PT94467A - Processo de preparacao de indeno-indolos e de composicoes farmaceuticas que os contem e processo para a estabilizacao de compostos - Google Patents

Description

71 167 Ν.60533 4-

MEMÓRIA DESCRITIVA

Campo.....do Invento 0 presente invento descreve a preparação de um novo tipo de antioxidante hidrofóbico com base na estrutura do indeno-indolo que é altamente eficiente para reduzir, isto é, paralizar, radicais livres em lipidos ou em bi-fases lipídicas, terminando o processo de peroxidação dos lipidos e evitando doenças iniciadas por éste ou processos com ele relacionados. Este invento descreve, também, a preparação de composições, especialmente composições farmacêuticas, contendo, pelo menos, um composto do invento ou um seu sal, especialmente um seu sal terapeuticamente aceitável, como ingrediente activo. Num outro aspecto, o invento descreve processos para a preparação destes compostos e o uso de compostos activos em terapia médica bem como em aplicações não médicas. Nas aplicações11^0 médicas será, especialmente, importante o uso no controlo ou na terminação de processos mediados por radicais livres.

Antecedentes do Invento

Alguns processos biológicos geram intermédios mais ou menos estáveis que contêm um electrão desemparelhado, que pode ser doado ou emparelhado com um electrão adicional das imediações. Estes intermédios são chamados radicais livres, e podem ser os produtos de várias reacções enzimáticas e não enzimáticas, algunas das quais, vitais para as funções do corpo, p. ex., a redução de ribonucleósidos de difosfatos, para a síntese do ADN e a criação de prostaglandinas na reacção da prostaglandina sintase. Esta última é essencial na resposta inflamatória que se segue a danos nas células, e em váias outras funções. Outras reacções de radicais incluem a reacção da mieloperoxidase em neutrófilos e macrófagos que destroem bactérias e outras partículas invasoras, e o transporte de electrões na cadeia respiratória nas mitocõndrias. A maior parte dos organismos contém antioxidantes químicos como o α-tocoferol (vitamina E), ácido ascórbico e diferentes radicais e enzimas inactivadores dos peróxidos, p.ex., a superóxido-dismutase, catalase e glutationa- -5- -5- 71 167 Ν.60533 iA— -peroxidase.

Radicais livres de vários tipos estão, cada vez mais, associados com uma larga faixa de estados clínicos e doenças como a ferida isquémica ou de reperfusão, trombose e embolia, aterosclerose, estados alérgicos/inflamatórios como a asma brônquica e a artrite reumatoide, estados ligados à doença de Parkinson, doença de Alzheimer ou envelhecimento, cataratas, diabetes, neoplasmas e toxicidade de agentes e produtos químicos anti-neoplásticos ou imunossupressivos. Uma explicação possível para estes estados e doenças é que, por razões desconhecidas, os agentes protectores endógenos contra os danos dos radicais não são suficientemente activos para proteger os tecidos contra os danos dos radicais. A peroxidação dos lípidos, provocada por excesso de geração de radicais, pode constituir um caminho de danos significativos nos referidos estados e doenças. A administração de antioxidantes adicionais que inibam as reacções dos radicais, p. ex. a peroxidação de lipidos, daria, assim, um processo de evitar ou curar os referidos estados e doenças. 0 presente invento descreve novos antioxidantes do tipo do indeno--indolo que preenche todos os requisitos, quer a acumulação em membranas, isto é, são suficientemente hidrofóbicos, quer uma forte inibição da peroxidação dos lípidos. Estes novos antioxidantes comparam-se, favoravelmente, com outros antioxidantes, p.ex., o α-tocoferol.

Os compostos do presente invento podem, também, ser usados em aplicações não médicas para estabilizar compostos susceptiveis de deterioração por oxidação, p. ex. em produtos para o cuidado da pele, aditivos alimentares, conservação de alimentos e de outros produtos. 0 presente invento abrange tanto o processo de estabilização usando indeno-indolos como as resultantes composições estabilizadas.

Arte Anterior

Alguns compostos do invento já foram anteriormente descritos. 0 5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo e o 5,6-di-hidro-indeno-

71 167 Ν.60533 -6- [2,l~b]indolo estão descritos em Faseb J. 2, A 407 (1988). 0 resumo descreve compostos que inibem a peroxidação de lipidos em microsomas do figado do ratinho fortalecidos com NADPH, iniciada com CCI4. Além disto, o 5,10-di-hidro~indeno[l,2-b]indolo está descrito como um forte inibidor da peroxidação de lipidos em Fd Chem. Toxicol, 26, 517 (1988). 0 pedido de patente japonesa 194916/85 (56471/87) descreve os 2-hidroxi- e 2-metoxi-5,10-substituido~di-hidro-indeno[l,2-b]-indolos. 5-metil-5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo e 5-neopentil--5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo são conhecidos como cintiladores, por J. Chem. Physics, 49, (7), 1906 (1968). 8-metil-, 8-metoxi-, 8-etoxi-5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]in~ dolo estão descritos em J. Prakt. Chemie, 4, (18), 41 (1962). 7“Cloro~5,10“di~hidro-indeno[l,2~b]indolo está descrito como um intermediário isolado num processo para preparar derivados da dibenzazocina em US 3 714 148. 3-isopropil-, 3-cloro-, 8-bromo-3-metil-, 3-cloro-8-metil-, 8-bromo-3-cloro-, 3,8-dimetil-5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo estão descritos em J. Chem. Soc. 2, 2225 (1952).

Descrição do Invento

Descobriu-se que compostos com as estruturas indeno-indolo de fórmula IA (DHII) e IB (iso-DHII) são eficientes como inibidores no processo de peroxidação de lipidos. Os seguintes compostos de fórmulas IA e IB são particularmente úteis como antioxidantes

IA IB 71 167 NI. 60533 -7-

onde R é hidrogénio ou um grupo alquilo'inferior, R1 e R2 são seleccionados, independentemente um do outro, entre * hidrogénio e um grupo alquilo inferior, R^, e são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogé-nio, halogéneo ou um grupo alquilo inferior, r5 é hidrogénio, hidroxi, halogéneo, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di--alquilamino inferior, NH2 ou NR11 COR12, R7, R8, R9 e R10 são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, hidroxi, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di-alquilamino inferior, NH2 OU NR11 COR12, R11 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R12 é um grupo alquilo inferior, com as seguintes condições: i) quando R é hidrogénio nas fórmulas IA ou ΪΒ então, pelo menos, um dos substituintes R1 a R10 não é hidrogénio, ii) quando R, R1, R2 e R10 são hidrogénio e R7 e R9 forem alquilo inferior -e R^, R^, R8 e R^ forem hidrogénio ou alquilo inferior ou R5 for hidroxi ou alcoxi inferior na fórmula IA, então R8 não é hidroxi, ou um seu sal.

Os novos compostos do presente invento têm a fórmula IA ou a fórmula IB

SEGUEM-SE FORMULAS IA E IB ,10 71 167 Ν.60533

R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R1 e R2 são seleccionados, independentemente um do outro, entre hidrogénio e um grupo alquilo inferior, R3, e R6 são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, halogéneo ou um grupo alquilo inferior, R5 é hidrogénio, hidroxi, halogéneo, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di--alquilamino inferior, NH2 ou NR11 COR12, R7, R8, R9 e R18 são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, hidroxi, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di-alquilamino inferior, NH2 ou NR11 COR12, R11 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R12 é um grupo alquilo inferior, com as seguintes condições: i) quando R é hidrogénio na fórmula IB, então, pelo menos um de R1 a R1^ não é hidrogénio, ii) quando R é hidrogénio, metilo ou neopentilo na fórmula IA, então, pelo menos um de R1 a R1^ não é hidrogénio, iii) quando R, R1, R2 e R1^ são hidrogénio e R7 e R9 SãO alquilo inferior e R8? r4; r5 e r6 sg0 hidrogénio ou alquilo inferior ou R8 é hidroxi ou alcoxi inferior na fórmula IA, então R8 não é hidroxi nem metoxi,

71 167 Ν.60533 -9- iv) quando R4 é cloro na fórmula IA, então, pelo menos um de r! a r!0 não é hidrogénio, v) quando é etilo, i-propilo, metoxi ou etoxi na fórmula IA, então, pelo menos um de R a R® ou R10 não é hidrogénio, vi) quando R^ é etilo na fórmula IA, então, não é meti-lo, vii) quando é metoxi ou etoxi na fórmula IA, então e R^ não são metilo, simultaneamente, viii) quando R^ é metilo na fórmula IA, então e R^ não são metilo, simultaneamente, ou pelo menos um de R a R?, R^ ou R^·® não é hidrogénio, ix) quando R^ é bromo na fórmula IA, então, pelo menos um de R a R^, R^ a r!*-1, não é hidrogénio, ou um seu sal.

Os seguintes compostos de fórmulas IA e IB que são eficazes como inibidores do processo de peroxidação de lípidos, são, particularmente, úteis como antioxidantes em terapia médica.

onde R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, r1, são seleccionados, independentemente um do outro, entre hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R^, R4 e R6 são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, halogénio ou um grupo alquilo inferior, r5 é hidrogénio, hidroxi, halogéneo ou um grupo alquilo

71 167 Ν.60533 -10- inferior ou um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di-al-quilamino inferior, NH2 ou NR3·3· COR3·2, R9, R8, R9 e R3·0 são seleccionados, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio ou hidroxi, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di-alquilamino inferior, NH2 ou NR3·3- COR3-2, R3·3· é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R3·2 é um grupo alquilo inferior, com as seguintes condições: i) quando R é hidrogénio, então pelo menos um dos substituintes R3· a R3·8 não é hidrogénio, ii) quando R, R3·, R2 e R3·8 são hidrogénio e R^ e R9 são alquilo inferior e R3, R^, R8 e R6 são hidrogénio ou alquilo inferior ou R8 for hidroxi ou alcoxi inferior na fórmula IA, então, R8 não é hidroxi, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

As estruturas do indeno-indolo e do iso-indeno-indolo do presente invento tem a seguinte numeração nos aneis:

ESTRUTURA DO INDENO-INDOLO

5a n

H 5,10-di-hidro~indeno[l,2-b]i.ndolo (DHII)

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ESTRUTURA DO ISQ-INDENQ-INDQLO

5,6-di-hidro-indeino[2, l-b]indolo (iso-DHII) 0 termo "inferior" na definição dos substituintes no composto do presente invento, significa um número de átomos de carbono não superior a 6, de preferência não superior a 4. 0 grupo alquilo inferior na definição de R, Rl, r27 r3^ r4^ R8, R6, R?, R8, r9? r10? r11 e R*2 é um grupo alquilo com 1 a 6 átomos de carbono, de preferência, 1 a 4 átomos de carbono, p. ex., metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo ou terc-butilo, e, com maior preferência é metilo ou etilo. 0 grupo alcoxi inferior na definição de R8, R?, R8, r9 e r10 é um grupo alcoxi com 1 a 6 átomos de carbono, de preferência, 1 a 4 átomos de carbono, p.ex. metoxi, etoxi, n-propoxi, iso--propoxi, n-butoxi, sec-butoxi ou terc-butoxi, preferindo-se. especialmente, metoxi e e.toxi.

Halogéneo, na definição de R^, R^, R^ e R^, é cloro, bromo, iodo ou fluor. 0 grupo mono- ou di-alquilamino inferior na definição de R87 R?, R8, R^ e r!° inclui metilamino, dimetilamino, etilamino, dietilamino, propilamino, dipropilamino, butilamino, dibutilamino, preferindo-se etilamino ou dietilamino. São grupos preferidos de comnpostos do invento, aqueles em que R8 é um mono- ou di-alquilamino inferior, particularmente, etilamino e dietilamino, e aqueles em que r3 e/ou R8 é um grupo alquilo inferior, particularmente metilo, e aqueles em que R8 é

71 167 Ν.60533 -12- um grupo alcoxi inferior, particularmente metoxi, e aqueles em que é NrUcorI2, particularmente NH-acetilo.

Outros grupos preferidos dos compostos do invento são aqueles em que: i) R8 é mono- ou di-alquilamino inferior, de preferência, etilamino ou dietilamino e R, a R^ e a R·^ são hidrogénio; ii) RS é um alcoxi inferior, de preferência metoxi, e R, R^ a r4 e r6 a r10 sgQ hidrogénio; iii) R3 e/ou são alquilo inferior, de preferência metilo, e R, r1, R2, R4, R6 a R10 são hidrogénio; iv) R^ é NHCOR de preferência NH-acetilo.

Os compostos preferidos de fórmulas IA e IB são os seguintes; 5.10- di-hidro~10,10-dimetilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-metilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-isopropilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro-6~cloro~indeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-fluoro-indeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8~metoxiindeno[l ,.2-b]indolo 5.10- di-hidro-10-metilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-6,8-dimetilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2-metoxi-l,3,6,8-tetrametilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2~metoxi-l,3-dimetil-8-isopropilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2-hidroxi-l,3-dimetil-8-isopropilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2,8-dimetoxi-l,3-dimetilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-terc-butilindeno[l,2-b]indolo 5,10~di-hidro~2~etilamino-indeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2-dietilamino-indeno[l,2-b]indolo 5.10- di-h idro-8-rnetoxi-7,9-dimetil i ndeno[ 1,2-b ] i ndolo 5.10- di-hidro-8-hidroxi-7,9-dimetilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-metoxi-6-metilindeno[l,2-b]indolo 5.6- di-hidro~9-metoxiindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-9-isopropilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-9-fluoro-indeno[2,1-b]indolo

71 167 Ν.60533 -13- 5.6- di~hidro-9-terc-butilindeno[2,l~b]indolo 5.10- di~hidro~2~(N-acetil-N-etil)amino-indeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2-acetamido-indeno[l,2-b]indolo 5,lQ-di-hidro~6~isopropilindeno[l,2~b]indolo 5.10- di~hidro-6~isopropil-8-metoxiindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-4,6-dimetil-8-metoxiindeno[l ,2-fo]indolo 5.10- di-hidro-8-dietilamino-6-metilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-etilamino-6~metilindeno[l,2~b]indolo 5.10- di-hidro-8-metoxi-6,10,10-trimetilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di~hidro-9-dietilamino-6-rnetilindeno[l,2-b]indolo 5,10“di“hidro-9-metoxi-6-metilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-7,9-dimetoxiindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro~8-dietilamino~6,10,10-trimetilindeno[l ,2-b]lndolo 5.10- di-hidro-4-dietilamino-indeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-3-hidroxi~2>4-dimetilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-3-metoxi-2,4-dimetilindeno[1,2-b]indolo 5.10- di-hidro~7-hidroxi-6,8-dimetilindeno[ 1,2-b] indolo 5.10- di-hidro-7~metoxi-6,8~dimetilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2,8-dihidroxi-l,3,7,9-tetrametilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-2,8-dimetoxi-l,3,7,9-tetrametilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro-8-hidroxi-7,9-diterc-butilindeno[l,2-b]indolo 5.10- di-hidro~8~metoxi-7,9-diterc-butilindeno[l,2-b]indolo 5.6- di-hidro-9-metoxi-7-meti1indeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-9-dietilamino-7~metilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-2-hidroxi-l,3-dimetilindeno-[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-2-metoxi-l,3-dimetilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-3-hidroxi-2,4-dimetilindeno-[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-3-metoxi-2,4-dirnetilindeno-[2,1-b] indolo 5.6- di-hidro-9~hidroxi-8,10-dimetilindeno[2,1-b]indolo 5,6~di-hidro~9~metoxi-8,10~dimetilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-8~hidroxi-7,9-dimetilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro~8-metoxi-7,9-dimetilindeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro~3-acetamido-indeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidr0-3-(N-acetil-N-etil)amino-indeno[2,1-b]indolo 5.6- di-hidro-9-acetoamido-indeno[2,1-b]indolo 5.10- di~hidro-8~acetoamido-indeno[l,2-b]indolo 5.6- di-hidro~l-dietilamino-indeno[2,1-b]indolo

71 167 Ν.60533 -14- 5.6- di-hidro~3~dietilamino-indeno[2,l-bjindolo 5.6- di-hidro-3~h idroxi-2,4-dimeti1i ndeno[2,1-b]indolo

Alguns dos compostos preferidos são já conhecidos e estão descritos na arte.

Os compostos de fórmulas IA e IB podem existir tal qual ou como sais farmaceuticamente aceitáveis.

Prepara ções Farmacêuticas

De acordo com o presente invento, os compostos de fórmula IA ou IB serão normalmente administrados por via oral, rectal, dérmica ou por injecção, sob a forma de preparações farmacêuticas compreendendo o principio activo como uma base livre ou como sal de adição ácida não-tóxico e farmaceuticamente aceitável, p. ex., o hidrocloreto, hidrobrometo, lactato, acetato, fosfato, sulfato, sulfamato, citrato, tartarato, oxalato e semelhantes em forma de dosagem farmaceuticamente aceitável. A forma de dosagem pode ser uma preparação sólida, semi-sólida ou liquida. Usualmente o principio activo constituirá entre 0,1 e 99%, em peso, da preparação, mais especificamente, entre 0,5 e 20%, em peso, para preparações adequadas a injecção e entre 0,2 e 50%, em peso, para preparações adequadas à administração oral. A administração dérmica utilizará, normalmente, 0,1 - 5%, em peso, de principio activo num veiculo adequado.

Para produzir preparações farmacêuticas contendo um composto de fórmula I sob a forma de unidades de dosagem para aplicação oral, o composto seleccionado pode ser misturado com um excipiente sólido, p. ex., lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos como o amido de batata, amido de milho ou amilopectina, derivados da celulose, um ligante como a gelatina ou a polivinilpirrolidona, e um lubrificante como o estearato de magnésio, estearato de cálcio, polietilenoglicol, ceras, parafinas e semelhantes, e, depois, prensados em comprimidos. Se forem necessários comprimidos revestidos, os núcleos, preparado como acima se descreveu, podem ser revestido com uma solução concentrada de açúcar que pode conter, p.ex., goma arábica, gelatina, talco, dióxido de titânio e semelhantes. Em

71 167 Ν.60533 -15- alternativa, ο comprimido pode ser revestido com um polímero conhecido dos peritos na arte, dissolvido num solvente orgânico facilmente volátil ou mistura de solventes orgânicos. Podem juntar-se corantes a estes revestimentos para, facilmente, distinguir comprimidos que contêm princípios activos diferentes ou quantidades diferentes dos compostos activos.

Para preparar cápsulas de gelatina mole, o principio activo pode ser misturado com, p. ex., um óleo vegetal ou com polietilenoglicol. As cápsulas de gelatina dura podem conter grânulos do princípio activo usando, quer os excipientes acima mencionados para os comprimidos, p. ex., lactose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos (amido de batata, amido de milho, amilopectina), derivados de celulose ou gelatina. As cápsulas de gelatina dura também podem ser cheias com droga liquida ou semi--sólida.

As unidades de dosagem para aplicação rectal podem ser soluções ou suspensões ou podem ser preparadas sob a forma de supositórios compreendendo a substância activa em mistura com uma base gorda neutra, ou de cápsulas rectais de gelatina compreendendo a substância activa misturada com óleo vegetal ou óleo de parafina.

As preparações líquidas para aplicação oral podem estar sob a forma de xaropes ou suspensões, p. ex., soluções contendo cerca de 0,2¾ até cerca de 20^ em peso, do principio activo aqui descrito, sendo o resto açúcar e mistura de etanol, água, glicerol e propilenoglicol. Estas preparações líquidas opcionalmente, podem conter agentes corantes, agentes aromatizantes, sacarina e carboximetilcelulose como um agente espessante ou outros excipientes já bem conhecidos dos peritos na arte.

As soluções para aplicações parentéricas por injecção podem ser preparadas numa solução aquosa dum sal solúvel em água, farmaceuticamente aceitável, do principio activo, de preferência numa concentração desde cerca de 0,5¾ até cerca de 10^ em peso. Estas soluções podem ainda conter agentes estabilizantes e/ou -16- 71 167 Ν.60533 agentes tamponantes e podem ser convenientemente apresentadas em ampolas de várias unidades de dosagem.

As doses diárias adequadas dos compostos do invento no tratamento terapêutico do homem, são de cerca de 0,01-100 mg/kg de peso corporal para a administração perorai e de 0,001-100 mg/kg de peso corporal para a administração parentérica.

Processo de Preparação

Os compostos do invento podem ser preparados como está abaixo indicado. a. 0 5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo (DHII, IA) e seus análogos contendo grupos funcionais dos átomos dos aneis benzenóides e/ou substituintes em C-10, como alquilo (p.ex., metilo, etilo, isopropilo) ou alcoxi (p. ex. metoxi ou etoxi) podem ser preparados pela síntese do indolo de Fischer.

A l~indanona (III) ou um reagente de partida equivalente, com substituição de grupos funcionais adequada no anel benzenoide e em C-3, pode reagir com fenil-hidrazinas (II) quer como uma base livre quer como- sal, de preferência o hidrocloreto. R-*·, r4? r5^ r6? r7^ r8? p9 e r10 têm 0 significado dado para a fórmula IA acima. Normalmente, dissolvem-se os reagentes num solvente, de preferência, num solvente alcoólico como o etanol ou o propanol. Nalguns casos, não é necessário aquecimento, enquanto que, noutros, é necessário aquecer a mistura reaccional ao refluxo durante uma hora ou mais. 0 produto fenil-hidrazona pode ser isolado por diluição da mistura reaccional com água e separado por filtração ou por extracção com 71 167 Ν.60533

-17-um solvente adequado- Consegue-se uma purificação adicional por cristalização ou por cromatografia. No último caso, a cromatografia em coluna de sílica é satisfatória e podem usar-se vários solventes^?è 1 uição. A ciclização das fenil-hidrazonas em DHII e nos seus derivados ocorre se o composto é redissolvido num solvente adequado, de preferência, num solvente alcoólico, p. ex., etanol ou propanol, e tratado com um ácido como, p. ex., o ácido clorídrico, ácido acético ou ácido trifluoroacético; pode ser necessário aquecer. Os ácidos de Lewis, como o cloreto de zinco, catalisam, também, a reacção de ciclização, tal como o fazem os ésteres polifosfonatos em solventes halogenados como clorofórmio. Também se observou que, se se utilizarem sais de fenil-hidrazina no primeiro passo desta sequência reaccional de dois passos, pode não se isolar o derivado intermédio de fenil-hidrazona e, neste caso, o produto ciclizado DHII forma-se directamente. Obter-se-á um resultado semelhante se a reacção entre fenil-hidrazinas e indanonas se realizar em ácido acético como solvente.

Os produtos di-hidro-indeno-indolos (DHII) são separados das misturas reaccionais por diluição com água e por filtração, ou por extracção por solventes. Consegue-se purificação adicional, por cristalização em solvente adequado ou por cromatografia em coluna usando sílica como material da coluna. Numa outra variante da reacção de ciclização, as fenil-hidrazonas podem ser aquecidas com silica na ausência de um solvente. 0 produto di~ -hidro-indeno-indolo pode, então, ser extraído da silica, no fim da reacção, com um solvente adequado; a purifação consegue-se como atrás. b. 0 5,6-di-hidro-indeno[2,l-b]indolo (iso-DHII, IB) e seus análogos contendo grupos funcionais nos átomos dos aneis benzenóides e di-substituintes de C-5, podem ser preparados pela síntese do indolq.de Fischer. 71 167 Ν.60533

,10 ,10

—IS! Η,

Pode-se fazer reagir a 2-indanona (IV), ou um reagente de partida equivalente, com substituição adequada de grupos funcionais no anel benzenoide em C-l, com fenil-hidrazinas (II) ou seus sais. Para os compostos onde Rl e R2 são hidrogénio ou Rl é um alquilo inferior e R^ é hidrogénio, então de R? a rIO deverão ser hidrogénio. Quando R^· e R2 for alquilo inferior, então, r3, r4? r5^ r6> r7? r8? r9 e rIO terão o significado dado para a fórmula IB acima. As condições de reacção e outros reagentes são semelhantes ãs descritas para o DHII no processo a. acima. c. Uma alternativa para a síntese do esqueleto de DHII envolve a ciclização dos 5-benzoil-indolos (V) adequados e a redução das cetonas tetracíclicas (VI) obtidas.

R, R1, R2, R3, r4? r5? r6? r7? r8? r9 e rIO têm o significado dado para a fórmula IA acima. Aqui, a ciclização consegue-se por reacção da cetona com paládio (0). rH é hidrogénio quando a ciclização é realizada com Pd. Os compostos onde o grupo benzoílo tem um substituinte iodo em posição orto em relação ao grupo carbonilo, são melhor ciclizados por exposição à luz ultra- -19- 71 167 Ν- 60533 -violeta. rH é halogéneo, de preferência iodo ou bromo, quando a ciclização se realiza por reacção fotoquímica. (Como referências para os compostos de benzoilo não substituídos e sua ciclização veja-se Synthesis, 607 (1978) e Heterocycles, 2433 (1983); para a reacção fotoquímica de ciclização, veja-se Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1523 (1974). A redução das cetonas tetracíclicas pode-se conseguir por reacção com reagentes como o hidreto de lítio e alumínio em éter dietílico ou em tetra-hidrofurano. Em alternativa o grupo carbonilo pode ser reduzido usando a redução de Wolff-Kishner. d. Uma síntese alternativa do esqueleto do 5,6-di-hidro-in-deno[2,l-b]indolo (iso-DHII), envolve a reacção de um di-anião (VIII) apropriado preparado por metalização, p. ex., litiação, da orto-halo- anilida (VII) correspondente, com uma alfa-halo-cetona IX, adequada, de acordo com o processo Wender e White

IX IB R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7; dado para a fórmula IB, acima. R®, R^ e têm o significado X1 é halogéneo, p.ex., bromo, X2 é cloro; em alguns casos, quando o esperado fecho do anel não ocorre facilmente, para conseguir a reacção é necessário um tratamento adicional com bases fortes, p. ex., com terc-butóxido de potássio. t t

71 167 N.60533 “20“

Modificação dos compostos DHII (ΙΑΊ e iso-DHII flEO pré-formados e. Os derivados 5-alquil-DHII são sintetizados por N--alquilação dos compostos 5H-DHII correspondentes dissolvidos num solvente aprótico, p. ex., acetona, acetonitrilo, dimetilsulfóxi-do (DMSQ), dimetilformamida (DMF) com uma base como o hidreto de sódio, seguida de um alquil-haleto ou alquil-sulfato, p. ex., R~ -haleto ou R-sulfato onde R é um grupo alquilo inferior.

Os compostos 5-metil- são sintetizados, de preferência, usando uma solução de hidreto de sódio em dimetilsulfóxido, seguido de adição de dimetilsulfato como agente de alquilação. Os derivados 6-alquil-iso-DHII são sintetizados de modo análogo ao acima descrito. f. Os compostos substituídos com hidroxi podem ser preparados a partir dos compostos correspondentes, substituídos com alcoxi, por métodos clássicos de desalquilação de éteres, p. ex., usando diferentes ácidos de Lewis. g. Os compostos substituídos com N-alquilamino podem ser preparados a partir dos compostos correspondentes, substituídos com N-acilo, por processos convencionais de redução ou por via de alquilação seguida de redução. h. Os compostos substituídos com N-acilamino, podem ser preparados a partir das aminas correspondentes, por processos convencionais de acilação.

Os seguintes exemplos ilustram o principio e a adaptação do invento sem, contudo, os limitar. A temperatura é dada em graus Celsius.

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Exemplos de......Trabalho

Exemplo1. - 5,10-di-hidro-indenori,2-blindolo

Uma mistura de 1-indanona (13,21 g; 0,1 mol) e de hidrocloreto de fenil-hidrazina (14,48 g; 0,1 mol), foi aquecida em ácido acético glacial (150 cm3). À medida que a temperatura da solução se aproximava da de refluxo, o hidrocloreto de hidrazina dissolvia-se. Pouco depois, precipitou da solução um sólido castanho. Retirou-se imediatamente o aquecimento e deixou-se a mistura reaccional arrefecer. Separou-se o sólido por filtração, lavou-se com quantidades abundantes de água e deixou-se secar numa placa sinterizada. Juntou-se o sólido a etanol absoluto (150 cm3), aqueceu-se até à fervura e filtrou-se ainda quente. Lavou--se o produto com etanol frio (150 cm3) e secou-se numa estufa de vácuo obtendo-se o composto do titulo, beige, sólido. Rendimento: 18,50 (90¾). P.f. 258-92C. *H RMN (DMS0-d6) <$: 3,67. (2H, s,), 7,07 (1H, ddd,), 7,14 (1H, ddd,), 7,20 (1H, ddd,), 7,36 (1H, dd,) 7,51 (1H, d,), 7,52 (1H, d,), 7,57 (1H, d,), 7,67 (1H, d,), 11,6 (1H, largo,).

Exemplo 2. 5.10-di-hidro-5-metilindenori,2-b~lindolo

Juntou-se hidreto de sódio (375 mg; 15,6 mmol) a dimetilsulfóxido (DliSO) (13 cm3) sob atmosfera de azoto. Aqueceu-se, então, a solução a 702C até cessar a libertação de gás (H2). Arrefeceu-se a solução até temperatura ambiente e juntou-se 5,10-di-hidro-indeno[l,2-b]indolo (2,69 g, 13,1 mmol) dissolvido numa quantidade mínima de DMSQ. Depois de se agitar à temperatura ambiente durante 1 hora, juntou-se sulfato de dimetilo (1,5 cm3, 15 mmol) e continuou-se a agitar por mais uma hora. Juntou-se, cuidadosamente, água (3 cm3) e verteu-se a mistura reaccional sobre água/gelo. 0 produto sólido assim formado foi recolhido por filtração por sucção, lavado primeiro com água, seco à trompa de água e, depois, lavado com éter de petróleo (60-80SC). A cristalização em etanol deu agulhetas incolores do

composto do título. Rendimento: 1,52 g (53¾). P.f. 1522C. RMN (CDClg) <S: 3,55 (2H, s,), 3,85 (3H, s,), 6,8-7,4 (8H, m, arom.). -22- 71 167 Ν.60533

Exemplo......3.,..._________5.1Q-di~hidro-8~metoxiindenon ,2-blindo lo A uma solução agitada hidrocloreto de p-metoxifenil--hidrazina, (3,5 g, 20 mmol) e 1-indanona (2,35 g, 20 mmol) em etanol absoluto (80 cm3) juntou-se, gota a gota, trietilamina (2,01 cm3, 20 mmol). Continuou-se a agitar até a análise por cromatografia liquida fina ("thin liquid chromatography") da mistura reagente indicar já não haver vestígios dos reagentes iniciais (cerca de 1 hora). Removeu-se o solvente, e aqueceu-se o resíduo amarelo ao refluxo, numa solução de éster polifosfonato em clorofórmio (preparado por fervura de pentóxido de fósforo (50 g) em clorofórmio (100 cm3) e éter dietilico (50 cm3) durante 12 horas). Após 1 hora, removeu-se o solvente e agitou-se o resíduo negro em água (200 cm3). Extractou-se esta mistura 3 vezes com éter dietilico, lavaram-se as fases orgânicas com água e secaram--se (MgS04). A remoção do solvente deu um produto sólido, beige, que foi cristalizado em acetato de etilo/éter de petróleo (60--802C) obtendo-se plaquetas beige do composto do título. P.f. 2072C, Rendimento: 3,8 g (78¾). *H RMN (DNS0-d6) <$: 3,66 (2H, s, ) 3,79 (3H, s,), 7,4-7,6 (7H, m,), 11,4 (1H, largo,).

Exemplo 4._____5,lO-di-hidro-lO-metilindenor1,2-blindolo

Aqueceu-se ao refluxo, em ácido acético glacial (20 cm3), 3-metil-l-indanona (500 mg; 3,42 mmol), preparada por um método análogo ao descrito por A.M. Weidler et al., Acta Chem. Scand., 18 p. 148 (1964), e fenil-hidrazina (0,35 cm3; 3,5 mmol). Dois minutos depois juntou-se, através do condensador de refluxo, ácido clorídrico concentrado (1 cm3). A fervura continuou durante 75 min e depois arrefeceu-se a mistura reagente. Verteu-se a solução sobre gelo/água e extractou-se com acetato de etilo. Lavaram-se os extractos consecutivamente com salmoura e, depois, água e secaram-se (MgS04). Por evaporação do solvente in vacuo e por cromatografia em coluna do resíduo (10¾ EtOAc/éter de petróleo (60-802C)) obteve-se o composto do titulo como um sólido creme. Rendimento: 320 mg (43%). P.f. 153-1552C. ^ RMN (DMSQ-d6) <5: 1,50 (3H, d,), 3,85 (1H, q,), 7,0 -7,6 (8H, m.), 11,55 (1H, s,). 71 167 Ν.60533 -23-

Exemplo 5._5.10-di-hidro-10.IQ-dimetilindenof1..2-blindolo

Uma solução de 3,3-dimetil-l-indanona (20,0 g; 0,125 mol), preparada pelo método descrito por R. Knorr et al, Leibig’s Annalen, 1207 (1980), e fenil-hidrazina (12,3 cm·5; 0,125 mol) em ácido acético glacial (200 cm·5), foi aquecida sob refluxo. Pelo condensador, juntou-se ácido clorídrico concentrado (10 cm·5) e manteve-se a ebulição por mais duas horas. Deixou-se a solução arrefecer e, depois, verteu-se sobre água (500 cm·5). A água foi extraída com éter dietilico por três vezes, os extractos juntos foram lavados com salmoura e água, e secos (MgSO^.). Removeu-se o solvente e juntou-se éter de petróleo (60-802C) ao resíduo. Aqueceu-se a suspensão até à ebulição. 0 produto sólido foi separado por filtração e concentrou-se o licor mãe. Quando arrefeceu, obteve-se mais produto sólido e separou-se este produto adicional à medida que o licor mãe era ainda mais concentrado. Os sólidos foram juntos e cristalizados em éter de petróleo, obtendo-se o composto do titulo. Rendimento: 10,2 g (35¾). P.f. 16020-^1-1 RMN: (CDC13) <5= 1,60 (6H, s,), 7,1-7,7 (8H, m,), 8,16 (1H, s,).

Exemplo 6.___5.10-di-hidr0-6,8-dimeti1indenof1.2-blindolo

Uma solução de hidrocloreto de 2,4-dimetilfenil-hidrazina (1,27 g; 7,35 mmol) e 1-indanona (lg; 1,1 eq) em ácido acético glacial (15 cm·5), foi aquecida ao refluxo durante 30 min.

Arrefeceu-se a mistura reaccional e verteu-se sobre gelo/água (200 cm·5). Saturou-se esta solução com sal e extraiu-se com éter dietilico. A solução etérea foi seca (119804) e evaporada in Μ.§.£Μ2- 0 ácido acético em excesso foi removido por destilação com tolueno e éter de petróleo (60-802C) in vacuo, deixando um sólido, de cor escura. Purificou-se primeiro o resíduo por cromatografia de "sucção flash" e, depois, cristalizou-se em éter de petróleo (60-802C), obtendo-se o composto do título como um sólido incolor. Rendimento: 0,53 g (31¾). P.f. 1822C. *Η RMN (CDCI3) <S: 2,42, 2,46 (6H, s,), 3,62 (2H,s,), 6,7-7,6 (6H,m,), 8,05 (1H, largo,).

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Exemplo 7._______5,6-di-hidro~indenor2,l~blindolo 2-indanona (5,25 g; 39,7 mmol) e hidrocloreto de fenil--hidrazina (5,74, g; 39,7 mmol)) foram aquecidas ao refluxo em ácido acético glacial (60 cm^) durante 1 h e, depois, arrefecidas. Verteu-se a solução sobre gelo/água e recolheu-se, por filtração, o precipitado sólido. Após purificação parcial por cromatografia em coluna e cristalização (carvão vegetal) em acetato de etilo, obtiveram-se agulhas incolores do composto do titulo. Rendimento: 0,64 g (80¾). P.f. 205QC. J-H RMN (DMSO--d6) 6: 3,65 (2H, s,), 7,0-7,2 (8H,), 10,40 (1H, largo,).

Exemplo 8.____5.10-di-hidro-6-cloro-indenor1.2-blindolo i) A o-clorofenil-hidrazona da 1-indanona (P.f. 1282C, 72 mg, 0,28 mmol) foi absorvida em sílica (Merck N2 7736, 500 mg) a partir do diclorometano. 0 pó foi aquecido a 1402C, sob vácuo aspirado por água, durante 30 min. Após arrefecimento, o produto foi extraído da sílica com acetato de etilo e removeu-se o solvente. 0 resíduo foi purificado por eluição através de uma camada de sílica "flash” com 5¾ acetato de etilo/éter de petróleo (60-802C), obtendo-se o composto do titulo, sólido, incolor. Rendimento 47 mg (65¾). ii) A o-clorofenil-hidrazina da 1-indanona (650 mg; 2,5 mmol) foi fervida numa solução em clorofórmio de éster polifosfonato (ver a preparação do 5,10-di-hidro-8-

-metoxiindeno[l,,2 -b]indolo) durante 30 min. Removeu-se o solvente e agitou-se o resíduo em água (75 crn-^), durante i hora. Por extracção com éter dietílico obteve-se uma solução verde que foi lavada em água, seca (MgSO*;) e evaporada. Por purificação por cromatografia em coluna (Rf [5¾ EtOAc/éter de petróleo (60--802C)] 0,5) obteve-se o composto do título como um sólido incolor. Rendimento: 500 mg (82¾). P.f. 1392C. RMN (CDCI3) 6: 3,72 (2H, s,), 7,0-7,6 (7H,m,), 8,5 (1H, largo,).

Exemplo 9.____5, lO-di-hidro-8-metilindenor 1,2-b~lindolo

Uma mistura de hidrocloreto de p-tolil-hidrazina (9,75 g; 61,5 mmol) e 1-indanona (8,13g; 61,5 mmol) foi aquecida ao 71 167 Ν.60533 25

refluxo, em etanol (60 cm3) contendo ácido clorídrico concentrado (5 cm3). Depois de se aquecer durante 2 horas, deixou-se a mistura reaccional arrefecer , lentamente, até temperatura ambiente. 0 produto formado foi separado por filtração, lavado com etanol aquoso 10%, e secou-se em estufa de vácuo, obtendo-se o composto do titulo como um sólido cristalino, incolor. Rendimento: 10,0 g (74%). P.f. 2252C. (em etanol) RMN (DMS0-d^) d: 2,4 (3H, s,), 3,6 (2H, s,), 7,8-8,7 (7H, m,), 11,7 (1H, largo,).

Exemplo 10.________5,10-di~hidro-8-iso-propilindenor 1 -2~b~lindolo

Uma mistura de hidrocloreto de 4-isopropilfenil-hidrazina (6,3 g; 34 mmol) e 1-indanona (4,5 g; 34 mmol) foi aquecida ao refluxo, em etanol (40 cm3) contendo ácido clorídrico concentrado (2 cm3). Continuou-se a aquecer durante 4h e, depois, arrefeceu-se a mistura reaccional até temperatura ambiente; durante este tempo o produto separou-se da solução por cristalização sob a forma de cristais incolores. Separou-se este composto por filtração, secou-se em estufa de vácuo e recristalizou-se em etanol/água obtendo-se prismas incolores. Rendimento: 6,59 g (79%). P.f. 1932c. (em etanol/água) *Η RMN (DMS0~d6)<$: 1,27 (6H, d,), 2,96 (1H, septeto,), 3,65 (2H, s,), 6,9-7,6 (7H, m,), 11,2 (1H, largo,).

Exemplo 11. 5.10-di-hidro-2-metoxi-l,5-dimetilindenori-,2-b1indolo

Uma mistura de 5-metoxi~4,6-dimetil-l~indanona (3,0 g; 16 mmol) e hidrocloreto de fenil-hidrazina (2,3 g; 16 mmol) foi aquecida ao refluxo, em etanol (20 cm3) contendo ácido clorídrico concentrado (2 cm3). Aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 6 horas, e arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Juntou-se água, e separou-se por filtração o precipitado resultante. Este produto foi seco em estufa de vácuo e purificado por cromatografia em coluna, obtendo-se o composto do titulo como um sólido, incolor. Rendimento: 2,8 g, (67%). P.f. 1772C. em acetato de etilo/éter de petróleo (60-802C). RMN (CDC13)<$: 2,36 (6H, s,), 3,56 (2H, s,), 3,76 (3H, s,), 7,1-7,6 (5H, m,), 8,2 (1H, largo,).

71 167 Ν.60533

Exemplo 12......5.10-di-hidro-2~hidroxi~l.3-dimetilindeno Γ1,2-b~l indolo 5,10-di-hidro~2~metoxi~l,3-dimetilindeno[l,2-b]indolo (2,4 g; 9,1 mmol) e cloreto de piridínio (5,8 g) foram misturados e aquecidos a 20020, durante 30 min. · A mistura reaceional foi arrefecida e sofreu partição em acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica por três vezes com ácido clorídrico 214 e, depois, três vezes com água, e depois secou-se (MgS04). Removeu—se o solvente in vacuo, e purificou—se o resíduo por cromatografia em coluna, obtendo-se o composto do titulo em prismas incolores. Rendimento: 1,5 g (66¾). P.f. 1902C. (em diclorometano) *Η RHN (DMS0~d6)<$: 2,25 (3H, s,), 2,26 (3H, s,), 3,50 (2H, s,), 6,9-7,5 (5H, m,), 8,16 (1H, largo,), 11,33(1H,largo).

Exemplo 13. .....5,lQ-di-hidro~2-metoxi-l,3-dimetil-8-isopropilindeno Γ1,2~blindolo

Uma mistura de 5-metoxi-4,6-dimetil~l-indanona (3,1 g; 16 mmol) e hidrocloreto de p-isopropilfenil-hidrazina (3,05 g; 16 mmol) foi aquecida ao refluxo em etanol (20 cm3) contendo ácido clorídrico concentrado (2 cm3). Aqueceu-se, então, a mistura reaceional áo refluxo durante 4 h e, depois, deixou-se arrefecer até temperatura ambiente. 0 precipitado cristalino formado, foi separado por filtração, lavado com etanol aquoso 10%, e seco em estufa de vácuo, obtendo-se o composto do titulo como um sólido cristalino verde claro. Rendimento: 3,04 g (62%). P.f. 1302C. (em etanol) *H RI4N (CDCI3) <5: 1,33 (6H, d,), 2,34 (3H, s,), 2,35 (3H, s,), 3,02 (1H, septeto,), 3,6 (1H, largo,), 3,76 (2H,s,), 7,08 (1H, s,), 7,30 (1H, d,), 7,45 (1H, s,), 8,12 (1H, s,).

Exemplo 14........5,10-di-hidro-8-terc-butilindenor1,2-blindolo

Uma solução de hidrocloreto de 4-terc-butilfenil-hidrazina (1,74 g; 8,67 mmol) e 1-indanona (1,15 g; 1 eq) em etanol (15 cm3) foi aquecida ao refluxo. Juntou-se um par de gotas de ácido clorídrico concentrado, aqueceu-se a mistura reaceional ao refluxo durante 12 h e, depois, arrefeceu-se. Filtrou-se o produto sólido, obtendo-se agulhas incolores. P.f. 202QC. RMN 27- 71 167 Ν.60533 (CDC13) <$: 8,15 (1H, largo), 7,7-7,1 (7H, m), 3,7 (2H, lar go), 1,42 (9H, s).

Exemplo 15.____5,10-di-hidro-2-hidroxi-l ,3-dimetil-8-isopropilin~ denofl.2-blindolo

Dissolveu-se 5,10~di-hidro-2-metoxi-l,S-dimetil-B-isopropil-indenotl ,2-b]indolo (0,50 g; 1,64 mmol) em diclorometano seco (DCM, 2 cm3) em condições anidras, e arrefeceu-se até -782C. Juntou-se tribrometo de boro (2 cm3, 1,2 eq. de solução 1M em DCM) e aqueceu-se até temperatura ambiente e, em consequência, formou-se uma suspensão. Após 2o min., este redissolveu-se. Juntou-se,cuidadosamente, água (2 cm3) e extraiu-se a mistura com rnais DCM e com solução saturada de bicarbonato de sódio (um pouco de substância sólida formada durante a extracção dissolveu-se finalmente). A fase de DCM foi seca (^2804) e filtrada por uma camada de sílica "flash", eluindo com DCM, obtendo-se um produto sólido branco (0,43 g, 90¾). P.f. 1732C(dec.). RMN (CDCI3) <5: 8,04 (1H, largo), 7,43 (1H, largo), 7,29 (1H, d, J = 8,2), 7,04 (1H, largo), 4,58 (1H, largo), 3,55 (2H, largo), 30,2 (1H, septeto, J-7,0 Hz), 2,30 (3H, s), 2,29 (3H, s), 1,33 (6H, d, 3-7,0 Hz).

Exemplo 16.____5J.O-dí-hidro-2-metoxi-l.3.6.8-tetrametilindenoíl42- -blindolo 4,6-dimetil-5-metoxi-l-indanona (2,2 g; 11,6 mmol) e hidrocloreto de 2,4-dimetilfenil-hidrazina (2,00 g, 1 eq) foram aquecidos ao refluxo em etanol (15 cm3) contendo HC1 conc. (1 cm3). Apôs 2 h, filtrou-se o precipitado e lavou-se com solução de hidróxido de amónio. Todo o material recolhido foi extraído com acetato de etilo com a ajuda de salificação. 0 solvente foi seco e evaporado in vacuo. e o produto purificado por cromatografia em coluna, eluindo com 5¾ EtOAc/éter de petróleo (60-802). 0 indolo foi recristalizado em diclorometano/éter de petróleo (60-802) como agulhas beige claro. P.f. 2102C. •'•H RMN (CDCI3) ó: 8,03 (1H, largo), 7,25 (1H, s), 7,15 (1H, s), 6,81 (1H, s), 3,76 (3H, s), 3,53 (2H, s), 2,49 (3H, s), 2,43 (3H, s), 2,37 (6H, s).

71 167 Ν.60533 -28-

Exemplo......17,.__________5,10-di~hidro~2.8-dimetoxi-l ,3-dimetilindenor 1,2-bl- indolo

Aqueceu-se ao refluxo, durante 2 horas, uma solução de 4,6--dimetil-5-metoxi-l-indanona (3,32 g; 17,5 mmol) e hidrocloreto de 4-metoxifenil-hidrazina (3,05 g; 1 eq) em etanol (25 cm^), contendo ácido clorídrico (1 cm^). Removeu-se o solvente após arrefecimento, e o material foi extraído entre éter dietílico e solução de bicarbonato de sódio. A camada orgânica foi seca, evaporada e purificada por cromatografia em coluna, eluindo com 50¾ diclorometano/éter de petróleo (60-802), obtendo-se um sólido amarelo claro (2,30 g, 45¾). P.f. 1802C (em EtOAc/éter de petróleo (60-802)). 1h RMN (CDC13) <5: 8,10 (1H, largo), 7,19 (1H, d, J » 8,6Hz), 7,06(1H, d, J * 2,3Hz), 6,98 (1H, s), 6,79 (1H, dd, J * = 8,6, 2,3), 3,87 (3H, s), 3,75 (3H, s), 3,49 (2H, s), 2,33 (3H, s), 2,31 (3H, s).

Exemplo 18.______5.10-di-hidro-8-fluoro-indenof1,2-blindolo

Uma mistura de hidrocloreto de 4-fluorofenil-hidrazina (1,83 g; 11,25 mM) e 1-indanona (1,49 g) em etanol (20 cm^) foi aquecida ao refluxo e juntou-se ácido clorídrico conc. (1 cm^).

Continuou-se a aquecer durante 5 h, e arrefeceu~se a mistura reaccional. 0 produto que se separou por cristalização, da solução fria, sob a forma de plaquetas coloridas, foi recolhido por filtração e seco (1,90 g, 75¾). P.f. 225-2272C (em acetato de etilo/éter de petróleo [60-802]). *Η RMN (CDCI3) «5: 8,3 (1H, largo, s), 7,6-6,9 (7H, m), 3,70 (2H, s).

Exemplo 19._______5,6-di-hidrο-9-metoxiindenof2,1-blindolo

Hidrocloreto de 4-metoxifenil-hidrazina (3,5 g) e 2-inda.nona (2,6 g) foram dissolvidos em etanol (25 cm^) contendo ácido clorídrico conc. (0,5 cm-3) e aqueceu-se a solução ao refluxo durante 2 h. Removeu-se o solvente sob pressão reduzida obtendo--se um resíduo negro que foi tratado com acetato de etilo e filtrado. Misturou-se o filtrado com sílica (25 g) e removeu-se o solvente sob pressão reduzida; o resíduo foi, então, colocado no topo de uma coluna de sílica e eluído com acetato de etilo: éter de petróleo 60-802C (1:10) para dar o indolo (2,35 g; 50¾) como

71 167 Ν.60533 -29- agulhas castanho claro. P.f. 170-1712C. RMN <S: 3,65 (2H, s), 3,90 (3H, s), 6,84 (1H, dd, J = 8,5 e 2,5Hz), 7,08 (1H, ddd, J = = 7,5, 7,5 e 1,0 Hz), 7,20 (1H, d, J = 8,5Hz), 7,24 (1H, ddd, J = = 7,5, 7,5 e 0,5Hz), 7,30 (1H, d, J = 2,5Hz), 7,39 (1H, d, J * = 7,5Hz, 7,61 (1H, d, J * 7,5Hz), 8,09 (1H, s largo).

Exemplo 20.__________5.6-di"hidro-9-isopropilindenor2,i-blindolo

Uma suspensão de hidrocloreto de 4-isopropilfenil-hidrazina (3,13 g; 16,8 mM) e 1-indanona (2,22 g, 1 eq), foi aquecida ao refluxo, em etanol absoluto (20 cm3) contendo ácido clorídrico conc. (0,5 cm3) durante quatro horas. Removeu-se o etanol in vácuo, purificou-se, parcialmente, o produto por cromatografia em coluna, eluindo com 10¾ acetato de etilo/éter de petróleo (60--802C) e, finalmente, purificou-se por cristalização em acetato de etilo/éter de petróleo. Obtiveram-se agulhas verde claro (0,84 g, 18,7¾). P.f. 1442C. 1|H RMN <$: 8,05 (1H, s largo), 7,7-7,0 (7H, rn), 3,65 (2H, s), 3,07 (1H, septeto, J = 7,0Hz), 1,35 (6H, d, J = =: 6,9Hz).

Exemplo 21. 5,6-di-hidro~9~terc-butilindenor2.1~b~lindolo 2-indanona (2,0 g; 15,2 mM) em etanol (25 cm3) contendo ácido clorídrico aquoso 30¾ (0,5 cm3), foi agitada e aquecida com hidrocloreto de 4-terc-butilfenil-hidrazina (3,0 g; 15,2 mM) durante 4 h. Juntou-se, então, sílica gel (3,0 g) e removeram-se os solventes sob pressão reduzida. 0 resíduo foi, então, colocado no topo de uma coluna de sílica (28 g) e eluído com 5¾ acetato de etilo em éter de petróleo 60-802C. Por cromatografia repetida obteve-se o produto pretendido 0,35 g, 9%), P.f. 1822C. *Η RMN ô-1,44 (9H, s), 3,71 (2H, s), 7,10 (1H, ddd, J = 7,5, 7,5, 1,5Hz), 7,22-7,42 (4H, m), 7,68 (1H, d largo, J * 7,0Hz), 7,84 (1H, s largo), 8,15 (1H, s).

Exemplo.....22.______2-(N-acetilamind)-5,10- di -hidro-indenoF1,2-blindolo

Uma solução de fenil-hidrazina (4,05 g; 37,5 mM), 5-(N~ ~acetilamino)indan-l-ona (preparada pelo processo de N.L. Allinger e E.S. Jones (J. Org. Chem., 1962, 27, 70) (5,8 g; 30,7 mM) e ácido 4-tolueno-sulfónico (0,005 g), em tolueno (125 cm3),

71 167 Ν. 60533 -30- foi aquecida num aparelho de Dean Stark durante 2 h. A mistura reaccional foi arrefecida e o produto hidrazona foi separado por filtração como uma substância sólida, microcristalina, castanho claro (7,3 g; 85*), p.f. 252-2532C.

Hidrazona finamente esmagada (8,5 g, 30 mM) da experiência acima, foi adicionada, sob agitação, a uma solução de éster polifosfórico, preparada a partir de pentóxido de fósforo (30 g), clorofórmio (30 cm3) e éter dietilico ( cm^) em conjunto, durante 24 h. Os solventes em excesso foram removidos por evaporação e o resíduo aquecido a 602C durante 45 min. Depois de arrefecer o resíduo alcatroendo foi vertido sobre água (150 cm3) e clorofórmio (40 cm3) e agitou-se a mistura vigorosamente durante 10 min. A substância sólida, de cor escura, que se manteve, foi recolhida e misturada com sílica (6 g) e, depois, adicionada ao topo de uma coluna de sílica (20 g), eluindo a coluna com acetato de etilo. Obteve-se do eluente um produto sólido amarelo claro. Rendimento: 2,0 g, 27*. P.f. >24020. *H RMN (CDC13) <5: 2,11 (3H, s), 3,50 (2H, s), 6,95-7,10 (2H, m), 7,33-7,50 (4H, m), 7,67 (1H, s largo).

Exemplo 23.________5.lQ~di-hidro-2-fN-etilamino)indenof1.2-blindolo

Uma solução de 5,10-di-hidro-2-(N-acetilamino)indeno[l,2-b]-indolo (0,70 g; 2,8 mM) em tetra-hidrofurano seco, (50 cm3) sob uma atmosfera protectora de azoto, foi tratada com hidreto de alumínio e lítio (0,40 g; 10,50 mM) durante 3 horas. A mistura foi, então, aquecida ao refluxo durante mais 3 horas e, eventualmente, arrefecida. 0 reagente em excesso foi destruído pela adição de uma solução saturada de tartarato de sódio e potássio (5 cm3) e separou-se a fase orgânica. A suspensão aquosa residual foi extraída com tetra-hidrofurano (3 x 10 cm3), juntaram-se os extractos e a fase orgânica, filtraram-se por papel de transferência de fase e evaporaram-se. Obteve-se o composto do título sob forma de um sólido amarelo claro. P.f. 2252C. Rendimento; 0,47 g, 71%. RMN (CDCI3) <5: 1,23 (3H, t, J * 7,0Hz), 3,09 (2H, q, J = 7,0Hz), 3,59 (2H, s), 4,80 (1H, s largo), 6,56 (1H, d, J = 7,5Hz), 6,87 (1H, s), 7,01 (2H, m 71 167 Ν.60533 31-

largo), 7,32-7,48 (3Η, m largo), 10,47 (1H, s largo).

Exemplo 24._________5,10-di~hidro-2~(N-acetil-N-etilaminoHndenofl.2-bl~ indolo 5.10- di-hidro~2~(N-etilamino)indeno[l,2-b]indolo (0,47 g, 1,90 mH) e anidrido acético (4 cm3) foram aquecidos a 90-952C, durante 4 horas. Juntou-se água (30 cm3) à solução fria e agitou-se a mistura, vigorosamente, durante 1 h. 0 produto sólido formado foi, então, recolhido e lavado com algumas gotas de etanol frio, obtendo-se o composto do título, (0,5 g, 90¾) como um sólido incolor. P.f. 2322C. ·*·Η RHN (CDC13) <5: 1,16 (3H, t, J = = 7,0Hz), 1,90 (3H, s), 3,73 (2H, s), 3,81 (2H, q, J = 7,0Hz), 7,05-7,20 (4H, m), 7,46 (1H, d, J = 7,5Hz), 7,57 (1H, d, J * * 8,0Hz), 7,63 (1H, d, J = 7,0Hz, 10,36 (1H, s)).

Exemplo 25. 5,10-di~hidro-2-fN,N-dietilamino)indenori,2~blindolo 5.10- di-hidro-2-(N-acetil-N-etilamino)indeno[l,2~b]indolo (0,5 g; 1,7 mH) em tetra-hidrofurano seco (80 cm3), protegido por atmosfera de azoto, foi tratado com hidreto de alumínio e litio (0,3 g) durante 1 h. Aqueceu-se, então, a mistura reaccional a 502C por mais 1 h, arrefeceu-se e juntou-se tartarato de sódio e potássio, saturado, (5 cm3). Decantou-se a camada de solvente do resíduo aquoso, e lavou-se este último com tetra-hidrofurano (3x8 cm3). A fase orgânica e as lavagens, combinadas, foram filtradas por papel de transferência de fase e evaporadas, obtendo-se o composto do titulo como um sólido amarelo. Este foi cristalizado em etanol, a 95%, obtendo-se o composto do título (0,35 g) em prismas amarelo claro. P.f. 204-2062C. Após cromatografia em coluna (sílica: acetato de etilo/éter de petróleo 60-8020, o p.f. do composto subiu para 205-2Q62C (0,26 g; 55%).

Exemplo.....26.............5,10-di~hidro-6-metil-8-metox.iindenor 1.2-blindolo i) Juntou-se hidrocloreto de 2-metil-4~metoxifenil-hidrazina (23,6 g; 0,125 mol) a uma solução de acetato de sódio (30,8 g; 0,375 mol) em 650 ml de água. Agitou-se a mistura até todo o material se dissolver. 0 restante material corado, insolúvel, foi removido por filtração. À solução límpida resultante juntou-se

71 167 Ν.60533 -32- 1-indanona (13,2 g; 0,1 mol) dissolvida em 150 ml de etanol. Aqueceu-se a mistura durante 15 min em banho de água e, depois, deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Depois de se agitar durante 30 min à temperatura ambiente, seguindo-se o arrefecimento em banho de gelo, separaram-se os cristais formados e lavaram-se com água fria. Por cristalização em etanol obtiveram-se 14,0 g (53¾) da 2-metil-4-metoxifenil-hidrazona da 1-indanona. P.f. 131ÔC. ii) Uma mistura de 14,0 g (0,053 mol) da 2-metil-4-metoxife-nil-hidrazona da l~indanona, em 300 ml de etanol, foi aquecida a 602C, altura em que a maior parte do material sólido se dissolveu. Juntaram-se, então, 120 ml de etanol saturado com HC1 e a solução resultante foi, então, agitada durante 15 min, à temperatura ambiente. Removeu-se o solvente por evaporação, dissolveu-se o residuo em cloreto de metileno e lavou-se três vezes com solução 1 H de hidróxido de sódio e uma vez com solução saturada de cloreto de sódio. Por secagem (MgSQ^.) e evaporação, obtiveram-se 13,2 g do produto em bruto. Purificou-se este material por cromatografia sobre sílica gel usando cloreto de metileno como eluente, obtendo-se 8,98 g (68¾) do composto pretendido. Recristalizando em hexano/acetato de etilo (9/1) obtiveram-se 7,2 g do composto puro com p.f. 1812C. ^H-RMN (CDCI3): 2,49 (3H, s), 3,67 (2H, s), 3,88 (3H, s), 6,68 (1H, s), 6,95 (1H, d.), 7,16-7,25 (1H, dd), 7,3 (1H, t), 7,45 (1H, d), 7,5 (1H, d), 8,12 (1H, s).

Exemplo 27.5,10-di-hidro~8-metoxi-7,9-dimetilindenor1,2-blindo-lo

Manteve-se ao refluxo, durante 1 h, uma mistura de 3,17 g (0,024 mol) de 1-indanona, 5,46 g (0,0269 mol) de hidrocloreto de 3,5-dimetil~4-metoxifenil-hidrazina, 50 ml de ácido acético e 2,5 ml de ácido clorídrico conc.. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa de hidróxido de sódio em excesso, e a mistura resultante foi, então, extraída com éter. Por secagem (MgSQ4) e evaporação, obteve-se o produto em bruto. Purificando por recristalização e por cromatografia em coluna, combinadas,

71 167 Ν.60533 -33- obtiveram-se 1,47 g (23¾) do produto. 1H-RMN (CDC13)= 2,42 (3H, s), 2,61 (3H, s), 3,28 (3H, s), 3,85 (2H, s), 7,07 (1H, s), 7,19 (1H, dd), 7,32 (1H, dd), 7,43 (1H, d), 7,53 (1H, d), 8,1 (1H, s).

Exemplo 28.____5,10-di-hidro-8-hidroxi-7,9-dimetilindenor1,2- -blindolo

Obteve-se este composto, numa pequena quantidade;na sintese do Exemplo 27, mas poderia, também, ter sido obtido por desmetilação do 5,10-di-hidro-8-metoxi-7,9-dimetilindeno[1,2--b]indolo obtido no Exemplo 27, análogo ao exemplo 12. RMN (CDC13): 2,39 (3H, s), 2,57 (3H, s), 3,84 (2H, s), 4,37 (1H, s), 7,05 (1H, s), 7,19 (1H, dd), 7,32 (1H, dd), 7,44 (1H, d), 7,53 (1H, d), 8,04 (1H, s).

Exemplo 29._________5,10-di-hidro-6-isopropilindenori,2-blindolo

Uma mistura de 12,6 g (0,096 mol) de 1-indanona, 19,7 g (0,105 mol) de hidrocloreto de 2-isopropilfenil-hidrazina, 150 ml de etanol e 10 ml de ácido clorídrico conc., foi mantida ao refluxo durante 2 h. Removeu-se o solvente por evaporação e suspendeu-se o residuo em água acidica. Por extracção com éter, secagem (MgS04) e evaporação, obteve-se o produto em bruto, que foi purificado por crornatografia em coluna sobre silica-gel usando como eluente cloreto de metileno/éter leve de petróleo (2/8).. A purificação final foi conseguida por recristalização em acetato de etilo/éter leve de petróleo, obtendo-se 14,0 g (59¾) do produto. RMN (CDCI3): 1,48 (6H, d), 3,37 (1H, septeto), 3,77 (2H, s), 4,37 (1H, s), 7,1-7,3 (3H, m), 7,37 (1H, dd), 7,5-7,6 (3H, m), 8,03 (1H, s).

Exemplo.....30........ 5.6-di-hldro-5-metoxi-2.4~dimetllindenor2.1-blindolo i) Juntou-se, gota a gota, ao longo de 30 min., cloreto de sulfonilo (Ca. 1 eq) a uma solução de 5-metoxi~4,6-dimetilindan--1-ona (0,65 g; 3,4 mmol) em éter seco (10 cm^), com agitação e na ausência de luz, a Q2C. Depois de se completar a adição, deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente, e continuou-se a agitar por mais 2 horas. Removeram-se os solventes e cromatografou-se o residuo sólido, eluindo com 50¾ 34 34 71 167 NI. 60533 λ/~

Jr-r' diclorometano/éter de petróleo (60-802C) e, depois, com diclorometano, obtendo-se o derivado do dicloro [Rp (DCM) 0,85; O, 14 g; 14¾] que foi rejeitado, e a 2-cloro~5-metoxi-4,6--dimetilindan-l-ona pretendida [Rp (DCM) 0,7]. Este último é um sólido incolor. (0,65 g, 85¾) p.f. 109-110ÔC. 1h RMN (CDC13) <$: 7,53 (1H, s), 4,54 (1H, dd, J = 7,8, 3,7 Hz), 3,79 (3H, s), 3,64 (1H, dd, J = 17,5, 7,8 Hz), 3,13 (1H, dd, J = 17,5, 3,5 Hz), 2,33 (3H, s), 2,25 (3H, s). ii) Uma solução de o-bromotrifluoroacetanilida (325 mg, 1,2 mM) em tetra-hidrofurano (THF)(20cm·^) foi arrefecida até -78SC e juntou-se-lhe metil-litio (1 equivalente molar de uma solução 1,4 M em éter dietilico). Esta adição foi seguida, 10 min mais tarde, pela introdução de terc-butil-litio (2 equivalente molar de uma solução 1,7 M em pentano). A mistura reaccional foi agitada durante lha -789C e, depois, juntou-se gota a gota, por uma cânula, uma solução de cloro-indanona (272 mg; 1,2 mM) em THF (3 cm^). Deixou-se a solução aquecer, lentamente, até à temperatura ambiente, agitou-se durante lhe juntou-se uma solução a 10¾ de hidróxido de potássio em metanol (3 cm^). Depois de se agitar durante 30 min, verte-se a mistura reaccional sobre HC1 2M e extrai-se com diclorometano (3 x 10 cm^). Os extractos orgânicos combinados foram secos (Na2S04) e evaporados in vacuo. obtendo-se um resíduo sólido que foi cromatografado sobre sílica, eluindo com 10¾ acetato de etilo/éter de petróleo (60-8020), para dar a trifluoroacetanilida (Rp 0,4)(50 mg) e o 2-cioro-l-hidroxi-5-metoxi-4,6-dimetil-l~(2,-trif luoroacetamidofenil )j,ndano (Rp 0,3) (220 mg; 44¾). 0 último composto é um sólido incolor. P. f. 1822C. *H RMN (CDC13) <5: 10,7 (1H, largo), 8,25 (1H, dd), 7,36 (1H, ddd), 7,06 (1H, s), 6,98 (1H, ddd), 6,39 (1H, dd), 4,76 (1H, dd, J = 4,8, 2,7 Hz), 3,78 (3H, s), 3,63 (1H, s, troca com D2O), 3,11 (2H, 2 x múltipledos de 2ã ordem), 2,33 (3H,s), 2,33 (3H,s). iii) 0 cloro-hidroxiindano (19 mg; 50 umol) em THF (0,5 cm^) foi adicionado, gota a gota, a uma solução de terc-butóxido de potássio (2 equivalentes molares) em 2-metilpropan-2-ol (0,5 cm^) seco. Agitou-se a mistura reaccional durante 16 h, juntou-se -35- 71 167 Ν.60533 água (0,25 cm3) e removeram-se, in vacuo, os solventes orgânicos. Extraiu-se o resíduo entre salmoura e diclorometano, secou-se o extracto orgânico (Na2SC>4) e concentrou-se até cerca de 1 cm3 jn vacuo. Juntou-se a mistura reaccional hidróxido de potássio metanólico (0,25 cm3 de solução a 10¾), seguindo-se, dez minutos mais tarde, ácido trifluoroacético (0,5 cm3). Após 30 min, verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução saturada de bicarbonato de sódio e extraiu-se o material orgânico com diclorometano. Removeu-se solvente in vacuo e cromatografou-se o resíduo sobre sílica, eluindo com diclorometano, obtendo-se o iso-indeno-indolo como um sólido incolor (9 mg; 70¾). P.f. 179- 18220 (dec). !h RMN (CDC13) <5: 8,2, (1H, largo), 7,82 (1H, m), 7,4-7, 1 (4H, m), 3,74 (3H, s), 3,58 (2H, s), 2,4 (3H, s), 2,3 (3H, s).

Exemplo 31.__5.6-di-hidro-3-hidroxi-2,4-dimetilindenor2.1- blindolo

Arrefeceu-se até -78QC 5,6-di-hidro-2,4-dimetil-3-metoxi-indeno[2,l-b]indolo (50 mg) em diclorometano (1 cm3) e tratou-se com tribrometo de boro (0,1 cm3). Depois de se agitar durante alguns minutos deixou-se a mistura reaccional aquecer até à temperatura ambiente e verteu-se sobre gelo moído. Depois da adição de um excesso de carbonato ácido de sódio, extraiu-se o produto da mistura reaccional com diclorometano e os extractos secos combinados, foram evaporados até se obter uma substância sólida, incolor. Rendimento: 40 mg. Esta foi cromatografada sobre sílica, eluindo com diclorometano obtendo-se o composto do título como um sólido microcristalino. P.f. 192-1942C. 1h RMN óh: 10,2 (1H, s largo), 7,5-7,0 (5H, m largo), 3,62 (2H, 3), 2,35 (3H, s), 2,30 (3H, s).

Propriedades Farmacológicas

Os indeno-indolos descritos no presente invento têm estruturas hidrofóbicas que formam catióes, radicais catiónicos ou radicais após oxidação. Constituem poderosos anti-oxidantes, o 36- 71 167 Ν.60533 que se avalia pela inibição da peroxidação in vitro dos lipidos, induzida pelo ascorbato/Fe^4·. Qs compostos de fórmulas (IA) e (IB) evitam, eficientemente, a oxidação das lipoproteínas no plasma humano, na presença de células de músculo liso de coelho ou macrófagos do peritoneu do ratinho. Também evitam danos isquémicos/reperfusão no coração isolado da ratazana, perfundido, e protegem contr a danos no fígado do ratinho, induzidos pelo tetracloreto de carbono, acetaminofeno, sulfonato de metilmetano, menadiona, t-butil-hidroperóxido e N-metil-N1-nitro-N-nitroso-guanidina, ou nos hepatócitos isolados da ratazana.

Estas propriedades sugerem que as estruturas de fórmulas (IA) e (IB) têm uma aplicação potencial na protecção ou tratamento da ferida isquémica ou de reperfusao, particularmente a isquémia/enfarte cerebral e cardíaco, trombose e embolia, aterosclerose, doença de Parkinson, doença de Alzheirner, envelhecimento, neoplasmas e toxicidade de drogas anti-neoplásti-cas e agentes imunosupressores, e a inflamação incluindo estados alérgicos/inflamatórios como a asma brônquica e a artrite reumatóide. Outras aplicações potenciais são a quimioprevenção contra a toxicidade química ou os danos por radiações. Os compostos de indeno-indolo não são, significativamente, activados pela luz UV tornando-os candidatos ao uso de produtos para o cuidado da pele. Outra caracteristica, interessante e importante, dos compostosde indeno-indolo, é a sua capacidade de estabilizar membranas.

Ensaios......Farmacológicos A característica mais importante dos compostos do invento é a sua eficácia como depuradores de radicais livres ou anti--oxidantes. Usou-se um sistema de avaliação para medir a concentração dos compostos de fórmulas (IA) e (IB) necessárias para inibir em 50¾ (IC50) a peroxidação dos lipidos. A avaliação da peroxidação de lipidos está descrita adiante e os resultados estão apresentados na Tabela 1. Outros ensaios descritos abaixo são o ensaio da fragilidade dos glóbulos vermelhos, usado para medir a estabilização de membranas pelos indeno-indolos, (Tabela

71 167 Ν.60533 2), e a protecção pelos indeno-indolos contra a citotoxicidade da N-metil-N^-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) em hepatócitos de ratazana (Tabela 3). 0 MNNG é um agente altamente citotóxico, cujo mecanismo de acção pode envolver a destabilização de membranas, mediada por radicais. 1. Peroxidação de lipidos dependente de Ascorbato/Fe^4

Para se obter o sistema de peroxidação de lípidos por ferro/ascorbato, juntaram-se 6,25 ml de tampão de fosfato de potássio 1M (KP^), pH 7,4, a 12,5 mg de fosfolipidos secos de soja. Depois de borbulhar árgon durante 2 min, a suspensão foi selada com 5 camadas de parafilm e sonicada até a suspensão ficar translúcida. A mistura reaccional final era composta de 200 pg/ml de fosfolipidos, 10 uM de FeNH4(804)2 ou de Fe(NH4)2(S04)2 e 100 uM de ácido ascórbico em KP^ 0,1 M (pH 7,4), e o antioxidante a ser ensaiado em acetona ou DMSO. 0 volume do veiculo nunca excedeu í% do volume total. A reacção iniciou-se pela adição de ácido ascórbico mais ferro. A reacção continuou, à temperatura ambiente, num banho de água com agitação, durante 30 min, e foi, depois, parada pela adição de 10 μΜ de hidroxitolueno butilado 0,5 M em DMSO. 0 procedimento acima e a subsequente determinação do material que reage com o ácido 2--tiobarbitúrico está descrito em= Shertzer, H.G. et al, Biochem. Pharmacol. 37, 333 (1988). A Tabela 1 mostra o efeito dos indeno-indolos e do cx-tocoferol na peroxidação de lipidos dependente de ascorbato/Fe^4.

Tapeia..........1

Composto ρΙΟςη 2-etilamino-DHII 7,9 2-dietilamino-DHII 7,4 9-metoxi-iso-DHII 6,4 8-metoxi-DHII 6,2 6,8-dimetil-DHII 6,1 10,10-dimetil-DHII. 6,1 DHII 5,8 71 167 Ν.60533 -38-

Tabel.a......1 ( continuação)

Pl.Ç.50 5,8 5.7 5.7 5.6 5.6 5,2 5,1 5,0

Composto

iso-DHII 8-metil-DHII

10-metil-DHII 8-isopropil-DHII 8-fluoro-DHII

6-cloro-DHII 5-metil-DHII α-tocoferol (Vitamina E) 2. Estabilização de membranas em glóbulos vermelhos O efeito de estabilização de membrana, pelos indeno-indolos, foi avaliado pelo ensaio de fragilidade dos glóbulos vermelhos. Anestesiaram-se ratazanas com 65 mg de pentobarbitol por Kg de peso corporal, por injecção i.p. Retiraram-se amostras de sangue do ventrículo esquerdo, para uma seringa heparinizada, e diluiram-se vinte vezes com tampão contendo 140 mM NaCl, 10 mM citrato de sódio e 5 mM glucose (pH 7,4) a 02C. 0 sangue diluído foi mantido em gelo. Juntou-se uma alíquota de 0,75 ml de sangue a uma cuvette de 4 ml contendo 10 ul do antioxidante dissolvido em veiculo DMS0. Após um minuto de agitação branda, juntaram-se 0,75 ml de NaCl 0,9 N ou H2O à cuvette por pipetagem vigorosa, e registou-se a absorvância a 656 nm com um espectrofotometro Beckman DU-70. Quando se juntou H2O na ausência de um agente estabilizador, a absorvância diminui em 15 segundos até 0,8. A adição de NaCl em vez de H2O deu uma absorvâncioa de 2,2 independente do tempo. Na presença de concentrações crescentes de produtos químicos estabilizadores, o decréscimo de absorvância observado, após a adição de água, diminui. A percentagem de protecção da osmólise obteve-se pela equação [[(2,2 - 0,8) - A) / (2,2 - 0,8)] x 100%, onde A=22,2 menos o decréscimo de absorvância quando se juntou água na presença de uma concentração conhecida do produto químico. A protecção, em é, então, posta em gráfico contra as várias concentrações do produto químico a ser tratado. 0 valor do índice de protecção da fragilidade dos glóbulos vermelhos (RBC-PIV) é o declive da 39 71 167 Ν.60533 regressão linear deste gráfico, expresso em % de protecção contra a osmólise por uM de agente protector. A Tabela 2 mostra os valores de RBC-PIV para os diferentes indeno-indolo e ot--tocoferol.

Tabela 2

Composto RBC-PIV (%/μΜ). 10,10-dimetil-DHII 0,48 DHII 0,49 iso-DHII 0,50 5-metil-DHII 0,74 oe-tocoferol 0,10 ________5. Protecção contra os efeitos citotóxicos de MNNG em____hepa- tócitos

Os efeitos protectores dos indeno-indolos na citotoxicidade induzida por MNNG, foram ensaiados com hepatócitos de ratazana. Foram preparados hepatócitos de ratazana macho Sprague-Dawley, por tratamento em colagenase como foi originalmente descrito por Zalthem e Stratman (Zalthem, R.N. e Stratman, F.W., ftrch. Biochem. Biophys, 163, 600(1988), modificado por Reitman et al. (Reitman, F.A., Shertzer, H.G., e Berger, M.L., Biochem. Pharmacol, 37, 3183 (1988)). A fim de melhorar a viabiliadde, as células foram centrifugadas por Percoll a 0,508 g/ml (Pharmacia AB, Uppsala, Suécia) em 137 mM de NaCl, 8,1 mM Na2HP04 e 1,5 mM de KH2PO4 (pH 7,4). Juntaram-se agentes, considerados protectores, às células, sob a forma de soluções em DM80, de concentração final de DMS0 nunca excedendo Spl/ml da suspensão de células. Juntou-se MNNG a uma concentração de 0,5 mM como solução em etanol, obtendo-se uma concentração final de etanol de 1%; o etanol, por si só, não tinha qualquer efeito. A viabilidade foi determinada como a percentagem de células que excluiam 0,2¾ de azul de tripano. Os efeitos protectores dos indeno-indolos e do acetato de oc-tocof erilo sobre a citotoxicidade estão indicados na Tabela 3. Os valores são a concentração de composto necessária para aumentar de 1 h o tempo necessário para que o MNNG matasse 50¾ das células viáveis. 71 167 Ν.60533 -40-

Composto IC50Itím DHII 3,1 iso-DHII 3,4 5-metil-DHII 6,0 acetato de a-tocoferilo 161

Claims (10)

1. 71 167 Ν.60533

   -41 R Ε I V INDICAÇÕES 1 - Processo de preparação de um composto de fórmula IA ou IB

   IA IB na qual R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, r1 e r2 são escolhidos, independentemente um do outro, entre hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R^, r4 e r6 sgc escolhidos, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, halogêneo ou um grupo alquilo inferior, R- é hidrogénio, hidroxi, halogêneo, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di~ -alquilamino inferior, NH2 ou NR11 COR12, R7, R8, e RlO são escolhidos, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, hidroxi, um grupo alquilo inferior, um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di-alquilamino inferior, NH2 ou NR11 COR12, R11 é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, R12 é um grupo alquilo inferior, ou de um seu sal, e com as seguintes condições: i) quando R é hidrogénio na fórmula IB, então pelo menos um de R1 a R1® não é hidrogénio, ii) quando R é hidrogénio, metilo ou neopentilo na fórmula IA, então pelo menos um de R1 a R10 não é hidrogénio, iii) quando R, R1, R2 e R1® são hidrogénio e R^ e R^ são 42- 71 167 Ν.60533 alquilo inferior e R3, R4, R5 e R6 são hidrogénio ou alquilo inferior ou R® é hidroxi ou alcoxi inferior na fórmula IA, então R® não é hidroxi nem metoxi, iv) quando R4 é cloro na fórmula IA, então pelo menos um de Rl a r!° não é hidrogénio, v) quando R9 é etilo, i-propilo, metoxi ou etoxi na fórmula IA, então pelo menos um de R a R® ou R^® não é hidrogénio, vi) quando R9 é etilo na fórmula IA, então R5 não é metilo, vii) quando R9 é metoxi ou etoxi na fórmula IA, então R3 e não são simultaneamente metilo, viii) quando R® é metilo na fórmula IA, então R3 e R9 não são simultaneamente metilo ou pelo menos um de R a R^, R9 ou Ri® não é hidrogénio, ix) quando R® é bromo na fórmula IA, então pelo menos um de R a R4, R6 a R10, não é hidrogénio, ou de um seu sal, caracterizado por compreender as seguintes reacções a) indolização de Fischer de uma fenil-hidrazina de fórmula II e de uma 1-indanona de fórmula III

   na qual R1, R2, R3, R4, R®, r6? R7? R8? r9 e R10 são definidos como para a fórmula IA e, se adequado, seguida de N-alquilação com um R-halogeneto ou R~sulfato, onde R é definido como para a fórmula IA; ou b) indolização de Fischer de uma fenil-hidrazina de fórmula II e de uma 2-ind.anona de fórmula IV -43-71 167 Ν.60533

   na qual r1, r2, r3, r47 RS? r6? r7? r8? r9 e R10 sg0 definidos como para a fórmula IB e, se adequado, seguida de N-alquilação com um R-halogeneto ou R-sulfato, onde R é definido corno para a fórmula IB; ou <0 ciclização de um 3-benzoíl-indolo de fórmula V

   na qual, R, r3, r47 rS^ R6? R7? R85 R9 e R10 sg0 definidos como acima e R^· é hidrogénio ou halogéneo, seguida de redução da cetona tetraciclica obtida, de fórmula VI; ou

   VI d) metalização de uma orto-halo-anilida de fórmula VII até ao correspondente di~anião VIII, seguida de reacção com urra aLfa-halo-cetona -44- -44- 71 167 Ν.60533 ff ér r

   CF-

   VIII ,10

   na qual R3· a R10 são definidos como para a fórmula IB, X1 é halogéneo e é cloro; cu e) N-alquilação de um derivado de 5-H-DHII ou de derivados de 6-H-iso-DHII, respectivamente por reacção com um R--halogeneto ou R-sulfato, onde R é definido como para a fórmula IA e IB; ou f) desalquilação de um derivado de DHII ou de isoHDHII, substituídos com alcoxi, por meios convencionais para se obterem os correspondentes derivados de DHII ou de iso--DHII, substituídos com hidroxi; ou g) redução de um derivado correspondente de N-acil-DHII ou de um derivado correspondente de N-acil-iso-DHII, por meios convencionais para se obterem os derivados correspondentes N-alquilamino.
2. 2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por r8 ser um grupo mono- ou di-alquilamino inferior, de preferência etil- ou dietilamino.
3. 3 - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por ser NR^^ C0r12? de preferência NH-acetilo.
4. 4 - Processo de acordo com qualquer urna das reivindicações anteriores, caracterizado por, pelo menos, um entre e R^, ser um grupo alquilo inferior, de preferência metilo.
5. 5 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por R^ ser um grupo alcoxi inferior, de preferência metoxi. -45- -45- 71 167 Ν.60533 *Τ£Γ4Γ
6. 6 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por R, R^, R^, R7, R9 e R^·8 serem hidrogénio.
7. 7 - Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado por se preparar 5,10-di-hidro-2-etilamino-in-deno[l,2-b]indolo ou 5,10-di-hidro-2-dietilamino~indeno[l,2-b]in-dolo.
8. 8 - Processo de preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se formular um veiculo ou diluente farmaceuti-camente aceitável com um composto de fórmula IA ou IB,

   na qual R é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, r! e r2 são escolhidos, independentemente um do outro, entre hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, r3? r4 e R^ são escolhidos, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, halogéneo ou um grupo alquilo inferior, R8 é hidrogénio, hidroxi, halogéneo, um grupo alquilo inferior ou um grupo alcoxi inferior, um grupo mono- ou di--alquilamino inferior, NH2 ou NR11 CDr12? R7, R8, R9 e R10 são escolhidos, independentemente uns dos outros, entre hidrogénio, hidroxi, um grupo alquilo inferior ou um grupo alcoxi inferior ou um mono- ou di-alquilamirio inferior, NH2 ou NR·^ COR^-2, rH é hidrogénio ou um grupo alquilo inferior, r!2 é um grupo alquilo inferior, e com as seguintes condições: -46“ 71 167 Ν.60533 i) quando R é hidrogénio na fórmula IA ou IB, então, pelo menos, um de a R·^ não é hidrogénio, ii) quando R, R^, R^ e R·*·^ são hidrogénio e R^ e R^ são alquilo inferior e. R^, r4? r5 e R6 sgD hidrogénio ou alquilo inferior ou R5 é hidroxi ou alcoxi inferior na fórmula IA, então R® não é hidroxi, ou com um seu sal farmaceuticamente aceitável.
9. 9 - Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por a fórmula IA ou IB ser definida como em qualquer das reivindicações 1 a 7.
10. 10 - Processo para a estabilização de um composto susceptivel a deterioração oxidativa, caracterizado por se pór em contacto o composto com um composto de fórmula IA ou IB, definido em qualquer das reivindicações 1 a 8. Lisboa, 2g; M Í99Q Por UNIVERSITY OF ΒΑΤΗ e UNIVERSITY OF CINCINNATI - 0 AGENTE OFICIAL -