PT92177B - Processo para a preparacao de um precursor de insulina em estreptomicetes - Google Patents

Processo para a preparacao de um precursor de insulina em estreptomicetes Download PDF

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Description

Ja foi descrito um processo para a preparação de proteínas de fusão caracterizado por se acoplar o gene estru tural para a proteína pretendida na extremidade C-terminal do gene de tendamistato eventualmente modificado, provocar a expreg são deste gene estrutural numa célula hospedeira de um estrepto micete e isolar a partir do sobrenadante de cultura a proteina de fusão segregada (DE 57 14 866 Al ou EP 0 289 936 A2). 0 pedido de patente anterior refere-se para além disse a estruturas genicas que compreendem o gene de tendamistato eventualmente modificado, em cuja extremidade C-terminal se encontra acoplado um gene estrutural para uma outra proteína, a vectores que contém esta estrutura genica, a células de estreptomicetes que contém estes vectores bem como a proteínas de fusão que sao caracterizadas por uma fracçao situada na extremidade N-terminal
ΘΑΟ ORIGINAL .J
de tendamistato eventualmente modificado. 0 pedido de patente anterior contém exemplos de proteínas de fusão nas quais a sequência de ácidos amimados do tendamistato se encontra acoplada através de um elo em ponte à pró-insulina ae macaco.
Atingiu-se agora um desenvolvimento daquela invenção através do qual é possível preparar prcteinas de fusão de modo especialmente vantajoso fazendo seguir à fracção de ten damistato uma pro-insulina encurtada cuja cadeia C é constituída somente por um ou dois residuos ds lisina. Estes precursores podem ser transformados em insulina humana de modo muito simples e económico.
Formas de concretização preferenciais da presente invenção referem-se especialmente a estruturas genicas para a amplificação e para a expressão do gene que codifica para a proteína de fusão. As formas de concretização preferidas da presente invenção são elucidadas em seguida, sendo ainda definidas na reivindicação da patente.
Na base das estruturas genicas utilizadas de acordo com a presente invenção está de modo vantajoso um gene sintético que codifica para um derivado encurtado da pré-insulina. fe modo especialmente adequado toma-se em consideração na construção deste gene a utilização de codoes especifica dos estreptomicetes. Verificou-se que deste modo é possível aumentar o rendimento das proteínas de fusão.
Para alem disso, resulta vantajosa a integração duma sequência de terminação na estrutura genica sintética, conseguindo-se em consequência também um incremento da velocidade de sintese.
Uma grande vantagem do processo da presente invenção consiste em que as proteínas de fusão podem ser detestadas Com a ajuda dos ensaios em placa que foram descritos em ΞΡ-Al 0 161 629 no Exemplo 3 bem comc na publicação de pedido i **
BAD ORIGINAL |
o... -J
ds tatente Alema 3 5>6 182, nxetnplo 2. Deste medo, e possível elucidar convenientemente não só a selecção dos clones de interesse coso tamtem c procedimento final, uma vez rue é possível revelar facilmente a influencia dos diferentes parâmetros cobre o rendimento.
As proteínas de a presente invenção apresentam-se çao çue corresponde a da insulina fusão obtidas de acordo com manifestamente numa conformamadura ou pelo menos próxima desta. Deste modo nao apenas se elucida consideravelmente- o pro cedimento adicional para obtenção da insulina como ainda se verifica surpreendentemente, para períodos dc fermentação que per mitem já um bom rendimento, nao ocorrer qualquer ataque notável pelas proteasses segregadas para o meio de fermentação.
As modificações na molécula da pró-insulina de acordo com a presente invenção com a respectiva cadeia C encurtada proporcionam um procedimento simples para obtenção da insulina humana, nomeadamente por cisão quimica com hidroxilamina e/ou por cisão enzimatica com o auxílio de tripsina ou, de m.odo vantajoso, de endopreteinases de lisilo. A cisão ensimática é preferida. As endoproteinases de lisilo cindem de modo especifico as frações carboxiterminais após o ácido aminado lisina. Através duma ordenação conveniente das cadeias A e 3 nas proteínas de fusão obtém-se por acção das referidas enzimas um precursor da insulina em que as pontes de dissulfureto se encontram surpreendentemente situadas correctamente.
De modo conveniente prevê-se na construção génica entre a fracção de tendamistato e o início da molécula de pró-insulina um elo em pente que permite a separação do derivado de pró-insulina da fracção de tendamistato ccm a mesma enzima que é utilizada para a separação do derivado da pró-insulina nas duas cadeias de insulina.
Se se cindem as proteínas de fusão da presente invenção com uma endopeptidase de lisilo, obtém-se - de
BAD ORIGINAL
** 'ζ Ο acordo com a construção da cadeia C modificada - des-S-' -insulina, a qual pode ser transformada em insulina humana por trans ~ ^1 31 3?
peptidizaçao, ou B^ -Lys-insulina ou 3 -Lys-3 -Lys-insulina, as quais podem ser transf orrnadas em insulina humana por exemplo pela acçao de carboxipeptidase B.
Obtêm-se rendimentos especialmente elevados na proteína pretendida quando se utilizam construções pênicas com um gene de tendamistato encurtado. Esta forma de concretização do processo da presente invenção possui uma grande vantagem, pois a fracção da insulina modificada na proteína de fusão corresponde aproximadamente a metade, contendo neste caso consi, deravelmente menos ''balastro1', â dobragem correcta da proteína de fusão não é prejudicada pelo encurtamento da fracção de tendamistato, de modo que é possível o procedimento vantajoso com a proteína de fusão menor de acordo com a presente invenção. Es ta vantagem nao deve também ser compensada por uma velocidade de decomposição aumentada por meio das proteases próprias do hospedeiro - inesperadamente verifica-se na verdade uma estabilidade aumentada perante estas proteases.
A presente invenção refere-se por conseguinte a uma ampla série de construções genicas vantajosas cue dao origem a precursores de insulina que podem ser facilmente separados das suas fracções de balastro das proteínas de fusão. Por meio deste procedimento simples é possivel adicionalmente melhorar o rendimento em insulina humana.
A separaçao da proteina de fusão a partir do meio de cultura, ó tratamento a fim de se obterem os precursores de insulina e a respectiva transformação em insulina humana podem ser efectuados usando técnicas conhecidas em si. Deste modo é possível isolar a proteina de fusão de modo vantajoso por cromatografia de adsorção ou de permuta iónica e/ou por fil tração em gel e separar a fracção de pró-insulina por via química ou de preferência por via enzimática. A construção dos
BAD ORIGINAL
eles em ponte correspondentes e conhecida em geral, encontran-
do-se descrita ror exemolo em SP-A2 0 12
I-S f» (-X
-J 5'9c.
A partir de EP-B 0 089 007 sao conhecidos ctna_!_ogos de pre-pro-msulina e ae pro-insulma que possuem na extremidade O da pre-cadeia (ca na extremidade N da pró-insulina) Lys ou arg (o que igualmente se considera preferido nas construções da presente invenção), cuja cadeia B termina cor?, c
L^-Lys e em que o peptideo 0 pode ser encurtado ei? Lys cu em Arg, de tal medo que também na estrutura da pró-insulina a 3^-Lys se segue, no caso mais simples, apenas Lys ou Arg, terminando deste modo a cadeia A. Estes compostos servem de precursores para a preparaçao de insulinas com o auxílio de tripsina ou de endopeptidases semelhantes à tripsina e de um éster de um ácido aminado natural, o qual eventual mente possui grupos protectores.
Sao conhecidos a partir de EP-A 0 195 691 precursores de insulina em que as cadeias 3 e A se encontram ligadas por meio dc elo em ponte -X-Y-, em que X e Y são iguais cu diferentes e representam Lys ou Arg. Estes precursores da in solina são expressos em leveduras e podem ser transformados em insulina humana por tratamento enzimático. Sao conhecidos a par tir de EP-A 0 165 529 p-ecursores de insulina com a cadeia C encurtada. Em EP-3 0 152 ?69 e 0 152 770 são descritos derivados da insulina bem como composições farmacêuticas que os contêm.
Nos exemplos que se seguem a presente in venção e elucidada mais em pormenor. Os dados em percentagem referem-se a peso sempre que nada em contrário seja indicado.
EXEMPLO 1
Sintetiza-se o gene sintético (i) reproduzido no Quadro 1 de um modo conhecido em si por meio do método da fosfoamidite. Para a selecção dos oodoes foi tida em
BAD ORIGINAL conta a preferência dos estreptomicetes para G e 0. Como no gene qu.e codifica para a pro-insulina de macaco do pedido de patente anterior (ver Quadro 2) o gene (l) de acordo com o Quadre 1 também apresenta uma sequência saliente na extremidade 5*típica para a enzima de restrição EcoRI. A seguir ao gene estrutural enccntram-se dois codoes de paragem e uma sequência adaptadora com o local de reconhecimento para a enzima Sall. Na extremidade 3 encontra-se a sequência saliente correspondente à enzima HindIII.
Corta-se o plasmideo comercial pUCig com as enzimas DcolI e HindIII e promove-se a ligação do gene sintético (i) de acordo com o Quadro 1. Obtém-se deste modo o piasraídeo ρ II (2). Após amplificação corta-se o gsno sintético com as enzimas EcoRI e Sall sob a forma do fragmento (3) que é utilizado na construção subsequente descrita seguidamente.
Digere-se coapletamente o plasmideo pUCig com Smal e liga-se com a sequencia de terminação reproduzida no Qua dro 2. Deu-se a denominação de pTl (5) aos plasmídeos que possuem esta sequência na orientação correcta. Abre-se este plasmí deo (3) com EcoRI e preenche-se 0 locai de corte com polímerase de ADN (fragmento de Klenow). Ror nova ligação obtêm-se o plasmídeo pT2 (6). Este plasmideo é aberto com as enzimas Sall e Sphl e isola-se 0 fragmento maior.
Corta-se 0 plasmideo pKK400 (8) (ver pedido de patente anterior, Eigura 4, (20)) com Sphl e EcoRI e isola-se o fragmento menor (9) com o gene de tendamistato.
Por ligação dos fragmentos (3), (7) e (9) obtem-se o plasmideo pKK5Q0 (10), no qual à sequência de tendamistato se segue 0 elo em ponte que codifica para 12 ácidos aminados.
ÇaD
Phe Asn Ala Net r-ls. Thr Gly A SM Ser Asn Gly Lys
TTC AAT GGG ATG -t kJX-/ .*1 r*. in 0 0 GGG A nrp r.ii TGG AAG f» AÁG
AAG TTA GC-C TAC π r’ x Lrkj- i-z ^z ·—I ' 1 λΛ AGC TTG r< τ jr rmrnn ilu
icoRI e em seguida o gene para a prc-insulina modificada da presente invenção. A ordenação correcta é verificada por corte com Sphl e SstI, obtendo-se deste modo a partir do plasmídeo de 3,5 kb de dimensão um fragmento de S33 pb. Por sequenciação de ADN segundo o mébodo ds di-desoxi confirma-se a correcção da sequência.
As construções genéticas de acordo com a pre sente invenção nas quais a Lys do peptídeo de fusão é completada por uma outra Lys sao preparadas de modo análogo. Para este fim duplica-se o tripleto que codifica para a lys, AAC-. Obtem-se de modo análogo o plasmídeo p 12 e a partir deste e vector ρΧΙίβΟΟ.
nXEMPLO 2
De modo análogo ao descrito no pedido de patente anterior para o vector pC-P 1, obtêm-se a partir dos vectores pKK500 e pKKGOO os plasmídeos de expressão pGT2 e pG?3· Para este fim isolam-se a partir dos vectores pKKpOO e pKKGGO por dupla digestão com Sphl e SstI as inserções de 823 pb e de Õ26 pb respectivamente e ligam-se estes fragmentos de ADN no plasmídeo de expressão pIJ7D2 cortado com as mesmas enzimas. Transforma-se 3. lividans Tk 24 com a mistura de ligação e is_o la-se 0 ADN plasmidico dos transformantes resistentes à tioestreptona que apresentam actividade de tendamistato (ensaio em placa). Todos os clones positivos contém a inserção utilizada proveniente de pHKqCG ou de pKKSOO, respectivamente.
A expressão da proteína de fusão codificada pode ser efectuada de medo conhecido. Incubam-se ' os transformantes de estirpe S.
BAD ORIGINALJ lividans TX 24 durante auatro dias a 2820 ea balões cónicos e
setara-se o rarcelio co ca±ao oe cu +· ira coj :io de centrifugação, sendo então possível detectar a proteína de fusão na solução limpida coso se segue:
rl;
μΊ.
IC a 100 ^il da solução coo 20 a 200 ácido tricloroacético a 13 7 e concentra-se o. proteína precipitada por centrifugação, lava-se e retoma-se era tampão de •S, amostra contendo SDS (U. Laemmli, Nature 227 (1970) 680-635). Após 2 minutos de incubaçao a 9090 secaram-se os constituintes por electroforese era gel de poliacrilamida contendo 10 a 17 /> de SDS. Obtém-se uma proteina de peso molecular de 15 DD, portanto na ordem de grandeza esperada de peso molecular para a proteina de fusão de tendamistato com pro-insulina. A proteína de fusão reage tanto cera anticorpos contra tendamistato como também cora anticemos centra insulina»
EAPLO 5 o vector de expressão pTE2 (DE 57 enzimas de restrição EcoRI e SstI odifica para a pre-insulina de mace 5,65 Xpb para a reacção de liDigere- se
366 Al, Exemple 4) com as e retira-se o fragmento que c caco» Utiliza-se o fragmento gaçao descrita seguidamente.
A partir do plasmídeo pKK500 (Exemplo l) recorta- se cora as mesmas enzimas de restrição um fragmento de ADN de 2S5 pb de comprimento, o qual contém o gene da pró-insulina encurtado bem como a sequência de terminação.
A ligação co fragmento de 5,65 kpb de comprimento do plasmídeo pTE2 com c fragmento de 285 pb de comprimento de pKX500 da origem ao plasmídeo de expressão pT?3.
Transformara-se protoplastos de Sterptorayces lividans TK24 com a mistura de ligaçao, obtende-se clones que
BAD ORIGINAL - 8 -
são resistentes ã tioestreptona fusão que reage com anticorpos na de fusão é constituída pelos tendarnistato, pelo elo ea ponte e que segregara uma contra pró-insulina primeiros 41 ácido proteína de . Esta prote s aminados d
Pro-Ser-neu-Asn-Ser-Asn-Gly-Lys e pela pró-insulina encurtada.
QUADRO 1
B1 10
a Ei'· SnR A SN GLY -i-J_ o pLV l ílíx V aL A d\ GLN RIS j-iPL1 CYS GLY SER HIS
AAT tcg AAC GGC AAG TTC GTC AAC CAG p A p 1 G TGC p U. .Tin <-i x ur GAG
GC ΓΠΗ p X '<T nn p v/ UT TTC ÀÀC- GAG TTG GTC GTG LxPXr λ P r UT p^ p V/ sX x AGG GTG
(Ec oRi) vXL GLU aLA LEU TYR LEU UAL CYS GLY GLU ARG GLY r'ilj
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xxTC TGG TGG CTC TÂC GAG CTG GAG AAG TAG TGG AAC TAG TaA
m , sy 1 n.' J- ’ ρ n _P-/ _/ AGG GAG 4íTG GTC GAG GTG TTG aTG AGG TTG ÀTC ATT
GTG r» * p urxuvy CTG CAG CCA
CAG fimq X/ x ur GAG p ^P ur x v/ /-i nm UT1 jl TCG A
Sall (ΚίηΰΙΙΙ) ,1 bad original _4
QU-h-LíRC 2
5'-CGATAAACCGATACAATTAAAGGCTCCTTTTGGAGCCnTTTnTTGGAGATTTTCAA0GTGGATC , GCTA1TrGGCTATGTTAATTTCCGAGGAAAACCTCGGAAAAAAAAACCTCTAAAAGTTGCACCTAG-5'

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  1. Processo para a preparaçao de proteínas de íusao per acoplamento do gene estrutural para a proteina pretendida na extremidade 0-terminal do gene de tendamistato, expressão desta estrutura genica numa célula hospedeira de um ex treptomicete e isolamento a partir do sobrenadante da proteína de fusão segregada, caracterizado por o gene estrutural para a proteina pretendida codificar para um derivado da proinsulina no qual a cadeia 3 se encontra ligada à cadeia a por meie de u ele em ponte, que codifica para Lys ou parei Lys-Lys.
    A requerente reivindica as prioridades dos pedidos alemães apresentados em 3 de Lovembro de 1383 e em 13 de agosto de 1389, sob os n°s. P 33 37 273.3 e P 39 d? 449.7, respectiva ment e.
PT92177A 1988-11-03 1989-11-02 Processo para a preparacao de um precursor de insulina em estreptomicetes PT92177B (pt)

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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3714866A1 (de) * 1987-05-05 1988-11-24 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten
US5426036A (en) * 1987-05-05 1995-06-20 Hoechst Aktiengesellschaft Processes for the preparation of foreign proteins in streptomycetes
DE4012818A1 (de) * 1990-04-21 1991-10-24 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten
CZ283234B6 (cs) * 1990-09-05 1998-02-18 Hoechst Aktiengesellschaft Enymatický způsob konverse preproinsulinů na insuliny
GB9513967D0 (en) * 1995-07-08 1995-09-06 Univ Leicester Insulin
KR20110059602A (ko) 2008-08-07 2011-06-02 바이오콘 리미티드 인슐린 화합물의 제조방법

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3418274A1 (de) * 1984-05-17 1985-11-21 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Signalpeptid fuer die exkretion von peptiden in streptomyceten
DK129385A (da) * 1985-03-22 1986-09-23 Novo Industri As Peptider og fremstilling deraf
DK437786D0 (da) * 1986-09-12 1986-09-12 Nordisk Gentofte Insulinprecursorer
DE3707150A1 (de) * 1987-03-06 1988-09-15 Hoechst Ag Tendamistat-derivate
DE3714866A1 (de) * 1987-05-05 1988-11-24 Hoechst Ag Verfahren zur herstellung von fremdproteinen in streptomyceten

Also Published As

Publication number Publication date
FI895184A0 (fi) 1989-11-01
DE58909556D1 (de) 1996-02-15
NO894363L (no) 1990-05-04
EP0367163A2 (de) 1990-05-09
HUT53675A (en) 1990-11-28
CN1042378A (zh) 1990-05-23
EP0367163A3 (de) 1991-03-06
PT92177A (pt) 1990-05-31
FI95600C (fi) 1996-02-26
JPH02219588A (ja) 1990-09-03
FI95600B (fi) 1995-11-15
NZ231222A (en) 1991-08-27
ATE132531T1 (de) 1996-01-15
HU209596B (en) 1994-08-29
DK546889A (da) 1990-05-04
EP0367163B1 (de) 1996-01-03
CA2002062A1 (en) 1990-05-03
AU4395089A (en) 1990-05-10
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DK546889D0 (da) 1989-11-02
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IL92178A0 (en) 1990-07-26
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