica com enchimento em 1% de etanol/cloreto de metileno (v/v) eluindo com 700 ml cada de 1%, 2% e 4% de etanol em cloreto de metileno. A substância em epigrafe, 338 mg (63%), foi obtf da como uma pó incolor, TLC Rf 0,53 no sistema A, HPLC em 50/50 MeCN/tampão, 6,97 min, 97% de integração UV a 12 minutos.

NMR (DMS0-d6), 250 mHz, parcial,Ç, ppm: 0,88 (t, 3H, sobreposição m, 1H), 1,0-1,85 (m, ca. 16H), 2,67(m, 3H, NCH^), 2,83 (dd, 1H), 3,0 (dd,1H), 3,21 (m, 4H6, 3,47 (m, 4H), 3,96 (d9, 1H), 4,17 (sobreposição m, 2H), 4,33 (m, 1H), 6,0 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 7,13-7,5 (m, ca. 6H), 8,05 (d, 1H), 8,46 (m, 1H), FAB-MS (tioglicerol) m/e (intensidade relativa): 201 (11), 217 (100), 218(11), 219(10), 233(16), 261(24), 265(22), 307(24),

-14325(11), 378(12), 638(76, ΜΗ + ), 639(32).

EXEMPLO 2

Morfolinocarbonil-Phe-Nle-epi-2,2-difluoro-C-Sta N-metilamida (X = 0, R^n-C^Hg,

Y = CH-^OH e R₂ = CF₂C0NHCH₃

Uma mistura aproximadamente 1:1 (270 mg) de 2,2-dif1uoro-(R)-3-hidroxi-(S )-4-amiηο-5-ciclohexi1-N-metilvaleramida e 2,2-dif1uoro-(S)-3-hidroxi-(S)-4-amino-5-ciclohexi1-N-meti1valeramida obtida a partir de ester

2,2-difluoro-(R, S)-3-hidroxi-4-t-butoxicarbonilamido-5-ciclo hexi1-valeramida etílico foi tratada de acordo com o processo do Exemplo 1 com trietilamina, Mor-Phe-Nle, HBT e DCC para obtermos após processamento edêntico e cromatografia, a substância em epígrafe (266 mg, 47%) a qual foi bem separada do isómero ligeiramente menos polar (produto do Exemplo 1 (160 mg, 28%).

TLC Rf 0,45 em TLC sistema 1, HPLC em 60/40 MeCN/tampão, 3,54 minutos, 94% de integração UV a 8 minutos. Sob estas condições o produto do Exemplo 1, apresentou um tempo de retenção de 3,83 minutos. NMR (DMS0-d6, 250 mHz), parcial,5, ppm.: 0,62 (m, 1H), 0,88 (t, 3H), 1,02-1,85 (m, ca. 16H), 2,67 (br, 3H, NCH₃), 2,83 (dd, 1H), 3,00 (dd, 1H), 3,21 (m, 4H), 3,48 (m, 4H), 3,94 (dq, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 5,95 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 7,1-7,35 (m, ca. 6H), 7,69 (d, 1H), 7,97 (d, 1H), 8,58 (m, 1H). FAB-MS (tioglicerol ) m/e (intensidade re1ativa ) =21 7(24 ), 233

-15(48), 261(53 ), 265 (33), 307( 1 1 ), 378(27 ), 638( 100, ΜΗ⁴), 639 (39), 640(10).

EXEMPLO 3

Morfolinocarbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-C-Statone N-metilamida (X = 0, R₁=n-C₄-H_g, Y = C = O e r₂=cf₂conhch₃

Um frasco seco de 15 ml com um sep to na boca e mantido sob azoto foi carregado com 0,8 ml de cloreto de oxalil (1,2 equiv.) e arrefecido a -65⁹C. Juntamos dimetilsulfóxido (48 μ 1; 2,2 equiv) seguido após 3 minutos por uma solução de 197 mg do produto do Exemplo 2 (1,0 equiv.) em 0,75 ml de diclorometano ( a adição desta solução foi acom panhada por pressão de azoto através de uma câmula de aço ino xidâvel e demorou 3 minutos; usamos mais 0,25 ml de diclorometano para ensopar este material). A temperatura da reacção foi elevada para -30^eC durante 45 minutos, a seguir baixamos para -60⁹C, juntando a seguir 255 ml (5,0 equiv.) de diisopro pileti1amina. 0 banho de arrefecimento foi substituído com um banho de gelo durante 5 minutos e a reacção foi deixada a agj_ tar à temperatura ambiente durante 5 minutos. JUntamos então diclorometano (ca 50 ml) e a solução foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio aquoso (3x2 ml), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada originando 230 mg de uma espuma incolor a qual foi cromatografada sobre 18 g de silica com enchimento em 0,5% de etanol-diclorometano, eluindo com 500 ml cada de 0,5%, 1%, 2% e 4% de etanol-diclorometano. Obtivemos a substância em epigrafa como um pó inco-

lor (107 mg, 55%), juntamente com 49 mg (25%) de meterial de partida que não reagiu.

TLC Rf, Sistema A, 0,60; HPLC em MeCN/tampão 50/50 com uma cauda ampla, a 6% da integração UV total até 12 minutos. Sob as mesmas condições o material de partida (produto do Exemplo 2) originou um pico 5,15. NMR (CDClg, 250 mHz),£, ppm, parcial: 0,83 (t, 3H, sobreposição 0,9 ml), 1,0-1,9 (m, ca. 16H), 2,83 (d, 3H, NCH₃), 2,95 (dd, 1H), 3,05-3,35 (m, ca. 5H), 3,55(m, 4H), 4,35, 4,50, 4,85 e

5,18 (m, 1H cada), 7,03, 7,37, 7,45 (m, 1H cada), 7,1-7,3 (m, aromático). FAB-MS /tioglicerol, m/e (intensidade relativa)7: 233(82), 234(13), 259(12), 261(99), 262(18), 263(35), 374(18), 376(29), 636(100, MH⁺), 637(37), 638(11).

EXEMPLO 4

N-(Morfolinocarbonil-Phe-Nle)-(R)-2-hidroxi-(S)-3-amino-1,1,1-trifluoro-4-ciclohexilbutano (X = 0, R₁=n-C₄H_g, Y = CHiitiOH e R₂ = CF₃)

A. 2-nitroetilciclohexano

Um frasco de 3 tubuladuras de 1 li_ tro seco no forno equipado com um funil de entrada, termómetro e nitrito de sódio de 31 g. A mistura foi agitada a 5^SC enqua£ to juntávamos 50 mg de 2-ciclohexiletilbrometo (Aldrich) durante 5 minutos. 0 banho de arrefecimento foi removido e a mistura foi agitada a 25^eC durante 18 horas, deitada em 1,5 1

de água fria e a mistura foi repetidamente extraida (4 χ 150 ml) com éter de petróleo a qual foi lavada com água (2 χ 10 ml) e seca sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido e a pressão reduzida usando um evaporador rotativo e o residuo foi destilado através de uma coluna Vigreux de 8 originando 18,3 g (41%) do produto desejado fervendo a 70-80^sC e 2 mm Hg, precedido por 8 g de material de baixo ponto de ebulição originando 16,4 g, 40%, bp 62-65⁹C a 0,5 mm de Hg do produto em epigrafe.

B. 2-hidroxi-3-nitro-1,1,1-trifIuoro-4-ciclohexiIbutano produto do Exemplo 4A (1,52 g) foi misturado com 200 mg de carbonato de potássio e 16,86 mg de hidrato de trif1uoroaceta1 de ido a 25⁹C, aquecido sob azoto a 50^QC durante 4 horas, refrigerado durante a noite durante 14 horas, aquecido contra a 60⁹C durante 8 horas e refrigerado durante a noite. A solução amarela claro limpida foi cro matografada sobre 100 g de sílica em éter: hexano 1:10 originando 24 g de um óleo amarelo claro o qual foi recromatografado sobre 300 g de silica cheia em éter-hexano 1:15, eluindo com 1 litro de 1:15 e 2 litros de 1:10 éter-hexano originando 20,2 g de um óleo amarelo claro após remoção do solvente.

C. 2-hidroxi-3-amino-1,1,1-trifluoro-4-ciclohexilbutano

Uma garrafa centrífuga de 500 ml foi carregada com 20,1 g do produto do Exemplo 4B, 250 ml de etanol absoluto e 5 g de catalizador de Niquel Aldrich Raney molhável em água. A solução azul clara foi agitada sob uma pressão 45 p.s.i. de hidrogénio durante 20 horas, filtrada através de Celite a qual foi lavada com metanol e os filtrados foram concentrados para obtermos um sólido ceroso o qual

-18foi filtrado e lavado com 2x10 ml de hexanos frios e seco para obtermos 11,0 g da substância em epígrafe como uma mistura de dois diastereómeros racémicos. Uma grama desta material foi cromatografado sobre 100 g de silica cheias em etanol a 1%/cloreto de metileno eluindo com 500 ml cada de 1%, 2%, 4%, 6% e 10% de etanol/cloreto de metileno. 0 isómero menos polar (531 mg) foi identificado como o isómero 3(R), 3(S) e o isómero mais polar (433 mg) como o isómero 2(S), 3(S) pelo seu aspecto NMR.

D. N-(morfoli nocarbon il-Phe-Nle)-(R)-2-hidroxi-(S)-3-amino-1 ,1 ,1-trifluoro-4-ciclohexilbutano

Este composto foi preparado como uma mistura ca. 1:1 com o correspondente isómero 2(S), 3(S).

De acordo com o processo geral para preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 381 mg do isómero 2(R), 3(S) do Exem pio 4C foram acoplados a 860 mg de Mor-Phe-Nle usando 414 mg de HBT e 453 mg de DCC em 3 ml de diclorometano. 0 produto em bruto foi cromatografado sobre 40 g de silica em 1:3, 1:2 e 1:1 acetato de etil:hexano (11 de cada), originando 700 mg (69%) da substância em epígrafe como um sólido incolor.

TLC Rf 0,35 no Sistema A, HPLC em 60/40 MeCN/tampão 7,47 minutos, NMR (CDCl^, 300 mHz,^ ,ppm., parcial): 0,82 (t), 1 ,05-1,95 (m), 2,9-3,1 (m), 3,27 (m), 3,53 (m), 3,90, 4,17, 4,21, 4,70, 4,85, 5,27 ,5,49 ,5,83^_(m ) , 6,04 (d), 7,1-7,3 (m), 7,4 (m), 7,54 (m), 8,02 (br). 19F NMR (CDC1₃), 300 mHz,(5, ppm a partir de CFCl^: Duas duplas em relação 1:1-101,07 (d, J=5,7 Hz), 100,83 (d, J=6,1Hz). FAB-MS /‘tioglirol, m/e (intensidade relativa)j7: 226 (21 ), 233(91 ), 234( 14), 259 (17), 261(100), 262(17), 599(40, MH⁺), 600(16).

EXEMPLO 5

-19N-(Morfolinocarbonil-Phe-Nle)-(S)-2-hidroxi-(S)-3-amino-1,1,1-trifluoro-4-ciclohexilbutano (X = O, R₁=n-C₄Hg, Y = CH-^OH e R_£ = CF₃)

O composto em epígrafe foi preparado como uma mistura 1:1 com o isómero correspondente 2(R), 3(R). De acordo com o processo usado para a preparação do pro duto do Exemplo 4D, 240 mg do isómero 2(S), 3(S) do Exemplo 4C são acoplados com Mor-Phe-Nle originando após processamento e purificação análogos 538 mg (85%) das substâncias em epj_ grafe como uma espuma incolor.

TLC Rf 0,38 no Sistema A, HPLC em MeCN/tampão 60/40 8,26 minutos e 9,22 minutos, relação 1:1.

1H NMR (CDClg, 300 mHz,£, ppm, parcial): 0,89 e 0,91 (triplos) 1,05-2,0 (m de sobreposição), 2,85-3,05 (m), 3,05-3,35 (m), 3,58 (m), 3,96 (m), 4,22, 4,35 e 4,76 (m), 4,81 e 4,90 (d), 5,30 (m), 6,53, 6,67, 6,85 e 6,96 (d), 7,10-7,35(m) . FAB-MS /tiogl icerol , m/e (intensidade relativa )_/·' 21 7(20, 226(24), 233(67), 234(12), 259(13), 261(93), 262(93), 339(29), 583(22), 597 ( 1 1 ), 599(100, MH⁺), 600(37).

EXEMPLO 6

N-(Morfolinocarbonil-Phe-Nle)-3-(R,S)-amino-1,1,1-tri-fluoro-4-ciclohexilbutanona (X=0, R₁ =n-C₄H_g , X=C=O e R₂ = CFg)

-20Uma solução de 200 mg do produto do Exemplo 5 foi adicionada a uma solução de 156 mg de periodinano Dess-Martin (^. Org. Chem., 1983, 45, p. 4155) e a su£ pensão foi agitada 20 minutos a 25^SC. Juntamos éter (50 ml), seguido por solução de hidróxido de sódio 1,3N(20 ml), e a agitação continuou 10 minutos. As camadas foram separadas e a camada etérea foi lavada com solução de hidróxido de sódio diluida, ãgua salgada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada originando 100 mg de um sólido amarelo o qual por NMR era produto/material de partida 1:1. 0 sólido foi dissolvido em 5 ml de diclorometano, tratado sequencialmente com 45 ml de ãcido trifluoroacético e 1,0 equiv. de periodiano e a mistura reagente agora homogénea foi agitada 0,5 horas a 25²C diluida com éter, agitada com solução de hidróxido de sódio 1 ,3N durante 10 minutos, separada, a camada orgânica lavada com solução fresca de hidróxido de sódio, água salgada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada para obtermos 45 mg de um sólido amarelado. As camadas aquosas foram adicionalmer^ te extraídas com diclorometano (5 χ 30 ml) as quais foram secas e concentradas para obtermos sólido adicional o qual combinado com o primeiro lote originou 95 mg de substância em epígrafe como flocos amarelo pálido, TLC Rf 0,38 no Sistema A, HPLC em MeCN-tampão 50/50 5,43 e 5,72 minutos (relação 35/64, respectivamente).

1H NMR (CDClg, 300 mHz,5, ppm, par ciai): 0,89 (t), 1,05-2,0(m), 2,95(dd, 1H), 3,1-3,35 (m),

3.60 (m, 4H), 4,32, 4,47, 4,80, 4,88 e 4,95 (m), 6,34 (d),

6.60 (m), 7,14-7,45 (m). FAB-MS /tioglicol, m/e (intensidade relativa)/: 233 (78), 234(12), 259(20), 261(100), 262(15), 597(50, MH⁺), 598(18).

-21EXEMPLO Ί

Piperazinocarbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-C-Sta N-met i lam ida (X=NH, R^nC^Hg, Y = CH U U OH r₂=cf₂conhch₃)

A. 1-t-butilQxicarboni1-4-benzilpiperazina

Uma solução de 10,0 ml de N-benzij_ piperazina em 150 ml de dioxano-água 2:1 foi tratada com soli[ ção aquosa de hidróxido de sódio para elevar o pH para 12, e a solução a 0²C foi tratada com 18 ml de di-t-buti 1 carbonato.

pH foi mantido a 9,5-10,5 por adição de base aquosa. Após 10 minutos juntamos mais 4 ml de di-t-butil dicarbonato e após alguns minutos a mistura foi concentrada, extraída com acetato de etil (5χ), a qual foi lavada com água salgada e seca sobre sulfato de magnésio. Obtivemos um óleo limpido (24,5 g) após remoção do solvente o qual foi cromatografado sobre 350 g de silica cheia e carregada em 4% de etanol-1% de trietilamina em diclorometano (v/v/v). A coluna foi eluida com 1 litro cada de 4% de EtOH/1% TEA e 6% de ETOH/1% TEA. As fracções contendo o produto foram concentradas para obtermos 18,9 g de um sólido incolor o qual foi recromatografado sobre 600 g de sílica eluindo com 1:4, 1:2 e 1:1 de acetato de etilo/hexanos. Obtivemos a substância em epígrafe, 14,2 g) TLC Rf 0,43 em 2:1 acetato de etilo/hexanos.

B. 1-t-butiloxicarbonilpiperazina

Uma solução de 7,70 g do produto do Exemplo 7A em 75 ml de metanol com 2,0 g de 10% de paládio

-22sobre carvão, foi agitada sob uma pressão de 45 p.s.i. de hidrogénio durante 2,5 horas e filtrada através de Celite a qual foi a seguir lavada com metanol. Os filtrados foram concentrados e o resíduo foi co-evaporado com éter e tolueno on ginando um sólido oleoso, 9,9 g. Este foi recristalizado a partir de 75 ml de éter a ferver para obtermos 6,92 g de agulhas incolores, TLC Rf 0,10.

C. Ester benzilico de N-t-butiloxicarbonilpiperazina-N'-carbonilfenilalamina produto do Exemplo 7B, 3,2 g, foi dissolvido em 30 ml de diclorometano e juntamos 3,65 g de éster benzílico de ácido (S)-2-isocianato-3-feni1propiónico. Após 15 minutos a mistura concentrada foi cromatografada sobre 400 g de sílica em 30% de acetato de etilo/hexanos eluindo primeiro com 6 litros 30% a seguir com 2 litros 40% de ace tato de eti1o/hexanos originando após remoção do solvente 3,85 g do produto em epígrafe como um sólido oleoso, TLC Rf 0,24 em 1:1 acetato de etilo/hexanos.

D. N-t-butiloxicarbonilpiperazlno-N¹ -carbon i 1 ,f en i 1 a 1 ami na

Uma solução de 3,84 g do produto do Exemplo 7C em 30 ml de 10% de ácido acético em metanol foi agitada com 0,5 g de 10% de paládio sobre carvão durante 1,5 horas a 25^?C e 50 p.s.i. de pressão de hidrogénio. A mistura filtrada através de Celite e concentrada originou após coevaporação com adição de tolueno (2χ) e éter (2χ) 2,74 g de uma . espuma incolor, TLC Rf 0,48 no Sistema A.

E. Ester benzílico de N-t-butiloxicarbonilpiperazino-N'-carbon i1-Phe-Nle

De acordo com o processo geral para preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 1,00 g de cloreto de ester norlencina benzílico, 8 ml de diclorometano, 700 ml de trietilamina, 1,46 g do produto do Exemplo 7D, 890 mg HBT, e 800 mg DCC originou após isolamento e purificação análoga 1,65 g do produto em epigrafe como numa espuma incolor, TLC Rf 0,68 no Sistema A.

F. N-t-butiloxicarbonilpiperazino-N'-carbonil-Phe-Nle

De acordo com o processo para a preparação do produto do Exemplo 7D, 1,64 g do produto do Exem pio 7E originou 1,40 g da substância em epigrafe como uma espuma incolor, TLC Rf 0,54 no Sistema A.

G. N-t-butiloxicarbonilpiperazino-N'-carbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-C-Sta N-metilamida

De acordo com o processo da preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 301 mg de cloreto de 2,2-difluoro-C-Sta N-metilamida, 2,5 ml de diclorometano, 180 ul de trietilamina, 491 mg do produto do Exemplo 7F, 230 mg de HBT e 206 mg de DCC originaram 573 mg da substância em epigrafe após isolamento e purificação análoga. TLC Rf 0,58 no Sistema A, HPLC tempo de retenção 2,84 minutos em 80/20 acetonitrilo-água.

H. piperazinocarbonil-Phe-Nhe-2,2-difluoro-C-Sta N-metiIam ida

-240 produto (261 mg) do Exemplo 7G foi dissolvido em 2,0 ml de ãcido clorídrico 4N-dioxano. Após 45 minutos a suspensão foi concentrada, o residuo coevaporado com éter adicionado e seco originando 251 mg da substância em epígrafe como um sólido incolor. HPLC 40/60 acetonitrilo-tampão tempo de retenção 5,03 minutos.

1N NMR (250 mHz, DMS0-d6, ,ppm, parcial): 0,88 (t, 3H), 1,07-1,92 (m de sobreposição, ca, 16H, total), 2,70 (d, 3H, NCH₃), 2,8-3,07 (m, ca. 6H total), 3,48 (m, 4H), 4,32 (m, 2H) 4,85 (m, 1H), 6,92 (d, 1H), 7,15-7,38 (m, ca. 6H), 8,11 (d, 1H), 8,43 (d, 1H), 9,07 (m, 2-3H).

FAB-MS /tioglicerol, m/e (intensidade relativa)^ 217(16), 2325106, 260(44), 265(30), 378(10), 6,37 (100, MH+), 638(40).

EXEMPLO 8

Piperazimocarbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-CStatona N-metilamida (X = NH, R^in-C^Hg,

Y=C=O e R₂=CF₂C0NHCH₃)

A. N-t-butiloxicarbonil-Phe-Nle-2,2-difluoro-C-Statona Nmeti1amida

Uma solução de 43 ml de cloreto de oxalil em 0,8 ml de diclorometano foi arrefecida a -60^eC e

-25tratada com 64 ml de dimetilsulfóxido numa porção. Após 3 mj_ nutos, juntamos uma solução de 300 mg do produto do Exemplo 7G em 0,8 ml de diclorometano (enxaguamento adicional com 0,25 ml de diclorometano). A solução foi agitada a -30⁹ C durante 45 minutos, arrefecida a -60⁹ C e tratada durante 30 segundos com 351 ml de diisopropi1 eti1amina e aquecida a 0⁹C durante 5 minutos e levada a 25⁹C durante 5 minutos. A mistura foi diluida com diclorometano, lavada com 3 χ 2ml de bica£ bonato aquoso saturado, âgua salgada, seca sobre sulfato de sódio e concentrada originando 346 mg de uma espuma incolor a qual foi cromatografada sobre 15 g de silica em 3:1 acetato de eti lo/hexanos, eluindo com 500 ml deste solvente. Obtj_ vemos um produto (245 mg) por concentração das fracções apropriadas. TLC Rf 0,35 em acetato de etilo. Carbono-13 e fluor-19 NMR mostraram ressonâncias consistentes com um composto único de mais do que 90% de pureza.

B. piperazinocarbonil-Phe-Nle-2,2-dif1uor-C-Statona N-meti 1 am i da produto do Exemplo 8A (157 mg) foi dissolvido em 2,0 ml de ácido clorídrico 4N-dioxano. Após 40 minutos a mistura foi concentrada, o residuo coevaporado com éter e seco originando a substância em epigrafe, 145 mg, como um pó incolor. TLC Rf 0,28 (o prato manchado foi exposto a vapor de NHg antes da eluição no sistema A). HPLC em 40/60 MeCN/tampão apresentou um pico a 5,73 minutos com uma camada ampla. Não houve contaminação com o álcool 7H correspondente (eluindo a 5,03 minutos).

1H NMR (250 mHz, DMS0-d6, £ , ppm, parcial): 0,88 (t, 3H), 1,02-1,88 (m de sobreposição, ca. 16H), 2,66 (d, 3H, NCH^), 2,75-3,08 (m de sobreposição, ca. 6H), 3,48 (M), 3,97 (dd,1H)

4,2 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,17-7,48 (m, 6-7H),

8,18 (d, 1H), 8,47 (d, 1H), 9,05 (br, 1H). FAB-MS /triglice-

-26rol, m/e (intensidade relativa)/ 181(18, 201(20), 217(100), 219(11), 232(10), 260(47), 261(12), 289(20), 635(56, MH+), 636(20), 667(21), 743 (14, MH+ + tioglicerol).

EXEMPLO 9

Morfolinocarbonil-Phe-Nva-2,2-difluoro-C-Sta N-metilamida (X=0, R₁₌ n -C₃H_?, Y = CH IIII OH e r₂=cf₂conhch₃)

A. butiloxicarboni1-norva1ina-2,2-dif1uoro-C-Sta N-metilam i na

De acordo com o processo para a preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 143 mg de cloreto de 2,2-difluoro-C-Sta N-metilamida, 1,0 ml de dicloro metano, 86 ml de trietilamina, 103 mg de Boc-norva1ian, 109 mg de HBT e 98 mg de DCC originaram após isolamento e purificação 162 mg do produto em epigrafe, TLC Rf 0,68 no sistema A

B. norvalina-2,2-difIuoro-C-Sta N-metilamina produto do Exemplo 9A, 157 mg, foi dissolvido em ácido cloridrico-dioxano (1,5 ml). Após 30 minutos a mistura foi concentrada, o residuo co-evaporado com adição de éter e seco originando um pó incolor, 140 mg, TLC Rf 0,15 no sistema A.

-27C. morfolinocarbonil-Phe-Nva-2,2diluoro-C-5ta N-meti lamida

De acordo com o processo para a preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 130 mg do produto do Exemplo 9B, 0,5 ml de diclorometano, 59 ul de trie tilamina, 90,4 mg de morfolinocarboni1-Phe 75 mg de HBT e 67 mg de DCC originaram 168 mg da substância em epigrafe como um solido incolor.

TLC Rf 0,54 no Sistema A, HPLC tem po de retenção 2,48 minutos em 70/30 acetonitrilo-tampão. 1H NMR (DMS0-d6, 250 πίΗζ,£, ppm, parcial): 0,89 (t, 3H), 1,02-1,85 (m, ca. 16H), 2,67 (d, 3H, NHC₃), 2,73 (dd, 1H); 3,0 (dd, 1H), 3,21 (m, 4H), 3,48 (m, 4H), 3,97 (ddd, 1H), 4,23 (m, 2H), 4,34 (m, 1H), 6,0 (d, 1H), 6,67 (d, 1H), 7,13-7,35 (m, 5-6H), 7,4 (d, 1H), 8,05 (d, 1H), 8,45 (d, 1H). FAB_MS /tioglicerol, m/e (intensidade rel.)7 233(85), 234(16), 261 (100), 262(17), 265(89), 266(14), 364(38), 624(87, MH⁺), 625 (31 ).

EXEMPLO 10

Et i 1 (2 S, 5S )-2- i sobut i 1 - 3,3-d if 1 uoro-4-ceto-5-N- (N-^horf ol inocarboni 1-L-fenilalani lJ-L-norleuci1)-amino-6-ciclohexilhexano ato (X=0, R₁₌n-C₄H₉, Y=C=0 e R₂=CF₂CHC0₂C₂H₅) ch₂ch(ch₃)₂

-28Α. 1,1--difluoro-4-ciclohexi1-1-buten-3-ol

Preparamos 2,2-difenorovini11itio por adição gota a gota de sec-buti11itio em ciclohexano (88 ml) de 1,4M, 0,123 mol, 1,0 equiv.) durante 10 minutos a uma solução agitada de 1,1-difluoroetileno (15, 3 g; 0,230 mol;

1,9 equiv.) em THF (140 mL) e éter (20 mL). A mistura reage£ te foi mantida entre -100 e -93⁹C durante esta adição e foi subsequentemente agitada 10 minutos a -100⁹C. Juntamos gota a gota ciclohexilacetaldeido (15,6 g; 0,123 mol; 1,0 equiv.) durante 5 minutos (a temperatura da reacção subiu para -89⁹C), e a mistura reagente foi agitada 1 hora entre -110 e -93⁹C. Juntamos então NH₄C1 aquoso saturado (50 mL), e a mistura foi aquecida a 0⁹C e tratada com éter (500 mL) e ãgua salgada.

Após separação a camada orgânica foi lavada duas vezes com HC1 aquoso 1N, H₂0, NaHCO^ aquoso saturado, e seca sobre MgS0₄. A concentração a pressão reduzida originou um óleo amarelo o qual foi destilado (juntamos uma pequena porção de CaC0₃) a pressão reduzida (ca. 0,1 Torr) originou 6,7 g da substância em epígrafe como um liquido incolor (bp 65-70⁹C), juntamente com as fracções 25⁹C-65⁹C (5,2 g) e 70-80⁹C (5,2 g). A destilação separada destas fracções impuras separou contaminantes menos polares (TLC) e ponto de ebulição menor e maior, respe£ tivamente, originando amostras adicionais de produto (rendimento total, 12,7 g, 54%): TLC Rf 0,15 êter-hexanos; ^H-NMR (300 mHz, CDC1₃ ) ,^,0,97 (m, 2H), 1,07-1,93 (m de sobreposição, 15H), 4,12 (ddd, 1H, J=22, 10, ca 2Hz), 4,52 (m, 1H).

^Normant, J. F. ; Sauvetre, R. Tetrahedron Lett. 1981, 957-958.

-29Β. metil(E)-2-isobutil-3,3-difIuoro-6-ciclohexil-4-hexanoato

Um frasco de 500 mL de três tubuladuras foi colocado num banho de óleo e equipado com termómetro, rolha e linha de azoto. Na linha de azoto inserimos um T de vidro ligado através de um tubo de pequeno comprimento com um segundo frasco de 25 ml, arrefecido por gelo, o qual foi posicionado de modo a evitar voláteis (metanol) que destilam para a linha retornem ou regressem à mistura reagente.

frasco de três tubuladuras foi carregado com o produto do Exemplo 10A (84,0 g; 0,442 mol), trimetil 4-metilortovalerato¹ (156 g; 0,884 mol, 2,0 equiv.) e ácido piválico (2,25 g; 22 mmol ; 0,05 equiv.) e a mistura foi aquecida a 107^sC (inter na) durante 35 minutos. A reacção foi vigiada por 300 mHz H NMR para o desaparecimento do material de partida em partes aliquotas diluídas com CDClg. Após 3 horas de aquecimento nenhum material de partida foi assim observado e a mistura foi arrefecida, diluída com éter (1,5 L), e a solução resultante foi lavada com NaOH 1N aquosa (3 χ 60 mL), água salgada (100 mL) e seca sobre K2C03 anidro. A solução foi concentrada por destilação (coluna de Vigreux) primeiro à pressão atmosférica e a seguir a 3 Torr para originar ortoester (bp 39-50⁵C, 112 g) impuro não reagido. A destilação continuou a 0,25 Torr orj_ ginando o produto em duas fracções (bp a 130^QC, 26,1 g, impuro e 130-140-C, 82,5 g). A redestilação do primeiro originou mais 10,9 g de produto o qual se combinou com a fracção principal originando 93,4 g (70%) do produto como um liquido amarelo claro: TLC Rf 0,6 (1:4 éter-hexanos); ^H NMR (300 mHz, CDC13), £ , 0,85 e 0,87 (d, 3H cada, J=7Hz), ca. 0,90 (m, 2H), 1,0-1,8 (sobreposição de m, ca. 14H), 1,96 (m, 2H), 2,96 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 5,52 (m, 1H), 6,00 (m, 1H).

-30C. (E)-2-isobutil-3,3-difluoro-6-ciclohexiI-4-hexenal

Uma solução do produto do Exemplo 10B (32,5 g ; 0,107 mol) em hexano (100 mL) e tolueno (50 mL) num frasco de 4 tubuladuras equipado com funil de adição, agj_ tador de cabeça, termómetro e entrada de azoto foi arrefecida com agitação a -78^SC. Juntamos hidreto de diisobutilaluminio (260 mL de 1,0M em hexano, 2,4 equiv.) durante 45 minutos ( a temperatura da reacção foi mantida a baixo de -68⁵C), e a mi.s tura resultante foi agitada mais 15 minutos a -78⁹C. Juntamos gota a gota metanol absoluto (44 mL) durante 5 minutos e a mistura foi agitada 10 minutos a -78⁹C. Juntamos éter (800 mL), seguido por solução aquosa de sal Rochelle (373 mL, 50% em peso de tartarato tetrahidratado de Na-K o primeiro de vários mL adicionado lentamente) e a mistura foi aquecida a 25⁹C e agitada 20 minutos. Após dissipação da emulsão resultante a camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com éter (4 χ 200 mL). 0 conjunto das camadas orgânicas foi lavado com água salgada, seco sobre MgSO^ e concentrado originando 30,3 (103%)g de produto como um liquido amarelo pálido o qual não foi purificado, 0 produto aldeído assim preparado era essencialmente homogéneo por 1H NMR e TLC; este processo, no entanto, ocasionalmente originou o produto contendo 10-15% de uma substância mais polar espectralmente caracterizada como o álcool primário correspondente. Os lotes foram do mesmo modo transportados para a etapa seguinte (oxidação) sem purificação ou diminuição do rendimento subsequente. Para o prduto: TLC Rf 0,55 ( 1:20 éter-hexanos) ; NMR (300 mHz, CDC1₃), 0,89 (d, 3H, J=7Hz), 0,92 (d, 3H. J=7Hz), 1,0-1,4 (sobreposição de m, ca. 6H), 1,6-2,0 (sobreposição de m, ca. 8H), 2,02 (m, 2H), 2,83 (m, ÍH), 5,48 (dt, J=15Hz, 12Hz), 6,07 (m, 1H), 9,67 (t, 1H, J=ca. 3Hz).

D. Acido (E)-2-isobutil-3,3-difluoro-6-ciclohexil-4-hexenóico

A uma solução agitada a 10^QC do produto em bruto do Exemplo 10C obtido na etapa anterior (29,3; 0,103 mol, máximo) e éter (600 mL) num frasco de 2 L dê 3 tubuladuras equipado com agitador mecânico, funil de entrada, termómetro, e banho de gelo, juntamos gota a gota durante 30 minutos uma solução de ácido crómico (87 mL) de tal modo que a temperatura da reacção não excedeu 20⁹C. TLC indicou convejç são completa do material de partida numa substância mais polar. A mistura foi filtrada através de Celite a qual foi bem lavada com éter. Juntamos mais éter (2 L), uma pequena camada inferior decantou-se e a camada orgânica restante foi lavada com HCl aquoso (2 χ). A camada orgânica foi separada, lavada com éter (3 χ) e as camadas orgânicas foram secas (Na₂S0₄) e concentradas. 0 residuo castanho escuro foi cromatografado sobre 1 Kg de sílica cheio em 1:20 éter-hexanos, carregando e eluindo com 6 L deste solvente seguido por 6 L de 2:3 éter-hexanos originando 22,0 g (74% de éster metilico do Exemplo 10B) de produto como um óleo amarelo pálido. Preparações análogas de escala semelhante incluindo as que empregam material de partida em bruto contendo até 15% do álcool primário correspondente originando consistentemente o produto com 70-80% de rendimento. Para o produto: TLC Rf 0,3 (3:5 acetato de et£ lo-hexanos): 1H NMR (300 mHz, CDC1₃)^O,89 (d, 3H, J=7Hz),

0,91 (d, 3H, J = 7Hz), 1,05-1,5 (m, ca. 6H), 1,5-1,9 (m, ca.8H)_r, 1,98 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 5,61 (m, 1H), 6,08 (m, 1H), 10,95 (br, 1H).

Preparado como descrito em organic Syntheses, Wiley, New York, 1973; collect. Vol. V, p. 310.

-32Ε. (E)-2-isobutil-3,3-difluoro-6-cicIohexiI-4-hexenamida

Juntamos cloreto de oxalil (70 g; 0,55 mol; 9,3 equiv) durante 3 minutos a uma solução a 15⁹C do produto do Exemplo 10D (17,1 g; 59,3 mmol) e dimeti1formamida (50 pL, 0,6 mmol, 0,01 equiv) em tolueno seco (80 mL) e a mistura foi agitada a 25^SC durante 24 horas. TLC (3:5 acetato de eti lo-hexanos) da camada orgânica de uma parte aliquota de butilamina concentrada, tratada, dividida entre éter-HC1 1N revelaram uma pequena quantidade (ca. 5%) de material de partida que não reagiu. Juntamos 100 mL de dirnetilformamida e a mistura foi agitada mais 2 horas a 25⁹C (TLC como acima indicou mais conversão do material residual de partida em ácidos clorídrico. A mistura foi concentrada num óleo (usando uma bomba de vácuo e armadilha a -78^eC) o qual foi dissolvido em diclorometano seco (200 mL) e arrefecido com agitação a 0⁹C. Introduzimos amónia anidra durante 10 minutos, nesta solução. A temperatura da reacção subiu rápidamente (< 1 minuto) para 20⁹C e persistiu a 15⁵C durante a maior parte deste periodo. Quando a exotermia diminuiu paramos a introdução da amónia e a mistura foi concentrada. 0 residuo foi dissolvido em acetato de etilo, e a solução resultante foi lavada com H₂0 (3 χ), NaHCO^ aquoso saturado, seca (MgS0₄) e concentrada originando um sólido amarelo pálido (17,4 g). A recristalização a partir de 10 mL de haxanos quentes originou 13,1 g (77%) de produto como um sólido incolor, mp 72-74,5^SC. Os licores-mãe foram concentrados e cromatografados sobre sílica em 1:6 e a seguir 1:4 de acetato de etilo-hexanos originando mais

3,1 g (18%, rendimento total 95%) de produto. Para o produto: TLC Rf 0,35 (3:5 acetato de eti1o-hexanos): NMR (CDCl^,

300 mHz)£ 0,93 e 0,95 (d, 3H cada, J=7Hz), 1,16 (m, 4H), 1,34 (m, 2H), 1,67 (m, 8H), 2,03 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 5,58 (m,

1H), 5,65 e 5,73 (br, 1H), 6,1 (m, 1H).

F. éster etílico de ácido (E)-2-isobuti1-3,3-dif1uoro-6-ciclohexil-4-hexemimidico

Uma solução de trietiloxómio tetr£ fluoro borato preparada de fresco (14 g, 74 mmol, 1,4 equiv) em clorometano seco (40 mL) foi adicionada de uma só vez a uma solução de amida a 25⁹C do Exemplo 10E (15,2 g, 52,8 mmol) em diclorometano seco (40 mL) e a solução resultante foi agitada 24 horas a 25^SC. A mistura reagente foi diluída com éter (600 mL) e esta solução foi lavada com NaHC03 saturado aquoso (3 χ 100 mL), água salgada e seca sobre NaSO^. 16,8 g de um óleo cor de laranja obtido após remoção do solvente foram cro matografados sobre 200 g de silica eluindo com 1:10 (2L), seguido por 1:1 acetato de etilo-hexanos. A concentração das fracções apropriadas originou o produto como um líquido amarelo claro (15,8 g; 95%): TLC Rf 0,55 (3:5 acetato de etilohexanos); ¹H NMR (300 mHz, CDC13)£O,86 e 0,89 (d, 3H cada, J=7Hz), 1,0-1,7 (m, ca; 14H), 1,30 (t, 3H, H=7Hz), 1,95 (m, 1H), 2,76 (m, 1H), 4,13 (dq, 2H, J=7Hz, ca 2Hz), 5,51 (m, 1H), 6,05 (m, 1H).

G. (±)-(3R*. 5R*, 6R*)-6-cic1ohexilmeti1-4,4-difluoro-2-etoxi-5-iodo-3,4,5,6-tetrahidropiridina

Juntamos sequencialmente bicarbonato de sódio (12,0 g; 143 mmol; 6 equiv) e iodo (12,3 g;

48,5 mmol; 2,0 equiv) a 25²C a um frasco de fundo redondo de 125 mL contendo uma solução de produto iminoester do Exemplo ^{3 3} Organic Syntheses; Wiley, New York, 1973;

collect. vol. V., p. 1080.

-3410F (7,56 g; 24,0 mmol) em acetonitrilo (30 mL) e THF (30 mL). 0 frasco foi parcialmente imersa num banho de um limpador metrasómico (Bransonic 221) e a mistura foi sonicada durante 24 horas (esta operação originou uma temperatura de reacção de 43^SC). A mistura reagente foi diluida com acetato de etilo (400 mL) e a solução resultante foi lavada com 10% Na₂S₂0₃ aquoso (2 χ 50 mL), NaHCO^ aquoso saturado (50 mL), ãgua salgada e secos sobre Na₂S0₄. A solução foi concentrada e o residuo cromatográfado sobre sílica (65 g) cheia e carregada em 1:4:200 êter-trieti1amina-hexanos. As fracções contendo o pro duto juntaram-se (juntamos 2 mL adicionais de trietilamina) e concentraram-se originando um óleo o qual cristalizou como um sólido ceroso amarelo de baixo ponto de fusão após secagem (7,39 g; 70%). A estrutura e estereoquimica do produto foram definidos por análise de vários X de cristal único num cristal que cresceu por evaporação lenta deste material a partir do hexano. A eluição adicional da coluna com 1:9 éter-hexanos originou material de partida que não reagiu (ca. 800 mg, 10%). Para o produto: TLC Rf 0,45 (5% de éter-hexanos); 0,68 (1:3 acetato de etilo-hexanos); ¹H NMR (300 mHz, CDCl^) ca. 10:1 mistura de sois compostos, principal/0,91 (d, 6H, J=7Hz),

1,21 (t, 3H, J=7Hz), 1,05-1,45 (sobreposição de m, ca. 4H),

1,5-1,75 (sobreposição de m, ca. 8H), 1,84 (m, 2H), 2,85 (m, IH), 3,75-3,90 (m de sobreposição, 2H), 4,02 (dq aparente,

2H, J=7Hz, ca. 3Hz),£ menor 0,88 (d, J=7Hz); ¹⁹F (mHz, CDC1₃, 282 mHz, ppm a jusante de CFCl₃)(ca. 10% de um segundo cornpo^ to presente) £ principa1 79,6 (ddd, 1F, J = 16, 26, 235Hz), 83,5 (d, 1F, J=235Hz) menor 64,7 (ddd, 1F, J=235, 23, 29Hz), 98,6 (dd, 1F, J=235, 10Hz).

H. (í)-etil(2R*, 4R*, 5R*)-2-isobuti1-3,3-dif1uoro-4-iodo-5-amiηο-6-ciclohexi1hexanoato

Juntamos HC1 1N (50 mL; 2,2 equiv) a 0^?C a uma solução de iminoétercic1ico do Exemplo 10G (10,1g;

-35- 22,9 mmol) em THF. A mistura foi agitada a 0^aC durante 6,5 horas e deixada em repouso não agitada a -20⁹C durante 15 horas. 0 sólido foi filtrado e lavado com 2:1 éter-THF (3χ) e éter (4χ) e seco originando o produto em bruto (6,63 g; 59%) como um sólido ambar. Para o produto (lote cristalino): H NMR (CDC13, 300 mHz)^0,94 (m, ca. 1H), 0,90 (d, 3H, J=7Hz), 0,92 (d, 3H, J=7Hz), 1,27 (t, 3H, J=7Hz), 1,05-1,42 (m, ca. 6H), 1,42-1,80 (m, ca. 8H), 1,91 (m, 2H), 3,38 (m, 2H), 4,21 (q, 2H, J=7Hz), 5,16 (br d, 1H, J=22Hz), 8,71 (br, 3H); ¹⁹F NMR (CDC13, 282,2 mHz, ppm a jusante de CFC1₃)72,2 (dd, 1F, J=247, 20Hz), 84,3 (dd, 1F, J = 247, 22Hz).

I. (-)-eti1(2R*, 4R*, 5R*)-2-isobutil-3,3-difluoro-4-iodo-5-benziloxicarbonilamino-6-ciclohexilhexanoato

Juntamos cloreto de benziloxicarbonil (8,1 g; 5 equiv.) de uma só vez a uma mistura bem agitada do produto do Exemplo 10H (lote cristalino, 4,76 g, 9,60 mmol) em THF (95 mL) e NaHC0₃ saturado aquoso (95 mL) a 0^sC. Após 15 minutos a mistura foi parcialmente concentrada e extraída com éter. As camadas orgânicas foram lavadas com NaHC03 aquoso saturado, âgua salgada secas (MgSO^) e concentradas originando um liquido límpido o qual foi cromatografado sobre silica (320 g) cheio e carregado em 3% (v/v) de éter-hexanos. A eluj_ ção com 3% (2L), 5% (2L) e 10% (2L) de éter-hexanos originou o produto (4,97 g; 87%) como um óleo incolor. Para o produto: TLC Rf 0,42 (1:4 acetato de eti1-hexanos): ¹H NMR (CDC13, 300 mHz)£0,91 (d, 3H, J=7Hz), 0,93 (d, 3H, J=7Hz), 1,05-1,46 (sobreposição de m, ca. 14H), 1,27 (t, 3H, J=7Hz), 3,24 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 4,23 (q, 2H, J=7Hz), 4,6-4,75 (sobreposição de m, 2H total), 5,04 (d, 1H, J=13Hz), 5,12 (d, 1H, J=13 Hz), 7,33 (m, 5H); ^yF NMR (CDClj, 282,2 mHz, ppm a jusante de CFC1₃)^76,7 (ddd, 1F, J=246, 16, ca. 16Hz), 85,0 (ddd, J= 246, 16, ca. 16Hz); uma quantidade menor (ca 10%) de outra

Q (possivelmente isomérica )substânc'ia estava presente F£73,1 (d de m, 1F, ca. 250Hz), 83,4 (d de m, 1F, ca. 250Hz).

-36J. (í)-etil (2R*, 4S*, 5R*)-2-isobuti1-3,3-difluoro-4-h i droxi-5-benz iloxicarbonilamino-6-6-ciclohexilhexanoato

Uma solução de ácido trifluoroperacético (3,3 equiv.) foi preparada por adição gota a gota de anidrido trifluoroacético (5,6 g; 26,8 mmol) a peróxido de hidrogénio a 70% (750 mg; 22,1 mmol) em diclorometano a 0⁹C. Esta solução foi adicionada durante 3 minutos a 0⁹C a uma mi/ tura agitada de iodoester produto do Exemplo 101 (3,97 g;

6,69 mmol) e Na₂HP0₄ (9,5 g; 10 equiv) em 35 mL de diclorometano. TLC (1:3 acetato de eti1-hexanos) apresentam 40% de co/ versão do material de partida no rpoduto mais polar. A mistura reagente foi tratada mais duas vezes a 0⁹C com porções ad/ cionais de ácido trifluoroferacítico (3,3 equiv. cada, como acima) resultando no consumo completo do material de partida. Juntamos diclorometano (100 mL) e água (50 mL) e a mistura foi aquecida a 25⁹C. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (5 χ 30 mL). 0 conjunto das camadas orgânicas foi lavado com NAHCOg aquoso saturado, 10% de Na2S203 aquoso, água salgada, seco (MgS04) e concentr/ do originando 3,2 g de óleo amarelo o qual foi cromatografado sobre sílica (300 g) cheia e carregada em 7% (v/v) de êster-hexanos. A eluição com 10% (3L), 25% (3L) e 30% (3L) de éster-hexanos originou o produto como um sólido ceroso (2,37g; 73%). Para o produto: TLC Rf 0,25 (1:3 acetato de etilo-hexanos); ¹H NMR (CDC13, 300 mHz)£0,88 (d, 3H, J=7Hz), 0,91 (d, 3H, J=7Hz), 1,05-1,4 (sobreposição de m, ca. 6H), 1,24 (t,

3H, J=7Hz), 1,4-1,8 (sobreposição de m, ca. 8H), 1,82 (m, 2H),

3,18 (m, 1H), 3,72 (d de m, 1H, J=18Hz), 3,94 (br, 1H), 4,08 · (m, 1H), 4,15 (q, 2H, J=7Hz), 5,0-5,2 (m, 3H), 7,29 (m, 5H); ¹⁹F NMR (CDClg, 282,2 mHz, ppm a jusante de CFClg)£63,5 (dd, 1F, J=260Hz, 18Hz), 67,1 (dd, 1F, J=260Hz, 20-27Hz).

K. cloreto de (-)-etil (2R*, 4S*, 5R*)-2-isobuti1-3,3-dif1uo ro-4-hidroxi-5-amino-6-ciclohexilhexanoato

Uma mistura do produto do Exemplo

10J (1,36 g, 2,81 mmol) e 10% Pd(0H)₂/C (Aldrich, 1 g) em 10:

metanol: ácido acético (25 mL) foi agitada sob uma pressão de hidrogénio de 50 p.s.i. durante 1 hora, filtrada através de Celite, e concentrada originando um óleo amarelo claro o qual foi coevaporado com HC1 4N anidro-dioxano (3x5 mL) e seco originando o produto como uma espuma amarela (996 mg;

91%) oqual foi usado sem purificação na etapa seguinte. Para o produto: TLC Rf 0,3 (18:2:1 v/v/v CHC1₃: EtOH: HOAc); ¹H NMR (DMS0_d6, 300 mHz, pareia 1)£ 0,87 (d, 3H, J=7Hz), 0,89 (d, 3H, J=7Hz), 3,19 (m, 1H), 3,85 (d de m, 1H, J=20Hz), 4,12 (m, 2H), 6,94 (br, 1H), 7,84 (br, 3H).

L. etil (2R*S*, 4S*R*, 5R*S*)-2-isobuti1-3,3dif1uoro-4-hidroxi-5-N-( N - /morfol inocarbon il-L-fenilalanilJnorlencil) -amino-6-ciclohexilhexanoato

Cloreto de amina do Exemplo 10K (78 mg; 0,202 mmol) foi agitado em dimetoxietano (1,0. mL) a 0⁸C e tratado sequencialmente com trietilamina (28 mL; 0,202 mmol; 1,0 equiv) e morfolino-1-carboni1-L-Phe-Nlc-OSu (99 mg; 0,202 mmol; 1,0 equiv). A mistura foi deixada a aquecer a 20^sC durante 18 horas, diluida com acetato de etilo, e a so lução resultante lavada com HC1 1N (2χ), NaHC0₃ aquoso satura do (2χ), água salgada, seca (MgSO^) e concentrada originando uma espuma incolor a qual foi cromatografada sobre silica (13 g) cheia e carregada em 3:2 acetato de eti1-hexanos. A co. luna foi eluida com 3:2 acetato de etil-hexanos (600 mL) originando o produto, num sólido incolor (80 mg, 55%), como uma mistura 1:1 de isómeros. Para o produto TLC Rf 0,45 (acetato

-38de etilo); 1H NMR (CDClg), 300 mHZ, parcial, 1H = área de um protão de ressonância num dos isómeros) 0,88 (d, isobutil CHg de ambos os isómeros), 0,86 (t, norleucil CH^), 1,23 e 1,25 (triplos, OCHgCHg de cada isómero), 2,93-3,08 (m, 2H), 3,08-3,32 (m, ca, 8H), 3,58 (m, 4H), 3,70 (d de m, 2H, J = ca. 20Hz), 4,04-4,24 (m, ca. 8H), 4,26-4,44 (m, ca. 8H), 4,62 (d, 1H, J=9Hz), 4,89 (d, 1H, J=5Hz), 4,93 (d, 1H, J=5Hz),

5,07 (d, 1H, J=8Hz), 6,44 (sobreposição de m, 2H), 6,80 (d, 1H, J=9Hz), 6,98 (d, 1H, J=9Hz), 7,10-7,35 (m, 10H); ¹⁹FNMR (CDClj, 282, 2mHz , ppm a jusante de C F C1 ^) <>' 61 , 3 (A de AB , ddd, 1F, J=253, 20, 10Hz), 63,5 (A de AB, ddd, 1F, J = 253, 16, 16Hz), 64,8 (B de AB, dd, 1F, J = 253, 17Hz), 66,3 (B de

AB, 1F, ddd, J = 254, 11, 19Hz).

M. etil (2S,5S)-2-isobuti1-3,3-dif1uoro-4-ceto-5-N-(N-/mo£ foi inocarboni l-L-fenilalanil_7-L-norleucil)-amino-6-ciclohexilhexanoato

Cloreto de 1 - (3-dimetilaminopro pi 1 )-3-etilcarbodiimida (DEC, 68 mg, 0,355 mmol, 6 aquiv) e ácido dicloroacético (3 uL; 0,036 mmol; 0,6 equiv) foram sequencia lmente adicionados a uma solução do produto do Exem pio 10L (43 mg; 0,0595 mmol) em 120 uL de dimetilsulfóxido e 120 uL de tolueno a 25⁹C. Após 20 minutos juntamos mais 3 uL de ácido dicloroacético, seguidos 15 minutos mais tarde por adição de 45 mg de DEC. Após mais 30 minutos juntamos uma solução de ácido oxálico (32 mg) em metanol (300 uL), e a mis; tura foi agitada 5 minutos e diluida com acetato de etilo. Es^ ta solução foi lavada com HCI 1N (2 χ 5 mL), NaHCO^ saturado aquoso (2x5 mL), seca (MgSO^) e concentrada. 0 residuo foi cromatografado sobre silica (5 g) cheio, carregado e eluido com 80:20 acetonitrilo-água a 6,3 mL/min, 254 nM detecçâo. Injectamos aproximadamente 5 mg da mistura de uma vez em 200 mL de fase móvel. A concentração das duas fracções originou o produto isómero menos retido ( 9 mg), e o isómero 2R, 5R

-39mais retido (5 mg) o qual foi distinguido com base na potência inibidora da renina (o produto 2S.5S era o mais activo) Para o produto: HPLC Tret 5,08 min. (Zorbax C-8 4,6 χ 250 mm,

1,5 mL/min 80/20 acetonitrilo-água); ¹H NMR (CDCl^, 300 mHz) ^0,87 (t, 3H, J = 7Hz), 0,90 (d, 3H, J = 7Hz), 0,92 (d, 3H,

J = 7Hz), 1,45-1,95 (m, ca 12H), 3,08-3,15 (m, 2H), 3,28 (sobreposição de m, 5H), 3,61 (m, 4H), 4,16 (q, 2H, J=7Hz), 4,34 (q, 1H), 4,55 (q, 1H), 5,08 (m, 1H), 6,54 (d, 1H), 6,68 (nr, 1H), 7,16-7,37 (m, 5-7H) 19F NMR (CDC1₃, 282,2 MHz, ppm ajusanet de CFCl₃)<i 67,1 (A de AB, ed, 1F, J=285. 16Hz),

69,4 (B de AB, dd, 1F, J=285,16Hz6. Para o produto 2R, 5R : RP-HPLC, como acima, T_fe^ = 5,46 min, 1H NMR (CDCl^), 300 mHz) 00,87 (t, 3H), 0,88 (d, 3H), 0,90 (d, 3H), 1,23-2,0 (m, ca 14H), 3,01 (dd,1H), 3,15-3,35 (m, 6H)), 3,62 (m, 4H), 4,15 (q, 2H), 4,35-4,52 (m, 2H), 4,89 (br, 1H), 5,08 (m,1H), 7,00 (d, 1H), 7,18-7,38 (m, 5-6H); ¹⁹F (CDC1_3> 282,2 mHz, ppm aju sante de CFC1₃) 66,5 (A de AB, dd, 1F, J=280, 16Hz), 70,0 (B de AB, dd, 1F, J=280, 16Hz).

PREPARAÇAO 1

Morfoli nocarbon i1PheNIe

A. Ester norleucina benzilico

De acordo com o processo geral apresentado em jj- Med. Chem. 1986, Vol, 30, p. 3575, 15,0 g de norleucina (Nle) foram misturadas com 200 ml de álcool ben' zilico e arrefecidos a 0^eC. Juntamos cloreto de tionilo (25ml) gota a gota durante 15 minutos e a mistura foi lentamente aque cida a 90^eC., ocorrendo uma libertação feroz de S0₂ a cerca

-40de 50⁹C. Após 2 horas a 90⁹C a mistura foi arrefecida a 0^sC e juntamos mais 25 ml de cloreto de tionilo. A mistura foi a seguir aquecida de novo a 90⁹C, durante 2 horas, arrefecida, diluída com 1,6 litros de éter e armazenada durante a noite a 0⁹C. Os cristais que se formaram foram filtrados, lavados com éter e secos para obtermos 23,1 g de um sólido húmido o qual foi recristalizado a partir de 1:10 etanol-êter, usando 23 ml de etanol. 0 sólido filtrado e seco pesou 17,1 g, TLC Rf 0,25 no sistema C (o prato manchado foi exposto a vapor de amónia ou amoníaco e seco antes da eluição).

B. ester benzílico de ácido (S)-2-isocianato-3-fenilpropión i co

De acordo com o processo de Lombar dino et al. (J. Med. Chem. 1964, _7, 97) 18,0 g de cloreto de cloreto de éster benzilico de L-feni1-alanina em 150 ml de tolueno foi agitado a refluxo sob uma atmosfera de fosgénio durante 1,5H, arrefecido e concentrado para obtermos um sólido o qual foi recristalizado a

16,1 g de agulhas incolores.

Anal. Calcd. para C^H^NO^: Observada:

MP 68-72⁹C. /a 1fa/p³-80,4⁹ (C = 1750 cm^-1.

partir de 120 ml para obtermos . C, 72,59; H, 5,37; N, 4,98 C, 72,32; H, 5,35; N, 4,92.

,02, CHC1₃). IR (CHC1₃) 2250,

C. Ester morfolinocarboni1Phe benzilico produto da Preparação 1B foi dis solvido em 5 ml de diciorometano, tratado a 25⁹C. com 930 ul de morfolina e após 30 minutos a mistura foi concentrada num sólido ceroso o qual foi recristalizado a partir de 4:1 hexa-41no-acetato de etilo originando 1,92 g de substância em epígrafe, mp 87-89^sC. MS (ionização química, isobutano) 369 (MH⁺, pico base).

D. MorfolinocarbonilPhe produto da Preparação 1C (1,85 g) foi dissolvido em 30 ml de metanol absoluto e 5 ml de áci do acético e agitado com 0,5 g de 10% Pd/C durante 1 hora sob uma atmosfera de 53 psi de hidrogénio. A suspensão foi filtrada, concentrada, co-evaporada três vezes com adição de tolueno e seca para obtermos 1,43 g de uma espuma incolor.

E. Ester morfolinocarboni1PheNle benzílico

Seguindo o processo para preparação e purificação do produto do Exemplo 1, 2,12 g do produto da Preparação 1A e 2,53 g do produto da Preparação 1C originaram 3,30 g da substância em epígrafe como uma espuma incolor, TLC Rf 0,5 em acetato de etilo sobre silica, HPLC tempo de retenção 3,27 minutos 97% de aborção total para 25 minu tos em 70/30 MeCN-pH 2,1 fosfato 0,1M.

F. Morfo 1i nocarbon ilPheNle produto da Preparação 1D (3,3g) foi agitado em 35 ml de metanol e 7 ml de ãcido acético com 1,0 g de 10% Pd/C durante 45 minutos, filtrado através de celite, concentrado, co-evaporado vãrias vezes com tolueno e

-42éter e seco para obtermos 2,9 g de um sólido incolor, TLC Rf 0,2 no sistema C.

Claims (2)

1^a. - Processo para a preparação de um composto de fOrmula onde X é o ou NH; R₁ é alquilo de um a seis átomos de carbono, imidazol-4-ilmetilo ou metiltiometilo; Y é CH llllOH ou C = 0; e R₂ é CF₂C0NHCH₃, CF₃ ou CF₂ÇHC0₂C₂H₅

Sh₂ch(ch₃)₂ caracterizado pelo facto de se formar uma ligação amida C(O)N, por acoplamento com desidratação em que os grupos funcionais não envolvidos na reacção podem ser bloqueados, seguido pelos passos opcionais de 1) oxidação de Y quando este ê CHIIIIOH ou CH OH, para obter C=0; 2) remoção selectiva dos grupos bloqueadores e, se o desejarmos se preparar um sal farmaceuticamente aceitável do produto.

2^a. - Processo de acordo com a rej_ vindicação 1, caracterizado pelo facto de a ligação amida ser formada entre os fragmentos.

vindicação 1 plamento ser -imida.

- Processo de acordo com a rej_ caracterizado pelo facto de o reagente de aco1-hidroxibenzotriazole e diciclo-hexilcarbodi4-. - Processo de acordo com a rej_ vindicação 1, caracterizado pelo facto de a oxidação de CHIIIIOH ou CH OH em C=0 ser efectuada com cloreto de oxalilo e dimet i 1 su1f6x ido.